close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

3315.РАСПРОСТРАНЕНИЕ И СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ МЕР БОРЬБЫ С ЦИСТИЦЕРКОЗОМ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА НА СРЕДНЕМ УРАЛЕ

код для вставкиСкачать
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
€9%
На правах рукописи
Кульневская Марина Николаевна
РАСПРОСТРАНЕНИЕ И СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ
МЕР БОРЬБЫ С ЦИСТИЦЕРКОЗОМ
КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА
НА СРЕДНЕМ УРАЛЕ
Специальность 03.00.19 - паразитология
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени
кандидата биологических наук
Москва 2007
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
2
Работа выполнена^ во Всероссийском научно-исследовательском
институте гельминтологии им: К. И. Скрябина (ВИГИС).
Научный руководитель: доктор ветеринарных наук, профессорАлександр Витальевич Успенский!
Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор
Владимир Васильевич Горохов
(ВИГИС),
кандидат ветеринарных наук, доцент
Светлана: Александровна Шемякова
(МГАВМиБт)
Ведущая организация - Вятская Государственная:
сельскохозяйственная академия
Защита диссертации состоится «11» апреля 2007 г. в-11'часов- на
заседании
диссертационного
совета
Д 006.011.01
при
Всероссийском
научно
— исследовательском
институте
гельминтологии имени К. И. Скрябина (ВИГИС).
Адрес: 117218; Москва, ул. Б. Черемушкинская, д. 28.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВИГИС.
Автореферат разослан «6» марта 2007 г.
Ученый секретарь Диссертационного
Совета, доктор биологических наук
Бережко В: К..
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
3
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность проблемы.
Из данных отечественной и зарубежной литературы известно, что
только с конца 70-х годов ХГХ столетия впервые начали применяться
научно обоснованные меры по охране человека от заражения
тениаринхозом, а крупного рогатого скота цистицеркозом.
В период
экономических реформ в агропромышленном комплексе появилась
тенденция роста зараженности сельскохозяйственных животных
цистицеркозом. Так, из каждого миллиона голов крупного рогатого скота
убитого в Российской Федерации в 1993 году, 955 животных были
заражены финнами бычьего цепня. В 1994 году этот показатель
увеличился на 11,3 %., а в 1995 году - на 9,2 % (относительно 1993г.).
Результаты ветеринарно-санитарнои экспертизы в 2001 году по РФ
показали, что средний показатель по цистицеркозу крупного рогатого
скота составил 0,09 % к числу экспертиз, в 2002 и 2003 годах
соответственно 0,036 и 0,085 %.
В эндемически неблагополучных по тениидозам субъектах
Федерации зараженность животных цистицеркозом практически
постоянно превышает средне российский
уровень. Заболевания
животных, вызываемые лярвальными гельминтозами, в том числе и
цистицеркозом крупного рогатого скота, представляют серьёзную
проблему для сельского хозяйства и для медицины. Связана эта проблема
с экономикой сельского хозяйства и перерабатывающей промышленности,
кроме того, имеет большое социальное значение. Социальный ущерб
оценивается степенью отрицательного воздействия на здоровье и
общественную жизнь человека. ..
Принимая во внимание напряженную эпизоотическую ситуацию по
цистицеркозу крупного рогатого скота, представляющую, как уже было
отмечено,
серьезную экономическую и социальную проблемы
необходимо дальнейшее изучение особенностей распространения инвазии,
усовершенствование ветеринарно-санитарнои экспертизы и разработка
эффективных мер борьбы. Данная проблема остается актуальной, имеет
важное народно-хозяйственное и социально — экономическое значение, в
том числе и на территории Уральского Прикамья.
..,'.
..
Г
РГАУ-МСХА
J
имени К.А. Тимирязева
j ЦН5 имени Н.И. ЖЧ-лсзнова
I Фона каучньм) литературы
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
4
Цели н задачи исследований.
Цель
наших
исследований
заключалась
в
изучении
эпизоотологическои ситуации по цистицеркозу крупного рогатого скота,
особенностей эпидемиологии тениидоза и усовершенствовании мер
борьбы с данным гельминтозом в Уральском Прикамье.
Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:
1. Изучить эпизоотологическую ситуацию по цистицеркозу крупного
рогатого скота на территории Уральского Прикамья.
2. Изучить эпидемиологическую ситуацию по тениаринхозу в
регионе.
З.Определить основные факторы, обуславливающие распространение
инвазии.
4. Определить фактический экономический ущерб от цистицеркоза
крупного рогатого скота.
5.Усовершенствовать ветеринарно-санитарную экспертизу туш
крупного рогатого скота на цистицеркоз.
6.Апробировать прижизненную диагностику цистицеркоза крупного
рогатого скота методом определения фагоцитарной активности
нентрофилов крови.
7.Разработать комплекс ветерннарно-санитарных мероприятий по
профилактике цистицеркоза крупного рогатого скота в условиях
Уральского Прикамья.
Научная новизна.
- Впервые в Уральском Прикамье выполнен комплекс исследований
но изучению эпизоотологическои и эпидемиологической ситуации по
цистицеркозу- тениаринхозу с учетом различных уровней развития и
ведения животноводства, а также особенностей быта населения.
- Определены основные факторы передачи инвазии в различных
административных районах региона.
- Выявлены некоторые закономерности расселения цистицерков в
отдельных органах и группах мышц при спонтанном заражении и
слабой интенсивности инвазии у крупного рогатого скота в
Уральском Прикамье.
- Впервые применен для прижизненной диагностики цистицеркоза: .
крупного рогатого скота метод определения фагоцитарной активности .,нейтрофилов крови.
- На основании проведенных исследований разработаны основные
положения профилактики цистицеркоза крупного рогатого скота на
территории Уральского Прикамья.
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
5
Практическая значимость.
Результаты исследований использованы при разработке плана
мероприятий по профилактике цистицеркоза крупного рогатого скота в
Пермском крае на 2007 - 2012 годы, утвержденного управлением
ветеринарии министерства сельского хозяйства Пермского края №0512/529 28 декабря 2006 г.
Материалы исследований включены в курс лекций и лабораторнопрактических занятий по дисциплинам «Ветеринарная паразитология»
и «Ветеринарно-санитарная экспертиза» для студентов факультета
ветеринарной медицины Пермской ГСХА имени Н. П. Прянишникова и
факультета ветеринарной медицины Вятской ГСХА.
Апробация работы.
Материалы диссертационной работы доложены на:
Международной
57-й
научно-практической
конференции
«Актуальные проблемы науки в АПК»
(Кострома,
3 февраля 2006 г.).
Международной 57-й научно-практической конференции
«Актуальные вопросы ветеринарной медицины» (Троицк, 15-16
марта 2006 г.)'
Всероссийской научно-практической конференции ученых и
специалистов, посвященной 140-летию со дня рождения ак. Д. II.
Прянишникова (Пермь, 18-19 апреля 2006 г.).
Основные положения, выносимые на защиту:
Эпизоотологичёская
и эпидемиологическая
ситуация
по
цистицеркозу-тениаринхозу в регионе. Основные
факторы
передачи инвазии.
Эффективность
прижизненной
диагностики
цистицеркоза
крупного рогатого скота методом определения фагоцитарной
активности нейтрофилов крови.
Усовершенствование ветеринарно-санитарных мероприятий, и
основные положения профилактики
цистицеркоза крупного
рогатого скота на территории Уральского Прикамья.
Объем и структура диссертации.
Материалы диссертации изложены на
132 страницах
компьютерного текста. Состоят из общей характеристики работы, обзора
данных литературы, семи глав собственных исследований, выводов,
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
6
практических предложений, приложения и списка литературы. Список
литературы включает 156 источников, в том числе 109 отечественных и
47 зарубежных авторов. Работа иллюстрирована
12 таблицами и 12
рисунками.
ОБЗОР ДАННЫХ ЛИТЕРАТУРЫ
В данной главе проанализированы и обобщены имеющиеся в
литературе данные по изучению эпизоотологии и эпидемиологии
цистицеркоза-тениаринхоза в разные годы в разных регионах страны и за
рубежом.
Представлен анализ послеубойной и прижизненной
диагностики цистицеркоза крупного рогатого скота (С. bovis), а так же
возможный экономический ущерб от данного зооноза. Проведен анализ
различных методов прижизненной диагностики цистицеркоза крупного
рогатого скота.
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
1. Эпизоотологическая и эпидемиологическая ситуация по
цистицеркозу крупного рогатого скота и тениаринхозу населения в
Уральском Прикамье
1.1. Материалы и методы
Исследования проводили с 1999 по 2004 годы. С целью уточнения
эпгооотологической обстановки по цистицеркозу крупного рогатого скота
в регионе использовали данные материалов ветеринарной отчётности по
форме 5-вет и данные собственных исследований. Особенности
эпидемиологической ситуации изучали по данным материалов отчётности
санэпидемстанций городов и районов региона,
собственных
исследований. Типизацию очагов распространения цистицеркоза
крупного рогатого скота проводили с учётом параметров: экстенсивность
инвазии и показатель заболеваемости на 100 000 экспертиз. Типизацию
очагов тениаринхоза проводили по следующим параметрам: • уровню
пораженности населения тениаринхозом на 100 000 населения,
интенсивности передачи инвазии, определяемой по количеству свежих
случаев заражения населения за год. Для определения социальноэкономических
предпосылок
распространения
цистицеркозатениаринхоза изучались истории болезни с диагнозом «тениаринхоз»,
проводился анализ социально-хозяйственных и бытовых факторов, таких
как характер сельского хозяйства, уровень развития животноводства,
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
7
степень термической обработки мяса и санитарное состояние населенных
пунктов.
1. 2. Общая характеристика региона
С учетом темы диссертации дана краткая климато-ландшафтная
характеристика Уральского Прикамья. Приведены данные о
расположении и размерах территории региона, его природнохозяйственном делении, дана характеристика сельского хозяйства,
наличие сельскохозяйственных угодий (пастбища, пашни, сенокосы) и их
использование в народном хозяйстве, особенно в животноводстве. В
необходимой мере сообщается о климате и ландшафте отдельных
природных и хозяйственных зон.
13. Результаты исследований и их обсуждение
За период с 1999 по 2004 годы в регионе подвергнуто убою 991 088
голов крупного рогатого скота. По результатам проведенной
ветеринарно-санитарной экспертизы выявлено 3014 случаев финноза,
что составило 0,3 % к числу проведенных экспертиз, а показатель на
100 000 экспертиз соответственно составил — 304,1.
Цистицеркоз
крупного рогатого скота зарегистрирован в 30 из 38 административных
районов региона. Уровень зараженности крупного рогатого скота
цистицеркозом за период с 1999 по 2004 годы снизился в 1,5 раза или на
31,3 %, однако темпы снижения оставались незначительными и
нестабильными (рис. 1).
Согласно полученным данным выделены 4 типа очагов,
характеризующихся разной степенью напряженности эпизоотического
процесса (рис.3).
-— г* т£
-А ггзгаг
T^i?
t 1.5
.5
(
Ui_j
—
1996
г~\ п
*""**
1989
2000
2001
2002
2003
2004
• 0.7
2005
1SS8
Рис. I Динамика заболеваемости
крупного рогатого скота
цистицеркозом с 1999 по 2004 гг.
(показатель на 100 000 экспертиз)
1909
2000
2001
2X2
20D3
2004
7005
Рис.2 Динамика заболеваемости населения
тениаринхозом с 1999 по 2004 гг.
(показатель на 100 000 населения)
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
- широко (от 1000 до 5000)
ЕШ - значительно (от 500 до 1000)
pyF| - умеренно (от 100 до 500)
|
| - слабо (от 0 до 100)
Рис. 3 Распространенность цистицеркоза
крупного рогатого скота на территории
Уральского Прикамья с 1999 по 2004 гг.
(показатель на 100 000 экспертиз).
За период исследований на территории Уральского Прикамья
зарегистрировано 195 случаев тениаринхоза.
При этом
случаи
заболевания регистрировались в 26 из 38 районов региона. Динамика
заболеваемости жителей Уральского Прикамья тениаринхозом в период с
1999 по 2004 год отражена на рисунке 2.
С 1999 по 2004 уровень пораженное™ населения Уральского
Прикамья тениаринхозом снизился в 2,5 раза, однако в ряде районов ещё
остается на достаточно высоком уровне. На основании полученных
данных нами выделены 4 типа очагов, отражающих уровень
напряженности эпидемического процесса в регионе (рис. 4).
На территории Уральского Прикамья установлено повсеместное
формирование функционирующих очагов тешгаринхоза. Макро- и
микроочаги тениаринхоза населения и цистицеркоза крупного рогатого
скота на территории региона имеют пространственно-мозаичное
распределение, сосредоточены близко друг к другу, что наряду с другими
факторами обеспечивает неблагополучие региона по данному зоонозу.
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
9
-высокий уровень
(от 7 до11)
~Х
- средний уровень
(от 4 до 7)
-уровень выше среднего
(от 1 до 4)
О
ниже среднего,
низкий уровень
(от 0 до 1)
Рис. 4 Распространенность тениаринхоза на
территории Уральского Прикамья
с 1999 по 2004 гг.
(показатель на 100 000 населения)
С
Для определения предпосылок распространения тениаринхоза на
территории Уральского Прикамья был проведен анализ 111 историй
болезни.
В результате чего была установлена различная
восприимчивость людей к тениаринхозу в зависимости от возраста, что
отражено в таблице 1.
Таблица I
Восприимчивость людей к тениаринхозу в зависимости от возраста
Возраст
До 10 лет
До 20 лет
До 30 лет
До 40 лет
До 50 лет
До 60 лет
До 70 лет и старше
ИТОГО
Количество человек
3
12
16
24
25
16
15
111
(%)
2,7
10,8
14,4
21,6
22,5
14,4
13,5
100
В течение 6 лет (1999 - 2004 гг.) диагноз тениаринхоз был
зарегистрирован у 13 детей дошкольного и школьного возраста (один
ребёнок в возрасте до 1 года), что следует рассматривать как
показатель ухудшения эпидемиологической ситуации в регионе.
Наиболее восприимчива к тениаринхозу возрастная группа люден от 41
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
10
до 50 лет, что составляет 22,5% от общего числа больных.
Среди
нзросдах (от 21 до 70 лет) возрастных групп наиболее инвазированы
тениаринхозом женщины - 62,1 % и менее мужчины - 37,9 %, что, скорее
всего, объясняется тем, что женщины чаще готовят и во время
приготовления пробуют фарш или мясное блюдо.
При анализе отдельных профессиональных и социальных групп
населения было подтверждено, что тениаринхоз как профессиональное
заболевание встречается редко (Бессонов А. С , 1999) в Уральском
Прикамье. Устойчивости вредной привычки или потребности
употреблять в пищу сырой мясной фарш или сырое мясо способствует
низкий уровень знаний населения по профилактике гельминтозов и
отсутствие эффективной санитарно-просветительной работы в этом
направлении органов здравоохранения. Большинство опрошенного
населения не имеют представления, как происходит заражение
тениаринхозом и как можно от него уберечься.
Таблица 2
Восприимчивость к теннаринхозу отдельных профессиональных и
социальных групп населения
Социальные и профессиональные
*"
группы населения:
Дошкольники
Учащиеся
Работники С/Х
Пенсионеры, инвалиды
Неработающие граждане
Рабочие
Продавцы и повара
Работники Д/С и школ
ИТОГО
Количество
человек
4
9
12
22
26
23
10
5
111
%
3,6
8,1
10,8
19,8
23,4
20,7
9,0
4,5
100
2. ПОСЛЕУБОЙНАЯ ДИАГНОСТИКА ЦИСТИЦЕРКОЗА
КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА
2.1. Материалы и методы
Послеубойную диагностику на цистицеркоз крупного рогатого
скота проводили методом осмотра согласно действующих «Правил
ветеринарного осмотра убойных животных и ветеринарно-санитарной
экспертизы мяса и мясных продуктов». Исследования проводили на ОАО
«Пермский Мясокомбинат» с 4.01.05 по 5.01.06 гг. у животных со
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
11
спонтанной инвазией. Обнаруженных цистицерков извлекали
пораженных органов и вели подсчет в каждой группе мышц.
из
2.2. Результаты исследований
За период с 4.01.05 по 5.01.06 гг. на ОАО «Пермский мясокомбинат»
было исследовано 164 туши крупного рогатого скота, спонтанно
зараженного С. bovis. Во всех случаях была отмечена слабая
интенсивность инвазии. В связи с этим нами рассматривалась степень
заселения мышц и органов с позиции экстенсивности. Исследуемые
мышцы сводили согласно анатомической классификации. В сравнительной
картине по заселению цистицерками мышц не использовался прием
подсчета цистицерков на определенную единицу массы мышц (Агульник
М. А., 1940; Kozakiewicz, 1979; Бессонов А. С , 1980) поскольку не было
такой возможности.
Таблица 3
Степень поражения отдельных органов и групп мышц крупного
рогатого скота при спонтанном заражении С. bovis
Мышцы
и органы
Всего
голов
Язык
54
32,92
Сердце
53
Массетер
Тазобедр.
сустава
Глубокие
пояснич.
Пищевод
Э. И., И. И.,
%
колво
Кол-во цистицерков
При этом другие
группы мышц
пораженные
цистицерками
(кол-во случаев)
Без
видимых
изменен.
С
дегенерат
изменен.
1-6
35
19
32,31
1-3
32
21
50
30,48
1-3
31
19
3
1,83
1
2
1
Сердце- 1,
массетеры - 2,
м. тазобедр. сует. - I,
глуб. поясничные-1.
Язык-1, массет. - 4 ,
м.тазобедр. сует. - 1,
пищевод - 1.
Язык - 1 , сердце - 4,
глубок, пояснич.- 2,
пищевод - 1 .
Язык-1, сердце - 1 .
2
1,22
1
1
1
Сердце -2.
2
1,22
1
2
164
103
Сердце-1,
массетеры - 1 .
61
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
12
Полученные данные ещё раз доказывают, что при слабой
интенсивности инвазии локализация цистицерков в туше не является
строго определенной и обнаружение цистицерков возможно лишь при
тщательной и в полном объеме проведенной ветсанэкспертизы.
3. ЭКОНОМИЧЕСКИЙ УЩЕРБ ОТ ЦИСТИЦЕРКОЗА
КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА
3.1. Материалы и методы
Экономический ущерб, причиняемый цистицеркозом крупного
рогатого скота, складывается из снижения качества продукции и браковки
пораженных туш. Экономический ущерб определяли
на
ОАО
«Пермский мясокомбинат» за период с 2001 по 2004 годы.
Экономический ущерб от снижения качества продукции вычисляли
по формуле: Уб = Вр* (Цз - Цб)
где Вр - количество реализованной продукщш пониженного качества,
Цз - цена реализации единицы продукции от здоровых животных,
руб.;
Цб - цена реализации единицы продукции от больных животных,
руб.;
Экономический ущерб от браковки пораженных туш вычисляли по
формуле: У7 = Вб * Ц - Сф,
где Вб — количество выбракованной продукции и сырья, кг;
Ц - цена продукции и сырья стандартного качества, руб.;
Сф - стоимость продукции и сырья, полученных после переработки,
руб.
Общий экономический ущерб определяли как сумму всех видов
ущерба: Уо = Уб + У 7 .
3. 2. Результаты исследований
На АОА «Пермский мясокомбинат» за период с 2001 по 2004 гг.
было подверпгуто ветеринарно-саннтарной экспертизе 29829
туш
крупного рогатого скота. Средняя живая масса одной головы крупного
рогатого скота составила в 2001 году - 167,5 кг; 2002 - 177,4 кг; 2003 190,5 кг; 2004 - 168,6. Убойный выход мяса в среднем по Пермской
области составлял для взрослого крупного рогатого скота 43,5 % к
живому весу, а молодняка 44,3 %. Средняя закупочная цена мяса
крупного рогатого скота за 1 кг живой массы составляла: 2001 — 38,66
руб.; 2002 - 44,18 руб.; 2003 - 40,6 руб.; 2004 - 45,96 руб. Экономический
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
13
ущерб, причиняемый цистицеркозом крупного рогатого скота на АОА
«Пермский мясокомбинат» представлен в таблице 4.
Таблица 4
Экономический ущерб от цистицеркоза крупного рогатого скота на
ЛОА «Пермский мясокомбинат» за период с 2001 но 2004 гг.
Утилизировано
туш (гол/кг)
2001
Выявлено
случаев
цистицеркоза
35
2002
94
2003
Обезврежено
туш (гол/кг)
Эконом, ущерб
Уо (руб.)
35/5863
56695,2
1/139
93/16542
188836,99
125
3/543
122/23274
257913,09
2004
162
4/485
158/26842
.330380,15
Итого
416
8/1167
408/72521
833825,43
Годы
4. ИЗУЧЕНИЕ ФАГОЦИТАРНОЙ РЕАКЦИИ НЕЙТРОФИЛОВ
КРОВИ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА ПРИ ЦИСТИЦЕРКОЗЕ
4.1. Материалы н методы
Получение цистицерков. Цистицерков отбирали из туши крупного
рогатого скота, спонтанно заражённой С. bovis, затем не менее 4-х раз
отмывали в стерильном физрастворе с добавлением антибиотиков. После
чего цистицерки ампулировали и лиофилизировали. До лиофилизации
материал хранили при температуре -20°С, затем при температуре + 4°С.
Получение антигена-экстрата из С. bovis. Экстракт из цистицерков
готовили по методу Walther (1979) с модификациями (Белозеров С. Н.,
1999). Антиген готовили в отделении лидазы на Пермском НПО
«Биомед». Полученный антиген-экстракт разливали в ампулы по 0,5 мл и
лиофилизировали. Рефрактометрическом методом было установлено
содержание 62,3 г/л общего белка в антиген-экстракте из С. bovis.
Объем забираемой крови и концентрация нейтрофилов.
Нами был использован метод, разработанный на кафедре
патофизиологии Пермской государственной медицинской академии,
позволяющий уменьшить необходимые для определения ФАН объемы
крови и диагностикумов в 10-20 раз. Для этого 0,1 мл крови забирали
непосредственно в полиэтиленовую пробирку для микропроб, куда
заранее был внесен раствор «Глюгицира» в объеме 0,1 мл. Капли крови
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
14
легко перемешивались с консервантом, причем одновременно
происходило разведение плазмы в два раза, что, как правило,
способствует быстрому (за 1,5-2 часа) оседанию форменных элементов
крови. Затем применили щадящий микрометод концентрации лейкоцитов,
позволяющий увеличить их концентрацию в смеси крови с объектами
фагоцитоза в 3-5 раз.
Метод подготовки объектов фагоцитоза. В связи с тем, что в
работе использована модификация способа определения ФАН в
отношении антигена-экстрата из С. bovis, при проведении исследования
со смесью специфического и контрольного диагностикумов значительное
внимание было уделено подготовке объектов фагоцитоза. Специфический
и контрольный эритроцитарные диагиостикумы соответственно были
окрашены в голубой и черный цвета анилиновым красителем с целью
микроскопического различия специфических и контрольных объектов
фагоцитоза.
Метод изготовления мазков. С целью совершенствования
процесса
изготовления
и обработки
мазков и
повышения
производительности и экономичности исследований мы применяли
«Устройство для изготовления мазков» (Каплин В. Н., Самоделкин Е. И.
а. с. № 1292732, 1986), позволяющее одномоментно или поочередно
изготовить на одном предметном стекле 10 узких параллельных мазков из
различных проб крови.
Исследование фагоцитарной активности нейтрофилов.
Исследование ФАН проводили исключительно в микрообъемах.
Необходимое количество проб исследуемой крови помещали в термостат
на 15 мшгут при температуре 37°С. В это время готовили равную
смесь
1%
специфических
и
контрольных
эритроцитарных
диагностикумов, приготовленных по общепринятой методике (Boyden,
1951). Затем 0,01 мл этой смеси вносили в пробы крови непосредственно
в термостате, чтобы не нарушать температурный режим. Пробы
тщательно перемешивали. После чего готовили микромазки, нанося
капли исследуемых проб крови на предметное стекло микропипеткой на 1
мкл. Мазки высушивали, фиксировали и окрашивали по РомановскомуГимзе.
В мазках производили сопряженный подсчет фагоцитоза обоих
объектов в 100 изолированных нейтрофилах. Для количественной
характеристики фагоцитоза использовали показатель - фагоцитарное
число. Определение соотношения фагоцитоза двух объектов позволило
установить унифицированный количественный критерий в форме
индекса специфического изменения фагоцитоза, выражающего
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
15
кратность прироста фагоцитоза специфического объекта над контрольной
величиной.
С этой целью фагоцитоз специфического и контрольного объектов
выражали в процентах к соответствующему показателю исходного фона в
исследованиях в эксперименте и вычисляли отношение уровней:
ИСФ = - ^ а F
несп
где FC1I - величина фагоцитоза специфического объекта в % к
показателю исходного фона,
F„ecn - величина фагоцитоза неспецифического объекта в % к
показателю исходного фона.
4.2. Результаты исследований и их обсуждение
В наших исследованиях для
прижизненной диагностики
цистицеркоза крупного рогатого скота была сделана попытка применить
метод диагностического исследования ФАН при острых вирусных
инфекциях, разработанный на кафедре патофизиологии Пермской
государственной медицинской академии.
Исследования фагоцитарной реакции нейтрофилов крови на антигенэкстракт из С. bovis in vitro проводили с кровью клинически здоровых
животных (58 голов крупного рогатого скота) и людей (27 человек).
Специфическую фагоцитарную реакцию нейтрофилов крови исследовали
у животных спонтанно инвазированных С. bovis с низкой и высокой
интенсивностью инвазии, у животных со смешанной инвазией (бовисный
цистицеркоз и фасциолёз) и животных, инвазированных другими видами
гельминтов.
С целью определения дозы антигена-экстракта из С. bovis,
вызывающей изменения фагоцитарной реакции нейтрофилов, нами были
проведены специальные исследования. В контрольную пробу к 10 мкл
крови клинически здорового животного добавляли 1 мкл физраствора. Во
вторую пробу - 1 мкл рабочего раствора антигена-экстракта из С. bovis
(конечная концентрация антигена 1:10), в третью - 1 мкл рабочего
раствора антигена, разбавленного в 10 раз физраствором (конечная
концентрация антигена 1:100). В четвертой пробе конечная концентрация
антигена составила 1:1000, в пятой — 1:10000. Все пробы помещали в
термостат при температуре 37 "С на 20 минут при периодическом
перемешивании. Затем во все пробы вносили 10 мкл равной смеси 1%ных взвесей специфического и контрольного диагностикумов, тщательно
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
16
пнпетировали,
вновь помещали в термостат на 20 минут при
периодическом перемешивании. Результаты представлены в таблице 5.
Таблица 5
Фагоцитарная активность нейтрофилов крови крупного рогатого скота
по отношению к специфическим (в числителе) и неспецифическим
(в знаменателе) объектам фагоцитоза при взаимодействии in vitro
с антиген-экстрактом из С. bovis
Показатели
Исходный
фон, М ± т
Фагоцитарное
число
% к исходному
фону
ИСФ и пределы
колебаний
Кол- во проб с
повышением
ИСФ
Кол - во проб
со снижением
ИСФ
Кол - во проб
без значит.
колебания ИСФ
После контакта с антиген-экстрактом из С. bovis,
M±m разностное
Дозы антигена-экстракта из С. bovis
1:10
1:100
1:1000
1:10000
0,15 ±0,01
0,11 ±0,01
0,23 ±0,02
0,12 ±0,01
110(63-187)
66(52-91)
1,66 + 0,10
(0,47-2,23)
0,22 ±0,02
0,13 ±0,01
105(64-191)
72(61-94)
1,46 ±0,12
Пермь
(0,68-2,35)
0,21 + 0,01
0,18 + 0,01
100
100
1,00 ±0,03
(0,87-1,24)
71(67-105)
61(60-123)
1,16 ±0,09
(0,62-2,03)
0,19 ±0,02
0,13 ±0,01
90(66-156)
72(34-95)
1,25 + 0,14
(0,92-2,35)
0
17
38
49
37
0
29
2
8
5
0
12
18
1
6
Как видно из таблицы 5, при исследовании фагоцитарных
показателей
уровни фагоцитоза специфического и контрольного
объектов при контакте крови с эритроцитарными диагностикумами
значительно варьируют. Величина фагоцитарного числа специфического
объекта
в среднем по группе составила 0,21+0,01. Величина
фагоцитарного числа неспецифического объекта при средней по группе
составила 0,18 + 0,01. Соответственно этому индексы соотношения
фагоцитоза специфического и нсспецифического объектов близки к
единице и колеблются в небольших пределах от 0,87 до 1,24 при средней
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
17
величине 1,00±0,03. Поэтому крайние величины индексов можно взять
как границы специфического изменения показателей.
Воздействие антигена-экстракта из С. bovis в дозе 1:10 привело в
целом к достоверному снижению уровня фагоцитоза специфического и
контрольного объектов.
Доза антигена-экстракта из С. bovis 1:100 незначительно изменила
фагоцитоз специфического объекта, однако уровень фагоцитоза
неспецифического объекта достоверно снизился, что привело к
достоверному повышению ИСФ в 38 пробах. Антиген в разведении
1:1000 вызвал повышение фагоцитоза специфического объекта на фоне
достоверного снижения фагоцитоза неспецифического объекта,
Воздействие антигена-экстракта из С. bovis в разведении 1:10000
незначительно повысило фагоцитоз
специфического объекта и
достоверно снизило фагоцитоз контрольного объекта. Оптимальное
повышение ИСФ наблюдали в разведении антигена 1:1000.
Повышение ИСФ достигается при различном соотношении уровней
специфического и неспецифического объектов фагоцитоза. Так нами
было выявлено шесть вариантов различного соотношения уровней.
В целом достоверное повышение ИСФ наблюдалось в 141
пробе (60,77 %), что является показателем чувствительности метода
определения ФАН в данных исследованиях. Достоверное снижение ИСФ
установлено в 44 пробах (18,96 %) и в остальных 47 пробах (20,25 %)
достоверных изменений ИСФ выявить не удалось.
Нуровень фагоцитоза специфического объекта
Пуровень фагоцитоза контрольного объекта
Рис.5 Оценка ИСФ при разном соотношении уровней фагоцитоза
специфического и неспецифического объектов.
(Величины ИСФ указаны над столбиками)
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
18
Диагностика
тениаринхоза
базируется
на
клиникоэпидемиологических, лабораторных данных и копроовоскопичсских
методах. В наших исследованиях была предпринята попытка определить
фагоцитарную активность нейтрофилов крови клинически здоровых
людей (от 20 до 40 лет) путем контакта in vitro клеток крови с антигенэкстрактом из С. bovis. Оценку фагоцитарной активности нейтрофилов
определяли путем вычисления индекса специфического изменения
фагоцитоза. Для определения чувствительности клеток крови людей к
дозе антигена-экстракта из С. bovis, вызывающей изменения
фагоцитарной реакции нейтрофилов, были проведены аналогичные
исследования, что и при проведении исследований с кровью крупного
рогатого скота. В целом достоверное повышение ИСФ отмечали в 65
пробах, что составило 60,18% и явилось показателем чувствительности в
данных исследованиях. Достоверное снижение ИСФ отмечали в 20
пробах (18,51%) и в 23 пробах (21,29%) достоверных изменений ИСФ не
установлено. Результаты исследований позволяют предположить, что
данный метод диагностики может быть применим для выявления
больных тениаринхозом людей, особенно в начальной стадии
заболевания, когда характерных клинических признаков (активное
отхожденис члеников) не наблюдается. Однако данный метод требует
дальнейшего изучения и последующей апробации в достаточно широких
масштабах.
Для обоснования адекватности диагностического критерия
была обследована контрольная группа клинически здоровых животных 58 голов и инвазированных С. bovis - 4 головы. В ходе исследований было
установлено, что индексы соотношения фагоцитоза специфического и
неспецифического объектов у животных контрольной группы близки к
единице и колеблются в пределах - от 0,67 до 1,50. Эти величины и были
взяты в качестве крайних значений ИСФ. Поэтому величина ИСФ,
выходящая за указанные пределы, свидетельствовала о специфических
изменениях фагоцитарной реакции нейтрофилов.
Результаты диагностического исследования фагоцитарной реакции
нейтрофилов крови инвазированных животных представлены в таблице 6.
У животных первой группы инвазированных С. bovis с низкой
интенсивностью инвазии уровень фагоцитоза специфического объекта
достоверно превышает уровень фагоцитоза специфического объекта
контрольных животных. Уровень фагоцитоза неспецифического объекта
достоверно ниже фагоцитоза неспецифического объекта контрольных
животных. Величина ИСФ у всех больных животных достоверно выше ее
предельного контрольного значения и составляет от 1,55 до 2,16.
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
Таблица 6
Фагоцитарная активность нейтрофилов по отношению к специфичесиш (в числителе) и неспецифическим
(в знаменателе) объектам фагоцитоза у больных животных и в контрольной группе
(М±га разностное и в скобках пределы колебаний)
Фагоцитарное число
Группа
инвазированных
животных
Уживотн.
контрольн.
группы
I
с низкой
интенсивностью
инвазии
(цистицеркоз)
Q21±0,02
II
с высок интенсива
инвазии
(цистицсркоз)
0,21 ±0,01
III
со смешан.
инвазией
(цистицеркоз и
фасциолёз)
0,21*0,01
0.18 ±0,02
IV
с другими видами
инвазии*
Q18±Q01
(O,O9-C09i
(0,09-0,49
0,18 ±0,02
(0,09 -0,20)
(0,08-0,29)
(009ЧЩ
(0,09-02-?
0,21 ±0,01
0,18 ±0,02
(0,09 - 0,30)
(0,09-0.24)
У больных животных
1
2
3
0Д5
0,14
031
0,12
0,20
0,11
Величина ИСФ
% к показателям контроля
4
0,49'
0,14-
1
2
3
167
148
95
77
67
61
4
1
2
2,16
2,20
3
4
1,55
2,61
233
о
89
030
0,17 '
0,29
0,19
Q22±0Q1
QlTtQOl
(B064J5)
«07-Q4)
Q23±Q.01
од-адо!
0,19± 0,02
ДО9-04)
(908-Q2)
0Д6±0,01
<Р,07-ОД
(PPT-0,4)
0Д1
Q23
142
138
94
106
104
109
106
94
119
89
100
127
1,51
1,30
1,10
1,02
1,33
0,78
—
* 1 - фасциолёз (7 животных), 2 - дикроцслиоз (4 животных), 3 - эхинококкоз (3 жизотных), 4 - сстариоз (1животное).
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
20
Во второй группе животных с высокой интенсивностью инвазии
изменения ФЛН представлены в виде значительного превышения уровня
фагоцитоза специфического объекта над неспецифическим и
сопровождалось достоверно значимым повышением ИСФ до 2,61.
В третей группе животных со смешанной инвазией в одном случае
наблюдается превышение уровня фагоцитоза специфического объекта над
неспецифическим, что определило высокое значение ИСФ (1,51). Во
втором случае величина ИСФ соответствует индексам соотношения
фагоцитоза специфического и неспецифического объектов у животных
контрольной группы (1,30).
В четвертой группе животных, инвазированных другими видами
гельминтов в 100 % случаев специфической реакции, в виде достоверного
превышения значения ИСФ не выявлено. В данной группе животных
отмечено значительное снижение величины ИСФ от 1,33 у животных с
эхинококкозом и до 0,78 у животных больных сетариозом.
Таким образом, у больных животных выявлены специфические
изменения ФАИ преимущественно в форме повышения фагоцитоза
специфического объекта и снижения фагоцитоза контрольного объекта.
Специфичность данного метода в наших исследованиях составила 83,3%.
Кроме того, метод диагностики цистицеркоза ФАН оказался прост в
выполнении, не требует использования дорогостоящего оборудования, не
требует особых технических навыков, для выполнения данного теста
необходимо
минимальное
количество
исходного
материала,
диагностикумов, а так же исследуемого материала, поскольку все опыты
проводили в микрообъемах.
5. Профилактика цистицеркоза крупного рогатого скота
Определение особенностей эпизоотологии и эпидемиологии
цистицеркоза крупного рогатого скота позволили разработать план
мероприятий по профилактике данного зооноза в Пермском крае на
2007-2012 гг. План мероприятий по профилактике цистицеркоза крупного
рогатого скота в Пермском крае на 2007-2012 гг. утвержден управлением
ветеринарии Министерства сельского хозяйства Пермского края №0512/529 28 декабря 2006 года.
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
21
ВЫВОДЫ
1.Цистицеркоз крупного рогатого скота широко распространен иа
территории Уральского Прикамья, что связано со степенью развития
животноводства, уровнем культуры, привычками местного населения и с
разнообразием ландшафтных зон региона.
2. За период с 1999 по 2004 гг. цистицеркоз крупного рогатого
скота ежегодно регистрировался в 30 из 38 административных районов
Уральского Прикамья. Экстенсивность инвазии составила 0,3%.
3. Показатель заболеваемости тениаринхозом населения региона за
период с 1999 по 2004 гг. составил 1,1 (на 100 000 населения).
Тениаринхоз регистрировался в 26 из 38 районов. Макро- и микроочагн
тсниаринхоза населения и цистицеркоза крупного рогатого скота имеют
пространственно-мозаичное распределение, сосредоточены близко друг к
другу, что наряду с другими факторами обеспечивает неблагополучие
региона поданному зоонозу.
4.Установлено, что у крупного рогатого скота со спонтанной и
низкой интенсивностью инвазии в Уральском Прикамье основным
местом локализации цистицерков являются мышцы языка, сердца, и
жевательные мышцы. Что важно для повышения эффективности
ветеринарно-санитарной экспертизы при цистицеркозе.
5. С целью прижизненной диагностики цистицеркоза крупного
рогатого скота применен метод определения фагоцитарной активности
нейтрофилов крови (ФАН). Разработаны оптимальные параметры
выполнения фагоцитарного теста с использованием в качестве объектов
фагоцитоза эритроцитарных антигенных диагностикумов, позволяющие
объективно регистрировать ранние специфические реакции клеток крови
на паразитарные антигены,
6. Установлены и изучены основные закономерности возникновения
и развития экстренной специфической фагоцитарной реакции in vitro
нейтрофилов крови здоровых животных и людей под воздействием
паразитарных антигенов, а именно антигена-экстракта из С. bovis.
7. Фагоцитарная активность нейтрофилов зависит от дозы антигена.
Иод воздействием большой дозы (1:10) наблюдается снижение уровня
фагоцитоза специфического и контрольного объектов. Малые дозы
(1:1000 и 1:10 000) ведут к стимуляции фагоцитоза специфического
объекта на фоне торможения фагоцитоза контрольного объекта.
8. Показана высокая диагностическая эффективность фагоцитарного
метода. Разработанные фагоцитарные тесты экспресс-диагностики
позволили диагностировать цистицеркоз крупного рогатого скота у 83,4%
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
22
животных. Чувствительность метода в исследованиях in vitro с кровью
животных составила 60,77%, с кровью людей 60,18%.
9. Комплекс профилактических мероприятий при цистицеркозе
крупного рогатого скота должен осуществляться на основе ветеринарносанитарных и организационно-хозяйственных мероприятий, а также
применении
в диагностике заболевания метода определения
фагоцитарной реакции нейтрофилов крови (ФАН).
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.
1. На оснопэнии анализа эпизоотической ситуации по цистнцеркозу
крупного рогатого скота разработан комплексный план по борьбе и
профилактике заболевания в масштабах всего региона.
2. Данные мониторинга заболеваемости тениаринхозом различных
социальных и профессиональных групп целесообразно использовать при
планировании санитарно-эпидемиологических мероприятий в целях
профилактики тениаринхоза.
3. Проведение. мероприятий по профилактике и ликвидации
цистицеркоза-тениаринхоза строить планово с учетом выявленных
неблагополучных зон региона.
4. Практическим работникам рекомендуем при проверке говяжьих
туш особое внимание уделять исследованию языка, сердца и жевательных
мышц, поскольку, согласно нашим исследованиям, у животных со
спонтанной и низкой степенью инвазии основным местом локализации
являются данные органы и мышцы.
5. Рекомендуем для прижизненной диагностики
цистицеркоза
крупного рогатого скота применять метод исследования фагоцитарной
активности нейтрофилов с целью определения эпизоотологической
ситуации в районах неблагополучных по данному зоонозу, т.к. данный,
метод диагностики отличается простотой и доступностью выполнения.
6. В неблагополучных по цистнцеркозу и тениаринхозу районах
региона усилить санитарно-просветительную работу среди местного
населения по данному зоонозу.
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
23
СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО МАТЕРИАЛАМ
ДИССЕРТАЦИИ
1. Кульневская М. Н: Ситуация по цистицеркозу крупного рогатого
скота в Уральском Прикамье // Матер. 5-го Сибир. международ, вет.
конгресса «Актуальные проблемы вет. медицины». - Новосибирск 2005.- С. 72-74.
2. Кульневская М. Н. Особенности эпизоотологии и эпидемиологии ;
цистицеркоза крупного рогатого скота в Уральском Прикамье//
Матер.57-й международ, научно-практич. конф. «Актуальные проблемы
науки в агропромышленном комплексе» - Кострома. — 2006,т.З - С.63-64.
3. Кульневская М. Н: Проблема тениаринхоза-цистицеркоза на
территории Уральского Прикамья. // Материалы международ, научнопрактич. конф. «Актуальн. вопросы ветеринарной медицины» - Троицк.
-2006.- С. 68-72.
4. Кульневская М. Н: Распространение цистицеркоза крупного рогатого
скота в Уральском Прикамье // Сборн. научных трудов^
Всероссийской науч.-практич. конфер. ученых и спец., посвящен. 140летию со дня рождения; ак. Д. Н. Прянишникова — Пермь - 2006. —
С. 288-291.
5. Кульневская М. Н; К вопросу о локализации цистицерков у крупного
рогатого скота при спонтанном заражении // Материалы Всеросс. научнпрактич конференции — Казань — 2006. - С. 26-28.
6.Торовиц Э. С , Кульневская М: Н., Самоделкин Е. И. Изменения
фагоцитарной активности нейтрофилов крови лабораторных животных
под влиянием вирусных антигенов // Материалы международ, научнопроизв. конф., посвящ. 100-летию со дня рожд. проф. АвророваА.А.
«Актуальные: проблемы ветеринарной патологии и: морфологии
животных» - Воронеж - 2006. - С.424- 428.
7. Кульневская М: Н.г, Самоделкин Е. И. Изучение фагоцитарной реакции нейтрофилов крови крупного рогатого скота при цистицеркозе
// Труды ВИГИС - М. - 2006. - т. 44. - С.108-П5.
Отпечатано в ООО «Форвард-С» г. Пермь, ул. Куйбышева, 118; т.ф.: (342) 249-47-20,249-47-40;
e-mail:forward-s@mail.ru.
Дата выхода 24.01.07. г. Тираж 70 экз. заказ № 0084
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
15
Размер файла
586 Кб
Теги
крупного, борьба, урала, рогатого, средней, 3315, мер, скотт, распространение, совершенствование, цистицеркозом
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа