close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

47

код для вставкиСкачать
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
A-3YYW
ВСЕРОССИЙСКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ
ИНСТИТУТ ЖИВОТНОВОДСТВА
(ВИЖ)
На правах рукописи
Гавриков Александр Михайлович
л
"ТЕХНОЛОГИЯ ТРАНСПЛАНТАЦИИ ЭМБРИОНОВ В МЯСНОМ
СКОТОВОДСТВЕ
0 3 . 0 0 . 1 3 . - Физиология человека и животных
f- '
|
!
А В Т О Р Е Ф Е Р А Т
диссертации на соискание ученой степени
доктора биологических наук
п. Дубровицы Московской области
1995
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
Работа выполнена во Всероссийском научно-исследовательском инсти­
туте животноводства (ВИЖ).
Научный консультант: зав.отделом трансплантации эмбрионов сель­
скохозяйственных животных ВВДа. доктор биологических наук, профессор
Н.И.Сергеев.
Официальные оппоненты:
1. Доктор биологических наук, профессор Ю.Д.Клинский
2. Доктор биологических каук, профессор А.Н.Успенский
3. Доктор биологических наук СВ.Советкин
Ведущее' учреждение:
Всероссийский научно-исследовательский институт племенного дела.
Защита состоится
_1995г. в
" IV
часов
на заседании специализированного совета Д.020.16.02 при Всероссийском
научно-исследовательском институте животноводства.
.
Адрес института: 142012. •Московская область. Подольский район,
пос. Дубровины.
•
_
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института.
Автореферат разослан ".
Ученый секретарь специализированного совета,
доктор биологических,наук '
.1995 г.
П.А.Науменко.
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
- 3 -
1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.
1.1.Актуальность проблемы. Первостепенной задачей современного
ЗСИБОТКОВОдетва является обеспечение народонаселения страни продуктами
питания. Решение проблемы увеличения производства мяса возможно путем
эффективного использования репродуктивного потенциала животных, спо­
собных интенсивно увеличивать массу тела с высоким коэффициентом
трансформации корма в мясную продукцию.
Существенное значение в интенсификации воспроизводства крупного
рогатого скота и повышения его продуктивности приобретает биотехнологический метод трансплантации эмбрионов. Данный метод является важным
фактором ускорения процесса качественного улучшения популяции сельско­
хозяйственных животных, обеспечивает более полное использование гене­
тических ресурсов маточного поголовья. Применение трансплантации эмб­
рионов направлено на ускорение селекции крупного рогатого скота при
создании высокопродуктивных стад, быстрое и широкое распространение
редких и исчезающих пород, ускоренное создание выдающихся семейств ко­
ров-рекордисток в целях использования их как матерей будущих быков ро­
доначальников линий. Более 6055 быков-производителей, используемых для
искусственного осеменения в странах Северной Америки и Европы, получе­
ны методом трансплантации и доля их продолжает увеличиваться (H.Camp л
др. 1988).
Практическое применение метода трансплантации эмбрионов в мяенгк
скотоводстве основывается на получении быков-производителей от выд^:-:щихся матерей, ускоренной проверке быков по качеству потомства, для
увеличения числа двойневости за счет пересадки или подсадки эмбрионов
ранее осемененным коровам или телкам(G.Anderson и др. 1982; D.Williams
1985: R.Huhn 1990: J.Sreenan 1989). Программы трансплантации эмбрионов
в мясном скотоводстве имеют свои особенности, связанные с физиологи­
ческими особенностями животных мясных пород и спецификой технологии их
содержания. При вызывании полиовуляции трудно получить полноценную ре­
акцию на экзогенные гонадотропины у животных в период сезонного или
лактационного анэструса. У коров с телятами на подсосе даже при доста­
точно высокой реакции полиовуляции оплодотворяемость яйцеклеток при
осеменении в индуцированную охоту-сущесгвенно понижена (W.H111 и др.
1976: Е.Сопуеуидр. ^98?* ^ ^ I ^ l & Q ) ^ |
Другим фактором. |т^есно^^заш1ым1^,7ехнрлогией мясного скотоводе-
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
- 4 тва. является резко выраженная сезонность размножения. В странах За­
падной Европы при отгонном пастбищном содержании и естественном осеме­
нении коров до 8055 отелов проходят в марте, апреле и мае (J.Eldon и
др. 1988). С сезоном отела связана и продолжительность послеотельного
анэструса (W.H111 и др.1976, Е.Convey и др. 1933). Интервал от отела
до первой охоты у коров мясных пород колеблется от 46 до 168 дней.
Величина индуцированной полиовуляции у животных разных пород раз­
лична и зависит от их генетически обусловленной плодовитости и особен­
ностями гормонального статуса. Число эмбриониь, поручаемых от отдель­
ных доноров даже в пределах одной -породы зависит от индивидуальных
особенностей их эндокринного статуса, а также типа нервной деятельнос­
ти (A.Sluda 1981; P.Renbock и др. 1986; А.Свитаюс 1991;).
Из анализа мировой научной литературы установлено, что в настоя­
щее время имеются реальные предпосылки более эффективно использовать
ценный генетический материал маточного поголовья мясного скота с по­
мощью метода трансплантации, увеличить выход телят на 30-50%, а эконо­
мическую эффективность стада на 25-30%.
В тоже время.ряд вопросов, связанных с технологией трансплантации
эмбрионов мясных пород до последующего времени, остаются нерешенными и
требуют технической доработки, а также научного обоснования исследова­
ний в новых направлениях. Необходимо разработать новые эффективные ме­
тоды отбора и подготовки доноров к полиовуляции, прогнозирования и вы­
зывания множественной овуляции с помощью надежных гонадотропинов, низ­
котемпературного криоконсервирования зародышей, нехирургического изв­
лечения к пересадки эмбрионов с помощью более совершенных приборов. <
формы организации работ по трансплантации эмбрионов в условиях стойло- •,,
во-пастбищного и отгонно-пастбищного содержания мясного скота, прием­
лемых для различных регионов страны.
Дальнейшее совершенствование метода трансплантации с использова­
нием современных достижений генетики, эмбриологии и эндокринологии,
обеспечивают перспективность разработки современной технологии транс­
плантации эмбрионов мясного скота.
"
1.2. Целью исследований являлась разработка эффективной техноло­
гии трансплантации эмбрионов мясного скота для регионов России и Ка­
захстана G определенными традициями разведения животных мясного нап­
равления.
Для реализации поставленной цели ставились следующие задачи:
- изучить влияние особенностей физиологии.воспроизведения и тех­
нологии содержания крупного рогатого скота мясных пород на результаты
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
- 5 трансплантации эмбрионов;
i - усовершенствовать существующие и разработать новые методы отбо­
ра доноров, синхронизации охоты и индуцирования полиовуляции у коров и
телок с помощью гонадотропинов. Изучить влияние экзогенных и эндоген­
ных факторов на результаты полиовуляции, оплодотворяемость яйцеклеток
и качество эмбрионов. Определить оптимальные технологические параметры
осеменения коров и телок доноров при полиовуляции;
- усовершенствовать методы нехирургического извлечения и переса­
док эмбрионов у коров и телок, сконструировать специальные приборы и
приспособления для,этих целей. Разработать способы получения двойневой
стельности у животных методом трансплантации эмбрионов;
- усовершенствовать технологию глубокого замораживания, длитель­
ного хранения и оттаивания эмбрионов в условиях животноводческих ферм:
- разработать технологические параметры проведения работ по
трансплантации эмбрионов мясных пород при стойлово-пастбишном и отгонно-пастбищном содержании животных.
1.3. Научная новизна. Разработана технология трансплантации эмб­
рионов мясного скота отечественных и зарубежных пород для регионов
России и Казахстана.
Изучены физиологические и технологические особенности воспроизве­
дения крупного рогатого скота мясных пород. Усовершенствованы сущест­
вующие и разработаны новые методы отбора доноров и синхронизации охоты
и индуцирования полиовуляции с помощью экзогенных гонадотропинов. Изу­
чено влияние экзогенных и эндогенных факторов на результаты полиовуля­
ции. оплодотворяемость яйцеклеток и качество эмбрионов. Определены оп­
тимальные параметры технологии осеменения коров и телок-доноров .";:;•
полиовуляции. Сконструирован прибор для искусственного осеменения к;ров и телок (а. с. N 263078). Усовершенствованы методы нехирургического
извлечения и пересадок эмбрионов у коров и телок. Сконструирован спе­
циальный прибор (а. с. N 1762914) для нехирургического извлечения эмб­
рионов у мясных коров, телок и буйволиц. В целях усовершенствования
технологии поиска эмбрионов в промывной жидкости сконструирован специ­
альный фильтр (а. с. N 1655486). что позволило сократить время поиска
эмбрионов в 4 раза. Разработаны технологические параметры получения
двойневой стельности у коров и телок методом трансплантации эмбрионов.
Разработаны некоторые технологические режимы глубокого замораживания,
длительного хранения и оттаивания эмбрионов в условиях животноводчес­
ких ферм. Разработаны два варианта термосов-контейнеров для кратковре­
менного хранения (до 1 часа) и транспортировки приборов и пайетт с
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
_е эмбрионами к месту проведения пересадок. Научная новизна исследований
подтверждена тремя авторскими свидетельствами.
1.4. Практическая значимости работы. Разработанная технология
трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота мясных пород позволя­
ет эффективно использовать ценный генофонд маточного поголовья при
создании высокопродуктивных стад и семейств коров-рекордисток матерей
будущих быков-производителей родоначальников линий, увеличить выход
телят в 1.5 раза и экономическую эффективность мясного стада в целом.
Разработанные методы предварительного отбора доноров и гормональ­
ного вызывания полиовуляции обеспечивают' полиовуляторную реакцию у
76.535 коров и телок-доноров, получение эмбрионов у 80% животных при
числе овуляций от 6.0 до 8.0 и выходе 4 нормальных эмбрионов в среднем
на донора.
Разработанный катетер для нехирургического извлечения эмбрионов у
крупного рогатого скота мясных пород и буйволиц обеспечивает 98,9%
извлечения промывной среды от количества введенной и 96.1% зародышей
от числа овуляций.
Разработанное специальное Фильтрационное устройство
позволило
сократить непроизводительные затраты времени по обнаружению зародышей
з промывной жидкости в четыре раза и обеспечивает 96.1% извлечений от
числа овуляций.
Разработанные методические и технологические условия проведения
пересадки двух эмбрионов или подсадки эмбриона ранее осемененным реци­
пиентам позволяют увеличить число двойневых отелов до 75.0% и средний
выход телят на 50%.
Разработанные технологические режимы глубокого замораживания и
оттаивания эмбрионов обеспечивают эффективное использование метода
трансплантации эмбрионов в условиях животноводческих ферм и отдаленных
районов пастбищного содержания животных.
По результатам научных исследований разработаны и опубликованы
четыре рекомендации для практического использования в мясном ското­
водстве:
1. Методические указания за трансплантация на ембриони при месодайни породи говеда. Троян. НРБ. 1990. Одобрены сельскостопанской Ака­
демией НРБ.
'
2. Методические рекомендации по трансплантации эмбрионов мясного
скота. Дубродицы. 1990г. Одобрены ученым Советом ВИЖа.
3. Методические рекомендации по отбору, фдготовке к суперовуля­
ции и осеменения коров мясных пород. Дубровицы. 1993. Одобрены ученым
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
- 7Советом ВИЖа.
-** 4. Технология трансплантация эмбрионов в мясном скотоводстве (Ре­
комендации). Москва. 1994г. Одобрены секцией по животноводству науч­
но-технического Совета при Главке животноводства министерства сельско­
го хозяйства России (протокол I 23 от 02.12.1993 г.).
.
1.5. Адробапия работы. Материалы диссертации доложены я обсуждеви
на конференциях, симпозиумах, ученых советах и производственных сове­
щаниях специалистов сельскохозяйственных предприятий:
- международный симпозиум "Радиоиммунологическая диагностика реп­
родуктивных процессов в скотоводстве" г. Разград. Болгария 1989г;
- пленарное совещание четвертой интернациональной школы криобио­
логии и лиофилизации г. Боровец Болгария 1989;
- научно-практическая конференция "Интенсификация технологии мяс­
ного скота и производства говядины" г. Элиста КНИИМС 1991 г;
- научно-практическая конференция "Технология производства говя­
дины в мясном скотоводстве" г. Оренбург ВНИИМС 1992г;
- научно-практическая конференция "Совершенствование методов се­
лекции и повышения продуктивности мясного скота" г.Оренбург. 1993г;
- региональная научно-практическая конференция ученых и специа­
листов животноводства г.Оренбург. 1994т;
- научно-технический Совет Министерства сельского хозяйства и
продовольствия Российской Федерации (протоке. N 23 от 2.12.93 г.).
1.В. Реализация результатов исследований.
-
Реализация научных исследований по разработке технологии транс­
плантации эмбрионов мясных пород осуществляется в ГПЗ "Чапаевский"
Уральской области Казахстана. "Парижская Коммуна" и "Красный Октябрь"
Волгоградской области.. опытных хозяйствах ВНИИ мясного* скотоводства
(г.Оренбург). Калмыцкого НИИ мясного скотоводства" (г.Элиста), институ­
та горного животноводства и земледелия (г.Троян Болгария) и подсобного
хозяйства "Маяк" Пермской области.
1.7. По материалам диссертации опубликовано 59 научных работ. 3
авторских свидетельства на изобретения.
1.8. Основные положения диссертация, выносимые на защиту: реэультаты научных исследований, позволившие разработать-технологию транс­
плантации эмбрионов мясного скота для регионов России и Казахстана.
1.9. Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 353
страницах машинописного текста, содержит 66 таблиц. * 21 рисунок. 17
приложений, состоит из введения, обзора литературы, результатов собс­
твенных исследований, обсуждения, выводов и практических предложений.
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
- 8 Список литературы включает 308 источников, из них 210 иностранных.
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.
2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ.
Работа выполнена в 1983-1994 годах во Всероссийском научно-иссле­
довательском институте животноводства (ВИЖ). институте горного живот­
новодства и земледелия (г.Троян, Болгария), в ГПЗ "Чапаевский" Ураль­
ской области Казахстана. "Парижская Коммуна" и "Красный Октябрь" Вол­
гоградской области.
опытных хозяйствах ВНИИ мясного скотоводства
(г.Оренбург) и Калмыцкого ВНИИ мясного скотоводства (г.Элиста).
Научные исследования проводили на генетически ценном маточном по­
головье крупного рогатого скота шести мясных пород: симментальская,
герефорд. калмыцкая, салерс. абердино-ангусская и казахская белоголо­
вая.
Подопытные животные были в условиях отгонно-пастбищного и стойлово-пастбищного содержания, кормление их проводили по нормам и рационам
ВИЖа.
Е экспериментах по изучению физиологических и технологических
особенностей воспроизведения мясного скота было использовано 568 ко­
ров. в р^зрасте от 2.5 до 12 лет и телок случного возраста высокоцен­
ных в племенном отношении. При изучении сезонности половой циклики и
влияния сезона отела на протекание послеотельного периода ректальным
путем исследовали состояние матки, яичников и контролировали воспроиз­
водительные функции организма в целом. В послеотельный период опреде­
ляли среднюю продолжительность, сервис-период, стельность животного от
первого осеменения и индекс осеменения. Одновременно с этим изучали
степень влияния совместного содержания коров-матерей и телят на восп­
роизводительные функции самок по аналогичным показателям.
При различных вариантах содержания маточного поголовья (стойлово-пастбищное и отгонно-пастбищное) изучали полноценность уровня корм­
ления на воспроизводительные функции коров. Биохимические исследования
проб крови проводили в лабораториях ВНИИ мясного скотоводства. Калмыц­
кого НИИ мясного скотоводства и ВИЖа по общепринятым методикам. Гормо­
нальный фон у подопытных животных определяли в различные дни полового
цикла радиоиммунологическим методом в соответствующих лабораториях
ВНИИРГЖГ; и ВИЖа по утвержденным методикам.
При отработке критериев отбора доноров было использовано 459 ко­
ров и телок. Определение рН содержимого полости матки животных прово­
дили с помощью прибора рН-метра и высокочувствительного индикато*
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
_ а _
фОИЗБОлства фирмы "Whatman".
При разработке оптимальных схем синхронизации охоты и индуцировав
ш я полиовуляции было использовано 568 коров и телок.
Для синхронизации охоты у циклирующих животных использовали метод
.однократного или двукратного введения с интервалом 10-12 дней аналогов
фостагландина Fg-альфа: эстрофан (СПОФА). клопростенол (ИЕНАФАРМ),
эструмат.и суперфан отечественного производства в дозе 500 мкг по
ллопростенолу.
В анэстральный период.и при овариальной гипофункции использовали
Гестогены в' имплантатах. Имплантаты ("ИНТЕРВЕТ") с 3 мг норгестомета
вводили под кожу уха на 9-10 дней при одновременном внутримышечном
введении 5 мг эстрадиолвалерата. При удалении имплантатов дополнитель­
но вводили ГСЖК телкам - 500 И.Е., коровам - 600 И.Е.
При разработке различных схем индуцирования полиовуляции с по­
мощью экзогенных гонадотропинов.использовали препараты: ГСЖК (прегмагон "Дессау" в дозах 2000-2500 И.Е., фоллигон "Интервет" 3000-350С
И.Е.), ФСГ "Бернс-Байотик" 42-50 мг, фоллитропин "Каунас" в дозах
1100-1200 И.Е. Препараты вводили на 8-12 дни полового цикла. На пред­
последний 4 или 5-дневлой схеме обработки, животным вводили аналоги
простагландина F2-альфа в дозе 500 мкг по клопростенолу.
Искусственное осеменение коров и телок проводили свежеполученной
и замороженно-оттаянной спермой визо- и ректоцервикальным способами с
учетом одноразовой дозы спермы, места и кратности ее введения. Однора­
зовая доза спермы содержала 25, 50 и 75 млн. подвижных живчиков. При
естественном осеменении доноров применяли ручную случку быками, пред­
варительно проверив их спермопродукдаю.
В экспериментах по нехирургическому извлечению и пересадке эмбри­
онов было использовано 1023 коров и телок. При извлечении эмбрионов
применяли четыре типа катетеров производства фирм: "Кассу". "Нойштадт". ВИЖа и нашей разработки. Конструкцию устройств оценивали по
продолжительности технологических операций (подготовительный
цикл,
введение, извлечение прибора и заключительный цикл), процента извлека­
емой промывной жидкости и эмбрионов и удобства в работе.
Поиск эмбрионов в промывной жидкости проводили по общепринятой
методике и путем фильтрации через специальное устройство, разработан­
ное нами.
Оценку качества эмбрионов перед пересадкой или замораживанием
проводили по морфологическим признакам четырехбальной системы под мик­
роскопом "Wild" при 140-кратном увеличении. Было оценено более 1300
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
- 10 зародышей. Пересадку эмбрионов осуществляли нехирургическим способом с
помощью катетеров "Нойштадт-Айш", "Кассу" и конструкции ВИЖа.
В качестве реципиентов использовали коров и телок случного воз­
раста, регулярно циклирующих. с нормальным физиологическим развитием.
клинически здоровых и не имеющих племенной ценности. Эмбрионы переса­
живали на 7 или 8 день полового цикла, при наличии у реципиентов ак­
тивного желтого тела на одном из яичников. В экспериментах по получе­
нию* двойневых отелов пересадку двух эмбрионов проводили в один или оба
рога, подсадку одного эмбриона - в противоположный рог от желтого тела
беременности.
Замораживание эмбрионов проводили на программных замораживателях:
Р-204 (Англия). "Миникул" (Франция). ЗЭМ-3 (Харьков. Украина) и мето­
дом "витрификации" без применения криогенного оборудования. В качестве
криопротекторов использовали 1.0 М; 1.4 М растворы глицерина и 1.5 М
этиленгликоля. Насыщение эмбрионов криопротектором проводили по однос­
тупенчатой. трехступенчатой и четырехступенчатой схеме. Замораживание
эмбрионов с помощью программных устройств проводили в автоматическом
режиме: от +20°С до -7°С со скоростью 1°С в минуту, эквилибрация в те­
чение 2-3 ' минут, от -7° до -36°С со скоростью 0.3°С в минуту. 20-30
минут стабилизации при -36°С с последующим погружением и хранением в
жидком азоте. Замораживание эмбрионов по принципу "витрификации", пос­
ле плавного насыщения.их 5.6 М раствором глицерина или смесью криопро­
текторов, состоящим из 2,8 М глицерина и 2.8 М 1,2-пропандиола, прово­
дили в парах жидкого азота. Эмбрионы оттаивали в водяной бане при тем­
пературах +20° и +37°С. Эффективность режимов замораживания и оттаива­
ния оценивали по качеству оттаянных эмбрионов и их приживляемости пос­
ле пересадки.
Статистическую обработку экспериментальных данных проводили по
методике Меркуловой Е.К. (1970) с использованием компьютерной техники.
3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.
3.1.1.Физиологические и технологические особенности
'воспроизведения крупного рогатого скота мясных
• .пород.
' .. Были изуяены физиологические
особенности воспроизводительной
функции мясного скота отечественных и зарубежных пород регионов России
и Казахстана. ,;'
i-
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
- 11 Б результате проведенных исследований по изучению воспроизводи­
тельных функций у 321 коровы установлено, что ь зимнее время, особенно
в условиях отгонно-пастбищного содержания, только у 16,5% животных
проявлялись признаки спонтанной охоты и ректальный путем у большинства
из них (80,255) диагностировали атонию матки и гипофункцию яичников
(табл. 1 ) .
.• ^
Таблица 1
Состояние половой функции мясных ксров по сезонам года
Показатели (п-%)
Сезоны года
зима
91
Число коров
Проявили спонтанную охоту 15-16.5
Состояние матки:
73-30,2
атония
18-19.8
норма
увеличенная регидность
Средние размеры яичников (мм)
5x4
правый
4X2
левый
Средняя продолжительность
8,9±0.75
охоты (час)
весна
112
лето
осень
53
65
96-85.7
33-62,3 49-75.4
10- 8.9(
56-50.0..
46-41,1
2- 3.1
45-84.9 52-80,0
8-15.1 11-16.9
16x20
14x10
11.9Ю.4
15X10
12x8
15X11
12x9
10,6+0.61 10.840.51
В конце марта у животных наблюдали более стабильные признаки по­
ловой циклики и в мае они достигали максимума в своем проявлении. Вес­
ной число животных со спонтанной охотой достигало 85,1%. В летнее вре­
мя. особенно при высоких внешних температурах, половая активность жи­
вотных несколько подавлялась и число коров с признаками спонтанной
охоты снижалось до 62.355. Видимо, летом коровы с трудом поддерживают
нормальную температуру тела при термострессах, особенно при подсосе
телят, что сказывается отрицательно на воспроизводительных возможнос­
тях животных. В осенний период, при балансированном кормлении воспро­
изводительные функции животных нормализуются. Более 75% коров проявля­
ли признаки спонтанной охоты и у 8055 животных состояние матки и яични­
ков было нормальным.
В последующей серии опытов на 339 новотельных коровах установле­
но. что сезон отела существенным образом влкяет на поалеотельныи пери-
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
- 12 од и воспроизводительные функции животных в целом. При отеле коров ь
весенний период продолжительность анэстрального периода
достигала
99.0±3.03, а сервис-период 106+3.25 дней (табл.2). Если отелы проходя'
осенью, половая циклика коров восстанавливается через 37,411,53 дней и
сервис-период не превышает 48±1,9б дней. Стельность животных от перво­
го осеменения осенью достигала 68,755, а индекс осеменения равен
1,4+0.15.
Таблица 2
Влияние сезона отела на послеотельный период и
воспроизводительные функции коров.
Показатели
Отелилось коров (п)
Средняя продолжительность
послеотельного периода (да)
Сервис-период (да.)
Стельность от первого
осеменения (%)
Индекс осеменения
Сезоны отела
зима
весна
лето
96
116
62
79.8±2,4 99. 013.03 41,011,72
58.0+2.43
10613.25
9013,03
56.9+5.05 50.4+4,64
1,910.14
2,410.14
осень
37.411.53
48.011.96
54.016,33 68.715.75
1.610.16
1.410.15
Особенностью технологии разведения мясного скота является сов­
местное содержание коров-матерей и телят на подсосе.
Е.Convey и др.(1983) отмечают, что при совместном содержании ко­
ров и телят в значительной степени удлиняется послеотельный период.
В опытах по изучению влияния подсосного метода содержания телят с
матерями на воспроизводительные функции самок нами установлено, что
совместное содержание коров и телят задерживает инволюцию матки и тем
самым удлиняет сервис-период, а также в значительной мере снижает ре­
зультаты оплодотворения и повышает индекс осеменения. В* группе коров с
телятами на подсосе средняя продолжительность послеотельного периода и
сервис-период достигают 96.0+2.47 и Ю4.0±2.67 дней соответственно.
что в 1.5-2 раза больше, чем в группе коров без телят (табл.3). Стель­
ность от первого осеменения коров первой группы не превышает 43.955. а
индекс осеменения статистически выше (Р<0.001). чем в группе животных
без телят. По всей видимости причиной подобных! последствий являются
гормоны, выделяющиеся при сосании вымени, оказывающие ингибирующее
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
- 13 воздействие на секрецию гонадотропных гормонов, что приводит к сниже­
ние воспроизводительных функций организма животного в целой.
Таблица 3
Влияние совместного содержания коров-матерей и телят на
послеотельный период и воспроизводительные функции коров
Коровы
Показатели
с телятами
Число отелившихся коров (п)
Средняя продолжительность
лослеотельного периода (п)
Сервис-период (п)
Стельность от первого
осеменения (%)
Индекс осеменения
165
без телят
74
96,0±2,47
104,0+2,67
41,6±1,6
62.5±2,40
43.9
***
2,6±0.12
68,9
1.7±0.15
(***)-Р<0,001
3.1.2. Критерии отбора коров и телок доноров.
Путем целенаправленного отбора высокопродуктивных и генетически
ценных животных с хорошими воспроизводительными функциями, способных
реагировать полиовуляцией на введение экзогенных гонадотропннов и да­
вать необходимое количество биологически полноценных эмбрионов, воз­
можно в значительной степени повысить эффективность метода трансплан­
тации.
одним из первостепенных критериев отбора доноров является объек­
тивное определение их клинического состояния. Известно, что при раз­
личных формах эндометрита в очаге воспалигельного процесса нарушается
кровообращение и обмен веществ^ в силу чего появляются физико-химичес­
кие сдвиги, изменяется кислотно-щелочное равновесие." и повышается мест­
ный ацидоз. Учитывая этот фактор, мы применили метод определения рН
содержимого полости матки как один из критериев отбора доноров и прог­
нозирования результатов гормонального вызывания полиовуляции у живот­
ных.
..
:
В результате исследований установлена : прямая зависимость между
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
- 14 величиной рН содержимого матки, ее клиническим состоянием. - оплодотворяемостью яйцеклеток и качеством извлекаемых эмбрионов.
При рК в пределах 6.2-6.8 до 27,935 яйцеклеток остаются неоплодотворенными. а число качественных эмбрионов не превышает 34,4% (табл.4).
Таблица 4
Влияние рН содержимого полости матки на оплодотворяемость
яйцеклеток и качество эмбрионов.
<%
рН содержимого матки
Показатели.
6.2-6,8
6.9-7.5
-7,6 и более
Число доноров
30
39
Среднее число овуляций
на донора
7.8+0.47
7.1+0.38
Получено в среднем на донора
эмбрионов и неоплодотворенных
яйцеклеток (п-Ж)
6.1+0.37
5.8+0.31
В Т.Ч. нормальных эмбрионов 2.1±0.26-34,4 4. 0±0.32-69.0
2,3+0,23-37,7 1.0+0.16-17,2
дегенерированных
неоплодотворенных
.1,7+0.33-27.9 0.810.14-13.8
яйцеклеток
21
8,3+0.6
6.4±0,46
3. 4±0,4-53,1
1.1+0,23-17,2
1.9+0.3-29.7
При нейтральной среде полости матки (рН=6.9-7.5) получены макси­
мальные результаты по выходу нормальных эмбрионов (4,0+0.32-69. ОХ)-",
при этом число неоплодотворенных яйцеклеток (0,8±0.14-13,8%) было ми­
нимальным. При рН равном 7.6 и более, не установлено значительных ко­
лебаний по выходу нормальных и дегенерированных эмбрионов по сравнению
свеличиной рН полости матки от 6.9 до 7.5.
Различные нарушения в условиях содержания и кормления отрицатель­
но сказываются .на состоянии здоровья и воспроизводительных функциях
животных. Учитывая это мы изучили основные биохимические показатели
крови подопытных животных в различные периода года для того, чтобы ус­
тановить "степень их, влияния на результаты индуцирования полиовуляции и
выход нормальных эмбрионов.
•
' .'..'-'
л )/.;.Результаты исследований биохимических показателей белкового, липидного обмена •каротина, витамина.^" позволили установить, что овулирующая реакция яичников- и выход нормальных эмбрионов у животных с
отклонениями в ; обмене веществ в 1,5-2 раза ниже.,,/ чем у доноров с отно-
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
15 ;ителъко нормальным обменом (табл.5). У доноров с низким числом овуля­
ций (от 2 до 10; 0-5; 2-3) биохимические показатели были достоверно
ниже (P<Q.G-5). чем в группе животных с высоким уровнем пслиовуляции
(11-18; 6-12; Э-1'3).
•
В зимний период у доноров с числом овуляций от 11 до 18 по срав­
нению с животными, имеющими овуляции от 2 до и.• содержалось в крови
больше белка на 23.4%. альбуминов и фосфслипидов на 15.55, обоих липиДОЕ - 24.6%. холестерина - 18.4S. триглицеридов. криотинйна. каротина
и витамина "А" в 2 раза. В весенний период при минимальной (0-5) и
максимальной (6-12) овуляции основные биохимические показатели у зе­
вотных несколько сглажены, исключение составляет креатинин и каротин.
"цифровые величины которых, при овуляции от 6 до :;•. в два раза бодьи'г.
чем при минимуме овуляций. В летний период наиболее значительные раз­
личия установлены по содержанию в крови триглицеридов. криотинйна. £=лочной фосфотазы. каротина и витамина "А". При максимуме овуляций
О-13) эти показатели были в 1.5-2 раза выше, чем при минимальном чис­
ле овуляций у животных. По остальным показателям эта разница не пр-вь:шает 12-195S.
Гормональный фон организма животного в различные функциональные
стадии полового цикла отражает его полноценность протекания и может
варьировать в определенных пределах. Изучив пределы этих колебаний
ЕОЗМОЖНО отбирать доноров .только с гарантированной эмбриопродукцией. В
связи с этим, нами был изучен гормональный фон подопытных животных пу­
тем определения в крови прогестерона, эстрадиола и кортизола.
Установлена достоверная зависимость между уровнем полиовуляции.
числом извлекаемых эмбрионов и гормональным фоном в крови Д О Н О ^ О Е . При
минимальном числе овуляций (0-3) и выходе эмбрионов, в среднем на доно­
ра (до 3) концентрация прогестерона в крови не превышала 0.6+0.15
нг/мл. а 17р эстрадиола - ll.85t0.74. пг/мл. что достоверно ниже
(Р<0.01) по сравнению с другими группами подопытных животных (табл.6).
При уровне овуляции от 4 до 21 и выходе эмбрионов до 19 в среднем
на донора концентрация прогестерона была в пределе от 2.15±0.26 до
2.8Sto,34 нг/мл. а уровень 17f эстрадиола колебался 18.6+1.53 до
22.8±1,97 пг/мл. Содержание кортизола в крови доноров не отражало
уровня овуляции и результатов извлечения эмбрионов, существующая раз­
ница по группам (от 11.7340.66 до 12,67+0.75 нг/мл) была недостоверной
(Р>0.5).
Таким образом, путем изучения гормонального фона животных возмож­
но прогнозировать результаты индуцирования полиовуляции и качественный
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
Таблица В
Биохимические показатели крови доноров по периодам
года в связи с реакцией яичников на гонадотропии
Показатели
Число овуляции по периодам года
осенне-зимний
весенний
•
2-ID
Общий белок (т/7.)
Альбумин -"Общие липиды (мг/Х)
Фоофодипиды -"Холестерин -"Тркглицериды -"Крбзтинин
-"Щелочная фосфотаэа
Каротин
-*•-.
Витамин "А" -"-
6,440,51
0,7140,05
240111,6
109+8,2
84,3±8,9
40,Oil,8
0,47±0,01
31,6il,l
0,194±0,16
0,112*0,59
(*) - Р<0,05
11-18
7,9+0,93
0,82±0,02
299410,3
128+6,9
99,845,1
76,946,2
0,98+.0.16
56,142,2
0,427+0,22
0,204+1,6
летний
*
0-5
8,5941,01
0,6440,69
221410,Э
10345,8
82,947,1
39,5±1,0
0,4940,05
30,9+1,6
0,13640,25
0,111+0,62
6-12
9,39±0,94
0,7040,71
241413,6
13147,5
85,645,1
45,841,0
0,81+0,12
38,041,0
0,288i0,52
0,12040,96
2-8
7,640,73
0,73±0,83
237416,7
11247,7
86,547,0
46,041,1
0,454.0,12
32,841,5
0,21741,62
0,11040,96
9-13
9,1±0,79
0,9840,09
285411,0
1284669
97,644,3
77,140,90
0,9010,15
55,641,9
0,34941,1
0,19641,93
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
- 17 Таблица 6
Влияние гормонального Фона крови коров-доноров на
результаты полиовуляции и извлечение эмбрионов
N Число Число
п/п коров овуля­
доноров ций
Гормоны
Число
извлечен- .
эстраднол
ных эмб­
прогестерон
(пг/мл)рионов
. (нг/мл)
»*
1
2
3
4
28 0-3
31 4-6
25 7-12
16 13-21
0-3
4-5
6-12
13-19
(** ) - Р<0. 01
0,610.15
2.1510.26
2.8910.34
2.6810,41
кортизол
- (нг/мл)
**
11,8510,74
21.511.27
22.811.97
18.611,53
11.3510.74
12. 6710.75
12.1810.8
11.7310.66
выход эмбрионов у доноров. Эти показатели возможно использовать как
критерии при отборе животных-доноров.
Не менее важным фактором отбора доноров является определение оп­
тимальных возрастных пределов использования животных для полиовуляг.:;:.
По данному вопросу в литературе весьма противоречивые сведения. LI:.naldson (1984) установил, что результаты извлечения эмбрионов не зано­
сят ст возраста доноров. В то же время l.kuciel и др. (1990) утверк'-ют, что жизотных старше 15 лет невозможно использовать в качеств- ;.-•
норов эмбрионов. . • " • " • . „
Мы изучали возрастные особенности гормонального индуцирования usлиовуляции у коров и телок доноров.
При гормональном вызывании полиовуляции с помощью экзогенных гонадотропинов у телок получены следующие результаты (табл.7).
Из числа обработанных животных 58,8% реагировали полиовуляцией и
в среднем на донора получено 6,710.27 овуляций. 5.4Ю. 22 эмбрионов и
неоплсдотворенных яйцеклеток, в т.ч. 3. Н О , 12 нормальных заролклей. У
коров от'3.6 до 9.5 лет среднее число овуляций на донора состаылс8. Н О . 27 и 4.4Ю. 15 качественных эмбрионов, что составляет 62.0.? от
общего числа зародышей. В группе коров-первотелок в возрасте от 2.5 до
3,5 лет 54,2% животных реагировали полиовуляцией и в среднем на донора
получено 2.2Ю. 09 или 44.055 качественных эмбрионов. У коров старше 9.ё
лет выход качественных эмбрионов несколько снижается по сравнен-- г
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
- 18 Таблица 7
„Возрастные особенности гормонального вызывания
полиовуляции у коров и телок доноров.
Возрастные группы доноров (лет)
Показатели:
-• I
" телки
случного
возраста
Число доноров '
Реагировали полиову-
68
лящей
40
• ••
о т
.
'
;
•
•
•
.
II
И1
2.5-3.5
IY : •
з.б-э;5":" 9. б"»; более
59
27
• ;
Процент от числа
обработанных
58,8
Среднее число овуляций"
6.7+0.27
на донора
Получено в среднем на
донора эмбрионов й не­
оплодотворенных
яйцеклеток ,
5.410.22
в т. ч. нормальных
эмбрионов
3.НО. 12
57.4
дегенерированных
1.010.12
%
. . . "
18.5
неоплодотворенных
яйцеклеток
1.3+0.14
Л
24.1
It
;:
9
6
"
'
.
32
67
54.2
69.8
'
•
'
•
'
•
' . ' . •
1
7
•
62.9
7.0Ю.З
8.1+0.27
7.410.47
5.0+0.21
7.1+0.24
6.510,41
2.2+0.09
44.0
1.6+0.16
32.0
4.410,15
62.0
1.6+0.13
22.5
3. 510. 22
53.8
0.910.18
13.9
»
1.210.14
24.0
1.110.11
15.5
2.1+0.18
32.3
третьей группой животных (3.5Ю.22). при этом число неоплодотворенных
яйцеклеток достигает 32.3%
Из приведенных данных следует, что оптимальный возраст коров для
использования. в качестве доноров эмбрионов является от 3.6 до 9.5 лет.
Телок мясных пород возможно использовать в качестве доноров эмбрионов,
но при нехирургическом извлечении зародышей, даже с иепользованием
специальных катетеров, часто возникают проблемы прохождения канала
шейки матки.
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
- 19 3.1.3. Синхронизация охота у доноров и реципиентов.
Синхронизация охоты у крупного рогатого скота стимулирует воспро­
изводительные функции, особенно у телок, ускоряет наступление стель­
ности и обеспечивает планирование работ по трансялавтащга эмбрионов.
Точность синхронизацииполовых циклов доноров ж реципиентов в значи­
тельной степени повышает результаты пересадок эмбрионов.
В соавнителмых Э1сспериментах по изучению эффективное™
нов и двукратной обработок коров и телок при синхронизации охоты ис­
пользовали "клопростеяол". "эструмат". "эстрофан" и "суперфан" в дозе
500 мкг по клопроствщолу.
Наиболее высокие результаты по синхронизации охоты получены при
однократной обработке подопытных животных эстрофаном. 85.7Х из них
пришли в охоту через 72 часа после введения препарата (табл.8). Не ус­
тановлено достоверных различий в результатах синхронизации охоты у хо­
ров и телок с помощью эструмата и суперфана. 0|т71.8 до 78. ох животных
реагировали на введение препаратов через 72 часа после инъекции. Мини­
мальные результата по синхронизации охота у коров и телок получены при
использовании клопростенола. Только 64. ЗХ животных пришли в*охсту и
35.7Х доноров не проявили даже слабых признаков полового возбуждения.
Таблица 8
синхронизация охота у коров и телох доноров с помощью
•'••••\•'•;'\•:^•• • ••-прхйявглмшщов'.'
.
•
.
Показатели -
i
"г
'•
Простагландин ,
#
клопростеяол эструмат эстрофан суперфан
Обработано доноров
28
39,
вз
41
Число доноров с '
'
признаками охоты
18
28
'54 ~
32
Процент от числа обработанных 64.3*9.05 71.8*7.2 85.7*4.41 78.0+6.47
в т.ч.пришли в охоту (п-Х)
^с
через 48 часов д
14-77.8
24-85.7: 50-92.6 30-93.7
через 72 часа
; :
4-22,2
4-14.3
4-7.4
2-.6£
Не проявили признаков
:-vYY',.Y'Vохоты
10-35.7*9.05 11-28.2*7.2 9-1#*4.41 9-22.0*6.47
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
- 20 .^Аналогичные результаты по синхронизации охоты получены при двукратаогГЗйработке .тавотных простагландинами в дозе 500 мкг. В анзетральный период для синхронизации охоты у коров и телок доноров были
использованы гестогены и ГСЖК в сочетании с простагландинами.
Анализ полученных данных показал, что схема обработки коров и те­
лок при синхронизации охоты путем подкожного введения имплантатов с 3
мг норгестомета и одновременным инъецированием 5 мг эмтрадиолвалерата
наиболее эффективна. 67.2Ж коров и 70.8Ж телок из числа обработанных
пришли .в-охоту, из них более 60S имели признаки охоты уже через 48 ча­
сов после введения простагландина (табл.9). Использование имплантатов
с 6 мг норгестомета позволило вызвать охоту у 51.0% коров и 62.1% те­
лок. При этом 49.035-коров и 37.9% телок не проявили признаков охоты
спустя 72 часа после обработки простагландином.1 При использовании ГСЖК
в сочетании с простагланданом получены идентичные показатели по синх­
ронизации охоты у коров и телок. 59.4 и 58.3% животных из числа «аоаботашшх б ы м с признаками_л"ечки и рефлекса неподвижности. Из общего
числа обработанных более 4055 животных не проявили охоту.
. ,''''."•''.
Таблица 9
.
Синхронизация охоты у коров и телок в анэстралышй период
Препа- Группы Число Пришраты живот-обра- ли в
ных
бртан- охоных '••
животных
Нсргес- коровы 96
томет телки 29
Норгестомет коровы 58:
эстрадиол- телки 24
валерат :
ГСЖК
коровы; 64
телки* 12
Процент
от числа обработанкых
*• В т.ч.
через
48 ч
(n-Sl
•
72 Ч
(П-Х).
"
•
Не пришли
в охоту
№-%)
49 51'. 0±5.1 36-73.513.1 13-26.514.1 47-49. 015. 07
.18 62.119.0 12-66.715.4 6-33.3+5,5 11-37.919.0
39 67.216.2 24-61.514.4 15-38.515.0 19-32.816,2
17 70.819,28 12-70.614.2
5-29.414.8
-7-2S.2l9.28
38 59.416.13 26-68,413.6 12-31.613.9 26-40.616.13
7 58.3114.-2 3-42,913.9 4-57.114.0 5-41.7114.7-
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
Г 21 :•-.';,:,. •
4.2.1. Влияние схемы обработки и дозы гонадотрошша на
результаты полиовуляции и качество эмбрионов.
Индуцирование полиовуляции является одним из основных моментов
технологии трансплантации эмбрионов. Тем не менеедопоследнего време­
ни не изучены в полной мере вопросы, связанныесгормональным вызыванием
полиовуляшш. особенно у мясного скота. Остается непредсказуемой реак­
ция организма животного на введение экзогенных гонадотропинов, не ог
ределены оптимальные дозы гормовальных препаратов 1фи янд}
цирования полиовуляшш. малоизучено влияние некоторых экзогенных и э\
догенных факторов на результаты полиовуляции и качество доноров.
Эффективность вызывания полиовуляшш у коров и телок
доноров П Ж в разных дозах. •
Показатели
'
•
•••
/
т . — • • • I —
1 - 1 -
npeniaroH (M.E.)
2000
2500
48
93 .-...
• • — • • —
|
I
Обработано животных
Число доноров с полиовуляцией
32
Процент от числа
обработанных '
. 66.7
Среднее число овуляций
на донора
5.4*0.32 .
•„•
• ш—
фоллигон(И.Е.)
3000
3500
", + ! • • • •
I
• • -
54
57
43
'* 38
61.3
56.6 -
6.1*0.26
'|
II
70.4
5.8*0.29 6.1*0.32
Получено в среднем на
донора эмбрионов и
неоплодотворенных
+
Яйцеклеток
5.1*0.30
4.9*0.21
в т.ч. нормальных
ЭМбриОНОВ Г
%
дегенер|фованных
*
неоплодотворенных
*•*
3.9*0.23
76.5
0.5*0.15
9.8
»•*
2,7*0.12 .4.2*0.21
. 55.1
79.3
0.8*0.10 0.6*0.-10
16.3
11.3
Яйцеклеток'.
.*
'
|.
76
0.7*0.10
13.7
(*м)-Р<0.001 •
'
1,4*0.12
28.6
5.3*0,27 4.6*0.25
2.940.16,
63.0
1.4*0.19
30.5
0.5*0.10 0.3*0.09
9.4
6.5
:
В связи с этим дальнейшие исследования были направлены на разра-
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
- 22 '-'
^ку и усовершенствование схем гормонального индуцирования полновуля•_:;ш Оптимизацию доз современных препаратов, используемых при этом.
По результатам экспериментов установлено, что применение прегмагона в дозе 2000 И.Е. обеспечивало полиовуляцию у 66.7%- животны:
(табл. 10).
••.('-•••
• При среднем числе овуляций 5,4+0,32 на донора, получено 5.1to.
эмбрионов и неоплодотворенных яйцеклеток, в том числе 3.9±0.23 нор
мальных эмбрионов или,76,55? от числа извлечений. При увеличении дозь
препарата до 2500 И.Е. эти показатели заметно снижаются. В среднем н<лонора получено.4.9+0,21 эмбрионов и неоплодотворенных яйцеклеток, и;
них только 2,7+0,12 были морфологически нормальными эмбрионами. Числе
дегенерированных эмбрионов достигает 16,35?. а число неоллодотворенню
яйцеклеток - 28.6%.
Использование фоллигона в дозе 3000 И.Е. при сравнительно м-'••• ::?!.
числе животных.. реагирующих суперовуляцией (56,655), позволило по.. :п
в среднем на донора 5.3±0,27 эмбрионов и неоплодотворенных яйцеклеток.
из.этого числа 4.2±0.21 или 79,3% зародышей по морфологической оценке
были жизнеспособными.
;
При введении 3500 И.Е. фоллигона выход нормальных эмбрионов сни­
жался до 2.9+0,16, а число дегенерированных зародышей достигало 30,55?.
Из приведенных данных следует, что оптимальными дезами для гормо­
нальных препаратов прегмагон и фоллигон являются 2000 и 3000 И.Е..
т.к. при этом достоверно увеличивается число нормальных эмбрконо!
(Р<0.001), а выход дегенерированных эмбрионов и неоплодотворенных яй­
цеклеток минимален. Применение ФСГ в суммарной дозе 42 мг обеспечшк
множественную овуляцию у 75,05? животных, (табл. И ) .
При среднем числе овуляций 5.9±0.24 получено на донора 5.3±0.2;
эмбрионов и неоплодотворенных яйцеклеток, из них 3,7+0,15 или 69.8?
были морфологически нормальными эмбрионами. Увеличение дозы ФСГ до 5(
мг позволило получить на донора 5.9+.0.30 эмбрионов и неоплодотворенных
яйцеклеток, в том числе 3.5±0.18 были нормальными эмбрионами. При этом
повышение дозы препарата достоверно увеличивало число дегенерированных
эмбрионов до 2256 (Р<0.05).
При использовании гормонального препарата фоллитропин в суммарной
дозе 1100 И.Е. из 71 обработанного животного 64.8% реагировали полио­
вуляцией. В среднем на донора получено 6,4±0.31 овуляций и 4.8±0.23
эмбрионов и неоплодотворенных яйцеклеток. - Средний выхед нормальных
эмбрионов на донора составил 3.6±0.18 или 75,0 % от числа изв­
лечений. Процент дегенерированных эмбрионов и.неоплодотворенных яйцек-
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
- dc 5гМ~г:т1«рчг
Табяша ii
:ть вызывания полловуляшш у коров к телок
ДСНСПСЕ с помошью ФСГ.
Показатели
ФСГ(мг)
50
•:Сработано животных
84
Числе доноров с
тслпозуляинеп
63
Процент от числа
обработанных
"5.0
Среднее число овуляций
->.910,24
•а донора
Получено Б среднем ча
декора эмбрионов и неоплодотвореккых яйце­
клеток
5,.310.22
в т. ч. нормальных
эмбрионов
3,7±0. 15
%
69.8
деггнерирванных
*
н/якаеклетки .
%
0.810.11
0.810.11
15.1
(*)-Р<С,05
Суммарная доза
Фоллитропина (И.
ll OG
120G
69.5
64.S
65,2
6.810,35 6.41С.31
7.HU.34
5, 9=0,30 4,8±0.23
6. 2+0. ЗС
3.5Ю.18 3.6Ю.18
5S.3
75.0 .
4.0Ю.2
64.5
•1.3Ю.19 0. 610.11
22,0
12,5
1.110.17 С. 610. И
18.7
12.5
1.4Ю 18
22.6
0.S10*13
12.9
легок не превышал 12.5л. Применение препаратов в суммарной дозе 1200
И.Е. незначительно увеличило число животных, реагирующих полисвуляцией
и среднее число овуляций на донора, но число дегенерированкых эмбрио­
нов увеличилось до 22.6%.
4.2.2 Полиовуляторная реакция доноров различных пород.
Известно, что животные различных пород обладают различной генети­
чески обусловленной плодовитостью проявляемой при индуцировании г.олиовуляцни с- помощью экзогенных гонадотропинов. Поэтому исследования по
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
изучению о т в е е т реакции мясного скота на введение гормональных пре'.'паратов^имеет научное и-практическое значение.
. В ходе эксперимента на коровах симментальской, калмыцкой, герё
форд, казахской "белоголовой и абердин-ангусской пород установлено, ч*
от 64.3 до 6Э.2Х доноров от числа обработанных, имели 3 и более свут
ций на яичниках (табл.12). В группе коров калмыцкой породы среди
число овуляций' на донора (7.1*0.39) было несколько ниже по сравнение
: Таблица 12
а
Результаты гормонального вызывания полиовуляции у доноров
различных пород.
Порода коров-доноров
Показатели
симиент.
Обработано животных
Число доноров с
полиовуляцией
Процент от числа ,.
обработанных
Среднее число овуляций
на донора
Получено в среднем
на донора эмбрионов
и н/яйцеклеток
в'т.ч. нормальных •
эмбрионов
%
'
• - . • ' . ' • • ; • ;
дегенерированных *
; ;
%
•
'
•
.
. • • • ^ • . - " ' : . : .
н/яйцеклеток
:
• •
.
*
•
калмышс герефорд
'
:
*
•
;''
'
(
*
)
-
абер"
ангу •
29
56
20
36
23
60"
27
69.0
64.3
67.6
6J.0
69.2
в7;
34
• ' . ' •
-
;
' ' . • ' • : " " • - '
:
39
' • ' • • • • у ; Л \
8.6*0.63 7.1*0.39 8.9*0.61 8.8*0.37 10.0*0.6*
•
- ' -
'
• ' ? • • - ' : • ' :
'
• '
-
*
"
'
'
•
•
''.
:'.-
•
'
6.1*0.45 6.9*0.38 7,3*0.5
7.1*0.3
9.0*0.58
4.9*0.3 3.1*0.22 3.3*0.23 3.5*0.15 4; 9*0.31
80.3
44.9
45,2
49.3
54.4
1.0*0.27 1.1*0.17 1.9*0.29 2.0*0.18 1.5*0.23
16.0
26.0
28.2
16.7
16.4
0.2*0.17 2.7*0.22 2.1*063 1.6x0.16 2.6*0.32
39.1
28.8 с ; 22.5
28.9
3.3
Р<0.С5
• ; ' . - -
:
казахск.
белого*.
""•"
V
" •
-«
'
остальными животными. Наиболее высокий показатель по числу выхода нор
мальных эмбрионов на донора получен в группе коров симментальской по
роды (80,3%) от числа извлечений., что по сравнении с остальными подо-
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
- 25 гйгтжяп!. группами доноров в 1.5-2 раза больше. У доноров абердин-ан-'
гусской породы отмечена тенденция к увеличению числа нормальных эмбри­
онов.
-,'•••.;
В группе доноров калмыцкой и абердино-ангусской пород число неоп­
лодотворенных яйцеклеток достигало 39. IX и 28.9*. что достоверно выше.
чем у остальных животных (Р<0.05). Вероятнее всего это можно объяснить
тем. что животные выше указанных пород имеет легко возбудимый тип
нервной системы, что приводит во время осеменения к стрессу и снижению
оплодотворяемости яйцеклеток.
. 4.2.3. Влияние сезонного фактора на результаты полиовуляпии
и качественный состав эмбрионов.
Одной из биологических особенностей крупного рогатого скота мяс­
ных пород является выраженная сезонность размножения. Вариабильность
показателей гормонального индуцирования полиовуляпии и результатов
эибриопересадок в течение года является сдерживающими факторами внед­
рения метода трансплантации эмбрионов в практику мясного скотоводства.
Анализируя экспериментальные данные по гормональному вызыванию
полиовуляпии у 242 коров и телок доноров получено, что при сравнитель­
но одинаковом числе животных с полиовуляцией, показатели выхода нор­
мальных эмбрионов и неоплодотворенных яйцеклеток в среднем на донора
различны (табл. 13).
Наибольшее число нормальных эмбрионов получено осенью. При сред­
ней числе овуляций на донора 7.0*0.34 получено 4.5*0.22 качественных
эмбрионов или 75.055 от числа извлечений. Разница по числу извлеченных
эмбрионов, полученных осенью достоверно выше по сравнению с весной
(Р<0.05). В зимнее время, когда у большинства животных несколько сни­
жена половая функция, возникают сложности в отборе и осеменении доно­
ров. что приводит к увеличению числа неоплодотворенных яйцеклеток (дс
22.9*). В весенний период года активизируется половая функция у живот­
ных. В этот период среднее число овуляций на донора достигав!
8.3*0,37. что достоверно выше по сравнению с осенне-зимним и летни»
периодами (Р<0.01). однако выход нормальных эмбрионов составил не бо­
лее 48. IX. а число дегенерированных эмбрионов и неоплодотворенных яй­
цеклеток достигает 31.5 и 20. 4Х.
Наиболее высокая приживляемость эмбрионов получена в осенне-зим­
ний период. Осенью, из числа пересаженных эмбрионов 51.8% прижились,
зимой этот показатель был несколько ниже и достигал 42.7*. Весной при
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
Таблица '.3
Величина индуцированной полиовуляши у доноров
приживляемости эмбрионов по сезона»! года.
Показатели
Сезон г'ода
зима
48
Обработано животных
Число'доноров с
полиовуляцией.
31
Процент от числа
обработанных
64,6
Среднее число овуляция
на донора
6.4*0,32
Получено в среднем на
донора эмбрионов и
я/яйцеклеток
3,1±0,3
в т.ч. нормальных
эмбрионов
4,0±0.28
65.6
%
дегенерированных
0,7±0.15
. %
11.5
н/яйцеклетки
1.4+.0,14
22.9
.*
Число реципиентов
89
Пересажено эмбрионов
89
Стельных реципиентов
38
42.7
Процент стельности
(*)- Р<0.05:
весна
лето
осень
78
49
S"
56
33
47
71.6
67,3
70. 1
Ж*
8.3±0,37
6.9±0. 4
7,0±CtM
5,4+0,2£
5. 3+0,3
С, uiC,
X."
*
2.6+0.22
3, 9+.Q,29
48,1
73. г
1.7+0.17
0.9+л,. 60
31.5
. 17.0
l.liO, 19 0.5+0, ?1
20.1
Э.4
64
71
20
31.3
(**) - Р<0.01
75
79
21
4, 5:0. Г;Г
75. 0
L.'.-lO. 15
16.7
0. 5+0. 10
8.3''
112
115
58
28,0
51.8
-
живляемость эмбрионов составила 31,3%. в летний период этот показатель
не превшал •28.0%. Низкая приживляемссть эмбрионов в летний период
объясняется преобладанием высокой температуры внешней среды и ограни­
ченностью травостоя на пастбищах, что характерно для зон мясного ско­
товодства России и Казахстана.
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
- 27 4.2.4. Влияние совместного содержания коров-матерей
к телят на результаты полиовуляции.
Совместное содержание- коров-матерей и телят на подсосе является
одной из особенностей технологии мясного скотоводства, .которое увели­
чивает продолжительность послеотельного периода, < сервис-период и сни­
жает оплодотворяемость маток.
•'• •'•> •'"
'••?->.В опыте использованы коровы с продолжительностью подсоса до 3 ме­
сяцев. 'от 3 до 5 и более 5 месяцев. Контролем служила группа коров без
телят. Во всех группах возраст доноров был одинаковым, ~а возраст "телят
от 2.5 до 6 месяцев.
,;...' •'
Установлено, что животные с телятами на подсосе по всем показатеТаблица 14 .
л ;"'
Влияние подсоса на результаты гормонального вызывания л,..
полиовуляции у коров.
Показатели
Без телят
(контроль)
Продолжительность подсоса
-, {мес.)
до 3-х • • 3-5 '
более 5
Обработано животных
48
56
" 62
74
Число доноров с
-•'.!••
полиовуляцией
40
so ;•.:
37
44:
Процент от числа
обработанных
83,3
67.6
66Г1
71.0 Г"Среднее число овуляций *
на донора .
. ~ю.2Ю.64
7.1+0.72
: 6.810;45. 4.4Ю. 45
Получено в среднем
на донора эмбрионов
и не оплодотворенных
яйцеклеток
.
6.3±0.34
5.710.71
5.9Ю.45 • 6.4Ю.59
в т.ч. нормальных
***
••'••"'.'" эмбрионов:
4.9Ю.23
3.110,62
3.6±0."35
3,610.40
.'•"'.-%.'''
77,8
54.4
61.0 .•'•'•-•. 56.3
дегенерированных
0.6Ю. 18
1.410,19
. 1* 010,54 ' - - 1,310.93
X '
9.5
24.6
17.0
20.3
неоплодотворенных
яйцеклеток
0,8±0,14
1.210.21
1.310,21 . 1.510.45
%
12.7
21.0
22.0
23.4
(*) - Р<0.05:
(***) - Р<0.001
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
:
- 28 ям явно уступали контрольной груше коров без телят (табл.14).
'''^*~В~1^пше. коров без «телят среднее число овуляций составило
Ю.2±0,64. а 'выход нормальных эмбрионов, равен 4.9Ю.23 или 77,8% от
общего числа извлеченных зародышей, что достоверно выше, по сравнению
с другими'группами подопытных животных (Р<0.05: Р<0.001).
Продолжительность подсоса на момент индуцирования полиовуляции не
оказывает заметного влияния на конечные результаты. При подсосе от 3
до 5 и более месяцев среднее число овуляций на донора было в пределе
от 6.4*0.45 до 7.UQ.72, а выход нормальных эмбрионов не'превышал
3.6Ю.35 или 61.0% от числа извлечений.
С целью преодоления отрицательного, воздействия подсоса на воспро­
изводительные функции животных был применен кратковременный отъем те­
лят на 6.12.24 и 48 часов перед началом гормональных обработок и осе­
менением доноров в индуцированную охоту.
По результатам эксперимента установлено, что отъем телят ст • .ерейна 6 и 12 часов не оказывает заметного положительного влияния на
результаты индуцирования^ полиовуляшю и качественный состав извлечен­
ных эмбрионов (табл.15).
В среднем на донора получено 6.6-6,9 овуляций, а выход качествен­
ных эмбрионов не превышал 3,7±о,32. При отъеме телят на 24 и 48 часов.
достоверно увеличивается среднее число овуляций (до 9.8^0.64) и выход
нормальных эмбрионов (5.7±0.47) на донора (Р<0.05: Р<0.001). По-види­
мому. даже кратковременный отъем телят на 24 и 48 часов стабилизирует
содержание ЛГ в крови коров-доноров и ограничивает действие гормонов.
выделяющихся при сосании вымени. Однако отъем телят на 48 часов отри­
цательно сказывается на их клиническом состоянии, более 70% из них пе­
реболели расстройством желудочно-кишечного тракта.
Таким образом, для уменьшения отрицательного влияния подсосана
репродуктивную функцию коров достаточно использовать24 часовой отъем
телят перед началом гормональных обработок и осеменением доноров, что
позволит увеличить результаты гормонального индуцирования полиовуляции
и выход нормальных эмбрионов у доноров без отрицательных последствий
для молодняка.. ^
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
29*
Таблица 15 :
Результаты индуцирования полиовуляции у коров при
регламентированном подсосе,,•.-,
Коровы по­
стоянно с
телятами
Показатели
Обработано животных
Число доноров с
полиовуляцией
Процент от числа
обработанных
Среднее число овуляций
на донора.
6
•
Время отъема телят (час)
--•- _.-.-. 24
12
48
36
49
19 "J
24
34
14
66.7
69.4
73.7
^t
12
17
9
14
75.0
*
82.3
*
6.410.45 6.6*0.52 6,9*0.45 9.8*0.64 8,9+0.82
Получено в среднем
•--- .;••".
л
на донора эмбрионов
^
и не оплодотворенных
яйцеклеток
5,3±0.32 6,5*0.39 6,8*0,41: 8.8*0,37 7,6*0.25 .
в т.ч. нормальных
, д,;-''*** \. ;Л ,-***',.
эмбрионов
. %
3.1*0.36 3.1*0.53 -3;7±Ь.32; 5.4*0.47 5.7*0.43
5 8 . 5 ;:;; 47,7
54.4,"/; 61.4 •• ":75.0: '*:'
• дегенерированных 0.4±о.30 1.040.24 1.8*0.19 •1,5*0.42 l,;±o.2i
'..'-'..•".' *:"•
7.5
15.4 '. 26.'5/^;;.:ДУ, 17.0^;:'; 14.5
неоплодотворенных..-.
•':•
.''':,
яйцеклеток : 1.8*0.14 2.4*0.22 1.3*0.17 1.9*0.28 0.8*0.23
..••••//•*
34.0 36.9
19.1' _ ; ! 2 1 . 6 Л 0 . 5
'•(»)-' Р<0.05; Ч { » * * ) - Р<0.001- : ' ; ; vi
4.2.5. Осеменение коров и телок доноров в
индуцированную охоту при полиовуляции.
Результаты извлечения и качественный состав эмбрионов, полученных
нехирургическим путем, во многом зависят от правильной организации
осеменения доноров.
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
- 30 .
Оптимальные сроки я кратность осеменения, количество я хачествен«Я^Остаа, спермиев. место»введения спермвев в половые пути самок являются главенствующими Факторами, опрелеляющими результаты оплодотво­
рения яйцеклеток и качество эмбрионов у доноров.
В связи с этим наши последующие исследования были посвящены реше­
нию задач по оптимизации технологических приемов осеменения доноров в
индуцированную охоту с целью повышения результативности полиовуляция и
метода трансплантации эмбрионов в целом.
По результатам исследований установлено, что способ осеменения
доноров при полиовуляции существенным образом влияет на результаты оп­
лодотворения .и качество навлекаемых зародышей (табл.16). При внзоцервикальном способе осеменения, когда одноразовая доза спермы вводится г
лучшей случав за вторую складку шейки матки, оплодотворяемость яйцекТаблица 16
Влияние способа и кратности осеменения доноров
;.:/• иа результаты извлечения эмбрионов.
Показатели
ЧИСЛО КОРОВ (№256)
Визо-цервикальный
Ректо-цервикальный
Кратность осеменения
1
2
1
2
30
Число овуляций на
8.0Ю.48
донора
Получено эмбрионов и
н/яйцеклеток на
7.1*0.43
донора
в т.ч. нормальных
2.610.29
эмбрионов
-..-' * "
дегенерированных
• ' "
»
:
- '
неоплодотворенных
яйцеклеток
.";..•: х : , .
Оплодотворяемость'
яйцеклеток
.
48
*
9.310.44
8.310.25
8.4Ю.4
8.910.42
7.710.23
••*
4.610.11
59.7
2.010.15
26.0"
,
1. НО. 1
14.3'
8.010.38
•»•
4.810.22
60.0 .
1;910.23
.23.7
*
1.310.16
' 16v3
36.6
1.610.23
22,5
3. НО. 18
34.8
2.310.22
25.9
2.910.31
\ 40.9
3.510.22
39.3
59.1
• ) - Р<0.001
121
59
60.7
85.7
*
)
х
.
1
83.7
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
- 3i -
леток не превышает 60.7%, а выход качественных эмбрионов находится в
пределе 34,8-36,6%. При ректоцервикальном способе осеменения, когда
обеспечивается глубокое введение спермы в половые пути самки, оплодот­
воряемость яйцеклеток достигает 85,7%, а выход'качественных эмбрионов
-60%. что достоверно выше, чем при осеменении доноров визоцервикальным
способом (Р<0.001).
. Установлено, что при осеменении доноров в индуцированную охоту
одноразовой дозой спермы с содержанием не менее 50 млн, подвижных жив­
чиков ошюдотворяемость яйцеклеток достигает 84.7%. а выход -нормальных
эмбрионов равен 71.2%. При снижении числа подвижных живчиков в однора­
зовой дозе спермы до 25 млн, оплодотворяемость яйцеклеток снижается до
53,3%. а выход неоплодотворенных яйцеклеток достоверно увеличивается
до 46.7%.
- . .
•,•••• Увеличение числа активных живчиков до 75 млн. в одноразовой дозе
спермы не влияет на выход качественных эмбрионов.
Следовательно при индуцированной полиовуляции ректо-цервикальное
осеменение животных одноразовой дозой равной 5р млн. • подвижных живчи­
ков обеспечивает до 85.7% оплодотворяемости яйцеклеток и выход качест­
венных эмбрионов 4,8±0,2 на донора. При этом следует отметить, что"бо­
лее высокие показатели по оплодотворяемости яйцеклеток достигаютсяпри
осеменении доноров в рог матки, выход качественных эмбрионов достигает
4,9±0,26 в среднем на донора. ;
V
;; : : . ;
Вариабельность оплодотворяемости яйцеклеток в индуцированную охо­
ту зависит от многих факторов., в том числе от типа нервной системы жи­
вотных-доноров. .Стрессовые^ситуации, возникаемые: при искусственном0
осеменении, приводят К'снижению оплодотворяемости яйцеклеток, цробенкс
у животных с повышенной возбудимостью. Д На двух породах мясного скота:' калмыцкая и казахская белоголовая.
противоположных по типу нервной системы, были проведены исследования
по изучению оплодотворяемости доноров при искусственном и естественном
осеменении. Искусственное осеменение проводили ректоцервикальным спо­
собом с помощью одноразовых инструментов, естественное осеменение до­
норов осуществляли бьком ручной случкой.
•; ;
В группе коров калмыцкой породы при искусственном осеменении в
среднем на донора получено 3,0+0.09 нормальных эмбрионов, что состав­
ляет 32.6% от числа извлечений и общая оплодотворяемость яйцеклеток не
превышала 59.8% (табл.17). •
У доноров казахской белоголовой породы при искусственном и ес­
тественном осеменении выход качественных эмбрионов составил 55,4%, а
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
- Зс
•уюдотворяемость яйцеклеток достигала 78.4%.
~"ТГтруппе_ доноров калмыцкой породы при естественном осеменении,
когда стрессовые ситуации сведены до минимума, оплодотворяемость яй­
цеклеток возрастала до 76,2%. а выход нормальных эмбрионов - 4.7+0,24
или 56.0% от общего числа извлеченных эмбрионов и неошюдотворенных
яйцеклеток, что на 23,4Ж больше, чем в группе доноров аналогичной по­
роды при искусственном осеменении и эта разница достоверна ( Р<0,01).
Таблица 17
Сравнительная оплодотворяемость доноров"при
искусственном и естественном осеменении.
Осеменение
Показатели
Естественное•
Искусственное
Порода доноров
;
_ - ~ - ' ~ "
• " " "
калмыцкая
Число доноровСреднее число ову­
ляций на донора
Получено эмбрионов
и н/яйцеклеток на
донора
в т.ч. нормальных
эмбрионов
%
дегенерированных .
%
н/яйцеклеток
%
оплодотворяемость
яйцеклеток (%)
казахская
белоголовая
калмыцкая
казахская
белоголовая
151
107
9.2±0.25
8,6+0.25
8.140.41''
9.610,43
9.210.25
7.4+0.25
8.4+0.43
9.2+0.41
3.0+0.09
32.6
2,5+0.13
.27.2
3.7+0.15
. 40.2
4.110.12
55.4
1.7+0.13
23.0
1.6+0.13
21.6
4,7+0.24
56.0
1.7+0.20
20.2
:
2,010,22'
23,8
42
54
а
,
**
59.8
(**)- Р<0. 01
78.4
76.2
;
5;i±0.23
55.4
2. U0.20 :
22.8
2,010,19
21.8
78.2
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
- 33 5.3.1. Нехирургическое извлечение, поиск, оценка
качества и пересадка эмбрионов.
Биотехнологический метод нехирургического извлечения эмбрионов
должен быть простым, надежным и эффективным при работе как в стациона­
ре животноводческих ферм, так и в полевых условиях отгонного животно­
водства. Кроме того, он должен быть безопасным для здоровья животных.
с тем. чтобы многократно использовать их в качестве доноров эмбрионов;,
Большинство приборов, ранее разработанных, предназначены для не^хирургического извлечения эмбрионов у молочного скота. Существующие
физиологические и анатомические особенности органов воспроизведение
мясного скота послужили основанием для разработки специального прибор
pa-катетера для нехирургического извлечения эмбрионов у мясных коров,и
телок. В результате длительных поисковых исследования разработан эксТаблица 18
Результаты нехирургического извлечения эмбрионов катетерами .
различных конструкций.
Типы катетеров
Показатели
"Кассу"
Число доноров
53
Введено среды в оба
рога (%)
100
Извлечено среды от коли­
чества введенной (%)
90.1
Среднее число овуляций
на донора
8.9±0,40
Извлечено эмбрионов и
н/яйцеклеток в среднем
на донора
6.4+0.29
Процент извлечений
от числа овуляций
71.9
Получено нормальных
эмбрионов в среднем
на донора
2,9+.0.23
В процентах от общего
числа зародышей .
45.3
"Нсйштадт-Айш"
ВИЛ
Опытный
образец
77
46
74 .
100
100
100
95.1
98.9
8.8±0.33
8.0±0.39
7.7+0.3
7.2±0.27
7.5+0.36
7.4+0.28
96.3
81.8
3.4+0,13
47.2
.
93.7
96,1
3.3±0.16 '4.2i0,16
44.0
i
56,7
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
- 34 перименталькый вариант устройства для нехирургичесхого извлечения эмб•>исн~-5--у<-коров и телок мясных пород (авторское свидетельство N1762914).
3 сравнительных исследованиях по нехирургическому извлечению эмб­
рионов у доноров катетерами' фирм Кассу. Нойштадт-Айш. ЗИЖ и опытного
образца установлено, что эффективность извлечения эмбрионов с помощью
устройства /катетера /
.' опытного образца в силу своих конструктив­
ных особенностей составила 96.i% от общего числа овуляций, что на
24,т.% больше. чем при извлечении катетером Кассу (табл. IS).
: помощью опытного образца получено в среднем на донора *\4±Q,2S
эмбрионов у, неоплодотворенчкх яйцеклеток, в том числе 4.2±С. 16 качест­
венных эмбрионов, что значительно выше по сравнению с остальными груп­
пами подопытных животных.
Следующим важным этапом технологии трансплантации является поиск
и оценка качества эмбрионов.
Сбычко поиск эмбрионов проводят путем предварительного от- . г з ния промывной жидкости в термостате при температуре +37°С в течении 2С
минут, удаления с помощью сифона верхней части жидкости, а исследуя
оставшуюся часть (до 100 мл) под бинокулярной лупой при 20-кратном
увеличении. Общие затраты времени на поиск эмбрионов составляют 45-50
минут.
Разработанный нами принципиально новый по конструкции вариант
устройства для фильтрации
эмбрионов
крупного
рогатого
скота
(авт.свид.N1655486) позволяет исключить такие непроизводительные опе­
рации технологии как отстаивание промывкой зшдкости и ее отсасывание
сифоном. В итоге общие затраты времени на операции по обнаружению эмб­
рионов сократились на 36.7 минут.
При 156 овуляциях получено 151 эмбрионов и неошюдотворенных яй­
цеклеток. что составляет 96.8". в контрольной группе извлекаемость за­
родышей достигала лишь 83,8£.
Таким образом наряду с положительными технологическими качества­
ми. применение разработанного фильтра сокращает поиск эмбрионов в 4
раза по сравнению с общепринятой методикой, обеспечивает максимальное
извлечение зародышей из промывной жидкости.
Оценка качества эмбрионов является последующим этапом технологии
трансплантации.
Наблюдаются широкие "вариации качества эмбрионов не только у раз­
ных доноров, • но даже у одного и того же. При этом отмечаются сущест­
венные различия морфологического состава эмбрионов у доноров различных
пород.
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
- 35 . Поэтому в наших исследованиях были изучены морфологические и биолсцические особенности эмбрионов, полученных от коров и телок мясных
породе полиовуляодей.
.
По результатам нехирургического извлечения у коров и телок доно­
ров мясных пород получено, что из общего числа 766 эмбрионов и яйцек­
леток 70,4% были нормальные. 17.135 - дегенерированные и 12.5% - неоплодотг ; энные яйцеклетки.У телок-доноров по сравнению с коровами было
меньше нормальных эмбрионов и больше неоплодотворенных яйцеклеток
Наблюдаются некоторые различия в скорости развития одновозрастных эмбрионов у доноров разных пород.У мясных доноров на седьмой день
индуцированного цикла поздние морулы, от общего числа извлеченных за­
родышей. составляют 65.8%. в тоже время, у молочного скота этот пока­
затель не превышает 36.0%. У мясного скота на стадии ранней морулы
наблюдается достоверно низкий процент (23.8±4.2) эмбрионов хорошего
качества (Р<0,001) и относительно высокое число удовлетворительных
зародышей (66.7i7.l9) (Р<0.01). Более поздние стадии характеризуются
достоверным увеличением числа эмбрионов высокого качества'и снижением
числа удовлетворительных зародышей (Р<0.01). .
Следует отметить, что эмбрионы на стадии морулы имеют более рых­
лую структуру, связь между бластомерами заметно ослаблена.
5.3.2. Применение метода трансплантации эмбрионов
с целью получения двойневости.
Большинство исследователей пришло к единому мнению, что-наиболее
результативный метод получения двоен является пересадка двух эмбрионов
или подсадка зародышей ранее осемененным животным. Но проблема получе­
ния двойневых отелов, имеющее особое значение в мясном скотоводстве не
решена в полной мере.
В исследованиях по разработке оптимальных вариантов получения
двойневых отелов коровам и телкам реципиентам проводили подсадку эмб­
риона. пересадку двух эмбрионов ипсилатерально. контрлатерально и^ би­
латерально. При этом учитывали процент стельности реципиентов, число
двойневых абортов и отелов, продолжительность послеотельного периода.и
последующую оплодотворяемость животных.
''-.'•; ;--:. чл:!'."7"-'^-.:'"''При пересадке одного эмбриона ранее осемененным животным было;по­
лучено 56.9i7.36 процентов стельности, а число двойневых отелов дости­
гало 75.0±Ю.8%. что достоверно выше, чем по остальным группам живот­
ных (Р<0. 01; Р<0..05) (табл. 19)
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
- зь
Таблица 19
Результаты получения двойневости путем пересадки или
подсадки эмбрионов
Показатели
Число реципиентов
Пересажено эмбрионов
Стельных реципиентов
Подсадка I
Пересадка 2-х эмбрионов в
эмбриона • один рог
по одному в оба рс;
51
51
29
**
Процент стельности
56.9+7.36
Число двойневых абортов
1
%
3.5±4.42
Из числа стельных реци­
пиентов отелилось
28
Число двойневых отелов
21
98
196
41
41.8+10.1
10
24.4±9, 49
31
13
Процент двойневости
75.0±10,8
42.0±16.6
(**)- Р<0.01; (*) - Р<0.05
130
260
51
39, 2+7.11
о
3, 9+5. 04
49
on
59.2+9.3
Трансплантирование двух эмбрионов в один рог увеличивало числе
абортов до 24.419.49, а процент двойневых
отелов
не
превышав
42.0+Л6.56. По-видимому, это связано прежде всего с тем. что рог матки
коровы или телки не в состоянии обеспечить условия развития двух эмб­
рионов. что и приводит к абортам. При пересадке по одному эмбриону в
оба рога процент стельности снижается до 39.2±7. II, что вероятнее все­
го происходит по причине повышенной вазможности заноса инфекции и
травмирования половых путей самок, приводящих к гибели эмбрионов.
Таким образом. . пересадка эмбрионов ранее осемененным животным
позволяет увеличить стельность более чем на 15%. а число двойневых
отелов до 75%. Вероятность перегулов за счет осемененных животных сни­
жается до минимума.
При изучении влияния двойневых отелов на репродуктигные функции
коров-матерей и сохранность молодняка нами установлено, что в группе
животных при отеле двойней число абортов и задержания последов было в
.1.5-2 раза Дольше по сравнению с животными отелившимся овинцом
(табл.20). '
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
- 37 Таблица 20
Репродуктивные функции реципиентов после
отела двойней и одинцом.
Показатели
Отелы
двойней
Число стельных животных (п)
Число абортов (п-%)
Число отелов (п-%)
одинцом
63
54
.
*
3-5.6+3.13
51-94.4+3.13
*
5-9.8±4.52
51
3-5,9+2.71
2-4.Ui2.78
46-90.2+3.67
8-12.715.68
55-87.3±5.68
Задержание последа (п-%)
11-20.0+7,52
Получено телят (п)
110
из них мертворожденных(п-%) 7-6.4±3.32
Пало телят (п-%)
6-5.8+3.02
Сохранность телят (п-%)
97-88,2+4.28
Средний выход телят на
*
I корову (п)
1.5+0.21
(*)-Р<0,05
.
0.8+0,12
Такие показатели, как процент падежа и сохранности телят в обоих
группах были практически одинаковыми. Но основной показатель как сред­
ний выход телят на одну корову в первой группе подопытных животных был
Таблица 21
Воспроизводительные функции коров после отела
двойней и одинцом.
Показатели
Отелы
двойней
Число животных (п)
Средняя продолжительность
инволюции матки (да)
Наступление первой охоты
после отела (да)
Оплодотворяемость от 1-го
осеменения (%)
Индекс осеменения
одинцом
63
54
59,513,42
57.1±2.12
78. 0±4.48
62.512.81
51.2±8.7
2.23±0.26
58.6±6.70
1.96Ю.19
х
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
-эана 0,7 теленка .выше, чем зо второй группе при отеле одинцсм и эха раз
"ница бчла достоверной (?<0,05).
Вместе с этим средняя продолжительность инволюции матки у коро!
после отела* двойней и одшщом практически не отличалась, но время нас­
тупления первой охоты после отела в первой группе животных было более
продолжительным, чем во второй (табл.21). Показатели ошюдотворяемостт
от 1-го осеменения и индекс осеменения в обеих группах животных был
равнозначными.
6.4.1. Режимы подготовки, замораживания и оттаивания
эмбрионов, их пркживляемостьТ
Технология криоконсервирования биологических объектов требуег
строго определенных режимов подготовки замораживания и оттаивания, npi
отклонениях или неправильно подобранных режимах как правило, отмечает­
ся нарушение морфологических качеств зародышей.
В исследованиях по криоконсервированию эмбрионов нами были сдела­
ны попытки оптимизации вариантов подготовки и замораживания зародыше?
мясных пород, т.к. большинство из существующих режимов были разработа­
ны для эмбрионов молочного скота.
В результате проведенных исследований установлено, что четырех­
ступенчатое насыщение 1.0 и 1.4 молярными растворами глицерина являет­
ся наиболее оптимальным для эмбрионов мясного скота, что позволяет по­
лучить высокие результаты качества зародышей после оттаивания. Из чис­
ла замороженных и оттаянных эмбрионов от 79.7 до 82.3% зародышей были
морфологически нормальными. При одноступенчатом насыщении эмбрионов
1.4 М глицерином снижается число нормальных эмбрионов после оттаивания
на 14.255. В этом же эксперименте установлено, что криозащитные свойс­
тва этиленгликоля для эмбрионов мясного скота недостаточны по всей ви­
димости в силу своих химических свойств. Разница по числу нормальных
эмбрионов, обработанных глицерином и этиленгликолем. составляет 1856.
что вполне достоверно (Р<0,05).
Экспериментальным путем установлено, что конечная температура ох­
лаждения эмбрионов перед погружением их в жидкий азот, не оказывает
существенного влияния на качество и приживляемость зародышей. При-дос­
тижении температуры -20°. -36° и -60°С с помощью замораживающих уст­
ройств и последующего хранения их в жидком азоте после оттаивания
69.055; 71.8% , и 70.1% эмбрионов были морфологически нормальными. После
нехирургической пересадки коровам и телкам реципиентам приживляемость
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
- 39 эмбрионов составила'43.1: 38.4 и 45.6% соответственно.
« Аналогичные результаты по числу нормальных эмбрионсз после оттаи­
вания и их приживляемое™ получены при быстром методе замораживания
зародышей в парах жидкого азота. Иь 99 замороженных и оттаянных эмбри­
онов 69,7% были морфологически нормальными. После нехирургической пе­
ресадки стельность реципиентов составила 37.7%.
Установлены породные различия в устойчивости эмбрионов к перепаду
низких температур. Определено, что наиболее чувствительны к низким
температурам эмбрионы калмыцкой породы. Из 113 замороженных и оттаян­
ных эмбрионов только 58.4% были морфологически нормальными, что на
18.1% меньше, пэ сравнению с эмбрионами породы симментальская и на
15.2%, по сравнению с зародышами казахской белоголовой породы.После
оттаивания эмбрионов пород герефорд, салерс и абердико-ангус число
нормальных зародышей колебалось от 69,8 до 71.2%. т.е. было на одном
уровне.
По результатам эмбриопересадок отмечена тенденция увеличения при­
живляемое™ зародышей симментальской и абердвдо-ангусской породы (до
48,9% и 43,1л соответственно). Наименьшая стельность реципиентов отме­
чена при пересадке эмбрионов породы салерс (37,9%).
Установлена прямая зависимость приживляемости оттаянных эмбрионов
от качества и стадии их развития. При пересадке морул хорошего (4 бал­
ла) и отличного (5 баллов) качества стельность реципиентов составила
41.3 и 42.0%. Приживляемость морул удовлетворительного (3 балла) ка­
чества не превышала 31,9%, что на 9,4% и 10,1% меньше по сразнению с
эмбрионами хорошего и отличного качества.
При пересадке бластоцист хорошего и отличного качества была пору­
чена стельность реципиентов 48,2% и 62.5%. что значительно выше, чем
при пересадке бластоцист с оценкой 3 балла (32.1%) и эта разница дос­
товерна (Р<0.001).
7.5. Технологические и санитарные условия проведения
работ по трансплантации эмбрионов.
При,разработке технологических и санитарных-условий проведения
работ по трансплантации эмбрионов мясного скота мы исходили из постав­
ленных перед нами задач и возможностей их реализации.
'v\;/>-\;-:-•%'/.'
Были сделаны попытки усовершенствования технологии проведения "ра­
бот по трансплантации эмбрионов с.целью повышения ее эффективности и
возможности применения в регионах России и Казахстана. При усовершенс-т
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
- 40 твовании технологии проведения работ по трансплантации эмбрионов в
"стационарных условиях, в опытном хозяйстве Всероссийского научно-исс­
ледовательского института мясного скотоводства (г.Оренбург) при нашем
консультационном участии был построен центр по трансплантации эмбрио­
нов крупного рогатого скота. Объемно-планировочные решения центра
обеспечивают полный цикл технологии трансплантации эмбрионов мясных
пород.
Мобильная форма организации работ по трансплантации эмбрионов
требует создания определенных условий. Для этих целей нами предложена
система прогонов и фиксации животных обеспечивающая спокойный перегон
и безопасную работу с животными. Мобильная форма организации работ по
воспроизводству стада методом трансплантации была использована в пле­
менном заводе "Красный Октябрь" Волгоградской области и опытном хо­
зяйстве Калмыцкого научно-исследовательского института мясного ското­
водства (г.Элиста).
Возможна смешанная форма организации работ по воспроизводству
стада методом трансплантации. При данном варианте на центрах (пунктах)
необходимо иметь выездные подразделения специалистов для работы на
фермах. Как правило эти работы проводятся по сезонам года в наиболее
оптимальные сроки воспроизводства мясного поголовья с использованием в
качестве лаборатории для работы с эмбрионами пункты искусственного
осеменения или других помещений переоборудованных для этих целей.
В племенном • заводе "Парижская Коммуна" Волгоградской области был
разработан и апробирован один из вариантов смешанной формы организации
работ по трансплантации эмбрионов. Предварительно пункт искусственного
осеменения был переоборудован и переоснащен для работы с эмбрионами.
Предложенная нами система загонов, расколов и фиксационных станков
обеспечивает технологичность и безопасность работы с мясным скотом.
Разработанные и усовершенствованные варианты организации работ п<
трансплантации эмбрионов мясных пород прошли апробацию в пяти хозяйс­
твах России и Восточного Казахстана в течение последних шести лет.
Нами был сделан анализ степени влияния вариантов организации ра­
бот на результаты трансплантации эмбрионов (табл.22). При работе t
стационарных условиях 76.5% животных, от числа обработанных гормональ­
ными препаратами, реагировали полиовуляцией и в среднем на донора по­
лучено 7,7+0,18 овуляций. При этом получено больше на донора эмбрионе*
и яйцеклеток Н6.6±0,16), в том числе нормальных эмбрионов (4.6±0. II
по сравнению с мобильным проведением работ. При комбинированном вари
. анте организации, работ выход нормальных эмбрионов в среднем на донор
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
- 41 составил 4,0+0,4, т.е. был практически одинаковим с аналогичными пока­
зателями при работе в стационарных услрвиях.
При пересадке эмбрионов в стационарных условиях наблюдалась за­
метная тенденция увеличения процента стельности реципиентов.
Таблица 22
Влияние вариантов организации работ на результаты
трансплантации эмбрионов.
Варианты организации работ
Показатели
Стационар­
Мобильный
Комбини­
рованный
200
121
136
85
ный
Обработано животных (п)
Число доноров с полиову­
ляцией (п)
Процент от числа обра­
ботанных
Среднее число ову­
ляций на донора
Получено в среднем на
донора эмбрионов
и н/яйцеклеток
в т.ч. нормальных
эмбрионов
' %
дегенерированных
%
н/яйцеклеток
%
Проведено эмбриопересадок
Стельных реципиентов
Процент стельности
Получено телят
247
189
•
76.5
,
68.0
70.2
7,,7±0,18
6.8+0.18
7,1+0.25
6,. 6±0,16
6,5+0,18
5.9+0.21
4,,6+0,11
3,9+0.И
60.0
1.0+0.08
15.4
1.610.11
24.6
4.0+0,4
67.8
0.910.10
69,7
1,,1+0.08
16.7
0,, 9+0. 07
13.6
367
172
241
89
15.3
1.010.11
16.9
146
59
46.9
36.9
40.4
169
84
56
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
- 42 ВЫВОДЫ
1» сезонние появление половой циклики является одной из особен
нрстей воспроизводительной функции мясного скота. Наиболее оптимально
временем года для реализации воспроизводительных возможностей маточно*
уо поголовья является.осень.
' 2 V Подсосный метод содержания телят с матерями увеличивает ,тпродалжительность послеотельного периода и сервис-период в 1.5-2 раза, а
индекс осеменения? коров достигает 2.6±0.12. что на ЗОЯ больше, чем в
группе коров без телят.
3.Оптимальный возраст использования мясных коров в качестве доно­
ров эмбрионов является от 3.6 до 9,5 лет. что обеспечивает стабильные
результата по числу овуляций (8.1*0.27) и Е Ы Х О Д У нормальных
эмбрионов (4.4±0,15) на донора.
4. Определены оптимальные дозы гормональных препаратов для инду• дарования полиовуляции ' у -мясного скота: для ГСЖК она составляет от
2000 ДО 3000 И.Е.. ФСГ - 42 МГ. фоллитропина - 1100 И.Е.
5. Совместное содержание коров-матерей и телят на подсосе сущест­
венно снижает результаты индуцирования полиовуляции у доноров. Крат­
ковременный отъем телят от матерей на 24 часа перед началом гормональ­
ных обработок и осеменением доноров достоверно увеличивает овуляторную
реакцию яичников (Р<0.05) . до 9.8±С. 64 и выход качественных эмбрионов
достигает 5.4*0.47 в. среднем на корову-донора (Р<0.001).
•6. Ректо-цервикальное осеменение доноров в индуцированную охоту
обеспечивает 85.7% ошгодотворяемости яйцеклеток.и выход качественных
эмбрионов 4.8±0,22. что составляет 60.055 от общего числа извлечений.
7. Усовершенствована технология нехирургического метода извлече­
ния эмбрионов с помощью разработанного устройства для этих целей.
Опытный образец катетера, в силу своих конструктивных особенностей.
обеспечивает 96.1ЭГ извлечений от числа овуляций, без отрицательных
последствий на воспроизводительные возможности и плодовитость ко­
ров-доноров.8.. Разработана технология обнаружения эмбрионов в промывной жид­
кости с использованием принципиально нового варианта устройства, пред­
ложенного нами. Новая технология сокращает время поиска эмбрионов в
четыре раза и процент обнаружения эмбрионов достигает 96.8%.
"/-'•• 9. Установлены некоторые морфологические особенности зародышей
мясных пород на определенных стадиях их развития. Эмбрионы на стадии
морулы имеют более рыхлую структуру и связь между бластомерамк заметж
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
- 43 ослаблена. Поздние морулы отличаются трудноразличимыми друг от друга
бластомерами с тенденцией к образованию компактной массы.
10. Наиболее рациональный вариант получения двойневых отелов пу­
тем пересадки одного эмбриона ранее осемененным животным обеспечивает
56,955 стельности реципиентов и до 75.0% двойневых отелов.
11. Разработанный вариант ускоренного режима замораживания эмбри­
онов до -20° С с последующим погружением в жидкий азот обеспечивает
сокращение времени замораживания зародышей на 1 час при сохранении их
жизнеспособности 69.0% и средней приживляемое™ до 43.1%. Быстрый ре­
жим замораживания эмбрионов со скоростью охлаждения 5°С/мин от +20° до
-50°С в парах жидкого азота позволяет получить после оттаивания 69.75?
качественных эмбрионов, приживляемость которых после нехирургической
пересадки составляет 37.7%.
12. Установлены породные различия в устойчивости эмбрионов к низ­
ким температурам. Только 58.4% эмбрионов калмыцкой породы после оттаи­
вания сохраняют свои морфологические качества, что на 18,1 и 15.2% ни­
же по сравнению с зародышами порода симментальская и казахская белого­
ловая.
13. Качество оттаянных эмбрионов взаимосвязано с их приживляемостыо. При пересадке бластоцист хорошего и отличного качества стель­
ность реципиентов
достигает 48.2% и 62.5%. что достоверно выше
(Р<0,001) по сравнению с эмбрионами оценкой 3 балла. Стадия развития
эмбрионов практически не оказывала влияния на их приживляемость.
14. Разработанные варианты технологии воспроизведения маточного
поголовья мясных пород методом трансплантации, обеспечивают гормональ­
ное индуцирование полиовуляции у 68.0-76.535 обработанных животных.
средний выход нормальных эмбрионов от 3.9Ю.11 до 4.6±0.11 или 60,0?" i;
69,1% от общего числа извлечений, что является вполне удовлетворитель­
ными результатами для мясного скота. При этом стельность реципиентов
при нехирургической пересадке свежеполученных и замороженно-оттаянных
эмбрионов достигает 46.9%.
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.
1. Разработанная технология трансплантации эмбрионов приемлема
для практического использования в мясном скотоводстве регионов России
и Казахстана.
2. Для повышения результативности гормонального индуцирования по­
лиовуляции и ошюдотворяемости яйцеклеток у доноров необходимо прово-
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
- 44 дить кратковременный отъем телят от матерей на 24 часа перед началом
гормональных.обработок и осеменением коров-доноров.
3. Для нехирургического извлечения эмбрионов предлагается уст­
ройство. которре в силу своих конструктивных особенностей обеспечивает
максимальное извлечение эмбрионов без отрицательных последствий на
воспроизводительные возможности коров-доноров.
'4. Предлагается принципиально новый вариант устройства для филь­
трации эмбрионов из промывной жидкости, который сокращает время поиска
эмбрионов в четыре раза при их максимальном обнаружении.
5. С целью увеличения числа двойневых отелов и выхода телят в
среднем по стаду предлагается проводить пересадку эмбрионов ранее осе­
мененным животным.
СПИСОК ОПУБЛИКОВАНШХ РАБОТ
ПО ОСНОВНЫМ ПОЛОЖЕНИЯМ ДИССЕРТАЦИИ.
1. Гавриков A.M.. Маслев Ц., Алексеенко А.. Кракосевич А.. Чичилов А. Резултати от използуването на крови от месодайни породи в качеството на донори за получаване на ембриони //Животновъдни науки 1988
80-82.
2. Алексеенко А.. Гавриков А... Кракосевич А.. Маслев Ц. .Прилагане
на допъянителни биотехнически методи в програмата за трансплантация на
• эмбриони //Животновъдни науки. 1988 N6. София. С. 84-86.
3. Алексеенко А.. Гавриков А.. Маслев Ц.. Карадочев М.. Ралчев
И.. Лалев И. Изучаване на врьзката между концентрацията на прогестеро­
на в крьвта и овариалния отговор при крави - донори на ембриони //Жи­
вотновъдни науки. 1989. S 8 . София. С. 63-65.
4. Гавриков А.. Маслев Ц.. Алексеенко А.. Карадочев М. Някои ас­
пекта на криоконсервацията и реанимацията на говяжди ембриони// Живот­
новъдни науки. 1989. N8.- София. С. 66-69.
..: 5. Гавриков A.M.. Алексеенко А.Н.. Маслев Ц.И. Эффективность ре­
жимов замораживания и оттаивания эмбрионов//3оотехния. "1989, N 7. с.
54-55.
•"• . 6 . Гавриков А...Маслев Ц.. Дронин А. Усъвършенствуване на техногинята за нехирургично получаване и трансплантация на ембриони при
;крави // Живитновъдни науки. 1990. N8. София. С 17-20.
7. Масле^ Ц.. Влахов К.. Ралчев И.. Карадочев М.. Лалев И.. Гав­
риков А.. Алексеенко А.. Дронин А.- Методически- указания за трансплантащ«? на ембриони при месодайни породи говеда. ;Троян. Болгария. 1990.
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
- 45 С. 1-32.
'•* 8. Сергеев Н.И.. Гавриксв A.M.. Алесеенко А.Н., Дронин А.П.. Шлет
лев Ц.И:, Корецкая Л.И. Методические рекомендации по трансплантации
эмбрионов мясного скота. Дубровицы. 1990. С. 1-40.
9. Гавриков A.M.. Маслев Ц.И.. Алексеенко А.Н.. Дронин А.П. Уско­
ренное воспроизведение высокопродуктивного мясного
скота
методом
трансплантации эмбрионов // Доклады ВАСХНИЛ, 1991. N2. С. 40-42.
10. Гавриков A.M., Кракосевич А.Н.. Алексеенко А.Н.. Маслев Ц.
Устройство для фильтрации эмбрионов / Авт. свид. N 1655486 от 15 фев­
раля 1991 Г.
И . Gavrlcov A.M.. Maslev T.J.. Alekseer.Ro A. N.. Dronin A. P. • Ac­
celerated reproduction of high-yielding beef cattle by embruo trans­
plantation method. New York. N. Y.Allerton Press Soviet agricultural
sciences 1991. P. 39-41.
12. Гавриков A.M.. Сергеев Н.И. Устройство для нехирургического
извлечения эмбрионов у буйволиц и коров / Авт. свид. N1762914 от 22
мая 1992.
13. Гавриков A.M.. Абуов А.. Кинзеев В.'. Мукминов М. Осеменение
коров-доноров мясных пород при суперовуляции // Молочное и мясное ско­
товодство. 1992. N3. С. 16-17.
14. Гавриков А.М.. Алексеенко А.Н.,Маслев Ц.И. Суперовуляторная
реакция у коров-доноров на экзогенные гонадотропины // Молочное и мяс­
ное скотоводство. 1991-. N6. С. 25-26.
15. Гавриков A.M.. Мукминов М.М.. Кинзеев В.Н. Индивидуальные к
породные особенности коров-доноров мясных пород при гормональном вызы­
вании суперовуляции. Сборник научных трудов, г. Оренбург. 1992, С
34-37.
»
16. Гавриков A.M.. Маслев Ц.И. Особенности использования мясных
коров в качестве доноров эмбрионов //Зоотехния 1992. N9-10. С. 34-35.
17. Гавриков A.M.. Мукминов М.М.. Кинзеев В.Н.. Илдашев М.С. Кри­
терии отбора и подготовки мясных доноров к суперовуляции. Тезисы док­
ладов XII Межрегиональной Научно-практической конференции. 31 марта 2 апреля. Оренбург. 1993. С. 54-55.
18. Гавриков A.M., Сергеев Н.И. Методические рекомендации по от­
бору. подготовке к суперовуляции и осеменению коров мясных пород. Дуб­
ровицы. 1993. С. 1-24.
19. Гавриков А.М., Кинзеев В.Н.. Мукминов М.М.. Влдашев М.С. Вли­
яние сезона года на результаты трансплантации эмбрионов // Молочное и
мясное скотоводство. 1993. Ы5. С. 19-21.
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
- 46 20. Гавриков А.. Кинзеев В., Абуов А., Мукминов М.. Басанов Е.
Использование мясных коров в качестве доноров эмбрионов // Молочное и
мясное скотоводство. 1993. N1. С. 22-24.
21. Гавриков А. М.. Смыслова Н. И.. Тарадайник Т. Е.. Суменкова Н.
Качество и приживляемость эмбрионов // Молочное и мясное скотоводство.
1994. N3. С. 16-18.
22. Гавриков А.. Дронин А. Приживляемость эмбрионов мясных короз
// Зоотехния. 1994. N7. С. 30-31.
23. Гавриков A.M., Сергеев Н.И.. Прокофьев М.И.. Павлов Е.А.. Советкин С В . Технология трансплантации эмбрионов в мясном скотоводстве
(Рекомендации). Москва. 1994. С. 1-61.
л
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
Подписано к печати 7 . 0 4 . 1 9 9 5 г.
Заказ 8 5 1 .
Тираж 1 0 0 экз.
Объем 1,9 уч.-взц. п.
ПМП ВИЖа
•
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
14
Размер файла
1 249 Кб
Теги
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа