close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

326

код для вставкиСкачать
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
-asw
На правах рукописи
МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО.ХОЗЯЙСТВА СССР
, Новосибирский сельскохозяйственный институт
ГОРЕЛОВ Иван Григорьевич
ИЗУЧЕНИЕ ИММУНОГЕНЕТИЧЕСКОГО ПОЛИМОРФИЗМА
ПО ГРУППАМ КРОВИ У СВИНЕЙ РАЗНЫХ ПОРОД
Разведение и селекция сельскохозяйственных животных
06.02.01*
А в т о р е ф е р а т
диссертации на соискание ученой степени
кандидата сельскохозяйственных наук
Новосибирск, 1975
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
' : v •. t
f?
^ ^ ^о-
^і/
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
.. На .правах рукописи
: ^, МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА СССР ;.Новосибирский сельскохозяйственный институт;
ГОРЕЛОВ Иван Григорьевич
-..
>
; ИЗУЧЕНИЕ
ИММУНОГЕНЕТИЧЕСКОГО ГШИІЮРФИЗМА
Г^ПО ГРУППАМ КРОВИ У,СВИНЕЙ РАЗНЫХ ПОРОД : V
Разведение-и селекция сельскохозяйственных животных
'.:;••
•'•'/"'• 06.02.0І!): * v.-,>...';.;- 't /:•:.l; .•••.-->•.
>••-' ,
.ІА
в т.о р е ф е р ; а т
диссертации на соискание ученой степени
кандидата,сельскохозяйственных наук
Новосибирск, 1975
\л%&:и_
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
Диссертационная работа-выполнена в лаборатории иммунога-/
* нетики и гибридизации животных Института цитологии и генетики
Сибирского отделения АН СССР. "'
*
:
;•"••••';.
т
.:;"; ':•-•.
'" ;у.к "•'' V ~' і"
л
ѵ. ;
' Н а у ч н ы й р у к о в о д и т е л ь - '••• •
доктор'биологических наук,
профессор ТИХОНОВ В.Н. г -
..' /: Официальные оппоненты: доктор сельскохозяйственных-наук,
'~••'••_ '••"-. • . ч ; : •'' , : , ' профессор ЭЙДРИГЕВИЧ Е.В. ;;
.; * •; •••. '"•
^ кандидат биологических наук; 1*
•'-'•-. у ^ •'•';. ]•' •"'
' ' : ? ; • ...;• ѵ 'доцент ѵ РУБАН А. И. ' '} 1:
ѵ'•'••": Ведуцее предприятие - Сибирский научно-исследовательский
,_ и Проектно-технологический Институт животноводства.\ ? Ѵ
. .„ ;
Автореферат разослан
_І9?5г.
Защита^состоится , ; "/.3 " іыыы?
1975г.
в /Нчао; УС мин, в аудитории 327 на заседании Ученого Совета
агрономического и зоотехнического факультетов Новосибирского
сельскохозяйственного института.
'••*>-
Адрес: Новосибирск 630039, ул.Добролюбова, 1 6 0 , Сельскоу хозяйственный институт.
":....
••-..-•.-•- С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института.
'..".:-.'. Ученый секретарь'Совета""""
кандидат~сёл^скбх6зяйственных наук,
• . ^.: .
доцент
.-''."
Г.В.БАЯНДИНА
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
"''.-'':"' ;В последние два десятилетия исключительно быстро развивается иммуногенетика.животных, один^из наиболее молодых разделов
^ 'зоотехнической науки;,Важное место;в шлмуногенетикеХза'нимает ...•'•
"изучение полиморфизма по группам крови. . •••-/">.."_.*•' ^ * ч _..„•.•^Современное состояние животноводства настоятельно,нуждает­
ся в дальнейшем развитии теоретических основ и большем исполь'- .
эовании в зоотехнической науке новых прогрессивных методов фи­
зиологии, ,биохимии и генетики. В. этом отношении изучение групп
.'-"'. крови животных могут сыграть значительную роль при разработке
•многих вопросов генетики и селекции животных. Иммуногенетичес^
•._•'. .кий метод определения происхождения может оказать большую п о -мощь при сравнительной оценке производителей по.потомству мето- *>"
дом полиаллельного скрещивания . на одних и тех же матках с пос­
ледующей расшифровкой происхождения пот-мства по группам крови.
Знание групп крови приобретает особенно большое значение при •
искусственном осеменении, поскольку при выборе производителей, -.."
, оставляющих десятки тысяч потомков, очень важно точно знать их
происхождение. С помощью изучения rj.ynn.крови можно вести ана­
лиз структуры пород, их отродий, линий и семейств, оценивать
^степень их консолидации, родства, гетерогенности и использовать
•, получаемые данные для целей совершенствования.стад и пород, а
также осуществлять контроль родословных при выведении новых по­
род, линий и'семейств.
.,
,~. •.•..-.:'.'.'
В последние,годы широко изучается связь групп крови с хо­
зяйственно-полезными признаками (J.Bendel , 1961; J.Baltzer ,;
-1264; В.Н.Тихонов,.1967; С.П.Безёнко, А.С.Терентьева и др.І97І;Н.О.Сухова, 1972; ВІА.Корешков, 1973 и др.). Успешно изучается
связь групп крови с устойчивостью животных к заболеваниям,__а
также при анализе несовместимости по группам крови, и при чины гемолитической болезни поросят • (Р.Вгшшег. , Н.Вгочт, Т.
Hull , 1949;j.Buxton et al., 1955; E.Andresea , 1962; Г.Н.Сердюк, 1971 и др.). ,
'
Иммуногенетический анализ, связанный-с полиморфизмом по>
группам крови,.можно проводить, только располагая моноспецифи­
ческими антисыворотками (реагентами), содержащими антитела про-
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
тив каждого изучаемого. антигенного фактора." При наличии антисы-,
-вороток определение антигенов является несложным и делается легко.
осуществимым в практических условиях. Однако изготовление pea'-Lгентов очень трудоемкий, сложный и длительный процесс (L^Fergueon, .
.':• І94ІJ В.Andres«a; ,1959;'J.MatouBek ДЭбО;' В.Н.Тихонов,І965; С П . ! 'ѵ
Безёнко,'П.Ф.Сороковбй и др. Д966; Ф.П.Ворон, 1969; В.П.Павли"-' '•'.
* ,ченко, С.И.Шадманов,І973; Н.6.СуховаД973; Г.В.Марусяк,І974 и ! -.
•.другие).'
:
, -У'\
' 'І": :.,"'"'/
'• ";''1 '•*'• ' '•"''"•'''' '•./'''
:.> В связи о вышеуказанным,первой задачей нашей работы, кото­
рая была начата в 1962 году, было изготовление моноспепифичео • ких антисывороток/ выявляющих возможно большее число антигенов.
,С этой целью было иммунизировано и реиммунизировано более 600^ і
животных-реципиентов .-При атом для повышения доли имглунореактив—;ннх животных, а также' увеличение(титра иммунных сывороток в за•дачу работы входило изучение эффективности испатазовашія внутри*:породных, межпородных и межвидовых иммунизации, различных' мето|дик и'схеы иммунизации,.проведение сравнительной оценки эффек JTHBHOCTH некоторых адыовантов. Кроме того, необходимо было раз-.
;работать новую методику иммунизации кроликов для ускорения по.-*
jлучения высокоактивной.антиглобулиноной сыворотки. Проведенная!;
. ;работа по получению ыоноспецифических сывороток позволила соз •дать большой*банк реагентов и приступить к выполнению главной : . • •
'задачи - изучению полиморфизма групп крови свиней разных пород.
Второй. основной задачей работы было изучение распространен......
ния антигенов разных систем групп крови в породах свиней, раз г :
! водимых в СССР, определение межпородной и внутрипородной диф [ференциации по генным частотам и установление иммуногенетиче^—'
' ских характеристик разных пород по кровогрупповому полиморфиз- .
" - м у . ' ' - ^ -
" ' ' .
• - ' • ' '
•'•.
_
•
:
- "
;
. . . . • : • ' • . '
.-•'._.-,._.
•'•'•'•
.••;.';. Изучение разных методов иммунизации для получения
_ * „ моноспецифических сывороток-реагентов,выявляющих
•','.:-'"... ' :.. полиморфизм по т-руАпам~крови свиней
'-.;;:/• ч " ' '
~
'
; f ; Хотя.начало'изучению групп крови свиней положено в 1913г.
УІвсЬЪвЭГп, только после 1955 г . использование полиморфизма ' '
»этих животных стало быстро развиваться, благодаря открывшимся \
возможностям использования иммунных изо- и гетероантисывороток.
-':, За сравнительно короткий период были получены 16 иммунных сы-
"
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
вороток, выявляющих соответствующее число эритроштарных анти- ••~ геноь 9 генетических систем ( Е.Andreaen,I962). Вскоре Р.Вгаішег - Nielsen (IS6I) сообщил об открытии'антигена Ма, а год
• ... спустя еще двух антигенов Мв и.Мс новой системы групп крови М ,./'•
.'.••.... В 1962 г. E.Andxesen ,: . и L.Baker , опубликовали'данные об откт
t рытии системы В, а в 1963 г. - системы С BI964-I969 гг.К.На1а
и J.Hojjny сообщили об открытии антигенов еще трех генетических
.систем -.N , 0 и D . В самые последние годы в литературе появи­
лись сообщения об антигенах,'которые, по-видимому, составляют
новые:системы; о чем свидетельствуют материалы международных
конференций по группам крови и биохимическому полиморфизму,; сое—
... тоявшихся в Будапеште (1970), Вене"(1972) и Дэвис (1974). '
; Работы по получению антисывороток (реагентов) начаты нами -'
с 1962 г. Основными животными в этих работах были чистопород '• ные свиньи ландрас, вьетнамские масковые черные и 'пятнистые
. свиньи и их гибриды.* Кроме того; для межпородных иммунизации в,
"• качестве доноров и реципиентов .использовали, кемеровских свиней
' • (совхозы им.Чкалова и "Возвышенка" Кемеровской области), бёркширских Ч совхоз "Красная Мордовия^, Мордовская"АССР), кахетин.-•:•.: ских (Госплемстанции Грузинской СС*1),омских Ѵерых
(экс'; . периментальное хозяйство:СибНИИсхоз, Омская.область). Кроме то;Ч, го, были проведены'межвидовые иммунизации с диким кабаном. "Для >
' выделения;моноспёцифических реагентов были использованы также
сложные антисыворотки, полученные на Кубе, где были проведены ,
межвидовая иммунизация с пекари и межпородная с дюрокской,
польско-китайской и, гемпширской породами. • .'•' • В период с 1962 по 1974; гг. проведено более 25 различных ""'.'
серий иммунизации и реиммунизаций в т.ч. Іб.внутрипородных и •,'
10 межпородных с общим числом 650 голов. Донорами мы подбирали'
животных, имеющих эритроциты с-антигенами, на которые требова-'"'
• лось выработать соответствующие антасыворотки, Га реципиентами животных, не.имеющих соответствующих антигенов. При планирова­
нии иммунизации мы стремились к тому, чтобы донор возможно мень­
ше превосходил реципиента по разнообразию антигенов и не,обре—;
-зовалпсь бы комплексов антител, труднорасчленяемых, например, ,
Lgc,Lah,Bbd ^И Т.П. .-• "'. '
'; ,.,..!;.''' У .;
I
.'.Кровь у доноров брали из,передней полой Ъены'по методу | ;
Dumont (I955), Для иммунизации применяли в разных сериях свежие
эритроциты,.а также гемолизированные и их строму. Антигены вво­
дили интравенозно, интрамускулярно (иногда одновременно) и суб-
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
кутально в рецепторную зону у основания уха.
Во избежание гибели'животных от посттрансфузионного ана филаксического шока перед внутривенной инъекцией,начиная со вто­
рой иммунизации, проводили десенсибилизацию реципиентов введени­
ем за 1,5-2 часа до внутривенной инъекции 1/3 дозы антигена под•„ хожно. Инъекции ври иммунизации проводили, как правило четырех- .
кратно с разной частотой, разными дозами и о разными адъюванта..__'.' М И Г .
- . • . . ' ; . ' " . "
: ~ ~
.
-.
' _
;''•'
• • " . > . • •
Ѵ
' : • ' '
.
"
"
'
Изучая результаты многих серий иммунизации свиней при полу­
чении антисывороток,пришли к заключению, что наилучшие результа­
ты получаются при тщательном подборе реципиентов и доноров из
достаточно различающихся имлуногенетически пород или специально
• селекционированных линий по антигенным характеристикам. Самая
' высокая эффективность иммунизации достигалась,-когда она прово':' лилась путем одновременного введения антигена иктравенозно и
'.'• интрамускулярно, При этом оптимачьной дозой оказалась 10 мл 50#
трижды^отмытой эритроцитарной суспензией, вводимой 4 раза с ин­
тервалом 6-7 дней.:Более частые и."длительные иммунизации не при­
в о д я т к. улучшению антателообразования., а гипериммунизации ' ,.
' -часто являются причиной понижения титра антител и уменьшения.их*'.
--.специфичности. Антитела у большинства иммунореактивных животных
> появлялись, уже после второй иммунизации, и рост их титра про"должался'до 8-10 дня после"ІУ иш;унизалии, затем титр начинает
' •".. снижаться,\причем у некоторых животных весьма быстро;. Получен;
вые данные" 6 зависимости эффективности иммунизации от "времени :
'года и возраста реципиентов показывают, что сезон года,-по-ви­
димому, не играет значительной роли в.иммунореактивности живот­
ных, хотя.возможно в осенне-зимний период она несколько новы шается. Известно, что взрослые животные являются лучшими проду. центами антисывороток нежели молодые*', Однако' данных о р а з л и ч ной реактивности взрослых свиней разного возраста в литературе
..•• нет» ->••..:-ѵ. •.•••••.'
• -:•••?• По нашим данным л начиная с возраста от I года до/5 лет,:др'ляі
. реактившд,жи^отных/увеличиввется--т)Г-60 Д О S2#, a _ 3efetrcH0BEr—
начинав*,снижаться» Наиболее высокий титр антител в сыворотках
наблюдали,у."свиней в возрасте 2: года (табл.І). /•'•••'
.;; -/Поскольку, во многих (случаях цельвую кровь для тшушізации
сохранять сложно, м ы Провели исследование по использованию для :
иммунизации гемолизата крови и стромы эритроцитов. Проведенные
опыты показали^ что гемолизированная кровь и строма эритроци-
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
тов, хранившиеся^ замороженном состоянии 4 года при -20°С, не
.утрртили своих антигенных свойств; У'реципиентов образовывались
антитела (как полные, так'и неполные) с"титром/ не отличающимся
от полученного при'контролышх иммунизациях суспензией из не­
поврежденных эритроцитов. В результате четырехкратных иммуниза­
ции гемолиз атом удалось получить 5а," Еа, На, Кв, Ів, Іе, Еі и
некоторые другие с титром до 1:128, как теоретически ожидалось
по схеме иммунизации. Наши опыты также подтвердили эффектов .ность использования стремы эритроцитов для абсорбции сырых сы­
вороток при изготовлении некоторых вариантов антисывороток Еа,
Ей, Ее, Іа, І« и be.
.
.
'. Таблиц I
Иммунологическая реактивность свиней-реципиентов
на эритроцитарные антигены в зависимости от возраста
Возраст
реципи­
ентов -*•
(число
лет)
I
2
3
4
'•. *
'в*-'.:
" 6 ...
Число иммунизированных животных
ареак гивных
реактивных
Всего
абс.
абс.
72
-43
IIS
60,8
39,2
: • 8і
60,0
48
33
40,0
65,0
14 • 35,0
40
26
71,7
28,3 .
39
28
II
82,3
- 3
17,7
17
14
• б-; 60,0
.-'10
4 .40,0
• Всего:
&
302
194
•
•
•
108
61,0
"
•
*
Средний
титр им­
мунных
сывороток
&
39,0
15,8
44,8
21,2
18,2 •
- 22,1
16,0
23,2
. Число иммунореактивных животных в.каждой серии при обыч ных иммунизациях (без использования адъювантов) составляло от '
50 до 60#.. В результате каждой серии иммунизации обычно удава­
лось получить 10-12 иммунных "сырых" сывороток, содержащих раз­
личные антитела, которые часто отличались по титру.' Для того,
чтобы из таких "сырых" сывороток получить какой-либо моноспеци­
фический реагент, мы или проводили инактивацию слабых антител
разведением, или чаще абсорбировали все антитела, кроме нужных
нам эритроцитами с известным антигенным составом. После каждой
анализирующей абсорбции обязательно проводили конфрантацию сы­
воротки со стандартной "панелью" - набором эритроцитов извести*
ного антигенного состава от 20-30 животных разных пород, .-что
. - " ' • . '
'•
••
_
-~7
-.'•.
-
•
.-
і
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
позволяет определить моноспецифичносгь полученной антисьшоротки.
-•.. . Наряду с иммунологической оценкой полученных моноспецифи­
ческих'сывороток-реагентов путем использования крови животных,
. у которых заранее был известен антигенный состав, мы проводили
генетическое их изучение антисывороток путем семейного и статис­
тического анализов. Этим анализом с высокой достоверностью мож­
но было подтвердить или отвергнуть гипотезу об аллельности выяв­
ленных антигенов. Применяя различные комбинации абсорберов из
сложных поливалентных сывороток, нами были получены несколько
сот ыоноспецифических онтисывороток, выявляющих во многих пов торностях 50 антигенов 13 генетических систем (табл.2). Высокая
активность и чистота приготовленных нами антисывороток была под­
тверждена в 5•международных сравнительных испытаниях, которые
' проходили в 1964-74 гг. •'•''"
Повышение эффективности антителообразования при
получении антисывороток к эритроцитарным антигенам
. Получение ыоноспецифических сывороток-реагентов для изуче—,-'
ния эритроцитарного полиморфизма животных-трудоемкий и длительныйпроцесо. Одна из причин сложности - сравнительно низкий.про­
цент иммунореактивных животных при иммунизации эритроцитарными
антигенами. По нашим данным, средний процент иммунореактивных
- животных обычно составляет 53/J. Исследования"-других авторов,
проведенные также на свиньях (Ф.П.Ворон,1969; Н.О.Сухова,1971;
В.Г,Марусяк,І974 и другие), подтверждают, что не более поло вины животных образуют иммунные антитела после иммунизации. Ана­
логичные данные были получены при яэоиммунизации эритроцитарны­
ми ' антигенами крупного рогатого скота {Ч.І1.Мешкаусас,І967; Х.А.
Йыги» 1969}•Э.Г.Воробьев,1970,и др.). Причины ареактивнооти не­
которых реципиентов, которым вводят антигенные факторы крови,
недостаточно выяснены до настоящего времьни (R.saieon:- , 1962;
Bednikoff ', Dotta «Stone Д 9 6 2 ; B.Andreaen. .1963; B.Buach.
, • J.Thamm ,1970 и др.), .:
"".' ,
''"• ~ ~
Реиммунизалия.считается наиболее надежным средством усиле­
ния.синтеза антител {R.Kace%I955;B7An3reeea,IS69; P.B^auaerittelsen ,1961; к.наіа, J.Hojay ,1962; Матоун1ек^1964 и др.). Од­
накодчасто и реиммунизѳиия не позволяет получить необходимые
•:"•' антисыворотки. Поэтому требуется разработка методов введения
антигена одновременно с неспецифическим стикуллтором-адъюван -
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
' о й
А Й Й Н О З Ш Ч Й И Л М Ю Н О Ш О - Л П С Л А И М
s3 & $ 5* ѵ о* £ff'pі?г? g в».*? R s?'г ff-ff ¥ s * & s?s
И
i Q ' : 4
3 3
o o o o '' О : •
-'
. o ^
'
•
о
e_,:
• •
,,
•
з ' з з з
>
о „
-.-
з з з з
s
s
з и
-з е . О
. с л о о ѵ о о с л о о о о ©
'•
'•'-.-'
P.-,*':» '. ~- "
•••,,:
,
,
•
-.
• ;
,
;
. • -
f
-
,
,
'
;
•
'.-
я 60
о о о о
•
',
,•: .;.
•
•
'
-
•
з
g
_
'
О 5 Ю 5 5 5 К W ІЗ И О (О ( O S ffl.Hl * . S Ы M О (О Ю
K i ' s Я t^ f t* t* *« t 4 t 4 f H f V ^ W W g ! « t ) m* ? HP
S l o e H t r u f І Г Я •» (к О о-в» /^ ft О Ю в W f P- О
з'з'г
1
<':
..._'
з я;-»,", я • з. • «'•• з . з я • з f •'•*. .» J.» я "я з н
•
/
'
"
.
>
•
'
.
'
•
'
.
'
.
з, з
.
(Л 51 Si Н (Л W Н СЛ Н * (Л W А Ц N S К) (Л Н (Л Н ОІ Г
.
О
О
О .- ,. О О О • . . , ОО.
О О О J» >• Ц» О > . , > > > . О > > О О > , >• > О O Q O
О О О • «
О » • і» •
О
- О О; . • .
О О О О
о о.,; г- о. о ' о J ••;.". о ; ; .
'
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
том различного происхождения, которые стимулируют иммуногенез. ,
Применению адыэвантов для приготовления сывороток-реаген­
тов при изоиммунизации эритроцитарными антигенами до последнего
времени не уделяли должного внимания. Исследования по этому воп­
росу; были начаты нами путем применения кристаллвиолета и адью- - ванта Фрейнда. А.С.Терентьева, С.П.Безенко (IS70),;которые под-твердили, что, применяя адышант Фрейнда при изоиммунизации сви­
ней эритроцитарными антигенами, можно значительно увеличить чис­
ло иммунореактивных животных и во много раз повысить титр иммун­
ных сывороток. В дальнейшем мы изучали эффективность использова­
ния скипидара и кофеина натрио-бензойного. ;
""" Приготовление и применение адаяшантовэ наших опытах было
следующее. Кристаллвиолет применяли в виде 1% - раствора в дис•* тиллированной воде по I мл (10 мг сухого вещества) на каждого...
. реципиента. Вводили его в смеси с антигеном:3-4 раза внутривен­
но и внутримышечно*. Адыовант Фрейнда ПРИГОТОВЛЯЛИ • из минераль"ного масла» эмульгатора и туберкулезных микобактерий (БЦЖ);Этот
адышант,' таким образом, представляет модификации масляной смеси
. .Района, ^который впервые применил ее в 1925 году для отимуляции".г>;
'.иммуногенеза..Мы готовили по'прописи (на одного реципиента):
" эритроциты, отмытые 3-4 раза - 2,6 млі вазелиновое масло - 5,0
-мл, ланолин - 2,5 мл, БЦК - 5 мг, пенициллин - 50 тыс;ел» Ва ; ; зелиновоѳмаслоо ЕЦ£ и ланолином стерилизовали на водяной бане
-в течение 30 мин. при І00°С. Затем в эту"'" смесь, охлажденную до
+40°С, добавляли антиген и тщательно перемешивали в фарфоровой
' ступке пестиком до гомогенной эмульсии, одновременно добавляли
.пенициллин. Перед введением реципиентам смесь пбдсгревали в го. рячей"воде до +40°С.. Антиген с адъювантом Фрейнда вводили только однократно,"а последующие"иммунизации проводили без адыован. та." Масло терпентинное очищенное (скипидар) мы использовали в .
ікачестве адъюванта в смеси с вазелиновым маслом (30% скипидара
., и 70% вазелинового масла), учитывая его свойства как сильного
раздражителя.
, ..... ..-—••--• - - - - - ••':• Смесь перед употреблением стерлизовали на тягучем пару в
течение 30 мин^ при;І00°С и вводили однократно в дозе.10 мл
адъюванта и 10 мл 50#-ной эмульсии эритроцитов.'Добавление адъ­
юванта и смешившие его с эритроцитами до тонкой эмульсии про. водили перед введением реципиентам. Кофеин - бензоат натрия
использовали в "виде*20$?-ного раствора. Препарат из ампул.вво "дили под кожу в дозе 1,5-2 мл 20% раствора 3-4 раза одновре •
•
-• •
-
То~-
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
•.'-. -:
v Таблица 3
•Иммунологическая реактивность реципиентов в зависимости от
использования при изоиммунизации адъшантов
П
ш
17
7
71
• Методы иммунизации
Число
иммунизи­
рованных доза анг кратность кратность Интервал
введения' введения между
животных тигена
(50% сус­ адъюванта антигена икиунипензия,
зациямл)
ми в
днях
Внутривенное .и
внутримшечное без
адъювантов
32
Внутримшечное и
внутривенное с крис- .
таллвиолетом
148
Внутривенно с| кристаллвиолетоы
118.
Внутримышечно с адын
вантсм Фрейнда.
14
. Внутривенное и внутри­
мшечное с кофейной
31
Внутримшечное с 305?
терпентинным маслом
105
Число
Яре-'
актив­
образовав­ ных. ;•:.•
ших анти - живот­
ныетела с
титром 1:4
и больше
ЯИВОТНЫХ,
... " V
4-5
6
17
53,12
4
.4-5
6
94
'63,51
'4
4г5
6
89
75,42
. I
4
6
12
85,71
3-4
4
5-6
29
93,54
I
4
6
9 8 .:.;'••'
93,33
о
,1
Методы' введения
антигена ,
о о о о о
Груп­
па
•
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
Таблица 4
Динамика антителообразования при иммунизации свиней
эритроцитарнши антигенами в зависимости от -применения
различных адьювантов
• ; Метод
иммунизации • '
Динамика титра антител
после II иммунизации
я
сМі-т
после Ш иммунизации после ІУ иммунизации
п-
М-±т
п.
М-*-"*.
Внутривенно и внутримышечно
с кристаллвиолетом'
86
8,40+0,37
77
14,26+1,568
68
19,796+2,162
Внутривенно с кристаллвио­
летом ;
69
9,00+0,72
77:
16,24+0,772
55
27,22+5,297
Внутривенно с кофеином
27
11,33+1,178
26,59+4,047
17
36,23+3,92
Внутримышечно с аддаантом
Фрейда
12
15,33+3,272
24,66+2,82
12
42,66+5,93
Внутримышечно с 30$ терпентинным маслом
30
16,33+1,138
24,77+2,46
30
43,66+5,94
27
12
30
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
менно с.введением антигена:(но,не. в смеси с ш ш ) . ' . ', •••
• ,лЦ, Некоторые, результаты,,полученные^при^изучении влияния вдъювантов,на.иммуногенез.""приведены в .таблицах.З' и: 4,. При. сравне ^
нии внутримышечной и внутривенной иммунизация,с кристаллвиолетом
и иммунизации без адьгованта, статистической обработкой разница
по числу иммунореактивных животных была небольшая и не подтвер­
дилась. При сравнении остальных групп, где применяли адъюванты,
с контрольной первой получили статистически"высокодостоверное
различие (Ра0,53 - 0.S9S). Кроме того, при использовании адыо­
вантов титр икмунных сывороток значительно увеличивался» Очень
ваяно, что титр увеличивался как на сильные,так и на слабые ан­
тигены, т.е. конкуренция между ними сглаживается (табл.4). Ре­
ципиенты вырабатывали антитела одновременно на слабые и- сильные
антигены, что редко наблюдалось при обычных иммунизапиях без
адыовантов, Что касается здоровья.животных-реципиентов при при­
менении адыовантов, то мы не обнаружили заметши: отклонений в .
период иммунизации и после нее.
Изучение полиморфизма по антигенам групп крови свиней
разных пород, разводимых в Советском Союзе
Иммуногенетические исследования пород с помощью групп кро­
ви приобретают все большее значение,"- поскольку дают важную до­
полнительную информацию для понимания их происхождения, гене —
алогических связей И'путей происхождения.
Большие различия по группам крови между породами свиней
показали'А.Качмарек и др. (1961) на крупной белой и злотницкой породах; £.Andreeen.(IS62) на геышшрской, дюрокской и ландрасской породах; к.Наіа , J.Hojny (I964) и H.Bruka (I964) на
ландшвайнах; V.iovanoviS and z.stojnovlS (1965) наберкширской,
ыангвлицкой, черно-словенской; J.Cerne(I966) на свиньях слове нии и шведском ландрассе;м£атаііег(І966) на крупной белой,чешской, корнвальской и ландрасской породах; j.Hojny • , j.mtat
(1968) на гемпширской и дюрокской породах; С.П.Безенко и др.
(1968) на крупной белой, ургуыской и брейтовской породах;Г.А.
Толпеко (IS69) на крупной белой и северокавказской породах;
В.П.Павличенко и др. (1971) на крупной белой, брейтовской по­
родах; H.Dinkiage (1969,1971) на немецкой улучшенной белой и
миниатюрной геттингенской породах свиней; З.Д.Ійльман и др.
(1974) на крупной белой и белорусской черно-пестрой и др.
- 13 -
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
В Советском Союзе "^обширные 'исследования^ггрупгі::кр6вигыног'их*
_• •, ішрод свиней "систематически "проводятся с Т І96І' года лабораторией
иммуногёнетики и гибридиз аіщи животных Института цитологии'а г е ­
нетики ' £ 0 " Ж СССР (В.Н.Тихонов и др. І962-74 *гг.) ,\ В ѳтих иссле­
дованиях при нашем участии были изучены не только особенности ;'
. полиморфизма по группам'крови 29 пород свиней ."связанные с иіс ' '
филогенезом',' но такжё;внутрипор6дная 'пбпуляционнаягдифференциа-'цияв^связи со структурой пород, генеалогическими и заводскими
ЛИНИЯМИ.";-
;
"
- V ; " ; J " "••'
. '*.'
"
•-''•
''"'•'.
";•.;. Для изучения полиморфизма и иммуногенетических особенностей
по группам крови пород свиней были проведены при нашем участии
несколько экспедиций на племенные фермы совхозов и колхозов в
Украинскую ССР, Эстонскую ССР, Литовскую ССР, Грузинскую ССР,Ал­
тайский и Краснодарский края, Московскую, Воронежскую, Омскую,
Кемеровскую, Новосибирскую и ряд других областей, а также и Мор­
довскую АССР. По группам крови мы исследовали свиней следующих
пород: крупная белая, крупная белая Эстонии, лакомбская, ландрасская, украинская степная белая и рябая, муромская, эстонская бе­
конная і латвийская белая, сибирская северная, литовская белая, "ч/
брейтовская, беркширская, северокавкаэекая/крупная черная,мир~
- городская, уржумская, пьетренская, белая длинноухая, кемеровская
ливенскея, сибирская черно-пестрая, омская'серая, польско-гкитайская черная и рябая, мангалицкая; кахетинская и вьетнамская чер­
ная и пятнистая породы* Таким образом, изученные нами,по группам
крови породы в генеалогическом отношении были очень разнообраз­
ны. Иммуногенетическое изучение проводили с помощью полученных
нами ыоноспецифическшс антисывороток (реагентов),'о которых бы­
ло сказано выше. Изучение пород.проводили по встречаемости анти­
генов, генной концентрации и частоте генотипов по 10 генетически*'
системам:-А,В,fl,E,F,G,H,I,К,L. Вычисление иммуногенетических па­
раметров, осуществляли по общепринятым методикам, при необходи мости материал статически обрабатывался, достоверность разнзвд
.-. определяли по углу f _(Н.А,Плохинскиа;іУЬУ).
'
—-\
Изучение пород свиней по многоаллельным
генетическим "закрытым" системам групп крови Е и Ь
• .'
Система Е является наиболее сложной из изученных в насто"Тящ'ее время систем групп крови. В настоящее время в этой системе
..известно более 12 антигенов, которые контролируются соответству-»
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
ющиы число?.галлеле;І7~нзследуюздигпсл~р-зиде~оп5еделеішых фоногруішсочетаний, 'которые не'дают рекомбинаций. Нами 'билл получены и не­
однократно воспроизводились антисыворотяи, которые выявляют следу­
ющие антигены этой системы: Еа, Ев,;Е<з, Ее, Ef, Eg, Eh, Еі, Ек,
El, Еп и Ео. Благодаря такому большому набору реагентов.мн могли
идентифицировать по этоіі системе в закрытой,популяции ландрасов .
экспериментального хозяйства СО ЛН СССР 8 аллелей-aegmno , aegla,
aegil.aeflu, bdgkjn ', ЬсШоа, edghkm И edfhkm Г, которые Образова­
ли 23 генотипа. Проведенное исследование разных пород по системе
Е выявило значительное шдѵуногенетическое'различие' между'ними,
Например, ш т и г е н Е а у некоторых пород встречается очень редко
или отсутствует.совсем. Наоборот, у других пород концентрация
этого.антигена очень высокая ~ у беркширсісой 56,3#, а у вьетпам-'
ской - І00#, Для характеристики популяции очень.большое значение
имеет концентрация аллелей, и по этому параметру наблюдается •весьма знач/тельнад дифференциация. Еольшоіі интерес, в частности,
представляет концентрация аллели aeg в разных породах. Концент­
рация этой аллели варьирует от 0,6188 у вьетнамской,черной поро­
ды до 0,0012 у литовской белой. Под'давлением определенных се -.: .
лекционных процессов аллель aeg из популяций сибирской северной,
украинской степной рябой и некоторых других пород полностью эли­
минировала. Большое разлило наблюдается между породами также по
разнообразию и частоте генотипов Е - системы. - ';.•"• о...•/[-:
Система h - сложная система, которая по последним данным;
состоит и з б аллелей:* bogi, bdfi , adnjk "',* Vdhji , adhi. , egi;»"Нами получены реагенты, выявляющие все известные антигены этой|
системы: ХІа , Lb, Lo , La , bf •, Lg', Lh , Li І Ы , Xk и Ы .,'
Таким образом мы можем точно установить все аллели и генотипы.''
Исследованные нами породы значительно различаются друг от
друга по частоте антигенов» Обнаружена исключительно, высокая
встречаемость антигена;Іа у вьетнамских черных свиней"- 1005?, ..
кахетинских - 76,51/2 и некоторых других, У свиней крупной белой
породы частота'значительно.(статистически достоверно) меньше 5,55#.- Следует отметить, что высокая частота антигена 1а харак­
терна для многих пород, выведенных с участием аборигенных сви ней и дикого кабана. Соответственно, значительное" разнообразие'.
наблюдается между породами и по концентрации аллелей (табл.5).
Большая ковдентрация аллели bogi.обнаружена у свиней сибирской
черно-пестрой породной группы - 0,9455, крупной белой -0,9305,"
ландрасской - 0,9055 и сибирской северной - 0,8589. С другой j '
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
.
. ." Таблгца 5
Концентрация аллелей групп кроЕи системы Ь у некоторых пород свиней
за
1
г
3
4
5
6
7
8
9
10
II
Породы
Число
живот­
ных
Сибирская черно-пестрая
НО
Крупная белая"
108
Іандрасская
905
Сибирская северная
659 '
78
Кемеровская
Омская серая
- 167
154
'Кангашщкая
Кахетинская .-•:
, 149
Польско-китайская
пятнистая
103
;
Вьетнамская черная
49.
Польско-китайская черная . 200
Частота аллелей (доля)
bcgi
0,9455.
0,9305 .
0,9055
0,8589
0,5448
0,4045
0,4195
0,4127
0,3737
0,2449
0,1525
bdfi
' о
0,0417
0,0105
0,0395
0,2814
0,0749
0,2987
0,1544
с
.0,2900 "
0,0510
0,4075
adhjl
adhjk•
. adhi
*<Ji
0,0409
0,0185
0,0116
0,0182
0,0989
0,0216
0,0974
.0,2048
0
0 .
0,0724
0,0470
0,C£35
0,2325
0
0,0738
0,013?
0,0093
0
0,0364
0.CI04
0,1527
0,0422
0,1203
0
0 ."
0,1138 '
0,0422
0,0336
0,2720
0,3367
0,2875
0,0243
0,0715
0,092.5
0,0340
0,2857 .
0,0150
0І0І02';
0,0050'
0
'. '•
0 ."'
0
•
-
,
0
'••
•
'
•
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
стороны, аллель agi
встречается у них очонь редко.
Изучение пород свиней по гозухаллельнкц
" "закрытым" системам групп крови В.о. F t С- и I
;•.
-"''•-' .->::
Система В, Первый антиген этой системы Ва обнаружен Алдре- •
сеном в 1961 (fi.Andreaen ;IS6I) при" изучении гемолитической бо­
лезни поросят. Однако по данным международншс испытаний сыворо-ѵ
ток до IS?0;r. только нашей лаборатории удалось воспроизвести :'ІГ
реагент енти- Ва. В настоящее время: этот реагент получен в ФРГ
и других странах. Трудность его получения обусловленатем, что
почти все свиньи, разводимых у нас пород, имеют антиген Ва и,
следовательно, у Них не может синтезироваться соответствующее
антитело. Только путем имідунизации беркширских свиней кровью
ландрасов ми получили необходимую ангисыворотку. Сыворотка, вы­
являющая второй антиген этой системы Вв, получена нами в 1974
году изоиммуішзацией ландрасской свиньи )і 1158 эритроцитами :
свиньи № 2028 сибирскойчерно-пестрой- порода. После четырех­
кратной иммунизации с30J2 масляным адъювантом (который вводили
дважды) из шести специально подобранны--, реципиентов одно кивот-'
ное № 1158 выработало полные антитела, анти- Вв с титром хІСО. ••
В связи с тем, что реагент Вв удалось получить оовсем не­
давно, нами приводятся данные только по породам, изученным в
настоящее время,'
.
'.•'"-'•.'•• ;;
Все исследованные с этими антисыворотками породы: ланд -'.;_•;'
расская, кемеровская, крупная белая, вьетнамская черная,, с и ­
бирская северная и сибирская черно-пестрая - имели встречав мость антигена Ва равную 1005?, а второй антиген этой системы
Вв был обнаружен только у одной свиньи из Н О животных сибир ской черно-пестрой породной группы. У животных других исследо­
ванных пород, а т*акжё у европейского дикого кабана антиген Вв
нами до сих пор не обнаружен."•>' '
.ч . •
Система й была открыта несколько лет назад иконтролиру- '..
ется двумя аллелями о 3 и • о* . В 1970 году антисыворотка
,
еь была получена нами путем специальной пзоиммуниаадией вьет- :
намских свиней №№3,5,9, 4 и-53 эритроцитами свиньи * 28 той
же породы. В конце 1973 г. нами был получен реагент, внявля-»'; ющий и второй антиген этой системы са» также специальной^им-.
мунизалией чистопородных ландрасов и их гибридов второго по *• :
_ 17 -
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
коления с вьетнаѵсло?. породой эритроцитами гибрида № 161 с гомо­
зиготным генотипом D а/а. В обоих случаях при иммунизации приме--/
няля масляный адъювант. - _;/ /• .
..-,~> ','.'.,/' ->-."..•'• •
В связи с тс!.:, что реагенты для антигенов" системы а п о л у ­
чены неловко,по этоі: системе изучены немногие породы.' Однако мы .
ухе располагаем данными по антигенам,Да и иъ таких генеалогиче­
ски разнообразных пород, как вьетнамская черная, крупнаі белая, .
.сибирская северная, кемеровская, а такке и сибирская черно-пест­
рая породная группа. Полученные данные, показывают, что пс—вида кому для большинства культурных пород с белой мастью характерна
встречаемость антигена . сь ІССГ'. В то же время у вьетнамских
черных свинец отот антиген имеет частоту только 55,10^. Интерес­
но, что антиген Da до сих пор не наГаен у ландрасских, сибирских
северных, сибирских черно-пестрых, кемеровских,'-'а „также у евро пейсик диких кабаков, хотя частота этого антигена.у свиней круп­
ной белом породы 14,87%, а у вьетнамской - 1005?. г-к • ' •
Система Г групп крови свиней открыта Е, Андресеном в IS57r.,
когда был обнаружен антиген Га.
Реагент, в^являвдий
второй
антиген этой системы Гв,Сил получен нами в 1966 г. путем кммуни'зоции свиньи № 328 беркширскоіі породы эритроцитами.ландраса
№ 286. Независимо от наших исследований сыворотку анти- Гв полу­
чил Ф.П.Ворон (I960) по аналогичной методике,.используя в каче­
стве реципиентов миргородских свиней. Следует отметить, что реа­
генты анти- Га и Ев.накя неоднократно воспроизводились' с весьма
высоким титром и при всех международных сравнительных испытаниях
показывали полную специфичность. В таблице 6 приведены данные о
концентрации аллелей групп крови системы Р у свиней разных по род. Из приведенных данных видно, что у большинства изученных
пород свиней или совсем нет антигена Га, или частота его очень
низкая. В то ке время нами обнаружена очень высокая встречав ыость антигена Fa у вьетнамских, беркширских, кемеровских, мир­
городских, северокавказских и других пигментированных пород, что
дает убедительное иммуногенетическое подтверждение историко-зоотехнических данных о генеалогических связях этих пород.
.
Система Д - одна из первых описанных генетических систем
групп крови у свиней ( В.АпсІгевѳп > A-Wrobieweki
»IS6I). В
Советском Союзе изучение этой системы было начато в 1962 г.,
;когда были получены первые отечественные реагенты для определе'нил групп крови свиней анти- Ga и анти- G B . Антисыворотки, чет­
ко реагирующие с высоким титром при непрямой пробе іфмбса", не '- -'18 -
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
•. Таблица 6,Концентрация аллелеа групп кровиГсистемы F
у свиней разных пород (в долях)
*'
Число
животных
Породы
ТБеркши'рская
" '.'••',• 2 6 0 •
Вьетнамская черная " •,.: г ""
< .'..49.'.
Польско-китайская черная
V :• 200 •'
Крупная черная
ѵ> :-'••• . 2 0 0 ' . ,
Кемеровская
'••..-.', -'.. 403.. .
Украинская степная рябая
' :.*424''Омская серая -'
'- 167
іѵіиргородская
' ; " ' ; ' . : ' • ' - -•".'••'. і б з :
Северокавказская * '•••"•/•'• ~~ *-- , 1 5 9 .
:
••••;'
6 3
"
Лакомбская•'/' -''__/'•
103
.
Польско-китайская пятнистая ••'.
. Эстонская•беконная ,
* •'-•'•>97 •
••'•-•154'".
Мангалицкая '",'«-''•"
~Ѵ--Г-.'':
' Брейтовская; ''•. ';/••'/• ••;'!"'.";-. •-'-: 44'..
Украинская степная белая
- ; 342
Ландрасская*-".-•. -*: : J
- • 905
Сибирская черно-пестрая -"•;, sol-J'
, - . •': 7 1 7 •
Крупная белая
Латвийская белая
. 48^
, Литовская белая : :
;• і ' ' \ : 219 •'"
Г Крупная белая Эстония '."
.г.;;-'-'.47г •
Промокая -' ,. • ѵ ....
:: -20
;
ѵ
••",'..!-'415
.
Сибирская северная >.- '. ':..-.
' Белая длинноухая
•".''•'*'
>г-',-':47 .
"Уржумская-'-;
'•"•.." • V 160 •:
• Пьетренская -, • ; ; - . * : : • ,;*,.--..зо;.'/
„ Кахетинская -" - : ' : Ѵ ....
•: : І49',
:
У--;,:
-
•••:':"Аллели••.-.
ГѴ •
0,7926
•0,7957
•; 0,6675
0,5528 •'•"
0,4082
- 0,3269 •
0,2425
0,2206
0,2149
0,1933 0,1602/.
- 0,1628с
0,1298£
0,0955
0,0603 '
0,1558'..0,0686
'.• о , :
• о'--*"
v.; о г;-'-."
'"•. ГоѴУ
:
0
о
.'"'• .0 ,:•-.
о :ч - о ^ -.
•:-У.
0'•:.'•'
•
^
' ; -
.'..-..г8
• 0,2074.,.
0,2143
0,3325
0,4472
0,5918 •"0,6731 .
0,7575 г
0.77Э40,7851-:'
.0,6067
: .0,8398 V
0,8372'.
:0,8702
6,9045
0,9397
.,0,8442."
0,9324 ,
1,000 ".
"1,000 1,000. 1,000 ....
1,000
1,000
тіооо••:••;
1:1,000 ,
-1,000.У
'1,000 .">
• • • / • • • •
• .
, < - , . - ; -
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
однократно воспроизводились нами различными методами межпород _
иоіі п ЕлутрипородноЯ иммунизации. Более того, нам впервые уда . лось получить антисывсротку, содержащую антитела Св,- реагирующие
в прямо!; реакции агглютинации.;Данные исследования частоты алле­
лей и генотипов системы G у'28 пород, представлены в табл.7 по- .
называют, что породы зтчнтельно различаются кмкуногенетичесхи.
По системе G при наіаем участии"было проведено много работ, кото­
рые показали внутрипородную' дифференциацию на генеалогические и
заводские линиіі в породах ландрас,' крупная белая, сибирская се- •
верная, украинские белая.и рябая, а та.оке беркширская. Кроме то­
го, в некоторых" исследованиях, проведенных также при нашем участип, был обнаружен мрногенный гетерозис и показано преимущество
гетерозиготных свиней по 6 - системе в отношении некоторых ре..продуктивных качеств. .,- ....-,.
./
, .-•_ *'*
.:Система I изучена в ношеіі стране относительно мало, по-ви­
далому в связи с тем, что реагенты для выявления антигенов.Іа и •
Ів получить трудно. Нам удалось получить антисыворотку,, выявляю­
щую антигены Іа и Ів, в нескольких.повторкостях с рабочим титром
до хІО. Наиболее активную сыворотку анти- Іа мы получили^от ре сипиента £ 4S72 внутрипородной изогтл.уішзашіей/лшдрасских сви- .*ней. Этот реагент, судя по международным сравнительным испытани­
ям 1072 и IS73-годов, обладает.высокой спещіфичностью. Получен­
ные нами реагенты Ів работают удовлетворительно пока только ."о •'•
эритроцитами животных определенных пород. Изучение"разных пород
свиней по системе I также показало значительную дифференциацию
в отношении генной.концентрации и частоте генотипов по этой сис­
теме групп крови,
Изучение пород свиней по "открытым" генетическим
- системам групп крови А,Н.К-и другим
. Система Д групп крови свиней была обнаружена более 50 лет
назад, но до сих пор она остается "открытой", т.е. не все алле­
ли изучены. Антиген А свиней, как свидетельствуют многие иссле­
дователи, имеет определенное иммуногенетическое сходство с а н ­
тигенами А у человека, J у крупного рогатого скота, н у овец. .'
-В настоящее время в А системе известны три антигена: Ар, Ас и
Ао. Путем иммунизации свиней нами получены реагенты ^.выявляющие
, антигены Ар, Ас и Ао. Реагенты Ар и Ас неоднократно воспроизво­
дились в лаборатории разными методами иммунизации и проверялись
/У;. V1,';
..Л-'-''.'
* 20 -
• • .'
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
"•"'*• Таблица 7 ' „/
• .Концентрация аллелей и,частота генотипов групп
\ крови системы G у свинеіі различних пород
П о р о д ы
Вьетнамская черная '••
Муромская
Крупная белая Эстонии
Крупная белая
...;;- .
Лакомбская ч
Ландрас
Украинская степная белая
Сибирская черно-пестрая
Эстонская беконная >
Латвийская белая ^
Сибирская северная •.-...
Литовская белая
.
Бреитовская
.
Беркширская . ' Северокавказская
Крупная черная ,
Миргородская ••'.•'» ' і
Украинская степная рябая
Уржумская
Пьетренская
Омская серая
Белая длинноухая
Кемеровская
, '. •.
Ливенская
,*л
Польско-китайская черная
Польско-китайская
пятнистая
Мангалицкая
'
Кахетинская :
.;
Число ' Аллели (доля) Д Iенотиіш {%) ЖКЕОТGB.
Ga/a
За/в
GB/B
.ных ;-еа:.-'
49 0,1735
20 0,2500
47:-.
609^
. 63
905:
342
301
„ 96
48.
415
219
118
280
158
20
163
424
20
30
167
47
403
.49
200
0,2553
0,2553
0,3333
0,2901
0,3363
0,3406
0,3594
0,3646
0,3964
0,4100
0,1892
0,4122
0,4621
0,5000
0,5031
0,'б092
0,6250
0,6333
0,6617
0,6915
0,7146
0,8571
0,8775
0,8265
0,7500
0,7447
0,7447.
0,6607
0,7099
0,6637
0,6594
0,6406
0,6345
0.С036
,0,5900
0.ЙІ08
0,5878
0,5379
0,5000
0,4969
0,3908
0,3750
0,3667
0,3383
0,3085
0,2854
0,1429
0,1225
4,08. 26,53 69,39
50,0 50,0
. 0
8,5 57,4 34,1
16,51 46,53 36,96
9,52 47,62 42,86
.7,96 49,94 42,10
45,3 43,4
11,3
44,2 43,5
12,3
19,79 47,92 32,29
12,50 39,58 47,92
12,5: 33,3 54.2
44,8 36,5
18,7
14,55 66,70 18,75
12,90 30,47 56,63
17,09' 59,23 24,68
20,0
20,0 60,0
21,60 20,99 57,41
36,39 14,55 49,06
50,00 25,00 25,00
33,33
6,67 60
38,32
6,0 55,68
53,19 14,89 31,91
52,1
9,2 38,7
75,51 . 4,0820,41
81754
103 0,9029
154 0,9513
149 0,9531
- 21'"'-'
0,0971
0,0467
0,0469
91,56
91,94
0.Т9 17, ¥7
0
Г 0
:'8,44
8,06
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
в международных срагнительных испытаниях (1666-1873 гг). Анти­
тело пнта- А в малом титре обнаруживаются и в нативной скворот- .
ке многих свиней, а при иммунизации А -негативные реципиенты \
почти всегда вырабатывают А -антитела на эритроцитарный антиген
А. Однако титр их, как правило, небольшой. Реагент для определе­
ния антигена Ло, судя по между нороднш сравнительным испытаниям
IS73 г., имеется только в Чехословакии и Японии. В 1974. г. нам
таіокс удачось получить реагент сити- Ао из сыворотки свиньи
X 3025 лаіідрасскоіі породы, которую иммунизировали Ао позитивны­
ми эритроцитами хряка .4 3 вьетнамской породы.'Этот реагент ра ботает, как полный агглютинин с титром х5.
Для изучения распространения антигена А у пород и породных •
групп-сзкней, разводимых в СССР, нами в период с IS62 по IS73r.
были проведены обширные исследования с помощью антисывороток
анти- Ас и Ар. Очень редко встречаются животные, имешцие Ар, но
не имеющие Ас и наоборот. Поэтому мы при масовых исследованиях' .
оба эти антигена определяли, как один антиген А (Аср).>Система Н. как в настоящее время можно считать доказанным;
включает не менее 6 антигенов: а, в, с, а, е и еще один (а воз­
можно, более чем один) не изученный. При этом указанные антиге­
ны образуют не менее 7 аллелей: а, в, с, ав, ва, cd.Be. Нами
получены реагенты, выявляющие антигены этой системы - На, Нв, •
Hd. Однако результаты международных сравнительных испытаний по­
казывают, что возможно некоторые из полученных реагентов выяв­
ляют не один, а два и более антигенов, сцепленных между собой.
Надо сказать, что чистые реагенты анти- На,—Нв и -Hd получить
весьма сложно. Дело в том, что при обычных иммунизациях реци -.
пиенты плохо вырабатывают антитела на эти антигены. Нам удалось
получить вышеуказанные антисыворотки только после применения
при иммунизации"масляных адыовантов. Антитела в полученных сы' воротках имели сравнительно высокий титр (до хЗО) при добавле­
нии антиглобуляновой сыворотки, т.е. реагировали только при по­
становке' пробы"Кумбса." Нами изучены некоторые породы по ветре— ! чаемости антигенов, концентрации аллелей и частоте генотипов.
:
системы Н. Однако необходима дальнейшая большая работа по изу­
чению этой системы*
'- Система^ была открыта в 1957 году Андресеном с помощью
сывороток,Среагировавших только при постановке реакции агглюти­
нации по Куыбсу. В 1963 году нами была найдена естественная
свиная сыворотка, содержащая антитело Ка. В дальнейшем путем
' -гг -
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
...
Таблица 8
Концентрация аллелей.групп крови системы К в .
некоторых породах свиней, разводиміос в СССР
. П о.р о д ы^
.
*
'
•
•
-
.
-
Число
жквот—
. ных •••
"
Частота аллелей
.: к
а
Миргородская
• .
163
0,0123 ч
Ілангалицкая
154 .
0,0487
Крупная белая Эстонии
47
0.0550
" Беркпирская
' 280 "'- 0,1039
Омская серая: s
•?І67.
0,1*167 .•
:
Сибирская северная •-.
4 І 5 .'
0,1200 .
Сибирская черно-пестрая 301 'Г-,- 0,1209
Кемеровская' " . >-• •
403 ';•-, 0,1534
Украинская"степная
рябая.
. . .
424
6,1568
Украинская степная
, белая
~'.
342 0,1836 .".'
Латвийская белая
48 •'-. 0^2036
Кахетинская
1 4 9 ' . l 0,2115"
Литовская-белая '
219
0,2391
Лакомбская
63
0,2647
"Сёверокавказская ' . ' "
І58
0,2941
Уржумская
20
0,2928
Ландрасская
723
0,2931
Крупная белая
609 . 0,3279
Пьетренская
-=.'
30
0,3293 .
.96.;.
0,3548
;_Эстонская беконная
Крупная черная Ф
20
0,4069..
Брейтовская
44 .
0,4226
Белая длинноухая
47 •
0,4890
Йурбмская-iw.
20
; 0,6500
Вьетнамская ч е р н а я ; ; '
% 49 - 0,6987
.; '
•" . ''. А;, ,, У ;'; '. ~\J'. J C '
• ; к В -.
к° '
.0,6125
0,9448;
0,6458 '
0,6563
:0,5833
, 0,6215
0,5860^
0,1410
0.3752
0.0065.
0,2992
0,2393
0,2393
0,3685.
0,29110,7056
0-,582І
6,2611
;
0,6540
0,1624
0,6118 . 0,1846
0,6677
0,1208
0,6292° ,0,1317
0,3928 - 0,3425
0,4403 '0,2656
•• 0,4882 •',-^ 0,2120;>
0,2769
0,4250
0,4979. ; 0Д742"
СГ.3542 '. 0*3165
0І2794-' 0,3658
0,4069
0,1362 .
0,4035
0,1739
0,2846 : 0,2264.
0,3500
<*Г,'ч
0,1439
071574,
•0-С.С-. .
.'.'.
:
--гу-'^
'-.::'':•,^
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
внутрипородкой иммунизации нам неоднократно удавалось пригото-;'' •
вить антисыворотку Ка с оолее высоким титром, обнаруживалщим
>.
соответствующий антиген путем обычноіі реакции агглютинации. В
настоящее врсі/л мы располагаем пятью антисиворотками выявляю -'
щиі/.и антигены К -системы: Ка, Кві Кс, К а и Ке.
.''ч' .' •
•""
Ь'.оноспешѵГичесгаіе сильные реагенты для.выявления основных
антигенов рассматриваемой системы -1<а, Кв и-Kd'получены в на­
шей лаборатории в нескольких повторностях. Надежность;их рабе—
. ты подтверждена всеми-последними международными сравнительными
испытаниями (IS66-I973 гг.)..В самое последнее время нами• полу­
чены путем изоимдіушізации таіске реагенты для антигенов Кс и Ке,'
которые работают, как полные агглютинины. Следует отметить, что
наси реагенты анти- Ка и анти- Кв хорошо работают "не только в/
пробе Кумбса,но,и как полные агглютинины. Антисыворотка Kd. поду* чена в двух вариантах: полного но относительно:слабого агглюти­
нина и неполного агглютинина, но реагирующего с высоким титром.
.- Эти реагенты получены внутрипородкой изоиммувизацией ландрас ских свиней. Антисыворотки Ка и Кв почти всегда имеют неболь шой титр (до хІ5). Что касается получения сывороток анти- Kd,'
Кс и Ке, то они вырабатываются на :
имеющихся у нас реци­
пиентах весьма трудно. Только применяя различные адъюванты,нам
удалось после многих иммунизации и реиммунизаций.получить эти
сыворотки. Данные по концентрации аллелей Ка,и К в в разных.пс—
родах, представленные в табл. 8, свидетельствуют, что система
К может эффективно использоваться для дифференциации многих по-.
род, разводимых в нашей стране и за рубежом.
В настоящее время мы продолжаем работу по дальнейшему изу-^
чению систем групп крови свиней С,"И,к , 0 небольшого числа
вновь выявленных антигенов пока неизвестных систем. ~.
'•'.' ,"• \ .
выв оды
^' :';,..•,. и
.\ . I; Путем использования иммуногенетических методов получе­
но большое число моноспецифических высокоактивных антисыворо , ток, которые идентифицируют, по данным международных сравни ' тельных испытаний, проведенных в 1966-74 гг., 50 эритроцитар- -.
ных антигенов свиней. Полученные реагенты позволили изучить
- 24 -
' V: '
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
'-'.иммуногенетическиё особенности и полиморфизм-по.группам крови •
многих пород и породзіых'групп'свиной, разводиільд*в-Советском у
Союзе. ;-.' Уу:'
, "*'••-. '• ''*•" "'.'''''..•.'
• , • 2. В процессе создания банка'(набора) реагентов для изу че'ния групп крови свиней усовершенствованы;п.разработаны эфрек.. тивные методы получения моноспецпфических антисквороток:'гене­
тический подбор доноров.и реципиентов'изспециальных гомогек . ных линий, испбльзовашш для межпородных" кгАтлунизасяЯ-пород ;:с ;;
определенным генотипом, межвидовая'гибридизация с использсвЪнием "диких кабанов и, пекарей,; ^применение для;повышения.имкуно•' логической реактивности реципиентов йдъювактов широкого спект­
ра действия, ;а также применение строкы эритроцитов и; гемолиза-?.
"тов в качестве" антигена при иммунизации и абсорбции поливаяент^
ных сывороток и.'другие методические' и технические приемы. . " •'3. Установлено, что наиболее элективными методами икму -'
-низации свиней для получения реагентов, учитывая процент им,-.
мунореактивных жкз'отных и высокий окончательный титр антител в
-сыворотке крови реципиентов, являются, следующие: а> внутримы шёчное введение антигена с адъювантда Фрейнда,..б) подкожное и .1
внутримышечное введение антигена'с тегпентино-масляной смесью •.*•
(30/? очищенного скипидара и 70/2 вазелинового масла), в) симуль­
танное внутривенное и внутримышечное введение антигена о кофе­
ином и реиммунизаиия о интервалом 2-3 месяца.
.•••'.'..
4. Показано..что стропа эритроцитов и гемолизат свиней не
теряют антигенных свойств при длительном хранении при темпера­
туре -20°С (в нашем опыте в'течение Ѵ л е т ) и могут эффективно
использоваться для иммунизации, реишунизации и ""абсорбции. .7
S T O открывает дополнительные возможности длительного и широ­
кого использования крови животных с редко встречающимися гено­
типами (по системам А, Е, Р І 0 и L ) .
5. Разработан новый способ получения антиглобулиновой сы-,
воротки путем использования в качестве антигена .'смеси иммунных/
свиных сывороток по предложенной нами схеме йшунизации."'Этот
метсд~вГсравнении о другими методами менее трудоемок/надежен'*
и дает возможность при. наличии "малого числа животных (кроли.-;.':;
ков) "и в короткое время получить сыворотки в.титрах до x200Cw'^
4000 и.выше, практически без видовых антител.;' - .,'~'. ''.-:'';''7'7*! •'*
6. Изучено влияние низких температур на сохранность неко­
торых сывороток-реагентов. При этом выяснено, что глубокое за- .
мораживание (-І5-20-°С) сывороток надежно консервирует иммунные
"
"••::>
-25;"-
•
;
---"'.
•
:
,'';.
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
сыворотки. Іірп-.эткх температурах в сыворотках и плазме длитель-.
,.ное время сохраняются полные к.неполные агглютинины и антигло--'булкны (по ниши/, ОППТГАІ, в течение", 10 лет).
.,•-'_
..
.7. Изучение с помощью полученных нами антиснвороток,по / \
эритроцитарніл.: антигеном свиней ландрасской, кемеровской,. си..—
бирской сезерной,-крупней белой, беркш:рской, лакомбской, ук -"
ракнекой степной белой и рябой пород и не которых, других обнаругенетический іюликорІкзіГ.й значительную межпородную диффеr \znr,o
/ренцкацаа по группам кроги А, В,-Д, ІГ, Г, ,G,-I, ;K,.;L и ,Н..»
,••
t*;:;"8. С помола.» полігчс::них снтисивороток.выявлітбщих антиге­
ны систем Е, Г, G и I, показана вбзмокнесть.изучения Хилогенезо современных пород от, европейского кабана "и, свиней азиатско­
го происхо.т.денил, а тзкже г-'.и/.укогенстпческого'анализа ^недавних .
породообразоьатсльных процессов но призере украинских степных
белой и'рябой.пород, сибирской''северной породы свиней.
9. При кммуіюгенетическом исследовании Енутрипородной
структуры ландрасской, сибирской северной,,крупной белой, беркширской, украинских степи их белой к рябой пород впервые была
установлена внутрнпородная иопуляционноя ди^оренішацдя на уров­
не генеалогических, заводские и инбредных л:ний. Установленная
.специфичность частот антигенов и концентрация аллелей разных
систем делает возможным использование их в качестве иммуцоге нетическшс маркеров при селекции свиней.
.-'_..•..*.. 1 /.
Предложения для внедрения
1. Для интенсификации получения сывороток-реагентов еле- дует использовать разработанные.в диссертации-генетические и
иммунологические методы, повышающие эффективность иммунизации:
геыолизатом эритроцитов и их'стромы с редким генотипом, широ­
кое использование при иммунизации адъювантов - адъювант Фрейн-: да, 30$ терпентинное масло и кофеина натрио-бензойного, подбор
- реципиентов и доноров из специальных гомогенных линий, а также
использование в качестве доноров диких кабанов-и пекарей. •
2. Созданный банк специфических антисывороток (реагентов)
может быть использован в качестве эталона при организации.про­
мышленного, производства их в специальных цехах биофабрик.
3. Полученные данные.по иммуногенетическим характеристи- ':
каы разных пород могут быть использованы, как генетические
;характеристики пород для их дальнейшего чистопородного совер-
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
'•'• шенствования, а,тс.гске подбора по сочетаемостигпри гибридизации"
"'Ѵв промышленных свиноводческих комплексах.' *"у^' .,,'..Т•%*•/„ ..i'J-^',.
• Списокіопубликованных:работ:по теме диссертации'
.-.':'
;І.'ИлімулогенетичесгаіЙ.прогноз,-і;етерозисной;сочетаемости у сви* •» ѵ - ней, Рурнал ."Сельскохозяйственная биология". S 3 , ' 1956 **-,^;
'•' '•'?г"ч?;;:Св соавторстве)-; *"..: -• ''• ':~J:-\
•'••"'
•':'\'- •-.'.-^ .•'-'
'?„ 2. Ккг.цгногенетический анализ":разведения по линиям. Зурнал "Еи- .'*•; -<• вогноводство". £• D,-"ISGo-(в соавторстве),' •
* -:.. ';-"л'".--..'
'- • 3 , Ид'муногенетический анализ межпородное и; внутри породной днф-;'
-,ференциации у. свиней. Еурнол "Генетика" !1 12, 1966 ,; (в _:
'•." соавторстве),.:"
г -'._' ^- ..:..
•"'••'•>'."••':%5г :h
:
':: 4 . Ишуиогенетические.особенности сибирских-'-.пород .'свиней- и -" ' "
.':.:. анализ.'.породообразовательного процесса'. І\урнал "Еквотнс—
"':--•• водство'М*. 12 ,''1968 (в соавторстве)., 'J '-" ' -'/ . . ;;. ; - _ .:
5. Immunogenetic analysis o£ Intraoreea Structure or Genea-'"'" 6
>. logicalli Seiated;.Breeds. XITHEurojieaa;Conference . *'
-..'•".'- on animal"olood groups biochemical polymorphism. , '.
° .i. . Warsaw, 1968 ( в,соавторстве).
.; - ,
"" •
6.;Изучение внутрипородной,линейнойструктуры у украинских
•
.'-",-: степной белой и рябой; пород;свиней. Генетический]поли•'-","
_,:. '- морфизм групп крови и^белков у сельскохозяйственных жи-,
вотных (сб. научных работ), І369'(в соавторстве). " " .7. Эффективность иммуногенеза у свиней при получении антисы "-.. вороток на эритроцитарные антигены. Актуальные вопросы^,;
повышения продуктивности сельскохозяйственных-животных,Г;
Изд-во "Урожай", Ь'лнск, ІЭбЭДв^соавторстве) , r V . ; ' *'-,
8. Иммуногенетическое изучение пород - свиней І .разводимых,в:Co^.-j
ветском Союзе., В книге '."Породы свиней* в СССР". j Изд-во • ѵ ;у
;.„ •-' "Колос", 1970 (в соавторстве).-: . '.,.'' '-. >- ' 9. Иммуногенетическое совершенствование метода линейного раз•-• .._ ^ведения свиней. Еурнал "Животноводство" S& 12,. 1970 (в
:
• соавторстве).,' ". V , - - >"Ѵ*'
-- '•-•'-'-:.'. " <Ѵ
10. Иыыуногенетические характеристики внутрипородной заводской,
структуры украинских степных белой и рябой пород свиней.
Журнал "Цитология и.генетика" J* I» I97I (в соавторстве)^
"'-'it. Иммуногенетические • особенности и межпородная дифференкиа —~~.
,даяукраинских степных .белой и рябой пород,свиней. Sypчял "Цитология и генетика".Я 6,1970 (в соавторстве). -
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
.12, Сравнительное изучение эффективности некоторых "вдъювантов :-,
/;*;.;,••" при изокк-мунизацид'свиней эритрошітарными антигенами.: ,.._;.
.•'-'" і ."•і*'-Материалы II конѵерегцпи молодых ученых "по генетике и,';,'
- разведению сельскохозяйственных КИЕОТНЦХ'Г т.П,І5*7І, Ле-:,"
•V ,;-...«, кииград.. :- '."^ *•.•.' - : ';'• ѵ ,- -:..'•'' ' Д _ , "'Л"~~Л.13. Цитогенетическое исследование дальневосточных и,среднеази-*"
а'теккх диких кабанов и домашних свиней. Известия Сибир"••'.. ,•: ского отделения АН СССР.-Выпуск 2"(в соавторстве)^'^Л?.
"14. Имцукогенетические особенности:свиней омской серой породной •
ъ.\: группы.Еурнйл "Сибирский вестник с-х наук" '•& 6, IS72 (в ..*
;'."..'• '-* соавторстве),
' •..^ .
. ;%-•;.;.;...;•
15. Изучение полиморфизма групп крови дальневосточного^.5 средне"-,,.'• азиатского кабенов в связи с происхождением домашних .-.;•'
„
СЕИиеа.'.Сб. научных- трудов "Кордлекие и разведение ; с-х
.. ' животных". Одесса, IS72 (в соавторстве),.,.-•;...,. .^;,'-•*-•-:...;vj :
16. Разработка методов.получения :.:оноспецифических сывороток- ••
реагентов для выявления генетических каркеров;у-свиней. •
V'
Сб. научных трудов.Института цитологии и генетики. Ново­
т
сибирск, IS74 (в соавторстве) *.'''т
''•'•;* "•'...>;•'
17, Изменение иш/уногекеткческих характеристик породнкх и внут-'.
ѵ
,. рипородных популяций свиней при племенной работе.Дурная
.: /.-/':' "Генетика" & 12, IS74 (в соавторстве). '
'
' -18, Івшгопо genetic studies of wild European, A^ia and American
> "•'• • Suiforaes in connection. with -Che origin, of some anti­
gens in Sua serofa domestica. "Апішаі Blood Groups and
''",.••;•-' Biocheaical Genetics"- Abstracts of papers read at the
13th European Conference on Aniaal Blood Groups and ВІ-.
*•
ochenical Polymorphlsni.Vienna," 1972, 3, (в"-соавторстве),
19, Study of genetic eysteas controlling blood:group polynor- .
•••: phism -in. pigs."Aniaal'Blood Groups: Bio chemical Genetics?.
::" Abstracts of papers read at the 13th European Conferen-', :
ce of Aniaal Blood Groups and Biochemical Polymorphism.
V ;. Vienna, 1972, 3 (в" "соавторстве).
Ч
•
20. IffiBtmogeaetical studies-of European,..Asian and American
'•'*.• "'• wild, suiformes;in,-connection)with-phylogenesis of,doB»stic:pigsiWorld congress:, on- genetics_applied_to 11westoclc. prodactioe; Maurid t 197* (* соавторстве).'
r
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
•„_Лрдписано к печати 15 апреля 1975 г .
Формат бумаги 60x84/16. Тираж 150 ака.
Заказ to 180
г . Новосибирск, ротапринт ЙГД СО АН СССР
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
7
Размер файла
870 Кб
Теги
326
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа