close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

54

код для вставкиСкачать
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
МОСКОВСКАЯ ОРДЕНА ЛЕНИНА
'
И ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ
СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННАЯ АКАДЕМИЯ имени К. А. ТИМИРЯЗЕВА
На правах рукописи
ДАВ ИДЧ УК Нина Валентиновна
УДК N1.142.
ФИЗИОЛОГО-АНАТОМИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ
В ПРОЦЕССЕ ПРОРАСТАНИЯ КЛУБОЧКОВ
САХАРНОЙ СВЕКЛЫ
03.00.12 — физиология растений
Автореферат
диссертации на соискание ученой степени
кандидата биологических наук
МОСКВА 1992
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
Работа выполнена на кафедре ботаники Московского ордена Трудового Красного Знамени областного педагогического
института им Н К. Крупской, электронномикроскопические
исследования проведены в лаборатории транспорта метаболитов Института физиологии растении им. К А Тимирязева АН
СССР.
Научный руководитель — доктор биологических наук, про-
фессор Якушкина Н. И.
Официальные оппоненты доктор биологических наук
Прусакова Л. Д., доктор биологических наук, профессор Ме-
ликян А. П.
Ведущее
университет.
учреждение—Воронежский
государственный
Защита состоится « & » . . ZhbnM&S . . 1992 г. в <1^*Ч
час на заседании специализированного совета Д 120 35.07
при Московской ордена Ленина и ордена Трудового Красного
Знамени сельскохозяйственной академии им. К. А. ТимиряАдрес- 127550, Москва И-550, Тимирязевская ул., 49, ученый совет ТСХА.
С диссертацией можно ознакомиться в ЦНБ ТСХА.
Автореферат разослан « ^ » . .«4*$^
. . . 1992 г.
Ученый секретарь
специализированного совета— _/" fft*Sj%/
Лосева А. С.
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность темы.Этап прорастания семян играет важную роль в онтогенезе растений.От протекания физиологических процессов на начальных этапах прорастания зависит появление дружных всходов,что в - '
свою очередь явится :залогом получения высоких устойчивых урожаев.На .
ocHOje понимания физиологии прорастания,применения различных спосо-.
бов предпосевной обработки появится возможность улучшения посевных
качеств семян(всхожести,энергии прорастаКия).
•
"•
Изучение процессов,происходящих при прорастании,проводилось'в.. •
разных направлениях.Исследовались особенности поступления и распределения 'воды в семенах при набухании(Аскоченская,1982;АксеноЕ,и.др.
I99Q) ;участие и взаимодействие'фитогормонов и ингибиторов.при прорастании семян(Кан,1975){закономерности,определяющие начало роста :
клеток в осевых органах зародыша на начальных этапах прорастания се
мян(0бручева,1991).Однако в большинстве случаев разные исследователи сосредотачивали внимание на изучении отдельных вопросов,что не
позволяет дать целостное представление об изменениях,происходящих,
в процессе набухания.Чрезвычайно мало работ,в которых одновременно
. исследовались и физиологические,и анатомические изменения покровов
семени.Недостаточно изучено поступление воды на первых этапах набухания,как сигнала,вызывающего изменения в активности веществ,инги бирующих и стимулирующих процессы,приводящие к началу роота осевых''
органов. Противоречивость литературных данных не позволяет дать определённые рекомендации по влиянию предпосевной обработки фитогормонами.Сказанное относится и к изучению парвых этапов прорастания :
" клубочков сахарной свёклы односемянных сортов.
.' .-.
Цели и задачи исследований.Основной целью нашей работы и явилось
• изучение физиолого-анатомичесйос изменений в процессе набухания и;
прорастания клубочков сахарной свёклы сорта'Рамонекая 09,од)<освУян- i
Г-
ЦЕНТРАЛЬНАЯ
НАУЧНАЯ БИБЛИОТЕЙЖ
Моск. семечохоз ачгдемич
им. К. А. Тимирязева '
^2^^
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
.:' ферулав'ая,.'.п-кумаровая кислоты); полифенолы(хлорогеновая кислота)и
V;.флавонриды.;-.' При набухании количество полифенолов и с[лаврноидов уме', ныпается. Полимерные формы(лей:соантоцианидины) превращаются в более
*п р о с т ы е ( щ а н и н ы ) .
-..'-. '.'••.;'.•••}'..•'
* . ' . > • . ' '• - :-
' . '•••,.• •:• • •"'••
--
'•••.'./'• В околоплоднике'содержится ряд веществ, ингибирующих прорас+
тёние($енольныэ соединения,неорганические ионы,в частности,К )^вы~ ,
.:.лшвание'крторьк происходит в,основном в первые 24ч намачивания»чтр •'•
• увеличивает скорость поступления'воды в клубочки и дальнейашЯ рост "'
;
, .
.
п
р
о
р
о
с
т
к
о
в
.
'
' ' / ' • ' •
•'•''••
."•'•••'•:
• • ' •
:
:
. ' .
• . ' • • ; .
' . • " " . • • ' : ' • . •
:
'
''•''':'
•
'
'
•
'
•
'
'
/
'"'•'
'•'•''V'••!••:
'•
;
;.:V.:.';:8.,Обработка..ИУК увеличивает'поступление воды в конце набуха —..
_ . кия и прорастания клубочков, растяжение клеток осевой части зароды>.ша,/поступление ионов-К^:в проростки. Растения,, выросшие из обрабо— .
г^.^.танкых'. ПУК клубочков, характеризуются увеличением'числа листьев.мас-^;
'; с ы ^ ' к р р н е п л о д а , V
у
:
:
','• ';•['••'./•'•
'"'••.,'•.•".'•'• •.;.
:
. ".р '-'^ ;;• \,~.' ]• :•'.; •.•• '.. ,
']:,:.г'^- ';>; ;--craicpK РАВот.'спУЕликоашных-'го:.ТЕМЕ Д И С С 2 Р Т А Ц ? 2 1 • :•".'• ••-•'••••
.';-•'• v 'I.Кулакова,-И.А.',СаввинаИ.И.',ДавВДЧУК H.BJ. Влияние предпосевной •
'-обработки сахарной свёклы ауксином на модификационнуя изменчивость
•'•'количественных признаков/Вопроси регуляции ростовых процессов у рас-"•••,тений//1-ежвуз.сб.науч..тр.Ы.:t'0mi,I9S8..C.9rrI3.- : ".•..;••.'• •. ; : '•
', К'•• ' 2.Кулакова11.А.,Давидчук- Н.В., СередоваГ. Влияние предпйсевноЯ •;. обработки с е ш ш ауксином на рост проростков сахарной ссекли первого
••" года. Ж И З Н И / Р О С Т растений и его гормональная- регуляция//А1едвуз.сб. .••:'науч.тр.М.:ШПИ,1969.С.12-18.
. •
•>
..
.- -.
• • - . :•
•• - : ' •
:• .''* -,: ' 4.Давидчук Н..В. ,:.Ку'лаковаИ.А. ;СередоваГ,- МетаболнческиЯ конт.••;. роль прорастания семкн сахарной свёклы/Регуляция роста растения// •
:• .Меявуз;с§.науч-.тр.М.:1:0ПИ,1&90.СЛЗ-18. . • .. .;
. .••••-.:
•, .••'.-' б.Давидчук Н.В.-, Парамонова Н.В. Ультраструктура сеыеннсй обо• лочки(СО) и клеток эпидермиса(КЭ) сухих и набухаих семян сахарнсЯ
свёклы/Электронная микроскопия и-современная технология//Сб.тез.1У
• Республиканской.конф.по .электронной"микроскопии.Кизинев,1990.С.53.
. • .в.проц:
. регуляции,
-. "•:'. '• .:7.Давидчук Н.В., ПарамоковаН.В. Об.особенностях ультраструкту—
;;рц.наружных покровов семян; в процессе набухания//Цитолопш.1991.г;5.
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
/слой не. имеет кутикулы со стороны зародыша.Перисперм,клетки которое'
- го заполнены крахмальными зернами,не имеющими оболочек,располагает- .
,'• сямакду. слоями семенной.конуры и отделен о.т зародыша лишь' внутренним слоем.При поступлении воды растворение крахмала.в клетках пери- •
.сперма и клеточных стенок внутреннего слоя увеличивает осмотическую ;
•-: концентрацию и способствует поступлению воды.Наряду с окояоплодни -'-;
ком,перисперм в семенах сахарной свёклы приспособлен для временного1 '
" поглощения и депонирования воды.При набухании клубочков происходит .\:
вымывание веществ,ингибирующих прорастание,неорганических(К+) и ор-- .'
• ганических(полифенолов и флавоноидов) .В. процессе прорастания происходят изменения в гормональном балансе,активность гиббереллинов возрастает,тогда как ауксинов падает,Обработка клубочков МУК, восполняя
недостаток ауксинов.увеличивает поступление воды в период наклёвы. в&ния.усиливает поглощение К^проростками-.Действие ауксина оказывает положительный эффект на дальнейший рост сахарной свёклы.'
Практическое значение работы.Полученные экспериментальные данные .
развивают наши представления о процессах,протекающих на-первых этапах набухания и прорастания клубочков сехарной свёклы.Установленные
изменения в ультраструктуре семенной кожуры, в содержании ингибиторов и стимуляторов роста иллюстрируют механизмы регуляции перехода '•
'от стабилизированного покоя к прорастанию.Дают возможность разра- -,
ботки приемов,регулируюцих и ускоряющих процессы прорастания,первые
[ этапы ростаСобработка ауксином,вымывание ингибиторов) .чтоимеет пра-"
ктическое значение при селекции и-возделывании сахарной своклы.
;•/• • Апробация работы.Основные результаты были представлены и доложены на 1У. координационном совещании преподавателей физиологии растений пединститутов FGECP(Челябинск,1987);Сабининеком семинаре при .
ШР АН (CCCP{MooKBajI9S8);pacujTpeHHOM семинаре лаборатории транспор-
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
та метаболитов ШР им.К.А.Тимирязева(Москва,1990);1У
Республикан-
ской конференции "Слектронная микроскопия и современная технология"
[Кишинев,1990);семинаре-совещании преподавателей физиологии расте,1йй и заведующих кафедрами ботаники педагогических институтовРОБСР
"Проблемы совершенствования преподавания ботанических дисциплин в
педвуз в" (Вологда, I9SO5 ^Всесоюзном совещании"$ункциональная4 морфолория клеткиЧЛенинград,19ЭГ).
'
Публикации.По теме диссертации опубликовано 7 научных работ.
Структура и объем диссертации.Диссертационная работа состоит из
введения,обзора литературы,описания объекта и методов исследования,
экспериментальной части,заключения,выводов,списка литературы ( 367
источников,в том числе 128иностранных).Материал изложен на 169 с т раницах машинописного текста и включает 30- рисунков и I I таблиц.
ОБЪЕКТ И МЕТОда ИССЛЕДОВАНИЯ
Объектом иоследорэния служила сахарная свекла ( Beta. Vu£oe.Ts-4 L.)
сорта Рамонская 09,односемянная.
Экспериментальная работа проводилась на агробиостанции и в лаборатории кафедры ботаники МОПИ им.Н.К.Крупской;
электронномикроско-
цические исследования - в лаборатории транспорта метаболитов ШР
им.К.А.Тимирязева.
Проращивание, Клубочки набухали в термостате при 25°С в закры тех кюветах на стеклах, покрытых фильтровальной бумагой, концы го-торой опускались в воду. Через определенное время клубочки препа рироваллсь на части л проводились соответствующие экспардаенты. В
отдельных опытах клубочки выдерживали в вода в соотношении 10:1 в
течение заданного срока, затем расгладывалгсь на прорацивьние,
а
водные вытяжки испсльзовкли при изучении их влияния ни прэрастаяие
семан и для анализов ( электропроводности, К* ) .
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
:м
1
В лабораторно-полевом эксперименте клубочки замачивали: I) в
воде;2) в растворе ауксина (10мг/л). Делянки размером Зм^павтор, н о с т ь 3 к р а т н а я . . ^ -.-;*•; •': \ ••
" "-... •••
'"•' У ' ; - , •./'.-.;'. •. ;.-,.'-.• „ ' . - . •
"' у У
.'; ч''. * Изучали следующие показатели. Количество воды в % в расчете. . н а исходную воздушно-сухую'массу клубочка и его отдельных частей.Скорость поступления воды в мг/г исходной воздушно-сухой массы- .-;
к л у б о ч к а - и е г о частей.'в ч а с , . .
• ' .:•.•''.,•''•
..
'••."''>'"'
• ';
- Строение семенной кояуры,. клеток эпидермиса семядолей.и пе-.рисперма семян изучали методом световой и электронной микроско . 'пии. Семена фиксировали 55С глютаровым альдегидом, для постфикса• '.ции применяли забуференный 1% 0*O^V Материал заключали в аралдит.
Срезы готовили на ультратоме.ШВ-8800{Швеция). Дчя.световой мик' ,-роскопии срезы окрашивали азуром II, приготовленном на 1%.растворе буры, для электронной -.окрашивали в парах 3% спиртового ^аст, вора йодистого калия'в течение I ч , цитратом свинца- 20 минут,
^следования проводили на электронном микроскопе УЕКИООВ фирмы
' "J*oE "(JbioHHH), Морфометрические измерения площади сечения клеток,
n
^сферосом, толщины кутиуулы-. на видеоплане W0Pфирмы" hjttutt
(
Ф
Р
Г
)
.
.
•-••;;
•
-
• , • ; •.';/••
•'
'
;
;
'
•;
'"'.•••".-
- :
;
.
;
/ • : • ' " / • • .
. : йчтенсивность дыхания определяли с помощьв Ж-гаэоанализато••-.
; раГИП-IOvMB без изменения естественной концентрации COg в воздухе
• и без нарушения целостности'клубочков (Гавриленко и д р . , 1 9 7 5 ) .
.: .'•;
Электропроводность водных вытяжек определялась кондуктометри- ,
чески.
Поглощение ионов (K^jJfOg) определяли по убыли ионов из растворов /К + -на пламенном фотометре;№0д - спектрофотометрически (
t&faMe ел.
,1975) / . Содержание - в клубоч:.е и его частях: К + -на
пламенном фотометре, Ю^ - о дисульфофеноловой кислотой (Данилова,
-»
5
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
1963).
Разделение фенольных соединенкй проводили на бумаге F№ - 3
(ГДР) в различных системах растворителей, в одном или двух напра влениях. Для идентификации веществ использовали УФ, УЙ+ЯНз» *ag^3
(102), »aOH(I№), FeCI 3 (I2), сульфаниловуп кислоту, А 1 С 1 3 ( Ш . Количественное содержание о-дифенолов определяли по методу Дукера и
Аренса &uckntttkun4 ,IS58), лейкоантоцианидины - по *5«/в«п, И,£&*
(1959). Фдавоноиды окрашивали t% AlCIg и определяли спектрофотометрически.
Выделение А Ш - методом газожидкостной хроматографии (Кислин*
Кефели,1981). Количество АБК - методом абсолютной калибровки (Столяров и др.,1978).
Фитогормоны выделяли комплексным методом (Власов и др.,1979)о
последующим биотестированием: ауксинов (Кефели и др.,1973), гиббвреллинов {FtankSanc/, Mfexw^, I960), цитокининов (Мазин и др., 1976).Калибровочные кривые строили с использованием метчиков: гибберелловой
кисло'ты (ГАд) "Мицубиси кайев сёке", зеатина " 4«*>*» И*,ИУК " /ПехА "
Опыты проводились в 2хкратной биологической и в Зхкратной химической повторностях. Данные обрабатывались статистически (Лакин ,
1990). В таблицах приведены средние арифметические значения со стандартными ошибками. Вероятность безошибочного прогноза данных, оце пенная по критерию Стыодента, была не ниже 0,95 .
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
I. Водный обмен и ультраструктурные изменения покровов
семян в процессе набухания клубочков сахарной свеклы
Согласно определениям, в клубочках сахарной свеклы РамонскалОЭ»
односемянная на доли околоплодника приходится 61 % , крышечки - IK,
семени - 28 % от общей массы клубочка. Б целых воздушно - сухих
б
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
г; клубочках, содержится 8,2& воды, •в крышечке - 7,1$, в околоплоднике
*. 7,6$ и в семени - I0-,6f£ воды к исходной массе»^
. • Динамика поступления воды определялясь как для. целого клубочка, так и для его частей. При этом учитывалась скорость' поступления воды за каждый последующий интервал времени в мг/г исходной Массы в час и количество поступившей*воды в % к исходной воздушносухой массе. В первые 3 ч набухания вода в целый клубочек(рисЛ) •
поступает с высокой скоростью( 146 мг/г чае ), Количество воды к.',
этому времени возрастает до 43,7? (табл.1). ' : ' . '
. . :'
'. •
' • • • ' > ' • • ' . ; . ; . ' • . •
'
•'
' • • . • ' -
Т а б л и ц а
',•'•' ;•.'."•' . •'; • П о с т у п л е н и е в о д ы в к л у б о ч е к с а х а р н о й
; .;",• .
I
••-'•.
-\\
_.'
••".-••
'. свёклы и. его части при. набухании. ; •.• ' . ... •. -
••'.... ! : . •„
.
••"' '•
количество" в о д ы
время набуха-: !___
£% к исх. РОЗД^ C V X . массе^
НИЯ /„\
'•
~~ " ~~
~
--__у'.клубочек .
околоплодник ' / • семя
••• -
•
з '••
6
-
•
:
.-
12 , '-:
• 1 8 V'•-.:•"
=-.24'••.•.:
.
4
8
,-.•;•
-.•..•
•••:•;",
:•
.
;
.-•
•
7
v
6
О
-: 103 6.
•'.-•
109,7
•-.
.*;
•'-*-•
4 3 , 7
63|4 •
•
'
.
-
1
:
-
5 0 . G
* --5Q3 ' -
• • " :.\ Q9,0
.
• •'.- Ю Э 6
•-. .:• •
107,9.
137,7-
•
'
: ••
•
..
'12
18
25
31 .
42 .'.
48-
•
Далее-скорость поступления. воды ритмически изменяется. В пе риодб - 12 ч скорость поступления.; водырезко падает, затем к 18ч
' возрастети к 24 ч - снова падает.. Скорость поступления ?оды'в око
лоплодник (рис.2) в первые часы несколько выше, чем в целый клубочек ( 168,5 мг/г час против 145 ) . Так же , как и в целом для
клубочка, скорость поступления воды в околпйлодних через 6 ч сни
жается и становится равной скорости поступления воды в целый клубочек. В последующие временные ' интервалы ( 12 и 18 ч ) скорость поступления растет и к 18 ч околоплодник в основном на-
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
сыщается водой. В этом случае изменению скорости поступления воды
присуща ритмичность. К 24 ч в клубочек продолжает поступать вода .
Важнейшим отапом, приводящим к началу прорастания, является овод ненность самого семени. В первые 3 ч скорость поступления воды в
семя значительно меньше, чем в околоплодник - 39,8 мг/г час против
168,5 (рис.3). Это связано с тем, что в этот интервал времени ( Зч)
околоплодник набухает и с большей силой удерживает воду. Л 6 ч скорость поступления воды в семя снижается лишь в 2 раза, в то время,
как в околоплодник - почти в 5 раз. Таким образом, околоплодник отдает часть воды семени. В последующие временные интервалы (6-12 ч)
скорость поступления воды в семя снижается, но количество воды продолжает расти как в семени, так и в околоплоднике. К 18 ч отмечается повышение скорости поступления воды, она продолжает расти и к 24ч.
Роль околоплодника подтверждается тем, что в изолированное семя (рис.4) поступление воды идёт с очень высокой скоростью (136 ыг/
г час против 39,$)., в нем раньше достигается уровень оводненности ,
необходимый для прорастания, оно раньше прорастает. Таким образом,
УЛ первых этапа:: поступления воды околоплодник является резервуаром,
снабжающим водой семя.
Наряду с околоплодником, барьерами на пути поступающей к зародышу воде служат семенные покровы. Вместе с тем, по мере набухания
клубочка в семенной кожуре, клетках эпидермиса и перисперма праисходят значительные изменения, которые в свою очередь влияют на скорость поступления воды. Как показано нами, семенная кожура имеет трехслойное строение. Наружный слой, покрытый кутикулой, заполнен веществами фенольной природы (флобафенами), вследствие чего его содержи мое не просматривалось в электронном микроскопе. На снимках хорошо
видно наличие в этом слое протуберанцев, субериновых ламелл.Внутрен»
В
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
i
3
I
ов'
IOC
о
о
К
Л
О
О
|
20
V б 12. 18 24--.\
Рис.I.Скорость поступления воды в .
клубочек сахарной
свёклы.
6
Г
12 18 24 "".•/ ,6
12 18 24
3 9 15 24
' - ':
.
время набухания (ч)
Рис.2.Скорость по- Рис.3.Скорость по- . Рис.4,Скорость поступ-.
ступления воды в •• ступления вомл в '*• ления воды в семя.наоколоплодник сахар- семя сахарной свек- бухавшее вне околоплодной свёклы.•'. ,
лы. • .
:•
ника.
.
•/
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
ний слой состоит из сжатых к.«ток и не имеет кутикула со стороны
зародыша. Семенная кожура покрывает все семь снаружи. Перисперм ,
клетки которого заполнены крахмальными зернами, располагается между слоями семенной кожуры, таким образом, что от околоплодника его
отдаляют наружный и. промежуточный слои, а от зародыша - лишь внутренний. Отсутствие внутреннего слоя семенной кожуры напротив перисперма может способствовать более быстрому поступлению воды именно
в перисперм. Обилие крахмала в перисперме может играть Вслснуп роль
при поступлении воды. Таким образом, перисперм, как и околоплодник,
является резервуаром воды. К 24 ч набухания в наружном электронно плотном слое появляются трещины, направленные перпендикулярно поверхности семени. Вода, проникая между микрофибриллами, делает клеточные стенки более рыхлыми, их электронная плотность снижается.Изменения в семенной кожуре в процессе набухания, лизис крахмальных зерен в перисперме способствуют поступлению воды. В клетках эпидермиса сферосомы округляются и уже не представляют сплошного липидного
слоя, как -в сухих семенах.
.
В период от 24 до 48 ч содержание воды продолжает несколько
возрастать, однако скорость её поступления во все части клубочка резко падает. Поступление воды в данный период обусловлено главным образом осмотическими силами (матричный потенциал падает до минимума).
Это подтверждается тем,что, как показали электронномикроекопичес кке снимки, в клетках перисперма резко возрастает число лизирован ных крахмальных зерен со стороны внутреннего слоя семенной кожуры ,
некоторые из них выглядят как бы изъеденными с одной стороны. В этот
срок площадь сечения клеток эпидермиса увеличивается^ Кутикула на
их поверхности имеет более низкую электронную плотность, чем после
24 ч набухания, что может быть обусловлено изменением ее химическо10
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
• го состава; Таким образом, в результате всех/изменений проницаемо- .
• сть'для;воды повышается. Достигается уровень оводненности, необходимый для наклёвывания. Именно в это,время (48ч) было отмечено на/клёвывание клубочков. Показано, что наклёвывание как изолированно-:
го семени, так и семени, набухающем в околоплоднике, начинается
. при одмом и том'же количестве воды. ;
-.
' •. •. '
:
2, Характеристика биологически активных веществ • ,'
'
:
'
клубочков.сахарной свёклы. . • . • '.
.
" • •
•:. 2 Л . Влияние вымывания веществ из клубочков на ;•..-••'.
, • .. '
процессы их прорастания. ,.' . .
.-. - •. В околоплоднике сахарной свёклы локализованы вещества,которые!
• задерживают прорастание и которые при набухании постепенно вымываются". Увеличение времени приводит к возрастанию количества пророс~ ших клубочков.^Наибольшее положительное влияние оказало отмывание
клубочков в течение 9 ч {рис.5). Отмывание ингибиторов положитель-' но сказалось и наросте гипокотиля проростка (рис.б). Так,на 17 от ,
•посева день у проростков, выросших'иа отмытых клубочков, длина.гипокотиля -.3,6 см против длины 2,'&-2,8см у проростков.вцросших-из
неотмытых клубочков. Имеются данные, что замачивание в воде не только растворяет ингибирующие вещества* но и ускоряет их распад;
' (Исип,1939). Выдерживание клубочков в водных вытяжах вызывает торможение/прорастания; При проращивании клубочков сахарной свёклы в "
вытяжке девятичасовой ингибирование достигает наибольшей величины
(прорастает лишь 18% клубочков). В концентрированных вытяжках (24ч)
клубочки если и прораснают, то у них не развивается корневая систе, ма,(рис.7). Тормозящее влияние вытяжек, полученных в результате на> мачивания клубочков сахарной свеклы, ^проявилось .и на прорастании семян кресс-салата Стабл:2); И в этом случае наибслмаее торможение отмечалрсь'••'-9 ч вытяжке. СледсЛательно, ыожио считать,что 9 ч доо - .
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
70
§
t 30
2
4
6
8
I0
вымывшие ( )
Рис.5.Влияние вымывания веществ из околоплодника, Ч
на прорастание клубочков сахарной свеклы.
4,6
ОПЫТ
к
о
контроль
|з,о
дни от посева
Рис.6.Влияние отмывания ингибиторов из клубочков
сахарной свёклы на рост гипокотиля проростков.
Й 40
S 20
1
время вымывания(ч)
Рис.7.Влияние водных вытяжек разного срока вымывания
на прорастание клубочков сахарной свеклы.
12
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
таточно для вымывания веществ ингибиторного типа.
Таблица 2
Влияние вытяжки веществ из клубочков сахарной
свеклы на прорастание семян кресс-салата
вариант опыта
контроль
время вымывания
9 Ч
24 ч
48 ч
1
~
~~~~
к
35,0^0,50
о.ЗохО.02
3;33?001
гипокотиля
24,0±0,28
_
О, UrU,<du
50j0jl8
Полученные данные указывает на то, что в околотлоднике сахарной свёклы сосредоточены вещества ингибиторного действия, обуслав ливающие так называемый "химический" покой (Сйяе.,1977). •
2.2. Содержание неорганических ионов в клубочках сахарной, свёклы и их изменение в процессе прорастания.
Согласно литературным данным {hAlmki. ,1934), неорганические
ионы могут быть ингибиторами прорастания клубочков. О сумме ионов
переходящих в водную вытяжку, судили по изменению электропровод /
кости. Уже за первые 2 ч вымывается определённое количество ионов .
Вместе с тем, при повторном погружении клубочков вымывание ионов
продолжается. В этих же вытяжках определяли содержание К*.Наибольшее количество К + вымывается также в первые часы (табл.3).
Определение распределения К* показало, что ионы концентриру ются в основном в околоплоднике (рабл.4). При набухании количество К + в околоплоднике снижается, тогда как в семени не изменяется.
Таким образом, К не только концентрируется в околоплоднике,но и
вымывается из него на начальных этапах прорастания.Что косвенно может оказывать положительное влияние на прорастание. О роли К*,как
ингибиторов прорастания,говорится и а литературе( foiBa-ak*. ,1988 ) .
13
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
-""•.; • " - • " • '
'.
.".••' •• '..
Таблица.3
.
Электропроводность водных вытяжек .из околоплод- .-'
ника сахарной свёклы и содержание в них К :
время вымы- . 1
вания (ч)
I- ", , Т
•• I
I
I '
;
^ 2 - , 4 { Э4 .- j 48 ] 64, j II2 j. 184
Электропро-:
Ввода
ОДНОСТЬ
т
• '
,-••'•'.
мсм см" 1 6,72 ' 8,48 13,4 1,08 0,74 0,42.•" 0,31
К+<
мг/г , 3,14 ' 1,25 0,64 0,60
• " . ' • ' • '
•
г-
' .-,
Таблица 4 ^
*;•
Изменение содержания ионов в вестях клзгбочка
сахарной свёклы в процессе набухания
. . . •-:,.
вариант
опыта .,сухиее
•;
д
ч
набухания'
дГч
набухания'
24ч набухания48ч набухания
;
''
. . .
I2,4I0i0,050
I2,4I00,050 "
'
510|0,060
••
.
886 330±0
510|0060
•
008
5 950±0 050
. '
б,180£0,008
б,180£0,008
260|0 007
007
666 230±0
260|0
001
6 230±0!001
2 . 3 . Содержание биологически активных веществ и их'
1
.
• изменение в процессе прорастелия.
•' ; 2 . 3 . 1 . Фенольные соединения. •
, :
'
. .
,
Наряду с неорганическими ионами, на'прорастание могут оказывать влияние и органические соединения, в частности, фенолы. Среди
которых имеются вещества, ингибирующие рост: салициловая.оксибен зойнея, феруловая, п-кумаровая кислоты (Плотникова и др.,1967).тормозящее влияние оказывают также полифенэлы.(^банова,1964) и фла вснолы (Новотельное,Вков,1957).Хроматографическое разделение вещестз и их качественнел идентификация показали,что в сухих клубочках
(рис.8) содержатся кверцетин ( I ) , кис.лоты:хлорогвновая(2) .гентизиновая(3),оксибензойная(4), п-кумаровая цис,-транс(5,5»), феруло -
-•
14 -
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
вая цис,-транс(6,6'), салициловая(7). Наряду с веществами, наличие
которых было показано ранее, нами дополнительно выделены:хлороге новая, гентизиновая кислоты; цианидин. Из флавоиоидов при набуха нии клубочков вместо цианидина обнаружен цианин(рис.9а,б).Количественный анализ показал (табл.5), что при. набухании клубочков в те чение 48ч происходит снижение содержания о-дифенолов(в основном,
хлорогеновой кислоты, почти в 2 раза) и фдавоноидов. Содежание окрашенных форм - флавонолов(рутнна,кверцетина) и бесцветных соединений - флавононов снижается в равной степени. Наибольшее падение отмечается в содержании лейкоантоцианидинов(в 2,8раза).Уменьшение
этих соединений в процессе набухания может способствовать прорастании.
Таблица 5
Содержание ^енольных соединений в клубочках
сахарной С Е З К Л Ы
г сырой массы)
( М К Г / ? 0 0
сумма веществ
!
t
*
о-дифенолы
флавоноиды:
окрашенные
неокрашенные
лейкоантоцианидины
J22S22SL__
сухие
7400±2-,657
.
17162^0,596
16613±0 015
I60i0 001
|
на5ухшие
4200*1,429
2.3.2. Дбсцизовая кислота.
К веществам, накапливающимся в семенах и оказывающих влияние
на прорастание, относится и АБК. Методом ПОС было показано,что в
процессе набухания содернание абсцизовой кислоты не только не
уменьшается, а увеличивается с 6,7 до 8,2 нг/г . Сходные данные
имеются и в литературе (Петрова,1973;0бручева и др.,1985).Это еще
раз подтверждает, что роль абсцизовой кислоты многообразна.В част-
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
•
• •.
• -*сн3соон
(2%)-
•
• ..
•.
:
•
.
.
;•;
Рис.8.Схема хроматограммы веществ из клубочков сахарной
свеклы:
.
кверцетин(1);кислоты:хлорогеновая(2),гентизиновая(З),оксибензойная(4),п-кумаровал(5,Э) ,феруловач цис,транс(б,6') ,салициловая(7).
а)
; б)
3
5
Б
Г
Рис.9.Схемы хроматограмм веществ из сухих(а) и набухших(5)
..• клубочков сахарной с в ё к л ы : х л о р о г е н о в а я к и с л о т а ( 1 ) > ? . .
неидентифицированный флавоноид(2).салициловая кисло1
та(3),цианедий!;4).цигнин(5). ,. .
•
16
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
ности,этот фитогормон стимулирует новообразование белков( Кулаева
и др.,1964).
2.3.3. Стимуляторы гормональной природы.
В процессе прорастания клубочков сахарной овеьлы в них происходят изменения содержания и соотношзния гормонов.Особенно сильно
возрастает количество гиббереллинов(табл.6).По мнению Кана А.(1971)
гиббереллин необходим для прорастания и при его отсутствии семена
находятся в покое независимо от того,имеются или отсутствуют в них
ингибиторы.Цитокиншш инактивируют ингибиторы,обеспечивая прорастание.Поскольку в наших опытах отмечено вымывание ингибиторов,то незначительное снижение содержания цитокининов не оказывает влияния.
Почти полное исчезновение активности свободных ауксинов, возможно,
происходит за счет имеющихся в клубочках фенольных соединений,активирующих фермент,разрушающий ИУК.
Таблица б '
Содержание <$итогормонов в клубочках
сахарной свеклы
v -3 »
( л 10 мг/г сух.массы)
**"""
~ Г"г"йооерелл"ины ~~"~~ПцйтокТмййы'' *' ~Т~.~Т~Т~'^У^С^^СГ.~~Т ..
вариант| Э тил-ацетатная ! эфирная !бутанольная I эфирная
сухие
проросшие
0,033*0,0001
0,115-0,0003
O,4±0,005
0,3-0,007
0,lj0,040
0,1-0,003
0,030^0,0004
0,005^0,0002
3. Влияние ауксина на процессы набухания, прорастания
и дальнейшего роста сахарной свеклы.
Ауксин является одним из регуляторов поступления воды в растительные клетки(Якушкина,1947;1Ълевой, 1973) .Предварительные опыты показали,что обработка клубочков сахарной свеклы ИУК увеличивает поступление воды лишь через определенный промеяуток времени.В связи
с этим,в следующем опыте клубочки переносились на рстворр ауксина
посла наклёвывания.В этом случае поступление воды превышало конт 17
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
• > - * * •
-
*
•'••'•
'•
•
. ' : ' '
'
•
•
•
•
"
• .
. ' . ,
.
/
>
'
*
\
-
:
: : -
;ИУК
gio
a -- •
I
о
«I
&,;
•
•
'
•
'
•
•"
:
; ' : •
:
•
•
.
f
*
^
-
••
^
;
•
•
* '
'
I5
о
. 66
:-84'
;
.
•••'••
9 6
"
72
78
-'
,,
"Ьремя набухания(ч)
Рис.10.Влияние ауксина на пос^пление воды в клубочки'
сахарной свёклы после предварительного набухания
1
,
• V
В
В О Д в .
.•.•",•',
..
•
_
•••'•..
-
*
'
ИУК
о
О
к
13
15
17
19
21 дня от посева
.Рис.II.Влияние ауксина на рост гипокотиля пророс*ков '
с с а х а р н о й с в ё я л ы . , '••;
. , , '.,,;.*• '.;
. •; -..
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
роль(рис.10).Анализ кривых роста гипокотиля(рис.П) показывает у в е личение темпов роста у проростков,выросших из клубочков,обработанных ИУК - 6,2см против 4,4 .По длине гипокотиля в настоящее время
проводится сценка качества клубочков сахарной свёклы.как своеобразный n cTpecc-TecT"(£)urwuvffe-.I985) .Наряду с увеличением поступления
воды ауксин усиливает поглощение
ионов.Норни Юдневных проростков,
выросших из обработанных ауксином клубочков,поглощают ионов К*боль—
те.чем контрольныеС 1,256 мг/г сырой ыассы против 0,623).Мсшно п р е д - 1
положить,что ауксин оказывает влияние через повышение активности
К+М^А©азы(Полевой,Вахмис21ров, 1988).Обработка клубочков ИУК сказала
полотательное влияние на ростовые показатели,сырую и сухув иассу
листьев,массу корнеплода(табл.Т)..
Таблица 1
Влияние обработки клубочков ИУК на
ростовые показатели сюсарной свеклы
показатели
сырая~мас саТеухая~массаТ
листьев г {листьев
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Клубочки сахарной свеклы находятся в стабилизированной покое(£Ьиnuini, 1970). По мнению HSKOTOVUX исследователей это связано с црнсут« в и е м в них АЕК(Калинин,Горя, 1975) .Наши данные аоказали.что з т о явление имеет более сложный харсияер.Ингибирувщее влияние иогуг о к а зать неорганические ионы(К*") .разнообразные фенольные соединения.
Рель К + ,как ингибитора прорастан*ш,сбсуядыется в литературеС^^-^* 1 »
19е£).В клубочках обнаружены монсфенолы(оксибенэойная,п-ку м <- с '- ) 8ая;
феруловая кислоты).полифенолы и флавоноиды,многие из них-ингибитс19
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
ры прорастания. Важно также, что клубочки содержат определённое ко- ,
личество гиббереллинов и цитокининов. Роль цитокининов,по-видимому,
связана с блокированием ингибиторов(Кан, 1975),' Действие гибберелли- нов на прорастание связано-непосредственно ^"образованием- ферментов»
катализирующих. распад сложных органических соединений". Процесс водопоступления вклубочки можно разделить на'2 этапа. Г этап (24ч) ха-^.<
рактеризуется ритмическими колебаниями скорости поступления воды, • • ••
при непрерывном возрастании её содержания, увеличением интенсивности- дыхания. Изменения в клубочках сахарной свёклы на этом этапе, индуцированы поступлением воды. Хорошо проявляется.регулирующая роль
околоплодника. Ткани околоплодника удерживают воду до наступления
определённого уровня влажности семени. В первые Часы скорость поступления воды в околоплодник выше, по сравнению с семенем. Затем; ско-•••
рость поступления воды в околоплодник падает, тогда как в семя воз- .
растает. Количество воды в околоплоднике в этот.период достаточно- -'.!
для вымывания ингибиторов как органической, так и неорганической природа.' Содержание фенольных соединений и неорганических ионов, в част+
:
ности,К /падает. ..'...
•, ..,:' ..'
,
. • :.,
,. .Семенная кожура имеет трехслойное строение. Благодаря расслоению семенной кожуры, перисперм снаружи покрывается двумя слоями, а .
от зародыша его отделяет лишь внутренний слой.. Такое расположение '
периспермами обилие в нем крахмала,, способствуют депонированию воды."
Таким образом, наряду с околоплодником, перисперм сформировался как
приспособление к прорастанию клубочков свеклы при наличии достаточной влажности почвы. Через 24 ч набухания происходят значительные .'•
изменения семенной кожуры. В наружном слое появляются трещины.В про-'
межуточном и внутреннем слоях под действием амилазы происходит, раз-.
рушение клеточных стенок. В клетках перисперма отмечается начало лизиса крахмала. В клетках эпидермиса сферосомы отдаляются от:плазма-^-
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
леммы и ужа не образуют сплошного липидного слоя. В этот период поглощение воды идзт не только за счет матричных, но и за счет осмо тических сил.
На 2 этапе (24-48ч) поступление воды продолжается с меньшей скоростью. Интенсивность дыхания, выход ионов, в том числе и К* .стабилизируется. В клетках перисперма происходит дальнейший лизис крахмала. Крахмальные зерна выглядят как бы изъеденными, осмотическая концентрация возрастает. Уменьшается размер белковых тел. Клетки эпи - *
дермиса переходят к растяжению.
Исследования показали, что. под влиянием обработки клубочков ИУК
наблюдается усиление поступления воды в период проклэвызания.Проростки, выросшие из клубочков, обработанных ИУК, характеризуются усилением поглощения калия, более интенсивным протеканием ростовых процессов. Увеличивается размер листовой поверхности, масса корнеплода.
вывода
I. Поступление воды в клубочки сахарной свеклыСдо каклёвывакия)
включает 2 этапас первые 24ч содержание воды непрерывно возрастает.
Оводнекность семени достигает уровня, при котором начинается растя хение клеток зародыша. В последующие 24ч вода поступает с малой скоростью а основном за счет осмотических сил. В этот период отмечается наклёвЫвание семян. Интенсивность дыхания на I этапе возрастает,
в дальнейшем несколько снижается.
2.Вода различными частями клубочка сахарной свеклы поглощается
неравномерно. В первые часы ~корость*поступлечия воды значительно выше з околоплодник, в котором и сосредотачивается большая вз часть.
Околоплодник выполняет роль резервуара воды. В последующем ускоряется поступление воды а семя.
3. Использование световой и электронной микроскопии позволило
21
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
выявить ряд особенностей в строении семенной кожуры й е§ роли в по- '..
ступлении" воды:
•••-•.••
•• . . •'. • ''-:"".,•'••'•' ' :;.;..' ;': ''•'.''-•'..--'.' - V ;
'"
а) семенная кожура имеет трехслойное строение. Наружный слой по- .
крыт кутикулой, состоит из клеток, заполненных электронноплотным ма- •/;
териалом, оболочки которых имеют протуберанцы. Промежуточный-из 2' '-'
компонентов: основного гомогенного вещества средней плотности и на-. '
, ходящихся в нем тончайших, рыхлосвяэанных микрофибрилл. ВнутренниЙиз разрушенных клеток, сильно сжатых. В области перисперма семенная. ~,
кожура расслаивается. Снаружи перисперм покрыт.лишь двумя слоями(на--,
, ружным и промежуточным), что в дальнейшем способствует накоплению в '
н е м
в о д ы ;
.
, : -,-"•:':'':
'
;
<'-:-_
-•.
'/;
::
-:''-"
• " , " ;'' •;:.' ; : :
'. •'';.',:'
б)в процессе набухания на I этапе в наружном слое семенной.ко.журы появляются трещины, происходит разрушение клеточных стенок промежуточного и внутреннего слоев. В клетках эпидермиса сферосомы ок- •
рутляются и отдаляются от плазмалеммы. Гиалоплазма просветляется.В •' •,
клетках перисперма отмечается начало лизиса крахмала; Растворение
крахмала и клеточных стенок внутреннего слоя семенной кожуры увели1-, '
чивает осмотическую концентрацию и способствует поступлению воды;:-'
- в) на 2 этапе водопоступления (48ч)' в перисперме происходит "да-,
льнейшнй лизис крахмала. В клетках.эпидермиса хорошо видны митохонд-••
рии,-ядро, пластиды, эндоплазматический ретикулум. ; : , , .,* ' •
5. Клубочки сахарной свёклы характеризуются высокой активностью
•цитокининов, небольшой активностью гиббереллинов. На первых этапах •
набухания содержание АБК увеличивается. При прорастании активность ''.'•'
гиббереллинов резко возрастает;; а активность ци^кининов остается •" ;'
н а
т о м
ж
еу р о в н е !
-.-. '••'-.
^
... _••'•'
.
'::;-
•-;'
Г.*.
',' '"''•.'•'-, **•:.
6. Показано-наличие в клубочках .разнообразных фвнольных соединения. Среди них: монофенолы - ингибиторы прорастания(оксибензойная,
-
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
•".:' ферулав'ая,.'.п-кумаровая кислоты); полифеноли(хлорогеновая кислота)и
V.'фла!вонриды.. При набухании количество поляфенолов-и с[лаБрноидов уме•- н'ыпается. Полимерные формы(лей:соантоцианкдины) превращаются в более
' \ п р о с т ы е ( ц и а н и н ы ) .
;
'•;'." ; | > ; ^ .
\
' . • • : . . • •••••••;
' . ' ' . < • '.
'"•''•-.
:
-
-'-
' ••; '•.'"."/7. В околоплоднике .содержится ряд веществ, ингибирующих прорас+
тание($енольныэ соединения,неорганические ионы.в частности,К )^ЕЫ~ ,
..':. |ыыван:1е'крторьк происходит в, основном в первые 24ч.намачивания»чтр
•'
.-•
' ; увеличивает скорость поступления'воды в клубочки и дальнейашЯ рост "'
• . ' , . . п р о р о с т к о в . '
;
^ ' ' '
;
• •
:
.^•:'••-'
-
V - •••V-
' " • • ' : • , • ':'• \ \ \ '
'..'•"-.'•'-•
'";
'•:'• '-.'•• ••.•'.• •
\:\у..•..";:8...Обработка }Щ увеличивает'поступление воды в конце набуха -..
\ . ния и прорастания клубочков, растяжение клеток осевой части зароды>.iaai/поступление ионов-К^:в проростки. Растения, выросшие из обрабо— .
.';-•' v 'I-Кулакова,- И.А.',СаввинаИ.И.,ДавВДчук H.BJ. Влияние предпосевной
<-'обработки сахарной свёклы ауксином на модификационнуя изменчивость
"^количественных признаков/Вопроси регуляции ростовых процессов у рас-v
Л ; т е н и й / / 1 , 1 е г в у з . с б . н а у ч , т р . Ы . : М 0 П И , 1 9 8 8 . С . 9 г г 1 3 . - ; •.•..;•;
•.• •• *
.
-v ', '\ш- •• ' 2".Кулакова11.А.,Давидчук- Н.В., СередоваГ. Влияние предпосевной
*•' ' Т':\ : ' З.Давидчук Н.В..Изменения содержания фитогормонов на разных эта• ,;.. пах прорастания семян/Рост • растений к его гормональная регуляция/Д^еж
•;--ву^са;^чтрЛ1:Шга11989:С8О82
••
•
; ;
:
• : -'-. : 4.Давидчук Н..В.г:КулаковаИ. А. ;СередоваГ.- Метаболический конт;"•••; роль прорастания семкн сахарной свёклы/Регуляция роста растения// •:
:.:' .Йеявуз;сб.науч-.тр.М.:1'0ПИ,1990.СЛЗ-18.
.
• .."
• •
'
•••
•
', .-•'.; 5. Да вид чу к Н. В.-, Парамонова Н.В. Ультраструктура сеыеннсй обо* • лочки(СО)-и клеток эпидермиса(КЭ) сухих и набухаих семян сахарнсЯ
. свёклы/Электронная микроскопия и-современная технология//Сб.тез.1У
., • Республиканской. конф.по.электронной"1:икроскопии.Кизинев,1990.С.53.
ч -V1 :.'" б.ДавидчукН.В., РунковаЛ.В. Шыенение органическгос соединений .
•..• .в.процессе-прорастания соплодия .сахарной свёклы/Рост растений.Пути
, •. регуляции//Ыеавуз.сб,,науч.тр.;.1.-.110111^,1991.0.20^22.
•
. ••
V•
' •' • •' • •' 7.Давидчук Н.В., ПарамоковаН.В. Об.особенностях ультрастт>укту:.ры.наружных покровов семян; в процессе набухания//1&тстопшЛ991.!;&..
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
Объем l'/г п л
Заказ 523
Тираж 100
Типография Московской с х академии им К А Тимирязева
127550, Москва И-550, Тимирязевская ул, 44
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
Бесплатно
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
2
Размер файла
1 178 Кб
Теги
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа