close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

14.Цитоморфологические и биохимиче-ские аспекты адаптивности животных к условиям среды обитания

код для вставкиСкачать
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
С.А. НЕФЕДОВА
Под редакцией профессора Е.С. Иванова
Цитоморфологические и биохимические аспекты адаптивности животных
к условиям среды обитания
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
С.А. НЕФЕДОВА
Под редакцией профессора Е.С. Иванова
Цитоморфологические и биохимические аспекты адаптивности животных
к условиям среды обитания
Рязань, 2011
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
УДК 576:577:591.1:691.5
ББК 28
ISBN 978-5-98660-043-7
Рецензент:профессор, д.с.-х.н. Н.И. Торжков
Цитоморфологические и биохимические аспекты адаптивности животных к условиям среды обитания/ С.А. Нефедова. Под редакцией Е.С. Иванова//Издательство учебной литературы и учебно-методических пособий
ФГБОУ ВПО РГАТУ. – Рязань, 2011. – 152 с.
В книге расскрываются эколого-физиологические аспекты регуляции
адаптивности животных к условиям среды обитания на йодэндемичной территории при динамике радионуклидов и тяжелых металлов; приводятся интерьерные параметры животных для использования методов биоиндикации и
биоиндукции на экологически неблагополучных территориях.
Книга предназначена для врачей, ветеринаров, зоотехников, зоологов,
экологов, физиологов и других специалистов, сферой деятельности которых
является биология и фундаментальная медицина.
ISBN 978-5-98660-043-7
©С.А. Нефедова
© федеральное государственное
образовательное учреждение высшего
профессионального образования «Рязанский
государственный агротехнологический
университет имени П. А. Костычева»
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
Предисловие
В рамках мониторинга антропогенного давления среды на йодэндемичной территории необходима комплексная оценка динамики компенсаторной адаптивности коров к недостатку йода в экологически различных
условиях содержания (в зависимости от загрязнения территорий тяжелыми
металлами и радионуклидами); характеристика цитогенетических параметров мобилизационного резерва наследственной изменчивости, определяющих адаптивность к среде обитания.
При идентификации давления техногенных факторов, отражающегося
на биохимических, цитоморфологических и цитогенетических показателях
животных, актуально использовать биоиндикаторные виды: полёвку обыкновенную (MicrotusarvalisPall) для лесостепной и полёвку рыжую (ClethrionomysglareolusSchreb) для подтаёжной ландшафтно-географических зон.
Цитоморфологические и биохимические исследования механизма воздействия Са2+- антагониста на адаптивное развитие сердца телят, содержащихся на экологически неблагополучных по радионуклидам и тяжелым металлам йодэндемичных территориях, убедительно доказывают перспективность использования блокаторов медленных кальциевых каналов при коррекции компенсаторно-приспособительных реакций животных.
Таким образом, в монографии изложено комплексное решение проблемы оптимизации адаптивности молочного скота к антропогенному давлению
среды на экологически неблагополучных по радионуклидам и тяжелым металлам йодэндемичных территориях по средствам регуляции Са2+- антагонистом компенсаторно-приспособительных реакций.
Благодарности.Искренне признательна директору Федерального научноклинического центра детской гематологии, онкологии и иммунологии (Рязанский филиал)
профессору Е.Ф. Морщаковой, сотрудникам Научно – исследовательского института
детской гематологии Министерства здравоохранения РФ профессору Р.В. Ленской и А.Г.
Лукьяновой, коллективу ЦНИЛ РГМУ им. И.П. Павлова; сотрудникам экологического отдела ЗАО «Институт «Рязаньпроект», сотрудникам Государственного научного метрологического центра «ВНИИ ФТРИ» Госстандарта России Центра метрологии ионизи-
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
рующих излучений, моим аспирантам за помощь в проведении экспериментов и лабораторных исследований.
Отдельно благодарю академика РАН Е.А. Строева, академика РАСХН В.В. Калашникова, член – корреспондента РАН Э.В. Ивантера, член-корреспондента РАСХН
А.Ф. Яковлева, профессоров Г.М. Туникова, Н.В. Бышова, А.А. Коровушкина, А.Ф. Астраханцева, Н.И. Торжкова за многолетнее научное сотрудничество и полезные советы
при выполнении этой работы.
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
Введение
Для большинства государств основной причиной усиливающейся деградации окружающей среды является недостаточный учет комплекса природных условий при осуществлении хозяйственной деятельности и отсутствии комплексного подхода к оценкам влияния различных объектов хозяйственной деятельности на окружающую среду.
Для выявления роли биоиндикаторов различных видов растений и животных при антропогенных, техногенных воздействиях важна не только их
количественная оценка в экосистемных процессах, но и качественная - интерьерная. Разным типам экосистем соответствуют определенные объекты
биоиндикации, включающие изменения специфических связей между содержанием в окружающей среде загрязняющих веществ и количественными параметрами растительных сообществ, массовых групп почвенной мезофауны,
видового и количественного состава биоты (Зейферт Д.В., 2011).
В ряде стран Скандинавии, Великобритании, Ирландии, Австралии, отчасти США и Канаде, дефицит йода был ликвидирован не путем массового
йодирования соли. Широкое использование препаратов йода стало частью
ветеринарной технологии, т.е. обогащения кормов премиксами с йодом и использования йодосодержащих дезинфицирующих средств при дойке (обработке вымени коров и доильных аппаратов).
В США также широко использовался (сейчас много меньше) йодат калия в качестве, допустим, улучшателя хлеба при его выпечке. Опять же йодат калия добавляли в хлеб в Великобритании (и в очень значительных количествах) вовсе не с целью борьбы с йодным дефицитом, а для того, чтобы он
быстро не черствел. Этот успех сами британцы назвали "случайным" (PhillipsD., 1997).
Британцев можно только поздравить с успехом, если бы не тревожная
тенденция в других упомянутых выше высокоразвитых странах: очевидный
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
рост гипотиреоза в тех же условиях потребления в пищу йодированной соли.
Об этом есть публикации из США, Австралии и Новой Зеландии.
Таким образом, четко прослеживается разделение подходов к йодной
недостаточности – с одной стороны это профилактические мероприятия здоровой щитовидной железы, дабы не провоцировать её морфологическую перестройку на режим гипофункции, что происходит в условиях снижения потребления йода, с другой – совершенствование методики лечения гипотиреоза в тех группах, где это заболевание уже возникло и, таким образом, йодированная соль необходима лишь, как фоновый материал в процессе глубоко
лечения гормональными препаратами.
По разным причинам использование йода в ветеринарной практике
снижается и будет снижаться дальше. Долгое время в животноводстве в Европе использовали интенсивные технологии вскармливания животных, добавляли разные премиксы к корму. Некоторые из них, основанные на костной муке, теперь обвиняют в переносе "коровьего бешенства". Нынче усиливается тенденция к производству "органических" (в России называемых
"экологически чистыми") продуктов. Значит, все меньше йода будет попадать в корм скота, а затем в молоко и молочные продукты, мясо и т.п. Это
уже происходит в США — использование йода за 20 лет снизилось почти в 3
раза (Барковский Е.В., 1997).
Для прогнозирования адаптивности животных к условиям возрастающей антропогенной нагрузки на йодэнемичных территориях в первую очередь необходимо проводить комплексное изучение состояния среды обитания во взаимосвязи с селекционными, физиологическими и биохимическими
аспектами. Актуальным являются исследования влияния абиотических факторов в естетсвенно-природных и производственных (сельскохозяйственных)
условиях с целью установления пределов толерантности и оценки устойчивости организмов к внешним воздействиям.
Вызывает тревогу малочисленность исследований динамики адаптивности и уровня мобилизационного резерва наследственной изменчивости на
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
территориях естественной йодной эндемии, в экологически неблагополучных
зонах, допустим, после аварии на Чернобыльской АЭС; на территориях вблизи промышленных зон, где неизбежно загрязнение тяжелыми металлами и
т.д. В результате не в полной мере реализуется генетический потенциал животных.
Таким образом, очередной раз подчеркивается актуальность определения эндемического зоба В.Н. Денисенко (2004), как хронического заболевания сельскохозяйственных животных, являющегося индикатором их среды
обитания. По мнению В.А. Попова (2003) главным этиологическим фактором для возникновения патологий щитовидной железы является недостаток
йода и антропогенное техногенное загрязнение. С этим согласны ряд ученых,
научные труды которых посвящены вопросам диагностики, усовершенствования методов профилактики при эндемическом зобе у животных: Б.B.
Алешина (1983), Ф.П. Петрянкина (1985), В.И. Георгиевского (1990), Е.А.
Строева (1990), О.Г. Дутовой (2000), Н.Ю. Мусиной (1985), В.Л. Романюк
(2004), Ф.Х. Пилова (2004), Т.Н. Бабкиной (2008, 2009), Д.Ц. Базарова
(2007). В разных биогеохимических зонах, в каждом конкретном регионе
этиологические факторы и, соответственно, клиническое проявление данного
заболевания варьируют.
При экологическом мониторинге йодэндемичных территорий загрязненных радионуклидами и тяжелыми металлами в качестве реакционных систем - биоиндикаторов принято использовать биологические объекты (мелких грызунов), в том числе - переносчиков инфекционных заболеваний, интерьерные реакции которых, на изменение среды, отражаются в идентичной
динамике с таковыми показателями сельскохозяйственных животных (Коровушкин А.А., Греф Е.Я. и др., 2011).
Необходимо исследовать цитоморфологические показатели лимфоцитограмм восприимчивых к вирусу лейкоза (ВЛКРС) коров и полёвок, инфицированных хантавирусами. Таким образом, можно учесть при биотестировании критерий - устойчивость к вирусным заболеваниям, оценить, влияет ли
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
естественный или искусственный отбор на уровень мутационного процесса
вызванного радиационным фоном.Разработка методики биоиндикации посредством изучения и сопоставления интерьерных показателей мелких грызунов и молочного скота, обитающих на общей территории, позволит оценить и откорректировать влияние среды на генофонд животных.
Изучая особенности пространственной дифференциации ареала рыжей
полёвки, Э.В. Ивантер (2008) определяет их значение в качестве экологогенетических механизмов микроэволюционного процесса. Адаптация периферических популяций полёвок находится в стадии становления и то обстоятельство, что полной приспособленности так и не достигается, определяет
постоянную готовность к эволюционным перестройкам в ответ на изменение
среды.
Благодаря интеграции биологических методов в животноводство, наряду с селекционно-генетической работой, значительную роль играют физиологические и биохимические приемы регуляции адаптивности крупного рогатого скота к интенсификации сельскохозяйственного производства на экологически неблагополучных территориях.
По мнению В.В. Богдан, Г.А. Шкляревич (2008) в последнее время всё
большее внимание уделяется биохимическим исследованиям, которые позволяют глубже понять механизмы адаптивного ответа организмов на действие
различных факторов и наблюдать изменения в обмене веществ, наступающие, как правило, до появления генетических, физиологических, морфологических и других отклонений от нормы.
При воздействии на компенсаторно-приспособительные свойства организма, всё большую популярность приобретает энзимология, позволяющая
регулировать развитие органов, корректировать их взаимодействие, обеспечивая тем самым высокий уровень проявления нормы реакции, лактогенеза и
лактопоэза. К таковым относятся фосфатазы, галактозидазы, катепсины,
кальпаины и другие ферменты, являющиеся маркерными при наблюдении за
развитием внутренних органов, в том числе и сердца (Рязанова Е.А., 1995).
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
Особо важно, чтобы в руках специалистов оказались не отдельные
биохимические показатели, а система тестов, позволяющих по ферментативному составу крови контролировать и при необходимости корректировать
обмен веществ в организме, развитие и работу органов, резистентность к заболеваниям, что позволит прогнозировать и поддерживать высокую продуктивность сельскохозяйственных животных.
В комплексах с замкнутым циклом производства косвенное действие
промышленной технологии, в частности односторонняя селекция, направленная лишь на повышение продуктивности, у части животных приводит к
ослаблению гуморальных, тканевых и клеточных механизмов иммунитета,
тогда как другие особи того же стада остаются высоко устойчивыми к различным заболеваниям (Коровушкин А.А., 2004). Анализ динамики резистентности коров к различным заболеваниям, реакционной способности к
компенсаторно-приспособительным механизмам, влияющим на гомеостаз
особей, говорят об адаптационном статусе породы, о пригодности к промышленной технологии в различных условиях среды. В основе адаптивности сельскохозяйственных животных лежат биохимические процессы, определяющие весь ход индивидуального развития. Следовательно, разработка
мало затратных и высоко эффективных методов коррекции молекулярных
процессов адаптивности, протекающих в организме при росте и развитии
особи является актуальной проблемой при совершенствовании продуктивных
и резистентных качеств крупного рогатого скота, содержащегося на территориях с неблагоприятными экологическими условиями.
Целенаправленное совершенствование племенных и продуктивных качеств молочного скота в нашей стране и за рубежом позволило создать высокий генетический потенциал продуктивности. Для его полной реализации в
условиях интенсификации отрасли молочного скотоводства, важное значение
имеет создание технологий, в том числе с применением методов биоиндикации, стимулирующих формирование и проявление высокого уровня адап-
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
тивных
качеств организма по
средствам регуляции
компенсаторно-
приспособительных процессов.
Таким образом, актуальным является в рамках экологического мониторинга ландшафтно-географических зон,которые одновременно являются и
территориями с интенсивным антропогенным воздействием, и зоной естественной йодной эндемии, для учета влияния давления экологических факторов среды на резистентные и продуктивные качества молочного скота, проанализировать интерьерные и генотипические показатели коров. Необходимо выявить возможности компенсаторной адаптивности черно-пестрой породы к условиям среды, используя при этом методы биоиндикации. Актуально детально проанализировать взаимосвязь уровня адаптивности к условиям
окружающей среды на параметры пригодности к промышленной технологии
коров черно-пестрой породы различного происхождения; выявить механизмы компенсаторно-приспособительных реакций организма к заболеваниям,
определить и сопоставить интерьерные параметры биоиндикаторных видов
животных и коров.именно эти залачи легли в основу данной монографии.
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
Глава 1. Цитогенетические последствия техногенного воздействия на животных с экологически неблагополучных
йодэндемичных территорий
Изучая факторы, имевшие негативные последствия для животноводства, в пострадавших от Чернобыльской катастрофы районах, В.И. Глазко и
Т.Т. Глазко (2006) приводят причины и следствия возникновения спонтанных
мутаций и их реализации, отражают результаты оценки чистоты мутантных
особей, приводят физиологические границы возможности поглощения живыми объектами дозы ионизирующего излучения, для того чтобы часть генофонда не исчезла, характеризуют спектр мутаций, направления отбора у
различных видов домашних животных и мышевидных грызунов.
Главная проблема для популяций разных видов, проживающих на территориях, загрязненных радионуклидами после аварии на ЧАЭС заключается
не в абсолютной величине полученных доз ионизирующего излучения, а в их
наличии. Основные генетические последствия обусловлены не увеличением
количества мутантных организмов, а тем, что часть генов в следствие селекции перестраиваются. Реальные генетические последствия Чернобыльской
катастрофы будут известны еще очень нескоро (Глазко Т.Т. 1999, Костенко
С.А. 2001).
Изучая структуру щитовидной железы, гормональный статус, гуморальные факторы резистентности у животных с гипотиреозом, после аварии
на Чернобыльской АЭС В.Я. Саруханов, Н.Н. Исамов (2010) отмечают, что
при облучении паренхима щитовидной железы замещается соединительной
тканью, что приводит к уменьшению количества тиреоидных гормонов в
крови на 80 %. Степень облучения щитовидной железы и содержание гормонов в крови у животных зависит от поглащенной дозы облучения. Процесс
сопровождается снижением бактерицидной активности крови при уменьшении концентрации тиреоидных гормонов.
Как отмечают В.А. Бурдаков (1977), Павлов С.А. (2008) биологическое
действие инкорпорированных радионуклидов определяется их физико-
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
химическими свойствами и содержанием в критическом органе. Радионуклид, накапливаясь в щитовидной железе, вызывает ее полную деструкцию
и, как следствие, гипотиреоз, ухудшение общего состояния, снижение продуктивности и резистентности организма.
По мнению В.Я. Саруханова и Н.Н. Исамова (2001) в модельных экспериментах на лабораторных и сельскохозяйственных животных установлено угнетение бактерицидной активности крови при лучевой болезни легкой и
средней степени тяжести и комплементарной – при тяжелой степени. Указанные результаты имеют высокую достоверность на территориях, которые
относятся к геохимической провинции с дефицитом стабильного йода в почве, что было отмечено в первые недели после аварии на Чернобыльской АЭС,
привело к увеличению гипотиреоидных животных.
По результатам оценки физиолого-биохимических показателей крови
поголовья крупного рогатого скота при длительном содержании на радиоактивно загрязненных территориях через десять лет после аварии на Чернобыльской АЭС, снижается фагоцитарная активность нейтрофилов у животных при длительном воздействии радиации. В результате естественного обновления поголовья крупного рогатого скота, стада на радиоактивно загрязненных территориях формируются из животных, имеющих скрытые патологии на молекулярно-клеточном уровне, в частности с активацией процесса
перекисного окисления липидов и модификации проницаемости мембран
клеток для ионов Са2+. Причиной обнаружения мембранных дефектов в эритроцитах крови коров исследователи называют изменения в структуре костномозгового кроветворения, что неизбежно при повышении радиационного фона. В своих исследованиях ученые делали акцент на проницаемости для
ионов Са2+ плазматической мембраны эритроцитов и характеризовали результаты по увеличению скорости поступления кальция в клетки.
В.Д. Сыпин, В.Г. Егоров (1998) отмечают морфофункциональные изменения лейкоцитов крови коров содержащихся в зоне радиоактивного загрязнения. К.Х. Папуниди (2003) указывает, что при скрытом течении про-
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
цессов, обусловленных хроническим воздействием радиации, возможные отдаленные эффекты облучения на фоне клинически благополучных животных
определяются компенсаторными и приспособительными реакциями последних. По мнению автора, истощение этих резервов может приводить к заболеваниям, например, лейкозу. Оценка эпизоотической ситуации в наиболее радиоактивно загрязненных районах Белоруссии выявила увеличение распространения лейкоза коров после аварии на АЭС.
Физиолого – биохимические последствия техногенного воздействия на
животных с экологически неблагоприятных йодэндемичных территорий анализировались нами при сопоставлении динамики морфологических, биохимических и цитогенетических параметров крови биоиндикаторных видов полёвка обыкновенная (MicrotusarvalisPall), полёвка рыжая (ClethorionomysglareolusSchreb), серая крыса (пасюк) (RattusnorvegicusBerk) и крупного
рогатого скота (BosTaurus).
Как отмечает Э.В. Ивантер (2008), анализ материалов по популяционной организации политипического вида (на примере рыжей полёвки
Clethrionomys Glareolus Shreb) позволяет выявить не только конкретные географические отличия в динамике численности полёвки, но и общие черты
этой динамики, типичные для вида в целом. Одной из наиболее характерных
особенностей, как сообщает учёный, является тот факт, что, несмотря на значительную частоту и амплитуду колебаний численности, они не достигают
масштабов, характерных для некоторых видов грызунов открытых ландшафтов, для полёвки типична кратковременность пиков, быстрое восстановление
численности после депрессий и постепенное сокращение после подъемов,
характерны «малые волны», вызванные местными причинами. Максимальной численности вид достигает в районах с относительным мягким климатом, где на значительной площади господствуют широколиственные и хвойно-широколиственные леса, представляющие для зверьков оптимальные
условия жизни. Изучая особенности пространственной дифференциации ареала рыжей полёвки, Э.В. Ивантер определяет их значение в качестве эколого-
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
генетических механизмов микроэволюционного процесса. Учёный констатирует факт, отсюда неоднозначность выполняемых центральными и периферическими популяциями эволюционных функций. Первые обеспечивают
поддержание фенотипической специфичности вида, сохранение его экологической и генетической нормы (посредством стабилизирующего отбора, усиления обмена генами, унификации генофонда и т.д.), вторые составляют эволюционный резерв вида и реализуют его тенденции к экспансии за границы
ареала. Именно в периферических популяциях, указывает автор, разворачиваются главные эволюционные события, приводящие к адаптивному формообразованию. Адаптация периферических популяций находится в стадии
становления и то обстоятельство, что полной приспособленности так и не достигается, определяет постоянную готовность к эволюционным перестройкам в ответ на изменение среды.
Н.В. Медведев (1990, 1998, 2004) указывает, что неоднозначность и
крайняя гетерогенность антропогенного влияния обусловливаются не столько характером самого загрязнения (разная степень загрязнения отдельных
территорий региона, различные временные периоды воздействия, неодинаковый качественный спектр токсикантов, стохастичность их распределения, как
в абиотической среде, так и в популяциях животных), сколько реакциями
биосистем на данный фактор на различных иерархических уровнях: организменном, популяционном, ценотическом. Наличие целого ряда адаптивных
механизмов на каждом из этих уровней позволяет популяциям млекопитающих в значительной степени компенсировать это негативное влияние, что
помогает им сравнительно быстро и с минимальными потерями адаптироваться к новым экологическим условиям.
Выявленная ученым гетерогенность популяций по степени толерантности к тому или иному типу техногенного загрязнения подтверждает перспективность нового направления в экотоксикологии, использующего спектр
ее мощных и точных методических средств в собственно популяционных исследованиях, при которых сами токсиканты (их качественный состав, нали-
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
чие/отсутствие корреляционных связей, относительные токсические эквиваленты) используются в качестве биомаркеров принадлежности особей к той
или иной популяции, субпопуляции либо эколого-функциональной группировке.
В современных условиях антропогенного влияния перспективы развития той или иной популяции сельскохозяйственных животных вовсё большей степени определяет отбор, котрый через дифференцированную приспособленность, отражающую степень соответствия генотипа и среды, регулируют вклад особи в генофонд поколений (Родионов Г.В., Христенко В.Т.,
1998). Адаптивность и стресс при содержании и разведении сельскохозяйственных животных являются серьезным критерием оценки крупного рогатого скота (Ковальчикова М, Ковальчик К., 1998).
Ещё совсем недавно горячо обсуждали появление мутантов в зоне отчуждения Чернобыля, речь шла о чудовищных мутациях, ускорении эволюционного процесса, но всё это – по слухам. А какие именно мутации можно
связать с катастрофой в Чернобыле? Генетические нарушения возникают в
организме постоянно, но только малая их часть сохраняется дольше, чем дватри деления клетки, негативные последствия будут иметь далеко не все. У
животных имеются сложные, комплексные механизмы контролирующие состояние генома, которые обеспечивают защиту от ошибок, повреждений генетического материала. Мутантными принято называть лишь те организмы,
когда мутация есть в каждой клетке, передано по наследству от родителей.
Химические реакции, которые приводят к повреждениям ДНК, включают в
себя гидролиз, окисление, а так же электрофильные воздействия, и происходят под влиянием химически экзогенных веществ (агенты внешней среды,
токсиканты пищи и т.д.) или в результате эндогенных метаболических процессов. предполагается, что экзогенные вещества приводят к опухолевым заболеваниям.. Системы контроля генетического постоянства имеются не только на клеточном, но и на организменном уровне, причем надежность их работы зависит в частности от иммуной системы. После чернобыльской ката-
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
строфы и у животных, и у людей в разных регионах явно повысилась частота
встречаемости соматических клеток с хромосомными абберациями(Глазко
В.И., Глазко Т.Т., 2004).
Исследования мутационных процессов у быка Уран и коров Альфа
Бетта, Гамма (уникальные животные, которые оставались в зоне отчуждения
и далее пребывали в экспериментальных условиях в 10 км от саркофага), а
так же их потомков, потомков иных коров, завезенных в стадо позже, показали, что отбор мутаций существует в процессе мейоза – при образовании гамет.В экспериментальном стаде различные аллели генов передаются с различной вероятностью, обнаружено достоверное отклонение от закона равновероятной передачи вариантов для генов трансферрина, церулоплазмина, пуринуклиозидфосфорилазы и рецептора к витамину Д. С биохимической точки зрения это очень логично: рецептор участвует в регуляции внутреннего
кальциевого обмена, от которого зависит активность ферментов, связывающих свободные радикалы, возникающие при избытке радиациооного фона.
Получается, что на свет появлялись лишь те особи, которые наиболее адаптированы к условиям среды, чьим ферментным системам удавалось справиться с неблагоприятными факторами среды, разные варианты гена как бы
стремились объединиться в одном организме, чтобы он мог более успешно
противостоять внешним воздействиям. Реальную опасность представляет не
доза излучения, а её новизна для конкретной популяции, вида или сообщества видов (Глазко В.И., Глазко Т.Т., 2004).
По сообщениям А.А. Коровушкина, Г.М. Туникова, А.Ф. Яковлева
(2004) методы исследования ядерных структур клеток системы крови позволяют установить состояние наследственного аппарата организма, его связь с
продуктивностью, заболеваниями и другими параметрами животных. Впервые фрагменты ядерного материала в лейкоцитах были обнаружены Хауэллом, а затем описаны французским ученым Жолли. Поэтому, в гематологии
микроядра известны как тельца Хауэлла - Жюли (Howell-Jolly). В настоящее
время их называют микроядрами. Уже в то время было установлено, что
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
микроядра отмечаются чаще у животных с геморрагической анемией (после
потери крови). По свойствам окрашивания микроядер было установлено, что
они имеют ядерное происхождение. Есть мнение, что микроядра образуются
в поздней телофазе из акроцентрических фрагментов и целых отставших
хромосом. А.А. Заварзин (1939) подчеркивает, что в эритроцитах могут сохраняться остатки ядра, каковыми являются микроядра. По его сообщению
они встречаются главным образом в эритроцитах крови, носящей уже патологический характер. В его описании микроядра представляют собой округлые барофильные зернышки различной величины, содержащиеся в эритроцитах в числе одного или нескольких штук. В то же время, А.А. Заварзин делает оговорку о том, что ядерное их происхождение не может считаться полностью доказанным. Микроядра являются продуктами неполного растворения
оболочки ядра. По его описанию – это круглые или овальные образования,
окрашивающиеся в ярко-красный цвет. Микроядра располагаются в протоплазме эритроцита большей частью одиночно, но встречаются эритроциты с
двумя и даже тремя тельцами. Иногда микроядра представляются в виде
мелкой зернистости. Микроядра встречаются при анемиях, но особенно много эритроцитов с микроядрами при спленектомии – удалении селезенки.
Профессор В.Н. Никитин (1956) относит микроядра вместе с красной
полихроматофилией, красной пунктуацией и красной штриховатостью, хроматиновой пылинкой Вайденрайха, кольцами Кэбота в эритроцитах к группе:
«изменения в эритроцитах, связанные с сохранением остатков распада ядра».
Так, микроядра - более крупные ядерные обломки (хроматиновые глыбки),
чем красная полихроматофилия, красная пунктация и красная штриховатость
эритроцитов. Эти тельца дают характерные тинкториальные реакции хроматина. Они окрашиваются в вишнево-красный цвет, метиловым зеленым - пиронином - в зеленый. Они окрашиваются также гематоксилином. Наличие
этих телец, указывает на не вполне закончившийся распад и растворение ядра и, следовательно, на юность красного кровяного тельца.
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
В. Риган, Т. Сандерс, Д. Деникола (2000) придерживаются мнения о
том, что микроядра являются остатками ядерного материала. Их присутствие
в момент регенеративного ответа, объясняется повышенным производством
эритроцитов и, в связи с этим, неспособностью макрофагов полностью удалить ядерный материал из зрелых эритроцитов. Если микроядра имеют место
при недостатке полихромазии, то следует рассмотреть недостаточность макрофагоцитарных функций, особенно у макрофагов селезенки. Микроядра часто присутствуют в крови здоровых животных, перенесших спленэктомию.
М.Г. Абрамов (1985) указывает, что микроядра являются остатками
ядерного хроматина. Описывает их, как имеющих округлую форму. По его
данным они достигают размера 1 мкм и более, окрашиваются в краснофиолетовый цвет. В одном мегалоците может быть несколько микроядер.
Они могут встречаться не только при перницитозной анемии, но и при некоторых других анемиях.
Г.А. Симонян (1989) определяет микроядра как мелкие круглые зернышки в цитоплазме эритроцитов, окрашивающиеся азуром - 2 с эозином в
красновато-фиолетовый цвет. Они обнаруживаются в виде остатков ядерного
вещества при патологических формах обезъядривания (пикноз, риксис, лизис), пернициозной анемии.
Г.А. Симонян, Ф.Х. Хисамутдинов (1995) приводят данные, микроядра
– это включения в эритроцитах в виде остатков ядерной субстанции округлой
формы.
В. Риган, Т. Сандерс, Д. Деникола (2000) считают, что микроядра представляют собой остаточные ядрышки, которые могут быть видны в эритроцитах различных домашних животных при регенеративной анемии. Эти
структуры окрашиваются в темно-пурпурный цвет и имеют диаметр около 1
мкм, но могут быть и большего размера. Единичные микроядрышки обычно
присутствуют в эритроцитах. У жвачных очень похожим на микроядра выглядит микроорганизм Anaplasma. В то же время, большинство анаплазм
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
принадлежит к виду Anaplasmamarginale, который в соответствии с названием обнаруживается на периферии эритроцитов.
В.А. Арефьев и Л.А. Лисовенко (1995) характеризуют микроядро как
центрический или ацентрической хромосомный фрагмент, имеющий собственную оболочку и обособленный от ядра. Не следует путать понятия микроядро и микроядрышки (в англоязычной литературе micronucleolus, nucleolinus). Микроядрышки характеризуют как мелкие, случайно расположенные в
ядре элементы, образованные в результате расщепления основного ядрышка
в процессе дегенерации ядра.
Ф. Фогель, А. Мотульски (1989) приводят данные об изучении микроядер в клетках костного мозга человека. По их мнению, микроядра формируются хромосомами (или хромосомными фрагментами), которые не связаны
с митотическим аппаратом и не принимают участия в митозе, как остальные
хромосомы. Это сопровождается преждевременной конденсацией таких хромосом и их фрагментов. В метафазных хромосомах основного ядра хроматиды имеют обычно нормальную степень конденсации, в то время как хромосомы микроядра конденсированы по типу профазных. Эти цитологические
феномены полезно использовать дляэкспресс - оценки мутагенных агентов.
Микроядра могут образовываться в клетках в процессе митоза из хромосомного материала, утратившего контакт с веретеном митотического аппарата. Этот материал может представлять собой как хромосому (несколько
хромосом), так и ее (их) фрагменты. Кроме того, установлено, что микроядра
могут образовываться в следствие разрушения ядра при апоптозе или же в
следствие разрушения ядра при радиационном воздействии.
Р.В. Амбурладзе и др. (1998) установили закономерность характера
связи между диаметром микроядер и дозой радиационного воздействия, что
открывает возможность использования оценки диаметра микроядер как одного из критериев нестабильности генома после радиационного воздействия.
В.А. Арефьев и Л.А. Лисовенко (1995) определяют микроядерный тест
(в англоязычной литературе micronucleustest) как метод определения гено-
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
токсичности (кластогенности) факторов внешней среды, который заключается в определении числа микроядер в интерфазных клетках (чаще всего клетках циркулирующей крови или костного мозга). По их мнению, этот метод
является одним из наиболее распространенных тестов на генотоксичность.
F.N. Ruddle (1962) в клетках почки свиньи invitro впервые описал выпячивание ядерного материала в виде тонкого выроста в пространство цитоплазмы клетки. N.B. Atkin, M.C. Baker (1964), T.C. Hsu, S. Pathak, R. Calleu et.
al. (1974) и другие исследователи изучали сходные морфологические аномалии ядер в интерфазе. Механизмы формирования таких морфологических
особенностей ядер объяснили образованием аномально длинных маркерных
хромосом.
Поубеждению T.C. Hsu, S. Pathak, R. Cailleu et. al. (1974) маркерные
хромосомы нормально разделялись в анафазе, но из-за большой длины их
свободные концы оставались около экватора митотической клетки, тогда как
центромеры отходили к полюсам. Свободные концы, таким образом, становились выростами дочерних ядер в интерфазе.
По мнению С.Н. Прошина, В.Ю. Кравцова, М.Г. Ольнева и др. (1998)
более вероятным представляется другой механизм возникновения ядерных
протрузий в клетках. Они придерживаются позиции N.B. Atkin, M.C. Baker,
S. Wilson (1967), Н.П. Бочкова, Ю.С. Демина, Н.В. Лучника (1972) и др. Возникновение дицентрических хромосом и центрических колец в результате
хромосомных аберраций по этой теории, как правило, приводит к образованию хромосомных мостов.
N. Denko, J. Sringer, Wani Maqsood et. al. (1995) остатками разорванных
хромосомных мостов называют структуры сходные по описанию с ядерными
выростами. Интересны сообщения и о ядрышковых организаторах. У хромосом особенно выделяются участки, синтезирующие все типы рРНК (за исключением 5S); ими обладают не все хромосомы. Эти участки называют ядрышковыми организаторами (Заварзин А.А. и др., 1992; Билич Г.Л. и др.,
1999). Ядрышковые организаторы образуют петли. Верхушки петель разных
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
хромосом тяготеют друг к другу и встречаются вместе. Таким образом, формируется структура ядра, именуемая ядрышком. В нем различают три компонента: слабоокрашенный компонент соответствует петлям хромосом, фибрилярный – транскрибированнойрРНК и глобулярный – предшественникам
рибосом.
В зависимости от функциональной активности клетки в образование
ядрышка включаются то меньшие, то большие участки организаторов. Иногда их группировка может совершаться не в одном, а в нескольких местах. В
этих случаях в клетке обнаруживается несколько ядрышек. Области, в которых ядрышковые организаторы активны, выявляют не только на электронномикроскопическом уровне, но и светооптически при специальной обработке
препаратов (особые методы импрегнации серебром).
Гены рРНК расположены в ядрышковом организаторе - участке хромосомы, локализованном в области вторичной перетяжки (Заварзин А.А.,
Харазова А.Д., Молитвин М.Н., 1992). Число ядрышкообразующих хромосом
специфично для вида (от одной, как в большинстве случаев, до нескольких).
В фибриллярных центрах обнаруживается ДНК. Эта ДНК представляет собой собранные вместе спейсеры, разделяющие рибосомные цистроны. Существует и другая точка зрения, согласно которой в этом районе локализуются неактивные гены рРНК.
Исследования активности цистронов рибосомной РНК в интерфазных
клетках методом серебрения ЯОР проводят в сравнении таковых у больных
лейкозом и здоровых коровах на мазках периферической крови. Следует отметить, что анализировались целые, незрелые клетки, так как в поврежденных клетках происходит уплотнение ядрышка и как следствие наблюдается
большая агрегация в них Ag-материала.
При описанных С.М. Федоровой, Т.П. (1982) Кудрявцевой показателях
гуморальной и клеточной защиты организма коров были отмечены определенные количественные и качественные показатели ядерных структур лимфоцитов, что было принято за норму для изучаемой популяции.
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
Так, количество лимфоцитов с микроядрами у здоровых коров в среднем в пределах 1,08 ед. или 0,22 % на 500 лимфоцитов Общее количество
микроядер, обнаруженных нами в маркерных лимфоцитах у здорового животного в среднем составляет 1,63 0,15 ед. в расчете на 500 лимфоцитов.
Как указывает А.Ф. Яковлев и соавторы (1997), достаточно многосторонне изучающие цитогенетические особенности лимфоцитов при различных
физиологических состояниях
животных и человека повышенная частота
встречаемости клеток с микроядрами является показателем кариотипической
нестабильности в популяциях. Так, при лейкозе, когда и гуморальные и клеточные факторы защиты достаточно ослаблены у коров из расчета на 500
клеток 7,52 0,13 тыс. маркерных лимфоцитов, в которых отмечается 34,0 0,74 микроядер, что превышает эти показатели в сравнении с таковыми у
здоровых коров в среднем в 7,0 и в 4,5 раз соответственно.
М.М. Кот (1990, 1992) подчеркивает, что микроядра в лимфоцитах появляются в результате различных нарушений митотического деления хромосом. В основном микроядра появляются в результате замедления расхождения хромосом или хроматид, в анафазе или телофазе митоза. От способа возникновения микроядра в лимфоците зависит размер первого, что также является важным фактором микроядерного теста. Оказалось, что размеры микроядер меняются в зависимости от заболевания животного. Так, действие
ВЛКРС сопровождается увеличением в маркерных лимфоцитах мелких микроядер до 74,02 %. Тогда как при мастите коров, по сравнению со здоровыми
особями,
увеличивается
количество крупных микроядер, их в среднем
насчитывается 43,19 %.
В своей работе Е.В. Старкова указала, что по размеру микроядер обычно судят о том, как оно образовано: либо из ацентрического конца хромосомы, либо из целой хромосомы при замедлении этой хромосомы в процессе
митотического деления. В случае если микроядро появляется из участка
ацентрической хромосомы, то размеры ядра различны (Е.В. Старкова, 1997).
Р.В. Амбурладзе (1999) отмечает, что в результате радиационного воздей-
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
ствия на кровь испытуемого животного микроядра разрушаются, при этом
количество микроядер резко возрастает, однако их размер уменьшается.
В нашем случае подобная картина отмечается и у коров при заболевании лейкозом, а количество мелких микроядер значительно превышает этот
показатель у здоровых особей. При мастите коров такой тенденции в наших
исследованиях не наблюдается. Это служит еще одним доказательством того,
что в возникновении и развитии онкологической болезни крови немаловажное значение имеет микроядерный тест.
По сообщению Р.В. Амбурладзе межъядерные «мосты» в лимфоцитах
возникают лишь в том случае, если хромосома их дающая имеет две действующие центромеры, направленные к разным полюсам. Таким образом,
наличие ядерных мостов указывает на появление в кариотипе животных изучаемой популяции дицентрических хромосом, что продуцирует повышение
частоты проявления кариотипических нарушений.Протрузии ядерных структур в виде длинных выпячиваний в цитоплазму также возникают при нарушении митотического расхождения хромосомного материала лимфоцитов.
Методом определения частоты встречаемости лимфоцитов с хвостатыми ядрами ученым удалось отобрать животных цитогенетической «группы риска»,
у которых была выявлена повышенная частота дицентрических хромосом.
Одним из вероятных исходов, на взгляд этих авторов, одним из вероятных исходов завершения митозов, в которых наблюдаются мосты, может
быть разрыв мостов с последующим образованием хвостатых ядер, которые
по своим морфологическим критериям соответствуют обсуждаемым ядрам с
протрузиями. Фактически отсутствие мостов и хвостов при мастите коров
указывает на отсутствие взаимосвязи этого заболевания от цитогенетических
аномалий ядерного материала, отражающихся в появлении в геноме дицентрических хромосом (Шаяхметов Д.М., Герзилова А.Г., Борисенко А.С.,
1995).
По сообщению Г.Ф. Михайловой (2010) последствием чернобыльской
катастрофы явилось радиоактивное загрязнение долгоживущими радиоизо-
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
топами огромных территорий, на которых проживают, и, следовательно,
подвергаются в той или иной степени постоянному хроническому радиационному воздействию огромные по численности популяции. Чернобыльская
катастрофа породила множество проблем общечеловеческого масштаба: экологических, медицинских, социальных, научных и др. Решение большинства
из них зависит, в первую очередь, от правильной оценки степени радиационной опасности для людей, оказавшихся в ситуации вынужденного проживания на радиационно-загрязненных территориях. И здесь на первое место выходит проблема такого понятия как качество жизни и, соответственно, здоровье населения, проживающего на загрязненных радионуклидами территориях. В биоиндикации радиационного воздействия нашли широкое применение
цитогенетические методы исследования. Культура лимфоцитов человека является одной из обязательных тест-систем при оценке влияния мутагенных
факторов окружающей среды. Одним из достоинств этой тест-системы является то, что по наблюдаемым типам аберраций можно достаточно определенно идентифицировать тип мутагенного воздействия. Так, наличие в спектре
наблюдаемых аберраций повышенного уровня дицентриков и центрических
колец однозначно свидетельствует о радиационной природе мутагена. Повышенный же уровень аберраций хроматидного типа может свидетельствовать о химической или вирусной природе мутагена. Использование цитогенетического метода в популяционных исследованиях позволяет выявлять лиц с
повышенным уровнем хромосомных аберраций, в особенности, долгоживущих стабильных аберраций, являющихся потенциальным источником малигнизации клеток. Следовательно, индивидуальные цитогенетические показатели могут служить объективным основанием для формирования групп повышенного риска с целью последующего углубленного медицинского
наблюдения.
Для того чтобы выявить, возможно ли использовать мелких млекопитающих в качестве биоиндикаторов, для прогнозирования действия экологических условий на адаптивность молочного скота к техногенному давлению
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
среды, мы изучили сопоставимость динамики морфологических, биохимических и цитогенетических параметров крови. С целью выявления влияния
мутационной изменчивости на генофонд крупного рогатого скота и взаимосвязи мобилизационного резерва наследственной изменчивости с экотоксикацией среды, мы проанализировали фенотипические характеристики лимфоцитов периферической крови экспериментальных коров. В качестве биоиндикаторных видов использовали мелких грызунов – переносчиков вирусных заболеваний, в частности, геморрагической лихорадки с почечным синдромом (ГЛПС) - серая крыса, полёвка обыкновенная в лесостепной зоне,
полёвка рыжая в подтаёжной зоне,обитающих в тех же условиях среды, что и
исследуемый нами крупный рогатый скот. Сопоставление данных диких видов и одомашненного крупного рогатого скота раскрывает истинную картину влияния экотоксикации на организм животных.
Структура пула периферических лимфоцитов, выявляемая Шикреакцией у коров из районов с наименьшей загрязненностью
137
Cs следую-
щая: Шик-реакция в виде крупных гранул и блоков встречается в среднем в
0,1…0,3 % лимфоцитах крови здоровых коров (таблица 1).
Следует отметить, что при превышении
естественного фона радио-
нуклидов, Шик-реакция в виде крупных гранул и блоков в лимфоцитограмме
здоровых коров составляет 0,5…0,7 %, при мастите 0,4…0,6 %, при гипотиреозе 2,2…3,0 %, что явно выше, чем в чистых районах, с которыми разница
составляет 2,1…2,5 %; для больных лейкозом 2,0…3,2 %, что явно выше, чем
аналогичный показатель в чистых от
137
Csрайонах области. Отличие состав-
ляет 1,6…2,3 %.
Анализ цитохимических лимфоцитограмм экспериментальных животных из наиболее загрязненных
137
Cs районов области отражает явное влия-
ние радионуклида на Шик-реакцию в виде крупных гранул и блоков. Так, для
здоровых животных этой зоны показатель составляет 0,3…0,5 %, тогда как
для больных маститом 0,2…0,9 %, гипотиреозом 0,7…1,0 % .
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
Таблица 1 - Оценка цитохимических параметров лимфоцитограмм экспериментальных животных на экологически неблагополучных территориях
Уровень загрязнения
137
Cs, Бк/кг
Экспериментальные группы
Шик-реакция в виде
крупных гранул и блоков, %
Шик-реакция в виде
средних и мелких
гранул, %
1
2
3
4
подтаёжная
1
0,1…0,2
10,0…14,0
2
0,4…0,6
13…19
3
0,3…0,6
10…13
4
0,1…0,5
11…15
5
0,1…0,7
12…15
6
0,3…0,6
11…19
7
0,1…0,3
9…12
8
0,1…0,2
10…13
1
0,2…0,3
12…16
2
0,4…0,9
10…14
3
0,2…0,3
11…14
4
0,1…0,5
10…13
5
0,1…0,6
10…16
6
0,4…0,7
12…14
7
0,2…0,3
10…12
8
0,2…0,3
12…14
1
0,4…0,5
20…24
ландшафтногеографическая зона
15,2…18,0
(экологически чистая)
лесостепная
ландшафтногеографическая зона
15,2…18,0
(экологически чистая)
подтаёжная
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
ландшафтногеографическая зона
29,6…71,4
лесостепная
ландшафтногеографическая зона
2
4,3…4,6
55…65
3
0,2…0,7
14…16
4
0,7…1,0
31…38
5
0,3…0,7
10…23
6
4,4…4,6
56…64
7
0,6…0,9
12…13
8
0,4…0,6
53…60
1
0,3…0,5
23…28
2
4,0…4,9
56…64
3
0,5…0,9
36…48
4
0,8…1,0
32…41
5
0,4…0,6
12…25
6
4,2…4,7
56…63
7
0,5…0,9
12…15
8
0,3…0,5
22…29
1
0,5…0,7
26…32
2
2,1…3,2
61…76
3
0,4…0,6
19…22
4
2,2…2,9
37…44
5
0,5…1,2
25…27
6
2,0…3,2
62…77
30,1…71,9
подтаёжная
ландшафтногеографическая зона
20,4….32,3
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
лесостепная
ландшафтногеографическая зона
20,0….32,3
7
0,3…0,9
13…17
8
0,5…0,7
23…31
1
0,6…0,7
28…34
2
2,0…2,2
63…79
3
0,4…0,5
39…50
4
2,3…3,0
28…30
5
0,7..0,9
30…32
6
2,1…2,2
64…80
7
0,3…0,7
15…17
8
0,6…0,7
66…78
Примечание:При разработке методики биоиндикации были сформированы следующие экспериментальные группы животных: 1 - здоровые коровы (п = 30), 2- коровы,
инфицированные ВЛКРС (больные лейкозом) (п = 30), 3 - больные маститом коровы(п =
30), 4 - больные гипотиреозом коровы (п = 30), 5 - больные гипотиреозом коровы с регуляцией адаптивности Са2+ - антагонистом (п = 30), 6 – полёвки, инфицированные хантавирусами (больные ГЛПС) (п = 30), 7 - крысы пасюк (п = 30), 8 – здоровые полёвки (п =
30)
Интересным является тот факт, что среднее загрязнение (20,0…32,3
Бк/кг) почвы
137
Cs оказывает большее влияние на показатели Шик-реакции
по крупным гранулам и блокам у гипотиреоидных животных, чем сильная
экотоксикация почвы (29,6…71,9 Бк/кг). Так, разница в этом случае составляет 1,5…2,0 %. При лейкозе количество крупных гранул и блоков резко возрастает, разница со здоровыми животными составляет 3,7…4,4 %. Причем,
по сравнению с коровами, подверженными лейкозу, содержащимися на чистых по
137
Csтерриториях, разница так же ощутима – 3,6…4,0 %.
На благополучной и загрязненной радионуклидами территориях динамика показателей цитохимических лимфоцитограмм среди сельскохозяйственных и диких животных одинаковая. У полевок при загрязнении терри-
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
тории
137
Cs в пределах фонового уровня (15,2…18,0 Бк/кг) количество круп-
ных гранул и блоков, выявляемых приШик – реакции составляет 0,1…0,7 %,
что сопоставимо с таковыми показателями у крупного рогатого скота. При
этом увеличение экотоксикации радионуклидами на 4,8…14,3 Бк/кг изменяет
Шик-реакцию грызуна в среднем на 0,9 %, коров на 0,4 %. Та же тенденция
сохраняется и при действии большей радиации (29,6...71,9 Бк/кг). То есть,
увеличение радиационного фона на 14,4…53,9 Бк/кг приводит к росту показателей Шик-реакции в лимфоцитах полевок на 1,3 %, что сопоставимо с результатами коров, имеющих низкую резистентность к лейкозу.
Что касается идентичных показателей, полученных у крыс, обитающих
на исследуемых территориях, необходимо указать, что эти животные обладают гораздо большей стойкостью к радиационному загрязнению среды. Так,
в экологически чистой зоне области, где после аварии на Чернобыльской
АЭС не отмечено выпадение осадков, Шик-реакция крови у крыс пасюк по
показателю - крупные гранулы и блоки составляет 0,1…0,3 %, при среднем
загрязнении территорий динамика незначительная и составляет 0,2…0,6 %,
при загрязнении
137
Csпочв в размере 29,6…71,9 Бк/кг рост пула лимфоцитов
по Шик-реакции с крупными гранулами и блоками составляет от нормы
0,4…0,6 %. Таким образом, крысы пасюк не могут считаться полноценными
биоиндикаторами влияния загрязнения радионуклидами окружающей среды,
в сопоставлении результатов их мутационной изменчивости с аналогичной у
крупного рогатого скота нет достоверности. Тогда как полёвки отражают
картину экотоксикации именно так, как и крупный рогатый скот.
Таким образом, можно рекомендовать использовать полёвок в качестве биоиндикаторного вида, при профилактических работах с крупным рогатым скотом, направленных на повышение резистентности к лейкозу.
У крупного рогатого скота при регуляции Са2+ - антагонистом адаптивности к низкому статусу работы щитовидной железы не выявляется изменения цитохимических показателей лимфоцитограмм в сравнении с таковыми
при лейкозе. Однако тенденция выявляемых Шик-реакцией крупных гранул
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
и блоков следующая: в экологически чистых районах количество гранул и
блоков 0,1…0,5 %, при среднем загрязнении 2,2…3,0 %, при достаточно высокой экотоксикации территории 0,7…1,0 %. У коров инфицированных вирусом лейкоза крупного рогатого скота (ВЛКРС) число лимфоцитов с интенсивно гранулярной Шик-реакцией в виде средних и мелких гранул в
сравнении животных между районами области, относящимися к разному
уровню экотоксикации (низкая, средняя, высокая) по здоровым коровам составляет 10,0…16,0 %, 26,0…32,0 %, 20,0…28,0 %. Таким образом, именно в
средне загрязненных районах области (20,0…32,3 Бк/кг) отмечается наиболее
выраженные изменения в пуле лимфоцитов. Разница 10,0…12,0 % по сравнению с чистой зоной. Причем по сравнению с загрязненной, показатели выше
на 6,0…4,0 %.
При мастите на экологически чистой по радионуклидам территории 10
– 14 клеток из 100 обнаруживают изменения в своей структуре в виде мелких
и средник гранул, что принципиально не отличает этих коров по показателям
Шик-реакции он здоровых животных. В средне загрязненных районах таких
клеток в крови коров 19 – 50 штук, в экологически грязных по
137
Csрайонах
14 – 48 на 100 исследуемых клеток.
При лейкозе маркерных Шик-реакцией клеток обнаружено в чистой
зоне 10 – 19 штук, в средне загрязненной части их количество резко возрастает на
51…60 %, в зоне, где экотоксикация почв
137
Cs наиболее высокая,
рост маркерных Шик – реакцией клеток составляет 45,0…46,0 %, что делает
показатель мелкие и средние гранулы лимфоцитов при Шик-реакции маркерным по выявлению тенденции к понижению резистентности крупного рогатого скота к лейкозу.
При гипотиреозе так же наблюдается изменение количества средних и
мелких гранул в лимфоцитах коров в зависимости от условий среды, обусловленных выпадением радионуклидов в результате аварии на Чернобыльской АЭС. Так, в экологически чистых районах области у гипотиреоидных
коров на 100 лимфоцитов маркерными являются около 15 штук, тогда как
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
повышение содержания 137Cs до 20,0…32,3 Бк/кг даёт увеличение пула Шикреакционных показателей крови до 18,0…44,0 %, при высоком загрязнении
территорий
137
Cs этот процент составляет 31,0…41,0 %, то есть несколько
снижается. Очередной раз прослеживается тенденция, что для гипотиреоидных животных наиболее опасным является пребывание на территориях с загрязнением радионуклидом 137Cs в пределах средних значений.
Анализируя цитохимические результаты лимфоцитограмм гипотиреоидных коров, которым в процессе роста и развития вводили Са 2+ - антагонист, мы пришли к выводу, что это необходимое мероприятие для установления желаемого уровня адаптивности к низкому статусу щитовидной железы. У этих коров, по сравнению с их интактными гипотиреоидными сверстницами, обитающими на идентичных по загрязнению
137
Cs и одновременно
йоддифицитных территориях обнаруживается гораздо меньше мелких и
средних гранул в лимфоцитах после Шик – реакции. Так, в экологически чистой зоне количество клеток с маркерными показателями Шик-реакции составляет 10 – 16 штук на 100 исследуемых клеток. При среднем загрязнении
среды обитания
137
Cs количество их возрастает несколько меньше 15 - 16
штук, у тех животным, которым вводили антагонист Са2+, по сравнению с
теми особями, которым не вводили блокатор «медленных» каналов - 8 - 29
штук.
В условиях сильного загрязнения почв Cs137 введение Са2+ - антагониста гипотиреоидным животным так же снижает в лимфоцитах количество
мелких и средних гранул Шик-реакции. По сравнению с интактными гипотиреоидными особями без регуляции адаптивности Са2+- антагонистом в процессе роста и развития телят количество исследуемых гранул на 21,0…16,0
% меньше.
Динамика мелких и средних гранул, выявляемыхШик-реакцией в пуле
лимфоцитов полёвок подтверждает выводы о том, что этот показатель является маркерным при проведении экологического мониторинга территорий. У
этих грызунов в благополучных районах области в пуле лимфоцитов гранулы
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
обнаруживаются в 11,0…14,0 % клетках, тогда как при увеличении экотоксикации среды их обитания
137
Cs при среднем загрязнении количество мар-
керных клеток 14 – 18 штук, при сильном - их количество возрастает до 26 –
33 штук на 100 исследуемых клеток.
У крыс пасюк, которых мы определили, как устойчивый к радиационному загрязнению вид, в чистых от
137
Csрайонах в пуле лимфоцитов обна-
руживается 9,0…12,0 % маркерных Шик - реакцией клеток, при среднем загрязнении – 13,0….17,0 %, при сильной экотоксикации территорий
12,0…15,0 %.
При сопоставлении лимфоцитограмм крыс, полёвок и коров прослеживается чёткая тенденция к одинаковой динамике изменения гранул в пуле
клеток крови полёвок и коров с низкой резистентностью к лейкозу, тогда как
с крысой пасюк нет параллелей в показателях Шик-реакции. Так, при
15,2…18,0 Бк/кг, где территория подтаёжной и лесостепной ландшафтногеографических зон не пострадала после аварии на Чернобыльской АЭС,
Шик-реакция в виде крупных гранул и блоков, а так же мелких и средних
гранул и у коров больных лейкозом 0,4…0,6 %; 13,0…19,0 % и 0,4…0,9 %,
10,0…14,0 %, и у полёвок составляет 0,3…0,6 %; 13,0…19,0 % и 0,4…0,7
%; 12,0…14,0 % соответственно.
На территориях обитания со средним загрязнением почв
137
Cs
20,4….32,3 Бк/кг сохраняется та же тенденция по выявлению показателей
Шик-реакции лимфоцитов. Так, у коров, больных лейкозом, и у полёвок
крупных гранул и блоков, а так же мелких и средних гранул выявляется в
подтаёжной зоне 2,1…3,2 %; 61,0…76,0 % и 2,0…3,2; 62,0…77,0 %, в лесостепной -
2,0…2,2 %; 63,0…79,0 % и 2,1…2,2 %; 64,0…80,0 % соответ-
ственно.
В наиболее загрязненных районах
137
Cs (29,6…71,4 Бк/кг) в очередной
раз сохраняется одинаковый ряд показателей для коров больных лейкозом и
полёвок при выявлении Шик-реакцией гранул различных размеров и структуры в лимфоцитах животных. Так, крупных гранул и блоков, а так же мел-
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
ких и средних гранул в лимфоцитах коров и полёвок из этих районов в подтаёжной зоне 4,3…4,6 %; 55,0…65,0 % и 4,4…4,6 %; 56,0…64,0 %, в лесостепной 4,0…4,9 %; 56,0…64,0 % и 4,2…4,7 %; 56,0…63,0 % соответственно. По остальным показателям у коров с различными заболеваниями (мастит,
гипотиреоз) соответствий с данными Шик – реакции с лимфоцитами полёвки
не отмечается, что указывает на типичность реакции на окружающую среду
для полёвки и коровы с низкой резистентностью к вирусу ВЛ КРС.
Таким образом, по Шик-реакции лимфоцитов, где в качестве маркерных объектов наблюдаются мелкие и средние гранулы, у крыс обнаруживается высокая устойчивость к радиационному состоянию среды обитания, полёвка представляет интерес, так как является маркерным биоиндикатором,
отражающим влияние мутационной изменчивости на генофонд популяции,
при этом данные совпадают с таковыми у коров с низкой резистентностью к
лейкозу.
Основываясь на полученных данных, нами был очерчен коридор параметров цитогенетической нормы, определены критические значения показателей Шик - реакции лимфоцитов исследуемых животных, которыми необходимо пользоваться при профилактических мероприятиях при оздоровлении от лейкоза стад крупного рогатого скота на экологически неблагоприятных территориях.
В районах влияния аварии на Чернобыльской АЭС137Cs оказывает не
однозначное влияние на генофонд сельскохозяйственных животных. В частности, наличие мелких и средних гранул в периферической крови животных
следует считать фактором иммунотоксичности, является фактором онкотоксичности, определяющим снижение резистентности к лейкозу. Динамика соотношения заболеваемости коров лейкозом на экологически благополучных
и неблагополучных по
137
Csтерриториях ландшафтно-географических зон
области доказывает, что после аварии на Чернобыльской АЭС на территориях условно благополучных по
137
Cs процент выбраковки коров из стада по
причине лейкоза возрастает незначительно, тогда как в экологически загряз-
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
ненных зонах наблюдается снижение резистентности по данному заболеванию.
Мы исследовали цитоморфологические показатели лимфоцитограмм
восприимчивых к ВЛКРС коров и полёвок, инфицированных хантавирусами,
таким образом, выбрав критерием устойчивость к вирусным заболеваниям.
Это необходимо чтобы оценить влияет ли естественная или искусственная
эволюция на уровень мутационного процесса вызванного радиационным фоном. В экологически загрязненных радионуклидами районах выявлено достоверно большее число лимфоцитов с индуцированными хромосомными
абберациями дицентрического типа, абберациями типа «хвостатые» ядра, абберациями цитоплазматического типа - микроядра. Причем, динамика показателя обнаруживается, как у селекционированных животных (молочный
скот), так и у диких видов млекопитающих (полёвки). При кариотипической
оценке экспериментальных коров
были отмечены определенные количе-
ственные и качественные показатели ядерных структур лимфоцитов, сопоставимые с таковыми у биоиндикаторных видов – полёвок обыкновенной и
рыжей (в зависимости от ландшафтно-географической зоны обитания).
Так, в чистой от радионуклидов зоне, количество лимфоцитов с микроядрами у коров, равно как и у полёвок оказалось в абсолютной идентичности,
в норме в среднем 1,10 и 3,00 (таблица 2). Общее число микроядер в этих
лимфоцитах 1,70 и 2,90 единиц соответственно, в т.ч. микроядра размером от
0,5… 1,0 мкм составляет 13,72 % и 13,80 %, от 1,1…3,0 мкм - 70,59 % и 70,11
%, а от 3,1…5,0 мкм их 15,69 % и 16,09 %.
В условиях средней загрязненности радионуклидом, количество лимфоцитов с микроядрами, независимо от вида животных, составляет уже 13,60
и 14,93 ед. на 500 лимфоцитов. Общее число микроядер в лимфоцитах 54,7 и
57,0 ед. соответственно, в т.ч. микроядра размером от 0, 5…1,0 мкм в среднем 32,91 % и 33,98 %, от 1,1…3,0 мкм составляют 41,62 % и 40,29 %, от
3,1…5,0 мкм 25,47 % и 25,73 %.
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
На сильно загрязненных территориях, количество лимфоцитов с микроядрами 27,47 и 25,9 ед. соответственно. Общее число микроядер в них
134,13 и 131,03 ед. соответственно, в т.ч. микроядра размером от 0,5…1,0
мкм составляют 78,01 % и 75,91 %, от 1,1…3,0 мкм их содержится 12,15 % и
11,90 %, от 3,1…5,0 мкм их 9,84 % и 12,19 %. Данные необходимо использовать при проведении биоиндикаторного тестирования, так как гораздо проще
брать кровь у мелких млекопитающих, чем делать соответствующие анализы,
стрессируя дойных коров.
При анализе цитоморфологических показателей животных были также
выявлены хромосомные абберации дицентрического типа. Так, в экологически чистой по радионуклидам зоне, количество «дицентриков» составляет
1,21 ± 0,05 и 2,34 ± 0,52 ед. на 500 лимфоцитов соответственно.В средне
благополучной зоне количество дицентрических лимфоцитов колеблется в
среднем от 17,87 ± 0,30 ед., до 19,61 ± 0,88 ед. на 500 лимфоцитов. В самой
пораженной радионуклидами зоне, содержание «дицентриков» составляет в
среднем на 500 лимфоцитов 29,89 ± 0,76 и 31,07 ± 0,44 ед. соответственно.
Анализируя результаты микроядерного теста больных коров лейкозом и маститом, обитающих в экологических неблагоприятных условиях, мы обнаружили различия показателей для этих двух распространенных заболеваний.
Так количество лимфоцитов с микроядрами у здоровых коров в среднем в
пределах 1,08 ед. или 0,22 % на 500 лимфоцитов.
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
Таблица 2 - Динамика цитоморфологической характеристики аббераций типа
- микроядра в лимфоцитах животныхс различных по загрязенеию 137Cs
территорий
Загрязнение
Общее
число
микроядер
Микроядра размером от
0,5…1,0
мкм, %
Микроядра
размером от
1,1…3,0
мкм, %
1,10 ± 0,139
1,70 ± 0,199
13,72
70,59
Микроядра
размером от
3,1…5,
0 мкм,
%
15,69
3,00 ± 0,214
2,90 ± 0,222
13,80
71,11
16,09
13,60 ± 0,370
54,70 ± 1,920
32,91
41,62
25,47
14,93 ± 0,395
57,00 ± 1,966
33,98
40,29
25,73
27,47 ± 0,853 134,13 ± 5,051
78,01
12,15
9,84
25,90 ± 0,642 131,03 ± 6,032
75,91
11,90
12,19
Количество
лимфоцитов
с микроядрами на 500
штук
15,2…18,0
Бк/кг
15,2…18,0
Бк/кг
20,4….32,3
Бк/кг
20,4….32,3
Бк/кг
29,6…71,4
Бк/кг
29,6…71,4
Бк/кг
Общее количество микроядер, обнаруженных нами в маркерных лимфоцитах у здорового животного в среднем составляет 1,63 0,15 ед. (таблица
3).
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
Как указывают А.Ф. Яковлев и соавторы (1997), А.А. Коровушкин
(2004) достаточно многосторонне изучающие цитогенетические особенности
лимфоцитов при различных физиологических состояниях животных и человека повышенная частота встречаемости клеток с микроядрами является показателем кариотипической нестабильности в популяциях. В нашем случае
увеличение параметров микроядерного теста в экологически неблагополучных районах области отмечается и при лейкозе, и при мастите коров. Однако
в процентном отношении при лейкозе встречается гораздо большее количество нарушений ядерных структур, чем при мастите.
Так, при лейкозе, когда и гуморальные и клеточные факторы защиты д
у животных ослаблены, обнаруживается 7,52 0,13 тыс. маркерных лимфоцитов из расчета на 500 клеток, в которых отмечается 34,0 0,74 микроядер,
что превышает эти показатели в сравнении с таковыми у здоровых коров в
среднем в 7,0 и в 4,5 раз соответственно.
Несколько иная картина наблюдается в крови коров больных маститом.
У них на 500 лимфоцитов маркерных 1,19 0,06, что на 10,2 % превышает
аналогичный показатель в контрольной группе. Количество микроядер в этих
лимфоцитах 2,31 0,12, что так же несколько выше, чем у здоровых животных в 1,4 раза. Однако по сравнению с подобными результатами у лейкозных
коров явно видно, что при мастите происходит менее значительное повреждение ядер лимфоцитов. Анализируя эти данные, мы пришли к выводу, что
воспалительный процесс, как, например, при мастите, практически не приводит к цитогенетическим изменениям в геноме, тогда как лейкоз наносит значительный ущерб организму в этой области.
При гипотиреозе так же наблюдаются отличия в параметрах микроядерного теста. Среди 500 лимфоцитов таких животных с микроядрами 5,14
штук, что в среднем в 5 раз превышает норму, впрочем, как и по показателям
общего числа микроядер в маркерных лимфоцитах 6,17 при норме 1,63.
Следует еще раз подчеркнуть, что микроядра в лимфоцитах появляются в результате различных нарушений митотического деления хромосом. В
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
основном микроядра появляются в результате замедления расхождения хромосом или хроматид, в анафазе или телофазе митоза. От способа возникновения микроядра в лимфоците зависит размер первого, что также является
важным фактором микроядерного теста.
Таблица 3 - Показатели микроядерного теста в лимфоцитах коров
с условно неблагополучных по 137Csтерриторий
Группы коров
Показатели
больные лейкозом
больные маститом
больные
гипотиреозом
1,08 0,061 7,52 0,136***
1,19 0,067
5,14 0,136
здоровые
лимфоцитов
с
микроядрами
(на 500 лимфоцитов)
общее число
микроядер в
маркерных
1,63 0,154 34,0 0,742*** 2,310,126*** 6,17 0,122
лимфоцитах
в т. ч. микроядра
(%): размером
0,5…1,0 мкм
20,51
74,02
11,36
40,78
1,1…3,0 мкм
71,79
20,27
45,45
13,68
3,1…5,0 мкм
7,70
5,71
43,19
45,54
Примечание: * - маркерный лимфоцит – это лимфоцит, содержащий одно и более микроядер.
У здоровых коров в основном встречаются микроядра средней величины 1,1…3,0 мкм, их 71,79 %, крупных микроядер размером 3,1…5,0 мкм
встречается намного меньше – 7,7 %, мелкие микроядра размером 0,5…1,0
мкм встречаются в 20,51 % на 500 лимфоцитов.
Однако оказалось, что размеры микроядер меняются в зависимости от
заболевания животного. Так, действие ВЛКРС сопровождается увеличением
в маркерных лимфоцитах мелких микроядер до 74,02 %. Тогда как при ма-
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
стите коров, по сравнению со здоровыми особями, увеличивается количество крупных микроядер, их в среднем насчитывается 43,19 %.
По размеру микроядер обычно судят о том, как оно образовано: либо
из ацентрического конца хромосомы, либо из целой хромосомы при замедлении этой хромосомы в процессе митотического деления. В случае если микроядро появляется из участка ацентрической хромосомы, то размеры ядра
различны (СтарковаЕ.В., 1997). Р.В. Амбурладзе (1999) отмечает, что в результате радиационного воздействия на кровь испытуемого животного микроядра разрушаются, при этом количество микроядер резко возрастает, однако их размер уменьшается.
В нашем случае подобная картина отмечается и у коров при заболевании лейкозом, а количество мелких микроядер значительно превышает этот
показатель у здоровых особей. При мастите коров такой тенденции в наших
исследованиях не наблюдается. Это служит еще одним доказательством того,
что в возникновении и развитии онкологической болезни крови немаловажное значение имеет экологическое загрязнение среды.
При исследовании мазка крови здорового животного (коров) относительно редко встречаются лимфоциты с двумя ядрами, соединенными между
собой перетяжкой в виде моста. Нами подсчитано, что в среднем в группе
здоровых коров при естественном радиационном фоне почв обнаруживается
не более 1 лимфоцита с такой аномалией. 1,03 межъядерных моста на 500
клеток, или 0,21 % лимфоцитов (таблица 4).
Увеличение радиационного фона до средних, по загрязнению среды,
значений, приводит к скачку количества «мостов» у здоровых особей до 0,72
%, у предрасположенных к лейкозу животных до 2,99 %, что даже выше, чем
значение показателя при сильном загрязнении – 2,77 %.
Следует отметить, что у коров больных маститом, в различных экологических зонах по загрязнению
137
Cs, нами не обнаружено достоверной раз-
ницы по сравнению со здоровыми коровами по наличию мостов.
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
Таблица 4 - Сопоставимость количества ядерных мостов в лимфоцитах животных в зависимости от уровня загрязнения территории 137Cs
Уровень загрязнения территории 137Cs
Группы
животных
естественный фон
среднее загрязнение
сильное загрязнение
15,2…18,0 Бк/кг
20,0….32,3 Бк/кг
29,6…71,9 Бк/кг
Количество двуядерных лимфоцитов с «мостами»
на 500 клеток
%
на 500 клеток
%
на 500 клеток
%
здоровые коровы,п=30
1,03 0,140
0,21
3,60 0,207***
0,72
3,33 0,168***
0,67
больные лейкозом коровып = 30
13,63 0,265
1,82
14,93 0,283**
2,99
13,86 0,364
2,77
1,00 0,179
0,20
3,63 0,206***
0,73
3,60 0,218***
0,72
3,53 0,190
0,71
6,00 0,349***
1,20
3,56 0,202
0,71
1,07 0,135
0,21
3,67 0,161***
0,73
3,60 0,170***
0,72
0,93 0,126
0,19
3,50 0,218***
0,70
3,200,200***
0,64
13,270,314
2,65
14,870,377**
2,97
13,970,155*
0,79
больные маститом коровы
п = 30
больные гипотиреозом коровып = 30
больные гипотиреозом при
введении Са2+ - антагониста
коровып = 30
здоровые полёвкип = 30
полёвки с ГЛПСп = 30
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
У коров с гипотиреозом при естественном фоне и сильном загрязнении
среды
137
Cs, количество мостов составляет 0,71 %, тогда как средняя экоток-
сикация территории радионуклидом приводит к повышению аббераций в
лимфоцитах до 1,20 %. Причем у тех особей, которым регулировали адаптивность к недостатку йода, так же наблюдается самое высокое количество
ядерных мостов именно при среднем загрязнении среды
137
Cs, однако коли-
чество аббераций снижается практически на половину. Таким образом, введение Са2+ -антагониста позволяет адаптировать животных к экологически
неблагополучной среде.
Таким образом, наличие ядерных мостов указывает на появление в кариотипе животных изучаемой популяции дицентрических хромосом, что
продуцирует повышение частоты проявления кариотипических нарушений и
отражает мобилизационный резерв наследственной изменчивости.
По нашим данным, для коров полёвки являются оптимальным биоиндикатором, отражающим ту же тенденцию в хромосомных абберациях типа
ядерные мосты. Обнаруживается сопоставимость показателя в группах здоровых животных (у коров – 1,03 ед., у полёвок – 0,93 ед.), а так же между коровами, больными лейкозом (13,63 ед.) и полёвками, инфицированными хантавирусами (13,27 ед.), что необходимо использовать при профилактических
работах на экологически неблагополучных территориях.
Таким образом, наличие ядерных мостов указывает на появление в кариотипе животных изучаемой популяции дицентрических хромосом, что
продуцирует повышение частоты проявления кариотипических нарушений.
Следующая изучаемая нами аномалия – это хвостатые ядра. Протрузии ядерных структур в виде длинных выпячиваний в цитоплазму также возникают при нарушении митотического расхождения хромосомного материала лимфоцитов. Методом определения частоты встречаемости лимфоцитов с
хвостатыми ядрами удалось отобрать животных цитогенетической «группы
риска», у которых была выявлена повышенная частота дицентрических хромосом.
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
По нашим данным в контрольной группе здоровых коров на 500 лимфоцитов встречается до 0,97 лимфоцитов с хвостатыми ядрами, то есть у
здоровых коров лимфоциты с множественными протрузиями ядра встречаются крайне редко, в единичных случаях. Та же тенденция и у полёвок, что
очередной раз доказывает возможность их использования в качестве биоиндикаторного вида. При лейкозе коров отмечается увеличение количества
ядерных протрузий до 2,45 %, при мастите отличий от здоровых особей не
наблюдается (таблица 5).
Таблица 5 - Наличие хвостатых ядер в лимфоцитах животных в зависимости от экотоксикации территории обитания 137Cs
Уровень экотоксикации территории 137Cs
Группы
животных
естественный фон
15,2…18,0
Бк/кг
среднее загрязнение
20,0….32,3
Бк/кг
сильное загрязнение
29,6…71,9
Бк/кг
Количество двуядерных лимфоцитов с «хвостами»
на 500 клеток
здоровые коровы
п = 30
больные лейкозом
коровы
0,97 0,122
1,00 0,136
3,57 0,171***
12,27 0,203
24,13 0,469***
46,17 1,027***
1,03 0,148
1,07 0,148
1,00 0,186
5,30 0,280
1,30 0,221***
1,27 0,191***
1,07 0,166
1,13 0,202
1,10 0,054
0,97 0,155
1,00 0,152
3,60 0,189***
12,23 0,313
24,22 0,478***
46,13 0,783***
п = 30
больные маститом коровы п = 30
больные гипотиреозом
коровы
п = 30
больные гипотиреозом
при введении Са2+ - антагониста п = 30
здоровые полевки п =
30
полёвки, инфицированные хантавирусамип = 30
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
При гипотиреозе, благодаря экспериментальной работе по повышению
компенсаторной адаптивности животных к условиям среды на территориях с
риском йодной эндемии введением блокатора «медленных» кальциевых каналов, обнаружено, что количество протрузий типа «хвостатые» ядра нормализуется, происходит уменьшение их числа в среднем на 500 лимфоцитов с
5,30 ед. (у гипотиреоидных особей) до 1,07 ед. (после введения Са2+ - антагониста). Индукция адаптивности к условиям среды при гипотиреозу Са2+- антагонистом приводит к изменению процессов при митозе лимфоцитов.
Следует заключить, что лишь при низкой резистентности к лейкозу активно задет наследственный аппарат клетки. И очередной раз подчеркнуть,
что полёвка является прекрасным биоиндикатором, по состоянию ядерного
материала, которой можно строить прогнозы о заболеваемости крупного рогатого скота лейкозом на территории их совместного обитания.
При мастите у коров отмечается в среднем 1,03 лимфоцита с «хвостатыми ядрами», что не отличает особей по этому показателю от здоровых. Таким образом, мутационный процесс не определяет устойчивость коров к маститу и количество «хвостатых» ядер не является критерием при тестировании особей на предрасположенность к этому заболеванию.
По мнению С.Н. Прошина, В.Ю. Кравцова, М.Г. Ольнева, А.Ф. Яковлева, Ю.Б. Вахтина (1998) возникновение дицентрических хромосом и центрических колец в результате хромосомных аберраций, как правило, приводит к
образованию «хромосомных мостов». На взгляд этих авторов, одним из вероятных исходов завершения митозов, в которых наблюдаются мосты, может
быть их разрыв с последующим образованием «хвостатых» ядер, которые по
своим морфологическим критериям соответствуют обсуждаемым ядрам с
протрузиями. Фактически отсутствие мостов и хвостов при мастите коров
указывает на отсутствие взаимосвязи этого заболевания от цитогенетических
аномалий ядерного материала, отражающихся в появлении в геноме дицентрических хромосом, что и подтверждено в нашем исследовании. Причем
следует отметить, что из 16 известных, описанных Е. В. Старковой и др.
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
(1997) морфологических типов ядерных хвостов в лимфоцитах коров чернопестрой породы встречаются лишь протрузии без специфических терминальных расширений, что указывает на образование этих ядерных структур
без обычно сопровождающего этот процесс замедления расхождения хромосом при митозе.
В группе здоровых коров и полёвок на 500 лимфоцитов встречается до
0,97 лимфоцитов с хвостатыми ядрами, введение Са2+ -антагониста приводит
в норму процессы митоза, у гипотиреоидных коров снижается количество
хвостатых ядер с 5,30 ед. до 1,07 ед.; при лейкозе у коров в среднем 12,27
хвостатых ядер, при инфицированности хантавирусами у полёвок идентичные показатели – 12,23 ед. на 500 лимфоцитов. Таким образом, «хвостатые
ядра» являются основательным критерием при тестировании животных на
предрасположенность к заболеваниям на экологически неблагополучных
территорях. Критерий необходимо использовать в методике биотестирования
с использованием полёвок.
Данные по встречаемости «хвостатых» ядер в лимфоцитах крупного
рогатого скота интересно использовать не только в разрезе экологии среды
обитания животных, но и в качестве отражения состояния кариотипа при
различных заболеваниях, в сравнении со здоровыми особями. У здоровых
коров количество «хвостатых» ядер всречается в 0,97 случаях, при лейкозе в
12,27, при мастите в 1,02, при гипотиреозе в 1,27 исследованиях, что необходимо использовать в своей практике селекционерам.
В результате проведенного кариотипического анализа лимфоцитов полёвок и коров из разных по загрязнению
137
Cs, зон, была отмечена тенденци-
озность аббераций типа хвостатые ядра (таблица 6). Так, в чистой от радиационного загрязнения зоне, наличие в лимфоцитах таких аббераций в среднем составляет 1,43… 1,90 ед. на 500 лимфоцитов. В условно благополучной зоне со средними показателя загрязнения
137
Cs, содержание «хвостов»
колеблется в пределах 17,20...19,73 ед. ± 0,49 на 500 лимфоцитов. В условно
неблагополучной зоне - 27,93…29,23 ед., что необходимо использовать при
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
применении биотестирования реакции организма животных на радиационное
загрязнение среды.
Таблица 6- Цитоморфологическая характеристика аббераций типа хвостатые
ядра в лимфоцитах животных с различных по загрязнению137Cs
территорий
Загрязнение
Количество лимфоцитов с хвостатыми ядрами на 500 штук
благополучная зона
среднее
сильное
1,43 ± 0,157
1,90 ± 0,168
17,20 ± 0,601
19, 73 ± 0,591
29,22 ± 0,801
27,93 ± 0,625
Одним из определяющих факторов кариотипических изменений отражающихся в нарушениях ядерных структур клетки с образованием протрузий типа «хвостов» и «мостов», а также микроядер являются ядрышковые
организаторы. Эти структуры ответственны за синтез рРНК, который происходит на генах, расположенных в участках ДНП, образующих эти ядрышковые организаторы или ядрышковые цистроны (ЗаварзинА.А., ХаразоваА.Д.,
МолитвинМ.Н., 1992).
Одним из определяющих факторов кариотипических изменений отражающихся в нарушениях ядерных структур клетки, с образованием протрузий типа «хвостов» и «мостов», а также микроядер являются ядрышковые
организаторы (ЯОР). Эти структуры ответственны за синтез рРНК, который
происходит на генах, расположенных в участках ДНП, образующих эти ядрышковые организаторы или ядрышковые цистроны (А.А. Заварзин, А.Д.
Харазова, М.Н. Молитвин, 1992). Величина и структура спейсоров, разделя-
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
ющих цистроны, характеризуется четко выраженной видовой специфичностью. В наших исследованиях все количественные и качественные изменения
ядерных структур в лимфоцитах описываются по методике А.Ф. Яковлев и
др. (2001) в сопоставлении с индексом ядрышкового организатора (индекс
ЯОР). Так, в контрольной группе здоровых коров индекс ЯОР 2,08, что очередной раз подчеркивает достоверную идентичность группе резистентных к
хантавирусам, к заболеваемости ГЛПС полёвок ЯОР у которых 2,09. При
этом абсолютно сопоставимы и индексы ЯОР животных низко резистентных
к вирусным заболеваниям, у коров больных лейкозом показатель составляет
4,24, у больной ГЛПС полёвок - 4,21 (таблица 7).
Таблица 7 - Ядрышковые организаторы в лимфоцитах животных с экологически неблагоприятной по радионуклидам и тяжелым металлам йодэндемичной территории
Показатели ядрышковых организаГруппы животных
торов
число ЯОР в 100
Индекс
лимфоцитах
ЯОР
здоровые коровы,п = 30
207,5 6,40
2,08
коровы, больные лейкозом, п = 30
423,5 24,10***
4,24
коровы, больные маститом,п = 30
248,6 11,48 **
2,49
коровы, больныегипотиреозом,п = 30
239,0 8,37 **
2,39
коровы, больные гипотиреозом с регу-
237,9 7,48**
2,38
здоровые полёвки, п = 30
208,9 5,42
2,09
полёвки, больные ГЛПС, п = 30
420,7 13,31***
4,21
ляцией адаптивности Са2+антагонистом,п = 30
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
При сравнении показателей по остальным заболеваниям коров с биоиндикаторным видом грызунов связи не выявлено. Таким образом, индекс
ядрышкового организатора является маркерным показателем при проведении экологического мониторинга резистентности крупного рогатого скота к
лейкозу. При заболевании коров маститом происходит увеличение индекса
ЯОР на 0,41 единицу или на 19,7 %. При лейкозе этот показатель возрастает
еще сильнее и становится равным более 4,0, причем разница между контролем и группой больных по лейкозу коров составляет 2,16.
При сравнении показателей по остальным заболеваниям коров с биоиндикаторным видом грызунов связи не выявлено. Таким образом, индекс
ядрышкового организатора так же является маркерным показателем при проведении экологического мониторинга резистентности крупного рогатого скота к лейкозу.
При заболевании коров маститом происходит увеличение индекса ЯОР
на 0,41 единицу или на 19,7 % . При лейкозе этот показатель возрастает еще
сильнее и становится равным более 4, причем разница между контролем и
группой больных по лейкозу коров составляет 2,16.
Как видно из вышеизложенного, в опытных группах изучаемых животных нами отмечаются кариотипические изменения ядерного материала.
С.Я. Плященко (1979) описывая опыты Г. Селье по возникновению
стрессов, указывают на то, что природа и физиологические свойства животного, формировавшиеся в течение длительного времени в поколениях не в
состоянии изменяться с той же быстротой как изменяются условия окружающей среды и технология ведения животноводства. Поэтому возникает
несоответствие между биологической природой организма, его физиологическими возможностями при ответных реакциях индивидуума на воздействие
окружающей среды. Мы, этим же объясняем наличие различных протрузий и
изменений ядерного материала у здоровых животных. Однако, не факт, что
указанные изменения в ядерных структурах перейдут в виде скрытого резерва наследственной изменчивости в последующие поколения и не проявятся
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
отрицательно. Хотя остается фактом, что в контрольную группу попали коровы явно наиболее устойчивые к воздействию факторов внешней среды, о
чем свидетельствуют биохимические и морфологические показатели крови
этих животных.
Динамика цитоморфологической характеристики хромосомных аббераций дицентрического типа в лимфоцитах коров, больных гипотиреозом из
различных эколого-эпидемиологических зон Рязанской области представлена
в таблице 8.
По нашим исследованиям оказалось, что именно дицентрические абберации являются показательным признаком при проведении экологического
мониторинга коров больных гипотиреозом. В первую очередь, обращает на
себя внимание тот факт, что с увеличением уровня экотоксикации территории радионуклидом 137Cs до средних и высоких значений, что на территории
Рязанской области составляет 20,0….32,3 Бк/кг и 29,6…71,9 Бк/кг, в ядерном
материале лимфоцитов коров больных гипотиреозом отмечается рост числа
дицентрических аномалий хромосомного материала в прямой зависимости от
экотоксикации среды радионуклидом.
По сравнению с территориями обитания крупного рогатого скота, где
отмечаются фоновые значения 137Cs, в пределах 15,2…18,0 Бк/кг, увеличение
числа «дицентриков» (дицентрические абберации хромосом) для высоко
продуктивных коров с территорий со средней загрязненностью составляет в
группе интактных 16,60 ед.,с сильно загрязненных территорий 28,70 ед., для
низко продуктивных 17,37 ед. и 28,34 ед.
При индукции Са2+ - антагонистом компенсаторной адаптивности животных к низкому содержанию йода в окружающей среде, количество дицентрических лимфоцитов снижается, однако по прежнему остается выше нормы. Так, для высоко продуктивных гипотиреоидных животных при естественном фоне влияния радионуклида
137
Cs «дицентриков» на 500 лимфоци-
тов меньше в среднем на 1,004 ед.; при среднем загрязнении на 2,07 ед.. при
сильном на 6,0 ед.
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
Таблица 8 - Цитоморфологическая характеристика хромосомных аббераций
дицентрического типа в лимфоцитах коров из различных по загрязнению
137
Cs территорий (в зависимости от продуктивности)
Количество лимфоцитов дицентрического типа
(на 500 лимфоцитов)
Уровень
ПродукзагрязнеГруппы
тивность
ния почв
гипотиреогипотиреоидные с рекоров
интактные
137
Cs
идные
гуляцией адаптивно(п = 30)
(п = 30)
сти(п = 30)
высокая
1,20 ± 0,139
1,27 ± 0,116
1,30 ± 0,161
фоновое
низкая
2,33 ± 0,264
2,53 ± 0,278
2,40 ± 0,228
среднее
высокое
высокая
17,87 ± 0,867
19,30 ± 1,019
17,97 ± 0,787
низкая
19,60 ± 0,846
22,63 ± 0,753
20,97 ± 0,695
высокая
29,90 ± 0,821***
37,57 ± 0,855
31,63 ± 0,830***
низкая
31,07 ± 0,933***
42,10 ± 1,332
41,83 ± 1,548
Обращает на себя внимание тот факт, что введение Са2+-антагониста
практически уравнивает особей группы с интактными животными при высокой продуктивности, что не происходит у низкопродуктивных коров.
Таким образом, в результате цитоморфологических исследований крови экспериментальных групп коров нами было выявлено, что существуют
различные мутации, вызванные уровнем радиационного фона. Такая же динамика аббераций ядерных структур прослеживается и при исследовании
крови грызунов – переносчиков инфекционных заболеваний (в нашем случае
ГЛПС) в исследуемых зонах. Таким образом, нам удалось вывить одинаковую динамику между показателями лимфоцитограмм здоровых и инфицированных хантавирусами полёвок и крупного рогатого скота с различной резистентностью к лейкозу. Полученный результат необходимо использовать в
практической деятельности ветеринарных врачей и селекционеров, чтобы
добиться повышения резистентности коров к вирусу лейкоза. Если сопоставить данные по абберациям хромосомного материала с количеством заболевших животных, то можно увидеть, что существует прямая зависимость
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
между количеством мутаций и количеством заболевших животных. Соответственно, следует считать, что мутации типа микроядра являются маркерными
показателями изменения генофонда популяции крупного рогатого скота на
территории Рязанской области, которые необходимо использовать санитарно
- эпидемиологической и экологической службам при проведении профилактических работ.
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
Глава 2. Цитоморфологические параметры морфофункциональной регуляции компенсаторной адаптивности миокарда и железистой ткани
животных, обитающих на экологически неблагоприятной территории
Наиболее выраженные изменения сердечно - сосудистой системы возникают при тяжелом течении первичного гипотиреоза. Вследствие выраженных нарушений метаболизма при гипотиреозе развивается дистрофия миокарда. Первое
клиническое описание сердца при гипотиреозе привел Н. Zondek (1918), которому удалось выделить основные признаки патологических нарушений— брадикардию, увеличение сердца – кардиомегалию. Н. Zondek (1938) описал характерные изменения в ЭКГ, а именно, сглаженность зубцов Ри Г, возникающие
на фоне неудовлетворительной работы щитовидной железы.
Гипотиреоз представляет собой заболевание, возникающее в результате понижения функции щитовидной железы. Различают гипотиреоз первичный, вторичный и третичный. Первичный гипотиреоз развивается в результате поражения непосредственно самой ткани щитовидной железы, при вторичном гипотиреозе снижение функции щитовидной железы возникает в результате поражения
гипофиза, причиной третичного гипотиреоза является нарушение гипоталамической регуляции тиреотропной функции гипофиза (Баранов В. Г., 1977; StahnkeNL,
1984).В работе исследования касались первичного гипотиреоза коров, который
возник вследствие неудовлетворительного развития щитовидной железы в процессе онтогенеза телят. Тяжесть течения первичного гипотиреоза обусловлена
снижением концентрации в крови тиреоидных гормонов (Т3, Т4). От степени
снижения концентраций Т3 и Т4 зависит и выраженность клинических проявлений.
Наиболее четкое представление о состоянии миокарда, и в частности о
развитии дистрофических изменений, дает ЭКГ – исследование, о чём подробно
информирует в своей работе Л.И.Левина (1989). Так, при гипотиреозе, выявляются
снижение, сглаженность,
инверсия
зубцаТи
депрессия
сегмента
ST(Славина Л. С, 1979; Балаболкин М. И. и др.,1984; BennettJ., Steyn А., 1983,
и др.). По мнению автора, сложность оценки изменений сегмента STи зубца Т
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
при гипотиреозе заключается в том, что их изменения не являются специфичными. Инверсия зубцаТ требует решения вопроса, не являются ли эти изменения проявлением коронарного атеросклероза.
Мышечные клетки сердца млекопитающих являются упорядоченно организованными системами. Как правило, наблюдения проводятся на клетках, которые имеют тот же возраст, что и само животное, так как очень небольшое количество данных свидетельствует о возможности регенерации миоцитов сердца
млекопитающих. Эти клетки прекрасно адаптируются к неблагоприятным условиям, а количество сарколеммальных и миоплазматических компонентов изменяется при этом так, что постоянство отношения площади поверхности к объему
поддерживается с высокой степенью точности (HillsL.D., BraunwaldE.,
1977;WillersonJ. Т.,HillsL. D., BujaL. M., 1982).
М.С. Форбс, Н. Сперелакис (1990) посвятили исследованию ультраструктуры сердца в норме и патологии огромное количество времени.
Именно эти ученые подробно описали миокард при различных болезнях
(диабете, тиреотоксикозе, гипотиреозе и т.д.), что даёт возможность экспериментаторам при работе с цитоморфологией сердца проводить сравнительную характеристику, сопоставлять свои результаты.
Дистрофические изменения миокарда при гипотиреозе, подтверждены экспериментальными исследованиями. В эксперименте гипотиреоз у животных получали удалением щитовидной железы (Рязанова Е.А. и соавт., 1995), так и введением антитиреоидных реагентов. По многичисленным сообщениям ученых при
гипотиреозе у экспериментальных животных различных видов определяется атрофия миокардиальных волокон, что принято расценивать как адаптацию сердечной
мышцы к понижению поступления в организм кислорода.
С морфологической точки зрения, исследователи наблюдают изменения
стромы и паренхимы в миокарде животных, причем по мере развития заболевания и нарастания отека стромы прогрессируют дистрофические изменения миокардиальных клеток, которые постепенно перерастают в очаговые некробиотические и некротические поражения (Павлюк В. Г., 1978).
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
Общее описание ультраструктуры сердца дано в ряде крупных обзоров WillersonJ. Т., BujaL. M. (1980), BujaL. M., WillersonJ. T. (1981), OlivaP. B.
(1981), а кроме того, опубликовано множество узко специализированных сборников, посвященных одной, или нескольким клеточным компонентам, особенно мембранные системам, среди них ReimerK. A., JenningsR. (1979), BujaL. M.,
HillsL. D., Petty С S., WillesonJ. T. (1981), Hirsh P. D., Campbell W. В., Willerson
J. Т., Hills L. D.(1981).
Некробиотические повреждения миокардиальных клеток (фуксинофильная
дегенерация, плазматическое пропитывание, вакуолярная и жировая дистрофия,
миоцитолизис, глыбчатый распад) возникают в разное время после удаления, щитовидной железы и наблюдаются в различных отделах миокарда (Степанова
С.А., 1992). В ткани миокарда обнаружено также повышенное содержание
натрия и воды, в то время как содержание калия значительно снижено. Дистрофия миокарда при гипотиреозе сопровождается снижением интенсивности окислительного фосфорилирования, замедлением синтеза белка, уменьшением поглощения кислорода миокардом (Ром – Бугословская Е.С., 1976).
При гипофункции щитовидной железы возникает отек миокарда, в полости перикарда нередко накапливается транссудат (до 500 мл). Это связано как
с повышением концентрации натрия, так и с увеличением проницаемости капилляров. Жидкость в полости перикарда желтоватого или бурого, цвета, прозрачная, богатая альбумином, холестерином, содержит также мукоидное вещество. При микроскопии обнаруживаются эритроциты, лимфоциты, моноциты,
эндотелиальные и полинуклеарные клетки. У больных гипотиреозом нередко
развивается анемия, что усугубляет дистрофические изменения миокарда, нарушает гемодинамику.
В условиях гипоксии или ишемии происходит нарушение ряда метаболических процессов в кардиомиоцитах, лишенных поступления кислорода. Кроме
того, происходит повреждение плазматической мембраны. Раньше всего нарушаются функции специфических мембранных насосов, таких как (Na+, К+)АТФаза, и постепенно увеличивается проницаемость мембраны. Эксперимен-
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
тальные данные свидетельствуют о том, что наступление необратимых изменений коррелирует с появлением обширных дефектов мембраны, при которых изменяется ее проницаемость для поливалентных ионов и происходит деградация
фосфолцпидов. Нарушение функций мембраны приводит к: а) изменению потоков ионов натрия, калия, хлора и воды, что вызывает разбухание клеток; б) превышению поступления ионов кальция в клетки над их выведением, что вызывает развитие токсических эффектов этого катиона. Степень разбухания клеток и
величина аккумуляции кальция определяются тем, насколько легко внеклеточная
жидкость проникает внутрь клеток (Сперелакис Н., 1990).
Как отмечают Поповичи Д., Сяхляну В. (1969) при цитоморфологическом
и гистологическом исследовании, мышцы сердца при гипотиреозе практически
постоянно выраженный отек сократительных волокон и интерстициальной ткани,
вакуолизация плазмолеммы кардиомиоцитов, жировая инфильтрация волокон, с
возрастом очаги фиброза, В отечной жидкости обнаруживается мукополисахариды с PAS-положительной реакцией. В участках миокарда с высокой степенью
ишемии даже небольшие потоки электролитов и воды, вызванные облегчением
обмена между внутриклеточным и внеклеточным пространством, вызывают значительное повреждение клеток.
Механизм повреждения миокарда при интоксикации катехоламинами заключается в активации адренергических рецепторов,стимуляции метаболизма
миокарда и увеличении потреблениямиокардом кислорода. Относительно высокая степень несоответствия между поступлением кислорода с кровью и потребностью миокарда в кислороде может привести к запуску явлений, возникающих при патологии сердца. Необратимая фаза повреждения связана с выраженными дефектами сарколеммальной проницаемости (Сперелакис Н., 1990).
К сожалению, влияние нарушений гормональной регуляции при эндокринных заболеваниях на формирование и течение заболеваний сердечно - сосудистой
системы до настоящего времени изучено недостаточно. Нет единой точки зрения
на основные вопросы патогенеза, клиники и лечения поражений сердца при этих
заболеваниях. Мало внимания уделяется особенностям возникновения и течения
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
сердечно - сосудистых заболеваний у больных с эндокринными заболеваниями. Вместе с тем изменения сердечно - сосудистой системы очень многообразны и
занимают в клинической картине эндокринных заболеваний настолько большое
место, что, вероятно, следует уже говорить о существовании эндокринной кардиологии как самостоятельной науки(Василенко В.Х. 1989; Окороков.А.Н.,
2001)
Основное место в ней занимает дистрофия миокарда. Понятие «дистрофия
миокарда» введено Г.Ф. Лангом, который объединил под этим термином все заболевания сердечной мышцы не воспалительного и не коронарного генеза, обозначавшиеся до этого различными терминами - «кардиомиопатия», «миокардоз»,
«миодегенерация сердца», «миастения сердца» и т. д. Г. Ф. Ланг (1936) считал, что эта категория изменений миокарда теоретически и практически важна, и
включил диагноз «миокардиодистрофия» в классификацию сердечно - сосудистых
заболеваний, принятую на XII Всесоюзном съезде терапевтов в 1935 г.
Основным возражением против этого диагноза была невозможность выявить в то время существующими методами исследования морфологические изменения в сердечной мышце. Наличие морфологических изменений, в существовании которых Г.Ф. Ланг не сомневался, было в дальнейшем подтверждено многочисленными работами по изучению миокарда, выполненными на клеточном и
субклеточном уровне с использованием электронной, люминесцентной и поляризационной микроскопии, а также серией гистохимических и гистотопографических исследований.
Взаимодействие кислых и нейтральных протеиназ, локализованных в
различных структурах клетки, позволяет осуществить ограниченный протеолиз, посредством которого можно повлиять на активацию ферментов и других биологических соединений, что оказывает существенное влияние на течение физиологических процессов в формирующихся тканях. Известно, что
развитие сердечной мышцы во многом определяется уровнем гормонов щитовидной железы, которые регулируют изоферментный состав миозина в
кардиомиоцитах желудочков, особенно в процессе роста особи. Отсюда по-
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
нятен интерес к возможной роли Са2+–зависимых протеиназ в механизме
действия аналогов тиреоидных гормонов при развитии наиболее частого
проявления дисфункции щитовидной железы на экологически неблагополучных по радионуклидам и тяжелым металлам йодэндемичных территориях –
патологии миокарда. К.Стиммер, X.Питеринг, JI.Мюрти и др. (1980) указывают на токсическое действие кадмия и свинца на сердце.
В целом, изменения кардиомиоцитов телят при гипотиреозе, содержащихся на экологически неблагоприятных территориях (группа – интактные)
выражаются в атрофии миокардиальных волокон, наблюдается отек стромы
и паренхимы, которые постепенно перерастают в очаговые некротические
поражения. Фуксинофильная дегенерация, плазматическое пропитывание,
вакуолярная и жировая дистрофия, миоцитолизис, глыбчатый распад и другие патологические состояния сердечной мышцы возникают в кардиомиоцитах
телят
при
недостатке
трийодтиронина
(рис.
1,
рис.
2).
Рис. 1 - Очаг фуксинофильной дегенерации, вакуолярной и жировой дистрофии в кардиомиоците теленка с экологически неблагополучной по радионуклидам и тяжелым металлам йодэндемичной территории. Электронная
микрофотограмма ×15000.
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
Рис. 2 - Участок кардиомиоцита теленка с экологически неблагополучной по
радионуклидам и тяжелым металлам йодэндемичной территории. В зоне
аномального отека сарколеммы первичная лизосома с плотным гомогенным
содержимым. Электронная микрофотограмма ×15000.
Дистрофия миокарда у телят с экологически неблагоприятных территорий сопровождается снижением интенсивности окислительного фосфорилирования, замедлением синтеза белка, уменьшением поглощения кислорода,
как следствие происходит нарушение развития молочной железы, сбой в работе иммунной системы.
Наблюдается митохондриальный компартмент с нарушением архитектоники. Энергетические органеллы набухшие, рыхло располагаются по отношению друг к другу. Общее количество митохондрий по сравнению с нормой (миокард интактных эутиреоидных телят) уменьшается в среднем на
49,6 %. В большинстве митохондрий наблюдается отечность и просветление
матрикса на фоне гомогенизации крист. Количество крист в митохондриях
так же ниже нормы, их в среднем 9, тогда как для данного вида и возраста
животных их должно быть не менее 18. Площадь митохондрии достигает
0,38 мкм2, тогда как в норме 0,30 мкм2.
Количество первичных лизосом в цитограммах миокарда гипотиреоидных телят с экологически неблагополучной территории в 5,5 раз превышает
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
норму, что указывает на активацию аппарата Гольджи к процессам аутолизиса (рис.3, рис. 4). Однако низкое число вторичных гетерогенных лизосом
(их меньше нормы в 2,5 раза) на фоне очагов повреждения актинмиозиновых структур подтверждает изменения проницаемости мембран, что
препятствует работе ферментов, исправить патологию можно регуляцией
компенсаторной адаптивности организма. В зонах гомогенизированных митохондрий и нарушения сократительных компартментов локализуются вторичные крупные лизосомы с гетерогенным содержимым низкой электронной
плотности, остаточные тельца, гранулы липофусцина, что указывает на активацию лизиса структур не способных поддерживать работу кардиомиоцита в
норме.
Рис. 3 - Первичные лизосомы в митохондриальном компартменте восприимчивой к лейкозу коровыс экологически неблагополучной по радионуклидам
и тяжелым металлам йодэндемичной территории. Электронная микрофотограмма ×15000.
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
Рис. 4 - Участок кардиомиоцита коровы восприимчивой к лейкозу с экологически неблагополучной по радионуклидам и тяжелым металлам йодэндемичной территории при индукции компенсаторной адаптивности к низкому
содержанию трийодтиронина. Электронная микрофотограмма ×15000.
Вторичные лизосомы с гетерогенным содержимым средней электронной плотности в миокарде гипотиреоидных животных восприимчивых к лейкозу с экологически неблагоприятной по радионуклидам и тяжелым металлам йодэндемичной территории.появляются лишь после индукции Са2+- антагонистом нормализации проницаемости мембран, что оптимизирует баланс
между седиментируемой и неседиментируемой фракцией ферментов (рис. 5).
Сами лизосомы крупные с гетерогенным содержимым, диктиосомы аппарата Гольджи выражены четко, ампулярные расширения пустые, что указывает на нарушение процесса синтеза ферментов. Отсутствие или малое количество энзимов в клетке миокарда коров с экологически неблагоприятной
по радионуклидам и тяжелым металлам йодэндемичной территории определяет снижение защитной функции кардиомиоцитов. Митохондрии с абсолютной гомогенизацией крист, а соответственно клетка испытывает необходимость в энергетических ресурсах.
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
Рис 5 - Вторичная лизосома с плотным гетерогенным содержимым в кардиомиоците коровы с экологически неблагополучной по радионуклидам и тяжелым металлам йодэндемичной территории. Электронная микрофотограмма
×15000.
Ядра кардиомиоцитов гипотиреоидных коров восприимчивых к маститу с не свойственной инвагинацией, в части клеток переходят в овальную
форму, что в норме не наблюдается в мышечной клетке (рис. 6).
В большинстве ядер измененное перинуклеарное пространство, в котором располагаются мелкие электроноплотные включения
нуклеолеммы.
Нарушение в строении ядерной мембраны можно объяснить лишь аномальным транспортом кальция, регуляцию движения и связь которого с рецепторами во многом обеспечивают гормоны щитовидной железы.
Нередко наблюдаются митохондрии с частичной гомогенизацией
крист.
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
Рис.6 - Аномальная инвагинация ядра кардиомиоцита коровы с экологически
неблагополучной по радионуклидам и тяжелым металлам йодэндемичной
территори. В зоне ядра дистрофические изменения митохондрий. Саркоплазматические пузырьки крупные, локализуются между вакуолизированными
митохондриями. Электронная микрофотограмма ×15000.
В таких зонах локализуются вторичные крупные лизосомы с гетерогенным содержимым низкой электронной плотности, остаточные тельца,
гранулы липофусцина, что указывает на активацию лизиса структур не способных поддерживать работу кардиомиоцита в норме (рис. 7).
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
Рис. 7 - Аутолиз в зоне гомогенизации митохондрий коровы с экологически
неблагополучной по радионуклидам и тяжелым металлам йодэндемичной
территории. Электронная микрофотограмма ×15000.
Актин-миозиновые сократительные структуры кардиомиоцитов у первотелок
с экологически неблагоприятной по радионуклидам и тяжелым металлам
йодэндемичной территории.восприимчивых к лейкозу выглядят следующим
образом: пучки истончены, в области Z-дисков размытые лизированные
участки, структура с нечетким контуром. А именно соединение актинмиозиновых структур являются одними из маркерных локусов ионов Са2+ в
кардиомиоците (рис. 8).
В целом, изменения кардиомиоцитов коров с экологически неблагоприятной по радионуклидам и тяжелым металлам йодэндемичной территории.выражается в атрофии миокардиальных волокон, что мы рассматриваем
как низкую адаптацию сердца к возрастающим потребностям организма в
кислороде, наблюдается отек стромы и паренхимы, которые постепенно перерастают в очаговые некробиотические и некротические поражения.
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
Рис. 8 - Лизированные участки в области Z-дисков при гипотиреозе у
первотелкис экологически неблагополучной по радионуклидам и тяжелым металлам йодэндемичной территории, восприимчивых к лейкозу. Электронная микрофотограмма ×15000.
Фуксинофильная дегенерация, плазматическое пропитывание, вакуолярная и жировая дистрофия, миоцитолизис, глыбчатый распад и другие патологические состояния сердечной мышцы возникают в кардиомиоцитах телят при недостатке гормонов щитовидной железы.
Это влечет за собой
нарушение иммунитета, отсюда низкая резистентность к лейкозу. Недостаточное развитие сердечной мышцы неизбежно приводит к тому, что организм недополучает необходимое количество кислорода для осуществления
клеточного дыхания, а так же питательных веществ, белков, жиров и углеводов для роста и развития, В нашем случае, это приводит к маститам.
Дистрофия миокарда при гипотиреозе сопровождается снижением интенсивности окислительного фосфорилирования, замедлением синтеза белка,
уменьшением поглощения кислорода. Такое нарушение энергетики сердечной мышцы, её пластического обеспечения и электролитные сдвиги вызывают снижение сократительной функции органа.
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
В полости перикарда накапливается транссудат насыщенный альбумином, холестерином, мукоидными веществами, волокна миокарда подвергаются жировой инфильтрации, в ткани накапливаются мукополисахариды, что
обусловлено с одной стороны, повышением концентрации кальция, с другой
– увеличением проницаемости капилляров.
При регуляции компенсаторно-приспособительных процессов Са2+- антагонистом в условиях развития сердечной мышцы телят при низком уровне
гормонов щитовидной железы исследование кардиомиоцитов указывает на
высокую эффективность этого метода (рис. 9). Так, кардиомиоциты в миокарде располагаются плотно.
Рис. 9 - Кардиомиоцит коровы с экологически неблагополучной по радионуклидам и тяжелым металлам йодэндемичной территории, при регуляции
Са2+- антагонистом компенсаторной адаптивности к неблагоприятным условиям обитания. Электронная микрофотограмма ×15000.
Цитогранулы (гликоген, рибосомы) локализуются между четко выраженными миофибриллами, вокруг митохондрий и снаружи от кариолеммы,
что указывает на отсутствие нарушений цитоструктуры клеток миокарда.
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
Границы саркомеров ограничены четкими, хорошо прослеживающимися Z –
дисками (рис. 10). Соединение белков актина и миозина формируют четкие
очертания сократительного волокна, подчеркивают упорядоченность его
строения. В целом, именно такие сократительные пучки мы наблюдаем у
эутиреоидных коров с высокой резистентностью к маститу и лейкозу.
Митохондрии располагаются строгими цепочками, имеют одинаковый
размер, овальную форму, двухконтурную четко очерченную мембрану. В
энергетических органеллах кристы располагаются параллельно друг другу. В
части митохондрий наблюдается плотнозернистый матрикс, что указывает на
активный процесс диссимиляции.
Рис. 10 - Поперечный срез кардиомиоцита коровы с экологически неблагополучной по радионуклидам и тяжелым металлам йодэндемичной территории, при компенсаторной адаптации Са 2+ - антагонистом.
Электронная микрофотограмма ×15000.
В кардиомиоцитах гипотиреоидных телят после введения им Са2+антагониста встречается небольшое количество первичных лизосом, что указывает на нормализацию работы аппарата Гольджи, а именно на влияние
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
ионов Са2+ непосредственно на внутриклеточные мембранные комплексы,
на его роль в процессе нормализации проницаемости мембран.
В саркоплазме встречаются единичные липидные капли со слабой гетерогенной исчерченностью.
Канальцы гладкого эндоплазматического ретикулума в околоядерной
зоне несколько расширены по сравнению с нормой. Аппарат Гольджи выражен слабо, чаще он располагается в околоядерной зоне. В межклеточном
пространстве наблюдаются вакуоли различной величины, что не встречается
в миокарде эутиреоидных животных. В эндотелии капилляров выражены явления активного пиноцитоза.
При сравнительной характеристике миокарда эутиреоидных телят, гипотиреоидных и гипотиреоидных с регуляцией Са2+ -антагонистом адаптивности к низкому гормональному статусу особей с экологически неблагоприятной по радионуклидам и тяжелым металлам йодэндемичной территории.
Следует указать, что применение нифедипина дает положительный
эффект на формирование структуры кардиомиоцитов, на усиление адаптивных функций организма к экологическим условиям содержания животных.
Таким
образом,
регуляция
Са2+-антагонистом
компенсаторно-
приспособительных реакций в процессе развития сердца телят с экологически неблагоприятной по радионуклидам и тяжелым металлам йодэндемичной
территории, позволяет привести цитоморфологию миокардиальной клетки в
норму, причем без использования гормональных препаратов.
Цитограмма кардиомиоцитов телят с экологически неблагоприятной
по радионуклидам и тяжелым металлам йодэндемичной территории, при регуляции Са2+- антагонистом компенсаторной адаптивности
представлена в
таблице 9.
Такое нарушение энергетики сердечной мышцы, её пластического
обеспечения и электролитные сдвиги вызывают снижение сократительной
функции органа. В итоге, недостаточная работоспособность сердечной мышцы неизбежно приводит к снижению функциональной активности вымени.
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
Таблица 9 - Цитограмма кардиомиоцитов телят при регуляции Са2+антагонистом компенсаторной адаптивности к экологически неблагоприятным условиям среды
Группа
эутиреоидные
гипотиреоидные
с регуляцией
с регуляцией
Показатели
интактные
адаптивно- интактные адаптивно(п = 10)
сти
(п = 10)
сти
(п = 10)
(п = 10)
митохондрий в
30
электроно- 54,0±1,38*** 51,8± 2,13*** 27,2 ± 1,58 49,2±2,07***
граммах
крист в митохондрии
18,0 ±0,72*** 17,8± 0,55***
8,8 ± 0,58
16,8±0,72***
средняя площадь
митохондрии,
0,3 ± 0,02**
0,28± 0,02*** 0,38 ± 0,01
0,33± 0,02*
мкм2
первичные лизосомы на 30 полей 11,2± 0,48*** 8,8 ± 0,45***
62,0 ± 2,84 17,8±0,76***
зрения
вторичные лизосомы на 30 полей 8,0 ± 0,34*** 8,2 ± 0,38***
3,2 ± 0,26
6,0 ± 0,37***
зрения
При
разработке
метода
оптимизации
компенсаторно-
приспособительной адаптивности к развитию миокарда телят в условиях гипофункции щитовидной железы, вызванной экологическими условиями содержания, прежде всего мы выяснили действие Са2+- антагониста на кардиомиоциты.
Обнаружена положительная динамика, показатели цитограммы приблизились к норме, что указывает на высокую эффективность применения
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
Са2+- антагониста, как регулятора развития миокарда при низком гипотиреоидном статусе.
Количество энергетических органелл в среднем для низко резистентных к маституэутиреоидных особей в 2,2 раза, для неустойчивых к лейкозу в
1,5 раза меньше, чем у высоко устойчивых. Использование Са2+- антагониста
способствует нормализации количества митохондрий в кардиомиоцитах у
восприимчивых к маститу животных независимо от трийодтиронинового
статуса (таблица 10).
Таблица 10 - Цитограмма кардиомиоцитов телят с низкой резистентностью к маститу и лейкозу при регуляции Са2+- антагонистом компенсаторной
адаптивности особей к экологически неблагополучной по радионуклидам и
тяжелым металлам йодэндемичной территории
Группа
эутиреоидные
гипотиреоидные
с регуляциПоказатели
с регуляцией
интактные
интактные ей адаптивадаптивности
(п = 10)
(п = 10)
ности
(п = 10)
(п = 10)
1
2
3
4
5
восприимчивые к маститу
митохондрий в 30
41,8 ±
электронограммах
1,07***
крист в митохон-
16,0 ±
дрии
средняя площадь
0,63***
0,30 ±
41,0 ± 2,07*** 19,2 ± 1,02
16,2 ± 0,80***
6,8 ± 1,16
0,28 ± 0,01*** 0,63 ± 0,02
38,6 ±
2,64***
15,2 ±
0,80***
0,33 ±
митохондрии, мкм2
0,01***
митохондрий на 30
421,6 ±
446,6 ±
273,6 ±
478,6 ±
полей зрения
7,11***
11,70***
9,34
14,94***
10,6 ± 1,83
9,0 ± 0,71*
16,3 ± 3,45
11,2 ± 1,90
0,01***
первичные лизосомы на 30 полей
зрения
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
вторичные лизосомы на 30 полей
8,2 ± 1,02**
8,4 ± 0,93**
4,0 ± 0,71
6,2 ± 0,66*
зрения
восприимчивые к лейкозу
митохондрий в 30
46,6 ±
электронограммах
1,44***
крист в митохон-
15,8 ±
дрии
0,37***
средняя площадь
0,30 ±
49,6 ± 2,64*** 30,6 ± 1,54
17,2 ± 0,86*** 10,8 ± 1,24
0,28 ± 0,01*** 0,49 ± 0,02
50,2 ±
2,06***
18,6 ±
1,12***
0,31 ±
митохондрии, мкм2
0,01***
митохондрий на 30
467,8 ±
502,6 ±
313,2 ±
509,6 ±
полей зрения
6,87***
7,03***
4,90
4,26***
7,2 ± 1,07***
67,6 ± 4,23
11,6 ± 1,08***
1,8 ± 0,37
первичные лизосомы на 30 полей
зрения
вторичные лизосомы на 30 полей
зрения
6,0 ±
0,71***
4,8 ±
0,37***
0,02***
7,6 ±
1,60***
7,0 ±
0,89***
Количество крист в митохондриях при низкой резистентности к маститу на фоне гипотиреоза уменьшается на 56,2%.
У восприимчивых к лейкозу особей, использование антагониста Са2+
нормализует лизосомный баланс. Причем, как у эутиреоидных, так и у гипотиреоидных животных, с экологически неблагоприятной по радионуклидам и
тяжелым металлам йодэндемичной территории, снижается количество первичных гомогенных лизосом на 88,2%.
Количество первичных лизосом
приходит в норму. Компенсаторно-приспособительная регуляция Са2+ – антагонистом развития сердца сохраняет внутреннюю структуру; количество
митохондрий и лизосом у восприимчивых к лейкозу телят с экологически
неблагоприятной по радионуклидам и тяжелым металлам йодэндемичной
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
территории.на должном уровне. Регуляция Са2+-антагонистом компенсаторной адаптивности к низкому уровню трийодтиронина позволяет привести
цитоморфологию миокардиальной клетки к норме, причем без использования
гормональных препаратов.
Таким образом, использование Са2+-антагонистапри компенсаторноприспособительной регуляции в процессе роста и развития телят с экологически неблагоприятной по радионуклидам и тяжелым металлам йодэндемичной территории, положительно влияет на резистентность животных к маститу, так как увеличивает энергетический баланс сердца, а так же к лейкозу,
нормализуя при этом проницаемость мембран лизосом, что способствует активации ферментативной системы клеток, тем самым увеличивая защитную
функцию.
Регуляция развития миокарда телят с экологически неблагоприятной
по радионуклидам и тяжелым металлам йодэндемичной территории, под
действием Са2+ – антагониста оказывает положительное воздействие на формирование тканевой структуры молочной железы (таблица 11).
По диаметру продольных альвеол, высоте альвеолярных клеток, количеству клеток эпителия на 10 мкм, продольному диаметру жировых клеток,
толщине магистральных соединительных тканевых тяжей гипотиреоидные
коровы, которым в период раннего онтогенеза до возраста 18 месяцев не
проводили стимуляцию развития миокарда, отличаются от своих интактных
аналогов по указанным показателям 19,2 %, 26,3 %, 18,6 %, 21,6 %, 29,2 %
соответственно.
Таким образом, использование Са2+ – антагониста в качестве стимулятора формирования адаптивности к экологическим условиям среды через цитоморфологические структуры миокарда, опосредовано положительно влияет
и на развитие молочной железы гипотиреоидных животных, с экологически
неблагоприятной по радионуклидам и тяжелым металлам йодэндемичной
территории, что актуально в экологических условиях содержания молочного
скота.
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
Таблица 11 - Гистоструктура молочной железы коров при регуляции Са2+антагонистом компенсаторной адаптивности особей к экологически неблагополучной по радионуклидам и тяжелым металлам йодэндемичной территории
Группа
эутиреоидные
гипотиреоидные
с регуляцией
с регуляциПоказатели
интактные
адаптивно- интактные ей адаптив(п = 30)
сти
(п = 30)
ности
(п = 30)
(п = 30)
Продольный диа106,4 ±
104,8 ±
102,6 ±
метр альвеол,
86,0 ± 3,00
3,51***
3,53***
4,38**
мкм
Высота альвеолярных клеток,
мкм
7,2 ±
0,34***
7,0 ± 0,34***
5,3 ± 0,29
6,6 ± 0,46*
4,2 ± 0,35
3,5 ± 0,33
4,1 ± 0,41
71,8 ± 3,89**
58,2 ± 2,74
70,0 ± 4,22*
Количество клеток эпителия на
10 мкм диаметра
4,3 ± 0,34
альвеол, шт
Продольный диаметр жировых
клеток, мкм
74,2 ±
3,73**
Толщина магистральных соеди-
415,8
422,6 ±
587,6 ±
429,0
нительных ткане-
±26,92***
24,30***
31,08
±26,56**
вых тяжей, мкм
Как отмечает Н.В. Медвелев (2004) у птиц и млекопитающих, и вне зависимости от среды обитания (наземная или водная), линька является одним
из главных каналов экскреции тяжелых металлов из организма, при этом
наружные покровы птиц и зверей зачастую наиболее объективно, по сравне-
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
нию с внутренними органами, отражают как степень загрязненности организма тяжелыми металлами, так и сезонную либо долговременную динамику
концентрации токсикантов. Определенное значение имеет также угнетение
иммунной системы и общее снижение сопротивляемости организма. Кроме
того, очевидную роль играют и внутрипопуляционные, в т. ч. адаптивные
механизмы в популяциях. Отсюда значимость комплексного подхода при
оценке влияния токсикантов на популяции млекопитающих и птиц.
Биологическое воздействие свинца весьма многообразно, к его наиболее общепризнанным последствиям относится расстройство гемосинтеза.
Речь идет, в частности, об ингибировании дегидратазы аминолевулиновой
кислоты (ALA-D) - фермента, ответственного за синтез порфирина, - а также
об ингибировании процесса поглощения порфирином железа, ведущем к
накоплению свободных протопорфиринов в эритроцитах. Таким образом,
экотоксикация атмосферы свинцом приводит к нарушению окислительновосстановительных процессов в организме животных, что естетственным образом сказывается на развитии вымени, на устойчивости его к воспалительным процессам.
Хроническое отравление развивается при постоянном употреблении
свинца в малых дозах. Свинец имеет свойство накапливаться в тканях организма и симптоматика отравления появляется при достижении концентрации
свинца в крови 40…60 мг/100 мл. Проявляется признаками поражения центральной и периферической нервной системы, кишечника, почек. Свинец откладывается практически во всех органах и тканях (особенно много в шерсти, когтях, слизистой оболочке десен «свинцовая кайма на деснах»).
Основной механизм действия свинца на организм заключается в том,
что он блокирует ферменты, участвующие в синтезе гемоглобина, в результате чего красные кровяные тельца не могут переносить кислород, развивается анемия и хроническая недостаточность кислорода.
Содержание свинца в шерсти экспериментальных животных в зависимости от удаленности их обитания от источников экотоксикации металлур-
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
гической и химической промышленности (Касимовский район «Приокский
завод цветных металлов», Скопинский район «АООТ «Металлург») представлено в таблице 12.
Содержание свинца, как в шерсти коров, так и в шерсти грызунов биоиндикаторных видов в двух экологически неблагополучных частях ландшафтно-географических зон области выше физиологически допустимой нормы в 20,00…66,25 раз по лесостепной и в 16,25…60,00 раз по подтаёжной,
что необходимо учитывать при использовании методики биоиндикации при
исследовании воздействия антропогенного давления на адаптивность крупного рогатого скота к экологически неблагоприятным условиям содержания.
В загрязненных частях лесостепной зоны содержание свинца в шерстяном покрове млекопитающих выше, чем в подтаёжной зоне на 3…5 мкг/г.
Разительно отличаются показатели накопления свинца в чистой и загрязненной зонах.При том, что песчаные почвы и суглинки легче накапливают тяжелые металлы, следовательно, в подтаежной зоне свинец всасывается лучше,
чем в лесостепной.
Так в лесостепной зоне
на 15,2…52,2 мкг/г, а в подтаежной на
12,2…47,2 мкг/г. Выявлено, что свинец аккумулируется больше в шерсти
животных в лесостепной зоне в 1,1...1,2 раза. Объяснением того, что свинец
всё же превышает норму в подтаёжной зоне, где мало промышленных производств, является структура почв.
В подтаежной зоне перегнойно - глеевые почвы, с поверхности залегают пески и суглинки. На песках, где участки междуречий лучше дренированы, сформировались дерново – слабо - и среднеподзолистые почвы, наименее
дренированных при близком залегании грунтовых вод дерново – глеево подзолистые, на заболоченных – торфяно - перегнойно - глеевые, на покровных суглинках – серые лесные почвы.
Нами также замечена тенденция снижения показателей по свинцу в
волосяном покрове животных, в зависимости от удаленности от источника
загрязнения в обоих районах.
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
Таблица 12 - Содержание свинца в шерсти животных с экологически неблагополучной по радионуклидам и тяжелым металлам
йодэндемичной территории
РасЛандшафтно-географические зоны
стоялесостепная
Подтаёжная
ние от
Объект
источ- Нориссленика
ма,
дований
экомкг/г
чистая
грязная
чистая
Грязная
токсикации,
км
полёвки
48,66±2,49
0,94±0,04 53,67±2,54 1,06±0,02
***
(п = 30)
0,5
0,80
коровы
52,12±3,42
0,92±0,04 54,05±2,73 0,87±0,03
***
(п = 30)
5,0
полёвки
0,85±0,02
28,39±1,29
0,91±0,04*
26,49±1,65
(п = 30)
*
***
*
***
0,80
коровы
0,87±0,03
(п = 30)
10,0
29,17±1,68
**
0,83±0,03
24,13±1,73
***
полёвки
0,78±0,03
16,17±0,87
0,83±0,03*
13,56±0,96
(п = 30)
*
***
**
***
коровы
0,80±0,03
17,33±0,86
*
***
0,80
(п = 30)
0,81±0,03
11,77±0.81
***
Доказательством воздействия тяжелых металлов на развитие железистой ткани является анализ развития подчелюстной железы полёвок в эмбриональном онтогенезе. У полёвок, обитающих в экологически благоприят-
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
ных условиях инсулиноподобный белок (ИПБ) появляется гораздо раньше,
чем у их аналогов с неблагополучных территорий.
При гистологическом исследовании развития железистой ткани полёвок в указанных зонах экотоксикации и прослеживается влияние загрязнения
тяжелыми металлами на формирование фолликулярных структур (рис. 11 ,
рис. 12).
Рис. 11 - Подчелюстная железа эмбриона полёвки с экологически неблагополучной по радионуклидам и тяжелым металлам йодэндемичной территории. Окраска гематоксилин – эозином, микрофотограмма
×400.
Известно, что железа является паренхимальным органом, имеющим
фолликулярное строение. С началом проявления эндокринной функции гормоны накапливаются между железистыми клетками и формируются фолликулы. Железа начинает развитие в плодном периоде и весьма активна до полового созревания. Развитие железистой ткани у животных, обитающих в
зоне экотоксикации, идет с явными нарушениями морфологической структуры этого органа. Фолликулярные компартменты формируются слабо, нарушен рисунок строения железы, что отчетливо заметно при сравнении её ги-
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
стоструктуры с таковой у животных из благополучной по тяжелым металлам
зоны.
Рис. 12 - Подчелюстная железа эмбриона полёвки с экологически
благополучной по радионуклидам и тяжелым металлам йодэндемичной территории. Окраска гематоксилин – эозином, микрофотограмма
×400.
Гистоструктура железы соответствует описанию этого органа в норме.
В паренхиме железы четко прослеживаются фолликулярные зоны, строма
сформирована рыхлой волокнистой соединительной тканью, в которой четко
различимы каппиляры. Внутри фолликула вязкое содержимое – коллоид.
Кальцитониноциты распределены одиночно или небольшими группами и локализуются в базальных участках эпителиальной выстилки фолликулов или
погружены в прослойки рыхлой соединительной ткани.
Четко выражены в паренхиме железы интерфолликулярные островки,
наличие которых указывает на положительные перспективы развития.
Флюоресцентная окраска железы эмбрионов экспериментальных полёвок из различных по экотоксикации мест обитания указывает на то, что развитие железистой ткани начинается гораздо раньше у животных из условно
благополучных районов области (рис. 13, рис. 14).
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
Рис. 13 - Подчелюстная железа эмбриона полёвки с экологически неблагополучной по радионуклидам и тяжелым металлам йодэндемичной территори. Фюоресцентная окраска метод Кунса, микрофотограмма ×400.
Рис. 14 - Подчелюстная железа эмбриона полёвки с экологически
благополучной по радионуклидам и тяжелым металлам йодэндемичной территории. Фюоресцентная окраска метод Кунса, микрофотограмма ×400.
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
Глава 3. Естетсвенная резистентность и патология щитовидной железы
при низком содержании йода в окружающей среде
Во
вступительной
речи
председателя
симпозиума —
член-
корреспондента РАМН, директор ФГУ «Эндокринологический научный
центр Росмедтехнологий», доктора медицинских наук, профессора Г.А.
Мельниченко (2007) было подчеркнуто следующее: «Как показывает практика, ощущение полной изученности какого-либо заболевания зачастую является обманчивым, и исследователям, не ленящимся углубляться в проблему,
всегда под силу внести изменения в устоявшиеся взгляды». В полной мере
это проявилось в докладах ученых на симпозиуме «Патология щитовидной
железы — новое об известном», организованном в рамках IV Всероссийского
тиреоидологического конгресса.
Причинами иммунных нарушений в щитовидной железе являются генетическая предрасположенность, стрессы, инфекция (чума плотоядных),
травмы черепа, энцефалит, опухоли гипофиза. Причиной диффузного токсического зоба может быть первичный тиреоидит, в том числе, развивающийся
вследствие воздействия ионизирующей радиации.Основной причиной эндемического зоба является недостаток йода в организме вследствие дефицита
его в воде и кормах.
Установлено, что заболевание появляется в местностях, где содержание
йода в почве ниже 0,1 мг/кг, в питьевой воде менее 10 мгк/л. Эти величины в
различных районах йодной эндемии могут колебаться в ту или иную сторону,
так как на степень усвоения йода оказывают определенное влияние другие
минеральные вещества (Мельниченко Г.А., 2007;Базарова Д.Ц., 2007).
Йодная недостаточность отягощается избытком кальция, магния, свинца, фтора, брома, стронция, железа, так как эти вещества ухудшают усвоение
йода. В очагах эндемического зоба Читинской области содержание йода в
воде менее 2 мкг/л, в кормах 0,06…0,25 мг/кг сухого вещества. В Украин-
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
ском Полесье йодная недостаточность у животных отмечается в очагах, где
содержание йода в воде составляет 1,30…2,58 мкг/л, а в некоторых источниках 0,9…1,0 мкг/л. В Ивановской области в очагах эндемического зоба в 1 кг
сухого вещества кормов зимних рационов содержание йода составляет
0,039…0,323 мг/кг, в благополучных районах — 0,071…0,393 мг/кг (Ковда
В.А., 1973; Таракулов Я.Х., 1986).
Появлению зоба способствует поедание животными большого количества кормов, содержащих тиреостатические вещества (гойтрогенные вещества), которые имеются в рапсе, сурепке и других крестоцветных, в белом
клевере, свекле, брюкве, турнепсе, ржи, некоторых сортах капусты. Йоддепрессивным действием обладают нитраты, парааминосалициловая кислота,
соединения тиомочевины, тиосурацил, сульфаниламиды, цианогенные глюкозиды(МакДермотт Т., 1992).
Отягчающим фактором возникновения заболевания служит дефицит в
кормах и воде кобальта, цинка и других микроэлементов, а также витаминов.
В условиях химического загрязнения воздуха Л.В. Барков, В.Г. Казанцева,
Г.И. Тимащук, Г.Н. Цирик, Л.Н. Михеева (1982) обнаруживают изменения
эритроцитарного и лейкоцитарного ростка системы крови в условиях химического загрязнения воздуха.
Окружающая среда постоянно пополняется вредными факторами физической, химической, биологической природы. Объективная оценка и прогнозирование опасности загрязняющих веществ возможны только при совершенствовании экоанализа, включающего учет данных химического состояния объектов окружающей среды, постановки модельных экспериментов с
использованием биотестов, экстраполяции реакций тест-объектов на природные популяции организмов. Экологическая оценка территорий с использованием биотестирования предусматривает выявление токсических реакций
чувствительных тест-систем по летальности, модификационной, мутационной изменчивости, стрессовому ответу. Среди токсикантов мутагены отличаются способностью вызывать все перечисленные формы токсикации. При
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
скрининге мутагенов используются микробные, растительные, животные
тест-объекты. В связи с прогрессирующим техногенным загрязнением биоресурсов слабыми мутагенами все большую актуальность приобретает проблема отдаленных последствий подобного воздействия. Распространение малых
концентраций мутагенов увеличивает число онкозаболеваний, число неопухолевых форм отдаленной патологии (развитие катаракты, пневмо- и
нефросклероза, ослабление эластичности кожи, различные нейродистрофические расстройства), в том числе и нарушений нейроэндокринной регуляции, снижающих адаптивные возможности организма. На уровне эмбриональных клеток даже одиночный клеточный дефект может привести к нарушениям развития, тератогенезу (Гарипова Р.Ф., 2011).
Несмотря на многочисленные исследования в области тиреоидологии,
проблемы йододефицитных состояний в животноводстве не получили окончательного решения и остаются актуальными (Козлов В.Н., 2008).Главным
этиологическим фактором для возникновения патологий щитовидной железы
является недостаток йода и антропогенное загрязнение (В.А. Попова, 2003).
Причиной эндемического зоба у крупного рогатого скота является: природный йоддефицит, дисбаланс микроэлементов и антропогенное загрязнение
окружающей среды (Кашин В.К., 1990). Как отмечают А.П. Дмитроченко,
1972; В.У. Давыдов, 1983; А.А. Журавлев, 1985; Ю.Г. Покатилов (1993), Е.А.
Валдина (2001), Г.А. Герасимов, 2002; П.Н. Абрамов (2006) патология щитовидной железы получила в последние годы широкое распространениекак на
территории Российской Федерации, так и во всём мире.
Гипотиреоз сопровождается существенным угнетением морфологического, биохимического, иммунологического статуса организма животных, приводит
к глубоким деструктивным перестройкам в структурных компонентах щитовидной железы и иммунных органов. Недостаточность функциональной активности
щитовидной железы значительно снижает устойчивость организма к инфекционным и инвазионным заболеваниям, приводит к развитию вторичных иммунодефицитов и дисбактериозов. Йододефицитные состояния представляют особый
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
интерес, ибо огромные территории России в той или иной степени эндемичны по
зобу. С возрастанием загрязнения окружающей среды данная патология становится более актуальной. Многие животные в этих условиях имеют низкую общую и специфическую резистентность, предрасположены к легочным и желудочно-кишечным заболеваниям, что в свою очередь нередко приводит к нарушению всасывания и метаболизма йода (В.И.Иванов с соавт., 1975, 1994;
F.Lemarchand – Berandetetal., 1977; J.M.Scheiff, 1977; Е.А.Корнева, 1988;
Р.М.Хаитов, 1995; В.В.Удут, 2001).
Целенаправленное восполнение тиреостатических и биологически активных веществ в организме животных активизирует обменные процессы, повышая
физиологический статус, обеспечивает сохранность и увеличивает их продуктивность (Р.Н.Уельданов, с соавт., 1983; П.Я.Гущин, Н.Г.Фенченко, 1988;
В.В.Мингазов, Р.З.Курбанов, 1995, Г.Ф.Кабиров, 1999; 2000; М.Б. Утарбаев,
2002).
В последние годы появились работы, показывающие, что можно управлять
физиологическим, иммуноморфологическим, биохимическим, микробиологическим статусом животных и при снижении
стимулировать их (В.А.Антипов с
соавт., 1990, 1991; Н.С.Асфандиярова с соавт., 1993; Н.А. Тюкавкина с соавт.,
1997; А.Н.Панин, 2005; Р.Т.Маннапова, 2006, 2007).
Изучая эндемическую ситуацию по влиянию йодной недостаточности
на молочный скот в условиях Южного Федерального Округа РФ (на примере
Ростовской области), С.Н. Ищенко (2009) определил наличие тяжелых металлов в ткани щитовидной железы у телят крупного рогатого скота при эндемическом зобе. Сведения о распространённости йодной недостаточности у
крупного рогатого скота в литературе отражены мало. А между тем, наличие
йода в почве 0,0124…0,0934 мг/кг; в воде ниже 0,1 мг/ дм3, что и наблюдается на большинстве территорий РФ, указывает на то, что территория относится к зоне с йодной эндемией.
Наличие тяжелых металлов в ткани щитовидной железы на территориях йодной эндемии: цинка (16 мг/кг), меди (0,85 мг/кг), свинца (0,022 мг/кг),
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
кадмия (0,012 мг/кг) и ртути (0,1 мг/кг) подтверждают кумулятивное влияние
экологических условий среды на организм животных. Таким образом, очередной раз подчеркивается актуальность определения эндемического зоба
В.Н. Денисенко (2004), как хронического заболевания сельскохозяйственных
животных, являющегося индикатором среды обитания.
Как отмечает В.П. Кондрахин (1989), решение проблемы дефицита
йода включает конкретные вопросы по выбору средств и методов диагностики, коррекции рационов животных, с учетом их потребности в йоде. Полноценность йодного питания у животных зависит от поступления его с кормом
и водой, от доступности усвоения поступившего йода в организме. Содержание йода в них изменяется по почвенно-географическим зонам и значительно
колеблется в зависимости от его концентрации в почве, а так же от физиологических условий организма, имеющихся для усвоения этого элемента.
Потребность животных в йоде зависит от вида, породы, физиологического состояния, времени года и других факторов. Н.Ю. Мусина (1985), В.И.
Иванов (1994) указывает, что для высокоудойных коров потребность в йоде
8…12 мг на голову. Норма для сухостойных коров (в расчете на 1 корм.ед.)
составляет 0,7 мг на голову в сутки.
Морфологией щитовидной железы плодов, новорожденных и ковров в
экологически напряженных районах Свердловской области занимались О.Г.
Климова и др. (2000). У телят крупного рогатого скота распространенность
эндемического зоба составляет 4 % от общего числа незаразных заболеваний.
Основными клиническими признаками эндемического зоба являются: микседема, увеличение щитовидной железы, сухость кожи, тусклость волосяного
покрова, «чубатость» и алопеции в области головы и крестца. Эндемический
зоб у телят сопровождается значительным нарушением гематологических и
биохимических показателей. Отмечается снижение гемоглобина (до 76,0 г/л)
эритроцитов (до 4,4×109/л); общего белка (до 57,8 г/л), глюкозы (до 2,7
ммоль/л), резервной щелочности (до 48,7 об% СО2) и общего кальция (до 2,1
ммоль/л).При эндемическом зобе у телят происходит снижение Т3 (до 0,77
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
нмоль/л), Т4 (до 18 нмоль/л) и повышение ТТГ (до 4мМЕ/мл), что характеризует эндемический зоб, как гипотиреоз (А.Р. Ахментзянова, 1996, 1997).
Alscher B. (1989) провел биохимическое обследование 17 здоровых молочных коров и их телят для определения концентрации тиреоидных гормонов в крови при постнатальной адаптации. Через час после рождения содержание Т4 в крови телят было значительно выше, чем у матерей, и быстро возрастало. Через 2 недели уровень Т4 снижался и стабилизировался. К 6 неделе
уровень Т4 в крови телят был сходен с материнским. Уровень Т3 у телят
начал подниматься почти сразу после рождения и достигал высоких значений
между 4 и 24 ч жизни. В течение 6 недель опыта уровень Т3 у телят был значительно выше, чем у коров. Индекс свободного тироксина (FTI) у телят при
рождении в 3 раза выше, чем у матерей. С 4 ч до 2 недели жизни FTI телят
несколько снижается, но в течение опыта оставался более высоким, чем у матерей. В первый час после рождения отношение Т3/Т4 быстро повышается,
снижается к 4 ч и медленно возрастает ко 2 дн. жизни. Следующие 3 нед. отношение Т3/Т4 опять снижается. В общем можно выделить 3 фазы постнатальной адаптации тиреоидной системы телят: стимуляция тиреоидной активности,в первые 2 часа жизни, снижение активности щитовидной железы
ко второй неделе жизни, окончательная адаптация тиреоидной системы к работе в послеродовой период.
В.Л. Романюк, Н.С. Мандыгра, В.И. Левченко (2001) в условиях 2 хозяйств Ровенской области (Украина) изучали функциональное состояние щитовидной железы у 33 больных и 40 здоровых телят черно-пестрой породы. У
больных телят при рождении регистрировали гиперфункцию щитовидной
железы, а через 1…3 месяца нормализацию или даже гипофункцию. По мнению авторов, гиперпродукция, прежде всего трийодтиронина (Т3), у больных
животных является крайним проявлением напряжения адаптивных возможностей организма и характеризует значительный недостаток йода. У животных с зобом более объективные данные о функциональном состоянии щитовидной железы можно получить по уровню Т3 (было увеличено у 93,9% жи-
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
вотных) а у телят без гиперплазии щитовидной железы - по уровню тироксина (Т4). Состояние гиперфункции щитовидной железы у большинства больных подтверждено при морфологическом исследовании, что говорит о развитии паренхиматозного или коллоидного зоба. Предложена классификация
врожденного эндемического зоба: выделено VIII степеней увеличения щитовидной железы. В каждой последующей степени абсолютная масса железы
возрастает на 20 г, или в 2 раза, а относительная - на 100 г, или в 3 раза. К нулевой степени отнесено наибольшее количество исследованных желез телят
(51,6%). Увеличение железы в степени 0 считается ее гиперплазией, в
остальных степенях - зобом. Классификация эндемического зоба у новорожденных может быть использована при постмортальной диагностике и является одним из элементов эколого-генетического мониторинга врожденной патологии у телят. Рождение животных с патологией щитовидной железы служит биологическим индикатором йодной недостаточности в биогеоценозах.
Bekeova E.; Elecko J.; Hendrichovsky V.; Hajurka V.; Choma J.;
Krajnicakova M. (1989)изучали взаимосвязь оплодотворяемости коров с изменениями концентрации тироксина (Т4) и трийодтиронина (Т3) у коров в
марте (n=15), июне (n=10) и ноябре (n=7) после синхронизации охоты клопростенолом (Эстрофан, Спофа) в дозе 0,50 мг/гол. Коров искусственно осеменяли в период между 8.00-9.00, кровь у животных брали между 9.00-10.00
в день обработки эстрофаном (-3 дн.), в день искусственного осеменения (0
дн.), на 6 и 21 дн. после искусственного осеменения. Самый низкий процент
оплодотворяемости отмечен в марте (26,67), самый высокий в июне (50,0), в
ноябре оплодотворяемость составила 42,86 %. Концентрация Т4 при положительном результате осеменения в день 0 в марте в среднем составляла
67,55+15,95 нмоль/л сыворотки крови, значительно меньшие показатели отмечены в июне и ноябре (65,60+10,06 и 49,33+17,47 нмоль/л сыворотки соотв.). Концентрация Т3 колебалась от 2,53+0,79 нмоль/л в марте до 1,48+0,67
нмоль/л в июне и до 0,80+0,45 нмоль/л сыворотки в ноябре в день искусственного осеменения. По данным результатов исследования способность
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
коров к оплодотворению и концентрация гормонов щитовидной железы
находятся в косвенной взаимозависимости.
Радченков В.П.; Бутров Е.В.; Панасенко В.Н.; Сапунова Е.Г.; Сухих
В.Ф.; Исмаилов С.А.; Григорьев В.В. (1988) изучали гормональный профиль
у телок в онтогенезе, нетелей и первотелок и взаимосвязь между уровнем
гормонов в крови и продуктивностью животных. Экспериментальная часть
работы выполнена на молочном комплексе ОПХ "Калужское" на телках черно-пестрой породы в возрасте от 1 мес. до завершения лактации. Полученные
результаты исследований позволили сделать следующие выводы. Концентрация соматотропина в крови телок имеет тенденцию к уменьшению с возрастом животных, особенно в период роста от 1 до 8 мес. Уровень иммунореактивного инсулина (ИРИ) максимальный в возрасте 2-3 мес. уменьшается до
минимального значения в период перевода на летний рацион и перехода к
рубцовому пищеварению (6-7 мес.), а также при половом созревании. Содержание тироксина (Т4) и трийодтиронина (Т3) было высоким в период роста и
снижалось при завершении становления половой функции (17-18 мес.). Концентрация эстрадиола - 17b у телок 17-18-мес. возраста достигает уровня, характерного для возрослых животных. Отмечена достоверная положительная
связь между концентрацией ИРИ (2 мес.), Т4 (2, 7, 8 мес.) и приростом живой
массы у телок и отрицательная - между содержанием эстрадиола-17b и приростом (7-12 мес.). Установлена достоверная отрицательная корреляция
между концентрацией ИРИ в течение лактации (6,8 мес.), пролактина (3, 5, 8
мес.) и кортизола (3-5 мес.) и уровнем молочной продуктивности. Уровни Т3
(1 мес.) и ИРИ (5-й мес.) достоверно и положительно связаны с количеством
белка в молоке (r=0,64) а Т4- (6-й мес.) - с количеством жира в молоке.
(r=0,70).
Судаков Г.И.; Шамаров А.В.; Бенемецкий Ю.С.; Афонин А.С. (1990)
предполагают, что одна из причин эмбриональной смертности у коров - неподготовленность эндометрия к имплантации зародыша, которая определяется гормональным фоном половой цикличности. Установлено, что секреция
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
гипофизарно-кортико-овариальной
системы
коров
при
эмбриональной
смертности (С) заметно отличается от таковой в стадии эструса (Э) и диэструса (Д) при нормальном половом цикле. При С в крови заметно снижено содержание кортизола (27,11 нг/мл против 45,10 и 31,7 при Э и Д). Содержание
Т3 снижается при С в 1,4 раза (1,01 нг/мл) по сравнению с Э (1,53), но выше,
чем при Д (0,52). Уровень Т4 несколько ниже при С, чем при Э и Д (47,7
нг/мл против 54,7 и 49,5). Концентрация прогестерона также при С ниже, чем
при Э и Д (0,74 против 2,5 и 9,96). Уровень тестостерона, наоборот, при С
резко возрастает (3,18 нг/мл против 0,19 и 0,15 при Э и Д). Уровень эстрадиола при С также выше, чем при Э и Д (0,23 против 0,16 и 0,18 нг/мл). При
эмбриональной смертности у коров, кроме того, снижена функциональная
активность надпочечников и щитовидной железы. Для усиления пролиферативных изменений в эндометрии и коррекции эмбриональной смертности коровам вводили прогестерон (150 мг) и прозерин (2 мл 0,5%-ного р-ра) на 3,10
и 20 дн. после осеменения. У обработанных гормонами животных оплодотворяемость после первого осеменения составила 50% против 20% в контроле.
Однако все эти исследования проводились без учета влияния экологических условий, а исключать этот фактор в современном мире невозможно.
Морфологические изменения в щитовидной железе у телят с картиной
гипотиреоза проявляется низкой функциональной активностью щитовидной
железы: в междольковой строме железы преобладают эластические волокна,
изменения фолликулярного эпителия в виде сандерсоновских подушечек и
формирование внутриклеточных структур является не пролиферативными, а
гиперпластическими (Ледяева Е.М., 1964). При применении с лечебной целью монклавита-1 в дозе 0,5 мл/кг живой массы тела один раз в сутки в течение 1 месяца нормализует клинико-морфо-биохимические показатели, повышая: количество эритроцитов (на 25 %), уровень гемоглобина (на 22 %),
общего белка (на 11 %), глюкозу (на 7 %), резервную щелочность (на 4 %),
общий кальций (на 14 %), трийодтиронин (на 42 %), тироксин (на 88 %) и
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
понижая ТТГ (на 94 %). Экономическая эффективность лечения составила
1,45 руб. При использовании монклавита-1 в дозе 0,2 мл/кг массы тела животного один раз в сутки в течение 1 месяца предотвращает появление заболевания эндемического зоба. Экономическая эффективность профилактических мероприятий составила 1,7 руб.
Однако, как справедливо подчеркивает С.Н. Ищенко (2009), однозначных мнений по вопросам этиологии, патогенеза, симптомов и патологоанатомических изменений, профилактики и лечения эндемического зоба у
крупного рогатого скота до сих пор нет. В частности это видимо, связано с
тем, что в разных биогеохимических зонах, в каждом конкретном регионе
этиологические факторы и, соответственно, клиническое проявление данного
заболевания варьируют (Мальгин М.А., 1988). Для выявления эндемического
зоба у животных, рекомендует ученый, необходимо на диагностическом этапе диспансеризации учитывать йодную недостаточность, клинико-морфобиохимические показатели животных и антропогенное загрязнение.
А.Х. Пилов (2004) указывает, что из-за низкого содержания йода в биосфере в Кабардино-Балкарии в хозяйствах Зольского, Баксанского и Чегемского р-нов у коров отмечают низкорослость, растянутость туловища, усиление роста волос на голове, аборты, резкое снижение продуктивности, рождение телят с эндемическим зобом или без шерстного покрова.
Исследование гистологических срезов щитовидной железы от 100 голов крупного рогатого скота, поступившего на мясокомбинат из этих районов, показало, что нормальную структуру имели 20,5% срезов, гипофункцию
- 46,5% и тенденцию к снижению активности – 33%. Обнаружены характерные патоморфологические изменения при гипофункции щитовидной железы:
кистозные фолликулы, утолщение соединительной ткани между фолликулами, участки малодифференцированного строения, десквамация фолликулярного эпителия, интенсивная окраска коллоида.Число сосудов в щитовидной
железе крупного рогатого скота, приходящиеся на условно микроскопическое поле, было выше в центральной части, чем на периферии. Ферментатив-
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
ная активность железы зонально дифференцирована, размер ядер железы варьировал в зависимости от ее функционального состояния. Отмечено влияние вертикальной зональности на функцию щитовидной железы: чем выше
расположение местности, тем больше масса органа и ниже функциональная
активность. Рекомендовано включение в рацион йодистого калия (3 мкг на 1
кг массы тела), применение йодированной соли или опрыскивание корма
раствором йодистого калия.
Ещё раз обращает на себя внимание проблема - естественная йодэндемичная почва. В отличие от человека, в лечении которого допускается применение гормональных препаратов, в молочном скотоводстве это недопустимо. Нам удалось применением Са2+ - антагониста в процессе роста и развития телят минимизировать проблему недоразвития сердца, вызванного недостатком гормонов щитовидной железы. Взаимосвязь
показателей крови
при компенсаторной адаптивности развития миокарда животных регуляцией
Са2+- антагонистом, мыустановили, что введение препарата эутиреоидным
телятам не оказывает существенного влияния на белковый и ферментативный состав крови (таблица 13).
Отмечена тенденция - изменение биохимических показателей сыворотки крови опытных коров во фракции глобулинов. Так, на фоне введения
Са2+– антагониста общее количество глобулинов возрастает в среднем на 6,8
%. Достоверно изменяется количество - глобулинов на 7,8 %. На фоне увеличения общего белка в крови гипотиреоидных особей при регуляции развития миокарда наблюдается увеличение ферментативного статуса, так дезаминирующий АSТ возрастает на 19,2 %, а переаминирующий АLТ на 2,27 %
соответственно.
Положительная динамика мочевины свидетельствует о нормальной физиологической перестройке организма, на поддержание интенсивности уровня обменных процессов и лактопоэза, на высокую адаптивную реакцию к
условиям среды.
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
Таблица 13 - Белковый и ферментативный состав крови телят с экологически
неблагоприятной по радионуклидам и тяжелым металлам йодэндемичной
территории
Группа
Эутиреоидные
Гипотиреоидные
Показатели
с регуляцией
интактс регуляцией
интактные
адаптивности
ные
адаптивности
(п = 10)
(п = 10)
(п = 10)
(п = 10)
1
2
3
4
5
Общий
белок,
г/л
Альбумины, г/л
74,7 ±
74,3 ± 0,45***
0,53***
41,4 ± 0,44*
70,9 ±
73,8 ± 0,41***
0,53
41,3 ± 0,46*
39,8 ±
41,2 ± 0,33*
0,51
Глобулины, г/л
33,3 ± 0,62*
33,0 ± 0,46*
31,1 ±
32,6 ± 0,48*
0,51
В том числе:
- глобулины
7,4 ±
7,4 ± 0,09***
8,4 ± 0,07
7,4 ± 0,28**
3,7 ± 0,06
3,7 ± 0,06
4,6 ± 0,06***
21,9 ± 0,20***
19,0 ±
20,6 ± 0,26***
0,09***
- глобулины
4,2 ±
0,05***
- глобулины
21,7 ±
0,19***
Остаточный
0,2 ± 0,003
0,05
0,2 ± 0,003
азот, г/л
Мочевина,
0,2 ±
0,2 ± 0,01
0,003
4,9 ±
4,8 ± 0,07***
3,6 ± 0,04
3,9 ± 0,03***
моль/л
0,03***
АSТ, нкат/л
1223,6 ±
1219,0 ±
980,5 ±
1213,4 ±
8,46***
10,61***
7,86
6,36***
790,3 ± 7,67
787,9 ± 10,85
765,9 ±
783,7 ± 6,57
АLТ, нкат/л
16,38
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
Морфологические и биохимические показатели крови экспериментальных и интактных коров так же остаются в пределах физиологической нормы,
что указывает на безвредность введения регулятора Са2+ в разведении 0,25
мг/кг, на локальность действия антагониста непосредственно на миокард
(таблица 14).
Таблица 14 - Морфологические и биохимические показатели крови коров с
экологически неблагоприятной по радионуклидам и тяжелым металлам
йодэндемичной территории
Группа
Показатели
Гемоглобин,
моль/л
СОЭ мм/ч
Эритроциты,
1012/л
Лейкоциты,
109/л
Сахар,
ммоль/л
Кальций,
ммоль/л
Фосфор,ммоль/л
эутиреоидные
с регуляцией
интактные
адаптивности
(п = 10)
(п = 10)
гипотиреоидные
интактные
(п = 10)
с регуляцией
адаптивности
(п = 10)
7,16±0,048**
7,13±0,042**
6,89±0,063
7,11±0,040**
1,26±0,015***
1,23±0,022*
1,16±0,012
1,21±0,018*
7,9±0,07***
7,6±0,14
7,3±0,12
7,7±0,11*
9,12±0,017***
9,08±0,032***
8,16±0,036
9,00±0,039***
3,01±0,015**
2,98±0,024*
2,87±0,035
2,91±0,016
2,86±0,010*
2,92±0,022**
2,77±0,038
2,81±0,016
1,54±0,007***
1,47±0,012
1,28±0,018
1,35±0,010**
Динамика трийодтиронина в процессе роста и развития особей при регуляции Са2+- антагонистом компенсаторно – приспособительных реакций
миокарда отражена в таблице 15.
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
Отсутствие достоверной разницы в показателях трийодтиронина между
интактными и экспериментальными животными еще раз доказывает, что антагонист не влияет на уровень гормонов, а является маркерным ионным индуктором мембранного регулирования.
Таблица 15 - Динамика трийодтиронина при регуляции Са2+-антагонистом
компенсаторно-приспособительных реакций животных с экологически неблагополучной по радионуклидам и тяжелым металлам йодэндемичной территории
Группа
эутиреоидные
гипотиреоидные
Возраст
интактные
с регуляцией
интактные
с регуляцией
(п = 10)
адаптивности
(п = 10)
адаптивности
(п = 10)
(п = 10)
Новорож7,59±0,050*** 7,56±0,023***
7,21±0,039
7,23±0,036
денные
5 суток
7,20±0,038***
7,22±0,018***
6,39±0,035
6,47±0,034
1 мес.
6,52±0,27***
6,60±0,032***
5,25±0,032
5,28±0,031
3 мес.
4,72±0,041***
4,70±0,071***
3,53±0,026
3,78±0,013***
6 мес.
4,26±0,031***
4,35±0,033***
3,63±0,038
3,71±0,025
9 мес.
4,14±0,023***
4,20±0,023***
3,62±0,019
3,75±0,019
18 мес.
3,95±0,043***
3,90±0,040***
3,52±0,041
3,54±0,20
Липазы и фосфолипазы кардиомиоцита активируются в результате аккумулирования внутриклеточного кальция в результате увеличения концентрации Са2+ в свободной форме. Следует отметить, что активация фосфолипазы сопровождается образованием лизосомальных фосфолипидов (фосфатидилхолинов), которые сами по себе повреждают мембраны.
Механизм повреждающих эффектов в этом случае связан со способностью фосфолипидов лизосом химически разрывать структуры, что именуется
как эффект клинообразной формы фосфотидов. Более выраженное дестабилизирующее действие фосфолипидов проявляется в условиях недостатка
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
гормонов щитовидной железы. Мы проанализировали концентрацию и возрастную динамику липидного обмена в крови эу- и гипотиреоидных телят
при стимуляции Са2+ - антагонистом развития миокарда (таблица 16).
Таблица 16 - Возрастная динамика концентрации показателей липидного
обмена в крови телят с экологически неблагоприятной по радионуклидам и
тяжелым металлам йодэндемичной территории, при регуляции адаптивности
Са2+ – антагонистом
Группа
Возраст,
мес.
1
Эутиреоидные
гипотиреоидные
интактные
с регуляцией
интактные
с регуляцией
(п = 10)
адаптивности
(п = 10)
адаптивности
(п = 10)
(п = 10)
общие липиды, г/л
5,95 ± 0,054***
5,89 ±
4,73 ± 0,061
5,03 ± 0,065**
4,13 ± 0,159
5,46 ±
0,034***
6
5,11 ± 0,033***
5,67 ±
0,033***
18
4,65 ± 0,032***
4,61 ±
0,055***
3,91 ± 0,027
0,036***
4,65 ±
0,062***
триглицериды, моль/л
1
0,48 ± 0,011**
0,46 ± 0,010*
0,40 ± 0,019
0,42 ± 0,019
6
0,66 ± 0,008***
0,65 ±
0,44 ± 0,010
0,62 ±
0,011***
18
0,70 ± 0,006***
0,70 ±
0,012***
0,28 ± 0,029
0,012***
0,68 ±
0,011***
холестирин, моль/л
1
1,72 ± 0,039
1,73 ± 0,038
1,70 ± 0,019
1,70 ± 0,043
6
3,41 ± 0,090*
3,33 ± 0,031
3,18 ± 0,039
3,34 ± 0,075
18
2,74 ± 0,032
2,74 ± 0,040
2,73 ± 0,042
2,73 ± 0,044
Необходимо отметить, что разница у интактных месячных эу- и гипотиреодных телят в крови по содержанию общих липидов отличается не в
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
пользу последних на 20,5 %. Возрастная динамика показателей липидного
обмена у экспериментальных телят в возрасте до 6 месяцев характеризует
уровень влияния ионов Са2+ на метаболические процессы происходящие в
формирующемся сердце животных.
Так, введение Са2+ - антагониста увеличивает количество общих липидов на 3,7 %. Причем, разница между гипотиреоидными и интактными полугодовалыми здоровыми телятами составляет 19,2 %, в случае введения Са2+ –
антагониста этот разрыв сокращается до 12,8 %. Более того, наблюдается достоверная тенденция к увеличению общей липидной фракции. В 18 месяцев
тенденция по нормализации количества общих липидов отличается лишь в
группе гипотиреоидных телят, которым вводили Са2+- антагонист с начала
периода постнатального онтогенеза. Концентрация общих липидов в их крови при введении Са2+ – антагониста к 18-ти месячному возрасту выравнивается с нормой и составляет в пределах 4,65 ммоль/л. Отрицательная динамика (на 15,9 %) липидного обмена у гипотиреоидных телят из группы интактных.
Недостаточность развития миокарда связанная с низким уровнем
трийодтиронина вызывает необходимость компенсации уровня основного
обмена иными путями, целью чего является получение дополнительной теплопродукции для активации липидной фракции крови. Уровень холестерина
к возрасту 18 месяцев не отличается в экспериментальных группах и составляет в среднем 2,73 ммоль/л.
Диаметрально противоположная картина наблюдается при изучении
триглицеридов. В условиях формирования компенсаторной адаптивности телят к пониженному уровню трийодтиронина, отмечается увеличение концентрации триглицеридов у тех животных, которым компенсировали недостаток
гормона введением Са2+- антагониста.
Благодаря механизму работы Са2+- антагониста нормализуется липидный обмен в крови гипотиреоидных телят, отмечается положительная воз-
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
растная динамика триглицеридов - разница со сверстницами из интактной
группы гипотиреоидных особей составляет 58,8 %.
Концентрация глюкозы в крови экспериментальных телят достоверно
не отличается, что указывает на равновесное состояние глюкозо - гликогеновой системы независимо от трийодтиронинового статуса(таблица 17).
Таблица 17 - Возрастная динамика концентрации глюкозы в крови экспериментальных телят с экологически неблагополучной по радионуклидам и тяжелым металлам йодэндемичной территории, при регуляции Са2+- антагонистом адаптивности к среде обитания, (ммоль/л)
Возраст,
мес.
Группа
Эутиреоидные
интактные с регуляцией Са2+
гипотиреоидные
интактные с регуляцией Са2+
1
4,16 ± 0,059
4,14 ± 0,035
4,11 ± 0,064
4,12 ± 0,070
3
4,29 ±
4,28 ± 0,049***
3,43 ± 0,039
3,66 ± 0,029***
0,003***
6
4,61 ± 0,027
4,63 ± 0,029
4,59 ± 0,100
4,61 ± 0,045
9
4,27 ±
4,25 ± 0,045***
3,65 ± 0,029
4,20 ± 0,028***
4,63 ± 0,043
4,63 ± 0,025
4,63 ± 0,056
0,049***
18
4,65 ± 0,028
В возрасте 9 месяцев наблюдается пониженное содержание глюкозы
(на 14,5 %) в крови интактных гипотиреоидных телят, что связано с недостаточным уровнем диссимиляционных процессов.
Таким образом, используя Са2+ - антагонист при регуляции компенсаторной адаптивности телят, содержащихся на территориях с естественной
йодной эндемией почв, можно регулировать обменные процессы, метаболизм, развитие миокарда без применения гормонов, что необходимо использовать ветеринарным службам при работе с молочным скотом.
Динамика цитоморфологических показателей крови телят в зависимости от загрязнения окружающей среды выбросами промышленных произ-
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
водств, в том числе при регуляции динамики адаптивности их организма к
недостатку гормонов щитовидной железы, представлена в таблице 18.
Таблица 18 - Морфологические показатели крови экспериментальных телят
в зависимости от загрязненности территорий экотоксикантами
Загрязненность территории
условно благополучная зона
условно неблагополучная зона
Группы
гипотигипотиреоПоказатереоидные
эутигипоти- идные с реэутигипотили
с регуляреоидреоидгуляцией
реоидреоидцией
ные (п =
ные
адаптивноные
ные
адаптив10)
(п = 10)
сти
(п = 10) (п = 10)
ности
(п = 10)
(п = 10)
гемогло7,14 ±
6,63 ±
7,04 ±
6,93 ±
6,57 ±
6,78 ±
бин
0,043
0,081***
0,021*
0,012*** 0,032***
0,027***
эритроци-
7,81 ±
7,23 ±
7,45 ±
7,63 ±
7,12 ±
7,30 ±
ты, 1012/л
0,082
0,064***
0,128*
0,100
0,095***
0,073***
лейкоци-
9,13 ±
9,10 ±
9,11 ± 0,021
9,01 ±
8,52 ±
9,09 ±
ты, 1012/л
0,019
0,033
0,042*
0,036***
0,010
моль/л
Гуморальные факторы защиты организма отражаются в бактерицидной, лизоцимной и комплементарной активности. Клеточные факторы защиты определялись по фагоцитарной активности.
Уровень бактерицидной активности у коров контрольной группы в
наших исследованиях в среднем составляет 69,9 0,76 %, что близко к значению указанной в различных научных источниках нормы для чернопестрого скота в пределах 70,2 % (таблица 19).
Бактерицидная активность у коров больных лейкозом оказалась несколько ниже нормы и составила 54,1 0,27 % . Однако, этот показатель в
случае указанного заболевания колеблется в довольно – таки больших преде-
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
лах 50,0…54,7 %, что делает бактерицидную активность неспецифическим
показателем при исследовании лейкозных коров.
Бактерицидная активность сыворотки крови обуславливает возможности организма животного задерживать рост микроорганизмов, в частности
бактерий, попадающих из вне под влиянием окружающей среды.
Фактически высокая достоверность изменчивости бактерицидной активности в сторону ее уменьшения отмечается при мастите. В нашем случае
у всех коров больных этим заболеванием отмечается снижение бактерицидной активности от 67,9 % (при норме) до 60,7 %, что в среднем по группе
составляет 7,2 %.
Следует отметить, что бактериолизины активны лишь в комплексе с
лизоцимом и комплиментом. Комплиментарная активность в контрольной
группе коров в среднем составила 14,4 %, что также не отличается от общепринятых норм – 14,5 %. В группе коров, больных маститом отмечено снижение этого показателя до 12,7%. В группе коров, больных лейкозом, этот
показатель оказался еще ниже и составил 12,3 %. Следует учитывать тот
факт, что фактически уровень комплемента зависит от степени поражения
органа инфекцией или инвазией.
Животные контрольной группы коров имеют высокую активность лизирующего фермента. Известно, что лизоцим стимулирует защитные функции организма животных, способствуя благоприятному исходу при любых
возникших инфекционных процессах.
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
Таблица 19 - Показатели гуморальных и клеточных факторов защиты организма у здоровых коров, коров больных
лейкозом, маститом на экологически неблагополучной территории
Загрязненность территории
условно благопо-
условно неблагополучная зона
Показатели, %
Бактерицидная
лучная зона
Группы коров
здоровые
больные лейкозом
больные маститом,
здоровые,
п = 30
п = 30
п = 30
п = 30
67,4 ± 0,68*
54,1 0,26***
60,3 0,80***
69,9 0,76
40,3± 0,32
17,2 0,26***
21,2 0,20***
40,5 1,18
14,4 0,17
12,2 0,16*
12,6 0,18*
14,4 0,82
22,2 ± 0,14
37,7 0,22***
36,0 0,31***
22,3 1,37
активность
Фагоцитарная
активность
Комплиментарная
активность
Лизоцимная
активность
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
В группе коров больных лейкозом лизоцимная активность ниже нормы 22,7 % и в среднем составляет 17,6 %. По нашему мнению это связано с
активизацией защитных функций организма в борьбе с заболеванием. В сопоставлении с продуктивностью исследуемых животных оказалось, что чем
выше удой у коровы, болеющей лейкозом, тем выше и лизоцимная активность сыворотки крови этого животного. Причем, такая же тенденция отмечается и у здоровых коров.
Мастит следующим образом влияет на лизоцимную активность: она в
среднем несколько ниже нормы, и составляет 21,2 %.
Цитоморфологические показатели крови экспериментальных животных
в зависимости от экотоксикации ареала выбросами промышленных производств представлены на рисунке 15.
180
160
140
120
100
80
60
40
20
0
подтаежная неблагополучная зона
подтаежная благополучная зона
лесостепная неблагополучная зона
лесостепная благополучная зона
Рис. 15 - Цитоморфологические показатели крови экспериментальных животных в зависимости от экотоксикации ареала выбросами промышленных производств
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
Из представленных в таблице данных видно, что количество эритроцитов крови крыс в загрязненной подтаежной зоне ниже, чем в чистой зоне. В
лесостепной зоне этот показатель (в загрязненной ее части) ниже, чем в чистой зоне. Та же тенденция прослеживается и в отношении гемоглобина. Так,
в подтаежной зоне (в загрязненной ее части) показатели гемоглобина ниже,
чем в чистой, что свидетельствует об анемии у животных, обитающих в загрязненных зонах Рязанской области.
Количество лейкоцитов животных в загрязненных частях обоих ландшафтно – географических зон ниже границ показателей нормы (рис. 16).
80
70
60
%
50
40
30
20
10
0
БА (полевки)
БА (коровы)
ФА (полевки)
ФА (коровы)
ЛА (полевки)
подтаежная неблагополучная зона
подтаежная благополучная зона
лесостепная неблагополучная зона
лесостепная благополучная зона
ЛА (коровы)
Рис. 16 - Динамика показателей естественной резистентности экспериментальных животных в подтаежной и лесостепной зонах в зависимости от загрязненности территорий
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
Глава 4. Взаимосвязь активности ферментов и тиреоидных гормонов
при регуляции Са2+- антагонистомкомпенсаторно-приспособительных
процессов коров к условиям среды обитания
В настоящее время все более очевидной становиться важная и многообразная роль ферментных систем среди различных факторов, участвующих в
регуляции и интеграции процессов развития, физиологического состояния и
жизненных отправлений организма. На механизмах, основу которых составляют ферментные системы, базируется раскрытие в онтогенезе путей реализации наследственной информации, регуляции роста и развития, гомеостаза
(К.Б. Свечин, И.А. Аршавский, А.В. Квасницкий и соавт., 1967; В.Н. Никитин,
1975;
В.Ф.
Лысов,
1977,
1996,
2004;
С.И.Вишняков,
1989;
В.И.Максимов, 1999-2002, 2004, 2005; В.И. Максимов и др., 1999-2010;
Г.Ф.Рыжкова, 2005; В.А. Гудин, 2006; S.R. Torronterasetal., 1993). В частности, характерные периоды более быстрого и замедленного роста и развития
органов и организма в целом в определенной степени связаны с активностью
ферментных систем. Известно, что активность ферментных систем зависит от
степени воздействия различных факторов внешней и внутренней среды клетки, таких как изменение рН, концентрации субстрата, химическая модификация молекул, наличие специфических активаторов и ингибиторов, изменения
проницаемости мембран, скорости деградации молекул фермента, индукции
и репрессии биосинтеза белка молекул ферментов и др. (Н.Н. Чернов, 1996;
А.А. Болдырев, 1997).Степень влияния этих факторов во многом определяется экзогенными и эндогенными условиями существования, оказывающими
воздействие на организм, к ним относят: возраст, физиологическое состояние
(половое и физиологическое созревание, продуктивность и скорость роста),
тип кормления и кормовые добавки, гормональный и иммунный статус,
стресс и др. Таким образом, активность ферментов, играет ведущую роль в
реализации механизмов физиолого-биохимической адаптации, обеспечива-
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
ющих существование организма в постоянно изменяющейся внешней среде
(В.Ф. Лысов, 1977; В.Б. Решетов, 1998; Р.М. Хаитов, 2000; Р.Х. Кармолиев,
2002, 2005; В.Г. Галактионов, 2005; Е.Л. Харитонов, 2003, 2007; Е.А. Силиванова, 2006; Д.Н. Кыров, 2006 и др.; В.И. Максимов, 2002, 2006, 2008; В.В.
Михайлов, 2008). Для обеспечения физиологических процессов и свойств
живой клетки, структурно-физиологической единицы тканей, органов и организма животного в целом, необходим избирательный транспорт веществ и
энергии в клетку из внешней среды, ведущую роль в котором играет активный транспорт, осуществляемый ферментными системами мембран (ионными насосами), интегральными компонентами которых являются АТФазы.АТФ-зависимые ионные насосы, представляющие комплекс ферментов,
обеспечивают как первичный транспорт катионов (H+,Na+,K+,Ca2+) и анионов
(Cl-, HCO3-) против их электрохимических градиентов, так и вторичноактивный перенос через мембрану в клетку сахаров, аминокислот, органических кислот, за счет энергии трансмембранного градиента концентрации
ионов Na+. С работой АТФаз так же связана генерация биотоков, трансмембранного потенциала и передача нервного импульса, процессы сопряжения
окислительного фосфорилирования. Накоплено большое количество сведений по изучению транспорта ионов и функционированию Mg2+-, Ca2+-,
Na+,K+-, H+-АТФаз (Я. Кагава, 1985; А.А. Болдырев и др., 1985, 1998; С.И.
Вишняков, 1989; J.C.Skouetal., 1992; В.П. Скулачев, 1989, 2001; В.А. Опритов, 1996; Ю.А. Владимиров, 1998; А.М. Рубцов, 2005; Г.Ф. Рыжкова, 2005;
G. Schiener-Bobis, 2002; P.L. Jorgensenetal., 2003; и др.) (цитировано по В.В.
Мосягину, 2011).
Говоря о структуре и свойствах кальпаинов сердца и крови необходимо
указать, что кальпаины или кальций-активируемые нейтральные протеиназы
относятся к классу тиоловых (цистеиновых) амид-гидролаз (Соболев В.И.,
1976; Антонов В.К., 1983).
Кальций является ключевым модулятором функции кальпаинов, т.к. и
активация указанных протеиназ, и взаимодействие их с эндогенными инги-
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
биторами представляют собой процессы, зависящие от внутриклеточной
концентрации Са 2+ (Соловьев В.Е., 1976; Веренинов А.А., 1986; Е.А. Рязанова,1990). О том, что взаимодействие трииодтиронина с ядерно-рецепторным
комплексом клетки является ключевым звеном физиологического контроля
жизнедеятельности организма, указывает в своих трудах Г.Л. Верещагина
(1991).
В литературе встречаются единичные данные, допустим S. Tsuji,
S.Ishiura, M.Takahashi-Nakamuraetal. (1981),о влиянии кальция на структуру
кальпаинов.
GopalakrihnaR.(1985) утверждает, что Са2+ вызывает конформационные
изменения вокруг остатков цистеина, триптофана, тирозина в молекуле фермента индуцирует гидрофобные участки что является существенным для
протеолитической активности (Антонов В.К, 1983; Браунштейн А.Е., 1987).
T. Murachi, M. Hatanaka, Y. Yasumoto et al. (1981), A. Kishimoto, N.
Kajikama, H. Tabuchi et. al. (1981),GopalakrihnaR. (1985), Murachi.T (1981),
многократно подчеркивают, что кальпаины широко распространены и присутствуют в различных органах и тканях млекопитающих в двух формах, характеризующихся разной чувствительностью к ионам Са 2+ - это кальпаин I и
кальпаин II. Впервые о двух формах кальпаина сообщил Mellgren в 1980 г.,
выделив их из сердечной мышцы собаки (R.L.Mellgren, 1980).
Первоначально кальпаины были описаныW.J. Reville,
Stromer
et
D.E.Goll, M.H.
al. (1976), S.Ishiura, H.Murofushi, K.Suzuki, K.Imanori (1978),
(Murachi. T (1981)), какцитоплазматическиепротеазыВдальнейшем, благодаряисследованиямBaudry M.,
Lynch G. (1980), Gassel D., Glaser L. (1982),
Dayton W.R., Schollmeyer J.V. (1981), Hatanaka M., Yoshimura N., Murakami T.
(1984) Siman R., Baudry M., Lynch В (1983) былодоказаноихналичиевплазматическихмембранахицитоскелете Nelson W.J., Traub P. (1981), Nelson W . J . ,
Traub P. (1982).
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
Посообщениям S.PontremolI, E.Melloni,M.liichetti (1987)обакальпаина
- нейтральныепротеазы, имеющиеоптимальноезначениерН 7,0…8,0. При
снижении рН до 6,0 Са
2+
- зависимая активность исчезает. Как указывает
Л.А. Локшина (1981) изоэлектрическая точка кальпаинов находится в области 4,5…4,9. По исследованиям KubotaS., OhsawaN., TakakuF. (1984),
N.Yoshimura ,T . K i k u c h i , T.Sasakietal. (1983) кальпаин I и кальпаин II
отличаются друг от друга по устойчивости к тепловой обработке: более термостабильным является кальпаин I. Murachi.T (1981), TsujiS.ImahoriK. (1981)
подчеркивают, что кальпаины I и II имеют молекулярную массу
110000…130000 и состоят из двух субъединиц с молекулярной массой
72000…82000 и 25000…30000.
I.F.Penny, M.A.J.Taylor, A.G.Harris, D.J.Etherington (1985) предлагает
различать субъединицы кальпаина I и кальпаина II по молекулярной массе,
иммунологическим свойствам, J.W. Bird,
W.W. Schwartz, M.J. Wheelock
(1983), A.Kitahara, T.Sasaki, T.Kikachietal. (1984) по
(1982), A.M. Spanier
аминокислотному составу.
Благодаря работам S. Tsuji, K.Imahori (1981), T.Kikuchi, N.Yumoto,
T.Sasaki, T.Murachi (1984); Веремеенко К.Н., Головородько О.П. и др.,
(1988)удалось выяснить, что они обладают протеолитической активностью,
но более низкой и требующей высоких концентраций Са 2+ по сравнению с
нативными ферментами.
По
данным
иммунохимического
анализа
A.Kitahara,
T.Sasaki,
T.Kikachietal. (1984), MurachiT. (1985),WheelockM.J. (1982)сообщают, что
малые субъединицы кальпаина I и кальпаина II идентичны, не проявляют
тканевой и видовой специфичности; выделенные из различных источников
они заменяют друг друга при взаимодействии с изолированной большой
субъединицей, повышая ее активность и сродство к ионам Са 2+. Различие в
уровне Са2+ , необходимом для активации кальпаина I и кальпаина II, связано с большой субъединицей энзимов.
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
Эндогенные субстраты кальпаинов можно разделить на группы: ферменты, рецепторные белки, белки миофибрилл, белки цитоскелета, ассоциированные с мембранами Локшина Л.А. (1986).
Кальпаины гидролизуют казеин, нативный и денатурированный JohnsonP., ParkesC., BarrettA.J. (1984), W.R.Dayton, D.E.Gail, W.J.Re-villeetal.
(1974), I.Nishiura, K.Tanaka, S.Ya— mato, T.Murachi (1978), сывороточный
альбумин, сукцинилированный протамин M. Hayashi, M. Inomata, M. Nakamura (1985), R.L.Mellgren, J.H.Aylward, S.D.Killilea, E.Y.C.Lee (1979), азаказеин
J.W.C.Bird,
F.J.Roisen,
G.Yorkeetal.
(1981),
S.PontremolI,
E.Melloni,M.liichettietal. (1987), некоторые синтетические субстраты T. Sasaki, T. Kikuchi, N. Yomoto (1984), тубулин, спектрин, денатурированные гемоглобин и миоглобин S.Ishiura, H.Sugita, K.Suzuki, K.Imanori (1979).
Кальпаин I активируется микромолярными (4…100 мкМ), а кальпаин II
– миллимолярными (1…5 мМ) концентрациями Са2+, о чем сообщают
CroallD.E., DemartinoG.N. (1983), Murachi. T (1981), Mellg ren R.L. (1980),
M.N. Malik, M.D.Fenko,K . I q h a l , H.M.Wisniewski (1983).
Обе формы кальпаина присутствуют в тканях одновременно, однако их
относительное содержание варьирует в широких пределах. Самая высокая
активность
кальпаина
I
обнаруживается
в
селезенкепо
мнению
GopalakrihnaR. (1985), кальпаина II – в легких, что отражено в работах T. Murachi,
M. Hatanaka, Y. Yasumoto (1981),GopalakrihnaR. (1985), A. Kishimoto,
N. Kajikawa, H. Tabuchi (1981), GopalakrihnaR. (1985)и в почках, по сообщениям J.L. Azanza, P. Cottin, J.M. Robin (1981). Преобладающей формой является
кальпаин II.
Единственной Са2+ - активируемой нейтральной протеиназой эритроцитов млекопитающих является кальпаин II, кальпаин I в них не обнаруживается, что было доказано J. Miyachi, N. Joshimura, S.Suzuki (1986), MurachiT. (1985), MurakamiT., HatanakaM., MurachiT. (1981).
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
Методом иммунофлюорисценции показано, что основная масса кальпаина в сердечной мышце 96 % находится в цитозоле (свободный энзим) и
около 4 % существует в связанном состоянии в области Z – диска, что было
обнаружено S. Ishiura, Н..Sugita, I. Nonaka, K. Imanori (1980).
Функции цитозольных и связанных с мембраной кальпаинов различныутверждают M. Hatanaka, N.Yoshimura, T. Murakami (1984). Обнаружена
способность кальпаинов I и II в присутствии 50 мкМ Са2+
связываться с
субклеточными фракциями тканей. Показано, что in vivo кальпаины I и II
находятся в слабо-связанном состоянии (GopalakrihnaR., BarskiS.H., 1985.В
скелетных мышцах свиньи 14 % активности кальпаина присутствует в ядерной и митохондриально-микросомальной фракциях (W.J.Reville,
D.E.Goll,
M.H. Stromer, 1976).
Кальпаины,выделенные из различных тканей, характеризуется близкими физико-химическими и энзиматическими свойствами. Одно из уникальных свойств ферментов заключается в абсолютной зависимости их протеолитической активности от ионов кальция. При этом для достижения половины
максимальной активности кальпаина I требуется концентрация Са2+ в пределах 4…100 мкМ, а кальпаина II в пределах 1…5 мМ, что в разное время было
подтверждено
в
исследованиях
DeMartinoG.N. (1983), T. Murachi,
(1981),
Mellg ren R.L.
J.Wiener
(1980),
(Спиричев
В.Б.,
1978;
CroallD.E.,
K. Tanaka, M. Hatanaka, T. Murakami
R.J.Rozek ,T.H.Kuo,F.Gia c o m e l l i
( 1 9 8 3 ) , M.N.
,
Malik,
M.D.Fenko,K . I q h a l , H.M.Wisniewski( 1 9 8 3 ) .
Относительно активирующего влияния других катионов на кальпаин
получены противоречивые результаты. Кальпаины печени крысы не активируются ионами Мg и Мn (DeMartinoG. N. ,1981), кальпаин II из женской
плаценты – Мg, Мn, Ва, Со (Ли С.С., 1979), кальпаины мозга крысы - Мg, Jn,
Ва, Си (A. Kishimoto, N. Kajikawa, H. Tabuchi , 1981), кальпаин II миокарда быка - Мg, Jn, Сr и Сd (TanFuC., GoliD.E., OtsukaY., 1988). Вместе с тем имеют-
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
ся сообщения о том, что ионы Мg и Ва активируют кальпаин I, но не кальпаин II сердца свиньи (OtsukaY., TanakaH.,1983), Мn и Сr - кальпаин II из
предстательной
железы
грызунов(WildenthalK . , PooleA.R.,
D i n g l e J.T..
1975), Ва, Мn ,Сr и Ja – кальпаин II миокарда быка (TanFuC., GoliD.E.,
OtsukaY.,1988), Мn, Ва и Сr - кальпаин I почек грызунов, а Сr , кроме того, и
кальпаин II из того же источника (N.Yoshimura ,T . K i k u c h i , T.Sasaki,
1983).
Сведения о наличии Са2+ - связывающего домена в структуре и большой, и малой субъединиц кальпаина указывают на "механизм двойной регуляции", участвующий в активации гетеродимерной протеиназы. Возможно,
имеют место два типа внутримолекулярной регуляции активности кальпаина
с участием Са2+. Один - заключается во взаимодействии между каталитическим и Са2+ - связывающим доменами внутри большой субъединицы; другой
- между каталитической большой субъединицей и регуляторной малой субъединицей кальпаина, которая также способна связывать ионы Са2+(KannadiR.,
SakihamaT., MurachiT., 1985).
В структуре кальпаинов отмечены Са2+- зависимые и Са2+ - независимые гидрофобные участки. Субстратная специфичность энзимов, отчасти,
может определяться дополнительными гцдрофобными областями, которые
открываются под действием кальция и могут участвовать в образовании
фермент-субстратного комплекса. Так, взаимодействие кальпаина с казеином
требует присутствия Са2+ и осуществляется посредством гидрофобных сил
(GopalakrihnaR., HeadF., 1985). Изменений во вторичной структуре кальпаинов под действием кальция не обнаружено (S.Tsuji, S.Ishiura, M.TakahashiNakamura, 1981).
Активация происходит в присутствии высоких концентраций Са 2+
(0,1…1,0 мМ) без субстрата или при физиологических концентрациях Са2+
(1,0…5,0 мкМ) в присутствии субстрата (S. Pontremoli, E. Melloni, F.
Salamino, 1984). При этом проферменты диссоциируют на субъединицы без
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
изменения их молекулярной массы (M e l l o n i E., 1984) . Образовавшаяся протеиназа активируется мкМ концентрациями Са2+ (1,0…5,0 мкМ). Только те
субстраты (денатурированный глобин и нативный β -глобин и казеин), которые гидролизуются активными ферментами, могут быть активаторами зимогенов. Нативные цитозольные ферменты, такие как альдолаза и фруктозо -1,6
- фосфатаза не активируют проферменты кальпаинов и не гидролизируются
их
активными
формами
(Панченко
М.П.,
1984;
S.PontremolI,
E.Melloni,M.liichetti (1984). Очевидно, в физиологических условиях только
денатурированные белки способны активировать в присутствии низких,
имеющихся в клетке, концентрациях Са2+ прокальпаины
в протеиназы, ак-
тивирующиеся
Са2+(S.PontremolI,
мкм
концентрациями
E.Melloni,M.liichetti, 1984). С другой стороны, активация проферментов в
клетке может происходить в зоне локального повышения уровня Са2+ .
S. Pantremoli,
B. Sparatore,
E. Melloni (1984) предполагают, что
калъпаин I эритроцитов находится в цитоплазме в неактивной форме, а регулируемое Са2+ встраивание профермента в мембрану вызывает его диссоциацию
на субъединицы и аутолитическую активацию большой каталитиче-
ской субъединицы.
В результате конформационных изменений, вызванных присоединением Са2+, образуется активная форма фермента, обладающая аутолитической
активностью, но не способная расщеплять экзогенные субстраты. Активное
участие в регуляции активности кальпаинов принимают эндогенные ингибиторы этих фернтов - кальпастатины. Они ингибируют только активные протеиназы и составляют внутриклеточную регуляторную
кальпаин-
кальпастатиновую систему (Назаренко В.Т., 1995).
E.Takano,
N.Yumoto,R.Kannagi,T.Murachi
(1984),
MurachiT.,
E m i k o T., TanakaK. (1983), G.Melloni, F.Salamino, B.Sparatore (1984), или 2
DeMartinoG.N., CroallD.E. (1984), M . S p a l l a , W.Tsang,T.H.Kuo (1985) сообщают, что кальпастатины локализованы в цитозоле. Они представляют со-
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
бой термостабильные, высокомолекулярные белки с молекулярной массой
210000…300000, которые содержат 4 субъединицы. MurachiT., E m i k o T.,
TanakaK. (1983), E.Takano,A . K i t a h a r a , T.Sasaki (1986) установлен аминокислотный состав ингибитора.
Как
указывают
MurachiT.,
E m i k o T.,
TanakaK.
(1983),
N . T a k a h a s h i , S.Tsuji,R. Suzuk i , K . I m a n o r i (1981) все известные кальпастатины высокоспецифичны: они угнетают активность только кальпаина I
и кальпаина II и не действуют ни на одну из других исследованных протеиназ, включая лизосомальные катепсины, трипсин, химотрипсин, субтилизин,
термолизин, тромбин, пепсин, а также цистеиновые протеиназы из растений
– папаин, фицин и промелаин.
По результатам работ I JohnsonP., Guindon-HammerI.L. (1987),
JohnsonP., ParkesC., BarrettA.J. (1984) из скелетных мышц мышиных хомякообразны грызунов и гладких мышц желудка цыпленка выделены три вида
кальпастатинов, причем, один из них ингибирует кальпаин I и кальпаин II, а
два других – толко кальпаин.JohnsonP., Guindon-HammerI.L. (1987), H.Toyo—
hara, Y.Makinodan,L.Tanaka,T.Ikeda (1983) подчеркивают, что видовой и
органной специфичностью ингибиторы не обладают.
MurachiT., E m i k o T., TanakaK. (1983), I.Nishiura, K.Tanaka, S.Ya— mato,
T.Murachi (1978), WaxmanL., KrebsE.G. (1978) считают, что взаимодействие
кальпастатинов с кальпаином I и кальпаином II происходит только в присутствии высоких концентраций Са2+. При этом ферменты находятся в активной
форме и образуют с ингибиторами комплекс, который обратимо диссоциирует при удалении Са2+(MurachiT., E m i k o T., TanakaK., 1983) или в присутствии ЭДТА (M.Nakamura, M. Inomata, S. Imajoh, 1989), а протеиназы и ингибитор восстанавливают исходную активность (ImajohS., SuzukiK.,1985).
Кальпастатин и кальпаин из скелетных мышц в присутствии Са2+ образуют комплекс, содержащий две молекулы фермента и одну молекулу ингибитора. В экзимолярных соотношениях кальпастатин полностью блокирует
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
казеинолетическую
активность
большой
субъединицы
кальпаина
(N . T a k a h a s h i , S.Tsuji,R. Suzuk i , K . I m a n o r i , 1981).
Кинетические исследования Jakano и др. показывают, что один моль
кальпастатина из сердца свиньи, имеющего молекулярную массу 107000,
связывает 8 моль кальпаина, ингибитор из эритроцитов свиньи с молекулярной массой 68000 – 5 моль фермента (E.Takano,A . K i t a h a r a , T.Sasaki,
1986).
Авторы наблюдали фрагментацию кальпастатина с молекулярной массой
110000, происходящую при взаимодействии ингибитора с кальпаином I и
кальпаином II из скелетных мышц кролика и сообщают, что процесс активируется в присутствии микромолярных и миллимолярных концентраций
Са2+(M. Hatanaka, M. Inomata, S. Imajoh, 1989).Кальпастатины имеют максимальную активность при нейтральном значении рН, с уменьшением рН происходит диссоциация комплекса фермента с ингибитором
(P.Cottin,
J.L.Azanza, P. Vidalenc, 1981).
Предполагают, что функция ингибитора в эритроцитах состоит в том,
что при чрезмерном повышении концентрации внутриклеточного Са 2+, он
препятствует связыванию прокальпаина с мембраной, а, значит, активации
фермента (S. Pontremoli, E. Melloni, B.Sparatore,1985).
На примере эритроцитов крысы и человека показано, что слияние эритроцитов зависит от соотношения в них кальпаина и катьпастатина (GlasirT.,
KasoverN.S., 1986). Калъпастатин легких
крысы препятствует связыванию
кальпаинов с субклеточными структурами, такими как микросомы, мембраны, ядро, но не способен вызывать диссоциацию уже образовавшихся комплексов (GopalakrihnaR., BarskiS.H., 1985). Кальпастатин из миокарда быка
может связываться с препаратами саркоплазматического ретикулума с участием фосфолипидов (MellgrenR.L., CarrT.C., 1983).
Механизм активации заключается в ограниченном протеолизе. Ранние
исследования продемонстрировали в скелетной (MeyerW.L., FicherE.H.,
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
KrebsE.G., 1964) и сердечной (DrummondG.I., DuncanL., 1966) мышцах белковый фактор, активирующий киназу фосфорилазы в присутствии Са2+- активируемой нейтральной протеиназы (Саипов Т.Д., 1989).
Очевидно, основные функции кальпаинов связаны с ограниченным
протеолизом определенных
цитоплазматических и мембранных белков,
выполняющих важную роль в регуляции внутриклеточного метаболизма и
реализации многих клеточных функций. Воздействуя на ключевые ферменты обмена и модифицируя рецепторные белки, кальпаяны выступают как
факторы перестройки метаболизма, лежащие в основе трансформации и
дифференцировки клеток, а также адаптационных изменений обмена. Модифицируя ассоциированные с мембраной белки и белки цитоскелета, кальпаины включаются в регуляцию процессов, реализуемых с участием контрактильных элементов, таких как: секреция продуктов, деление и движение клеток, изменение их формы и т.д. (Локшина Л.А., 1986).
Веремеенко
К.Н.,
Голобородько
О.П.,
Кизим
А.И.
(1988),
Дж.В.Каллахана, Дж.А.Лоудена (1984) уверены, что в регуляции процессов
клеточного метаболизма и развитии обменных нарушений при патологии
принимают активное участие различные протеолитические системы. Представляет интерес взаимодействие различных по локализации и свойствам
протеолитических ферментов, таких как кальпаины и катепсин Д лизосом
(Дж. Дингла, 1980).
R. Zak, A.F. Martin, M.K. Reddy (1976), Topping Т.П., TravisD.F. (1974),
W i l d e n t h a l K. (1975), WildenthalK., CrieJ.S. (1980) обращают внимание на
то, что для нормального оборота мышечных белков требуется последовательное действие нескольких внутриклеточных протеиназ. В деградации белков миокарда и скелетных мышц участвуют кальпаины, лизосомальные кислые протеиназы (катепсины А, В, С, Д) и миофибриллярные фосфатазы
(SchwartzW.N., BirdJ.W.C.,1977). Высокоорганизованная структура миофибрилл, имеющая важное значение для физиологического функционирования,
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
определяет особенности обмена миофибриллярных белков. В некоторых тканях преобладает лизосомный путь деградации белков, на долю которого
приходится примерно 75 % всего внутриклеточного протеолиза. Однако
ферменты лизосом не могут гидролизовать белки при рН выше 6,5, что характерно для цитоплазмы клеток. По-видимому, для лизосомальной деградации миофибриллярные белки должны быть высвобождены из миофибрилл
(Короленко Т.А., 1990; Коровкин Б.Ф., 1982).
Полагают, что кальпаины являются ключевыми ферментами внутриклеточной деградации миофибриллярных белков и участвуют в их первичном распаде (FaganJ.M., BrooksB.M., GollD.E., 1983). W.R. Dayton,
W.J.
Revi11e,D.E. Goll,M.H. Stromer (1976), W.R. Dayton, D.E. Goll, M.G. Zeece
(1976), S.Ishiura, H. Sugita,
I. Nonaka,
K. Imanori (1980), DaytonW.R.,
SchollmeyerJ.V. (1981), IshiuraS. (1981) подчеркивают тот факт, что они обладают рядом описанных выше свойств, необходимых для этого: активны при
физиологическом значении рН, локализованы в саркоплазме и плазматических мембранах, а в миофибриллярных структурах расположена около Zдисков проявляют определенную избирательность при протеолизе, разрушая
преимущественно белки, ответственные зa организацию миофибрилл. В 1972
г. Буш и др. выделили из скелетной мышцы Са
2+
-активируемый саркоплаз-
матический фактор, который разрушал Z-диски при инкубации с изолированными миофибриллами (W.A.Buch, M.H. Stromer, D.E. Goll, A. Suzuki,
1972).
Деградация Z -диска под действием кальпаинов начинает метаболический оборот миофибриллярных белков. Наблюдаются изменения в организации миофибрилл: расшатывается структура саркомера (SchwartzW.N.,
BirdJ.W.C., 1977), нарушается трехмерное расположение толстых и тонких
филаментов (W.R.Dayton, D.E.Goll, M.H.Stromer, 1975), происходит их освобождение с поверхности миофибрилл (B.A.Brooks, D.E. Goll, Y.S. Pend,
1983), изменяется структура М-линии (A. Suzuki, M. Saito, Y. Nomani, 1978).
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
Кальпаины вызывают деградацию тропонина Т,J, тропомиозина, что отражено в работах W.R. Dayton,
W.J. Revi11e,D.E. Goll,M.H. Stromer (1976),
J.L.Azanza, J.Raymond, J.M. Robin (1979), W.R.Dayton, D.E.Gail, W.J.Re-ville
(1974), Toyo-okaT. , S h i m i z i T. , M a s a k i T. (1978), белка С J.W. Wird,
J.H.Sarter, R.E.Triemer (1980) и М-белка, в работах - J.W. Wird, J.H.Sarter,
R.E.Triemer (1980), J.L.Azanza, J.Raymond, J.M. Robin (1979), но не гидролизуют актин и миозин, по сообщениям K.S. Gie, M. Michio, I. Yoshihide (1980),
JohnsonP., ParkesC., BarrettA.J. (1984), KayJ. (1981), S.Ishiura, H.Sugita,
K.Suzuki, K.Imanori (1979).
Относительно α - актинина - белка, освобождающегося при устранении
Z - диска, получены противоречивые результаты: одни авторы сообщают об
отсутствии гидролитического расщепления белка под действием кальпаина, к
сторонникам такой точки зрения относятся W.R. Dayton,
W.J. Revi11e,D.E.
Goll,M.H. Stromer (1976), W.R. Dayton, D.E. Goll, M.G. Zeece (1976), S.Ishiura, H.Sugita, K.Suzuki, K.Imanori (1979), другие, а именно ReddyM.K., RabinowitzM., ZakR. (1983)наблюдали деградацию α – актинина кальпаином.
Интересно, что активность кальпаинов по отношению к интактным
миофибриллам проявляется только в присутствии Са2+, другие ионы:
Ва2+,Zn2+,Sr2+,Mn2+,Mg2+,Co2+ при этом неэффективны. Видимо, только Са2+
вызывает конформационные изменения в миофибриллах, в чем увереныR.
Zak,
A.F.
Martin,
M.K.
Reddy
(1976),
OtsukaY.,
TanakaH.
(1983),
SchwartzW.N., BirdJ.W.C. (1977), . Tan Fu C., Goli D.E., Otsuka Y. (1988),
N.Yoshimura, T . K i k u c h i , T.Sasaki (1983), Wildenthal K . , Poole A.R.,
D i n g l e J.T. (1975).
В результате начального этапа, осуществляемого кальпаинами, миофибриллярные белки становятся доступными для протеолитического действия лизосомальных протеиназ (Панченко Л.Ф., 1971). Катепсины В и Д
расщепляют миозин и актин, при этом большую активность проявляет катепсин Д – основной лизосомальный фермент, способный к деградации бел-
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
ков в культуре клеток сердца и подтверждают важную роль лизосом в катаболизме белков миокарда (Корнюшенко Н.П., Мартыненко Ф.П. 1981, 1984,
1985).
В ряде работ Джапаридзе Л.М.., Гуткин Д. В.
(1986), Клочков Н.Д.
(1986), W.R. Dayton, J.V. Schollmeyer, A.C. Chan, C.E. Allen (1979), KarN.C.,
PearsonC.M. (1972), NeerufljunJ.S., DubowitzV. (1979) показано увеличение
активности кальпаинов и лизосомальных протеиназ, последовательно расщепляющих белки миофибрилл, в скелетных мышцах экспериментальных
животных при мышечной дистрофии и атрофии, обусловленной дефицитом
витамина Е, что указывает на возможное участие этих ферментов в механизме усиленного некроза мышечной ткани. В миокарде грызуновR.J. Rozek,
T.H. Kuo, F. Giacomelli, J. Wiener (1983),M . S p a l l a , W.Tsang,T.H.Kuo
(1985)наблюдали увеличение активности катепсина Д и кальпаина II, но не
кальпаина I.
Установлено, что в миокарде крыс, перенесших стресс, увеличивается
неседиментируемая активность катепсина Д и кислой фосфатазы (Мейерсон
Ф.З., 1984), возрастает активность кальпаина II и снижается уровень кальпастатина.
Гормоны щитовидной железы - тироксин и трийодтиронин регулируют
внутриклеточные процессы посредством рецепторов, локализованных в ядре,
цитозоле, митохондриях и плазматических мембранах клеток-мишеней. Преобладающая часть рецепторов находится в хроматине ядра (Розен
В.Б.,
1984).
Эффекты тиреоидных гормонов зависят от их концентрации в организме и характеризуются тканевой и ферментативной специфичностью. В физиологических дозах тироксин и трийодтиронин стимулируют синтез нуклеиновых кислот, увеличивают содержание белка в тканях, индуцируют ряд
ферментов, в том числе лизосомальных; в токсических дозах гормоны тормо-
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
зят эти процессы (Крюкова И.В., 1967; Протасова Т.Н., 1975; Рачев Р.Р.,
1975; Бомаш Н.Ю.,1981; Виткова О.В., 2005) Протасова. Т.Н. (1975).
При лабораторных исследованиях у животных отмечают легкую нормоцитарную, нормохромную гипопластическую анемию, а также гиперхолестерию, гипертриглицеридемию и высокую активность креатинфосфокиназы
Общий анализ мочи обычно в пределах нормы. Исключительно важно правильно выбрать метод диагностики и лабораторные анализы, потому что достоверность некоторых из них низка. Радиоиммунный анализ гормонов информативен и крайне важен в оценке функционального состояния щитовидной железы. Для гипотиреоза характерна низкая концентрация трийодтиронина (Т3) и тироксина (Т4) в сыворотке, но снижение их содержания может
быть и при заболеваниях, не поражающих щитовидную железу, и при лечении глюкокортикоидами, антиконвульсантными средствами. При нетиреоидных заболеваниях и лечении вышеуказанными препаратами нарушается способность плазмы крови связывать Т4, концентрация которого при этом не меняется. Определение свободного Т3 может быть более ценным методом диагностики гипотиреоза, чем определение концентрации Т4. Тест стимуляцией
ТТГ в прошлом считали наиболее информативным в диагностике гипотиреоза. Определяют концентрацию сывороточного Т4 до и после введения бычьего ТТГ. Снижение концентрации Т3 после проведения теста ниже нормального уровня подтверждает диагноз гипотиреоза, но высокая стоимость ТТГ и
меньшая диагностическая ценность ограничила применение этого теста. Тест
стимуляцией тиреотропин-рилизинг-гормоном (ТРГ) также имеет меньшее
значение. При его проведении определяют высвобождение ТТГ из гипофиза
в ответ на экзогенный ТРГ. После введения ТРГ определяют концентрацию
сывороточного Т3 дешевле, чем ТТГ, и его легче получить. Теоретически организм животного с гипотиреозом не должен реагировать на введение ТРГ.
Интерпретировать результаты теста трудно из-за незначительного повышения концентрации Т4 в сыворотке после введения ТРГ. При гистологическом
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
исследовании биоптата в случае лимфоцитарного тиреоидита с первичным
гипотиреозом обнаруживают уменьшение фолликулярного эпителия. При
вторичном гипотиреозе фолликулы растянуты коллоидом.
В исследованияхКорнюшенко, Н.П., Мартыненко, Ф.П. (1984,1985),D.E.
Goll,
A. Okirani,
W.R. Dayton (1978), MurachiT. (1984), SatavJ.G., Kat-
yareS.S. (1981), Toyo—okaT. (1980), проведенных in vivo , показано, что тиреоидные гормоны изменяют активность лизосомальных гидролаз в различных тканях. Так, при тиреотоксикозе активность катепсина Д в печени, мышцах, головном мозге и почках, а также кислой фосфатазы и катепсина Д в
скелетных мышцах увеличивается (D.E. Goll,
A. Okirani,
W.R. Dayton,
1978), Toyo—okaT., 1980). В то же время в сердце тироксин снижает активность катепсина Д. При регрессии тиреотоксической гипертрофии миокарда
активность этого фермента возрастает(GriffinW.S.T., WildenthalK., 1978). При
этом активность кислой фосфатазы, N-ацетилглюкозаминидазы остается без
изменений (W i l d e n t h a l K., 1975).
По мнению W.R. Dayton,
W.J. Revi11e,D.E. Goll,M.H. Stromer (1976),
DeMartinoG.N., GoldbergA.L. (1978) при тиреоидэктомии, когда резко снижается уровень йодтиронинов в организме, отмечается падение активности кислой фосфатазы, катепсина Д в скелетных мышцах и печени,
в почках,
напротив, происходит увеличение активности кислой фосфатазы и катепсина
Д; в сердце активность кислой фосфатазы
уменьшается (DeMartinoG.N.,
GoldbergA.L., 1978). Активность катепсина Д при гипотиреозе снижается в
мышцах (Корнюшенко Н.П., Мартыненко, Ф.П., 1985) , печени и головном мозге (Мартыненко
Ф.П.,
Корнюшенко
Н.П., 1981,1984;DeMartinoG.N.,
GoldbergA.L., 1978;SatavJ.G., KatyareS.S.,1981),но не в почках (Муращкина
А.Н., 2010; SatavJ.G., KatyareS.S. , 1981). Заместительное введение тиреоидэктомированным животным трийодтиронина восстанавливало активность катепсина Д в печени (SatavJ.G., KatyareS.S., 1981).
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
Увеличение активности катепсина Д, наблюдаемое в печени и скелетных мышцах под действием тироксина и трийодтиронина, связано с увеличением синтеза этого фермента (DeMartinoG.N., GoldbergA.L., 1978). Резкое
возрастание активности других лизосомальных гидролаз свидетельствует об
усилении в этих тканях биогенеза лизосом под влиянием тиреоидных гормонов. Известно, что трийодтиронин взаимодействует с ядерным хроматином,
стимулирует транскрипцию различных видов РНК, повышает активность
РНК-полимераз, увеличивает количество рибосом. В результате происходит
усиление синтеза соответствующих ферментативных белков.
Влияние тиреоидных гормонов на метаболизм не ограничивается только их взаимодействием со специфическими рецепторами. Одним из внутриклеточных посредников йодтиронинов является цАМФ (Розен В.Б., 1984;
Строев Е.А., 1975), обладающий мембранотропной активностью. Установлено, что цАМФ оказывает стабилизирующее действие на мембраны лизосом (IgnarroL.J., 1974;IgnarroL.J., KrassikaffN., 1973).
Василенко, В.X.,
Фельдман, С.Б., Хитров, Н.К. (1989), Корнюшенко Н.П., Мартыненко, Ф.П.
(1985), VandenHove-VandenbroukeN.F., KozyressV., DEVisscherM. (1974) предполагают, что цАМФ изменяет свойства лизосомальных мембран, стимулируя фосфорилирование мембранных белков. При изучении ряда патологических состояний обнаружили Козлов, А. В., Коровкин, Б.Ф. (1976), Т.Ю. Стрежнева, В.И.Скорик, Е.С.Сафонова, Б.Ф. Коровкин (1977) четкую зависимость между степенью свободной активности ферментов лизосом и величиной снижения концентрации цАМФ.
Йодтиронины регулируют уровень цАМФ в клетке посредством влияния на активность ферментов, катализирующих синтез (аденилатциклаза) и
распад
(фосфодиэстераза)
циклического
нуклеотида
(Я.X.Туракулов,
С.К.Халиков, Т.С.Саатов, С.Н.Далимова, 1980; Соловьев
Я.X.Туракулов, С.К.Xаликов, Т.Саатов
и
В.Е., 1976;
др., 1976;SmithR.M., Osborne-
WhiteW.S., KingR.A.,1978). При этом эффекты гормонов также носят ткане-
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
специфичный
Я.X.Туракулов,
и
дозозависимый
характер
(Никитин
В.П.,
1989;
С.К.Халиков, Т.С.Саатов, С.Н.Далимова, 1980;Ростомян
М.А., Абрамян К .С , 1985;Строев Е.А. , Строителев В.В., Астраханцев
А.Ф., 1988;Файфура В.В., 1982).
Э.К.Сеппет, А.Г.Калликорм, И.А.Флейдервиш,
Е.С. Ром-Бугославская,
З.Анталоци (1987),
Н.Г. Цариковская,А.И.Брискин,
Д.А. Дехтярь
(1976), Селивоненко В.Г. (1979), Б.А. Ташмухамедов, М.В. Зараева, А.И.
Гагельганс (1981), Суслов Г.И.
(1979), Орлов С.Н. (1988), Веренинов
А.А., Марахова И.И. (1986), Василенко В.X., Фельдман С.Б., Хитров Н.К.
(1989) сообщают о том, что йодтиронины, воздействуя на системы транспорта Са 2+, изменяют внутриклеточную концентрацию ионов, являющихся универсальными регуляторами клеточного метаболизма. Увеличение содержания ионов кальция в миоплазме сопровождается стимуляцией Са2+ - зависимой протеинкиназы и активацией лизосом кардиомиоцитов, проявляющейся
возрастанием проницаемости мембран и переходом лизосомальных ферментов в цитоплазму клеток.Прямое действие тиреоидных гормонов на мембраны лизосом не установлено(Покровский А.А., Тутельян В.А., 1976).
Вместе с тем в ряде работ получены данные, свидетельствующие об
опосредованном влиянии йодтиронинов на лизосомальные мембраны, вероятно, через цАМФ и ионы Са2+. У тириоидэктомированных крыс наблюдается уменьшение неседиментируемой активности катепсина Д(Мартыненко
Ф.П., Корнюшенко Н.П., 1981, 1984), а при тиреотоксикозе, вызванном
тироксином, наоборот, происходит увеличение этого показателя для катепсина Д в печени, а в тиреотоксическом сердце показатель снижается
(W i l d e n t h a l K., M u e l l e r E.A., 1974).
Все это указывает на тканеспецифичные изменения проницаемости лизосомальных мембран, обусловленные уровнем йодтиронина в организме
экспериментальных животных (Рязанова Е.А., 1995).На кальпаины миокарда
тироксин не оказывает влияния (Toyo—okaT., 1980;T.Miyamoto и др., 1988)
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
сообщают о том, что тиреоидые гормоны могут увеличивать содержание
кальпастатинов.
Таким образом, на основании приведенных литературных данных
можно заключить, что исследования, касающиеся роли кальпаинов и катепсина Д в механизме действия тиреоидных гормонов на нормальный миокард, немногочисленны, а значение этих протеиназ в реализации эффектов
йодтиронинов при развитии повреждения миокарда мало изучено (Рязанова
Е.А., 1990, 1995), что и послужило основанием для данного исследования.
Достаточно серьезной экологической проблемой для молочного скота
является не только влияние антропогенных факторов, но и естественные неблагоприятные условия обитания. Среди последних необходимо отметить
ведение животноводства на территориях с естественным недостатком йода в
почвах и воде.Дефицит йода возможно компенсировать добавкой его в рацион лишь в том случае, если у телят не отмечается гипотиреоз с самого рождения. Оказалось, около 15 % всех исследуемых телят черно-пестрой породы,
содержащихся в хозяйствах Рязанской области изначально рождаются с
недоразвитием щитовидной железы, что невозможно вылечить.
Единственный путь решения проблемы – изыскивать адаптивно – компенсаторные регуляторы, которые позволят на фоне недоразвития щитовидной железы полноценно работать остальным органам и тканям, важным для
сохранения высокой молочной продуктивности. В частности это сердце и
вымя, а так же иммунная система коров.
Регуляция Са2+ -
протеолитических систем, кислых и нейтральных
протеиназ кардиомиоцитов, позволяет количественно изменять образование
ферментов и других биологически активных соединений, что существенно
влияет на течение физиологических процессов. Так, при биохимическом исследовании миокарда экспериментальных животных активность кислой фосфатазы – маркерного фермента лизосом, обеспечивающего гидролитическую
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
реактивность иммунной системы при ликвидации очагов некротического поражения, оказалась в достоверной динамике (таблица 20).
У эутиреоидных коров, с экологически неблагоприятной по радионуклидам и тяжелым металлам йодэндемичной территории, резистентных к
лейкозу, соотношение седиментируемой и неседиментируемой фракций кислой фосфатазы в гомогенате миокарда составляет 0,49 и 0,32 ед. Высшая активность кислой фосфатазы сосредоточена в седиментируемой фракции, тогда как у аналогичных гипотиреоидных особей 0,26 и 0,48 ед.
Наблюдается обратная зависимость между количеством гидролитического фермента в цитоплазме кардиомиоцитов и уровнем резистентности коров к лейкозу. Регуляция Са2+ - антагонистом компенсаторной адаптивности
гипотиреоидных коров, восприимчивых к лейкозу, нормализует активность
кислой фосфатазы в миокарде животных, что указывает на стабилизацию
мембранного комплекса лизосом.
Таблица 20 - Активность кислой фосфатазы в миокарде коров с различной
резистентностью к маститу и лейкозу при регуляции Са2+ - антагонистом
компенсаторной адаптивности к гипотиреозу на экологически неблагоприятной по радионуклидам и тяжелым металлам йодэндемичной территории
Группы
Эутиреоидные:
(п = 10)
резистентные к: лейкозу
маститу (п = 10)
восприимчивые к: лейкозу (п = 10)
маститу (п = 10)
восприимчивые к: лейкозу с регуляцией
адаптивности (п = 10)
маститу с регуляцией адаптивности (п = 10)
Гипотиреоидные:резистентные к: лейкозу (п
= 10)
маститу (п = 10)
восприимчивые к: лейкозу (п = 10)
маститу (п = 10)
восприимчивые к: лейкозу с регуляцией
Активность фермента (нмоль nнитрофенола/мг белка×час)
седиментируе- неседиментимая
руемая
0,49 ± 0,006
0,32 ± 0,007
0,48 ± 0,007
0,45 ± 0,011
0,49 ± 0,010
0,33 ± 0,005
0,31 ± 0,011
0,31 ± 0,011
0,47 ± 0,011
0,31 ± 0,007
0,47 ± 0,008
0,31 ± 0,009
0,26 ± 0,016
0,48 ± 0,017
0,49 ± 0,010
0,20 ± 0,014
0,47 ± 0,009
0,42 ± 0,014
0,33 ± 0,010
0,56 ± 0,023
0,31 ± 0,015
0,29 ± 0,016
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
адаптивности (п = 10)
маститу с регуляцией адаптивности (п = 10)
0,48 ± 0,009
0,32 ± 0,008
Достоверного результата по изменению активности кислой фосфатазы
в зависимости от уровня резистентности коров к маститу обнаружено не было. Однако необходимо отметить высокую нестабильность показателей кислой фосфатазы в гомогенате миокарда гипотиреоидных коров подверженных
маститу. У них седиментируемая и неседиментируемая активность кислой
фосфатазы варьирует в широком диапазоне, как внутри, так и вне лизосомы
0,47 ± 0,022 и 0,31 ± 0,019 ед. соответственно.
Влияние Са2+ - антагониста на процессы в кардиомиоцитах имеет следующий механизм: в клетках миокарда ингибируется активность фосфодиэстеразы
циклических
нуклеотидов,
что
повышает
концентрацию
цАМФ.Циклические нуклеотиды принимают участие в проницаемости мембран лизосом, отсюда эффект АМФ зависит от ее концентрации. Влияние тиреоидных гормонов на метаболизм не ограничивается только их взаимодействием со специфическими рецепторами. Эффект Са2+ - антагониста на лизосомы опосредован через цАМФ. В мембранах лизосом имеют место фосфотрансферазные реакции, которые катализируются АМФ-зависимыми протеинкеназами. Фосфорилирование белков мембран лизосом изменяет их текучесть и проницаемость.
Биохимически доказано, что Са2+ - антагонист аккумулируется в миокарде в концентрациях достаточных для реализации необходимого эффекта
по изменению седиментированной активности - галактозидазы, происходит
блокация «медленных» кальциевых каналов. Увеличение седиментируемой
активности - галактозидазы в результате введения Са2+-антагониста может
свидетельствовать о нарушении стабильности мембраны лизосом гипотиреоидных особей. Влияние регуляции адаптивности на активность - галактозидазы усиливается при низком гормональном статусе щитовидной железы
(Тирзите Д.Я.,1990).
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
Как уже отмечалось, при нарушении работы щитовидной железы активация лизосом в кардиомиоцитах происходит с изменением проницаемости
мембран, что негативно влияет на активность гидролитических ферментов,
связанных с фосфорилированием белков мембран аппарата Гольджи. Увеличение уровня ионизированного кальция в кардиомиоцитах гипотиреоидных
животных включает механизм стабилизации мембран лизосом. В итоге введение кальциевых регуляторов оптимизирует развитие миокарда независимо
от гормонального статуса щитовидной железы.Динамика - галактозидазы в
миокарде телят в зависимости от регуляции Са2+- антагонистом компенсаторной адаптивности к условиям естественной йодной эндемии территорий
отражена в таблице 21.
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
Таблица 21 - Динамика - галактозидазы в миокарде телят с экологически неблагоприятной по радионуклидам и тяжелым металлам йодэндемичной территории в зависимости от регуляции Са2+- антагонистом компенсаторной адаптивности к условиям среды
Группы телят
1 сутки
гипотиреоидные
эутиреоидные (п = 10)
без регуляции адаптивности
с регуляцией адаптивности
(п = 10)
(п = 10)
активность - галактозидазы (нмоль n-нитрофенола/мг белка×час)
неседиментиру- седиментируемая неседименти- седиментиру- неседименти- седиментируемая
емая
руемая
емая
руемая
421,33±31,951
478,13±38,651
451,27±25,182 387,97±24,150 458,97±31,280
398,91±29,111
5 суток
456, 21±27,863
484,37±31,153*
465,67±29,884
389,00±19,764
460,98±27,771
411,67±23,330
1 мес.
461,94± 23,320
489,92±24,453**
476,12±32,332
391,88±20,191
461,98±18,920
422,83±26,196
2 мес.
466,39±27,394
496,78±30,133**
481,13±22,220
398,16±25,250
465,13±16,292
467,49±23,433
3 мес.
476,70±31,192
501,28±21,210**
498,78±23,140
400,87±23,456
460,12±13,412
478,78±22,751*
6 мес.
483,78±29,110
512,32±29,112*
501,43±26,155
407,66±28,933
476,71±25,162
509,28±24,110*
9 мес.
498,13±27,111
523,66±24,501**
538,87±20,984
411,30±22,672
490,43±21,771
519,61±21,435**
12 мес.
524,78±16,174
547,00± 28,234**
547,89±24,990
415,67±23,449
519,93±18,673 539,09±27,195**
18 мес.
528,63±19,156
579,13±15,845***
565,55±16,781
419,14±20,341
521,69±27,111
Возраст
557,43±25,817***
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
При сравнении динамики - галактозидазы в миокарде экспериментальных телят можно утверждать, что этот фермент является маркерным для
отражения компенсаторно-приспособительных процессов под действием Са2+
– антагониста. Так, у эутиреоидных особей от рождения до 18 месяцев
наблюдается увеличение количества фермента, как внутри лизосомы, так и в
цитоплазме кардиомиоцита. Причем, на протяжении этого периода онтогенеза седиментируемая активность - галактозидазы обычно преобладает над
неседиментируемой. При рождении разница составляет 11,9 %, к месячному
возрасту 5,8 %, в три месяца 4,9 %, в возрасте пол года 5,6 %, к 9-ти месяцам
4,9 %, к полуторагодовалому возрасту 8,7 % в пользу седиментируемой
фракции.
Однако при гипофункции щитовидной железы наблюдается диаметрально противоположная картина – неседиментируемая активность - галактозидазы преобладает над седиментирумой в течение всего периода исследований: при рождении на 14,0 %, к 1-му месяцу онтогенеза на 17,7 %, в полгода на 18,7 %, к 9-ти месяцам на 23,6 %, а в полуторагодовалом возрасте на
25,8 %. При этом разница между седиментируемой активностью - галактозидазы между 18-ти месячными эутиреоидными и гипотиреоидными особями составляет 159,99 ед. или 27,6 % в пользу животных с нормальной
функцией щитовидной железы.
Регуляцией Са2+- антагонистом компенсаторно-приспособительных
процессов в миокарде гипотиреоидных телят удалось максимально приблизить показатели - галактозидазы внутри и вне лизосом к таковым у телят с
нормальной функцией щитовидной железы. Так, к возрасту 1 месяц разница
между седиментируемой и неседиментируемой активностью - галактозидазы сократилась до 8,4 %, тогда как при рождении она составляла 13,0 %. К 3х месячному возрасту, разница минимальная 3,8 %. Причем, тенденция меняется, седиментируемой активности становится больше, чем неседиментируе-
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
мой. Далее активность - галактозидазы под действием Са2+-антагониста
приближается к показателям нормы.
Так, в 6 месяцев– для седиментируемой формы разница 0,5 %, для неседиментируемой – на 1,4 %. В течение дальнейшего роста и развития до полутора лет достоверной разницы между показателями активности - галактозидазы у эутиреоидных и гипотиреоидных особей, которым проводили регуляцию компенсаторно-приспособительных реакций Са2+- антагонистом, не
обнаружено. Таким образом, ещё раз можно утверждать, что введение Са2+антагониста позволяет регулировать развитие сердечной мышцы независимо
от уровня гормонов щитовидной железы.
При оптимизации концентрации ионов Са2+ в миокарде происходит активация кальпаинов и освобождение из лизосом катепсинов, среди которых
наиболее активен катепсин Д.Следует указать, что кальпаины сосредоточены следующим образом: в области Z-дисков – кальпаин II, в цитозоле клетки
- кальпаин I. Уникальным свойством этих ферментов является абсолютная
зависимость их протеолитической активности от ионов кальция. Воздействуя
на ключевые ферменты обмена, модифицируя рецепторные белки, кальпаины выступают как факторы перестройки метаболизма, лежащие в основе
трансформации и дифференцировки клеток, а также адаптационных изменений обмена. Гипотиреоз вызывает понижение седиментируемой активности
катепсина Д, что приводит к нарушениям в области актин-миозиновых
структур миокарда. Регуляция катепсинов Са2+- антагонистом адаптирует
работу сердечной мышцы посредством компенсаторно-приспособительных
механизмов независимо от уровня гормонов щитовидной железы.
При рождении у телят с нормальной функцией щитовидной железы активность катепсина Д в цитоплазме кардиомиоцитов значительно выше, чем
у животных с гипотиреозом. Разница составляет 56,9 %. К возрасту 6 месяцев
у гипотиреоидных интактных животных тенденция к нарушению активности
фермента в цитоплазме сохраняется и по сравнению с нормой ниже на 60,3
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
%. Тогда как в идентичной по возрасту группе гипотиреоидных телят, которым вводили Са2+- антагонист седиментируемая активность катепсина Д
уступает норме лишь на 4,0 %. При дальнейшем онтогенезе телят динамика
седиментируемой активности фермента у гипотиреоидных особей всё более
уменьшается. Так, к возрасту 9 месяцев активность ниже нормы на 52,8 %, к
полуторогодовалому возрасту на 69,1 %.
При этом в группе гипотиреоидных телят, которым регулировали Са2+антагонистом развитие кардиомиоцитов, седиментируемая активность катепсина Д была значительно ближе к показателям нормы. Так, в полгода активность цитоплазматической фракции фермента отличается от нормы всего
на 4,1 %, к 18-ти месяцам на 4,8 %. Таким образом, независимо от тиреоидного статуса без использования гормональных препаратов при введении Са2+регулирующего реагента возможно установить необходимую активность катепсина Д для нормализации развития кардиомиоцитов.
Учитывая тот факт, что в практике животноводства важно сохранить
поголовье телят, при разработке тестирования протеиназных систем, мы озадачились поиском наиболее приемлемых методик выявления динамики ферментов не в миокарде, а в крови. Оказалось, что вместе с катепсинами кардиомиоцитов, при регуляции Са2+- антагонистом адаптивных процессов при
гипотиреозе телят с экологически неблагоприятной по радионуклидам и тяжелым металлам йодэндемичной территории, аналогичные изменения активности ферментов наблюдается с кальпаинами I и II в плазме и эритроцитах
крови (таблица 22).
Механизм изменения активности кальпаина I в эритроцитах следующий: неактивный предшественник из эритроцитов превращается в активную
протеиназу в присутствии низких концентраций ионов Са2+. В процессе активации происходит связывание каталитической субъединицы прокальпаина с
мембраной эритроцитов и последующая аутокаталитическая реакция. Чем
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
ниже уровень трийодтиронина, тем ниже наблюдается концентрация ионов
Са2+.
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
Таблица 22 - Динамика катепсина Д в миокарде животных с экологически неблагоприятной по радионуклидам и тяжелым металлам йодэндемичной территории, в зависимости от регуляции Са2+- антагонистом компенсаторноприспособительных реакций
Группы
гипотиреоидные
Возраст
1
день
1
мес.
3
мес.
6
мес.
9
мес.
12
мес.
18
мес.
эутиреоидные (п = 10)
без регуляции адаптивности
с регуляцией адаптивности (п = 10)
неседиментируемая
23,35±1,982***
(п = 10)
активность катепсина Д (нмоль тирозина/мг белка×час)
седиментируенеседимен- седименти- неседиментируемая
тируемая
руемая
мая
49,44±1,977***
52,69±2,785 21,28±3,420 24,94±2,233***
24,12±1,460***
50,84±2,134***
52,73±2,435
20,92±2,664
24,83±1,783***
37,77±2,916***
24,28±1,394***
51,65±1,654***
52,79±3,671
20,15±3,591
24,73±2,012***
39,85±3,887***
25,57±1,713***
52,78±2,264***
50,35±2,332
20,91±3,111
24,38±1,662***
50,59±3,342***
26,11±1,596***
53,77±1,742***
51,48±2,003
19,17±2,614
25,33±1,732***
51,27±2,171***
26,87±1,393***
54,34±2,121***
51,77±1,987
18,31±2,343
25,78±1,390***
51,59±1,971***
27.27±2,131***
54,48±1,986***
52,00±2,294
16,83±3,776
26,92±1,697***
51,86±2,693***
седиментируемая
22,11±2,512
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
В таком случае срабатывает компенсаторно-приспособительный механизм, повышается количество фосфолипидов, в присутствии которых происходит нормализация образования активной формы фермента. Кальпаин I
эритроцитов в цитоплазме находится в неактивной форме, под действием
ионов Са2+ происходит встраивание профермента в мембрану, что вызывает
диссоциацию фермента на субъединицы и аутолитическую активацию его
каталитической активности.
Неактивная форма кальпаин II обнаруживается в плазме крови, увеличение количества этого фермента отражает недостаточность его активации в
актин-миозиновом комплексе миокарда. Отсюда понятен наш интерес к выявлению динамики изменений кальпаинов в плазме крови, эритроцитарной
фракции эутиреоидных телят и их гипотиреоидных сверстниц, которым Са2+антагонистом проводили воздействие на кальпаины.
Важно отметить, что в исследовании эритроцитарной фракции гипотиреоидных животных при введении Са2+-антагониста, высоко достоверно повышение активности кальпаина I (таблица 23). У гипотиреозных животных к
возрасту 1 месяц активность кальпаина I ниже нормы на 52,5 %. Введение
кальциевого регулятора позволяет сократить разрыв в активности фермента
до 15,1 %. При этом у экспериментальных гипотиреоидных особей, которым
вводили Са2+- антагонист с момента рождения, скачок активности фермента
за первый месяц жизни составляет 37,9 % в противоположность тому, что
указанный показатель в группе интактных гипотиреоидных сверстниц составляет всего лишь 3,4 %.
К возрасту 3 месяца тенденция к выравниванию ферментативного
кальпаинового статуса в эритроцитах гипотиреоидных телят с введением
Са2+-антагониста сохраняется. Разница между результатами с эутиреоидными
составляет всего 2,6 %, тогда как без регуляции активность кальпаина I ниже
нормы на 52,7 %. Введение регуляторов кальция позволяет увеличить активность фермента на 51,5 %. В шестимесячном возрасте, благодаря регуляции
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
адаптивности к низкому содержанию трийодтиронина, активность кальпаина
I практически приходит в норму. Далее, как и необходимо, для полноценной
работы ферментативной системы у эутиреоидных особей, наблюдается плавное снижение активности кальпаина I на фоне не изменяющейся активности
кальпастатина (блокатора кальпаинов) в пределах 11,68…12,17 ед., как и в
норме 11,93…12,34 ед.
Следует указать, что в отсутствии регулятора Са2+ при гипотиреозе в
процессе онтогенеза активность кальпаина I значительно ниже нормы, при
максимуме у новорожденных 11,17 ед. и далее с постепенным понижением к
18-ти месячному возрасту до 8,36 ед., что уступает норме на 45,0 % и показателям при регуляции Са2+-антагонистом на 43,0 %. На фоне показателей
эутиреоидных и гипотиреоидных телят,с экологически неблагоприятной по
радионуклидам и тяжелым металлам йодэндемичной территории, с регуляцией Са2+-зависимых систем, у последних до возраста 18 месяцев явно повышенное содержание кальпастатинов – блокаторов кальпаинов на 4,0…7,0
ед., что нарушает баланс гомеостаза растущих животных.
Динамика активности эритроцитарного кальпаина I указывает на стабилизацию проницаемости мембран лизосом, на нормализацию Са 2+- зависимых систем в кардиомиоцитах, стабилизацию клеточного дыхания и окислительно-восстановительных процессов.Одним из наиболее выразительных
эффектов регуляции компенсаторно-приспособительных процессов к гипотиреозу является значительное возрастание активности кальпаина II в плазме
по сравнению с животными, которым не проводили введение регулятора
Са2+. Если при рождении у гипотиреоидных телят уровень активности кальпаина II в плазме в среднем 0,357…0,364 ед., то при проведении индукции
антагонистом Са2+ к 3 -м месяцам показатель возрастает до 0,322…0,498 ед.
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
Таблица 23 - Динамика активности кальпаина I и кальпастатинав эритроцитарной фракции телят с экологически неблагоприятной по радионуклидам и тяжелым металлам йодэндемичной территории, в зависимости от регуляции Са2+антагонистомкомпенсаторноой адаптивности
Группы телят
гипотиреоидные
Возраст
эутиреоидные (п=10)
без регуляцииадаптивно-
с регуляцией адаптивности
сти (п=10)
(п=10)
активность ферментов (мкмоль тирозина×мг белка-1×ч-1)
кальпаин I
кальпастатин
кальпаин I кальпастатин
кальпаин I
кальпастатин
новорожденные
19,48
14,16
11,17
13,72
11,13
13,59
5 суток
21,13
16,02
10,79
14,17
-
-
1 мес.
20, 87
15,11
10,03
14,22
17,94
14,31
2 мес.
20,31
14,12
9,62
14,39
18,13
12,45
3 мес.
19,45
13,06
9,19
14,45
18,94
12,99
6 мес.
17,17
11,93
9,00
14,67
17,31
11,68
9 мес.
16,48
12,81
8,70
14,73
15,11
12,34
12 мес.
15,94
12,63
8,47
14, 81
14,95
12,20
18 мес.
15,32
12,44
8,36
14,89
14,66
12,17
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
Это фактически можно приравнять к норме, разница с которой составляет 0,044 ед. У интактных гипотиреоидных телят аналогичных по возрасту
разница активности протеиназы в плазме составляет 0,222 ед. в пользу животных без отклонений работы щитовидной железы.
Динамика активности кальпаина II в плазме телят в возрасте от 9 до 18
месяцев
указывает
на
необходимость
регуляции
компенсаторно-
приспособительных механизмов миокарда Са2+- антагонистом в условиях недостаточного тиреоидного статуса. Так, применение кальциевых регуляторов
увеличивает активность протеиназы на 0,168 и 0,191 ед., что ниже нормы на
0,015 и 0,013 ед. соответственно. Тогда как при гипотиреозе в отсутствии индукции адаптивности активность кальпаина II в плазме в указанных возрастных группах (6 и 9 месяцев) ниже на 0,183 и 0,204 ед. соответственно (таблица 24). Возрастание активности протеиназы в плазме крови указывает на регуляцию сокращений актин - миозиновых комплексов, уровень стабильности
Z – дисков миокарда. Динамика кальпастатинов ингибирующих кальпаины в
плазме незначительная.
Таким образом, доля катепсина Д(активность этого фермента, выраженная в процентах от общей гемоглобинолитической активности крови) в
плазме существенно не меняется и составляет 47,7 %. Эритроциты в условиях активации компенсаторных адаптивных ответов характеризуются увеличением (в 1,5…1,9 раз) активности кальпаина I, тем самым приводя ферментативную систему метаболических процессов осуществляющих клеточное
дыхание к норме.
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
Таблица 24 - Динамика активности кальпаина II и кальпастатина в плазме крови телят с экологически неблагоприятной по радионуклидам и тяжелым металлам йодэндемичной территории, в зависимости от регуляции Са2+- антагонистом компенсаторной адаптивности
Группы телят
гипотиреоидные
Возраст
эутиреоидные
без регуляции
с регуляцией
Са2+ - антагонистом
активность кальпаина II и кальпастатина (мкмоль тирозина×мг белка-1×ч-1)
кальпаин II
кальпастатин
кальпаин II
кальпастатин
кальпаин II
кальпастатин
новорожденные
0,75±0,009
0,11±0,012
0,36±0,026
0,12±0,012
0,36±0,025
0,11±0,014
3 мес.
0,55±0,024
0,09±0,013
0,32±0,014
0,12±0,011
0,50±0,035
0,10±0,013
6 мес.
0,53±0,014
0,11±0,012
0,32±0,032
0,13±0,013
0,48±0,028
0,09±0,013
9 мес.
0,49±0,013
0,10±0,013
0,31±0,030
0,13±0,012
0,36±0,025
0,11±0,014
12 мес.
0,50±0,014
0,09±0,012
0,31±0,027
0,13±0,12
0,49±0,025
0,09±0,012
18 мес.
0,51±0,015
0,10±0,011
0,31±0,021
0,12±0,10
0,50±0,030
0,09±0,010
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
Заключение
Использование Са2+ - антагонистав процессе роста и развития телят при
компенсаторной адаптации к неблагоприятным условиям среды обитания,
положительно влияет на резистентность животных к: маститу, так как увеличивает энергетический баланс сердца, а вместе с тем нормализует кровообращение в вымени; лейкозу, так как нормализует проницаемость мембран
лизосом, что способствует активации ферментативной системы клеток, тем
самым увеличивая защитную функцию от вируса ВЛКРС.
Использование Са2+ – антагониста в качестве стимулятора формирования цитоморфологических структур миокарда телят, содержащихся на экологически неблагоприятных территориях, положительно влияет на развитие
молочной железы. По диаметру продольных альвеол, высоте альвеолярных
клеток, количеству клеток эпителия на 10 мкм, продольному диаметру жировых клеток, толщине магистральных соединительных тканевых тяжей коровы, которым в период раннего онтогенеза не проводили адаптивную стимуляцию, уступают своим интактным аналогам 16,16 %, 19,69 %, 14,63 %, 16,88
%, 36,82 % соответственно.
Регуляция Са2+- антагонистом компенсаторно-приспособительных процессов в миокарде телят с экологически неблагоприятной по радионуклидам
и тяжелым металлам йодэндемичной территории, максимально приближает
показатели - галактозидазы внутри и вне лизосом к таковым у телят с нормальной функцией щитовидной железы. Так, к возрасту 1 месяц разница
между седиментируемой и неседиментируемой активностью - галактозидазы сократилась до 8,4 % к 3-х месячному возрасту до 3,8 %, в 6 месяцев для
седиментируемой формы разница на 0,5 %, для неседиментируемой на 1,4 %.
В течение онтогенеза до полутора лет достоверной разницы между активностью - галактозидазы у эутиреоидных и гипотиреоидных особей, которым
проводили адаптивную регуляцию компенсаторно-приспособительных реакций, не обнаружено.
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
В онтогенезе телят, с экологически неблагоприятной по радионуклидам и тяжелым металлам йодэндемичной территории, динамика седиментируемой активности катепсина Д снижается. Так, к возрасту 9 месяцев активность ниже нормы на 52,8 %, к полуторогодовалому возрасту на 69,1 %. При
адаптивной регуляции развития кардиомиоцитов Са2+- антагонистом активность катепсина Д в возрасте полгода отличается от нормы на 4,1 %, к 18-ти
месяцам на 4,8 %. Таким образом, независимо от тиреоидного статуса без использования гормональных препаратов при введении Са2+-регулирующего
реагента возможно установить необходимую активность катепсина Д для
нормализации развития кардиомиоцитов телят.
В отсутствии Са2+-антагониста при гипотиреозе адаптивность телят к
условиям среды низкая, что отражается в показателях активности эритроцитарного кальпаина I: при максимуме у новорожденных 11,17 ед. и далее с
постепенным понижением к 18-ти месячному возрасту до 8,36 ед., что уступает показателям в норме на 45,0 %. У телят, с экологически неблагоприятной по радионуклидам и тяжелым металлам йодэндемичной территории, которым вводили Са2+- антагонист с момента рождения, скачок активности
фермента за первый месяц жизни составляет 37,9 %. Положительная динамика активности эритроцитарного кальпаина I указывает на адапивную реакцию, выражающуюся в стабилизации клеточного дыхания и окислительновосстановительных процессов.
Применение Са2+-антагониста увеличивает активность кальпаина II в
плазме крови телят, с экологически неблагоприятной по радионуклидам и
тяжелым металлам йодэндемичной территории, к 18 – ти месяцам на 38,2 %.
Возрастание активности протеиназы в плазме крови в процессе адаптивной
реакции на наблагополучные условия среды, нормализует уровень стабильности Z – дисков миокарда, сокращение актин-миозиновых комплексов.
На фоне введения Са2+– антагониста эутиреоидным особям, с экологически неблагоприятной по радионуклидам и тяжелым металлам йодэндемичной территории, общее количество глобулинов возрастает в среднем на
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
6,8 %. Достоверно изменяется количество - глобулинов на 7,8 %. На фоне
увеличения общего белка в крови гипотиреоидных телят с той же территории, при регуляции их адаптивности к недостатку йода, дезаминирующий
фермент АSТ возрастает на 19,2 %, переаминирующий АLТ на 2,27 %.
Концентрация общих липидов в крови телят с экологически неблагоприятной по радионуклидам и тяжелым металлам йодэндемичной территории, при введении Са2+ – антагониста нормализуется до 4,65 ммоль/л, холестерина до 2,73 ммоль/л, сокращается разница по триглицеридам на 58,8 %.
Среднее загрязнение (20,0…32,3 Бк/кг) почвы
137
Cs оказывает большее
влияние на показатели Шик-реакции по крупным гранулам и блокам у гипотиреоидных животных с экологически неблагоприятной по радионуклидам и
тяжелым металлам йодэндемичной территории, чем сильная степень загрязнения почвы (29,6…71,9 Бк/кг). При лейкозе количество крупных гранул и
блоков резко возрастает, разница со здоровыми животными составляет
3,7…4,4 %. Причем, по сравнению с коровами, подверженными лейкозу, содержащимися на чистых по
137
Cs территориях, разница так же ощутима –
3,6…4,0 %.
При лейкозе коров с экологически неблагоприятной по радионуклидам
и тяжелым металлам йодэндемичной территории, маркерных Шик-реакцией
клеток обнаружено в чистой зоне 10 – 19 штук; в средне загрязненной части
их количество резко возрастает на 51…60 %; в зоне, где экотоксикация почв
137
Cs наиболее высокая, рост маркерных Шик – реакцией клеток составляет
45,0…46,0 %, что делает показатель «мелкие и средние гранулы лимфоцитов» маркерным по выявлению тенденции к понижению резистентности
крупного рогатого скота к лейкозу.
В экологически чистых районах у гипотиреоидных коров на 100 лимфоцитов маркерными являются около 15 штук, тогда как повышение содержания 137Cs до 20,0…32,3 Бк/кг даёт увеличение пула Шик-реакционных показателей крови до 18,0…44,0 %, при высоком загрязнении территорий
137
Cs
этот процент составляет 31,0…41,0 %, то есть несколько снижается. Очеред-
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
ной раз прослеживается тенденция, что для гипотиреоидных животных
наиболее опасным является пребывание на территориях с загрязнением радионуклидом 137Cs в пределах средних значений.
На благополучной и загрязненной радионуклидами территориях динамика показателей цитохимических лимфоцитограмм среди сельскохозяйственных и диких животных одинаковая. У полевок при загрязнении территории
137
Cs в пределах фонового уровня (15,2…18,0 Бк/кг) количество круп-
ных гранул и блоков, выявляемых приШик – реакции составляет 0,1…0,7 %,
что сопоставимо с таковыми показателями у крупного рогатого скота. При
этом увеличение экотоксикации радионуклидами на 4,8…14,3 Бк/кг изменяет
Шик-реакцию крови грызуна в среднем на 0,9 %, коров на 0,4 %. Та же тенденция сохраняется и при действии большей радиации (29,6...71,9 Бк/кг). То
есть,
радиационный фон 14,4…53,9 Бк/кг приводит к росту показателей
Шик-реакции в лимфоцитах полевок на 1,3 %, что сопоставимо с результатами коров, имеющих низкую резистентность к лейкозу.
В экологически чистой зоне, где после аварии на Чернобыльской АЭС
не отмечено выпадение осадков, Шик-реакция крови у крыс пасюк по показателю - крупные гранулы и блоки составляет 0,1…0,3 %, при среднем загрязнении территорий динамика незначительная и составляет 0,2…0,6 %, при
загрязнении
137
Csпочв 29,6…71,9 Бк/кг рост пула лимфоцитов по Шик-
реакции с крупными гранулами и блоками составляет 0,4…0,6 % от нормы
Таким образом, крысы пасюк не могут считаться полноценными биоиндикаторами влияния загрязнения радионуклидами окружающей среды, в
сопоставлении результатов их мутационной изменчивости с аналогичной у
крупного рогатого скота достоверности нет.
Динамика мелких и средних гранул, выявляемых Шик-реакцией в пуле
лимфоцитов полёвок подтверждает выводы о том, что этот показатель является маркерным при проведении экологического мониторинга территорий. У
этих грызунов в благополучных районах области в пуле лимфоцитов гранулы
обнаруживаются в 11,0…14,0 % клетках, тогда как при увеличении экоток-
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
сикации среды их обитания
137
Cs при среднем загрязнении количество мар-
керных клеток 14 – 18 штук, при сильном - их количество возрастает до 26 –
33 штук на 100 исследуемых клеток. При сопоставлении лимфоцитограмм
крыс, полёвок и коров прослеживается чёткая тенденция к одинаковой динамике изменения гранул в пуле клеток крови полёвок и коров с низкой резистентностью к лейкозу.
Для коров полёвки являются оптимальным биоиндикатором, отражающим идентичную друг другу тенденцию по критериям: хромосомные абберацияи типа «ядерные мосты», индекс ядрышковых организаторов (ЯОР). Обнаруживается сопоставимость показателей «ядерные мосты» в группах здоровых животных (у коров – 1,03 ед., у полёвок – 0,93 ед.), а так же между коровами, больными лейкозом (13,63 ед.) и полёвками, инфицированными хантавирусами (13,27 ед.), индекс ЯОР 2,08 и 2,09 и 4,24 и 4,21 соответственно,
что необходимо использовать при биотестировании в процессе профилактических работ на экологически неблагополучных территориях.
В экологически благополучной по 137Cs зоне количество лимфоцитов с
микроядрами у коров и у полёвок идентичное; в среднем в норме -
1,10
…3,00 ед. на 500 лимфоцитов; общее число микроядер 1,70…2,90 ед. в т.ч.
микроядер размером от 0,5… 1,0 мкм - 13,72…13,80 %, от 1,1…3,0 мкм 70,11…70,59 %, от 3,1…5,0 мкм - 15,69…16,09 % . В условиях средней загрязненности среды
137
Cs, количество лимфоцитов с микроядрами, незави-
симо от вида животных, составляет 13,60...14,93 ед.; общее число микроядер
в лимфоцитах 54,7 …57,0 ед., в т.ч. микроядер размеромот 0, 5…1,0 мкм 32,91…33,98 %, от 1,1…3,0 мкм - 40,29 …41,62 %, от 3,1…5,0 мкм 25,47…25,73 %. На сильно загрязненных
137
Cs территориях,
количество
лимфоцитов с микроядрами 25,9…27,47 ед.; общее число микроядер в них
131,03 … 134,13
75,91…78,01
ед., в т.ч. микроядер размером от 0,5…1,0 мкм
%, от 1,1…3,0 мкм
- 11,90…12,15
%, от 3,1…5,0 мкм -
9,84…12,19 %. Данные необходимо использовать при проведении биоиндикаторного тестриования.
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
В группе здоровых коров и полёвок на 500 лимфоцитов встречается до
0,97 лимфоцитов с хвостатыми ядрами, введение Са2+ -антагониста приводит
в норму процессы митоза, у гипотиреоидных коров снижается количество
хвостатых ядер с 5,30 ед. до 1,07 ед; при лейкозе у коров в среднем 12,27
хвостатых ядер, при инфицированности хантавирусами у полёвок идентичные показатели – 12,23 ед. на 500 лимфоцитов. Таким образом, «хвостатые
ядра» являются основательным критерием при тестировании животных на
предрасположенность к заболеваниям на экологически неблагополучных
территорях. Критерий необходимо использовать в методике биотестирования.
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
Список основной литературы
1. Абрамов, П.Н. Распространение, диагностика и профилактика эндемического зоба крупного рогатого скота в условиях Московской области/П.Н.
Абрамов: диссертация ... кандидата ветеринарных наук : 16.00.01 Москва, 2006
120 c. : 61 07-16/9.
2. Адамова, Я.Г. Патоморфологический анализ щитовидной железы у
населения некоторых техногенно загрязненных городов /Я.Г. Адамова,Саратов,2003.-С.23-27.
3. Айдинов, Г. В. Методико-экологический атлас Ростовской области
/Г.В. Айдинов, A.A. Афонин. Ростов-на-Дону,-1999.-85с.
4. Алешин, Б.В. Эндокринная система и гомеостаз/Б.В. Алешин // Гомеостаз/Под ред. П.Д. Горизонтова.-М.: Медицина, 1981.- С.74-77.
5. Ананьева, С.А. География Рязанского района Рязанской области:
Учебно-методическое пособие/С.А. Ананьева, Г.М. Бабушкин, В.В. Бабаев и др.Рязань: Изд-во РГУ, 2008.-92с.
6. Ахментзянова, А.Р. Гематологические и биохимические показатели
телят при эндемическом зобе /А.Р. Ахментзянова, В.В. Мингазова , A.B. Елдашев, Г. Я. Стриха, Р.З. Курбанов. Казань. 1996.-С.81-89.
7. Бабкина, Т.Н. Гипотиреоз крупного рогатого скота в Ростовской области/Т.Н. Бабкина, С.Н. Ищенко- IX, 47 Ветеринария.., 2009.-С125 – 131.
8. Бабкина, Т.Н. Лечебно-профилактические мероприятия при эндемическом зобе крупного рогатого скота / Т.Н. Бабкина, Краинц Е.А.//Ветеринария.2008.-№11 .-С.38-41.
9. Базарова, Д.Ц. Морфология щитовидной железы крупного рогатого
скота при йодной недостаточности; автореферат дис. Кандидата биологических
наук /Д.Ц. Базарова.-Улан-Удэ.2007.- 21 с.
10. Байматов, В.Н. Механизмы действия экотоксикантов на животных /
В.Н. Байматов, Е.С. Волкова, А.Н. Мамцев, В.Н. Козлов, И.А. Бондарева // Современные проблемы ветеринарной медицины и животноводства: Сб. науч. тр. –
Уфа, 2005. – С. 122-124.
11. Балаболкин, М.И. Тиреотропный гормон / М.И. Балаболкин.М.:Сов.энциклопедия, 1985.Т25. - С.84.
12. Барков, Л.В. Состояние эритроцитарного и лейкоцитарного ростка
системы крови в условиях химического загрязнения воздуха/ Л.В. Барков, В.Г.
Казанцева, Г.И. Тимощук, Г.Н. Цирик, Л.Н. Михеева // Гигиена и санитария. 1982. -№ 8.-С.10-12.
13. Барковский, Е.В. Введение в химию биогенных элементов и химический анализ/ Е.В. Барковский. - Минск, «Высшая школа», 1997. – 213с.
14. Басовский, Н.З. Популяционная генетика в селекции молочного скота
/ Н.З. Басовский; М.: Колос, 1983. – 256с.
15. Бегучев, А.П. Скотоводство / А.П. Бегучев, Т.И. Безенко, Л.Г. Боярский и др.; Под ред. Эрнста Л. К. и др.; М.: Агропромиздат, 1992. – 543 с.
16. Бедрик, А.И. Медико-экологический атлас Ростовской области/А.И.
Бедрик.-Ростов-на-Дону 1999.- 90с.
17. Богдан, В.В. Оценка состояния прибрежных экосистем Белого моря
по эколого-биологическим и биохимическим показателям уамфипод/ В.В. Богдан, Г.А. Шкляревич// Ученые записки Петрозаводского государственного университета, № 1,2008, С.61- 74.
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
18. Боголюбский, С.Н. О задачах управления онтогенезом сельскохозяйственных животных / С.Н. Боголюбский Закономерности индивидуального развития сельскохозяйственных животных; М.: Наука, 1964. - С. 5 - 12.
19. Бомаш, Н. Ю. Морфологическая диагностика заболеваний щитовидной железы /Н.Ю. Бомаш. М.: Медицина, 1981.- 176с.
20. Бондаренко, А. Геморрагическая лихорадка с почечным синдромом/А. Бондаренко // Медицинская газета №46 – 23 июня 2006.
21. Бондарь, В.А. Диагностика, профилактика гипотериоз нарушение обмена веществ у молочных коров в зоне йодной и другой микроэлементной недостаточности /В.А. Бондарь: Автореферат. Киев, 1988. — 23с.
22. Браунштейн, А.Е. Процессы и ферменты клеточного метаболизма/А.Е. Браунштейн. –М.:Наука, 1987. -552с.
23. Бурдаков, В.А. Хроническая лучевая болезнь жвачных животных и
кур. Мат. Всерос. науч. конф. «Научные основы ведения агропромышленного
производства в уловиях крупных радиационных аварий»./В.А. Бурдаков.- Обнинск, 1998.-136с.
24. Бурназян, А.И. Итоги изучения и опыт ликвидации последствий аварийного загрязнения территории продуктами деления урана /А.И. Бурназян; М.:
Медицина, 1974. – С. 129-180.
25. Бурцева JI. В., Лапченко Л. А., Кононов Э. Я. и др. Фоновое содержание свинца, ртути, мышьяка и кадмия в природных средах // Мониторинг фонового загрязнения природных сред. Л., 1991. С. 23-55.
26. Валентюкевич, О.И. Исследование эффектов однократного воздействия внешнего ионизирующего излучения на активность перекисного окисления
липидов и антиоксидантный статус в печени и мозге крыс с экспериментальным
гипотиреозом [Индуцирование гипотиреоза введением в желудок мерказолила
ежедневно в течение 2 недель./ Валентюкевич О.И.; Надольник Л.И. Эпизоотология, иммунобиология, фармакология и санитария, 2007; N 3. - С. 18-23.
27. Веретенникова, В. М. Зависимость патоморфологии эндемического
зоба сельскохозяйственных животных от геохимической обстановки //Биогенная
миграция химических элементов в биосфере /В.М. Веретенникова. М.: Наука,
1972.- 201с.
28. Верещагина, Г.В. Взаимодействие трийодтиронина с ядернорецепторнным комплексом клетки — ключевое звено физиологического контроля жизнедеятельности организма / Г.В.Верещагина, A.A. Трапкова,
А.П.Кашулина //Успехи совр. Биологии .-1991.-Т.111,-С. 5972.
29. Вернадский, В.И. Проблемы биогеохимии // Тр. биогеохим. лаб./ В.И.
Вернадский М., 1980. Т. 16. С. 9-226.
30. Воронец, З.Д. Транспорт Са2+ сарколеммой миокарда и его регуляция цАМФ- и Са2+ -кальмодулинзависимым фосфорилириэанием / З.Д.
Воронец, М.Д. Курский // Успехи современной биологии. — 1985. -Т. 99,N3.
-С .358-370.
31. Галкина, Н.В. Экспериментальные природоохранные территории и
прогноз динамики их биологических компонентов в системе регионального мониторинга (на примере экополигона «Балаково» в Саратовской области)./Н.В.
Галкина Автореферат. Саратов, 2007.
32. Гашев, С.Н. Методика комплексной оценки состояния сообществ и
популяций доминирующих видов или видов-индикаторов мелких млекопитающих, амфибий и рыб/ С.Н. Гашев, Н.А. Сазонова, А.Г. Селюков, О.А. Хританько,
С.И. Шаповалов Тюмень: ТюмГУ, 2005. – 94 с.
33. Георгевский, В.И. Минеральное питание животных / В.И. Георгевский, В.Н. Анненков, В.Т.Самохин .-М.: Колос , 1990,-С. 215-391.
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
34. Герасименко, В.Г. Биохимия продуктивности и резистентности животных/ В.Г. Герасименко.-К.:Вища шк. Головное изд-во, 1987.-227с.
35. Герасимов, Г.А. Иоддефицитные заболевания в России. Простые решения сложной проблемы / Г.А. Герасимов, В.В. Фадеев, Н.Ю. Свириденко.-М.:
Адаманть, 2002.-168 с.
36. Глазко, В.И. Популяционно-генетические последствия Чернобыля.
Новый фактор эволюции/В.И. Глазко, Т.Т. Глазко– С.-х.биол., 2006.-№4.-С.20-33.
37. Глазко, Т.Т. Цитогенетические характеристики и их изменчивость у
мышей различных линий/Т.Т. Глазко, О.А. Ковалева, О.Е. Придатко.Докл.НАНУ,1999,№10.-С.191-196.
38. Голиков, А.Н. Адаптация сельскохозяйственных животных/А.Н. Голиков. – М.:Агропромиздат, 1985. -215с.
39. Давыдов, В.У. Профилактика тиреоидной недостаточности и лечение
коров /В.У. Давыдов//Ветеринария.-1983.-№8.- С.57-59.
40. Дегай, В.Ф. Эндокринный контроль в ранний период постнатального
развития плода /В.Ф. Дегай, П.А.Задорожный //Проблемы ветеринарии Приморского края / Приморская акад.-Уссурийск, 1996. С. 35-38.
41. Дедов, И.И. Алгоритмы диагностики и лечения болезней эндокринной системы./ - Под ред. И.И. Дедова// - Москва, 1995. - 256 с.
42. Дембо, А. Г. Определение систолического давления в легочной артерии/ А. Г.Дембо, Е. Н.Суров //: Метод, указания.— Л., 1986.— 39 с.
43. Денисенко, В.Н. Эндемический зоб крупного рогатого скота /
В.Н.Денисенко, П.Н.Абрамов // Материалы Международной учебнометодической и научно-практической конференции, посвященной 85-летию
МГАВМиБ им. К.И. Скрябина. М., 2004. - 4.2 - С. 265-267.
44. Дингл, Д. Лизосомы. Методы исследования / Под ред.Дж. Дингла//
-М.: Мир,1980. -342с.
45. Дмитроченко, А.П. Йод в кормлении сельскохозяйственных животных / А.П. Дмитроченко//.- М.: Агропромиздат, 1972. С.59-73.
46. Докукин, И.С. Наследственная предрасположенность различных пород крупного рогатого скота к лейкозам / И.С. Докукин; Науч. тр. Казанского вет.
ин-та. – Казань, 1980. – С. 6-8.
47. Долгова, М.А., Шварцман, Е.И. Об адаптивных особенностях реакции
лимфатических узлов под влиянием токсических веществ/ М.А. Долгова, Е.И.
Шварцман// Система адаптации человека и внешняя среда. -Л. -1975.-С.65-67.
48. Дрежевецкая, И.А. Основы физиологии обмена веществ и эндокринной системы /И.А. Дрежевецкая, 2-е изд. перераб. и доп.//-М.: Высшая школа,
1994.- 272 с.
49. Дутова, О.Г. Нарушение белково-минерального обмена при гипофункции щитовидной железы крупного рогатого скота /О.Г. Дутова Баронаул,
2000. 21 с.
50. Завадский, К.М. Вид и видообразование/К.М.Завадский//Л.,1968.-404
с.
51. Захаров, В.А. Совершенствование черно-пестрого скота с использованием отечественного генофонда / Захаров В.А.; Рязань: Русское слово, 2000.
52. Зейферт, Д.В. Научные основы биоэкологического мониторинга антропогенных воздействий при разных видах хозяйственной деятельности на примере территории южной промышленной зоны Башкортостана/ Д.В. Зейферт// Автореферат…доктора наук, Москва.-2011. – 43 с.
53. Зимин, В. Б. Экологические последствия применения гербицидов в
лесном хозяйстве./ Зимин В. Б., Кузьмин И.А. JL, 1980. 175 с.
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
54. Ивантер Э.В., Медведев Н.В., Паничев Н.А. Содержание тяжелых металлов в организме ладожской кольчатой нерпы //Экология,1998.№ 2.-С.116-120.
55. Ивантер, Э.В. Географическая изменчивость динамики численности
рыжей полёвки в пределах ареала/ Э.В. Ивантер //Механизмы регуляции численности леммингов и полёвок на Крайнем Севере. Владивосток.1980.С. 50-60.
56. Ивантер, Э.В. К популяционной организации политипического вида
(на примере рыжей полёвки Clethrionomys Glareolus Shreb) / Э.В. Ивантер
//Ученые записки Петрозаводского государственного университета, № 1,2008,
С.39-61.
57. Ильина, О.П. Выявление дефицита йода по характеру липидного и
энергетического метаболизма / О.П. Ильина, Ю.А.Тарицев, Б.Я. Власов// УланУдэ,1998. С.117-119.
58. Исамов, Н.Н. Состояние здоровья сельскохозяйственных животных
на территориях, подвергшихся радиоактивному загрязнению в результате аварии
на Чернобыльской АС/ Н.Н.Исамов, Г.В. Козьмин, Б.П. Кругликов и др..- Радиация и риск, 1997.-№9.-С. 71-75.
59. Истомин, А.В. Динамика популяций и сообществ мелких млекопитающих как показатель состояния лесных экосистем (на примере КаспийскоБалтийского водораздела)/ А.В. Истомин// Автореферат. Москва, 2009.-21с.
60. Ищенко, С.Н. Совершенствование методов диагностики, лечения и
профилактики эндемического зоба у телят/С.Н. Ищенко// Афтореф. диссер. на
соискание ученой степени кандидата наук 2009.- 22с.
61. Калашникова, Л.А. ДНК-технологии сельскохозяйственных животных / Л.А. Калашникова, И.М. Дунин, В.И. Глазко и др.;М.:ВНИИплем,1999.–
С.148.
62. Каллахан, Д.В. Лизосомы и лизосомные болезни накопления / Под
ред. Дж.В.Каллахана, Дж.А.Лоудена//.- М.: Медицина,1984.-448с.
63. Кандрор, В.И. Молекулярно-генетические аспекты тиреоидной патологии / В.И. Кандрор//.-2001.-Т47, №5.- С.3-10.
64. Катаев Г. Д. Роль мелких млекопитающих в биоиндикации природной среды Кольского Севера // Экотоксикология и охрана природы. М., Наука.
1988. С. 195-199.
65. Кашин, В.К. Эффективность применения йода в животноводстве /
В.К. Кашин, В.К. Касымова. Самарканд, 1990 .- С. 367-368.
66. Кедров, А. А. Болезни сердечной мышцы: их этиология, номенклатура,
классификация (по поводу классификации некоронарогенных повреждений миокарда,
опубликованной в № 5 журнала «Кардиология» за 1978/ А.А. Кедров // Кардиология.—1980.—№ 1.—С. 94—98.
67. Клочков, Н.Д. К вопросу о значении лизосом в катаболических процессах, развивающихся в скелетных мышцах при денервации и Е-авитаминозе/
Н.Д. Клочков // Структура и функции лизосом: Тез.111 Всесоюз. симп. с
международным участием.- Тбилиси, 1986.-С.149.
68. Ковалевский, В.В. Роль йода и кобальта в деятельности щитовидной
железы в условиях биохимической провинции с недостатком йода и кобальта
/В.В. Ковалевский, Р.И.Блохина //Проблемы эндокринологии.-1963 .-С.42-48.
69. Ковальчикова, М. Адаптация и стресс при содержании и разведении
сельскохозяйственных животных/ М. Ковальчикова, К. Ковальчик// Москва:
«Колос», 1978. – 271 с.
70. Козлов, В.Н. Пат. RU 2290859 С1 А 61 В 5/01. Способ диагностики
экспериментального гипотиреоза у лабораторных животных / В.Н. Козлов, А.Н.
Мамцев, И.А. Бондарева// Заявл. 19.05.2005; Опубл. 10.01.2007 // Бюл. – 2007.
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
71. Козлов, В.Н. К вопросу о механизмах развития общего адаптационного синдрома при экспериментальном моделировании гипотиреоза у белых
крыс / В.Н. Козлов // Наука, техника и высшее образование: проблемы и тенденции развития: Сб. науч. тр. – Ростов-на-Дону, 2006. – С. 215-216.
72. Кокоев, Л.П. Рост телок разной кровности по голштинской породе /
Л.П. Кокоев, Г.Н. Чохатариди, Л.П. Икоева; Тез.докл. науч.–произв. межвузовской конференции Горского ГАУ по итогам НИР 1996 г. - Владикавказ, 1997. - С.
90.
73.
Коровушкин, А.А. Совершенствование скота черно-песирой породы по генетической устойчивости к заболеваниям/А.А. Коровушкин. – изд. «Узорочье», 2004. –
191с.
74.
Коровушкин, А.А.. Устойчивость коров к маститу и лейкозу/ А.А. Коровушкин, С.А. Нефедова, А.Ф. Яковлев. Зоотехния. - № 7, 2004. – С.25-26.
75.
Коровушкин, А.А. Регуляция Са2+-антагонистом активности ферментов в
миокарде гипотиреоидных телят с различной резистентностью к маститу и лейкозу/ А.А.
Коровушкин, С.А. Нефедова, Е.Я. Греф // Аграрный вестник Урала № 1 (80), 2011, С.106107.
76.
Коровушкин, А.А. Стрессоустойчивость крупного рогатого скота черно –
пестрой породы в зависимости от степени голштинизации / А.А. Коровушкин, С.А. Нефедова // Материалы Международной учебно – методической и научно – практической конференции, посвященной 85 – летию академии. – Ч. 2. – М.: ФГБОУ ВПО МГАВМиБ им.
К. И. Скрябина, 2004. – С.24 – 26.
77.
Коровушкин, А.А. Сравнительная оценка цитоморфологических изменений
лимфоцитов у крупного рогатого скота и грызунов-биоиндикаторов на территориях, за137
грязненных
Cs/ В.В. Калашников, А.А. Коровушкин, С.А. Нефедова
//Сельскохозяйственная биология, 2011, № 4 . – С.82-89.
78.
Коровушкин, А.А.. Влияние быков-производителей на устойчивость дочерей к болезням/ А.А. Коровушкин, С.А. Нефедова, А.Ф. Яковлев // Сельскохозяйственная
биология. - № 6, 2003. – С. 81-85.
79. Короленко, Т.А. Катаболизм белка в лизосомах/ Т.А. Короленко//- Новосибирск. Наука. Сиб. отд-ние,1990.-189с.
80. Коротков, В.Б. Эпидемиологический надзор за Геморрагической лихорадкой с почечным синдромом в Саратовской области/ В.Б. Коротков//Автореферат. Саратов,1994.-312с.
81. Корякина, Л. Влияние экологии на заболеваемость скота лейкозом /
Л. Корякина; Молочное и мясное скотоводство. – 1997. - № 2. – С. 36-37.
82. Костенко, С.А. Видоспецифическая дисстабилизация кариотипа в
условиях радионуклидного загрязнения (ЧАЭС) у полевок/С.А. Костенко, Е.Г.
Бунтова, Т.Т. Глазко//-Цит.ген., 2001,№35,2.-С.11-18.
83. Левина, Л. И. Сердце при эндокринных заболеваниях/ Л. И.
Левина//-Л. : Медицина,1989.-264с.
84. Ледяева, Е.М. Гистологическое строение щитовидной железы крупного рогатого скота в плодный и постнатальный периоды развития, «Сб. работ
(Ленинградского ветеринарного ин-та)»/ Е.М. Ледяева, 3.С. Кацнельсон //1964,
№. 26, С. 404—10.
85. Ленинджер, А.– Биохимия/ А. Ленинджер//пер.сангл.,М.:Мир, 1974.
86. Ленская, Р.В. Расчет и математический анализ годовых средних эффективных доз за счет внутреннего облучения у детей Красногорского района
Брянской области, постоянно проживающих на территориях с различным уровнем радионуклидного загрязнения цезием – 137 / Р.В. Ленская, В.М. Гернов, М.Л.
Дорофеева и др. // Гематология и трансфузиология. –1996. -№ 6. – С.23-27.
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
87. Ленская, Р.В. Результаты скрикинговых гематологических и цитохимических исследований крови 906 детей, проживающих в Брянской области в
местах с разной плотностью загрязнения почвы цезием – 137 и стронцием – 90 /
Р.В. Ленская, А.И. Пивоварова, А.Г. Лунькова и др. // Гематология и трансфузиология. – 1995. - № 6. – С. 30-34.
88. Локшина, Л.А. Са 2+ -активируемые нейтральные протеиназы и их
регуляторное значение/ Л.А. Локшина// Вестник АМН СССР.-1986.— N8.С.59-68.
89. Лукьянова, А.Г. Динамические изменения цитохимических показателей лимфоцитов периферической крови у детей Чернобыля за период с 1987 по
1995 гг. /А.Г. Лукьянова, Р.В. Ленская // Гематология и трансфузиология. – 1996.
- № 6. – С. 23-27.
90. Лукьянова, А.Г.Показатели лимфоцитов крови детей российского
чернобыля в течение 9 лет после аварии на ЧАЭС/А.Г. Лукьянова. – Афтореф….кандидата наук. – Москва, 1998. – 24с.
91. Лысенко, Н.П. Ведение животноводства в условиях радиоактивного
загрязнения среды/ Н.П. Лысенко, А.Д. Пастернак, Л.В. Рогожина, А.Г. Павлов.изд. «Лань», 2005. – 240с.
92. Маколкин, В.И.,
Мелкумова, И.С,
Зайцева, Н.С.
Значение
нарушений обмена кальция в патологии миокарда/ В.И. Маколкин, И.С Мелкумова, Н.С. Зайцева // Кардиология. -1981.-Т.21,N9.-С.116-120.
93. Медведев, Н.В. Мониторинг тяжелых металлов в органах охотничьепромыс-ловых животных/ Н.В. Медведев // Антропогенное воздействие на природу Севера и его экологические последствия. Апатиты, 1998.-С. 208-209.
94. Медведев, Н.В. Охотничье-промысловые животные как биоиндикаторытехногенного загрязнения лесных экосистем/Н.В. Медведев//Современные
проблемы биоиндикации и биомониторинга.Тез.докл. Сыктывкар,2001.-С.126127.
95. Медведев, Н.В. Птицы и млекопитающие Карелии как биоиндикаторы химических загрязнений/ Н.В. Медведев// Петрозаводск,1998.-135 с.
96. Медведев, Н.В. Экотоксикологический анализ природных популяций
птиц и млекопитающих Карелии в условиях нарастающего техногенного загрязнения/Н.В. Медведев//Дисс…д-ра биол. наук.-Петрозаводск,2004.-261с.
97. Медведев,Н.В. Концентрации ртути, свинца и кадмия в печени и почках лосей из некоторых районов южной Карелии/Н.В. Медведев//Актуальные
проблемы биологии и рациональное природопользование.Петрозаводск,1990.-С.
68-69.
98. Мелехова
О.П.Биологический
контроль
окружающий
среды:биоиндикация и биотестирование:уч. пособие/О.П. Мелехова, Е.И. Сарапульцева, Т.И. Евсеева, В.М. Глазер, С.А. Гераськин, Ю.К. Доронин, А.А. Киташова.
А.В. Киташов,Ю.П. Козлов, И.А. Кондратьева, Г.В. Коссова, С.В. Котелевцев,
Д.Н. Маторин, С.А. Остроумов, С.И. Погосян, А.В. Смуров, Г.Н. Соловых, А.Л.
Степанов, Н.А. Тушмалова, Л.В. Цаценко//3-е изд. – М.: Издательский центр
«Академия», 2010. – 288с.
99. Мерзоев, Э.Б. Физиолого-биохимические показатели крови поголовья
крупного рогатого скота при длительном содержании на радиоактивно загрязненных территориях/Э.Б. Мерзоев, В.О.Кобялко, Н.Н. Исамов, Т.С. Шевченко// –
С.-х.биол., 2000.-№6.-С.69-73.
100. Милехина, Л.В. Гистологические изменения в почках рыжей полевки
обитающей в окресностях медеплавильного комбината/ Л.В. Милехина, М.С.
Шило// Основы охраны природы (раздел достижения в экологии) 2010.-С.34-39.
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
101.
Морозова, Н.И. Рекомендации по повышению продуктивности коров
черно-пестрой породы в современных экономических условиях/Н.И. Морозова, Г.М.
Туников, А.В. Савицкая, И.М. Фролов. – изд. РГСХА. – 38 с.
102.
Мусина, Н.Ю. Иодная недостаточность у крупного рогатого скота и
её профилактика /Н.Ю. Мусина //ВКН: Ульяновский СХИ. Нарушения обменных
процессов при инвазионных болезнях и меры их профилактики. Уфа.-1985 .-С.99-105.
103.
Невструева, М.А. Влияние инкорпарированных радиоизотопов на
иммунологические процессы/М.А. Невструева, В.М. Шубик, И.Б. Токин//-М., 1972.217с.
104.
Незавитин, А.Г. Влияние линейной принадлежности крупного рогатого скота на частоту инфицированности ВЛКРС и заболеваемости лейкозом / А.Г.
Незавитин; Селекция сельскохозяйственных животных на устойчивость к болезням,
повышение резистентности и продуктивного долголетия. – Выпуск 9. – М.: ВНИИплем, 1992. – С. 123-124.
105.
Неймарк, И.И. Дифференциальная диагностика заболеваний щитовидной железы /И.И. Неймарк // Новые методы диагностики. Барнаул, 1974 . С.-148153.
106. Нефедова, С.А. Влияние загрязнения окружающей среды экотоксикантами
химической промышленности в ландшафтно-географических зонах Рязанской области на
резистентность животных к вирусным заболеваниям/ А.А. Коровушкин, С.А. Нефедова,
Ю.А. Поминчук // Аграрная Россия № 1, Фолиум, М., 2011, С.54-58.
107. Нефедова, С.А. Динамика продуктивности телят с гипофункцией щитовидной железы при индукции развития миокарда Са2+-антагонистом// С.А. Нефедова // Известия Оренбургского государственного аграрного университета № 1 (29), 2011, С.176-178.
108. Нефедова, С.А. Динамика развития миокарда и молочной железы при индукции Са2+-антагонистом компенсаторной адаптивности телят к гипотиреозу/ А.А. Коровушкин, С.А. Нефедова // «Естественные и технические науки» № 1, Спутник плюс, М.,
2011,С.82-84.
109. Нефедова С.А. Взаимосвязь резистентности к маститу гипотиреоидных коров различных кроссов при индукции компенсаторной адаптивности Са2+-антагонистом/
А.А. Коровушкин, С.А. Нефедова, Г.М. Туников // Аграрный вестник Урала № 1 (80),
2011, С.107-108.
110. Нефедова, С.А. Динамика гематологических показателей крови телят при
формировании Са2+ - антагонистом компенсаторной адаптивности сердца к гипотиреозу/
В.В. Калашников, А.А. Коровушкин, С.А. Нефедова // Достижения науки и техники АПК,
2011. - № 2. – С.51-53.
111. Нефедова, С.А. Динамика развития миокарда и молочной железы при воздействии Са2+-антагонистом на компенсаторную адаптивность телят к гипотиреозу/ С.А.
Нефедова // Ученые записки Петрозаводского государственного университета № 2 (115),
2011, С.55-58.
112. Нефедова, С.А. Резистентность к маститу гипотиреоидных коров различных
линий черно-пестрой породы при компенсаторной адаптивности Са2+-антагонистом/ А.А.
Коровушкин, С.А. Нефедова // «Естественные и технические науки» № 2, Спутник плюс,
М., 2011,С.150-151.
113. Нефедова, С.А. Влияние регуляции компенсаторной адаптивности к гипотиреозу Са2+-антагонистом на технологические свойства молока/ А.А. Коровушкин, С.А.
Нефедова // «Естественные и технические науки» № 2, Спутник плюс, М., 2011,С.477-478.
114. Нефедова, С.А. Регуляция потребления корма, роста, развития, продуктивности коров с гипофункцией щитовидной железы в зависимости от индукции компенсаторно-приспособительных реакций Са2+ - антагонистом/ А.А. Коровушкин, В.С. Грачев,
С.А. Нефедова // Известия Санкт-Петербургского государственного университета № 22,
2011. – С.130-135.
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
115. Нефедова, С.А. Динамика вирусных заболеваний среди диких и сельскохозяйственных животных различных ландшафтно-географических зон в зависимости от экологии окружающей среды/ Л.С. Жебровский, С.А. Нефедова, Е.Я. Греф, Ю.А. Поминчук
// Известия Санкт-Петербургского государственного университета № 22, 2011. – С.136140.
116. Нефедова, С.А Цитоморфологический мониторинг при оценке адаптивности молочного скота к техногенной экотоксикации в связи с аварией на Чернобыльской
АЭС // В.В. Калашников, А.А. Коровушкин, С.А. Нефедова //Сельскохозяйственная биология, 2011, № 6 . – С.82-89.
117. Нефедова, С.А. Роль лизосом в патологии кардиомиоцитов/ С.А. Нефедова,
Е.А. Строев, А.Ф. Астраханцев// Сборник научных работ и материалов научно - практической конференции аспирантов и сотрудников Рязанского ГМУ «Влияние охраны здоровья населения и состояния окружающей среды». – Рязань, 1995.-С.137-141.
118. Нефедова, С.А. Влияние нифедипина и инсулина на лизосомный аппарат
кардиомиоцитов/ С.А. Нефедова// Сборник научных работ и материалов научно - практической конференции аспирантов и сотрудников Рязанского ГМУ «Социальногигиенические и медицинские аспекты здоровья». – Рязань, 1995.-С.99-103.
119. Нефедова, С.А., Защитно - приспособительные реакции кардиомиоцитов
миокарда кроликов и крыс при различном физиологическом состоянии животных/ С.А.
Нефедова, В.А. Захаров, А.С. Козлов// Сборник научных работ и материалов Всероссийской научно-практической конференции. – Рязань, 1996.-С.147-151.
120. Нефедова, С.А. Модификация метода обработки материала для электронномикроскопического исследования с учетом свойств миокарда/ С.А. Нефедова, В.А. Захаров// Сб. научных работ и материалов Всероссийской научно-практической конференции
«Творческое наследие Костычева П.А. и его развитие в Современном земледелии» посвященной 150-летию со дня его рождения, Рязань,-1998.-С.144-146.
121. Нефедова, С.А. Модификация метода обработки материала для электронномикроскопического исследования с учетом свойств миокарда/ С.А. Нефедова// Сб. научных работ и материалов Всероссийской научно-практической конференции «Теоретическое наследие П. А. Костычева и его развитие в современном земледелии». – Рязань,
1996.-С.144-148.
122. Нефедова, С.А. О роли электронной микроскопии в изучении компенсаторно-приспособительных реакций организма/ С.А. Нефедова, В.А. Захаров// Материалы
международного симпозиума по эмиссионной электронике. - Рязань, 1996. – С.213-217.
123. Никитин, В.П.Тиреоидные гормоны и липидный обмен /В.П. Никитин, Н.А
Бабенко// Физиологический журнал, т. 35 №3 1989. С. 91-98.
124.
Никифорова, Г.Н. Сравнительная характеристика молочной продуктивности голштинизированных коров разных генотипов в АОЗТ «Московское» Рязанского района /Г.Н. Никифорова// Материалы региональной научно – практической
конференции Современное состояние и стратегия развития АПК Рязанской области
на рубеже XXI столетия. – Рязань, 2001. – С. 168 – 170.
125.
Орлов, С.Н. Механизм и регуляция входа кальция в эритроциты/ С.Н., Орлов, Н.И. Токудин // Доклады АН СССР.-1988.-Т.298,N3.-С.753-756.
126.
Осечинский, А. Печальный опыт Чернобыля / А.Осечинский, А. Мартиросов, А. Прошин; М.: Врач, 1996. – С. 27.
127.
Павлов, С.А. Схемы исследования патологии щитовидной железы у
животных в зоне радиоактивного загрязнения/С.А. Павлов //Ветеринария.-2008.№7.С.47-48.
128.
Павлюк, В. Г. Морфогенез «микседематозного сердца» при экспериментальном удалении щитовидной железы у кроликов/ В. Г. Павлюк
//Кардиология.—1978.— № 5.—С. 123—127.
129.
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
130.
Папуниди, К.X. Болезни обмена веществ и эндокринных органов/К.Х
Папуниди// Спб.: Лань, 2003. - С.417-421.
131.
Пилов, Ф.Х. Патоморфология щитовидной железы у крупного рогатого скота/Ф.Х. Пилов//Ветеринария.-2004.-№5 с.44-45.
132.
Попова, В.А. Заболевание щитовидной железы у детей проживающих
в неблагополучных районах /В.А Попова// — Ростов —на-Дону,2003. — 41 с.
133.
Родионов Г.В. Эколгогия и селекция сельскохозяйственных животных/ Г.В. Родионов, В.Т. Христенко//Уч. пособие. – изд. МСХА, 1998.-172с.
134.
Рязанова, Е.А. Влияние гормонов щитовидной железы на активность
катепсина Д и кальпаинов нормального и поврежденного миокарда/Е.А. Рязанова. –
Автореф….кандидата наук, Смоленск. – 1990. – 23с.
135.
Рязанова, Е.А. Способ определения активности кальпаинов в биологическом материале/ Е . А Строев, Е.А. Рязанова, В.Д Тавинцев.// Положительное
решение на заявку изобр. N 4699987/30-14/ 077647/ 25.01.90.
136.
Саруханов, В.Я. Бактерицидные свойства крови различных видов
сельскохозяйственных животных под влиянием голодания и облучения/В.Я. Саруханов, Н.Н. Исамов// С.-х.биол., 2001.-№2.-С.80-83.
137.
Саруханов, В.Я. Естественная резистентность и патология щитовидной железы у крупного рогатого скота после аварии на Чернобыльской АС/В.Я. Саруханов, Н.Н. Исамов// С.-х.биол., 2010.-№6.-С.104-106.
138.
Сперелакис, Н. Физиология и патфизиология сердца: в 2 Т. Пер. с
англ./Под ред. Н. Сперелакиса. – 2-е изд. исправленное – М.:Медицина, 1990, 624 с.
139.
Старкова, Е.В. Морфологические аномалии интерфазных ядер клеток
крови у человека и животных при радиационных воздействиях / Е.В. Старкова; Диссертация…кандидата биологических наук. - С.-Пб. - Пушкин, 1997. – С. 128.
140.
Старкова, Н. Т. О патогенезе и лечении артериальной гипертензии у
больных гипотиреозом/ Н. Т. Старкова, Ф. М Эгарт, Т. М. Атаманова, А. Н. Назаров
//Клин.мед.—1986.—№ 8.—С. 27—30.
141.
Стиммер, К. Токсическое действие кадмия и свинца на сердце/ Стиммер К., Питеринг X., Мюрти JI. и др. // Гигиена окружающей среды. Материалы 3-го
итог, сов.-амер. симпоз. Суздаль, 1979. М., 1980. С. 28-32.
142.
Стрежнева, Т.Ю. Одна извозможных причин повышения активности кислых гидролаз в гомогенатах сердечной мышцы при инфаркте миокарда/Т.Ю. Стрежнева, В.И.Скорик, Е.С.Сафонова, Б.Ф. Коровкин // Вопросымедицинской химии. — 1977. -Т . 23 . N2 . -С 2 5 1 - 2 5 3 .
143.
Стрекозов, Н.И. Оценка быков по качеству потомства/Н.И. Стрекозов//Зоотехния. – 1989. - № 5. – С. 18 – 20.
144.
Строев, Е . А . Способ определения активности кальпаинов в биологическом материале/ Е . А Строев, Е.А. Рязанова, В.Д Тавинцев.// Положительное
решение на заявку изобр. N 4699987/30-14/ 077647/ 25.01.90.
145.
Строев, Е.А. Влияние эстрогенов и тиреоидных гормонов на
развитие индуцированной изопреналином миокардиодистрофии/ Е.А. Строев, В.В.
Строителев, А.Ф. Астраханцев //Кардиология.—1988.-Т.28,N8.-С.90-93.
146.
Строев, Е.А. О роли взаимодействия гормонов в реализа ции
их эффектов/ Е . А Строев // Краткий курс молекулярной фармакологии / Под ред.
П.В. Сергеева. -М.: 11 ММИ им. Н.И. Пирогова, 1975.-С.242-260.
147.
Сыпин, В.Д. Морфофункциональные изменения лейкоцитов крови
крупного рогатого скота, содержащегося в зонах радиоактивного загрязнения/В.Д.
Сыпин, В.Г. Егоров//- Мат. Всерос. науч. конф. «Научные основы ведения агропромышленного производства в уловиях крупных радиационных аварий». Обнинск,
1998.-С.20-23.
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
148.
Сысоева, A.A. Физиология сельскохозяйственных животных /
А.А.Сысоева//-М.: Колос.1980 С.87-88.
149.
Тангль, Г.Г. Возможности использования явлений стресса в практике
животноводства/ Г.Г. Тангль// Международный с.-х. журнал. - 1965, С. 65 – 67.
150.
Тирзите, Д.Я. Влияние нифедипина и риодипина на биохимические
процессы в интактных эритроцитах/ Д.Я.Тирзите, Г.Д. Тирзит, Г.Я. Дубур// Бюллетень экспер.биологии и медицины. -1990.- №10.-С379-381.
151.
Торжков, Н.И. Рост и развитие молодняка разных породных групп в
условиях Рязанской области / Н.И. Торжков, А.А. Прошляков; Сб. научных трудов
аспирантов, соискателей и сотрудников Рязанской ГСХА имени профессора П. А.
Костычева. – Рязань, 1998. – С. 90 – 93.
152.
Торжков, Н.И. Рост и развитие молодняка разных породных групп в
условиях Рязанской области / Н.И. Торжков, А.А. Прошляков; Сб. научных трудов
аспирантов, соискателей и сотрудников Рязанской ГСХА имени профессора П. А.
Костычева. – Рязань, 1998. – С. 90 – 93.
153.
Туников, Г.М. Рекомендации по повышению продуктивности коров
черно – пестрой породы в современных экономических условиях / Г.М. Туников,
Н.И. Морозова, А.В. Савицкая, И.М. Фролов//Рязань, 1999. –38с.
154.
Туников, Г.М. Рекомендации по повышению продуктивности коров
черно – пестрой породы в современных экономических условиях / Г.М. Туников,
Н.И. Морозова, А.В. Савицкая, И.М. Фролов; Рязань, 1999. –38с.
155.
Фадеев, В.В. Йододефицитные и аутоиммунные заболевания щитовидной железы (эпидемиология, диагностика, лечение)/ В.В. Фадеев//- М., "Видар",
2005.
156.
Фелинг, Ф. Эндокринология и метаболизм/ Ф. Фелинг//В 2-х томах.
Под ред. Ф. Фелинга. Пер. с англ. - Москва, 1987.
157.
Шварц, С.С. Метод морфофизиологических индикаторов в экологии
наземных позвоночных/ С.С. Шварц, В.С.Смирнов, Л.Н. Добринский// Свердловск,
1968.- 387 с.
158.
Эйдригевич, Е.В. Интерьер сельскохозяйственных животных / Е.В.
Эйдригевич, В.В. Раевская// М.: Колос, 1978. - 254 с.
159.
Яковлев, А.Ф. Исследования хромосом сельскохозяйственных животных // А.Ф. Яковлев; ВНИИРГЖ. – Л.: Лениздат, 1976. – С. 65.
160.
Якубке, Х.Д. Аминокислоты, пептиды, белки/ Х.Д. Якубке // Пер.с
англ.М.:Мир1985. -456 с.
161.
Abelman, W.H. Viral myocarditis and its sequelae/ Abelman W. H.. —
Ann. Rev, 1973, vol. 22, p. 145—152.
162.
Albright, J.L. Dairy cattle housing with emphasis on economics, sanitation and production/ J. L. Albright; J. Dairy Sci., 47, 11, 1273, 1964;
163.
Alscher, B. Einfluss der normalen Geburt auf den thyreoidalen Status
neugeborener Kalber und deren Mutter [Влияниенормальногоотеланаконцентрациюгормоновщитовиднойжелезывсывороткекровиуноворожденныхтелятиихматерей.
(ФРГ)] AlscherB.Giessen, 1989. – 138с.
164.
Antoni, H. Mechanische Reaktionen des Frosch- und Saugertiermyokards
bei Veranderung der Aktionpotential-Dauer durch kon-stante Gleichstromimpulse/ Antoni
H„ Jacob R., Kaufmann R.. — Pflflgers. Arch., 1969, vol. 306, p. 33—57.
165.
Bekeova, E. Zabrezavanie dojnic v roznych rocnych obdobiach vo vztahu
ku koncentraciam tyroxinu (T4) a trijodtyroninu (T3) [Связьоплодотворяемостикоровсконцентрациейтироксинаитрийодтиронинапослесинхронизацииклопростенолом.
(ЧСФР)] Bekeova E.; Elecko J.; Hendrichovsky V.; Hajurka V.; Choma J. Krajnicakova
M. ;Veter. Med. (Praha), 1989; Т. 34. N 8. - s. 491-500, ил.
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
166.
Billon, J. Stresseinwirkungen aut die Fleischqualitat/ J. Billon, K.L. Dlaxter; Symposium der internationalen Vereinigung Veratinar-Lebensmittelhygieniker vom 27.
Mai bis 2. Juni 1962 in Nizza., P.340 – 341, 1962;
167.
Brooks, B.A. Effect of alloxan diabetes on a Ca2+-activated proteinase in
rat skeletal muscle / B.A.Brooks, D.E.Goll, Y.S. Peng et al. // Am.J.Physiol.-1983.Vol.244,N3.-P.175-181.
168.
Buch, W.A. Ca 2+-specitic removal of Z lines from rabbit skeletal muscle
/ W.A.Buch, M.H.Stromer, D.E.Goll, A.Suzuki // J.Cell Biol.-1972.-Vol.52,N2.-P.367-381.
169.
Cassel, D. A Ca 2+—dependent, sulfhydryl—sensitive proteolytic system
in A431 cells / Cassel D., Glaser L. // J.Biol.Chen.-1982.-Vol.257,N16.-P.9845-9848.
170.
Chien, K.R. Phospholipid alterations in canine ischemic myocardium:
temporal and topographical correlations with Tc-99m-PPi accumulation and an in vitro sarcolemmal Ca2+ permeability defect/ Chien K. R; Reeves J. P., Buja L. M. et al.. — Circulat.
Res., 1981, vol. 48, p. 711—719.
171.
Dayton, W.R. A Ca2+ - activated protease possibly involved in myofibrillar protein turnover. Partial characterization of the purified enzyme / W.R. Dayton, W.J. Revi11e, D.E. Goll,M.H. Stromer // Biochem.-1976.-Vol.15,N10.-P.21592167.
172.
Fabiato, A. Calcium release from the sarcoplasmic reticulum/ Fabiato A.,
Fabiato F. — Circulat. Res., 1977, vol. 40, p. 119—129.
173.
Fagan, J.M. Assay precision and accuracy of calcium-dependent proteinase activity in rat skeletal muscle/ Fagan J.M. , Brooks B.M. ,Goll D.E. // J.Food Sci.1983.-Vol.48,N2.-P.487-491.
174.
Forbes, M. S. Myocardial couplings: their structural variations in the
mouse/ Forbes M. S., Sperelakis N.. — J. ultrastruct. Res., 1977, vol. 58, p. 50—65.
175.
Ignarro, L.J. Release o-f enzyme from a rat liver 1ysosome:lппibition by
catechol amines,cycliс 3,5-adenosine monophosphate,stimulation by cholinergic agen ts ,
cycl i с 3 , S-guaYiosi ne monophosphate/ Ignarro L. J. , Krassifcaff N. //J . Phar mac .Exp
.Ther.-1973.-Vol.136.-P.86-89.
176.
Kishimoto,A.Calcium—dependent neutral proteases, widespread occurrenceof a species of protease active at lower concentrations of c a l c i u m /
A.Kishimoto,M.Kajikawa,H.Tabuchi et al . // J.Biochem.-1981.-Vol.90,N3.-P.889-892.
177.
Kitahara, A. Lange-scale purification of porcine calpain I and calpain II
and comparison of proteolytic fragments of their subunits / A.Kitahara, T.Sasaki,
T.Kikachi et al.// J. Biochem. – 1984.- Vol.95,N6. – P.1759-1766.
178.
Kovalcik, K. Vyhodnotenie hlucnosti mastali pre dojnici/ Kovalcik K.,
Sottnik J.. Zemedelska technika, 17, 9, 595 – 602, 1971.
179.
Malik, M.N. P u r i f i c a t i o n and c h a r a c t e r i z a t i o n of two forms of
Ca 2+-activated neutral protease f r o m c a l f b r a i n / M.N. Malik, M.D.Fenko, K . I q h a l ,
H.M.Wisniewski // J.Biol. Chem.-1983.- Vol.258.-P.8955-8962.
180.
Malik, M.N. P u r i f i c a t i o n and c h a r a c t e r i z a t i o n of two forms of
2+
Ca -activated neutral protease f r o m c a l f b r a i n / M.N. Malik, M.D.Fenko, K . I q h a l ,
H.M.Wisniewski // J.Biol. Chem.-1983.- Vol.258.-P.8955-8962.
181.
Meyer, W.L. Activation of skeletalmuscle phosphorylase b kinase by
Ca 2+ / Meyer W.L., Ficher E.H., Krebs E.G. // Bio-chem.-1964.-Vo:.3,N8.-P.1033-1039.
182.
Miyachi, J. Biochemical demonstration and Immunohistochemical localization of calpain in human skin / J. Miyachi, N. Joshimura, S.Suzuki et al .
// J. Invest. Dermatol - -I986. - Vol . 86, N4.- P. 346-349.
183.
Miyamoto, T. Effect of thyroid hormone on the protein inhibitors for
Ca2+-dependent proteinase in brain:evidence for the induction by thyroidectomy of irreversible changes in rats/T.Miyamoto, K.Hashizume, K.Ichikawa et al.// En-docrin.-1988.Vol.123.-P.1916-1922.
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
184.
Oetliker, H. An appraisal of the evidence for a sarcoplasmic reticulum
membrane potential and its relation to calcium release in skeletal muscle Oetliker H.. — J.
Muscle. Res. cell. Motil., 1982, vol. 3, p. 247—272.
185.
Oliva, P. B. Pathophysiology of acute myocardial infarction, 1981/ Oliva P.
B.. — Ann. intern. Med., 1981, vol. 94, p. 236—250.
186.
Phillips, D. Iodine, milk, and the elimination of endemic goiter in Britain:
the story of accidental public health triumph. D. Phillips // Community Health — 1997 —
Vol. 51: 391 — 393).
187.
PontremolI, S. Phosphory1ation by protein kinase C of a 20-k0a cytoskeletal polypeptide enhances its susceptibility to di — gestion by c a l p a i n /
S.PontremolI, E.Melloni,M.liichetti et al. // Proc.Nat.Acad.Sci USA.-1987.-Vol.84,N2.P.398-401.
188.
Siedagrotzky, O. Uber die Leukamie bei den Hauctieren. Pflugers Vort. F.
Tierarztl. – 1879. – 1. Serie, H 10.
189.
Siman, R. Purification from synaptosomal plasma membranes of calpain I,
a thiol protease activated by micromolar calcium concentrations/ Siman R., Baudry M.,
Lynch B. // J.Neuro— сhem.-1983.-Vol.41,N4.-P.950-956 .
190.
Sperelakis, N. Ultrastructural changes produced by hypertonicity in cat
cardiac muscle/ Sperelakis N., Rubio R.. — J. molec. cell. Cardiol., 1971, vol. 3, p. 139—
156.
191.
Steinhauf, D. The stress and adaptation of domestic animals/ D. Steinhauf, J.H. Weniger; Pfiladelphia, Lea a. Febiger, 100 – 103, 1967;
192.
Sulman, F. G. Hypothalamic control of lactation. Berlin – Heidelberg –
New York, Springer Verlag, 1970.
193.
Toyooka, T. I n h i b i t i o n of prot e o l y t i c a c t i v i t y of c a l c i u m a c t i v a t e d neutral protease by l e u p e p t i n and a n t i p a i n / T. Toyooka, T. S h i m i z i ,
T. M a s a k i // B i o c h e m . a n d Biophys. Res. Commun .-1978.-Vol.82,N2.-P.484-491.
194.
Toyooka, T. Increased activity of intramuscular proteases in the hyperthyroid state / T. Toyooka // FEBS Lett.-1980.-Vol. 117,N1.-P.122-124.
195.
Wheelock, M.J. Evidence for two structurally different f o r m s of s k e l e t a l m u s c l e Ca2+-activated protease. M.J. Wheelock
// J.Biol .Chem.-1982.Vol.257,N21.-P.12471-12474.
196.
Y o s h i m u r a , N . Two d i s t i n c t Ca2+ proteases / c a l p a i n I and c a l p a i n I I / p u r i f ied c o n c u r r e n t l y by the same method from rat k i d n e y /
N . Y o s h i m u r a , T . K i k u c h i , T.Sasaki et al. // J. Biol.Chem.-1983.-Vol.258,N14.P.8883-8889.
197.
Y o s h i m u r a , N . Two d i s t i n c t Ca2+ proteases / c a l p a i n I and c a l p a i n I I / p u r i f ied c o n c u r r e n t l y by the same method from rat k i d n e y /
N . Y o s h i m u r a , T . K i k u c h i , T.Sasaki et al. // J. Biol.Chem.-1983.-Vol.258,N14.P.8883-8889.
198.
Zak, R.Control of protein balance in hypertrophied cardiac muscle / R.Zak,
A.F.Martin, M.K.Reddy et al. // Circu-1 at.Res.1976.Vol.38,N5,Suppl.Nl.-P.145-150.
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
Оглавление
стр.
Предисловие…………………………………………………..
5
Введение………………………………………………………
7
Глава 1. Цитогенетические последствия техногенного воздействия
на животных с экологически неблагоприятных йодэндемичных территорий………………………………………….
13
Глава 2. Цитоморфологические параметры морфофункциональной
регуляции компенсаторной адаптивности миокарда и железистой ткани животных, обитающих на экологически
неблагоприятной территории……………………………….
53
Глава 3. Естетсвенная резистентность и патология щитовидной железы при низком содержании йода в окружающей среде
80
Глава 4. Взаимосвязь активности ферментов и тиреоидных гормонов при регуляции Са2+- антагонистом компенсаторноприспособительных процессов коров к условиям среды
обитания……………………………………………………….
102
Заключение……………………………………………………
133
Список основной литературы………………………………
139
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
Нефедова Светлана Александровна (nefedova-s-a@mail.ru)
Под редакцией профессора ИвановаЕвгения Сергеевича
Цитоморфологические и биохимические аспекты адаптивности
животных к условиям среды обитания
Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Рязанский государственный агротехнологический университет имени П.А. Костычева»
390044, Россия, г. Рязань, ул. Костычева, д. 1
Компьютерный набор. Подписано в печать ________
Заказ №
____. Формат 84/16. Тираж 100 экз. Усл. печ. л. 2. Бумага офсетная.
Гарнитура Times. Печать ризографическая. Отпечатано_________
Отпечатано с готовых оригинал-макетов в информационном редакционно-издательском центре ФГБОУ ВПО «Рязанский государственный агротехнологический университет имени П.А. Костычева» 390044, Россия, г. Рязань, ул. Костычева, д. 1.
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа