close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

857

код для вставкиСкачать
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
А-дз&м
На правах рукописи
Шатайло Вячеслав Николаевич
ПРОДУКТИВНЫЕ И ФИЗИОЛОГО-БИОХИМИЧЕСКИЕ
КАЧЕСТВА ТРАНСГЕННЫХ СВИНЕЙ
03.00.23 - Биотехнология
Автореферат
диссертации на соискание ученой степени
кандидата биологических наук
Дубровицы, Московская область
2001г.
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
Диссертационная
работа выполнена в
отделе
биотехнологии
Всероссийского государственного научно - исследовательского института
животноводства (ВИЖ).
Научный руководитель:
доктор сельскохозяйственных наук, профессор,
академик Россельхозакадемии
Л.К. Эрнст
Официальные оппоненты:
доктор биологических наук, профессор,
Н.С. Марзанов
кандидат биологических наук, В Л . Рябых
Ведущее учреждение:
Всероссийский научно-исследовательский
институт свиноводства.
Защита диссертации состоится " 26 " июня 2001 г. в 10 час, на заседании
диссертационного совета Д. 006.013.01 во Всероссийском государственном
научно- исследовательском институте животноводства.
Адрес института:
142132, Московская область, Подольский район,
п. Дубровицы.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Всероссийского
научно - исследовательского государственного института животноводства.
Автореферат разослан 25 мая 2001 г.
Ученый секретарь диссертационно
кандидат биологических ^^}y/^(-^C^yt^}/^^a0^\L')
**• ^ - Губанова
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
-
1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
.
•
.
.
-
V
.
.
^
••'-'-? Актуальность темы. Основной целью работ,по генной инженерии в <животноводстве является' создание -. и , изучение уникальных племенпых -,>
животных с измененной и устойчивой наследственностью, используемых в ;
больших популяциях для их совершенствования, повышения продуктивности и
качества
продукции.
исследований
В
последнее
время
развернут
широкий
фронт
по созданию трансгенных животных с конечной
целью
повышения продуктивности.
.-•••..-..
Опыты по получению и изучению трансгенных животных по генам
соматотропиновой оси проводятся во многих странах мира. Но несмотря на
многочисленность и многообразие этих исследований, многие факторы,
определяющие - эффективность экспрессии ; чужеродных генов в клетках
целостного организма остаются недостаточно изученными. В связи с этим,
изучение экспрессии введенных генов и изучение их взаимосвязи с физиологоморфологическими признаками у трансгепных свиней является актуальной
задачей как в биотехнологии, так и селекции сельскохозяйственных животных.
;
Огромный "научный и практический интерес для
животноводства,/
представляет получение особей, устойчивых к заболеваниям (Muller M., Вгет
G., 1996). Новая стратегия повышения устойчивости животных к заболеваниям
основана на технологии нуклеиновых кислот (генетическая иммунизация'), *
которая развивается в двух направлениях: дополнительный перенос генов и
разработка ДНК вакцин (Зиновьева Н А . , Эрнст JIJC., Брем Г., 2001).
:
,
Совместными усилиями российско-германских ученых (Всероссийский
научно-исследовательский
институт
животноводства,
Россия;
Институт
животноводства и генетики^ ветеринарно-медицинский университет, г. Вена) .
были
получены
свиньи,
трансгенные
по ~ рёкомбинантным 'генным ~
конструкциям рилизинг-фактору соматотропина (mMTl/hGRF), гормону роста
человека с WAP. промотором (WAP/hGH) и дитрансгенные животные с ;
интеграцией как гена рилизинг-фактора гормона роста, так и гена гормона
роста человека с WAP промотором (mMTl/hGRF + WAP/hGH) одновременно.
\ ЦЕНТРАЛЬНАЯ
НАУЧНАЯ БИБЛИОТЕКА
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
4
Получение этих животных выдвинуло на первый план необходимость
изучения
физиолого-биохимических,
иммунологических
процессов,
хозяйственно-ценных признаков и их особенностей у вышеприведенных
трансгенных свиней четзертого поколения.
Цели и задачи исследований
Целью
процессов
исследований
и
выявление
интегрированными
в
было
их
геном
изучение
особенностей
рекомбинантными
физиолого-биохимических
в
организме
генными
свиней,
с
конструкциями
WAP/hGH, mMTl/hGRF и mMTl/hGRF + WAP/hGH четвергого поколения.
Для достижения указанной цели, были поставлены следующие задачи:
1) определить динамику среднесуточных привесов при выращивании и
откорме свиней с 50 до 160 кг живой массы;
2) изучить переваримость основных питательных веществ, обмен азота, .
углерода и энергии при живой массе ] 00 кг;
3)
вывить
особенности
биохимических
процессов
в
организме
ответа
организма
острых
кишечных
трансгештых свиней;
" 4)
изучить
трансгенных свиней
заболеваний.
особенности
иммунологического
на раздражение
возбудителями
*
5) определить мясо-сальную продуктивность при убое свиней в 160 - 170
кг живой массы, морфологический состав т у т , развитие внутренних органов;
6) изучить цито-морфологические
особенности
органов
и тканей
трансгенных свиней;
7) выявить корреляционную зависимость уровня соматотронина в крови с
другими физиологическими и хозяйственно-полезными признаками.
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
5
Научная новизна и практическая значимость работы
Впервые выявлены особенности физиолого-биохимических процессов,
мясо-сальной продуктивности и качества туш, цито-морфологических
показателей органов и тканей, иммунного ответа при вакцинации
бактериальной вакциной в организме свиней, с интегрированными в геном
конструкциями WAP/hGH и mMTl/hGRF + WAP/hGH у четвертого поколения.
Проведен анализ корреляционной зависимости уровня соматотропина в •'-.
крови трансгенных свиней с другими физиологическими и хозяйственнополезными признаками. ,
.
.
V
Положения, выносимые на защиту
1.Интегрированные в - геном * свиней, 'изученные рекомбинантные •'.'
конструкции, эффективно экспрессируют, что 'проявляется по динамикеV.
увеличения собственного гормона роста животных, в сравнении с этим
показателем животныхчгверстников.
2. Секреция собственного гормона роста у трелегенных свиней
способствовала повышению уровня' среднесуточных: привесов и лучшему
иммунному ответу при вакцинации. -•---•' ' • " - • •
-•.'"••-•.,
• •:
- 3.У трансгенных животных по рекомбинантной генной конструкции'
: WAP/hGH,. и рекомбинантной генной конструкции mMTl/hGRF.происходит
г улучшение мясо-сальных качеств.
'•;, ., w .
•
; 4.У дитрансгенных животных происходит ухудшение мясо-сальных
качеств в сравнении этими показателями животных-сверстников. ~: - '*. / . ; 5. Трансгенные свиньи по рекомбинантной генной конструкции
WAP/hGH; и рекомбинантной генной конструкции mMTl/hGRF являются
переспективными для целей селекции, а трансгенные по обеим генным
конструкциям одновременно, не пригодны для селекции.
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
6
Апробация работы
Материалы диссертации
были представлены
на заседании
отдела
биотехнологии ВИЖа и на 48-й конференции аспирантов и молодых ученых
"Вопросы интенсификации животноводства", Дубровицы, 1999.
По материалам диссертации опубликовано две работы.
Структура и объем работы
Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и
методов исследований, обсуждения, выводов, практических предложений,
списка использованной литературы и приложения. Диссертация изложена на"
167 страницах-машинопиского текста, включает 50 таблиц, 5 рисунков,-6
фотографий. Список литературы включает 125 источников, в том числе 65 на
иностранных языках.
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Для изучения влияния интегрированных в геном генных конструкций
релизинг-фактора соматотрэпного гормона человека (mMTl/hGRF), гормона
роста человека с WAP промотором (WAP/hGH) и интеграцией как гена
рилизинг-фактора гормона роста, так и гена гормона роста человека с"WAP
промотором
(niMTl/hGRF
+
WAP/hGH)
одновременно,
на
физиологс-
биохимическне, иммунологические процессы, хозяйственно-ценные признаки,'
были проведены , исследования; на растущих-откармливаемых трансгенных
свиньях и их аналогах помесей ландраса с крупной белой породой четвертого
поколения в условиях вивария Всероссийского НИИ животноводства.
*
•
Исследования проводили согласно схеме, представленной на рисунке 1.
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
Продуктивные и физиолого-биохимичсские качества трансгенных свиней
f ••••»'.*,•;>;д ' л г 1:'слсч\-->':.*.:;•.
? i 1 WAP/hGII,(n=3) | M;- | WAP/nGH + m M T l / h G R F , (n°2> 1
mMTl/hGRF,(n=3)l
. Сравнительная х а р а к т е р и с т и к а ' параметров : трансгеипых (n=S) и яетрансгенных <
?Vv7свиней (п=4), помесей 3/4 К Б х 1/4 Л Д , живая масса - 5 0 - 1 6 0 к г . - 7 ••'"'""-"'•*
Концент.
'
. показатели: . •
гормонов
... .'. -.'
Т-лимфоциты
в крови:
',> Иммунолог.
.Рости -^
развитие,
среднесут.'
привес .
>;№;г,7 •• *;•
'^•"••'"•'^•"г''-;-,
общий белок '
Фагоцитарная
фосфолипнды
еоматотропнн :
G - иммуноглоб.
тряйод-
М -иммуноглоб.
тиронин
- к Клебснелле ,
кортизол
- к Сальмонелле
- к Эшернхви ;.
,,,-.....,...,.
- . ••'t'.:
<.' - i ~ .
, .
.-f
..
,
.
:''_ -.;" выхода отрубов _'-.'.. • 0 J
•. ;*::-V,i\^^
глютаматдсгидрог.
. глюкоза • . •
-. креатянан .
Са и Фосфор :_ .-. :
инсулин
,-
' КОНТРОЛ1Ш Ы Й УБО
й
' г \ / ' • ."'-'
дактат 7 7'.„ "
-'
—
....... |
- • • * : . ' - .
—'•:
.
":•; Гистоло- ;7,
гнческие •
исследования:
.:/, Мясная продуктивноть, 7
\ % сала, % мяса, % костей, .
азот мочевины
лактатдсгвдроген.
•
? . '
масса предубойная, убойный
выход, толщина шпика, масса
внутр. жира н внутр. органов,
общие липнды
мочевина .
холестерин'.'..
триглкцернды ' »- . " альбумины ;
лншщротенды
• глобулины"молочная ки-та •;:.. АСТ.АЛТ
тироксин
• кПротею ,'..":
;
v
креатннфосфатаза '
Титры антител:
"J Обмен".
[ азота и
;" энергии •.'
;
.
креатнгасияазх ' ;
.' нейтрофнлов
рационов
••' к р о в и : .
В - лимфоциты
". активность
Перевари­
мость пнт.
веществ
Биохимические • показатели -
;
-'-Г
:u
'. !-*-
:~. печень, под­
желудочная и
щитовидная
железы, мыш.
;""•.'•_ ткань 7.;? i'T;-»
'.;*"Д «" '..'V : ^ "' - "' ' ' ""WJ-'"
. хвмическ.•'}.
i
характерис.
мыш.
;
;?-;
ткани:
рН-мяса '
%%- жира и
белка фарша
-
•
"
-
.
-
7,^.1
• ;Физико-»;
»" '.
£:
Корреляцион. пая зави-сть
уровня соматотропнна в кроч ви с другими
показателями
ч - # - -.1,7"."'' /*-"
\ V '-• Рис. i. Общая схема исследований;
•"Л*
v^:^^
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
8
Свиньи . были ' получены . методом • искусственного осеменения
нетрансгенных помесных маток семенем трансгенных хряков № 1236, № 1108
и К» 1253 в экспериментальном хозяйстве ВИЖа (ЭХ) "Кленово-Чегодасво".
И5ггеграцию чужеродного гена определяли с помощью полимераэной
цепной реакции. Для ГЩР геномную ДНК выделяли из кусочка ушной;
раковины родившихся поросят. . Тестирование г/роводили совместно с
сотрудниками ВИЖа Поповым А.Н. и Зиновьевой НА. (Зиновьева НА., Попов
А.Н.,ЭрнстЛ.К.идр., 1998). , ,
В течение опыта содержание свиней было индивидуальным,
безвыгульным. Кормление двухразовое (животные получали влажную
мешанху), полнорационным комбикормом СК-1 с повышенным (на 20 %)
уровнем протеина в сравнении с детализированными нормами кормления.
Температура в свинарнике находилась в пределах от +10 до 20°С. В период
опыта ежедневно учитывали по группам количество скармливаемых кормов и.
их поедаемость, контролировали физиологическое состояние животных, один у
раз в месяц поросят взвешивали.
,; '.,:••« .•••>.
:, Согласно схемы исследований (рис.1) в лаборатории нормирования
кормления свиней совместно с к. с.-х. н. Е.А. Махаевым были проведены
научно-хозяйственный, балансовый и респирациоиный опыты по методикам
в и ж а г ; . ' • • ' ' - . ' : " . " ' ' . ! " " . V '";'-V'
--^'••:••'•'"''•"'"\;^:-';- //''-.'.••-.'-'
В кормах и экскрементах определяли: содержание общей влаги - методом:.
_в^у^цимнв1я_в_термостате до постоянной величины; сырую золу - сухимозолением в муфельной печи;"общий азот -". по" Късльдалю; сырой жир по
Сокслету; сырую клетчатку - по Геннебергу и Штокману; кальций трилонометрическим методом; ; фосфор по ; Фиске-Сиббороу; энергию - калориметрическим методом; углерод - по методу Тюрина в модификации
Лукашек. Содержание кислорода и углекислого газа -, на газоанализаторах:
"Магнос";- и "Урас" фирмы Хартман и Браун, (ФРГ). Обмен энергии и.
энергетическую; питательность рационов определяли прямым методом в'
респирационных опытах на свиньях. Баланс энергии, отложение жира и белка в •
теле свиней рассчитывали по константам и уравнениям, рекомендуемым
первым международным симпозиумом по энергии.
В начале, середине и в конце научно-хозяйственного опыта от каждого
животного была взята кровь для гематологических исследований (Кудрявцев
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
АА., Кудрявцева Л А., .1974). Биохимический анализ крови проводили в
лаборатории биохимии с.-х. животных ВИЖа под рук. проф. Владимирова В Л .
В пробах крови определяли содержание: белка в сыворотке рефрактометрическим - методом; \ . мочевины ' } по "реакции
с
диацетилмонокисмосом в присутствии тиосемикарбоцида; общих липидов, .'•'••
фосфолипидов и холестерина по Покровскому; фосфора по методу Бригса в
модификации Усовича; активность: аминотрансфераз (ACT и "АЛТ) - по
Пасхиной. Концентрацию гормона роста устанавливали иммуноферментным
анализом." ,'" .,.".. ;• • ,:. V~:''-"'•'„''".•" ' •;/,': V' "'
; *' '."..•'•?"' ,
. Т-. и В-., клетки изучали с использованием антииммуноглобулиновых '
сывороток. Содержание иммуноглобулинов в сыворотке поросят проводили по ,
методуМанчини(ManchiniG., 1965). -; - :
..
. При постановке реакции i определения "фагоцитарной v активности, в
качестве тест-микроба" использовали "• кишечную палочку штамм 020 в
концентрации 1млрд. м-тТмл. - : ' .
^ ,J •.. ;. •'. ;..'.,•';
" УКровь для определения титров, брали в- различные сроки, т. е.- до
вакцинации; через 2 недели и 1 месяц после 1-ой вакцинации. Вакцинировали• - !
поросят два раза, согласно наставлению по применению вакцины ОКЗ, т. е. с '
промежутком в две недели между вакцинациями. *
?
-' Ч - i ,
Титры специфических антител к Протею, Клебсиелле, Сальмонелле и к'
; Ешерихии определяли при помощи реакции непрямой гемагглютияации."".':
• ,;По окончании опыта и при достижении свиньями живой массы 160кг,
был произведен контрольный убой всех подопытных животных.по методике
ВИЖа с'детальным изучением'развития внутренних;органов и анатомо-. морфологического, состава туш. В мясе и "длиннейшей мышце спины
^определяли содержание воды, белка, жира, золы. . Качество мяса и
" принадлежность к той или иной группе (PSE, DFD и N) оценивали по величине
рН мышечной.. ткани через 1 и 24 часа после убоя животных при
;
одновременном определении температуры.' • V " :
\'\
..'.'•*' Показатели,* полученные'в г>езультате* исследований, были обработаны
биометрическими методами по малой выборке по Е.К. Меркурьевой (1970) с
помощью компьютера IBM. ; • .,, - , :-, / . : v ,
_ :
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
10
3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
Живая масса и среднесуточные привесы свиней.
Динамика живой массы и среднесуточных привесов по группам в
возрастном аспекте и в целом за опыт приведены в таблице 1.
Таблица I
- Динамика живой массы и среднесуточные привесы по периодам
и в целом за опит трансгенных и контрольных свиней.
Возраст
Трансгенные
свиней (дней п Живая масса, Средн. привес
от рождения')
-" КГ
178
9
53,6±3,2
190
9
61,3±2,7
686,1±90,2
9
209
74,2±3,0
663,1±19,7
246
- 9 —103,3±3,1
789,1+10,7
1
274
8
110,7±2,9
557,9+97,6
8
287
120,0±3,1
779,4+19,1
305
8
133,9+3,6
753,7±134,6
319
8
142,6±4,6
6П,8±123,9
338
8
151,9±5,1
480,7±22,5
353
8
•648,8±101,4
16!,3±6,0
В среднем за весь
период опыта:
прирост живой
массы
108,5±4,9
средн. суточный
привес
663,4±36,6
-
• : • •
\
•
•
•
•
•
'
•
г
-
-
•
'
.
.
' -
.
Контроль
Живая масса, Средн. привес,
п
••"•••'•
4 .
_4,
4
4
4
4
4
4
К Г -
•-•-
49,0+3 Л
53,4*1,7
66,5±1,6
95,6±1,7
102,4±1,8
П3,7±2,0
124,0±2,8
137,9+2,5
144,8+3,1
150,2+4,9
Т1
4
'••
•
' •''.
г
.
365,0±159,2
687,5+22,3
787,5±58,0 "
245,0+45,0
870,0+36,2
572,5+48,9
995,0+108,1
357,5+42,9
362,5±156,4
101,2+6,8
582,5±94,1
18 февраля снижен уровень кормления до 1 кг в сутки (в возрасте 260 дней)
1 - 2 марта увеличен уровень кормления до 2-х кг в сутки (в возрасте 271 день)
9 марта увеличен уровень кормления до 3,2 кг в сутки (в возрасте 279 дней)
21 апреля произведена экспериментальная вакцинация 4-х валентной вакциной
ОКЗ (в возрасте 322 дня)
- ' ,'
7 мая произведена ревакцинация поголовья той же вакциной (в возрасте 338 дней)
Среднесуточные
привесы
как
у .трансгенных
поросят
так
и
у
контрольных были высокими и находились на уровне 600 г в сутки. В целом, за
период выращивания и откорма с 6 до 12 мес. возраста ( с 52 до 160 кг)
среднесуточные, привесы составили у трансгенных свиней 663,4 г, а у
контрольных 582,5 г, что на 13,9 % больше контроля.
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
11 с
.
> Переваримость, питательных, веществ рациопов, обмеп азота и
энергии. . " * ' * - , . . , , . * • • , .
Переваримость питательных 'веществ, трансгеиными боровками в
сравнении с их аналогами приведена в таблице 2. _
•
>•>
• <. ,
,
~
Таблица
2
Переваримость питательных веществ, (%), п-1,
Показатели
Группа
Контроль
Опыт
Разница
опыт - контроль
.+1,1
+1,8
+6,6
+2,0
" , +0,2
+1,5
+6,0
• +4.0 г ' ,
-. " +0,1
-0,2 ' - ~
' . ,"
~
" "- ' -+0,5
- " --' +5,3
-. '
+6,4
: -
Органич. ве-во
77,3
76Д
Протеин
76.6
74,8
Жир - •
53,2
- 46,6
Клетчатка
20,9
18,9
БЭВ
84,3
".- 84.1
76,2
* > * *~ Органич. ве-во " 77,7
- 80,8
74,8
Второй , . Протеин
Жир
50,6
46,6
тип
Клетчатка •
19,0
'
18,9
WAP/hGH
БЭВ
83,97 , 84.1
Органич- ве-во
76,7
- 76,2
Третий
Протеин
— 80,1 , - .74,8
тип
* WAP/hGH , Жир
- 53,0
46,6
. 20,0
- - 18,9
-' + - v
' Клетчатка ;
!
82,5
•• - ' 84,1'
mMTl/hGRF - - БЭВ "
Первый
тип *
mMTl/hGRF _
1
• '
;
•
+W
- •
-.,
-1,6
Трансгенные свиньи переваривали лучше контрольных на 4,4 % протеки
и на 5,7 % жир. Различия по переваримоста других питательных веществ
между трансгеиными свиньями и их аналогами были незначительными. '.; '..-.>.-И
Л'ч Отложение в теле боровков белка и жира за учетный период приведено в :..
."•'.'• - ч_": "",** '" .'•"• •Г>"ч*' Отложение в теле боровков белка и жира, пе*\ Ч -1 ;i-"-' -'-"; v "'•
•". ':__,-<: Группа •'."•> ' Первый тип
*Ч mMTl/hGRF
-.' Второй ТИП ;
Третий тип •i " f WAP/hGH.--.. С ;, WAP/hGH +•'-'"•
mMTl/hGRF
; белка, • • жира, -, - белка,
жира,
белка,
' жира,'
-'«-•д~'.*-:^'.;1*.'•:-: ...-п
" " г ' • ' * г - '"
'•-'••
г "•
*";'."'' Опыт •;-'"•.- -/-129,1 , '.* 308,1 • .; 106,9 > «-315,0 ;. . 1 0 7 3
329,0^
•'"••"•"
г
.
• ;. • Контроль-='.* "
. Опыт в %%; :
к контролю "
111,6
+15,7'
•332,8;
-7,4
•111,6
••••••-*2у:
> 332,8
Г ' -
:
" - - *
г 111,6 н
-;--- 5 » 4 ;'. •;:.-?.- 9 . | >
« 332,8 у.
^.1,г,::
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
По' отложению в ' теле белка первый-тип трансгенных свиней
(mMTl/hGRF) превосходил своих аналогов на 17,5 г или на 15,7 %, о поотложению жира уступал на 24,7 г или на 7,4 %.
•
,- '
Биохимические исследования крови.
<' '
>
- . ,
Результаты анализа метаболического профиля крови трансгенных и не
трансгенных свиней представлены в таблице 4.
•*- '
"
' - „ „ . "
Таблица 4
•• '
Биохимические показатели крови трансгенных
- 5
* и контрольных свиней общие за три взятия
Показатели
, _,
Ед.
2 тип
- 1 тип
mMTl/hGRF WAIVhGH
п=4
МНп, п=3
M+m. n=3
Общий белок
г%
8,2б±0,62
8,44±0,73
7,5±0,25
Альбумин : . ' . . . - г%< * 3,7610,23
•3,9±0,33
>4,27±0,23'
ACT
ге/л< 46,4±6,03. 41,4б±2,04 - 43,6+5,61
АЛТ
... ^ _ 1Е/Л 58,5±б,68
49,77±8,04
57,77±4,1б
Амилаза.: '. < . -- Е/Л * 4313±91,6
607,0±14,1
605,5±40,0
Глюкоза г
мг% 71.67±6,42
54,0±11,7
72,6±19,7
Фосфор
" '.
мг% 7,33±0,93 :
8,57±0,47
7,45±1,1 Изм.
Контроль
Группы
Зтип
Дитрансгекы,
M+m, n=2
7.81±0,31
3,91±0,33 37,67±3,54
• 54,33±8,97
525,5±10,3
"71,9±8,5
7,55±0,46
.,.>->. Как * видно ;'из;, таблицы/4, азотистый .обмен • в', организме ~свиней :
характеризовался повышением в крови трансгенных животных уровня общего V
белка на 8,9 %. Повышение общего белка произошло в значительной степени .-.'•.
за счет альбуминовой. фракции. Концентрация4, альбуминов у.-трансгенных; -.
свиней выше контроля на 7,2%. Активность амилазы в крови трансгенных \
свиней выше на 34,3 .%. Амилаза расщепляет альфа-1,4- гликозидные связи ";
* полисахаридов,'; (гликогена) . в , результате чего ,t повышается . концентрация у •:
; глюкозы."".^"*, '7- IV-'.'•"'""*,'"^г",:>•;•';'"-•'•""" ^*;""'v;^~'-.^-^-\*-V'',''':--"r':'^"---Vri-''/'*' .'\'-' v
,. "[• Анализ активности ферментов трансаминирования (ACT и АЛТ),'а также -|
креатинфосфокиназы показал, что в крови трансгенных животных активность
; ACT и АЛТ ниже на 11,7 и 7,8 % соответственно,* чем в контроле. Активность ,
ферментов трансаминирования тем ниже,.чем полноценнее аминокислотный
состав. поступающий из; пищеварительного'<•тракта." Лажим образом можно ;
предположить/ что биосинтез белка в организме трансгенных животных
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
13
,_ J
- —•
протекает интенсивнее чем в контроле, на что указывает повышение
концентрации альбуминов и снижение концентрации азота мочевины. "'"•
Минеральный обмен характеризовался повышением в крови трансгенных
свиней фосфора на 7,2 % в*сравнении с нётрансгенными животными, причем у t
,трансгенов первого типа эта разница составляла 16,9 % в пользу трансгенов.;
Повышение концентрации' фосфора н а ' ф о н е увеличения в крови белка
указывает на активное использование данного метаболита в процессах
фосфорилирования.
"
- " '
'
' •
- •. •
Гормональный статус трансгенных животных.
В гормональном статусе трансгенных животных произошли изменения.
- Показатели уровней некоторых гормонов,' в крови опытных свиней показаны в '\
:.таблицеэ. ..-.;.-..-.• .-••• •''....-'"•-.'.. •--''-:.'.: -';;- • -*.'•"'••.•'' u'~ .'•"" ; v : . ' - "">' '—bi-^., ; •"•,*„/.'' '^V: --fs*:"fc-':r* Содержание некоторых гормонов в крови... ^V/---; " *.,'..\v.,;• • ' . • - ' , . , j:» трансгенных животных в сравнении с контролем (нг/мл) . - ; " V
Г •: ' .-."' '-•"*" " *" - " ' . " ' ' . ' 1: •
: :-... - - :
' ~ Группа . .
Первый тип :
mMTl/hGRF,,
п=3
• • " - . ' • ;'
Второй тип..-.
WAP/hGH ••
п=3
':.'•<:•
Третий тип.
WAP/hGH+ ;,
mMTl/hGRF'
n=2'""-'•-- —
• " - — : : ?
'.-
'•-"- -
»
:
= ' -
• ."Гормоны -•-'• ;-:' ''' ОПЫТ '•':' *'« •у Контроль •-".
;>. ; : , М + т . .Лч. ':-- . М + т , •'...•• ;::;.„%% к, ; ; '.
~- контролю
••**•'•'•'IF*'-''
' Тироксин '••"•
48,93±4,20 ••• ' 45,63±3,58 •••.-. < >.- +7,23 - - • .
Инсулин ^
- -1,97
463,77±125,49 - 473Д±38,54
Кортизол
-58,06 • 81,07±9,90
193,28±23,9
Соматотропин •- -+146,00 л 7,38±2,67 '— ' 3,0±0,50 ;
Тироксина - >--. - 54,0±2,97 - ^45,63+3,58
+18,34
Инсулин
-15,89
473,1±38,54
397,93±148,19
Кортизол
-43,52
193Д8±23,9
109,17±28,69
Соматотропин
+208,33
9,25+2,72
3,0±0,50 •-Тироксин, -г. -. . 51,10±5ДЗ .
+11,99 v
45,63±3,58
Инсулин - - ' •--,- 333,45±393,36
-29,52
473,Ш8,54
. ^ -44,74 =-г i
Кортизол - '•-••
106,8±15,56
193,28+23,9
Соматотропин •'- - П,88±12Д7- ••- 3,0±0,50- +296,00 . -
,.v4-.v2. В среднем уровень соматотропина в крови всех трех типов' трансгенных \
.'..' свиней -равен 9,2 нг/мл,''; т.е. : средний уровень* соматоропного • гормона у •
.- трансгенов в 3,1 раза выше контроля''Ч : - -Л~-'"-Л~*- ~-У* ''£.•'- -7 i": : i i 1 - I t ; • ~"-Г• •;"«*' Jv'.r У. трансгенных животных "снизился уровень кортизола в крови, до 99,01
нг/мл, что меньше контроля на 48,77 % или в 1,95 раза!~ ."--.'Л>',•<:>•V\"л,;',\:'Г?';/:«'
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
14
У трансгенов всех трех типов было превышение содержания в крови
тироксина на 12,53 % в сравнении с нетрансгенными животными. Однако у ,
свиней первого типа превышение тироксина было всего лишь на 7ДЗ % а у _
двух других типов на 15,17%. :
'..'\.'..\.^. •'./': ..[1
• V ^:
У трансгенных животных произошло снижение содержания инсулина в '_
крови на 15,79_% в сравнении с аналогами. Причем у трансгенных свиней
первого типа всего лишь на 1,97 %, у свиней трансгенных по генной
конструкции WAP/hGH на 15,89 %, а у дитрансгенов на 29,52 % в сравнении с
КОНТРОЛЬНЫМИ СВИНЬЯМИ,
г'..
„.
•/.-..
,
•-,''...':.•'''
, .,
. . . . . .
Иммунологический статус трансгенных животных.
Были проведены исследования по изучению ряда показателей клеточного
(Т и В лимфоциты, фагоцитарная активность нейтрофилов), гуморального
(уровень иммуноглобулинов G и М) иммунитета,
определению динамики
образовании специфических антител к Протею, Клебсиеле, Сальмонелле,
Эшерхии при вакцинации животных вакциной ОКЗ.
Из проведенных исследований следует, что практически все показатели
количественного содержания как Т-, так и В- лимфоцитов, представленные в
таблице 6, у свиней опытных групп достоверно выше соответствующих
показателей контрольных животных. Что свидетельствует о стимуляции'
клеточных иммунных реакций гормонами соматотропинового ряда.
Таблица 6
• Содержание Т- и В- лимфоцитов у подопытных поросят
Опыт •• 1 Контроль
М+m, п=3 | КИ т , п=4
Т-лимфоциты
Первый тип абсолют, число 10у/л
9,33±0,36
6,95+1,27
mMTl/hGRF относит, ко-во в 1 мкл
37,3±1,09
44,3+0,44
Второй тип абсолют, число Ю'/л
б,95±1Д7
8,53±0,40
относит, ко-во в 1 мкл
WAP/hGH
44,8*2,95
37,3±1,09
В-лимфоциты
Первый тип абсолют, число Ю"/л •
4,56±0,18
2,72±0,15
mMTl/hGRF относит, ко-во в 1 мкл
14,6±0,44
21,6±0,37 <
Второй тип абсолют, число 10"/л
3,9б±0,17
2,72±0,15
относит, ко-во в 1 мкл
WAP/hGH
20,0±0,7б
14,6±0,44
Группа -
*Р<0,05
Показатели
Разность с
контролем
2,38±0,50*
7,0±1,17*
1,58±0,52*
7,5±3,12*
1,84±0,23*
7,0±0,57*
1,24±0,23*
5,4±0,87»
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
15
Результаты определения специфических антител к таким антигенам как
Протей, Клебсиелла, Сальмонелла, Эшерихия представлены в таблице 7.
Та&чица 7
Усредненные значения титров антител к протею, клебсиелле, сальмонелле,
эшерхни в различные сроки вакцинации опытных поросят
Группа
Сроки взятия
Опыт• •
Контроль
М+т
М + т , п=^4
крови*
2
1
4 •
3
Титры антител х Протею
•
Первый тип
1
133,3±32,7
120,0+26,7
mMTl/hGRF,
•• 2 853,3±261,3
200,0±46,2
п=3
746,6±345,6
300,0±143
.... з Второй тип
1
133,3+32,7
120,0+26,7
WAP/hGH,
•:-'•':•533,3±130,7
200,0±46,2
п=3
" ' - < -•-.
1066,6±261,3 • 300,0±143
Третий т и п - . .
.. .-.1
120,0±56,6
120,0+26,7
WAP/hGH +
2
1280,0±0
200,0±46,2
mMTl/hGUF, n=2
3:
1280,0+0
300,0±143
•-'•.•-- ;---• - • и Титры антител к Клебсиелле >
Первый тип :
1
40.0±0
66,6±16,3
mMTl/hGRF,
2
320,0±196
140,0+69,3
п = 3
•'•••-•'•
- ; J 3
533,3±457,2
140,0±23,1
- -~ 1 -'—-:•
Второй тип
66,6±16,3
- 40.0±0
WAP/hGH, ' .
320,0±0
140,0±69,3
« = 3
•••-..
-• - '
: • •
... .-3:-' .
586,б±429,3
140,0+23,1
Третий тип
1
60,0±28,3
40,0±0
WAP/hGH +
2
320,0±0
140.0±69.3
mMTl/hGRF, n=2
3
480,О±226,3
140,0±23,1
Титры антител к Сальмонелле
Первый тип
1
80,0±0
40,0±0
mMTl/hGRF,
2
586,6+428,3
340,0±132,7
п=3
3
480,0*196,0
300,0±143.0
Второй тип
1
106,0±32,7
40,0±0
WAP/hGH, .
2 .
320,0±0
340,0±132,7
п=3
3
640,0±392,0
300,0±143,0
Третий тип
1
120,0±56,6
40,0±0
WAP/hGH +
2
320,0+0
340,0±132,7
mMTl/hGRF, n=2
. .3
. 320,0±0
300,0± 143,0
••'•-••>•
•
•
:-:•
•
:
,
.
г
'
*
•
•
-
- . • • • . , 2 . - ; - '
.
•
" .
Отношение
опыт / контроль
5
••
•"•'
" М -
4,3
2,5
1,1
;
2,7
3,6
1,0
6,4
v;- . . 4,3 v..- ..--•
1,8
23
3,8
.-.••-.•
•••'--.
1,8.- .
23
4,2
1,5
2,3
3,4
2,0
1,7
1,6
2,7
0,9
2,1
3,0
0,9
1,1
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
*
•J
16
3
I
4
I
2
1
Титры антител к Етерихии
1
106,6±32,7
70,0±11,6
2
160,0±0
266,6±65,3
3
213,3±65,3 180,О±58,2
1
133,0±32,7
70,0+Л1,6
- 2
426,61130,6 ' 160,0±0
3
693,3±397,3 180,0+58,2
1
80,0±0 •* 70,0±П,6
2 '
240,0±ПЗ,1
160,010
,.. 3
480,0*226,3 • 180,0±58,2
•
.
1
Первый тип
mMTl/hGRF,
n=3
Второй тип
WAP/hGH,.
п=3
Третий тип " _
WAP/hGH + ' ,„
mMTl/hGRF, n=2
* 1 - до вакцинации i .._.1-„. •.'.'. -J_'- >Д'и ;. *"i::*v
•2-черсздвенедсли,после I вакцинацииN.i
3 - через две недели, после 2 вакцинации • s-V.
5
1,5
1,7
1,2
1,9
2,7
. 3,9
1,1
1,5
• 2,7
'
" -«
-
-
•
.
-
.
.••ОяТ;Н;
f ^Из таблицы 7 следует, что у всех животных до вакцинации отмечали^'
-наличие, антител ко "'всем г антигенам, ^входящим- в; вакцину ОКЗ, ' что-fj'
• свидетельствует о соответствующем • антигенном раздражении исследуемых' '• "•
.. животных на протяжении жизни, предшествующем вакцинации, естественным" л!
• путем: от матери, алиментарным и другими. Во вес периодынзучения уровни "р;" антител против каждого'антигена у трансгенных животных были выше, чему*:
контрольных," причем титр антител к.каждое антигену-возрастал во время: 1 !'
, вакцинации; но динамика изменения уровней в каждой группе была различна, л,-;
. j ;-;..'. Наиболеединамические изменения уровней значений антител наблюдали:» У'
>• в группе поросят, трансгенных по гормону роста c.WAP промотором: резкое,"' ;.
почти в' 3-4 раза" повышение уровней антител после 1-ой вакцинации, з а т е м , ' '
после 2-ой вакцинации его повышениебыло почти в 2 раза." Г" '; - ^ ; , ; . ; , ,\;V - : >.)
, "'. ~В группе.животных, трансгенных порилизинг-фактору гормона роста j
: первоначальный - уровень. • также резко - возрастал, - однако - после- второй:, |* вакцинацииизменялся незначительно. При этом абсолютные значения титров ; | '
антител к каждому антигену в группе ЛУАР/ЮН бьш'вьше, чЪм'в группахТ-.
"mMTl/hGRF 4~ и ~ rnMTl/hGRF+WAP/hGH..-. У.1. поросят;:; трансгенных ;: по ; 1
\ mMTl/hGRF+WAP/hGH,;^ резкие; изменения уровня: антител после - первой :-у „
вакцинации отмеченьТ прежде всего к протею (в 10 раз) и клёбсиелле (в 5 раз),, f.
" к другим антигенам изменение уровня было менее значительным. В результате
второй вакцинации значения титра антител менялись незначительно. Что
касается контрольных животных, то у них уровень антител после первого ;
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
17".
введения вакцины животным возрастал гораздо в меньшей степени, чем в
опыте; исключение составляет возрастание титра антител в 8,5 раз к
сальмонеллам. После второй вакцинации значения уровней антител изменялись
незначительно, к тому же сами абсолютные значения титров у контрольных
поросят были заметно ниже, чем у опытных групп животных.
. •• Мясная продуктивность и качество туш трансгенных и
контрольных .свиней.
В ^ таблице 8 приведены данные, характеризующие качество туш
различных групп животных по предубойной живой массе и убойному выходу.
Как видно из таблицы 8 предубойная масса всех экспериментальных групп
животных довольно высокая и составляет в среднем в контрольной группе
165,25 кг, в опытных mMTl/hGRF,' WAP/hGH, mMTl/hGRF + WAP/hGH
соответственно 166,0; 174,0 и 172,0 кг, при этом пред убойная масса отдельных
животных в каждой группе существенно не различается. Следует отметить, что
выход туш в опытных группах свиней значительно выше (на 0,55 - 2,68 %) по
сравнению с контрольной группой. Наибольший выход туши имели свиньи ,
второй опытной группы 70,5%."
,.
'
.
Таблица 8
Характеристика туш свиней по убойному выходу
Показатели
Группа
Пред убойная
живая масса, кг
Убойный выход
166,0±13,64
. Контроль
М+т,
п=4165,25+3,38
69,04±0,34
68,66±1,06
+0,55 ,
Пред убойная
живая масса, кг
Убойный выход
174,0±12,06
165,25+3,38
+5,30
70,5±1,38 .
68,66±1,06
+2,68
Предубойная
живая масса, кг
Убойный выход
172,0±9,90
165,25±3,38
- +4,09
69,57±1,96
68,б6±1,06
+1,33
'Первый тип
mMTl/hGRF, n=3
Второй тип
WAP/hGH, п=3 '
Третий тип
WAP/hGH +
mMTl/hGRF, n=2
-
Опыт
М+т
Опыт в
%% к
контролю
- +0,45
Сравнение параметров мясности животных первой группы с контролем
( Таблица 9 )
показывает, что при практически равном весе полутуш у
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
18
трансгенных животных отмечается. существенная тенденция; к увеличению ?*••* •'
мяса в тушеуна"6,4 % и снижений'веса сала -'на"5,9 %,'по весу;костяка1'"':
практически '.различий ~не отмечено. * Следует',отметить",„что' аналогичная-«ч->/
тенденция '*." отмечена и при t изучении у этих* трансгенных "животных *;в -{
• предшествующих поколениях:- у',* '•' •• '•/.*•' у >'•?';-"" Л;Г"* **w/f?:'\V'''.''\*-'r -!*':-:>1 *'•'-•;"">'• '•'''
' ( . « . M i .
"-:•"< '_--..;-•'-• Таблица 9; .-.
Мясные качества трансгенных свиней в сравнении с контролем, (кг) ;
Группа
,
-'
;
• . ' • . '
'
Показатели
t
:
\
*
• ' . • • ' / • • • " , : . „
•:'•, ОПЫТ .
v
-
'•;>•": ^ С ' У ^ л - : •-"•М+та1^•г
• - . - ; , -
2
.-•
;•
.
".-. , •
•3-,.:....
Вес полутуши у:
57Д7±4,54
г
Первый У"- Вес мяса" "':.*? • 28,10±2,88*
,.,i..Jwn.'ifУ % мяса И'?'j//,•;*• ; 4 8 , 9 4 ± l , 4 b j
• roMTl/hGRF,. Вес сала,-' " ;
2U0±U7 .
!
• ".:' п = 3 - / : • % сала . '•/' у ' ••'' У37,10±1,32
... ;.•Л"..У/ ;*"%V• Вес костей. •»•,:,
: ,7,98±0,53 У
% костей .
13,96+Д,21- '
: : .'~ ~ - Вес полутуши •'_:' f 61,20±3,43 !
29,67±0,97
... *J **.-.* --"'о; Вес мяса :Ул--..
;* Второй .
% мяса >.''.--•.';'
48,57±1,50
• • ' : . ' - т и п >:.''У.
Вес сала." - . / ;
24,08±2,37
:
WAP/hGH,' %сала .•;,'••• • •.'-;
39,23±1,88
уу.~.п=3,,-. ; Л Вес костей У.
7,45±0,3 ':>
• ' ' '"-•''*'
: , У' •
% костей'У *у:•_;"• '12,19*0,59
••|-.j:j "ri:.Вес полутуши Т ,:59,88±5,13?
7~" Третий ~ Т Вес мяса |:';^.:v.. ; 2 U 3 ± 4 , 9 9
• ; ' - ' - . Т И П ' - - " ;' %мяса-У V : ' :
; 35^9±5Л
" WAP/hGH r Вессала г у Ч л;1 / 2 7 Д 5 ± 1 , 6 3 :
%сала -• ч''-.у •" 45,80±6,64'.!л'...'.У,'. *•'•••" |
mMfi/hGRF,* Вес костей; *;•".* ; 1 U 0 ± 1 , 9 7 h — • n = 2 - . - ! - % костей-2- --'
18,82±1,34
•"
• . . - ' / .
'
•.",.'..
. . . "
• ; " • : " . " ' . . ' "
+
Контроль
£-М-Нп,1и=4""
- • , . . - . .
4
• > • • • -
Опытв%% к.,
'-"-'. ' КОНТРОЛЮ .-•'•*.
. - . . ,
•••:.•
5
; 56,64±1,36
•У . - • > + М : :.-.•"...•
-2б,40±2,02" •: •'.•<•'•;+6,4 ь--.-••••
у 46,68±3,74
. .;У^,8;:;УУ
22,38±1,59
•::;.:г-..4Х-\ •.:.••!
-•J:y;--5,9yy„4
-39,44*2,10
:.'„. 7,8б±1,09:. -:•:•',• -; +1 «5 -У . £ •
*13,87±1,84' --".".У. + 0 , 6 " •'•••"..'
"56,64±1,36у • ^ 1 > - . : - т + 8 , 1 у ' ' . •:.••;"?;•
; , . +12,4 . '-:•.
26,40±2,02.
46,68±3,74
'"' •'"+4,0'Г-'-'."'-г
22,38±1,59- •ъ,•••:<•?**
<•&;.-:,
У39,44±2,10.
•'•;>у-од-.у:-7,86±1,09 * :у^.-:--5Д:'у-;:.'.
- 13,87±1,84? .'•••-" ".-12,1 :.:••••:
; 56,04±1,36
••••;^Л +5,7 , - - - , ,
-19Д ;
26,40±2,02 .}
"':-"-.--7-24Д..'>' --•'
Ч6,68±5,74
У22^8±1,59" "г-^^+ги"--:'.
:
; 39,44*2,10 :•: . .у;.+16,1:::'у:':.
.'ЬУ:+43,8;.^У,*?,86±0,9г
.-"*" -'+35,7'"* ; "''
Л3,87±1,84
;:. ' i': Весьма •важным!- показателем у мясных ",~качеств •; животных. * является";
содержание "жира г В;,*;фарше".' после | обвалки у тушил; Этот показатель;- в •
значительной степени определяет содержание жира в составе мышечной ткани
• (Табл. 10).'- p - V f V ' ^ - ' l :"°: ? : : ^ ? v уу ; Т : :^';''ly^&ijy'y v л.-'"'.^-':t'b'^Y-- л
У. '••" . Из таблицы ^10 видное что трансгены первого Типа: характеризуются
. существенно у более ^низким, содержанием^ жира,^ в^ туше; повышенным
содержанием с у^ белка.', У :.Трансгены - -.: второго у. s типа _; - характеризуются
:
незначительными различиями по этим параметрам между опытом й контролем;
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
19
Дитрасгены характеризуются значительным увеличением содержания жира в
фарше на 24,59 % и резким снижением белка в фарше на 29,38 %. Это еще раз
подтверждает, что интегрированное действие двух генов вызывает усиление
липогенсза и снижение синтеза протеина.
Таблица 10
Содержание жира и белка в фарше трансгепиыхживотиых и их аналогов
Группа
Показатели
• Контроль
M-tm, п=4
s 23,02±3,35
Опытв%% к
контролю
-13,55
Первый тип
% жира фарша
Опыт
M+m
19,90±0,01
mMTl/hGRF, п=3
% белка фарша
20,19±1,14
18,99±1,40
+6,32
, % жира фарша
23,52+3,23
23,12±2,4
+1,73
Второй тип
-1,44
WAP/hGH,n=3
% белка фарша
Третий тип
% жира фарша
23,66±18,34
18,99+.1,40
+24,59 ,
WAP/hGH +
mMTl/hGRF, n=2
% белка фарша
13,5110,82
18,99±1,40
-29,38
18,72±0,58 . 18,99±1,40
; Другим существенным показателем мясных качеств ' является вес
внутреннего жира (Табл. 11).
Таблица 11
Вес внутреннего жира у трансгенкых свиней в сравнении с контролем, (кг)
•. •' • Группа'.-.-.:'•-:.';:•. .'.'"> ..'••• Опыт '• ', Контроль
M+m
M+m, n=4
Первый тип (mMTl/hGRF), п=3 .•
3,73±1,03
5,15±0,99
Второй тип (WAP/hGH), n=3
5.47+Д29
5,15±0,99'
Третийтип "-'•' !;•:• .•.•..-.-:.••'-.•
(WAP/hGH + mMTl/hGRF), п=2-ч
6,65±1,91
5,15±0,99
Опыт в %%
к контролю
-27,56
+6,21
;;
+29,13
' С.
:
Анализ данной таблицы показывает, что трапегены первого типа
характеризуются значительным ; уменьшением веса внутреннего жира, у
трансгенов второго типа эта разница не существенна, но в виде тенденции
отмечается увеличение содержания - жира, ? в сравнении с контролем. И,
наконец, у дитрансгенов • отмечено заметное • увеличение :; количества
внутреннего жира в сравнении с контролем на 29,13%.
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
^s**"
V "
;
\ . . / / . ' ' \ } '
'•'"•'',. V : ; ; v ^ - V ; / . : • [ ' . ' ; . 2 0 0 ; ' : / ; r ;
'•'.•••/..'•
• •-•"
;:••
"•;-/-:••.''•
_' "-Из приведенной ниже таблицы 12 видно увеличение массы основных
- внутренних органов сердца, легких, селезенки у.трансгенных животных, где*;
присутствует генная конструкция tnMTl/hGRF. Так увеличение массы сердца у^ ,
трансгенных свиней первого и третьего типов произошло на 29,17 %, легких на,
34,48 % и селезенки на 22,61 % в сравнении с контрольными животными. У
трансгенных животных по генной конструкции WAP/hGH было уменьшение
данных показателей в сравнении с контролем. Масса печени, была больше ;
контроля только у трансгенных свиней третьего типа (дитрансгены) на 10,12%.
Табтща 12 \
Масса внутренних органов трансгенных свиней в сравнении с контролем, (г) ; .
Масса органов v
•;•- Г р у п п а
"
' -
'
;
:
"
•
:
-
'
'
' '
Опыт j
М + т ••••- -
563,33±20,41
Сердце -;-.'..
Легкие '-'-'-* • "_ \ 830,0±163,10
Печень .
2223,33*89,5
Почки
513,33±4,08
Селезенка
n =
300,00±18,71
'•••-•
-W<::..'.
Матка .
1186,67*89,5
Сердце
413,33±67,21
Легкие
623,33±88,41
Второй ,,_. Печень, v.;.
2240,0+212,9
ТИП
'..:_. Почки.
500,00*44,16
;
WAP/hGH,
Селезенка
; 236,67±35,59
• :; "О., 1000,0*181,8
-• 'п=3 V у \ Матка ••
Третий
Сердце ' '•'"'. 625,00±35,36
тип
Легкие '^ ;.:• 925,0±176,78
WAP/hGH
Печень",
, 2475,0*176,8
:.
" + - " ' • •" . Почки '
495,00±63,64
mMTl/hGRF, Селезенка .„;. /_ 320,00*70,71
Матка
1 1205,0*49,50
1 к=1
-.'
- . „
Первый'
тип '.'.
mMTl/hGRF,
•
-•'
,
• ' " ' " ' ; - • " •
' . " . ' .
Контроль
Опытв%% г.,-.
- М + т , п=4
- контролю +22,46 "
460,00+30,91
- +27,2 :, .•: - .
652,50*44,06
-1,08
..;>••.:•
2247,5*160,9
532,50*32,10
-з,б"'
;••:-•
+18,69
252,75±38Д8
+38,79
855,00+124,4
-10,15
460,00±30,91 , :
-4,47
652^0*44,06
-0,33 ;
2247,5±160,9
532,50*32,10 " • - " - 6 , 1 ; " •
-6V36; ' V
252,75*38,28 ,.'. •
+16,96
855,00±124,4
•+35,87.•:"'...".'
460,00±30,91
,-+41,76
652,50*44,06
2247,5±160,9 "• "' +10,12
532,50±32,10 :'"':, г-7,о4 7 о ; :
+26,61 ч
252,75±38,28
+40,94"
855,00±124,4
i •:•- Нельзя не заметить существенные, различия между трансгенными. и
контрольными животными по воспроизводительным органам самок, а именно
массе матки с яичниками. У трансгенных свинок в сравнении с контрольными,
произошло увеличение этого показателя на 32,23 %...
,;;.,' -.; •.
. ,;
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
21 .
Результаты гистологических исследований.
• Данные, полученные при морфометрии фолликулов щитовидной железы
приведены в таблице 13.
•'
Таблица 13
Морфометрия фолликулов щитовидки трансгенных •
свиней ( мм на экране ).
Опытв%% к
Показатели
Контроль
Группа
Опыт
М+т>М+го, и=4
контролю
>2
Первый тип
38,5*5,4
9,1
Площадь, (тыс. р. )
42,0±6,7
mMTl/hGRF,
Периметр, ( ц )
765,7±57,2
721,3±58,2
6,2
п=3
Диаметр, ( ц )
251,3±22,7 231,3±19,6
8,7
Второй тип
Площадь, (тыс. р.2)
3U±11,5 38,5+5,4
-18,7
WAP/hGH,
Периметр, ( ц.)
644,7±113,7 721,3 ±58,2
-10,6
п=3
Диаметр, ( р.)
204,0±35,2 231,3±19,6
-11,8
Третий тип
Площадь, (тыс. ц г ) 29,8±13,01
38,5±5,4
-22,6
WAP/hGH +
Периметр, ( р )
607±165,5
721,3±58,2
-15,9
mMTl/bGRF, n=2 Диаметр, ( ц )
199,5±47,4 231,3±19,6
-13,8
У свиней трансгенов первого типа (mMTl/hGRF) площадь, периметр и
диаметр фолликулов выше контроля на 9,1; 6,2 и 8,7 % соответственно, а у
трансгенов второго и третьего типов отмечено обратное соотношение, что
соответствует установленным ранее особенностям обмена веществ.
Таблица 14
- Морфометрия мышечных волокон трансгеншлх свиней
в сравнении с контрольными (мкм).
Группа
Первый тип
mMTl/hGRF, .
п=3
„
Второй тип
WAP/hGH,
п=3
Третий тип
WAP/hGH +
mMTl/hGRF,
n=2
Показатели
Длиннейшая
мышца спины
Четырехглавая
мышца бедра
Длиннейшая
мышца спины
Четырехглавая
мышца бедра
Длиннейшая
мышца спины
Четырехглавая
мышца бедра
, Опыт
М+т
75,8±2,8
Контроль
М+m, п=4
77,8±2,1
Опытв%% к
контролю
-2,6
77,1±5,2
57,6±7,5
33,9
74,5±8,9
77,8±2,1
-4,2
62,1±7Д
57,6±7,5
7,8
76,0±17,1
77,8±2,1 -
-2,3
61,7+10,3
57,6±7,5
7,1
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
22
В результате полученных данных, приведенных в таблице 14,
морфометрического анализа мышечной ткани было установлено, что диаметр
, волокон четырехглавой мышцы бедра у трансгенных свиней первого типа
(mMTl/hGRF) превышает таковой, контрольных животных на 33,9 %.
У животных второго и третьего типов превышение диаметра было
незначительным. По диаметру мышечных волокон длиннейшей мышцы спины
среди опытных и контрольной групп различия были также небольшими. ,
. "
Корреляционный анализ.
^
"
Для оценки ^ характера , влияния соматотропина на биологические и
хозяйственно-ценные ~ признаки животных было • целесообразно изучить'
достоверные корреляционные связи уровня соматотропина с другими
количественными признаками животных (Таблица 15). При этом в расчет была
взята вся популяция трансгенных и контрольных животных.
<
, w ^
.
* - _ ''
'
- Таблица IS
Корреляция между уровнем соматотропина
и рчдом физиологических показателей траисгсиных свиней.
№п\п
1.
2.
3.
4.
5.
6
7.
8.
9.
10.
11.
12.
Показатели
альбумины
Y-побулины
тироксин
антитела к тютею
антитела к клебсиетле
антитела к сальмонелле
антитела к эшерихии
трииодтиронин
триппщериды
АЛТ
•
вес почек
вес селезенки
* -
г
0,67
0,92
0,63
0,65
0,93
0.78
0,44
0,82
0.83
0,74
0,92
* 0,94
td
0,95
0,999
0,95
0,95
0,999
0,99
н/д
0,95
0,95
0.95
0,999 - '
0,95
-
, 5
Таким образом установлена четкая положительная статистически
достоверная корреляционная связь между уровнем-, соматотропина и
важнейшими показателями обмена' веществ - альбуминами, у-глобулннами,'
тироксином, трийодтиронином, „триглицеридами, АЛТ, уровнем антител к
таким возбудителям болезней как протей, клебсиелла, сальмонелла, эшерихия,
весом почек и селезенки.
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
••'" Установлено," что в результате трансгенеза существенно изменился не.;
только уровень соматотропина, в результате экспрессии введенных в геном-.
генных конструкций, изменяются и сложившиеся корреляционные связи в
• ' организме.
.,
'•' ' : ' - v '
-..'•-" >; .--..•'.-. '.-.--у -;•':.• ;.•.;•] _•;.•.' ; . ; • . ; . : - ; • ; • ;
•.;.- •
Таблица 16 ,
Сравнительные характеристики корреляций между биохимическими
показателями трансгенных и контрольных животных ...
Показатели
Креатинин - креатинкиназа
Общий белок - мочевина
Глюкоза - инсулин
Глюкоза - триглицериды
ACT - общий белок
АЛТ - общий белок
Тироксин - мочевина
,
Тироксин - инсулин . . . . • . . ' Амилаза - глюкоза
Трийодтиронкн - тироксин
Лактатдегидрокиназа - холестерин *
-Кортизол - мочевина
Лактатдегидрокиназа . молочная кислота
Трансгены
-0,64
-0,46
•••'.
+0,43
-0,66
+0,50
+0,51
-0,66
-0,39
+0,03
+0,10
-0,87
+0,01
+0.39
"г
Контроль "
+0,58
-0,83
-0,13
-0,99
+0,50
+0,21
: -0,78
+0,02
+0,52
-0,76
. +0,33
+0,88
-0,07
-
Из тринадцати пар признаков, представленных в таблице 16, в шести
парах разница в корреляции характеризовалась обратным'знаком. Так если
корреляция между креатинином и креатинкиназой у трансгенов была равна 0,64, то в контроле +0,58; между глюкозой и инсулином соответственно +0,49 и
. -0,13. Там где знак коэфициента корреляции был одинаковым в большинстве
случаев величина корреляции была существенно меньшей у трансгенных
; животных в сравнении с контролем. Так, например, корреляция между общим
белком и мочевиной у трансгенов была равна -0,46, а у контроля -0,83; между
глюкозой и триглицеридами соответственно -0,66 и -0,99; между амилазой и
глюкозой +0,03 и +0,52 и т.д.
Были изучены коррелятивные связи и некоторых других признаков
тренсгенных животных и их аналогов.
Таким образом, становится очевидным, что интеграция в геном
конструкций соматотропинового цикла приводит не только к изменению ряда
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
фенотипических • признаков, но одновременно . .. - существенно изменяет •
направление и величину многих корреляций в организме животных. • < ,,
- ]-•••''.' Трансгенные животные характеризуются: перестройкой сложившихся V .
коррелятивных связей, которые несомненно оказывают влияние на прцессы ._,
развития животных.
Все это свидетельствует о том что интеграция и последующая экспрессия ;
генов соматотропинового цикла существенным.. образом меняет, характер
обмена веществ животных, затрагивает величину важнейших биохимических ••,
факторов. Разумеется сейчас еще трудно определить значение каждого из этих
факторов для развития хозяйственно-ценных признаков, это будет предметом •
дальнейших исследований в этом направлении.
4. ВЫВОДЫ
КЖивотные-траксгены изучаемых трех типоз характеризуются
несколько более высокими темпами роста, особенно в более поздние стадии
развития.
2. Отмечено отрицательное влияние вакцинации на темпы роста
животных, при этом реакция трансгенных особей была существенно слабее.
3. Отмечена тенденция к повышенной переваримости протеина и жира у
трансгенных животных.
4. У трансгенных животных первого типа отмечен более высокий
уровень отложения белка и пониженный уровень отложения жира в сравнении
с контролем и другими типами трансгенов.
5. В сыворотке крови трансгенов отмечен более высокий уровень общего
белка, альбуминов, фосфора и амилазы и повышенная активность ACT.
.'_.,,, 6.Трансгенез повлек за собой существенные изменения гормонального
статуса организма, в среднем содержание соматотропина у трансгенов в 3,1
раза выше контроля, уровень кортизола ниже в 1,95 раза," несколько повышен
уровень тироксина и снижен уровень инсулина.
,,
. : .-.:"•:-'•.
7. У трансгенных животных повышено содержание Т и В лимфоцитов.'--_.
; Вакцинация свиней к Протею, Клебсиелле, Сальмонелле и Эшерихии показали,
что уровень соответствующих антител превосходит контроль в несколько раз.
Все это свидетельствует о более эффективных механизмах защиты от болезней
у трансгенных животных.
• -
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
25
8. Трансгенные животные отличаются от контрольных по ряду признаков
мясной продуктивности. Они характеризуются большим убойным выходом.
Трансгены с геном рилизинг-фактора. гормона роста (первый тип)
характеризуются большим удельным. весом мяса и меньшим-жира в туше, .
меньшим содержанием внутреннего жира. Животные второго и третьего типов
характеризуются большим содержанием жира в организме.
, .,
: •"
.9. В результате изучения гистологии мышечной ткани было установлено,
."; что диаметр мышечного волокна в длиннейшей мыище спины не имеет
различий у трансгенных и контрольных животных. В четырехглавой мышце
бедра был отмечен больший средний диаметр волокон (на 33,9 %) у трансгенов
первого типа..
:
Г
,
. :
10. Отмечены определенные различия в массе внутренних органов.,
Характерным для всех типов трансгеноа является значительно большая масса
матки с яичниками свинок.
.
11. Установлены определенные различия в гистоструктуре щитовидной
железы. У трансгенов первого типа площадь, периметр и диаметр фолликулов
выше контроля, а у трансгенов второго и третьего типов отмечено обратное
соотношение, что соответствует установленным ранее особенностям обмена
веществ.
.';
.'- . • - . , , • - '
12. Корреляционный анализ рада морфологических и физиологических
параметров показал, что трансгенез вызвал существенные изменения
сложившихся в организме корреляций, что расширяет сферу воздействия
интегрированной генной конструкции на многие фенотипические признаки.
ПРЕДЛОЖЕНИЕ
Установленное влияние интегрированных чужеродных генов на
динамику роста, отложение в теле белка, на вес сала, мяса, костей и
внутреннего жира и устойчивость. к острым кишечным заболеваниям
рекомендуем изучить на большем поголовье животных и при получении
подтверждающих результатов предлагается использование трансгенных свиней
по генным конструкциям mMTl/hGRF и WAP/hGH в селекционных
программах свиноводческих хозяйств в качестве исходных животных для
создания синтетических линий свиней.
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
26 '
Список работ, опубликованных по теме диссертации: '
• 1. Шатайло В.Н. Мясная продуктивность и качество туш свиней,
трансгенных- по MTl-hGRF - reiry, WAPhGH - гену и но обоим генам //
Вопросы интенсификации животноводства. Материалы 48 - научной
конференции, п. Дубровицы, Московская область." 1999. С. 167-173.
- 2. Эрнст Л.К., Лисицын А.Б., Татулов Ю.В., Шатайло В.Н., Чабан И.М.
Генно-инженерная селекция свиней // Мясная индустрия - 1999. — № 3.- С. 11-
*0"
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
Издательство РУЦ ЭБТЖ
142132, Московская обл.. Подольский р-н, п. Дубровицы
Тел. (8 - 27) 65-14-24, (8 - 27) 65-14-07
Лицензия ЛРХ» 021248 от 21.12.97
Сдано в набор
24.0S.2001. Подписано в печать 24.0S.2001
Заказ № 19. Тираж 80 экз.
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
2
Размер файла
933 Кб
Теги
857
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа