close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Фармако-токсикологические свойства димикара и его применение при гепатозах коров

код для вставкиСкачать
На правах рукописи
ДЕНИСЕНКО ТАТЬЯНА СЕРГЕЕВНА
ФАРМАКО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ДИМИКАРА И
ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ ПРИ ГЕПАТОЗАХ КОРОВ
06.02.03 – ветеринарная фармакология с токсикологией
Автореферат
диссертации на соискание ученой степени
кандидата биологических наук
Краснодар – 2018
Работа выполнена в федеральном государственном бюджетном
образовательном учреждении высшего образования «Ставропольский
государственный аграрный университет»
Научный руководитель:
кандидат биологических наук, доцент
Киреев Иван Валентинович
Официальные оппоненты:
Пудовкин Николай Александрович
доктор биологических наук, доцент,
ФГБОУ
ВО
«Саратовский
государственный
аграрный
университет имени Н. И. Вавилова»,
профессор кафедры морфологии,
патологии животных и биологии
Никулин Иван Алексеевич
доктор
ветеринарных
наук,
профессор,
ФГБОУ
ВО
«Воронежский
государственный
аграрный
университет
имени
императора Петра I», профессор
кафедры терапии и фармакологии
ФГБОУ
ВО
государственный
университет»
Ведущая организация:
«Донской
аграрный
Защита состоится 25 октября 2018 г. в 10-00 в ауд. № 1 факультета
ветеринарной медицины на заседании диссертационного совета Д 220.038.07
при ФГБОУ ВО «Кубанский государственный аграрный университет имени
И. Т. Трубилина» по адресу: 350044, г. Краснодар, ул. Калинина, 13, тел.:
8(861) 221-56-37, e-mail: kubsau@mail.ru
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Федерального
государственного бюджетного образовательного учреждения высшего
образования «Кубанский государственный аграрный университет имени
И. Т. Трубилина» и на сайте http://www.kubsau.ru
Автореферат разослан «____» _____________2018 г.
Ученый секретарь
диссертационного совета
Винокурова Диана Петровна
2
1 ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность темы исследования. Современная аграрная политика
подразумевает внедрение рентабельных форм ведения животноводства,
направленных на получение максимального количества высококачественной
продукции.
Однако
стремление
к
значительному
возрастанию
продуктивности за счет использования интенсивных промышленных
технологий без соответствующего учета физиологических потребностей
животных ведет к функциональным перегрузкам организма, на фоне которых
развивается патология (В. А. Мищенко, 2008; И. А. Шкуратова и соавт., 2013;
И. И. Калюжный и соавт. 2016; S. LeBlanc, 2010; M. Mari et al., 2010).
Селекция молочного скота, направленная на увеличение удоев, привела
к тому, что у животных генетический потенциал продуктивности стал
превалировать над физиологическими возможностями. В результате
возникла проблема несоответствия фактического потребления расхода
энергии и ее поступления в организм коров с кормами на разных этапах
физиологического цикла (Е. В. Душкин и соавт., 2008; И. А. Никулин и
соавт., 2016; C. Gerspach et al., 2017).
Проявляемая энергетическая диспропорция тем сильнее, чем выше
продуктивность животного. Наиболее напряженными по интенсивности
обмена веществ у молочных коров является промежуток в течение последних
трех-четырех недель до родов и послеродовой период, когда происходят
существенные изменения в работе органов и гормональном статусе
организма (Р. А. Мерзленко и соавт., 2012; С. П. Ковалев, 2015; G. Bobe,
2004).
В отдельных хозяйствах высокая молочная продуктивность коров
достигается путем введения в их кормовой рацион большого количества
концентрированных кормов, что является одной из основных причин
поражения
печеночной
патологии
(Ю. Н. Алехин,
2008;
И. Ф. Хазимухаметова и соавт., 2010; М. П. Семененко и соавт., 2016;
C. Gerspach et al., 2017).
Из болезней печени у высокопродуктивных животных наиболее часто
отмечается гепатоз. Данному заболеванию в различной степени подвержены
до 60 % коров от общего стада. Гепатоз у крупного рогатого скота является
одной из актуальных проблем, стоящих перед ветеринарной наукой и
практикой. Данная патология наносит значительный экономический ущерб,
который
складывается
из
утраты
продуктивности,
снижения
воспроизводительных качеств и развития сопутствующих заболеваний
(М. З. Андрейцев, 2000; Е. В. Душкин и соавт., 2008-2015; Е. В. Кузьминова и
соавт., 2013; Р. А. Мерзленко и соавт., 2014).
Сложность диагностики и лечения гепатоза состоит в том, что данное
заболевание дифференцируется на поздних стадиях развития и имеет
длительное латентное течение (И. А. Никулин, 2002; Ю. Н. Алехин, 2011;
М. П. Семененко и соавт.. 2014-2016; Р. А. Добрунов, 2017).
3
Одним из основных звеньев этиопатогенеза гепатоза является
некомпенсированная активация свободнорадикального окисления, снижение
активности ферментативного звена системы антиоксидантной защиты и
накопление продуктов перекисного окисления липидов в организме
животных (М. Р. Баратова и соавт., 2016; М. П. Семененко и соавт., 2016;
M. Yin et al., 2017; Y. Yang et al., 2017).
Повреждающему действию свободных радикалов противостоит
система антиоксидантной защиты организма. Антиоксидантная система
удерживает процесс перекисного окисления на стационарном уровне, не
препятствующем нормальной жизнедеятельности. Формирующееся тем
самым прооксидатно-антиоксидантное равновесие является важнейшим
механизмом гомеостаза (М. И. Рецкий и соавт., 2008; В. С. Авдеенко и соавт.,
2016; О. А. Горошко и соавт., 2016; Y. V. Nancharaiah et al., 2015).
Следовательно, на этапе возникновения метаболических и
морфофункциональных изменений в печени, при ранней диагностике
нарушений функций данного органа, необходимо проводить адекватную
фармакологическую профилактику, предупреждающую дальнейшее развитие
повреждений гепатоцитов. Поэтому, создание новых поликомпонентных
препаратов, сочетающих гепатопротекторные и антиоксидантные свойства,
способных минимизировать морфофункциональные нарушения в печени,
остается весьма актуальной задачей ветеринарной науки и практики.
Степень разработанности проблемы. В нашей стране вопросами
изучения проблем диагностики и терапии болезней печени занимались
Ю. Н. Алехин (2011. 2012), М. З. Андрейцев (2000), А. М. Гертман (2012,
2016), Е. В. Душкин (2008-2015), И. И. Калюжный (2013-2016), С. П. Ковалев
(2015), Е. В. Кузьминова (2011-2017), Р. А. Мерзленко (2012-2014),
И. А. Никулин (2002, 2016, 2017), М. П. Семененко (2011-2017),
И. Ф. Хазимухаметова (2008, 2010), И. А. Шкуратова (2010, 2016) и другие.
Изучению проблем гепатопатологий у коров посвящены работы
зарубежных ученых J. K. Darckley (2001), C. K. Reynold (2003), G. Bobe
(2004), B. G. Young (2004), J. R. Aschenbach (2010), G. Weijers (2010),
F. S. Lima (2011) et al.
Вопросами применения антиоксидантов, в качестве средств
профилактики и лечения заболеваний печени занимались М. И. Рецкий
(2008), М. П. Семененко (2011-2017), Е. В. Кузьминова (2011-2017),
А. М. Гертман (2012, 2016), В. С. Авдеенко (2016) и другие. Среди
иностранных ученных наиболее значимые работы F. Fraschini (2002), F. Delco
(2005), S. C. Pradhan (2006), M. J. Zamek-Gliszczynski (2006), Jhy-Wen Wu
(2007), P. Cusack (2009), et al.
Несмотря на наличие работ, посвящѐнных терапии и профилактике
гепатозов у животных, их доля, затрагивающая вопросы применения
антиоксидантов в качестве средств лечения патологий печени чрезвычайно
мала. Поэтому, разработка и внедрение новых антиоксидантных препаратов,
4
обладающих гепатопротекторным действием, продолжает оставаться
актуальной.
Цель и задачи исследования. Целью работы явились разработка,
фармако-токсикологическая оценка и клинико-терапевтическое обоснование
применения нового препарата «Димикар» для профилактики и лечения
гепатозов у коров.
Для достижения данной цели поставлены следующие задачи:
1.
Разработать новый препарат «Димикар» и изучить его фармакотоксикологические свойства.
2.
Провести доклинические испытания препарата «Димикар» на
лабораторных животных.
3.
Изучить эффективность препарата «Димикар» при его
применении для профилактики гепатозов у коров.
4.
Изучить влияние препарата «Димикар» на эффективность
лечения гепатозов у коров, при включении его в комплексные
терапевтические схемы.
Научная новизна. разработан новый препарат «Димикар». Впервые в
ветеринарной практике обоснована возможность его применения в качестве
профилактического средства и в составе комплексной схемы лечения
гепатоза у коров. Получены экспериментальные данные о фармакотоксикологических свойствах димикара, установлено его гепатопротекторное
и антиоксидантное действие на лабораторных животных и у
высокопродуктивных коров. На основании комплексной оценки применения
препарата «Димикар» предложена экономически эффективная схема его
применения в молочном скотоводстве.
Теоретическая и практическая значимость работы. В ходе
выполнения диссертационных исследований, полученные данные,
расширяют и дополняют сведения о применении антиоксидантных
препаратов, в частности их использования для профилактики и в составе
комплексной схемы лечения гепатозов у коров.
Результаты диссертационного исследования апробированы и
используются в практической деятельности ОАО «Урожайное»,
Новоалександровского района, Ставропольского края.
Результаты исследований используются в учебном процессе по курсам
дисциплин «Ветеринарная фармакология. Токсикология» и «Внутренние
незаразные болезни» в ФГБОУ ВО «Ставропольский государственный
аграрный университет», ФГБОУ ВО «Саратовский государственный
аграрный университет», ФГБОУ ВО «Оренбургский государственный
аграрный университет».
Методология
и
методы
исследования.
Диссертационные
исследования выполнены с использованием широкого спектра современных
фармакологических, токсикологических, морфологических, клинических,
функциональных и лабораторных методов исследования с применением
статистического анализа.
5
Основные положения, выносимые на защиту:
1.
По токсикологическим параметрам препарат «Димикар»
относится к малоопасным веществам, имеет слабо выраженную кумуляцию в
организме и не оказывает эмбриотоксического, тератогенного и
раздражающего действия.
2.
В условиях моделирования окислительного стресса и
токсического повреждения печени у животных применение димикара
оказывает выраженный антиоксидантный и гепатопротекторный эффект.
3.
Применение димикара коровам в сухостойный и послеродовой
периоды является эффективным способом профилактики и лечения
гепатозов.
Степень достоверности и апробация результатов. Достоверность,
полученных результатов, подтверждается использованием современных
методов исследования, сертифицированного оборудования и проведением
статистической обработки данных. Результаты исследования опубликованы в
рецензируемых изданиях и апробированы на специализированных научных
конференциях.
Основные положения диссертационной работы были представлены,
обсуждены и положительно охарактеризованы: на кафедре терапии и
фармакологии ФГБОУ ВО «Ставропольский государственный аграрный
университет» (Ставрополь, 2015-2018); 81, 82, 83-й научно-практической
конференции «Аграрная наука – Северо-Кавказскому федеральному округу»
(г. Ставрополь,
2016-2018);
Всероссийской
научно-практической
конференции «Инновационные идеи молодых исследователей для
агропромышленного комплекса России» (г. Пенза, 2017); Международной
научно-практической
конференции
«Инновационные
решения
в
ветеринарной медицине, зоотехнии и биологии в интересах развития
агропромышленного комплекса» (г. Казань, 2017); Всероссийской научнопрактической
конференции
«Продовольственная
безопасность:
от
зависимости к самостоятельности» (г. Орел, 2017); Международной научнопрактической конференции «Аграрная наука – сельскому хозяйству»
(г. Барнаул, 2018); VI Международной научно-практической конференции
«Актуальные проблемы науки и образования в области естественных и
сельскохозяйственных
наук»
(г. Петропавловск,
Казахстан,
2018).
Исследования были представлены и удостоены дипломов I степени на II и III
этапе Всероссийского конкурса на лучшую научную работу среди студентов,
аспирантов и молодых ученых высших учебных заведений Министерства
сельского хозяйства Российской Федерации (г. Махачкала, 2017;
г. Ставрополь, 2017).
Личный вклад соискателя. Диссертационная работа является
результатом
исследований
автора.
Организация
и
проведение
экспериментальной части работы, а также статистическая обработка
результатов, их интерпретация выполнены лично соискателем. Доля участия
автора при выполнении работы составляет 85%.
6
Публикация
результатов
исследования.
По
материалам
диссертационной работы опубликовано 12 научных работ, в том числе 7
статей в журналах, входящих в Перечень российских рецензируемых
научных изданий, в которых должны быть опубликованы основные научные
результаты диссертаций на соискание ученых степеней кандидата и доктора
наук. Разработаны и изданы 1 методические рекомендации. Получен 1 патент
РФ на изобретение.
Объем и структура диссертации. Работа изложена на 191 страницах
компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы,
собственных исследований, заключения, списка литературы, списка
условных сокращений и обозначений, приложений. Диссертация
иллюстрирована 26 таблицами и 47 рисунками, включает 6 приложений.
Список литературы содержит 241 источник, в том числе 69 иностранных
авторов.
2 СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1 Материалы и методы исследований
Работа выполнена в период с 2015 по 2018 г. на кафедре терапии и
фармакологии, в виварии, Научно-диагностическом и лечебном
ветеринарном центре ФГБОУ ВО «Ставропольский государственный
аграрный
университет»
и
в
условиях
ОАО
«Урожайное»,
Новоалександровского района, Ставропольского края (рисунок 1).
Рисунок 1 – Алгоритм исследований
7
В лабораторных, научно-хозяйственных и производственных опытах
использовано 230 белых мышей, 232 белых лабораторных крыс, 124 кролика
и 50 коров черно-пестрой породы. Опытные группы формировались с учетом
принципа аналогов.
Все диссертационные исследования осуществлялись в соответствии с
Директивой 2010/63/EU Европейского парламента и Совета Европейского
Союза от 22.09.2010 по охране животных, используемых в научных целях,
Европейской конвенцией по защите позвоночных животных, используемых в
экспериментальных и других научных целях и Мерах по дальнейшему
совершенствованию организационных форм работы с использованием
экспериментальных животных.
Содержание,
уход
и
кормление
лабораторных
животных
осуществлялось в соответствии с ГОСТ 33215-2014 и ГОСТ 33216-2014.
Рационы кормления лабораторных животных составлены в соответствии с
ГОСТ Р 50258-92.
Фармако-токсикологические свойства препарата «Димикар» оценивали
методом определения острой токсичности на белых мышах и белых крысах,
определения кумулятивного эффекта на белых крысах, изучения
раздражающих свойств на кроликах, эмбриотоксических и тератогенных
свойств на белых крысах согласно «Методических указаний по
токсикологической оценке новых препаратов для лечения и профилактики
незаразных болезней животных» (по В. Т. Самохину, 1987).
Экспериментальное моделирование окислительного стресса у кроликов
проводили путем перорального введения сульфата железа (II). Для изучения
гепатопротекторного
действия
препарата
«Димикар»
провели
экспериментальное моделирование острого токсического повреждения
печени (по Р. У. Хабриеву, 2005).
Определение уровня гемоглобина, количества эритроцитов и
лейкоцитов проводили на автоматическом гематологическом анализаторе
«PCE-90Vet» (Япония). Лейкоцитарную формулу выводили при подсчете
лейкоцитов в мазках, окрашенных по Романовскому-Гимзе (И. П. Кондрахин,
Н. В. Курилов, 1985).
Биохимические исследования крови проводили на автоматическом
биохимическом анализаторе «ACCENT-200» (Польша) с использованием
комплекта реагентов «Cormay» (Польша). Определение белковых фракций в
сыворотке крови проводили турбидиметрическим (нефелометрическим)
методом (по И. П. Кондрахину, 2004). Определение кетоновых тел в крови –
йодометрическим методом (по И. П. Кондрахину, 2004).
При определении показателей антиоксидантной защиты в крови
пользовались методиками, изложенными в «Методических положениях по
изучению процессов свободнорадикального окисления и системы
антиоксидантной защиты организма» (по М. И. Рецкий и др., 2010). На
спектрофотометре UNICO 2800 UV/VIS (США) определяли активность
каталазы (КФ 1.11.1.6) по М. А. Королюк и соавт., (1988), активность
8
супероксиддисмутазы (КФ 1.15.1.1.) в эритроцитах – по О. П. Макаревичу,
П. П. Голикову, (1983), глутатионпероксидазы (КФ 1.11.1.9) в крови
определяли по Г. О. Кругликова, И. М. Штутман, (1976), содержание
восстановленного глутатиона – по Ф. И. Гимерих, (1967), концентрацию
диеновых конъюгатов в крови – по Л. В. Орлову, (1980), концентрацию
малонового диальдегида в крови – по Л. М. Двинской, Л. Н. Никифоровой,
(1980) и концентрацию флуоресцирующих оснований Шиффа в сыворотке
крови определяли по Е. И. Львовской и соавт., (1991).
Для гистологического исследования печени белых мышей и коров
брали материал, который фиксировали в 10 % забуференном растворе
формалина. Изготовили срезы тканей печени, через спирты в возрастающей
концентрации и ксилол, затем заливали в гистологическую среду
«Гистомикс» на три часа при t=62°C в термостат. Из полученных блоков
делали гистологические срезы, которые окрашивали гематоксилином и
эозином. С каждого препарата печени получили цифровые снимки на
цифровом микроскопе Axio Lab.A1 (Германия).
Клиническое исследование печени коров проводили методом
перкуссии, при помощи плессиметра и перкуссионного молоточка, используя
технику «стокатто», для определения границ органа.
Функциональную активность печени определяли постановкой цинксульфатной осадочной печеночной пробы (по И. П. Кондрахину, 2004).
Ультразвуковое исследование печени у коров проводили с
использованием портативного ультразвукового сканера DRAMINSKI 4VET
mini (Польша) со сменным электронным зондом «Microconvex» с частотой 49 MГц. Оценивали размеры печени, эхогенность, изменение структуры,
сосудистый рисунок. Биопсию печени у коров выполняли на стоячем
животном с помощью троакара Г. Л. Дугина.
Расчет экономической эффективности применения препарата
«Димикар» у коров при гепатозах проводили в соответствии с Методикой
определения экономической эффективности ветеринарных мероприятий (М.,
1997).
Статистический анализ проводили с помощью пакета статистических и
прикладных программ «STATISTICA 6.0» (США). Оценку значимости
различий средних величин определяли по t-критерию Стъюдента. Различия
считались статистически значимыми при р≤0,05.
2.2 РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
2.2.1 Разработка препарата «Димикар»
Препарат «Димикар» разработан на кафедре терапии и фармакологии
Ставропольского государственного аграрного университета. Изготовлен
опытный образец препарата. По внешнему виду препарат «Димикар»
представляет собой светло-коричневую жидкость, без запаха; не образует
осадка.
9
Препарат «Димикар» готовят путем смешения компонентов в
асептических условиях и растворения в воде для инъекций при следующем
соотношении компонентов в мас. %: 2,6-дитретбутил-4-нонилфенол – 9,0;
фенил-трет-бутилнитрон – 4,0; 2,4,6,8-Тетраметил-2,4,6,8-тетраазабицикло(3,3,0)-октадиселенон-3,7 – 12,5; β-каротин – 1,5; солютол HS15 – 7,0;
поливинилпирролидон – 0,3; вода для инъекций – остальное.
2.2.2 Изучение токсикологических свойств препарата «Димикар»
2.2.2.1 Изучение параметров острой токсичности препарата
«Димикар»
Для определения макимально переносимой дозы димикара
использовали клинически здоровых лабораторных животных: 144 белых
мышей и 96 белых крыс предварительно прошедших 14-дневный карантин.
Все животные были разделены на опытные и контрольные группы по восемь
особей в каждой с учетом принципа аналогов. Мышам препарат вводили
внутрижелудочно, крысам – внутримышечно.
Установлено, что максимально переносимая доза для белых мышей
составила 1580 мг/кг по действующему веществу, а для былых крыс – 1659
мг/кг по действующему веществу, они были приняты стартовыми для
проведения исследования по определению летальных доз препарата.
Опыт по определения летальных доз проводили на 56 белых мышах и
56 белых крысах. Каждый вид животных разделили на семь групп по восемь
особей в каждой. Способ введения препарата был аналогичен с предыдущим
опытом по определению максимально переносимой дозы.
В опытах, проведенных на белых мышах и белых крысах установлены
следующие параметры острой токсичности димикара, представленные в
таблице 1.
Таблица 1 – Параметры острой токсичности препарата «Димикар,
мг/кг по действующему веществу
Вид животных
Параметры токсичности
SLD50
МПД
LD16
LD50
LD84
LD100
Белые мыши
1580
3190
5312
7370
9044
65,31
Белые крысы
1659
3353
5587
7753
9516
68,75
Исходя из результатов опыта по изучению острой токсичности
препарата «Димикар» установлено, что в соответствии с ГОСТ 12.1.007-76
«Вредные вещества» по степени воздействия на организм он относится к 4
классу опасности – вещества малоопасные.
2.2.2.2 Определение кумулятивного эффекта препарата «Димикар»
Определение кумулятивного эффекта препарата проводили на 20 белых
крысах. Все животные были разделены на две группы по десять особей в
каждой. При выборе дозировки для проведения эксперимента учитывали
10
параметры острой токсичности препарата. Белые крысы первой группы
служили контролем и им вводили 0,5 мл воды для инъекций. Животным
второй группы вводили препарат внутримышечно, рекомендуемым для
практики способом, один раз в сутки, с ежедневным чередованием левой и
правой задней лапки. Первые четыре дня вводили дозу, составляющую 1/10
LD50, затем на 5-8 сутки дозу повысили в 1,5 раза. На девятый день дозу
повысили в два раза и вводили шесть дней. На 15 сутки дозу препарата
довели до 1/5 LD50 и вводили ее белым крысам до выявления кумулятивного
эффекта, который установили на 20 сутки по 50% летальности подопытных
животных.
На основании полученных данных препарат «Димикар» можно отности
к 4 группе, к веществам со слабо выраженной степенью кумуляции согласно
«Классификации химических веществ по степени кумуляции».
2.2.2.3 Изучение раздражающих свойств препарата «Димикар»
Изучение раздражающих свойств препарата «Димикар» проводили на
четырех кроликах. Исследования проводили методом окраски поверхности
кожи трепановым синим. После нанесения препарата кожа всех испытуемых
кроликов никакой посторонней окраски не приобрела, что свидетельствует
об отсутствии раздражающего эффекта.
2.2.2.4 Изучение эмбриотоксического и тератогенного действия
препарата «Димикар»
Изучение эмбриотоксического и тератогенного действия препарата
«Димикар» проводили на крысах в плодном и постнатальном периодах для
оценки степени влияния препарата на репродуктивную функцию организма.
Исследования проведены на 40 половозрелых белых крысах – самках, линии
Wistar. Начало беременности устанавливали по наличию сперматозоидов во
влагалищном мазке. Беременным крысам из второй группы вводили препарат
«Димикар», внутримышечно, в дозе из расчета 1659 мг/кг по действующему
веществу, однократно. Животные из первой группы служили контролем, им
вводили аналогичный объем воды для инъекций.
На 20-ый день беремености половину беременных самок из каждой
группы умервщляли путем декапитации, вскрывали и проводили учет по
основным показателям эмбриогенеза (таблица 2).
По результатам осмотра плодов, установили, что отклонений от
нормального развития и наличие уродств у животных из первой и второй
групп не зафиксировано.
После рождения крысят наличие аномалий и уродств у новорожденных
крысят не отмечено в обеих группах. По внешним клиническим признакам
физиологическое развитие крысят из первой и второй групп не имело
значительных различий.
11
Таблица 2 – Результаты эмбриотоксического исследования препарата
«Димикар», (n=20)
№
Показатели
Группа № 1
Группа № 2
п/п
(контроль)
(димикар)
Вскрытие н 20 день беременности
1. Количество беременных самок
10
10
2. Среднее количество желтых тел на 1
11,8
12,3
самку
3. Нормальных зародышей всего, %
94,5
95,69
4. Резорбированных плодов всего, %
5,5
4,31
Рождение в срок
1. Число родивших самок
10
10
2. Число рожденных крысят
116
121
3. Рожденных живыми, %
88,79
92,56
4. Средняя масса крысят при рождении, г
5,13±0,31
5,69±0,34
5. Средняя длина туловища, мм
48,3±2,90
52,3±3,14
6. Мертворожденных всего
13
9
7. Средняя масса, г
3,89±0,23
4,15±0,25
8. Средняя длина туловища, мм
39,5±2,37
42,7±2,56
Таким образом, на основании проведенного исследования,
установлено, что применение препарата «Димикар» беременным животным
не оказывает отрицательного влияния на эмбриональное развитие плодов и
постнатальный период жизни крысят.
2.2.3 Изучение влияния препарата «Димикар» на гематологические
и биохимические показатели крови кроликов
Для проведения опыта по определению оптимальной терапевтической
дозы препарата «Димикар» сформировали пять групп кроликов возрастом 4-6
месяцев, по десять животных в каждой группе. Интервал для нахождения
оптимальной терапевтической дозы препарата «Димикар» составил от 3,0 до
4,2 мг/кг массы тела по действующему веществу. Кровь для лабораторного
исследования получали до введения препарата, через одни, трое, пять и
десять суток после применения. В крови определяли содержания щелочной
фосфатазы, общего билирубина, глюкозы и малонового диальдегида.
В итоге, по совокупности изменений биохимических показателей в
крови у кроликов установлено, что оптимальной терапевтической дозой
препарата «Димикар» является 3,4 мг/кг, которая далее использовалась при
постановке экспериментов по доклиническим и клиническим испытаниям
препарата.
Для изучения влияния препарата на показатели крови кроликов,
сформировали две группы, по 20 условно клинически здоровых животных в
каждой в возрасте 4-5 месяцев. Животным из второй группы вводили
препарат «Димикар» в дозе 0,16 мл, из расчета 3,4 мг/кг, внутримышечно,
12
однократно. Кролики из первой группы служили контролем, им вводили
соответствующий объем воды для инъекций.
Через 20 и 30 суток после введения препарата разница между первой и
второй группой по соотношению коэффициента де Ритиса достигло
статистически достоверных отличий, разница в показателях составила
14,74 % и 18,09 % (таблица 3). Динамика содержания щелочной фосфатазы в
крови кроликов из второй группы практически не изменялась, а в
контрольной группе – за весь период эксперимента произошло увеличение на
15,44 %. Возрастание ее активности на фоне повышения концентрации
аспартаминотрасферазы и аланинаминотрасферазы может свидетельствовать
о функциональных нарушениях в печени. После применения димикара
концентрация щелочной фосфатазы во второй группе возросла на 2,03 % в то
время как в первой группе произошло ее увеличение за период исследования
на 20,41 %.
Таблица 3 – Биохимические показатели крови у кроликов после применения
димикара в дозе 3,4 мг/кг по ДВ, (n=20)
Активность
ГаммаглутатионЩелочная глутамилМалоновый
№
Коэффициент
пероксидазы,
фосфатаза,
трансдиальдегид,
группы
де Ритиса
мкмоль
G-SH
ед/л
фераза,
мкмоль/л
3
ед/л
/ лмин10
До введения димикара
1.
1,89±0,10
58,89±2,96 5,34±0,18
8,01±0,82
1,56±0,07
2.
1,83±0,09
58,23±2,93 5,41±0,17
8,14±0,71
1,50±0,06
Через 5 суток после введения димикара
1.
1,87±0,10
62,06±3,09 5,52±0,22
8,02±0,68
1,58±0,09
2.
1,78±0,09
57,54±2,90 5,34±0,20 15,57±0,96*
1,33±0,08*
Через 10 суток после введения димикара
1.
1,92±0,11
65,43±3,29 5,67±0,25
7,97±0,91
1,62±0,10
2.
1,70±0,09
58,10±3,12 5,46±0,19 15,02±0,87*
1,22±0,07*
Через 20 сутки после введения димикара
1.
1,90±0,11
66,24±3,33 6,12±0,27
7,99±0,77
1,67±0,08
2.
1,62±0,08*
58,46±2,94 5,55±0,21 14,63±0,92*
0,98±0,06*
Через 30 суток после введения димикара
1.
1,88±0,10
67,98±3,41 6,43±0,22
8,04±0,81
1,68±0,10
2.
1,54±0,08*
58,94±2,96 5,52±0,21 14,28±0,85*
1,06±0,06*
Примечание: *p ≤ 0,05 – разница статистически значима в сравнении с
контрольной группой
Наиболее значительными изменениями были относительно динамики
показателей, характеризующих функционирование системы антиоксидантной
защиты организма кроликов. Уже через 5 дней после введения димикара в
крови кроликов из второй группы активность фермента увеличилась
13
практически в 2 раза. К 30-ому дню наблюдения активность фермента во
второй группе увеличилась на 75,43 %, а в первой – оставалась практически
на первоначальном уровне. За весь период эксперимента содержание
малонового диальдегида в группе, где вводили препарат «Димикар»,
снизилась на 29,33 %, а в контрольной группе возросла на 7,69 %.
Проведенные исследования по изучению влияния димикара на
организм кроликов могут свидетельствовать о том, что его применение
положительно отражается на динамике показателей крови животных,
характеризующих функциональное состояние печени. Его введение
способствовало
нормализации
и
стабилизации
гематологических
показателей, а также оптимизации процессов трансаминирования у кроликов,
приводило к нормализации уровня белков, глюкозы и некоторых продуктов
обмена. Введение препарата «Димикар» способствовало повышению
активности ферментативного звена системы антиоксидантной защиты и
уменьшению концентрации побочных продуктов перекисного окисления
липидов в крови животных. В опыте установлено, что использование
димикара способствует увеличению прироста живой массы у животных.
2.2.4 Оценка действия препарата «Димикар» при экспериментальном
моделировании окислительного стресса у кроликов
Экспериментальное моделирование окислительного стресса проводили
для изучения возможности его фармакологической коррекции с
использованием препарата «Димикар». Для постановки эксперимента
использовали 30 кроликов в возрасте 7-9 месяцев, которых разделили на 3
группы по 10 животных в каждой. Животные из первой группы служили
контролем. У кроликов из второй группы проводили моделирование
окислительного стресса, путем перорального введения раствора сульфата
железа (II) в дозе 0,5 мл на 1 кг массы тела, из расчета 0,04 мг на 1 мл воды
для инъекций, один раз в сутки, на протяжении 7 дней. Животных третьей
группе подвергли аналогичной схеме воздействия сульфатом железа (II), но,
начиная со второго дня исследований, вводили препарат «Димикар»,
внутримышечно, в дозе 3,4 мг/кг массы тела.
Концентрация продуктов перекисного окисления в крови у кроликов
постепенно увеличивалась во всех группах. Содержание диеновых
конъюгатов в крови животных из первой группы за весь период
эксперимента увеличилось на 3,23 %, во второй группе – на 40,0 %, а в
третьей – на 15,63 %, соответственно. Концентрация малонового диальдегида
увеличилась в первой группе на 1,21 %, во второй – на 21,47 %, а в третьей –
на 9,76 %. В контрольной группе концентрация флуоресцирующих
оснований Шиффа практически не изменялась и находилась в равных
пределах, а во второй и третьей группах она увеличилась на 29,63 % и
11,54 %, соответственно.
14
Динамика массы тела у кроликов из первой группы за весь период
увеличилась на 1,6 %, во второй группе – уменьшилась на 5,3 %, а в третьей
– на 3,2 %, соответственно.
Таким образом, установлено, что применение препарата «Димикар»
кроликам в условиях моделирования окислительного стресса сопровождается
выраженным антиоксидантным эффектом, исходя из чего может быть
рекомендован для клинического испытания на продуктивных животных в
качестве антиоксидантного препарата.
2.2.5 Оценка профилактического действия препарата «Димикар»
при экспериментальном моделировании острого токсического
поражения печени у белых мышей
В эксперименте использовали 30 белых мышей, которые разделили на
три группы по десять животных в каждой. Мыши из первой группы служили
контролем. У животных из второй и третьей группы провели моделирование
острого токсического поражения печени. Для этого им вводили 50% раствор
CCL4 на оливковом масле, подкожно на протяжении трех дней, в дозе 2 мг/кг
массы тела, в расчете на одну мышь доза составила 0,06 мл. Белым мышам из
третьей группы препарат «Димикар» профилактически применяли за 1 час до
введения и сразу после введения раствора CCL4, внутримышечно, в дозе 0,34
мл, из расчета 3,4 мг/кг массы тела. Через сутки после последнего введения
димикара проводили умещвление животных методом декапитации, с
последующим отбором тканей печени для гистологического исследования.
В результате проведенной микроскопии установлено, что фрагменты
тканей печени от животных из первой группы имеют нормальное
гистологическое строение, представленны истинными дольками, строение
балочное, без видимых патологических изменений в гепатоцитах (рисунок 2).
В микропрепаратах, полученных от белых мышей из второй группы,
установлено токсическое повреждение печени. Отмечено нарушение
дольчатого строения, развитие жировой дистрофии (рисунок 3). У животных
из третьей группы на тканях отмечена репаративная рененерация с
образованием соединительной ткани вокруг некротизированной, образование
псевдодолек (рисунок 4).
Микроскопическое строение тканей печени.
Окраска гематоксилином и эозином
Рисунок 2 – Первая
Рисунок 3 – Вторая
Рисунок 4 – Третья
группа. Ув. 5х/0,12
группа. Ув. 20х/0,45
группа. Ув. 5х/0,12;
15
Результаты
эксперимента
указывают
на
выраженное
гепатопротекторное действие препарата «Димикар» и подтверждают
целесообразность изучения его эффективности при использовании в качестве
средства лечения и профилактики заболеваний печени у животных.
2.2.6 Изучение эффективности препарата «Димикар» при
профилактике гепатозов у коров
Объектом исследований явились коровы черно-пестрой породы, в
возрасте 4-6 лет, массой тела 400-500 кг, в период сухостоя с признаками
нарушения функциональной активности печени. Диагноз ставили на
основании клинического исследования, проведенной ультразвуковой
диагностики печени и по результатам постановки цинк-сульфатной
осадочной печеночной пробы. Из 180 стельных коров было выявлено 20
коров, с признаками гепатоза, которых с учетом принципа аналогов
разделили на две группы. Животные из второй группы получали препарат
«Димикар» внутримышечно, в дозе 1 мл на 100 кг живого веса, за 60 и 30
дней до предполагаемых родов и сразу после родов. Коровы из первой
группы служили контролем, им аналогично вводили стерильный
физиологический раствор. Отбор крови у коров осуществляли до введения
препаратов, за 30 и 15 суток до предполагаемых родов, сразу после родов и
через 15 и 30 суток после родов. Кровь от животных получали при помощи
вакуумных систем «S-Monovette» с активатором свертываемости («Sarstedt»,
Германия), в утреннее время до кормления.
Для определения профилактической эффективности димикара провели
перкуссию, ультразвуковое исследование печени, гематологическое и
биохимическое исследование крови, постановку цинк-сульфатной осадочной
печеночной пробы. По завершению эксперимента у коров провели биопсию
печени для последующего проведения гистологического исследования.
Результаты, полученные в ходе эксперимента по определению
профилактической эффективности димикара, свидетельствуют о том, что
применение препарата положительно отразилось на белковом обмене у
животных. Динамика цинк-сульфатной осадочной печеночной пробы
характеризовалась уменьшением ее объемов. В первой группе за весь период
эксперимента данный показатель уменьшился на 3,97 %, а во второй группе –
увеличился на 8,72 % (таблица 4).
У животных из первой группы концентрация холестерина за 15 дней до
отела увеличилась на 12,89 %, а из второй группы – уменьшилась на 8,79 %.
Сразу после родов во всех группах концентрация холестерина возросла: в
контрольной – еще на 13,9 %, а в группе, где применяли димикар, на 3,92 %,
соответственно. За 30 суток до родов в первой группе уровень глюкозы
уменьшился на 3,56 %, а в группе, где вводили димикар – возрос на 5,71 %.
После отела концентрация данного показателя обмена веществ во второй
группе достигла достоверных различий, составив 2,47 ммоль/л, что на
21,08 % больше, чем в контрольной группе. За весь период эксперимента в
16
первой группе уровень общего билирубин возрос на 26,75 %, а во второй –
уменьшился на 0,37 %, соответственно, достоверная разница между
группами составила 28,61 %.
Таблица 4 – Биохимические показатели крови и результаты постановки цинксульфатной пробы у коров, после применения димикара в дозе 1 мл на 100 кг
массы тела, (n=10)
ЦинкОбщий
Малоновый
№
Холестерин,
Глюкоза,
сульфатная
билирубин, диальдегид,
группы
ммоль/л
ммоль/л
проба, мл
ммоль/л
мкмоль/л
За 60 суток до предполагаемых родов
1.
1,51±0,08
3,57±0,18
2,51±0,17
8,30±0,43
1,39±0,09
2.
1,49±0,07
3,64±0,19
2,45±0,15
8,21±0,42
1,44±0,10
За 30 суток до предполагаемых родов
1.
1,52±0,08
3,81±0,20
2,42±0,15
8,75±0,45
1,45±0,10
2.
1,54±0,08
3,26±0,17
2,59 ±0,18
8,04±0,40 1,15±0,08*
За 15 суток до предполагаемых родов
1.
1,50±0,08
4,03±0,21
2,33±0,14
9,46±0,48
1,48±0,10
2.
1,59±0,08
3,32±0,18*
2,56±0,19
8,08±0,41* 1,01±0,07*
Сразу после родов
1.
1,46±0,07
4,59±0,23
2,04±0,12
10,39±0,52 1,57±0,11
2.
1,56±0,08
3,45±0,19*
2,47±0,16*
8,14±0,42* 1,06±0,08*
Через 15 суток после родов
1.
1,44±0,07
4,96±0,25
1,83±0,10
10,53±0,54 1,62±0,12
2.
1,58±0,08
3,30±0,16*
2,40±0,15*
8,20±0,43* 0,98±0,07*
Через 30 суток после родов
1.
1,45±0,07
4,88±0,24
1,85±0,11
10,52±0,53 1,60±0,11
2.
1,62±0,08
3,32±0,17*
2,48±0,16*
8,18±0,41* 0,99±0,07*
Примечание: *p ≤ 0,05 – разница статистически значима в сравнении с
контрольной группой
Концентрация малонового диальдегида в крови коров из первой
группы за 30 суток до родов увеличилась на 4,32 %, а у животных из второй
группы, где применяли димикар, уменьшилась – на 20,14 %. Сразу после
родов содержание малонового диальдегида в крови контрольной группы
возрос еще на 8,28 %, а во второй – снизился на 7,83 %, соответственно.
По результатам лабораторного и ультразвукового исследования, с
учетом клинического состояния и молочной продуктивности, одна корова из
первой группы была направлена на вынужденный убой, в связи тяжелыми
нарушениями функционального состояния печени, вследствие гепатоза. У
остальных животных из двух групп провели пункционную биопсию печени.
У животных из первой группы в центре долек отмечается нарастание
дистрофических изменений в цитоплазме гепатоцитов. Определены мелкие
капли липидов (рисунок 5). На периферии процесс дистрофии нарастает с
17
образованием в цитоплазме гепатоцитов крупных капель липидов.
Максимальную степень жировой дистрофии зафиксировали у вынужденно
убитой коровы (рисунок 6). Фрагменты тканей печени коров из второй
группы, которым применяли препарат «Димикар», отличался нормальным
гистологическим строением, у некоторых животных на периферии долек в
цитоплазме гепатоцитов определены гранулы липидов (рисунок 7).
Микроскопическое строение тканей печени.
Окраска гематоксилином и эозином.
Рисунок 5 –
Рисунок 6 – Жировая
Рисунок 7 –
Мелкокапельное
дистрофия гепатоцитов Пылевидное ожирение.
ожирение гепатоцитов.
(гепатоз). Ув. 4х/0,65
А – ув. 5х/0,12
Ув. 5х/0,12;
Далее произвели экономические расчеты для оценки рентабельности
использования препарата «Димикар» при профилактике гепатозов у коров.
Установлено, что экономический эффект от применения препарата
«Димикар» для профилактики гепатоза у коров составляет 116,8 рублей
прибыли на 1 рубль затрат.
2.2.7 Влияние препарата «Димикар» на эффективность
комплексной схемы лечения гепатозов у коров
Объектом исследований явились коровы черно-пестрой породы, в
возрасте 4-6 лет, массой тела 400-500 кг. Эксперименты проводились в
послеродовой период у животных с клиническими признаками гепатоза.
Постановку диагноза на гепатоз производили на основании данных,
полученных при пальпации, перкуссии и ультразвуковой диагностике
печени. Из группы отелившихся коров было выявлено 30 животных, больных
гепатозом, которых с учетом принципа аналогов разделили на три группы по
десять голов в каждой. Коровы первой группы служили контролем, им
применяли принятую в хозяйстве схему лечения, включающая введение
препарата «Катозал» (Германия), внутримышечно, в дозе 5 мл на 100 кг
массы тела, в сочетании с применением препарата «Кальфосет» (Словения),
внутривенно, в дозе 12,5 мл на 100 кг живого веса, один раз в сутки, в
течение пяти дней, сразу после отела. Животным из второй группы
применяли препарат «Гепатоджект», внутривенно, в дозе 25 мл на 100 кг
живого веса, в течение пяти дней, сразу после родов. Животным из третьей
18
группы комплексно вводили препараты «Димикар» и «Гепатоджект».
Димикар вводили внутримышечно, в дозе 1 мл на 100 кг массы тела, в
течение пяти дней, начиная с первого дня послеродового периода,
гепатоджект применяли по аналогичной схеме, как и у животных из второй
группы. Отбор крови у коров осуществляли сразу после родов (до лечения),
через 7, 14 и 21 сутки после родов.
В результате проведенных биохимических исследований установили,
что применение препаратов способствовало положительной динамике
показателей белкового обмена в крови коров (таблица 5). Через семь суток
после родов количество общего белка в крови животных из первой группы
увеличилось на 7,69 %, во второй группе – на 16,93 %, а в третьей – на
23,26 %, соответственно.
Таблица 5 – Динамика содержания ферментов и показателей системы
антиоксидантной защиты в крови коров после лечения гепатозов, (n=10)
Активность
ГаммаМалоноглутатион№
Общий
Щелочная глутамилвый диальпероксидазы,
групп
белок,
фосфатаза,
трансдегид,
мкмоль G-SH /
ы
г/л
ед/л
фераза,
мкмоль/л
ед/л
лмин103
После родов
1.
62,41±3,12 279,4±14,0
29,7±1,5
7,25±0,36
2,21±0,12
2.
63,07±3,15 281,3±14,1
29,1±1,5
7,13±0,37
2,23±0,12
3.
62,94±3,14 286,2±14,3
30,3±1,6
7,36±0,35
2,20±0,11
Через 7 суток после родов
1.
67,21±3,36 205,3±10,3
27,1±1,4
6,74±0,34
2,10±0,11
2.
73,75±3,69
181,0±9,1
25,6±1,3
6,80±0,35
2,08±0,10
3.
77,58±3,88 164,5±8,2*
23,7±1,2
14,36±0,77*# 1,47±0,08*#
Через 14 суток после родов
1.
68,49±3,42
179,3±9,0
22,7±1,2
6,21±0,31
2,07±0,11
2.
76,02±3,80
155,9±7,8
20,4±1,0
6,27±0,32
2,04±0,10
3.
81,54±4,08* 136,8±6,9*
19,8±1,0
14,19±0,76*# 1,39±0,07*#
Через 21 сутки после родов
1.
67,26±3,36
188,1±9,4
23,9±1,2
6,17±0,31
2,12±0,12
2.
75,73±3,79
168,5±8,5
21,3±1,1
6,23±0,31
2,06±0,11
3.
80,62±4,03* 142,4±7,1* 20,5±1,0*
14,05±0,75*# 1,41±0,08*#
Примечание: *р ≤ 0,05 – разница статистически значима в сравнении с
контрольной группой
#p ≤ 0,05 – разница статистически значима в сравнении с данной и
второй группами
Высокое содержание щелочной фосфатазы после родов у животных
может свидетельствовать о патологии обменных процессов в печени. После
лечения животных, в крови коров из первой группы содержание данного
19
фермента снизилось на 26,52 %, в группе, где применяли «Гепатоджект»,
уменьшение составило 35,66 %, а в группе, где комплексно применяли
«Димикар» и «Гепатоджект» снижение составило 42,52 %. Аналогичная
динамика была относительно содержания гамма-глутамилтрансферазы. За
весь период эксперимента в крови животных из первой группы концентрация
данного фермента снизилась на 19,53 %, во второй группе – на 26,8 %, а в
третьей группе – на 32,34 %, соответственно.
За весь период эксперимента активность глутатионпероксидазы у
животных из первой и второй групп снизилась на 14,9 % и 11,51 %, а у коров
из третьей группы, наоборот, увеличилась на 90,9 %, соответственно. Через
семь дней после родов концентрация малонового диальдегида у коров из
третьей группы уменьшилась на 33,18 %, а через 14 дней – еще на 5,44 %.
Содержание малонового диальдегида в крови животных из первой и второй
групп через семь дней после родов снизилось на 4,98 % и 6,73 %, затем
значения по данному показателю стали возрастать.
При ультразвуковом исследовании у 60 % коров из первой группы
были обнаружены мелкие очаги жировой инфильтрации, в размерах не более
2,5 x 1,5 мм. Отмечена зернистость и повышение эхогенности печени
(рисунок 8). У 30 % животных из второй группы также обнаружены мелкие
очаги жировой дистрофии гепатоцитов, размеры которых не превышали
1,5 x 1,0 мм. Сосудистый рисунок выражен слабо (рисунок 9). Результаты
ультразвуковой диагностики печени у коров из третьей группы указывали на
наличие регенеративных процессов в паренхиме органа. Края печени были
оформленные, четкие и ровные, легко ограничивающиеся от окружающих
тканей. Эхоструктура печени имела гомогенное строение с одинаковым
распределением сигналов по интенсивности. Сосуды изображены
равномерно (рисунок 10). У коров из третьей группы визуализируемых
очагов жировой инфильтрации не обнаружено.
Рисунок 8 – Печень
коровы из первой
группы. Зернистость и
повышенная
эхогенность
Рисунок 9 – Печень
коровы из второй
группы. Слабо
выраженный
сосудистый рисунок
Рисунок 10 – Печень
коровы из третьей
группы. Выраженный
сосудистый рисунок
Экономическая эффективность проведения лечебно-терапевтических
мероприятий при гепатозе коров в первой группе составила 15,57 рублей
прибыли на 1 рубль затрат, второй группе прибыль составила 20,9 рублей на
1 рубль затрат, а в третьей группе, где применяли препарат «Димикар» в
20
сочетании с гепатопротектором
22,51 рубля на 1 рубль затрат.
«Гепатоджект»
прибыль
составила
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
1. Разработан препарат «Димикар», включающий 2,6-дитретбутил-4нонилфенол – 9,0 %; фенил-трет-бутилнитрон – 4,0 %; 2,4,6,8-Тетраметил2,4,6,8-тетраазабицикло-(3,3,0)-октадиселенон-3,7 – 12,5 %; β-каротин –
1,5 %; солютол HS15 – 7,0 %; поливинилпирролидон – 0,3 %; вода для
инъекций – остальное; представляющий собой светло-коричневую жидкость,
без запаха; не образующий осадка.
2. Препарат «Димикар» относится к 4 классу опасности по ГОСТ
12.1.007-76, LD50 при однократном внутрижелудочном введении для белых
мышей составила 5312 мг/кг, а для белых крыс при однократном
внутримышечном введении – 5587 мг/кг; обладает слабой степенью
кумуляции; не оказывает раздражающего действия; не влияет на
эмбриональное развитие плодов и постнатальный период жизни потомства.
3. Оптимальной терапевтической дозой димикара является 3,4 мг/кг
массы тела по действующему веществу. Введение препарата способствует
стимуляции гемопоэза, стабилизации белкового обмена, нормализации
динамики
ферментов
переаминирования.
Применение
препарата
положительно
отражается
на
углеводном
обмене,
показателях,
характеризующих функциональное состояние печени животных, приводит к
активации ферментативного звена антиоксидантной защиты и снижению
концентрации продуктов перекисного окисления липидов.
4. При экспериментальном моделировании окислительного стресса
препарат «Димикар» обладает выраженным антиоксидантным эффектом,
заключающимся в увеличении активности каталазы, супероксиддисмутазы,
глутатионпероксидазы,
повышению
содержания
восстановленного
глутатиона и снижении концентрации диеновых конъюгатов, малонового
диальдегида, флуоресцирующих оснований Шиффа.
5. При экспериментальном токсическом повреждении печени препарат
«Димикар» обладает гепазащитным действием, способствует регенерации
поврежденных гепатоцитов и может использоваться в качестве
гепатопротекторного средства.
6. Применение препарата «Димикар» в терапевтической дозе 1 мл на
100 кг массы тела, внутримышечно, однократно, коровам за 60 и 30 суток до
предполагаемых родов и сразу после отела способствует уменьшению
заболеваемости гепатозами.
7. Применение схемы лечения, включающей использование препарата
«Димикар» внутримышечно, в дозе 1 мл на 100 кг массы тела,
внутримышечно, в сочетании с введением гепатопротектора «Гепатоджект»,
в дозе 25 мл на 100 кг живого веса, внутривенно, на протяжении пяти дней
сразу после родов, один раз в сутки, является эффективным способом
терапии гепатозов у коров.
21
Практические предложения
1. Молочному животноводству предложен новый препарат «Димикар»
на основе 2,6-дитретбутил-4-нонилфенола, фенил-трет-бутилнитрона, 2,4,6,8Тетраметил-2,4,6,8-тетраазабицикло-(3,3,0)-октадиселенон-3,7 и β-каротина.
2. Препарат «Димикар» рекомендуется применять с профилактической
целью сухостойным коровам за 60 и 30 суток до предполагаемых родов и
сразу после отела, в дозе 1 мл на 100 кг массы тела, внутримышечно,
однократно. Для лечения гепатозов у коров его рекомендуется применять в
комплексной схеме, в дозе 1 мл на 100 кг массы тела, внутримышечно, в
сочетании с введением гепатопротектора «Гепатоджект», в дозе 25 мл на
100 кг живого веса, внутривенно, на протяжении пяти дней сразу после
родов, один раз в сутки.
3. Полученные результаты по разработке, фармако-токсикологической
оценке, изучению воздействия препарата на организм лабораторных
животных, влияния его на развитие гепатозов у молочных коров могут быть
использованы в учебном процессе высших учебных заведений при
подготовке специалистов по специальности «Ветеринария» и бакалавров по
направлению «Ветеринарно-санитарная экспертиза».
Рекомендации и перспективы дальнейшей разработки темы
В результате проведенных экспериментальных исследований и
обобщения полученного практического и теоретического материала
сформированы
выводы,
позволяющие
запланировать
дальнейшие
перспективные направления в разработке данной темы:
- изучение влияния препарата «Димикар» на функциональные и
морфологические показатели печени и разработка регламента его
применения для лечения гепатозов у других видов сельскохозяйственных
животных и птицы;
- разработка методики применения и испытание эффективности
препарата «Димикар» при проведении лечебно-профилактических
мероприятий в отношении заболеваний, в этиопатогенезе которых
присутствуют гепатопатии и нарушение свободнорадикального баланса.
СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
Статьи в ведущих научных журналах, рекомендованных ВАК РФ
1.
Денисенко, Т. С. Изучение острой токсичности препарата
«Димикар» / Т. С. Денисенко / Вестник АПК Ставрополья. – 2017. – № 1 (25).
– С. 67-72.
2.
Денисенко, Т. С. Влияние димикара на динамику показателей
крови,
характеризующих
функциональное
состояние
печени
/
Т. С. Денисенко / Вестник АПК Ставрополья. – 2018. – № 1 (29). – С. 35-39.
3.
Денисенко, Т. С. Изучение терапевтической эффективности
димикара при экспериментальном моделировании окислительного стресса у
кроликов / Т. С. Денисенко, И. В. Киреев // Ученые записки Казанской
22
государственной академии ветеринарной медицины им. Н. Э. Баумана. –
2017. – Т. 230 (II). – С. 76-79.
4.
Денисенко, Т. С. Влияние препарата димикар на систему
антиоксидантной защиты кроликов / Т. С. Денисенко, И. В. Киреев //
Вопросы нормативно-правового регулирования в ветеринарии. – 2017. – № 4.
– С. 87-89.
5.
Денисенко, Т. С. Биохимические показатели крови коров при
применении препарата димикар для профилактики гепатоза /
Т. С. Денисенко, И. В. Киреев // Ветеринарная патология. – 2018. – № 2. – С.
28-33.
6.
Денисенко, Т. С. Влияние препарата димикар на показатели
системы антиоксидантной защиты молочных коров при гепатозе / Т. С.
Денисенко, И. В. Киреев // Международный вестник ветеринарии. – 2018. –
№ 2. – С. 28-33.
7.
Денисенко, Т. С. Эффективность применения димикара при
комплексном лечении гепатоза коров / Т. С. Денисенко, И. В. Киреев,
Б. В. Пьянов // Ветеринария и кормление. – 2018. – № 3. – С. 29-31.
Патенты
8.
Пат. 2619342 Российская Федерация, МПК А 61 К 31/03, А 61 К
31/095, A 61 P 37/04, А 61 Р 39/06. Препарат для профилактики и лечения
свободнорадикальной патологии у животных / Денисенко Т. С.,
Киреев И. В., Оробец В. А., Беляев В. А.; заявитель и патентообладатель
ФГБОУ ВО «Ставропольский государственный аграрный университет». –
№ 2016106564; заявл. 24.02.2016; опубл. 15.05.2017, Бюл. № 14. – 24 с.
Работы, опубликованные в сборниках научных трудов, материалах
конференций и других изданиях
9.
Денисенко, Т. С. Влияние димикара на показатели белкового
обмена коров при гепатозе / Т. С. Денисенко, И. В. Киреев //
Продовольственная безопасность: от зависимости к самостоятельности :
материалы Всерос. науч.-практ. конф. (Орел, 29 ноября 2017 г.) / Орловский
ГАУ. – Орел, 2017. – С. 69-71.
10. Денисенко, Т. С. Определение коэффициента кумуляции
препарата «Димикар» / Т. С. Денисенко, И. В. Киреев // Инновационные идеи
молодых исследователей для агропромышленного комплекса России :
материалы Всеросс. научн.-практ. конф. (Пенза, 23-24 марта 2017 г.) – Пенза,
2017. – Т. 2. – С. 106-109.
11. Денисенко, Т. С. Разработка и доклинические исследования
препарата для профилактики и лечения свободнорадикальной патологии у
животных / Т. С. Денисенко, И. В. Киреев // Инновационные технологии в
сельском хозяйстве, ветеринарии и пищевой промышленности : материалы
82-ой Междунар. науч.-практ. конф. «Аграрная наука – Северо-Кавказскому
федеральному округу». – Ставрополь, 2017. – С. 228-230.
12. Денисенко,
Т. С.
Влияние
димикара
на
динамику
гематологических показателей крови коров с клиническими признаками
23
гепатоза / Т. С. Денисенко, И. В. Киреев // Аграрная наука – сельскому
хозяйству : материалы XIII Междунар. науч.-практ. конф. (Барнаул, 15-16
февраля 2018 г.) / Алтайский ГАУ. – Барнаул, 2018. – Книга 2. – С. 376-377.
13. Денисенко, Т. С. Влияние препарата димикар на продуктивные
качества молочных коров / Т. С. Денисенко, И. В. Киреев // Актуальные
проблемы
науки
и
образования
в
области
естественных
и
сельскохозяйственных наук : материалы VI Междунар. науч.-практ. конф. –
Т. 1. – Петропавловск, 2018. – С. 45-48.
14. Профилактика
нарушений
метаболического
статуса
у
высокопродуктивных коров молочного направления на территории
Ставропольского края / И. В. Киреев, В. С. Скрипкин, В. А. Оробец,
В. А. Беляев, О. И. Севостьянова, Т. С. Денисенко // Методические
рекомендации. – Ставрополь, 2017. – 64 с.
24
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
7
Размер файла
1 134 Кб
Теги
коровы, токсикологическая, димикара, свойства, применению, гепатозах, фармако
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа