close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

ИНСТРУКЦИЯ.354

код для вставкиСкачать
ЗАО "ЭКОлаб"
"НАБОР ДИАГНОСТИЧЕСКИЙ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ ЩЕЛОЧНОЙ ФОСФАТАЗЫ
В СЫВОРОТКЕ И ПЛАЗМЕ КРОВИ
ПО ФЕРМЕНТАТИВНОМУ ГИДРОЛИЗУ
П-НИТРОФЕНИЛФОСФАТА"
ЗАО "ЭКОлаб"
ИНСТРУКЦИЯ ПО ПРИМЕНЕНИЮ НАБОРА ДИАГНОСТИЧЕСКОГО ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ ЩЕЛОЧНОЙ ФОСФАТАЗЫ В СЫВОРОТКЕ И ПЛАЗМЕ КРОВИ ПО ФЕРМЕНТАТИВНОМУ ГИДРОЛИЗУ П-НИТРОФЕНИЛФОСФАТА
Назначение
Набор предназначен для количественного определения активности щелочной фосфатазы в сыворотке или плазме крови человека по гидролизу п-нитрофенилфосфата в клинико-диагностических и биохимических лабораториях.
Набор рассчитан на проведение 200 определений, включая холостые пробы.
Принцип метода
Субстрат - п-нитрофенилфосфат гидролизуется ферментом сыворотки с образованием п-нитрофенола, имеющего в щелочной среде желтое окрашивание. Интенсивность окраски пропорциональна активности фермента.
Состав набора:
Реактив 1. Диэтаноламиновый буферный раствор - 1 флакон (50 мл).
Реактив 2. п-Нитрофенилфосфат - субстрат - 5 флаконов (по 40 мг).
Реактив 3. Натрия гидроокись раствор 5,0 моль/л - 1 флакон (16 мл).
Калибратор. Калибровочный раствор п-нитрофенола 40 мкмоль/л - 1 флакон (5,0 мл) Образцы
Сыворотка крови, свободная от гемолиза или гепаринизированная плазма.
Оборудование
Спектофотометр, регистрирующий оптическую плотность в видимой области спектра, или фотоэлектроколориметр.
Приготовление рабочих растворов
Субстратно-буферный раствор
К содержимому одного флакона Реактива 2 прилить 10 мл Реактива 1 растворить при перемешивании. рН 10 ± 0,2. Стабилен в течение 2 дней при условии хранения при температуре (2-8)о С.
Раствор гидроокиси натрия 0,2 моль/л
Содержимое флакона Реактива 3 разбавить в соотношении 1:24 прокипяченной дистиллированной водой.
Калибратор готов к использованию.
Проведение анализа
Компоненты реакционной смеси для определения активности щелочной фосфатазы в сыворотке или плазме крови отбирают в количествах, указанных в таблице.
Таблица
Компоненты
реакционной смесиОбъем компонента, мл
Опытная пробаХолостая пробаСубстратно-буферный раствор0,250,25Выдержать 5 мин при температуре 37о СОбразец 0,01Перемешать и выдержать 15 мин при температуре 37о СРаствор гидроокиси натрия 0,2 моль/л1,751,75Дистиллированная вода-0,01
Перемешать, измерить оптическую плотность растворов опытной и холостой проб относительно воды при длине волны 405 (400-420) нм в кювете с толщиной поглощающего слоя 1,0 см.
2
Измерить оптическую плотность калибратора (Екал) при длине волны 405 нм в кювете с толщиной поглощающего слоя 1,0 см относительно воды (использовать при расчете активности по варианту 1).
Расчет Вариант 1 (для фотоколориметров типа КФК-2 и КФК-2МП):
Активность щелочной фосфатазы (Амкмоль/мин.л = Е/л) рассчитать по формуле:
А=∆Е • 536/Екал
где ∆Е - разность значений оптических плотностей опытной и холостой проб;
Екал - оптическая плотность калибратора.
536 - фактор пересчета, полученный с учетом объемов реакционной смеси, проб, времени инкубации, толщины поглощающего слоя и концентрации калибратора.
Вариант 2 (для спектрофотометра типа СФ-46 и фотоэлектроколориметра КФК-3):
А=∆Е • 724
724 - фактор пересчета, рассчитанный с учетом коэффициента экстинкции п-нитрофенола, равного 1,85 л/мкмоль м, для кюветы с толщиной поглощающего слоя 1,0 см.
Аналитические характеристики набора
Воспроизводимость: коэффициент вариации результатов - не более 7 %. Чувствительность - 50 Е/л.
Линейность определения - в диапазоне от 80 г/л до 1150 Е/л.
В случае, когда ∆Е превышает значение 0,800, образец разбавить в 10 раз раствором хлорида натрия 154 мкмоль/л (9 г/л). Измерение повторить, полученный результат умножить на 10.
Нормальные значения
Нормальные величины активности щелочной фосфатазы при 37оС:
взрослого человека - 98 - 279 Е/л, детей (до 15 лет) - до 400 Е/л. Меры предосторожности при работе с набором
Реактив 3 содержит гидроокись натрия, калибратор - п-нитрофенол; следует избегать контакта с кожей и слизистыми. При попадании на кожу или слизистые - смыть струей воды.
При работе с набором соблюдать правила безопасности при работе с едкими веществами.
Меры предосторожности - соблюдение "Правил устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений системы Министерства здравоохранения СССР" (Москва, 1981 г.).
При работе с набором следует надевать одноразовые резиновые или пластиковые перчатки, так как образцы крови человека следует рассматривать как потенциально инфицированные, способные длительное время сохранять и передавать ВИЧ, вирус гепатита или любой другой возбудитель вирусной инфекции.
Срок годности 1 год.
Условия хранения
Набор хранить при (2-8)о С в сухом, защищенном от света месте.
По вопросам, касающимся качества набора, следует обращаться по адресу 142530, Московская обл, г. Электрогорск, ул. Буденного, д. 1. ЗАО "ЭКОлаб"; тел. (49643) 3-30-93 - отдел сбыта, факс (49643) 3-30-85.
Автор
manydocs10
Документ
Категория
Другое
Просмотров
404
Размер файла
50 Кб
Теги
инструкция, 354
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа