close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

29

код для вставкиСкачать
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
АКАДЕМИЯ НАУК СССР
ИНСТИТУТ МИКРОБИОЛОГИИ
На правах рукописи
КРУГЛОВ
Юрий Владимирович
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ПРИМЕНЕНИЯ
ГЕРБИЦИДОВ В СЕЛЬСКОМ ХОЗЯЙСТВЕ
(03.00.07 — микробиология)
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени
доктора биологических наук
Москва
1984
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
л
Работа выполнена во Всесоюзном научно-исследовательском институте
сельскохозяйственной микробиологии.
Официальные оппоненты — академик Е. Н. Мишустин; доктор биоло­
гических каук, профессор Д. Г. Звягинцев; доктор биологических наук,
профессор Э. А. Штина.
Ведущее учреждение — Центральный музей почвоведения им. В. В.До­
кучаева.
Защита состоится
^ОЛ^П-?^/)^
1Q84 г. в / ^ У ч ^?& мин на за­
седании специализированного совета Д.002.64.01 при Институте микро­
биологии АН СССР.
Автореферат разослан «Ж^<5^<£>/984 г.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института микро­
биологии АН СССР (Москва, ул. 60-летия Октябрьской революции, д. 7).
Ученый секретарь
специализированного совета,
кандидат биологических наук
Л. Н. Москаленко.
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
ВВВДЕНИЕ
Актуальность. Успехи современного сельского хозяйства за по,оледние 50-40 лет в значительной степени обусловлены химизацией
земледелия. В настоящее время наряду с минеральными удобрениями •
широко используются химические оредства защиты растений - пес­
тициды. Применение последних имело революционизирующее значение
в борьбе о вредителями, болезнями и сорной растительностью! что
объясняется их высокой агрономической и экономической эффектив­
ностью. Суммарный объем производства я применения пестицидов в
настоящее время достигает 2 млн.т. Ежегодный прирост применения его в различных странах мира составляет от 6 до 165». По состоя­
нию на 1980 год ореди химкчеокях средств защиты растений 47,4?
составляют гербициды, а к 1990 году доля их возрастет до 56%
(Грин и др., 1979; Мельников, 1981} Унанянц, 1981).
Гербициды, являяоь физиологически активными вещеотвами, ис­
пользуются в дозах 1-Ю кг/га и, обладая достаточно высокой
стабильностью, циркулируют в окружающей среде от нескольких
недель до нескольких лет.
Высокая физиологическая активность и относительная стабиль­
ность етих веществ в уоловиях систематического, применения соз­
дают исключительно сильный прецедент воздействия человека на
природу.
Большая часть гербицидов, используемая для борьбы о сорня­
ками, попадает в почву. Поэтому почва является основным при­
родным депо для гербицидов, местом их взаимодействия о микро­
организмами и основным источником загрязнения других природы!»
сред, кормов и продуктов питания. Вместе о тем почва являетоя
единственной средой, для которой содержание гербицидов так же,
как и других пестицидов, в большинстве стран не нормировано.
Микрофлора почвы являетоя неотъемлемой частью почвы. Значе­
ние ев обусловлено той ролью, которую играет она в процессах
почвообразования, круговорота веществ и самоочищения биосферы.
Поэтому изучение вопросов взаимодействия гербицидов и микроор­
ганизмов вытекает из насущных потребностей сельскохозяйствен­
ного производства я задач по охране природы.
Цель настоящей работы - разработать научные основы почвенно-микробиологической оценки токсичности гербицидов и вырабо­
тать методические подходы для микробиологического мониторинга '
! !•'•,-. . .-.-..с с ;.ээ
'
-..(. \{. А./Ги:.!
1 r'lHli. К З
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
и прогнозирования последствий применения гербицидов в земледе­
лии. Для достижения поставленной нели предполагалось решить
следующие задачи: а) изучить основные закономерности поведения
почвенной микрофлоры в ответ на обработку гербицидами;'б) р а з .работать микробиологические методы тестирования остатков гер­
бицидов и их фитотоксичных продуктов трансформации; в) выяснить
микробиологические факторы деградации наиболее. стабильных гер­
бицидов в почве; г) установить основные пути, обусловливающие
отрицательное действие гербицидов на эффективность бобово-ризобиального симбиоза.
Экспериментальная работа выполнялась в 1965-1980 г г . во
Всесовзном научно-исследовательском институте сельскохозяйст­
венной микробиологии ВАСЗОШ лично автором.
В выполнении отдельных разделов исследований принимали уча­
стие аспиранты и сотрудники лаборатории микробиологии пестици­
дов, работавшие под руководством диссертанта. Всем им автор
выражает глубокую признательность за оказанную помощь.
Полевые почвенно-микробиологические и фитопатологические
исследования проводились в различных районах СССР в опытах
ВНИИ лекарственных растений. Агрофизического института, ВНИИ
защиты растений, Всесоюзного института растениеводства. Анди­
жанского филиала СоюзНИХИ, Ленинградского института лесного
хозяйства, Степно-Ишимской опытной станции по борьбе о эрози­
ей почвы в процессе взаимопомощи и выполнения комплексных р а ­
бот.
Научная новизна, теоретическое и практическое значение ра­
боты.
1. Дано теоретическое обоснование, отобраны показателя и
критерии, разработана и апробирсвана система почвеняо-мияробиологической оценки токсичности гербицидов.
2. Установлены основные факторы, обуоловливающиэ отрица­
тельнее последствия систематического применения гербицидов на
микрофлору и плодородна почвы.
S. Изучены наиболее общие закономерности, характеризующие
поведение ассоци-щии почвенных микроорганизмов в ответ на'об­
работку почвы гербицидами. Развиты представления об "экологи­
ческих мишенях" и теоретически обоснованы методические подходы
для микробиологического мониторинга пестицидов и прогноза возо
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
можных отрицательных последствий их применения в земледелии. •
4 . Разработаны альгологичеокие методы определения гербици­
дов - ингибиторов фотосинтеза в окружающей среде. Дано теоре­
тическое обоснование и предложено использование зеленых водо­
рослей и цианобактерий для экспреос-микроскриниинга вновь син­
тезируемых химических соединений.
5 . Изучен механизм отрицательного действия гербицидов про­
изводных тиокарбаминовой кислоты, феноксяалканов и скм-триазинов на оимбиотичеокие взаимоотношения клубеньковых бактерий и
бобовых растений. Обоснованы подходы для отбора гербицидов на
посевах бобовых культур.
6. Сформулирована новая концепция, согласно которой разло­
жение пестицидов нерастворимых или плохо растворимых в воде,
происходит по типу "микробного обрастания", ограничено поверх»
ностью твердых частиц л обусловлено- деятельностью экзоферментов, солюбилизирующих веществ и агрессивных продуктов метабо­
лизма микроорганизмов.
Выполненные автором работы вошли в "Методические рекоменда­
ции по оценке токсического действия пестицидов на микрофлору
почвы", а также в "Еекомендации по» применению торфяного нитра­
гина (ризоторфина)".
Результаты исследований были использованы для почвенно-мик»
робиологического обоснования системы противоэрозионных меро­
приятий на парующей почве зерно-парового севооборота в услови­
ях Северного Казахстана (Степно-Итимская опытная станция по
борьбе с эрозией почвы), а также при разработке мероприятий гхо
защите от сорняков овощных культур (Ленинградская обл., ВИЗ?),
многолетних плантаций цитрусовых (Сухумская опытная станция
ВИР) и лекарственных растений (Московская обл., ВИДАР).
Апробация н публикация результатов исследований. Результате
работы по теме диосертацин вошли в 2 монографии и опубликованы
в 89 научных статьях. По материалам исследований получено 4
авторских свидетельства. С 1965 по Г582 г г . по теме диссерта­
ция сделано 45 докладов на Международных, Всесоюзных ж регио­
нальных совещаниях, конференциях, съездах, симпозиумах.
Объем и структура лясоертадяи. Диссертация состоит из вве­
дения, обзора литературы, 5 глав, включающих результаты собст­
венных исследований автора, обсуждения результатов, выводов,
3
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
приложения. Общий объем работы составляет 269 стр. машинопис­
ного текста § 50 таблиц и 53 рисунка, а также 14 стр. приложе­
ния. Библиография включает 567 наименований, из которых 263
на иностранных языках.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИХЛВДОВАНШ
Диссертационная работа является многоплановой и затрагива­
ет различные аспекты взаимодействия гербицидов и почвенных
микроорганизмов, что обусловило использование разнообразных
микробиологических, агрохимических и биохимических методов
исследования. В ряде олучаев это потребовало оригинальных ме­
тодических разработок.
Полевые исследования проводили в различных почвенно-географических зонах СССР на базе полевых опытов ряда научно-иссле­
довательских учреждений страны. Методика их проведения варьи­
ровала в зависимости от культуры растений и применяемых герби­
цидов. Гербициды вносили в почву в производственных дозах в
соответствия с агротехническими правилами.
Для оценки влияния многолетней систематической обработки
почвы гербицидами на формирование микрофлоры и биохимические
процесоы в почве были поставлены микрополевые опыты в биомет­
рах по методу Рахно (1964).
Отбор проб для микробиологических, биохимических я агрохи­
мических анализов проводили в соответствии с рекомендациями
3-4 раза за вегетационный период. Микрофлору корневой системы
я ризосферы растений учитывали по Березовой (1953). Для учета
микроорганизмов использовали метод посева последовательных
разведений почвенной суспензии на соответствующие питательные
среды. Микроскопические водоросли учитывали методом прямого
счета по Путиной (I960), а также в отраженном свете люминесцен­
тного микроскопа в собственной модификации.
Анализ видовой структуры альгофлоры почвы проводили методом
стекол обрастааля. Для экологической характеристики оообщеотва
почвенных водорослей рассчитывали коэффициент разнообразия,
индекс доминирования и индекс сходства (Одум, 1975). Для оцен­
ка протекавших в почве биохимических процессов использовали'
следующие показатели: дыхание почвы, разложение целлюлозы, ни-
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
трификацяонная способность почвы, азотфиксирующая активность,
активность ферментов (каталаза, уреаза, анвертаза, прогеаза).
Агрохимические анализы проводила общепринятьаш методами. •
Определяла содержанке гу?.;уса, общего азота, аммонийного азота,
нитратов, Е205* СУКМУ поглощенных оснований, гпдролктаческув
кислотность, рН.
Лабораторные опыты с почвой ставили в сосудах емкостью
I кг. Влажность почвы в эксперименте поддерживали на уровне
&0% от полной влагоемкости. Температура инкубации составляла '
+26°С.
Распределение гербицядов в почве и формирование микрофлоры
в ней исследовали в лабораторных условиях, используя методику
стекол обрастания (Рыбалкина, Кононенко, 1953).
Выделение микроорганизмов, разлагающих -гербициды производ­
ные сим-триазянов, проводили методом накопительных культур»
для чего использовали различные питательные среды, модифицируя
источник углерода и азота. Распределение симазиаа и атразиаа
в почве, а также анализ транслокации гербицидов в клетках мик­
роорганизмов, растений и микроскопических водорослей проводи­
ли спектрофотометрическим и радиометрическим методами. Выделе­
ние и анализ продуктов метаболизма проводили методом бумажной •
и тонкоалойной хроматографии. Соответственно в работе исполь­
зовали препараты, меченные ^J в триазиновом кольце и в алкильной группе. •
Влияние гербицидов на симбиотрофные взаимоотношения клу­
беньковых бактерий и бобовых растений изучали в лабораторных.
и вегетацяояяях опытах. Токсичность гербяцадов для клубенько­
вых бактерий определяли диффузионным методом и по кривой до­
за - эффект. В последнем случае расочитывали концентрации гер­
бицидов, снижающие численность бактерий на 505? (C&JQ).
Вегетационные опыты проводили в песчаных и почвенных куль­
турах в сосудах Вагнера емкостью 1-5 кг. В опытах использова­
ли клевер, горох, люпин. Учитывали динамику накопления назем­
ной массы растений, величество я массу клубеньков. Анатомоморфологическую картину клубеньков изучали на.ультратонких
срезах в постоянных препаратах (Паушева, 1974; мишустин.Шильникова, 1973).
В наземной масое и корнях растений определяли общий в бел5
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
ковый азот, а также оумму монооахаров общепринятыми методами
(Ермаков, 1952; Белозерский, Проскуряков, 1951). В клубеньках
анализировали активность сукциндегидрогеназы, определяли со- •
дергание легогдобяна и активность нктрогеказ.
Транслокацяю и разложение гербицида 2,4-Д в корневой систе­
ме растений и в клубеньках изучали рздиоизотопньм методом.
Для работы использовали натриевую соль 2,4-дихлорфеяоксиуксусной кислоты (2,4-Д), меченную *"Ч! в ароматическом кольце.
Радиометрические намерения проводили на установке малого фона УМЗ-1500 с торцовым счетчиком Т-25-БЗД. Микроскопичес­
кие водоросли выращивали на нэдккх [минеральных средах (Голлер• tiax, 1951; Громов, 1265) в условиях стационарной п интенсивной •
культуры. Продуктивность и реакции их на введение гербицидов •
изучали по накоплении биомассы п содержанию фотосинтетических
пигментов. Пигменты определяли о помосью спектрофотометрии. ••
Результаты количественных измерений подвергали статистической
обработке.
РЕЗУЛЬТАТЫ ГОСЛЕДОВАНКЙ
Г. Закономерности формирования и жизнедеятельности •
микрофлоры в почве, обработанной гербицидами
Ключевым вопросом проблемы является методология почвенномикробиологичесхой оценки токсичности пестицидов вообще и гер­
бицидов в частности. * •
Огромный экспериментальный материал, накопленный в настоя­
щее время, дазт очень расплывчатую информацию, которая практи­
чески не поддается обобщению. Поэтому результаты почвенно-мик-'
робиологических исследований ни в коей мере не регламентируют
применение гербицидов в земледелии.
При разработке этого вопроса мы исходили из экологичеоких •
представлений о месте и роли микроорганизмов в экосистеме.
Как часть наземной экосистемы, микрофлора почвы характеризует­
ся тремя основными параметрами: потоком энергии, круговоротом
вепрств и структурной организацией. Изменение любого из них в
той или иной степени влечет за собой определенные сдвиги в
„почвообразовательном процессе и изменение тех свойств, которые
определяют плодородие почвы. Отсюда задача почвенно-микробио6
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
логической оценки пестицидов, как мы ее понимаем, заключается
в определения тех границ их применения, за предели/д которых
происходит изменение потока энергии, нарушается круговорот ве­
ществ, ломается структурная организация микробиоценоза. Такой
подход обусловливает выбор показателей, которые представлены
в таблице I.
Таблица I
Почвенно-макробиологическая оценка токоичнооти пестицидов
Экологические
и сакитарногигиенические
показатели
Основные индикаторные микро- Дополнительные
организмы и процессы
. признаки
Поток енергии Дыхание почвы (выделение С 0 2 ,
поглощение Og)
Круговорот
Азота: нитрификация
Аммонификация,
веществ
азотфнксация
денитрификация»
уреаза.протеаза
Фосфора: минерализация
Фосфатаза
.органофосфатов
Углерода: выделение COgt
Иазертаза, амила­
разложение целлю­
за, полифеводоклозы
сидаза
Структура "
Сапрофитные бактерии, грибы, Видовое разнооб­
биоценоза
актиномицеты, микроскопичео-' разие, доминиру­
кие водоросли, микрофауна
ющие виды, виды
индикаторы '
Симбиотические системы:
- бактериотрофные растения
. - микотрофные растения
- лишайники
Санитарное
Патогенные формы микроорга- ' Антибиотический
в
состояние
низмов
потенциал
Способность
Персистентность пестицидов. ' Трансформация
п"чвы к само- Кинетика детоксикации
пестицидов»
очищению
Метаболиты
7
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
В серии лабораторных опытов было показано, что реакция от­
дельных микробиологических и биохимических показателей на
гербициды выражается характерной кривой доза - эффект. Учиты­
вая относительно низкую точность почвенно-микробиологических
и биохимических анализов, их лабильность во времени и прост­
ранстве, за критерий токсичности нами были приняты такие кон­
центрации гербицидов, которые сникают численность микроорга­
низмов или активность биохимических процессов в почве на 505
( K K J Q ) . Э Т О Т критерий является статистически значимым и широ­
ко используется в токсикологической практике.
Как известно, максимальные концентрации гербицидов в почве
заранее заданы к опрсделяются^лавнам образом, производственной
необходимостью и сакитарно-гигиеничеызшп правилами. Поэтому
при оценке опасности или вредности этих химических соединений .
в отношении отдельных почвенно-микробкологических показателей
логично соотносить токсические концентрации их к производст­
венным (ПК). Это отношение полулетальЕкх концентраций к про­
изводственным было названо нами коэффициентом безопасности
или надежности
^%о
*% = — Г П Г По своему смыслу он близок к индексу широты терапевтического
эффекта, используемому в фармакологии для оценки лекарственных
веществ, а по существу означает во сколько раз токсические
концентрации-гербицида выше производственных. Подобно лекарст­
венным веществам применение гербицидов является вынужденной
мерой, обусловленной стремлением получить чистые посевы и мак­
симальный выход сельскохозяйственной продукции на единицу пло­
щади. Поэтому в любом случае применение гербицидов представля­
ет определенный риск. Этот риск тем меньше, чем выше коэффици­
ент безопасности. Для практической оценки такого риска нами
была предлоаена следующая шкала безопасности: . К$ < 1 - силь­
ный ингибитор; Кд >-1 < Ю - умеренный ингибитор;
Kg. >-I0 к 100 - слабый ингибитор; К$ > 100 - практически
нетоксичен.
Результаты апробации такого подхода к оценке токсичности
гербицидов представлены в таблице 2.
Как видно, действие гербицидов на почвенную биоту носит избиратапьный характер, что позволяет вычленить наиболее слабые
8
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
Таблица 2
Коэффициент безопасности пестицидов (К^) для различных почвенно-микробиологических
показателей
Микроорганизмы и процессы
Глифосат Атразин Монурон Эптам Изо- Рогор 'Карбо- ТВД
фос-3
тион
1. Дыхание почвы
> 100
> 100
> 100 > 100 > 100 > 100
0,1
2. Разложение целлюлозы
> 100
> 100
> 100 > 100 > 100 > 100
0,1 .
20
3 . Нитрификация
> 100
> 100
26
0,01
10
4. Азотфиксация
> 100
> 100
>100
25 •> 100
ОД
30
5. Сапрофитные бактерии
> 100
> 100
> 100 > 100 ^ 1 0 0 > 100
0,3
10
6. Сапрофитные грибы
> 100
*• 100
>100 > 100 > 100 >Ю0
0,01
3
7. Сапрофитные актияошшегы
> 100
> 100
>100 >100 >100 >Ю0
0,1'
4
- 8. Микроскопические водоросли
> 100
<1
. > 100
> 100
9 . Клубеньковые бактерии
ПК - производственная
концентрация
•',
<1
12 >Ю0
-
25
> 100 > 100
13 >100
0,1
-
0,01 ..
>кю
- сильный ингибитор
- умеренный ингибитор
•>10 <10О
г-100
-
слабый ингибитор
нетоксичен
<1
-
> 100
< I
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
звенья в этом блоке экосиотемы. Для монурона и атразина это
микроскопические водорооли, для .эптама и рогора - процессы
нитрификация. Карботион оказывает стерилизующий эффект на все
почвенно-микробиологические показатели. Отсюда моашо сделать
заключение ;• что в ассоциации почвенных микроорганизмов,как в от­
дельно взятом организме,' имеются свои "точки приложения" ток­
сического дейотвия гербицида, имеютоя свои "мишени", которые
можно бы было назвать "экологичеокими мишенями". Изменение •
других почвенно-микробиологическях показателей будет зависеть
от того -насколько жестко они связаны о этими мишенями. Следо­
вательно, влияние гербицидов на биогеохимическую деятельность
микроорганизмов и плодородие почвы в целом будет определяться
тем местом, которое занимают микроорганизмы-мишени в потоке
энергии и круговороте веществ.
Отрицательное действие гербицидов на индикаторные группы
микроорганизмов (мишени) носит временный характер и; как пра­
вило; в наибольшей степени проявляется в первые 2 недели. В
последующем численность микроорганизмов и интенсивность микро- .
биологических процессов в почве, обработанной гербицидами, по­
степенно восстанавливается до контрольного уровня. Скорость
воостановления в значительной мере зависит от степени токси­
ческого эффекта и персистентности (стабильности) гербицидов.
При этом следует отметить, что отрицательные последствия их
применения часто превосходят по времени их физическое присут­
ствие в почве. Так карботион и продукт его разложения метилизотиоцианат исчезали из почвы за 4 недели, а отрицательное
действие их на грибы, водорооли и нитрифицирующие бактерии •
.сохранялось. в течение 14 недель.
При многолетнем систематическом применении динамика ингибирующего эффекта гербицидов приобретает вид пульсирующей кри­
вой. При этом амплитуда колебаний численности микроорганизмов
пооле очередной обработки гербицидами постепенно затухает. От­
рицательный эффект повторных обработок снижается (рис.1).
Восстановление численности индикаторной группы микроорга­
низмов в почве после обработки гербицидами обусловлено рядом;
факторов. Во-первых, концентрация гербицида в среде не остает­
ся постоянной. Она снижаетоя вследствие рассеяния гербицида
-по почвенному профилю, адсорбции и деградации под влиянием
10
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
атразиы
I год
2 год
3 год
4 год
а в
са в
са в
са Т)
....о
100
Хг
50
25
12
монурон
S loo
карботион
100
•
50
25
12
6
3
Г^
/
^
Г УГ ^
/ .
/
1
Щ-
1
Рис. I Динамика изменения численности водорослей при много­
летней систематической обработке почвы гербицидами.
( а-в-о- спустя I - 14 - 52 недели после очередной
обработки почвы гербицидами )
II
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
физико-химических и биологических факторов. Во-вторых, проис­
ходит адаптация микроорганизмов к гербициду* При этом в эколо­
гическом плане под адаптацией надо понимать не столько генети­
ческую или физиологическую приспособляемость отдельно взятого
организма или вида, сколько определенные структурные изменения •
в популяции индикаторных микроорганизмов и микробного сообще­
ства в целом. •
Для иллюстрации на рко.2 представлены результаты анализа •
видового состава цианобактерий и микроскопических водорослей
в почве, обработанной гербицидами. Как видно, через недело по­
сле обработки снижается частота встречаемости многих видов.
Часть.из них вообще исчезает из альгоценоза. Доминирующее по- .
ложение занимают 1-2 вида, которые в значительной степени
обеспечивают продуктивность альгофлоры. Восстановление видовой.
структуры происходит медленно и зависит от стабильности препа­
рата.
При многолетнем применении это положение закрепляется. Наи­
более чувствительные виды в результате систематической обра­
ботки гербицидами "выбрасываются" из микробоценоза. В резуль­
тате образуется качественно новое сообщество, характерной чер­
той которого является пониженный уровень видового разнообра­
зия, высокий коэффициент доминирования, отсутствие цианобакте­
рий, фиксирующих молекулярный азот.С рио.З )
Таким образом, главным следствием систематического примене­
ния гербицидов является переотройка микробного сообщества и
прежде всего изменение видовой структуры индикаторной группы
микроорганизмов.
Устойчивые изменения в видовой структуре индикаторной груп­
пы являются первым предупредительным сигналом, указывающим на
перегрузку почвы биоцидами. Удобным обобщающим показателем
для характеристики этой перегрузки является индекс видового •
разнообразия.
Другим важным фактором адаптации микроорганизмов к гербици­
дам является генетическая или физиологическая гетерогенность
популяции вида в почве. Исследования, проведенные на примере
клуоеаьковых бактерий показали, что чувствительность различных
штаммов одного и того же вида к гербицидам может отличаться
-более, чем на один горядок. Это, несомненно, способствует вы12
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
I неделя
RCETUOJIb
--
-
атразин
ffi
3 месяяа
- -
•а
I
J—
год
FH-
1
рйгаятр
<?
цонурон
и
tn;
ш
.. 1. 1
4
ЭДГаЦ
•L 1—
г
о
-
Ш ffl
L
г
о
'ЕЗрООТИОН'
:г::р: • +
3 S 7
'l 4 6 *'«,V
33
T-
l:
г
о
'* ***,', W
структуры сообщества водорослей в дерново-подзолистой почве под вли­
с?
•*
£
tf
/<3 /<?
Рис. 2
Изменение ВЯДОЕОЗ
янием гер&ШДОВ. I . Aisorpaoiiostoc punctiforne, 2. АлаЪаепа sp.,sp. 3» Cylindrosporaua sp..sp.
4.№ornidita auttnnsle 5. Pa. curtua 6. Ph. foveolarun 7. Chlaaydomona3 gloeosama 3. Chlorooosoua iafuslonua 9. Horraidi'xa flacciaua 10. Cliloridella neglecra 11. Haatzscbia aapbioxys
12. Ilavicula atojias 15. Hitz^JiUa pale a
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
хонтртлг
г
о
1!
11
атразин
2\
о
И
ш
И
монурон
J
I
Г
\
J__L
карбогаон
к
г.
о
JJJ-
13 3 4 56?
4SMHtei3
ill
i 2.3 4 5 6 7 S S/ОЛ/г /3
J_L_i
/«2 S4S6
7 8&/OH/2S3
2 года
I год
3 года
РЕС.З Влияние многолетнего систематического применения гербицидов на видовую структуру сооб­
щества водорослей в дерново-подзолистой почве.
1-Amorphonostoc puactiphorme, 2-АпаЪаепа sp., 3-Cylindrospernua sp, 4~Phoraidiin autuisiale
5-Ph. curtum, 6-Fb.£oveolarum, 7-Calamydomonas gloeogaaa, 8-Chlorococcui infuslonua, 9-Hornidium flaccidua, 10-Chloridella negleota, 11-Hantzschia aapnioxys, 12- llavicula atonus,
13-Nitzschia palea
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
живаниа вида и восстаковлеввп его роли в микробоценозе.
Третий существенный фактор, обусловливающий высокую устой­
чивость почвы, как биологической системы — это гетерогенный,
многофазный характер ее строения в гидрофобные свойства мно­
гих гербицидов, используемых в сельскохозяйственном производ­
стве.
В результате прямых микроскопических наблюдений было пока­
зано, что гербициды плохо растворимые в воде, распределяются
в почве дискретно в виде отдельных частиц. Диффундируя в ок­
ружающую среду,они становятся центром формирования микрофло­
ры. В зависимости от физических свойств и токсичности влияние
их на микроДлору различается* При этом мохво выделить, по
крайней мере, два типа формирования микроорганизмов вокруг
частиц. Первый - характерен для. веществ, обладающих широким
спектром микробоцидного действия, 3 атом случае развитие мик­
роорганизмов начинается ва некотором отдалении от чаотиц, в
результате чего-вокруг вх образуется стерильная зона. Причем
по мере удаления от частиц внгвбирующий аффект пестицида сни­
жается и переходит в отамулирующий. Последнее характерно для
физиологически активных веществ. Таким образом, в гетерогенных
условиях почвы действие гербицидов ва одни в те же микроорга­
низмы может иметь как отрицательвое, так в положительное влия­
ние одновременно, в результате чего происходит пространствен­
ная перегруппировка микроорганизмов.
Второй тип характерен для веществ о относительно узким из­
бирательным действием. В этом случае стерильная зова не обра­
зуется. Спустя какое-то время после попадания гербицида в поч­
ву вблизи и ва поверхности частиц развиваются бактерии, кото­
рые группируются в колонии, напоминая картину обрастания при-родных полимеров нерастворимых в воде (целлюлоза, хитин, кау­
чук в т.д.). Как правило, в этом случае формируется монокуль­
тура бактерий, которая первой вступает в контакт о гербицидом
в колонизует его поверхность. Накопление массы бактерий на по­
верхности гербицида происходит чрезвычайно медленно в для раз­
личных чаотиц» разобщенных в пространстве, неодинаково. Дли­
тельные наблюдения показала, что даже спустя 6 месяцев, наря­
ду о частицами атразиаа, обросшими плотным слоен бактерий, в
почве обнаруживаются практически стерильные кристаллы. Ни в
'
1
5
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
одном случае не отмечалось "обрастание" гербицидов мяцелиальными формами микроорганизмов.
Актиномицеты и грибы "избегают" контакта о гербицидами,
проявляя отрицательный хемотаксис к этим веществам. Эта спо>
собность мицелиальных микроорганизмов активно уходить из зоны,
наоыщенной гербицидом в гетерогенных условиях почвы обусловли­
вает высокую устойчивость микрофлоры к сельскохозяйственным
ядохимикатам и, по-видимому, в значительной степени объясняет •
низкув эффективность химических средств защиты растений в бо­
рьбе с почвообитающими фитопатогена*.'л.
Все сказанное приводит к заключению, что взаимодействие
гербицидов (и вообще пестицидов).плохо растворимых в воде, с
почвенной микрофлорой происходит главным образом в микрозонах,
т.е. носит локальный характер. В любом случае за пределами
втой относительно небольшой зоны, примыкающей к частице герби­
цида, существенных изменений в микрофлоре почвы не происходит.
Следовательно, в целом действие гербицидов на почвенные микро­
организмы ограничено каким-то относительно небольшим объемом
почвы. Причем о глубиной этот объем сужается до минимума.
Таким образом, устойчивость почвенных микроорганизмов к гер­
бицидам обусловливается не только химическим составом препара­
та и физиологической устойчивостью микроорганизмов, но и не­
равномерным дискретным распределением гербицидов в почве.
Микрофлора почвы в наземных экосистемах тесно связана с дру­
гими компонентами биоценоза и прежде всего с растениями, пред1
ставлягацими основную группу продуцентов. Именно•растения явля­
ются для сапрофитных микроорганизмов основным источником пита­
ния и энергии в метабиотическом цикле круговороте веществ.
Замена агротехнических методов борьбы о сорняками на хими­
ческие ведет к существенным изменениям в характере отрастания
сорных растений и распределению их остатков по почвенному про­
филю,
При использовании агротехнических приемов отрастающие оорняки заделываются в почву и служат постоянным источником энер­
гии и питания для почвенных микроорганизмов. Анализ результа­
тов собственных исследований и материала, опубликованного в
литературе, показывает, что при средней засоренности полей, со­
ставляющей 0,1-0,5 кг/м", в почву заделывается 10-50 ц свежей
16
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
растительной массы на I га. Это обеспечивает достаточно высо­
кий уровень жизнедеятельности гетеротрофной микрофлоры, в то
время как при химической обработке масса сорных растений со­
ставляет в 10-100 раз меньше. В связи с этим ухудшается обес­
печенность почвы органическим веществом и соответственно сни- •
жается интенсивность микробиологических процессов.
Этот механизм, иногда ускользающий от внимания исследовате­
ля, при однократной обработке почвы гербицидами в посевах по­
левых культур, особенно остро ощущается при систематическом
применении их в условиях многолетних насаждений.'
Почвенно-мякробиологические исследования, проведенные нами •'
на многолетних плантациях мандарина в Абхазской АССЕ (5 лет),
на 'лесопосадках ели в Ленинградской области (8-9 лет), на плав-тации лекарственного растения диаскореи Кавказской в условиях
Подмосковья £3-4 года) в принципе дали сходные результаты. То--'
тальное уничтожение сорняков о помощью гербицидов приводит к
снижению основных показателей биологической активнооти почвы. •
Микрофлора приобретает характерные черты, описанные для почв,'
находящихся длительное время в парующем состоянии. Снижается
общая биогенность почвы, уменьшается относительное! количество '
споровых форм бактерия и грибов, возрастает численность гуматразлагающих бактерий и нокардий. Одновременно происходит умень­
шение гумуса. Возрастает количество аммонийного и нитратного
азота.
Потери гумуса в гербицидном варианте опыта обусловлены
смещением процессов разложения - синтеза гуминовых веществ в ,
сторону разложения ввиду резкого снижения количества расти­
тельных остатков, поступающих в почву с сорняками, а также в
результате функциональной перестройки углеродного питания мик­
робного сообщества, о чем свидетельствует относительное увели­
чение численности гуматразлагающих бактерий и нокардий.
Для иллюстрации в табл.3 приведены результаты одного из опытов
на плантации мандарина в' условиях субтропического климата, где '
в течение 5 лет ежегодно применялся комплекс гербицидов, вклю-'
чающий атразин, монуров и реглоя.
Полученные результаты позволяют сделать заключение, что си-'
стематическое применение гербицидов в многолетних насаждениях
в конечном счете приводит к потере плодородия почва. Поэтому
17
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
Таблица 3
со Влияние аятилетвего ежегодного применения гербкцидов на микрофлору и активность некоторых
ферментов в почзе под культурой мандарина
Почва, варианты
опыта
_г
Г
1
—т.
t
, Бактерии
Гумус, Общий
Ферменты
Гори­
азот,
зонт, -:апрофитн нитри- денит- аэробные но- катала- уреаза %
СМ
( на ША
фвци- рифици- целлкло- кардии 0* мг/г « J *
(>бщее споры рующие руицие , зоразлатающие
дМкг/г L
t_:
1
!
t
Подзолистая
Контроль
Гербициды
Контроль
Гербициды
Аллювиальная
'контроль
Гербициды
0-15
0-15
1050 159
1470 117
10
5
250
60
90
I
7
32
7,0
2,1
170
67
4,03
3,53
0,375
0,256
15-30
I5-S0
1780 311
530
53
8
2
ПО
6
10
I
2
41
4,1
2,0
126
-
3,26
3,00
0,275
0,214
0-15
0-15
1000
530
170
67
20
I
25
6
10
I
-
2,2
1,9
475
120
4,36
3,57
0,211
0,197
Контроль
Гербициды
15-30
15-30
3660
920
530
130
4
I
250
6
10
I
-
2,4
2,2
232 •2,50
16
2,22
0,196
0,170
1елтозем
Контроль
Гербициды
Контроль
Гербициды
0-15
0-15
15-30
15-30
660
700
950
700
139
63
105
72
13
20
10
2
600
50
50
5
I
I
2
I
-
7.5
4,6
8,2
6,5
47
0
52
0
4,80
4,25
1,82
1,66
0,210
0,189
0,176
0,164
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
непременным уоловием охраны почвы и поддержания ее плодородия
в атом случае является внесение органических удобрений в любой
приемлемой для данной культуры форме (навоз, компосты, сидераты, промежуточные культуры и т.д.) и рациональное сочетание
агротехнических и химических методов борьбы о сорняками.
Применение гербицидов обусловило существенные изменения в
технологии возделывания сельскохозяйственных культур. Основным
элементом новой технологии являетоя минимализация механичеопой
обработки почвы.
С точки зрения охраны почвенного плодородия наибольший инте­
рес представляет применение гербицидов в системе противоэрозионных мероприятия.
Как показали, опыты Степно-Иашмской опытной станции по борь- •
бе о эрозией почвы, на которых проводились наши исследования,
сокращение механической обработки парующего поля до минимума ••
позволило полностью устранить ветровую эрозию.
В условиях минимальных обработок парующей почвы несколько •
увеличивалась дифференциация в распределении микроорганизмов
по почвенному профилю. Снижалось содержание нитратов в почве,
что характеризует заторможенность процеооов минерализации азот­
содержащих органических соединений в вей. Однако в целом чис­
ленность' микроорганизмов и уровень протекающих в почве микро­
биологических процессов был достаточно высоким. Суммарная био­
логическая активность во время парования, определяемая: аппли­
кационным методом, в условиях минимальных обработок не уступа­
ла контрольному варианту, где производилась вспашка.о отвалом.
В почве под. культурой пшеницы, следующей по пару, числен­
ность микроорганизмов была не ниже, а в верхнем горизонте ••
(0-Ю мл) даже превосходила контроль, особенно в начале лета
в первые фазы, развития растений.
Фитопатологические исследования в течение 3-х ротаций четы­
рехпольного оевооборота показали,' что частичная или полная за­
мена механических обработок почвы в парующей поле на химичес­
кие (гербициды) не ухудшала ее фитосанитарного состояния. Ко­
личество возбудителей корневой гнили и заболеваемость, пшеницы
в условиях минимальной обработки существенно не изменялись.
Высокий уровень почвенно-микробиологичеоких процессов в усло­
виях минимальной обработки объясняется рядом факторов.
19
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
Во-первых, хорошо оструктуреяаые черноземы, на которых
проводились почвенно-микробиологические исследования, имеют
высокую порозность и низкий коэффициент самоуплотнения. По­
этому в условиях недостаточного увлажнения дане в отсутствие
механических обработок аэрация почвы оставалась на достаточно
хорошем уровне.
Во-вторых, оставшаяся на поверхности стерня в лучшей степе­
ни обеспечивает снегозадержание и соответственно влагонокпление в почве, создавая более благоприятные условия для жизнеде­
ятельности микроорганизмов и развития пшеницы в весенний и
раннелетний засушливый период, характерный для Северного Ка-'
захстана.
Следовательно, защищая почвы от ветровой эрозии и притор-.
махивая микробиологические процессы в период парования, мини- .
мольные обработки служат важным фактором охраны плодородия и
более рационального использования азотного фонда почвы.
Таким образом, суммируя результаты наших исследований, сле­
дует сделать заключение, что гербициды оказывают на микроорга-низмы как прямое, так и опосредованное (косвенное) действие.
Прямое действие обусловлено токсичностью гербицида, носит
избирательный характер и ограничена отдельными компонентами
микробаценоза, которые в ассоциации почвенных микроорганизмов
представляют "мишени'1 Характер и степень этого воздействия на
почвенную биоту в целом зависит от места и роли "мишени" в
круговороте веществ.
Косвенное действие объясняется изменением условий питания
и энергетического обеспечения микроорганизмов вследствие огра- '
ничейного поступления в почву растительных остатков. В этом
случае проиоходит общее снижение биологической активности и
функциональная перестройка углеродного питания почвенной мик­
рофлоры, 'что в конечном счете мохет привеоти к более интенсив­
ной потере.гумуоа и плодородия почвы в целом.
Вместе с тем научно-обоснованное сочетание гербицидов и
минимальных механических обработок почвы о учетом почвеняоклиматических условий и
вида"" растений мохет слухить вах*ным фактором охраны почвенного плодородия.
Из всего вышеизложенного зытекает, что почвенно-микробиолотическая оценка и прогноз возмохных последствий применения
20
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
гербицидов должен складываться из выявления мишени, экологи­
ческого анализа места и роли ее в круговороте веществ с уче­
том изменения механической обработка почвы и продуктивности
других компонентов биоценоза.
Гербищцщ и симбиотические взаимоотношения
клубеньковых бактерий и бобовых растений
В плане рассматриваемой нами проблемы большой интерес пред­
ставляет система микроорганизмы - высшие растения» Наиболее
тесные и длительные взаимоотношения между микроорганизмами и
растением на физиолого-биохимическом уровне складываются в
симбиотических системах, продуктивность которых в очень силь­
ной стааени зависит от каждого из партнеров па симбиозу.
Гербициды-являются физиологичеоки активными веществами. По­
этому важно понять теоретически и оценить практически характер
и степень тех изменений, которые могут происходить в симбиотической системе в ответ на обработку гербицидами.
Учитывая роль бобовых в общем балансе кормовых а продоволь­
ственных: культур, мы исследовали влияние гербицидов на бобоворизобиальннй симбиоз.
В лабораторных опытах изучена влияние более 30 гербицидных
препаратов производных фенокоиалкиикярбоновых кислот, симтриазинов, фенилмочевины, карбаматов, тиохарбаматов, дитиокарбаматов и ряда других соединения да 55 штаммов пяти основных
видов клубеньковых бактерий. Показано, что токсичность их ,,для Rhizob'ium зависит от химического состава препарата. На­
иболее сильным эффектом обладают карботшн, цианамид кальция,
грамоксон и реглон.
Систематические наблюдения и статистически? анализ резуль­
татов экспериментальной работы показал значительную вариабель­
ность в чувствительности к гербицидам различных штамаов клу­
беньковых бактерий. Полулетальные концентрация, например, атратона, региона, грамоксона я фунгицида ТИЩ для различных
штаммов R . t r i f o l i i отлнчалиоь в 10-30 р а з .
Однако, как правило, резистентность так называемых быстрорас­
тущих видов клубеньковых бактерий ( a . t r i f o l l i , E.leguminosarum^ была выше, чем мёдаеннораотущих(Н.Зароа1сиа).
21
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
Введение гербицида карботиона в почву в дозах, близких к
производственным, полностью исключало развитие клубеньковых
бактерий в ней на протяжении 3-6 месяцев.
В хорошо проветриваемой (аэрируемой) почве гербицид разла­
гался за 4-6 недель. При искусственной инокуляции почвы и се­
мян растений клубеньковыми бактериями через 8-10 недель после
обработки почвы карботионом происходит нормальное образование
клубеньков. Возобновляется фиксация молекулярного азота. Вос­
станавливается продуктивность растений. Таким образом, бакте­
рицидные вещества подобно карботиону, обладающие фумигирующим
эффектом, полностью "выбивают" шпсросимбионта из~почвы .
В результате бобовые культуры переходят на автотрофное пита­
ние минеральными формами азота. Однако этот симбиоз легко вос­
станавливается путем искусственной инокуляции семян бобовых
культур клубеньковыми бактериями. Отсюда появляется реальная
возможность использовать такого рода вещества для устранения
из почвы малоэффективных бактерий и замены их ва высокоэффек­
тивные " производственные" штаммы.
Гербициды производные сим-триазина (оимазин, атразин, проыетрин и др.) малотоксичны для клубеньковых бактерий. Полуле­
тальные дозы их для Ehizobium (CKgQ) превышают производст­
венные в 50-100 раз. Однако они обладают сильным фитотокоическим эффектом и длительное время сохраняются в почве. •
При внесении в почву гербициды производные сим-триазинов
проникают в корневую систему растений и, передвигаясь в акропетальном направлении,концентрируются в листьях, ингибируя
процессы фотосинтеза. В серии вегетационных опытов- была пока,зано, что под влиянием симазина, атразина и триэтазива в рас­
тении люпина снижается содержание моносахаров, увеличивается
количество общего азота, сужается отношение Сахаров к азоту.
Это влечет за собой ухудшение обеспеченности корневой системы
растений, в частности, интенсивно растущей меристемы клубень­
ков энергетическим материалом.
В результате снижается масса клубеньксвна корнях растений,
уменьшается удельная масса клубенька, сужаются размеры бактероидной зоны, что влечет за собой снижение интенсивности фик­
сации азота. В соответствии с этим падает продуктивность рас•тений.
22
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
Высокие концентрации гербицидов, ингибиругщие рост расте­
нии более, чем на 50#, лолноотью блокируют процессы фиксации
азота. Клубеньковые бактерии иереходят к паразитическому об­
разу жизни, что усугубляет отрицательное действие оимазина и
атразина на растение.
Гербициды производные фенокоиалкилкарбоновых кислот (2,4-Д,
2Н-4Х, 2M-4JM) используются по вегетярующим раотеняям, когда
собственно, завершается инфекционный процесс, происходит ак­
тивный рост меристемы и формирование бактероидной ткани клу- •
бенька.
Используя 2,4-дихлорФен.окоиукоусную кислоту (2,4-Д), ме­
ченную в кольце 1 4 С, было показано,.что гербицид этот, прони­
кая в листья, передвигается в корневую систему раотений и ак­
кумулируется в клубеньках. До 7052 13 С; гербицида концентриру­
ется в бактероидах.
Аналогичным образом, используя метод ТСХ, в клубеньках рао­
тений был обнаружен гербицид 2М-4И. Однако, в последнем олу^
чае передвижение гербицида из листьев в корневую систему и
клубеньки обнаруживалось только в фазу 7-8 лиотьев и только урастений, инокулированных клубеньковыми бактериями. В соответ­
ствии о этим 2М-42М в используемых дозах оказывал отрицатель­
ное действие только на растения, у которых на корнях наблюда­
лось обильное образование клубеньков. По-видимому, клубеньки,
являясь мощным центром мобилизации питательных веществ, обес­
печивают передвижение 2М-4ХМ в корни раотений и соответствую­
щий доступ их к месту "конечного действия."
,.,
Эти данные по аккумуляции фенокоиалканов в клубеньках име­
ют принципиальное значение для понимания их отрицательного дей­
ствия на бобово-ризобиальный симбиоз.
Обладая ауксинподобным действием, феноксиалканы оказывает
сильное воздействие на формирование клубеньков.
Растительные клетки бактерокдной зовы под влиянием гербицидов ' '
измельчаются, происходит их вакуолизация, разрушение клеточных
стенок, лизис, что ведет к дезинтеграции бактерокдной ткани. Наряду о этим в клубеньках снижаетоя активность оукцяндегидрогеназы, уменьшается содержание легоглобина, сокращаются
размеры фиксации молекулярного; азота, "что приводит к снижению
эффективности бобово-ризобиального симбиоза.
•
23
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
Сопоставляя результаты анатомо-морфологических и биохямичеоких исследования можно предполагать, что одним из основных
механизмов отрицательного действия производных феноксяалкилкарбоновых кислот на фиксацию азота является разрушение бактероидной ткани клубенька.
Вместе с тем опыты, проведенные на здоровых клубеньках,
отделенных от растений, показали, что при инкубации их в рас­
творах 2М-4Х и 2М-4ХМ происходит резкое снижение активности
нитрогеназ. Это говорит о том, что фенокскалканы, проникая в
клубеньки, оказывают непосредственное влияние на физиолого-био- •
химический аппаоат симбиотической фиксация азота. Известно,
что производные феноксиуксусной кислоты и их фенольные метабо­
литы являются разобщителями окислительного фосфорилирования
(Чканников, Соколов, 1973).
Исходя из этого,можно предполагать, что концентрируясь в бактероидной ткани феноксиалканы блокируют процесс регенерации
АТФ, в результате чего снижается активность нитрогеназ, требу­
ющих для функционирования энергии макроэргичеоких связей.
Следовательно, в случае феноксиалканов можно рассматривать
2 механизма отрицательного действия на бобово-ризобиальный сим­
биоз, дополняющих друг друга. Один из них обусловлен аномаль­
ным развитием меристемы, приводящей к образованию недоброкаче­
ственной бактероидной ткани. Второй - разобщение окислительно­
го фосфорилирования, в результате чего блокируется деятельность
нитрогеназ.
Таким образом действие гербицидов на симбиотические систе­
мы носит многоплановый характер. Механизм этого действия зави­
сит от химического состава препарата.
В крайнем случае происходит разобщение симбиоза, прекраща­
ется фиксация азота, возникают условия для перехода клубенько­
вых бактерий в паразитизму, что усугубляет их отрицательное
действие на. продуктивность растений.
В экологическом отношении это лишает бобовые культуры основ­
ного преимущества перед другими растениями и подрывает их кон­
курентноспособность за источники питания.
С другой стороны, недостаточно продуманное и корректное"при­
менение гербицидов на посевах бобовых снижает или полностью
Снимает положительный эффект искусственной инокуляции семян
24
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
препаратами клубеньковых бактерий.
Отсюда следует, что недооценка симбиотрофного характера
азотного питания бобовых может привести к существенным про­
счетам как в экологическом, так и в хозяйственном отношении.
Поэтому все гербициды, предлагаемые для применения на посевах
бобовых культур, должны проходить обязательную проверку в от­
ношении их воздействия на бобово-ризобиальный скмбкоз.
Микроскопические водоросли как индикаторы
фитотокслчеокгсх веществ
Как было показано, гербициды оказывают избирательное дей- •
ствие на почвенные микроорганизмы. НаибольвеЯ чувствительно­
стью к ним обладают микроскопические водоросли. Последние по
физиологии автотрофного питания наиболее близки к высшим хлорофиллоносным растениям. Отсюда вытекает заключение о возмож­
ности использования микроскопических водорослей для индикации
гербицидов и их фитотоксическкх метаболитов в воде и почве.
При этом вырисовываются 2 подхода. В первом случае о характе­
ре и степени загрязнения почвы гербицидами можно судить на ос­
новании тщательно систематического анализа структуры сообщест­
ва почвенных водорослей. "Выпадение" отдельных видов из сооб­
щества, снижение индекса видового разнообразия, возрастающий
коэффициент доминирования сигнализируют о загрязнении почвы
фитотоксическпмя веществами (рис.2, 3 ) . Это позволяет предпри­
нять соответствующие меры для выявления и устранения источника
такого загрязнения.
Почвенно-альгологические исследования, проведенные нами в
условиях многолетних насаждений на территории Грузинской ССР,
в Ленинградской и Московской областях, достаточно хорошо иллю­
стрируют эти возможности. Однако, по-видимому, наиболее эффек­
тивно такой подход может быть использован при оценке переноса
фитотоксических веществ на территорию биосферных заповедников,
Второй путь - основан на использовании отселекционированных
высокочувствительных тест-культур микроскопических водорослей
для определения остатков гербицидов в окружающей среде. Нами
было испытано и отобрано ряд штаммов зеленнх, желтозеленых и
синезеленых (цианобактерий) водорослей, из которых наиболее
25
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
чувотвитвльной и удобной в работе оказалась Chiorelia vulga­
r i s 15? (ЛГУ). Показано, что очень высоким альгицидным зффек-том отличается производные оим-триазина и фенилмочевины. Сла­
бое действие на водорооля оказывает производные алифатических
карбоновых кислот и фенокоиалканы. Промежуточное положение за­
нимают карбаматы и тиокарбаматы. Следовательно водорооли не
являются универсальным индикатором фитотокоичеоких веществ.'
Известно, что оим-триазины, фенилмочевины и в некоторой
степени карбаматы являютоя ингибиторами фигосиатеза. Оговда .
следует, что втот теот может быть наиболее аффективно исполь­
зован для оценки фитотоксичности вещеотв, ингибирующих фотооинтетические процесоы. Исходя из этого вами был разработан
альгологячеокий метод определения сим-триазинов и фенидмочевин
в почва, минуя дорогой я трудоемкий процеоо экстракция их орга*1
ничеокими растворителями. В завиоимооти от типа почвы и хими­
ческого соотава гербицидного препарата чувствительность метода
составляет от 0,2 до 200 мкг в пробе. Точность определения не менее 15% и не уступает тонкослойной хроматографии. По сра­
внению о другими биологическими методами, где в качестве тест-культур используются высшие раотения, скорооть анализа возра­
стает в 5-10 раз.
В диссертации рассматриваются различные аспекты практичес­
кого применения альгологического метода.
1. Для оценки загрязнения почвы фитотоксическими веществами.
Особенность метода заключается в том, что он позволяет оценить
суммарную фитотоксичность исходного гербицида и продуктов его '
трансформации в сочетании о другими экзогенными веществами и
ингибиторами природного происхождения.
Метод пригоден для целей мониторинга и оценки хозяйственной
годности почвы. При этом следует подчеркнуть, что фитотоксич­
ность почвы, обработанной гербицидами, зависит от очень многих
факторов. Так внесение растительных остатков в почву,' содер­
жащую дяурон,' приводит к увеличению ее фитотоксичности, что • •
объясняется синергичеоким дейотвием гербицида и продуктов рас­
пада растительных оотатков и т . д .
2. Для экспреоо-микроскриняинга природных соединений и про­
дуктов искусственного синтеза - ингибиторов фотосинтеза. Апро'бация метода на основе 200 химических соединений,используемых
26
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
в качестве гербицидов и синтезированных во ВНИИ химических
средств защиты растений, подтвердили его высокую эффектив­
ность. Основные преимущества метода - проотота, скорость, де­
шевизна и хорошая воспроизводимость результатов. При много­
кратном определении фитотоксичности ряда производных фенилмочевины и сим-триазинов коэффициент вариации составлял не бо­
лее 2052. Расход вещества, необходимого для окриннинга, не
превышал 5 мг, что позволяет использовать его на первичных
этапах лабораторного синтеза.
3. Для оценки взаимосвязи между структурой химических сое­
динений и его фитотоксичностыо. Анализ этих связей представ­
ляет существенный практический интерео для прогноза и органи­
зации направленного синтеза веществ о заданными свойствами.
На примере систематических исследований производных фенилмочевины показано, что фитотокоический эффект этих веществ воз­
растает оо сменой заместителя на ароматическом кольце в следу­
ющем порядке: н — - с н ^ — — в г—-.01.
Наибольшей фитотокоичностью обладают дихлорфенилпроизводные метилмочевины. Замена
.водорода при N на гидрокоильную группу приводит к заметному
снижению фитотоксичности фенилметилмочевин, а N -карбалкокслгруппа уменьшает ее в десятки раз. При этом регулирующая роль
заместителя на ароматическом кольце практически снимается.
Замена -С Нд на -С2Н5 и с з н 7 П Р И Н" приводит также к
снижению фитотоксичности фенилмочевин.
Установлено, что фитотоксичнооть фенилциклометялмочевин про­
является при трансформации их до производных фенилметилмоче­
вин. Как выяснилось, собственно, в этом заключается механизм
их гербицидвого действия.
Аналогичным образом можно проследить за изменением фитотоксических свойств производных сим-триазинов.
Деградация гербицидов хлорпроизводных
оимметричнах триазинов
С экологической точки зрения наибольшую опасность представ­
ляют гербициды, устойчивые к деградация. При систематическом
применении они могут аккумулироваться- в окружающей среде и,
попадая в пищевую цепь, концентрироваться в отдельных ее зве27
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
ньях до критических концентраций. Среди таких гербицидов су­
щественное место занимают симметричные триазины, которые ши­
роко используются в сельском хозяйстве для борьбы с оорняками
в посевах различных сельскохозяйственных культур.
Имеющееся в настоящее время представления о судьбе пести­
цидов вообще и гербицидов в частности оводятоя к тому, что
попадая в почву, они переходят в почвенный раствор и частично
иммобилизуются ее органоминеральным комплексом. Взаимодейст­
вие гербицидов и микроорганизмов происходит в почвенном раст­
воре. На этом строятся соответствующие модели микробной дегра­
дации гербицидов в почве ( Soulas, I932).
Как показали наши исследования, для веществ плохо раствори­
мых в воде, а среди гербицидов их большинство, ата картина вы­
глядит недостаточно корректно.
Фракционный анализ распределения гербицида симазина 1 4 С ,
сделанный спустя 2 месяца посла обработки, позволил установить,
что, в зависимости от типа почвы и содержания в ней органичес­
кого вещества,от 40 до 78?» симазина 1 4 С включаетоя в соотав
гуминовых и фульвиновых кислот. Принципиальной разницы между
стерильным и ноотерильным вариантами опыта нет. Через 4 месяца
содержание 1г^3 в этой фракции не снижается. По-видимому, им­
мобилизованный органо-минеральным комплексом гербицид изымает­
ся из окружающей среды и станог :тся недоступным для микроорга­
низмов, на основании чего было сделано заключение, что сим-триазины вступают в химическую связь с гумусом. Исследования,
опубликованные эа последние 5-7 лет, уточнили, что при взаимо­
действии хлорпроизводных сим-гриазинов и гуыияовых
веществ
происходит образование комплексов.
Прямые микроскопические наблюдения,4 проведенные методом
стекол обрастания, подтверждают, что частицы гербицида атразива (а также ряда других пестицидов) размером в 10 и более мик­
рон, попадая в почву о влажностью 40-60$ от полной влагоемкости, не растворяются в вей в течение длительного времени. При
этом вокруг кристаллов и мелких частиц гербицида формируется
специфическая микрофлора. Со временем масса бактерий нараста­
ет, образует колонии, которые обволакивают эти частицы сплош­
ным слоем. В результате их жизнедеятельности кристаллы атразина оплывают, подвергаются деструкции и,наконец, полностью ис­
чезают.
28
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
Эта картина очень напоминает картину микробной деградации
природных полимеров, нерастворимых в воде, и
предполагает
участие экзоферментов, солюбилизирующях веществ или каких-то
агрессивных продуктов метаболизма микроорганизмов. Отсюда вы­
текает, что микробиологические процессы деградации таких гер­
бицидов, плохо растворимых в воде, в значительной степени ог­
раничены поверхностью частиц и соответственно локализованы в
микрозонах. Это предполагает, что разложение гербицида в поч- '
ве начинается с возникновения ряда очагов и вследствие их
пространственной разобщенности протекает неравномерно. '
Используя традиционные методы накопительных культур, из
почвы было выделено ряд микроорганизмов. Показано, что ня один
из них не мог использовать атразин и симазин в качестве един­
ственного источника энергии и углерода. Процесо деградации
гербицидов протекал очень вяло и только в присутствии энерге- •
тического материала. Максимальная скорость разложения соотав- •
ляла около 4 мг/л культуры за месяц.
Методом тонкоолойной и бумажной хроматографии- в сочетании
о радиоавтографией в культуральвой жидкости Aspergillus fumigatus было обнаружено 5 продуктов трансформации симазина. ''
Один из них переходил в хлороформеннуи фракцию, 4 оставались
в водной. От 4 до 6% 1 4 С гербицида выделялось в виде ^ O g *
Почти 50% 14 С. было обнаружено в мицелии гриба, из которых'
до 80S» входило в состав белковой фракции. Результаты анализа
метаболитов позволили сделать заключение, что разложение си- '
мазина начинается о деалкилирования боковых цепей и заверша­
ется 'раскрытием триазинового кольца а минерализацией молекулы
гербицида с образованием С02«
Наряду с этим было установлено, что симазин и атразин по­
глощаются и аккумулируются многими видами бактерий, грибов и
микроскопических водорослей независимо от их опособнооти метаболизировать эти гербициды. Коэффициент аккумуляции симази­
на для микроскопических водорослей варьировал от 66 до 230, а '
концентрация гербицида в альгомаосе достигала почти 500 мг/кг
сухого веса.
Таким образом, в почве имеются микроорганизмы, а следова­
тельно и потенциальные возможности микробной деградация герояцидов хлорпроизводных сим-триазинов. Однако эти возможности
реализуются в ней крайне недостаточно. Последнее обусловлено:
29
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
I) низкой численностью макроорганизмов, способных разрушать
скм-триазины; 2) дискретным распределением гербицидов, огра­
ничивающим их контакт о этими микроорганизмами, и, наконец,
3) отсутствием необходимого количества определенных форм
энергетического материала, который требуется для генерирова­
ния процессов микробной деградации этих гербицидов.
Вместе о тем показано, что введение в почву аммонийных
удобрений, мочевины и сеоы совместно о гербицидами приводит
к ускорению их деградации. Выяснен механизм этого процесса.
Он заключается в том, что аммонийные удобрения и сера окиоляются микроорганизмами соответственно до нитратов и серной '
кислоты. В результате этого происходит микрозональное подкисленге почвы и кислотный гидролиз симазияа и атразина до их
гидроксианалогов.
Своеобразие этого механизма заключается в том, что хими­
ческий гидролиз гербицидов в почве осуществляется за счет
биохимических реакций и что в этом процессе участвуют хемоавтотрофные микроорганизмы. Как показали последующие иссле­
дования нашей лаборатории этот механизм деградация широко
распространен в природе и касается практически всех пестици­
дов,' склонных к кислотному гидролизу. Полученные материалы
послужила основанием для рекомендаций по совместному приме­
нению таких пестицидов с физиологически кислыми удобрениями
о целью снижения их персистентности- в почве.
ВЫВОДЫ
1. Результаты экспериментальной работы показали, что гер­
бициды, используемые в сельском хозяйстве, язляютоя постоянно
действующим экологическим фактором, оказывающим на микрофлору
почвы прямое и косвенное (опосредованное) влияние.
Прямое действие определяется антимикробными свойствами хи­
мических препаратов и ностг избирательный характер. Косвенное связана о изменением экологических условий существования мик­
роорганизмов в почве, вызываемых определенными изменениями в
технологии механической обработки почвы, гибелью растений и
характером их распределения по- почвенному профилю.
2. Дана теоретическое обоснование, отобраны показатели и
разработаны критерии для почвенно-микробиологической оценки
30
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
токсичности гербицидов. Методические подходы, предлагаемые
нами, позволяют вычленить наиболее уязвимые звенья этой части
экосистемы и, рассматривая их в качестве "экологических мише­
ней", прогнозировать последствия применения гербицидов в зем­
леделии.
3. Установлены основные закономерности поведения ассоциа­
ции почвенных микроорганизмов в ответ на обработку гербицида­
ми. Под влиянием гербицидов снижается продуктивность популя­
ции индикаторных микроорганизмов ("мишеней"), происходит обед­
нение видового состава,снижается индекс видового разнообразия,
возрастает коэффициент доминирования, наблюдается смена доми­
нирующих видов.
При многолетнем применении гербицидов эти изменения стаби­
лизируются. В результате формируется новый микробоценоз, ха­
рактерной чертой которого является более низкий уровень видо­
вого разнообразия.
4. Систематическое применение гербицидов в многолетних по­
садках ведет к снижению биологической активности почвы. Микро­
флора почвы приобретает структуру, характерную для микрофлоры
многолетнего чистого пара. В ее составе возрастает относитель­
ное количество автохтонной микрофлоры,разлагающей гумиарвые
вещества, что говорит о перестройке углеродного питания, ассо­
циации почвенных микроорганизмов.
Эти изменение обусловлены гибелью растительного покрова. В
отоутствии постоянного притока свежего органического вещества
нарушается равновесие между процессами образования и разложе­
ние гумуса, вследствие чего происходит прогрессивное снижение
его содержания в почве. Отсюда следует,' что для сохранения
почвенного плодородия в этих условиях требуется периодическое
внеоение органических удобрений.
5. Применение гербицидов и сокращение механических обрабо­
ток в системе противоэрозионных мероприятий приводит к сниже­
нию темпов минерализации азотсодержащих соединений и накопле­
ния нитратов в парующей почве.
Под пшеницей, следующей по пару, скорость процессов нитри­
фикации возрастает. В результате этого более рационально ис­
пользуется азотный фонд, почвы.
Сокращение механической обработки и применение комплекса
31
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
!
гербицидов на оказывает отрицательного действия на фитосанитарвое состояние поля. Полученные результаты ПОЗВОЛЯЕТ реко­
мендовать минимальные обработки как эффективное средство ох­
раны почвы парового клина в условиях Северного Казахстана.
6. Показано, что гербициды,плохо растворимые в воде (симаэяк,' атразгя), распределяются в почве дискретно, в виде отдель­
ных частиц. Их взаимоотношение с микроорганизмами носит мшсро. зональный характер и изменяется по градиенту диффузии. В ре­
зультате происходит пространственная перегруппировка микроор­
ганизмов в почве. Вблизи частиц и на их поверхности формиру­
ется специфическая микрофлора,' ;которая в процессе своей жизне­
деятельности разрушает эти вещества. На основания этих данных
предложена новая концепция, согласно которой деградация герби­
цидов плохо растворимых в воде протекает по типу "микробного
обрастания'' и обусловлена деятельностью экзоферментоэ или ка­
ких-то агрессивных продуктов метаболизма микроорганизмов.
7. Из почвы выделены микроорганизмы и изучена их способность
разлагать гербициды симазин и атразин на искусственных пита­
тельных средах. Показано, что ни один из них не использовал
эти вещества в качестве источника углерода. Процесс деградации •
наблкздался только в присутствии дополнительного энергетическо­
го материала. Микробная деградация хлорпроизводных сим-тряазинов начинается с деалкилирования боковых цепей и завершается
раскрытием триазинового кольца и его минерализацией до С02« .'
Наряду о хемогетеротрофными микроорганизмами в деградации
сим-триазиков участвуют хемоавтотрофы такие, как нитрификаторы
и серобактерии. Их участие носит опосредованный характер и
обусловлено накоплением минеральных кислот, гидролизукщих эти
вещества. На основании этого для снижения персистентности си—
мазияа и атразина в почве предложено использовать их совместно
с физиологически кислыми минеральными удобрениями.
8 . Изучено влияние ряда гербицидов на симбиотические взаи­
моотношения клубеньковых бактерий и бобовых растений.
Механизм отрицательного действия гербицидов на бобово-ризобиальный симбиоз неодинаков и зависит от химичеокого состава
препарата.
Гербицид карботион, обладающий бактерицидным эффектом, "вы~
* бивает" из почва клубеньковые, бактерии," вследствие чего бобо32
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
вые растения переходят на автотрофный тип питания минеральным
азотом.
Сим-триаэины, ингибируя фотосинтез у растений, блокируют
образование Сахаров, вследствие чего снижается интенсивность
образования и рост клубеньков на корнях бобовых, уменьшается
удельный вес бактероидаой ткани, ухудшается энергетическое
обеспечение процессов фиксации азота, падает эффективность бобово-ризобиалъного симбиоза.
Производные феноксиалкилкарбоновых кислот, проникая в бобо­
вые растения," аккумулируются в клубеньках и оказывают отрица­
тельное действие на формирование бактероидаой ткани и ее функ­
циональное состояние. В результате этого снижается азотфиксирующая активность симбиотической системы.
9 . Установлено, что для большой группы гербицидов производ­
ных сим-триазянов, фенилмочевины, карбаматов и тиокарбаматов
наибольшей чувствительностью облапают фототрофные микроорга­
низмы (циаяобактерии, водоросли).
Дано теоретическое обоснование и разработаны методические
подходы для микробиологического мониторинга загрязнения окру­
жающей среды. Предложены альгологические методы экспресс-милроскриннинга природных соединений и продуктов искусственного
синтеза - ингибиторовфотосинтеза.
10. С целью повышения эффективности и безопасности примене­
ния химических соедстя защиты растений в земледелии необходима
организация единой системы почвенно-микробиологической оценки
токсичности и биодегрядательности пестицидов, включая внедре­
ние микробиологических методов в систему мониторинга.
33
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
До ?.?атешалам диссертации опубликованы следтпгиэ работы
1. Круглов Ю.В., Пароменская Л.Н. Влияние некоторых ампнотриази
ков на развитие микрофлоры в дерново-подзолистой почве.-В
кн.: Роль микроорганизмов в питании растений и повышении
эффективности удобрений. Д^Кодос, 1965, 0.70-78.
2. Круглов Ю.В., Пароыенская Л.Н. Влияние сиказина и атразина
на нитрифицирующие бактерии и процесс нитрификации.-В кн.:
Использование микроорганизмов для повышння уроаая сель­
скохозяйственных культур. Л.: Колос, 1966, с.55-60.
3. Круглов Ю.В., Лишпщная Г.П. Влияние триазиновых гербицидов
на почвенные водоросли. - В кн.: Современное состояние и
перспективы изучения почвенных водорослей в СССР. Киров,
1967, с.222-226.
4. Круглоз Ю.В., Пароменская Л.Н., Масленникова В.Г. •• Исполь­
зование водорослей в качестве индикаторов для определения
остаточной токсичности гербицидов в почве. - Тез.докл.2
межвуз.кокф. "Микроорганизмы в сельском хозяйстве". М.,
МГУ, 1968, с.181.
5. Лшшицкая Г.П., Круглов Ю.В. К вопросу о применении водорос­
лей в качестве теот-кудьтур для определения остаточных
количеств онытрпазинов в почве. - Тр.4 Украинского ботани­
ческого оъезда, Киев, 1968.
6. Бешанов А.В., Гера Н.Б., Круглов Ю.В., Казарина Е.М., Васяк Л.О., Чекцов Б.В. - Применение прометрина и линурона
под пооевы моркови к влияние их на микробиологические про­
цессы в почве. - В кн.: Материалы Ш Всесовзн.кояф. по
разработке и применению гербицидов в сельском хозяйстве.
Ы,»196Э, о. 15-16.
7. Шслонникова В.Г., Круглов Ю.В. К вопрооу о роли микроорга­
низмов в детоксикации симазина в почве. - В кн.: Материалы
Ш Всесоюзн.конф. по разработке s применению гербицидов в
сельском хозяйство. U., 1969, вып.З, о.67-69.
8. Круглоз Ю.В. Влияние гербицидов на микрофлору почвы. - В кн.:
Микробиология на службе сел.хоэ-ва. Сер."ИТОГЕ науки", Ы.
ВИНИТИ, 1970. O.I05-II6.
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
9. Круглов Ю.В. Альгодогический метод определния атразина в
почво. - Изв. АН СССР. Сер.биолог., 1970, J6 I, С.144-147.
10. Круглов Ю.В., Пароменская Л.Н. Детоксикащи симазина куль­
турой микроскопических водорослей..- Микробиология, 1970,
т.39, вып.1, с. 157-160.
11. Круглов Ю.В., Пароменская Л.Н., Масленникова В.Г. Альгологический метод определения триазиновых гербицидов в почве.
- В кн.: Микробиология земледелия. Л.; Колос, 1970,
с.156-162.
12.Масленникова В.Г., Круглов Ю.В. Разложение сшазина 1 4 С в
культуре Aspergillus fumigatus.
- Бюл.н.-т. информации
EHIM с.-х. микробиологии, 1970, JS 14, вып.4, с.32-34.
13. Круглов Ю.В., Бей-Биенко Н.В. К методике изучения последей­
ствия гербицидов на микробиологические процессы в почве.
- В кн.: Микробиологические и биохимические методы иссле­
дования почв. Киев: Урожай, 1971, с.143-148.
14. Круглов Ю.В. К вопросу о взаимодействии триазиновых гербици­
дов с микроскопическими водорослями. - В кн.: Биология,
география споровых растений Средней Азии. Ташкент: Сан.
Уз.ССР, 1971, с.138.
15. Круглов Ю.В. Гербициды как экологический фактор изменчивости
микрофлоры почвы. - В кн.: Микробиология и научно-техниче­
ский прогресс. Минск: Наука и техника, 1971, с.65-66.
16. Круглов Ю.В., Пароменская Л.Н. Симбиотические взаимоотноше­
ния бобовых растений с клубеньковыми бактериями при внесе­
нии пестицидов. - Докл.ВАСХНИЛ, 1972, № II, о.8-10.
17. Круглов Ю.В. Микроскопические водоросли как индикаторы на
загрязнение почвы гербицидами. - В кн.: Методы изучения н
практического использования водорослей. Киров, 1972, с.241251.
18. Круглов Ю.В., Квятковская Л.Б. Использование микроскопиче­
ских водорослей для первичных (отборочных) испытаний вновь
. синтезируемых гербицпдшхх препаратов. - Тез.докл. Воесовзн.
конф. "Результаты научно-исследовательских работ по созда­
нию новых пестицидов, внедрению их в производство и приме­
нению в сельском хозяйстве". М., 1972, с.51.
19. Круглов Ю.В., Гера Н.Б., Бей-Биенко Н.В. Влияние метурина на
биологическую активность почвы. - Химия в сел.хоз-ве,1973,
ih 4, с.54-56.
ос
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
20. Михайлова Е.И., Круглов Ю.В. - Влияние некоторых гербици­
дов на альгофлору почвы. - Почвоведение, 1973, & 8, с.
81-85.
21. Kruglov Y.V,, Kviatkovsk^a The algae as indicators of
herbicides contamination of soil. - In: International
slmposlum "The Interaction of herbicides microorganisms
and plants. Wroclaw, 1973, 11:11.
22. Maalennicova W.G., Kruglov Y.V. Some aspects of simazine
degradation in the soil. - In: International simposium
"The interaction of herbicides microorgonisas and plants."
VJroclaw, 19731 1:3.
23. Kruglov Y.V., Gersch H.B., Pertseva A.Yf., Bay-3ienko II.W.,
Uichallova S.I. The effect of long-term systematic her­
bicide application on microflora and some biochemical
processes in soil. - In: International simposium "The
interaction of herbicides microorganisms and plants"Wro­
claw, 1973, 11:3.
24. Круглов Ю.В., Михайлова Е.И. Детохсикацкя гербицида спмазика в культурах макроскопических водорослей. - В кн.:
Тез.докл. и сообщений 5-й конф. по споровым растениям
Средней Азии и Казахстана. Ашхабад, 1974, ч.1, с.196197.
25. Круглов Ю.В., Геры Н.Б. Иа-энение дашамнки микрофлоры поч­
вы при систематическом внесении карботиона. - В кн.:
Динамика микробиологических процессов в почве и обуслав­
ливавшие ее факторы, Таллин, 1974, ч.2, с.133-136.
26. Круглов Ю.В., Герш Н.Б., Бешанов А.В., Васюк Л.Ф., Чеп­
цов Б.В. Влияние линурона и прометрина на биологическую
активность почвы. - В кн.: Актуальные проблемы с.-х.
микробиологии. JL, 1974, с. 100-103.
27. Kruglov Y.V.
longee des
giqus dans
1 Colloque
Influence de e'utillsation systematique proherbicides sur certains processus microbiolole sol - -n: Biodegradatioa et humiflcatlon,
international. Nancy, 1974.
28. Круглов Ю.В. Влияние пестицидов и продуктов их трансформа­
ции на сообщества почвенных-микроорганизмов. - В кн.:
Экология почвенных микроорганизмов. М., 1975, с.23-27.
36
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
29. Круглов Ю.В., Масленникова В.Г. Разложение и распределе­
ние * 4 С спиазжна в почве.-Агрохимия, 1975, .'а 6, с.112115.
30. Круглов Ю.В., Михайлова Е.И. Разложение гербицида симазина в культурах водорослей. - Микробиология, 1975, т.44,
в ш . 4 , с.732-735.
31. Круглов Ю.В., Пароыенская Л.Н., Багиян Л.Г. О действии
гербицидов на бобовые растения. - Материалы X Мзздународного симпозиума стран-членов СЭВ. Пугцпно, I975, ч Л ,
с.43-47. .
32. Круглов Ю.В., Перцева А.Н., Галкина Г.А. Изменение биоло­
гической активности почвы под влиянием многолетней си­
стематической обработки почвы гербицидами. - Докл.ВАСШШ,
1975, № 2, с.20-21.
33. Володарская Н.А., Баскаков Ю.А., Мельникова И.А., Спиридо­
нов Ю.Я., Круглов Ю.В. Гербицпдныо свойства и -алкилгидроксплашновых производных сиытриазина. - Агрохимия,
1975, й II, с.93-98.
34. Паврилова Е.А., Круглов Ю.В. Содержание и жизнеспособность
конидий н. sativum в'почва при использовании различных'
почво-защнтных обработок. - Бюл.ВНШ с.-х. ыпкробнологии,
1975, й 7, вып.2, с.71-73.
35. Krouglov J.V. Microscopic algae aa indicators ox soil her­
bicides pollution. - Inj Bioindicatores deteriorisations
11/1. CSAV-UOST, 1975, 54-63.
36. Kruglow J.V., Gersz И.В., Pierceva A.M., Bey-Bienco Ы.*.,
Uichajlowa E.I. The effect of long-term herbicide app­
lication on microflora and biochemical processes in soil.
— Ins Roczniki Glebozmaweze, Warzawa, 1975, XXVI, z.2,
159-164.
37. Maslennikowa IV.G., Kruglow J.V. Some aspects of simazine
degradation in soil. - In: Roczniki —Gleboznaweze,
Warszawa, 1975, z.2, 24-29.
38. Kruglow J.W., Kwiatkowskaja L.B. The algae as indicatory
culture of herbicide contamination in soil. - Int Rocz­
niki Gleboznaweze, Warszawa, 1975, XXVI, z.2, 145-149.
37
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
39. Kruglow J.W., Paromenskaja L.H.,.Baglian L.O. - The in­
fluence of ЫСРА and MCPB herbicides on nodulation pro­
cesses and symbiotic fixation of nitrogen in pea plant.
- In» Soil biology and conservation of the biosphere/
VII Meeting of soil Biology section on the Hungarian Sooiety for Soil Sci, Kesathely, 1975» 7.
40. Круглов Ю.В., Шамин А.А., ^Олейникова В.Г., Михайлова Е.И.
- 0 распределении и миграции сшазина в почве. - В кн.:
Тез.докл.X Ыездународного симпозиума отран-членов СЭВ
"(Механизм действия гербицидов и синтетических регулято­
ров роста и их судьба в.биосфере." Пудино, 1975, с.67-68.
41. Круглов Ю.В., Паршенская Л.Н., Багаян Л.Г. Изменение виру­
лентности H.iequminosarum под влиянием гербицидов .
2.1МХМ и 2Ц-4Х. - В кн.: У съезд Всесоюзн.микробиол.
обц-ва, секция о.-х. микробиология, Ереван, 1975, о.3132.
42. Круглов Ю.В. 0 критериях оценки токсического действия пе­
стицидов на микробиологические процессы в почве. - В кн.:
Тез.докл.сов.учасишков 8 Неядунар.конгресса по защите
растений. М., 1975, о.69-70.
43. Круглов Ю.В. Критерии оценки токсического действия пести­
цидов на микробиологические процессы в почве. - Вол.
НИИ о.-х. микробиологии, 1976, й 18, вып.1, с.3-5.
44. Круглов Ю.В., Герш Н.Б. Изменение микрофлоры почвы при
длительной систематической обработке ее гербицидами. В кн.: Вопросы экологии и физиологии микроорганизмов,
используемых в сельском хозяйстве. Л., 1976, 0.61-67.
45. Чеботарь Н.И., Круглов Ю.В., Лупашку З.А. Влияние некото­
рых гербицидов на формирование клубеньков и урожай сои.
- В кн.: Экология к физиология почвенных микроорганиз­
мов. Л., 1976, о.147-152.
46. Круглов Ю.В., Толкачев Н.З. Изменение корневой микрофлоры
овса под влиянием гербицида монурона. - Бюл.ВНИИ с.-х.
микробиологии, Л., 1976, № 18, вып.1, с.14-15.
47. Круглов Ю.В., Герш Н.Б., Михайлова Ё.И. Об устойчивости
экологической связи между"отдельными компонентами мик­
рофлоры при обработке почвы гербицидами. - В кн.: Зна­
чение консортивных связей в организации биогеоценозов.
Пермь, 1ЕГ76, с.94-95.
38
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
48. Толкачев Н.Э., Круглов Ю.В. Микроскопические водорослииндикаторы биологической тохсичнооти почвы. - В кн.:
Проблемы аллелопатш. К.: Наукова думка, 1976, 0.77-78.
49. Круглов Ю.В. Микрофлора почвы и гербициды. - В кн.: Агроно­
мическая микробиология. Л., 1976, с.204-229.
50. Круглов Ю.В., Масленникова В.Г. Влияние растительных остат­
ков на детоксикацию симазина в почве. - Химия в сел.хоэ-ве,
1976, Я 7, с.53-65.
51. Круглов Ю.В., Толкачев Н.З., Солянова Э.М. Последействие
многолетнего применения которана на почвенно-ыпкробиологические процессы в посевах хлопчатника и люцерны. - В кн.(
Вопросы экологии и физиологии микроорганизмов, используе­
мых в сельском хозяйстве. Л., 1976, о.75-80.
52. Круглов Ю.В., Михайлова Е.И. Изменение альгофлоры дерновоподзолистых почв под влиянием систематического применения
гербицидов. - В кн.: Развитие и значение водорослей в
почвах Нечерноземной зоны. Пермь, 1977, с.74-75.
53. Круглов Ю.В., Масленникова В.Г., Баскаков Ю.А. Фитотоксическая характеристика некоторых химических соединений о
помощью микроскопических водорослей. - В кн.: Развитие-й
значение водорослей в почвах Нечерноземной зоны. Пермь, •
1977, 78-80.
54. Круглов Ю.В. О роли микроскопических водорослей в процессах
самоочищения водоемов и почвы от пестицидов. - В кн.:
Культивирование и применение микроводорослей в народном
хозяйстве. Ташкент: Фан, 1977, с.122-123.
55. Круглов Ю.В., Герш Н.Б., Михайлова Е.И., Пароменская Л.Н.,
Штальберг М.В., Кириенко В.П. Оценка токсического эффекта
нового гербицида изофос-3 на микрофлору и биохимические
процессы в почве. - Химия в сел.хоз-ве, 1978, И 8, о.70-72.
56. Гаврилова Б.А., Круглов Ю.В., Соснин Н.А. Влияние минималь­
ных обработок почвы на корневую гниль яровой пшеницы. В кн.: Микробиологические процессы в почвах и урожайность
с.-х. культур. Вильнюс, 1978, с.78-80.
57. Круглов Ю.В., Герш Н.Б. Последействие систематического при­
менения гербицидов на развитие сапрофитных микроорганизмов
в почве. - В кн.: Микробиологические процессы в почвах и
урожайность с.-х. культур, Вильнюс, 1978, с.174-176.
39
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
58. Kruglov J.V., Paromenskaja L.U. On the mechanism of herbici­
de action upon 3e.gume aymoiosis. - In: 4-th Inter, cong­
ress of Pesticide Chemistry. Main topic IV. Zurich, 1978,
416.
59. Лупашку З.А., Круглов Ю.В., Чеботарь Н.И. Средство для повы­
шения сшлбиотической фиксации азота у возделываемых расте­
ний: Автор, свпд-во la 60I272, опубл. 15.03.78. ЕЙ й 10.
60. Круглов Ю.В. .'.апсробиологическш факторы детоксикации пестпцидов^. - С.-х.биология, 1979, JS 6, с.710-715.
. 61. Круглов Ю.В., Перцева А.Н., Соснин Н.А., Васьковская Г.С. ••
Изменение микробиологических показателей в почве при раз­
личных способах содержания пара. - Почвоведение, 1979, & 8,
с.82-87.
62. Круглов Ю.В., Штальберг U.B. Использование серобактерий для
детоксикации гербицида атразина в почве. - В кн.: Микробио­
логические методы борьбы с загрязнением окружающей среды.
Цуцино, 1979, с.31-32.
63. Круглов Ю.В., Самошкин В.И., Стусь З.А. Влияние многократно­
го применения фосфорорганическнх инсектицидов на биологиче­
скую активность почвы - Бал. н.-т.информации ВНИИ с.-х.
микробиологии, 1979, В 30, с,16-18.
64. Монейы А., Круглов Ю.В. Испол зование метода стекол обраста­
ния для изучения взаимодействия пестицидов о микрофлорой
почвы. - Еш.н.-т. информации ВНИИ с.-х. микробиологии,
1979, & 32, с.75-76.
65. Круглов Ю.В. Экотокспкологическая оценка пестицидов и прак­
тические вопросы охраны почв. - Бюл. н.-т. информации ВНИИ
с.-х. микробиологии, 1979, JS 32, с.8-10.
66. Круглов Ю.В. Шкробиологическая деградация гербицида нзофос3. - Бюл.н.-т. информации ВНИИ с.-х. микробиологии, 1979,
& 32, с.39-40.
67. Герш Н.Б., Круглов Ю.В. Влияние многолетнего применения симазина на накопление в почве микрофлоры, разрушающей этот
гербицид. - Еюл.ВНИИ с.-х. микробиологии, 1979, № 31, с.2528.
40
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
68. Чукдерова А.И., Доросинский Д.И., Круглов Ю.В. Применение
нитрагина под бобовые культуры. - Рекомендации НТО МСХ СССР.
1,1., 1979. & 10, 16 с.
69. Круглов Ю.В., Герш Н.Б., Штальберг М.В., Масленникова В.Г.,
Пароменская Л.Н. К вопросу об экотокспкологическоЗ оценке
НОВОГО Гербицида ИЗОфОС-3. — В КН. : Wirkungs-mechaniamen
von Herbiciden und synthetischen »'achotxuiisreculstoren.
Jena (DDR). 1979 (1930), 205-215.
70. Круглов Ю.В. Некоторые закономерности в реакции почвенной
микрофлоры на пестициды. - В кн.: Проблемы с.-х. микробио­
логии. Л., 1980, т.49, о.95-113.
71. Круглов Ю.В., Герш Н.Б., Штальберг Ы.В. Действие глифосата
на почвенную микрофлору. - Химия в сел. хоз-ве, I960, J5 10,
с.42-44.
72. Круглов Ю.В., Шсленнпкова В.Г. Микробиологическое разложение
симазпна. - В кн.: Микроорганизмы в защите и рациональном
использовании окружающей среды. Рига, I960, т.6, с.45.
73. Круглов Ю.В. Об экотоксикологической оценке пестицидов в поч­
ве. - В кн.: Международная науч.конф. по экологическим
эффектам пестицидов и минеральных удобрений - человек а
окружающая среда, Варна, 1930.
74. Доросинский Л.М., Чундерова А.И., Круглов Ю.В. Рекомендации
по применению торфяного нитрагина (ризоторфина). - М.:
Колос, 1981т 16 с.
75. Круглов Ю.В., Кузнецова И.А. Метаболизм метазола в культуре
Hooardia sp. - В кн.: Тез.докл.Международного симпозиума
стран-членов СЭВ "Механизм действия гербицидов и регулято­
ров роста растений", Прага, 1981, с.37.
76. Круглов Ю.В. Микробиологическая деградация пестицидов и ох­
рана природы. - В кн.: Охрана природы и применение химиче­
ских средств в сельском и лесном хозяйстве. Л., 1931,
с.116-120.
77. Монейм А., Круглов Ю.В. Влияние гербицида атразина на биоло­
гическую активность почвы и микрофлору ризосферы кукурузы.
- Почвоведение, 1981, J* 5, с.64-68.
78. Круглов Ю.В., Герш Н.Б., Зайцева И.И., Пароменская Л.Н.,
Штальберг Ы.В. Методические рекомендации по оценке токси­
ческого действия пестицидов на микрофлору почвы. Л., 1981.
42 с.
41
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
79. Чеботарь Н.И., Пароменская Л.Н., Круглов Ю.В., Лупашку З.А.
.• Средство для повыиенЕЯ спыбпотической фиксации атмо­
сферного азота у бобовых растений: Автор, свид-во
й 702342, опубл. 07.08.81, БИ Я 29.
80. Круглов Ю.В. О почвепно-1.акробиологкческой оценке токсич­
ности пестицидов.-В кн.: Экологические последствия при­
менения агрохикккатов (пестицидов). Пуцино, IS82, с. 2832.
81. Круглов Ю.В., Нуйюша И.Р., Балашова Е.К. Инактивация фосфороорганических пестицидов микроорганизмами. - В кн.:
Рассмотрение результатов работ, выполняемых институтами
Академии Наук, Шнвузами союзных республик и организа­
ц и я м Союзхтлзациты,и обсуждение актуальных направлений
в плане поиска, разработки и применения химических
средств зазиты растении. Таллин, IS82, о.102.
82. Kruglov J.V. Algae аа indicators of herbicid soil polutioni ecological approach. - Int IV-th Int.Conference Bioindicatorea Deterioriaationia Regionis. Abatr.Liblicu near
Prague, 1932. 19.
83. Круглов Ю.З. Закономерности распределения микроорганизмов в
почве после обработки пестицидами. - В кн.: Сельскохо­
зяйственная микробиология и охрана окружающей среда. Л.,
IS83, т.52, с.32-36.
64. Берестецкий О.А., Круглов Ю.В. Некоторые задачи микробиоло­
гии в связи с охраной почвы от загрязнения пестицидами.
- В кн.: Сельскохозяйственная микробиология и охрана
окружающей среды. Л., IS83, т.52, с.5-11.
85. Круглов Ю.В., Монейм А. Разложение гербицида атразина поч­
венными бактериями. - Почвоведение, IS83, Я 7, O.II2-II4.
66. Гаврилова Е.А., Круглов Ю.В., Гаранысина Н.Г. - Влияние
растений и микрофлоры ризосферы на деградацию базудина в
почве. - В кн.; Сельскохозяйственная микробиология и
охрана окружающей среды. 1., 1983, т.52, 0.67-70.
67. Круглов Ю.В., Кузнецова И.А., Гордиенко С.А. Взаимодействие
гербицида оимазина и гумусовых веществ. - В кн.: Сб.док­
ладов УШ Междуварод. сшлюзиума. "Доклады о гумусе",
Прага, 1983, т.П, 0.273-274.
42
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
88. Kalovskova N., Kuzaecova I.A., Gordienko S.A., Kruglov J.7.
Interaction of herbicides and. hiicic acids qnd the toxi­
city of the complexes. - В кн.: Сб. докладов 7J! Ыежду-
народн. симпозиума "доклады о гумусе'.' Прага, 1983,
т.1, с.78.
Съезды, конференции. совед;ания. симпозиумы.
на которых докладывались материалы диссертации
Межвузовская конференция "Современное состояние и перспек­
тивы изучения почвенных водорослей в СССР" (Киров, 1966).
1У Ботанический съезд Украины (Киев, I9G8).
П Межвузовская научная конференция "1и;кроорганизш в сель­
ском хозяйстве" (Москва, I968).
Ш Всесоюзная конференция по разработке и применению герби­
цидов в сельском хозяйстве (Москва, IS69).
Всесоюзная конференция по методам микробиологических и био­
химических исследований почв (Киев, 1969).
1У Конференция по споровым растениям республик Средней Азии
и Казахстана (Ташкент, 1970).
';'
Межвузовская. конференция "Методы изучения и практического
использования почвенных водорослей" (Киров, 1971).
1У Съезд Всесоюзного микробиологического общества (Минск,
1971).
. ••
.
Всесоюзная конференция "Результаты научно-исследовательских
работ по созданию новых пестицидов, внедрению их в производст­
во и.применению в сельском хозяйстве" (Москва, 1972).
Координационное совещание по экологии почвенных ыикроорганизмов (Ленинград, 1972).
I Всесоюзное совещание "Поведение, превращение и анализ
пестицидов и их метаболитов в почвв (Пущино-на-Ока, 1973). .
Международный симпозиум "Взаимодействие гербицидов, микро­
организмов и растений" (Вроцлав, Польша, 1973).
Международная конференция "Биоиндикация и детериоризация
ландшафта" Шост, ЧССР, 1973).
5-я Конференция по.споровым растениям Средней Азии и Казах­
стана (Ашхабад, 1974).
I международный коллоквиум "Биодеградация и гумификация"
43
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
(Накси, Франция, 1974).
Всесоюзный симпозиум "Динамика микробиологических процес­
сов в почве и обусловливающие его факторы" (Таллин, 1974).
7 съезд Всесоюзного микробиологического общества (Ереван,
1975).
X Ыездународный симпозиум стран - членов СЭВ "Механизм
действия гербицидов и синтетических регуляторов роста расте­
ний и их судьба в биосфере" (Пуцико, 1975).
Всесоюзный семинар-совещание "Экология почвенных микроорга­
низмов к микробиологические аспекты применения пестицидов в
сельском хозяйстве" Шосква, IS75).
УП Совещание Секции биологии почвы Венгерского общества
почвоведов "Биология почвы и охрана биосферы" (Кештели, Венг­
рия, 1975).
8 Ккздународный конгресс по защите растеши (Москва, 1975).
Всесоюзное совещание по программе iaiSCWD "Человек и биосфе­
ра" по теме: "Экачогическая оценка использования пестицидов и
других средств борьбы с вредителями в наземных и пресноводных
экосистемах (Пукико, 1976).
И Всесоюзное совещание "Значение консортивных связей в ор­
ганизации биоценозов" (Пермь, 1976).
1У Всесоюзное совещание по фпзиолого-биохимическим основам
взаимодействия растений в фитоценозах (Киев, 1976).
Республиканское совещание "фльтявировакие и применение
микрозодорослец в народном хозяйстве" (Ташкент, 1977). .
Цегвузозсвая конференция "Развитие и значение водорослей в
почвах Нечерноземной зона" (Киров, 1977).
Республиканская конференция "Шкробиологические процессы
в почвах и урояайность сельскохозяйственных культур" (Каунас,
1978).
4 Ыеадународный конгресс по химия пестицидов (Цюрих, Швей­
цария, 1978).
12 Научно-координационное совещание и симпозиум стран-чле­
нов СЭВ "Механизм действия гербицидов и синтетических регуля­
торов роста Шшьгаузен, ГДР, 1979). .
Всесоюзная конференция "Микробиологические методы борьбы с
загрязнением окружашей среди" (Пушино, 1979).
Всесоюзное совещание "Роль микроорганизмов в деградации
44
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
пестицидов и охрана окружающей среды" (Ленинград, 1979).
П Всесоюзное рабочее совещание по проекту МАБ J* 9 "Методы
и проблемы экотоксикологического моделирования и прогнозиро­
вания (Пущино, 1979).
Ш Съезд Всесоюзного микробиологического общества (Рига,
1980).
Международная научная конференция по экологическим эффек­
там пестицидов и минеральных удобрений - Человек и окружающая
среда (Варна, Болгария, 1980).
ХШ Международный симпозиум стран - членов СЭВ по теме "Ме­
ханизм действия гербицидов и регуляторов роста растений" (Пра­
га, 1981).
У1 Всесоюзная научная конференция "Проблемы гигиены и ток­
сикологии пестицидов" (Киев, 1981).
Ш Всесоюзное совещание "Миграция загрязняющих веществ в
почвах, в системах почва - вода, почва - растения, почва - атмосфера" (Обнинск, 1981).
Научно-техническое совещание "Охрана природы и применение
химических средств в сельском и лесном хозяйстве (Ленинград^
1981).
Ш Всеооюзное научно-координационное совещание по Междуна­
родной программе ШВСКО "Человек и биосфера" (Пущино, 1982). .
Научно-техническое совещание "Рассмотрение"результатов ра­
бот, выполняемых институтами Академии наук, Минвузами союзных
республик с организациями Союзхимзащиты и обсуждение актуаль­
ных направлений в плане поиска, разработки и применения хими­
ческих средств защиты растений" (Галлия, 1982).
1У Международная конференция по биоиндакации и детериоризации ландшафта (Люблина, ЧССР, 1982).
Всесоюзная конференция "Роль микроорганизмов в деградации
пестицидов и охрана окружающей среды" (Ленинград, 1983).
Ш Международный симпозиум "Гуиуо и растение" (Прага,1983).
Расширенное заседание Пленума Всесоюзного микробиологичес­
кого общества "Микробиология сельскому хозяйству" (Ленинград,
1983).
."
Х1У Международный симпозиум стран - членов СЭВ по теме "Ме­
ханизм действия гербицидов и регуляторов роста растений" (Уфа,
1984).
45
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
РТП.Тнн.ВИР.Зак.709.'Гир.125.М-18432.15.05.84.
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
15
Размер файла
1 195 Кб
Теги
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа