close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Особенности спектра жирных кислот эритроцитов у больных хронической формой ишемической болезни сердца при лечении симвастатином

код для вставкиСкачать
На правах рукописи
КИРИЧЕНКО ДАРЬЯ АЛЕКСАНДРОВНА
ОСОБЕННОСТИ СПЕКТРА ЖИРНЫХ КИСЛОТ ЭРИТРОЦИТОВ У
БОЛЬНЫХ ХРОНИЧЕСКОЙ ФОРМОЙ ИШЕМИЧЕСКОЙ БОЛЕЗНИ
СЕРДЦА ПРИ ЛЕЧЕНИИ СИМВАСТАТИНОМ
14.03.06 – фармакология, клиническая фармакология
03.01.04 – биохимия
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени
кандидата биологических наук
Томск -2015
2
Работа выполнена на базе центральной научно-исследовательской лаборатории
Государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального
образования «Красноярский государственный медицинский университет имени профессора
В.Ф. Войно-Ясенецкого» Министерства здравоохранения Российской Федерации и в
Федеральном
государственном
бюджетном
научном
учреждении
«Научноисследовательский институт фармакологии и регенеративной медицины имени Е.Д.
Гольдберга»
Научный руководитель:
доктор медицинских наук,
профессор, академик РАН,
заслуженный деятель науки РФ
Дыгай Александр Михайлович
Научный руководитель:
кандидат медицинских наук
Котловский Михаил Юрьевич
Официальные оппоненты:
Суханова Галина Алексеевна, доктор биологических наук, профессор, Государственное
бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования
«Сибирский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения
Российской Федерации, кафедра биохимии и молекулярной биологии, профессор кафедры
Савченко Андрей Анатольевич, доктор медицинских наук, профессор, Федеральное
государственное бюджетное научное учреждение «Научно-исследовательский институт
медицинских проблем Севера», лаборатория клеточно-молекулярной физиологии и
патологии, руководитель лаборатории
Ведущая организация: Федеральное государственное бюджетное научное учреждение
«Научно-исследовательский институт кардиологии»
Защита состоится «____» _____________ 2015 г. в ____ часов на заседании диссертационного
совета Д 001.031.01 при Федеральном Государственном бюджетном научном учреждении
«Научно-исследовательский институт фармакологии и регенеративной медицины имени Е.Д.
Гольдберга» (634028, г. Томск, пр. Ленина, 3; www.pharmso.ru)
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Федерального Государственного
бюджетного научного учреждения «Научно-исследовательский институт фармакологии и
регенеративной медицины имени Е.Д. Гольдберга»
Автореферат разослан «____» ___________ 2015 г.
Ученый секретарь
диссертационного совета,
доктор биологических наук
Амосова Евдокия Наумовна
3
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность темы исследования. За последнее десятилетие
ишемическая болезнь сердца (ИБС) занимает одно из ведущих мест в структуре
смертности от болезней системы кровообращения (БСК), поэтому
прогнозирование ее течения, эффективность терапии и профилактики является
актуальной проблемой современной кардиологии. Наиболее значимыми
факторами, влияющими на развитие сердечно-сосудистых заболеваний (ССЗ),
являются нарушение липидного обмена, артериальная гипертензия, курение,
питание, недостаточная физическая активность, ожирение, а также половая
принадлежность [Драпкина О.М. и др., 2010; Бойцов С.А. и др., 2012; Яковлев
В.М. и др., 2012].
Морфологической основой ИБС является атеросклеротическое поражение
коронарных артерий. Механизм формирования атеросклероза связан с
нарушением липидного обмена, в частности, повышенным уровнем
триацилглицеролов (ТГЛ), холестерол-липопротеинов низкой (ХС-ЛПНП),
очень низкой плотности (ХС-ЛПОНП) и низким уровнем холестероллипопротеинов высокой плотности (ХС-ЛПВП) [Буеверова Е.Л. и др., 2008;
Косарев В.В. и др., 2010].
Доказательная база по эффективности, безопасности и переносимости
статинов
была
получена
благодаря
многим
контролируемым
рандомизированным исследованиям с применением малых (10-20 мг),
оптимальных (40 мг), а также максимальных (80-160 мг) доз препарата [Pin B.
et al., 1999; Corti R. et al., 2005; Pedersen T.R. et al., 2005; Miles J.M., 2006;
Сусеков А.В., 2007; Сусеков А.В. и др., 2011]. Статины, помимо снижения
синтеза холестерола, способны оказывать влияние на метаболизм жирных
кислот (ЖК). Механизмы действия препарата связаны с интенсивным
поглощением клетками транспортеров ЖК – ХС-ЛПНП, а также со
способностью статинов оказывать влияние на экспрессию десатураз и элонгаз –
ферментов, активирующих синтез длинноцепочечных ЖК [Risé P. et al., 1997;
Zhou G. et al., 2010; Nozue T. et al., 2013]. Необходимо отметить, что ЖК,
обеспечивая целостность биомембран, регулируя активность клеточных
функций, участвуя в процессах энергообразования и воспаления, играют
важную роль в патогенезе сердечно-сосудистых заболеваний [Титов, В.Н.,
2002; 2004; Галявич А.С. и др., 2011].
Для больных высокого и очень высокого риска рекомендовано сразу
выбирать максимально агрессивную тактику гиполипидемической терапии
[Reiner Z. et al., 2011]. В этом случае, одним из подходов к достижению
целевого уровня липидных фракций является использование препаратов в
максимально разрешенных дозах с последующим соблюдением контроля
безопасности терапии [Марцевич С.Ю. и др., 2008]. Доказан положительный
эффект статинов в стабилизации уровня атерогенных липидов в плазме крови,
однако полностью отсутствуют данные о влиянии препаратов данной группы в
разных дозировках на жирнокислотный состав мембран эритроцитов, который
отражает содержание данного компонента в мембранах других клеток
4
организма. Исследование этого вопроса позволяет выявить роль ЖК в
механизме фармакологического эффекта статинов.
Степень разработанности. Существуют экспериментальные данные о
воздействии симвастатина на жирные кислоты в составе мембран клеточных
линий моноцитов и гепатоцитов [Risé P. et al., 1997; Galli C., 2005]. Отмечено
влияние симвастатина в дозе 20 мг/сутки на отдельные показатели
эссенциальных ЖК в плазме крови у пациентов мужского пола с диагнозом
ИБС [de Lorgeril M. et al., 2005], а также на содержание мононенасыщенных и
насыщенных ЖК у мужчин с гиперхолестеринемией [Jula A. et al., 2005].
Механизм действия симвастатина связывают не только со снижением
концентрации
ХС-ЛПНП,
но
и
с
преимущественным
синтезом
длинноцепочечных ЖК [Risé P. et al., 1997; Zhou G. et al., 2010; Nozue T. et al.,
2013], а также образованием сывороточного альбумина, способствующего
оттоку неэстерифицированных жирных кислот и холестерола из
периферических тканей организма [Grundy S.M., 1994; Ha C.E. et al., 2009]. В то
же время, влияние исследуемого препарата в оптимальных и высоких дозах на
жирнокислотный состав мембран эритроцитов остается менее изученным.
Поскольку мембрана эритроцитов наиболее объективно отражает глубокие и
долговременные изменения жирных кислот в составе фосфолипидов [Parks J.S.
et al., 1989], а также является универсальной моделью плазматических мембран
других клеток организма [Постнов Ю.В. и др., 1987], то является актуальным
исследование особенностей спектра жирных кислот эритроцитов у больных
ИБС при лечении разными дозами симвастатина.
Цель исследования. Выявить особенности спектра жирных кислот
мембран эритроцитов у пациентов с ишемической болезнью сердца до и после
лечения симвастатином в разных дозировках.
Задачи исследования:
1. Определить состав отдельных ЖК в мембранах эритроцитов у больных ИБС
до и после лечения разными дозами симвастатина.
2. Оценить комплексные параметры ЖК эритроцитов по содержанию сумм
насыщенных, мононенасыщенных, ненасыщенных ЖК, ЖК-субстратов
мембран, глицерофосфолипидов, сфингофосфолипидов, витамина F, а также
коэффициент эффективности метаболизации эссенциальных ЖК у больных
ИБС до и после лечения разными дозами симвастатина.
3. Выявить зависимость содержания отдельных ЖК и их комплексов от
принадлежности к полу и дозы симвастатина.
Научная новизна. Впервые исследован спектр отдельных ЖК мембран
эритроцитов и разработаны комплексные характеристики ЖК у пациентов с
ИБС до и после приема симвастатина. Показано влияние препарата на
метаболизм ЖК клеточных мембран, которое характеризуется снижением
суммы НЖК, индекса ненасыщенности (ИН), ЖК-субстратов мембран и
повышением суммы НасЖК, мононенасыщенных ЖК (МНЖК) и ЖКсубстратов сфингофосфолипидов (СФЛ). После двухмесячной терапии
симвастатином отмечена нормализация отдельных показателей ω6 НЖК
(дигомо-γ-линолевой (С20:2) ЖК у мужчин, арахидоновой (С20:4) ЖК у
5
женщин), ω9 – гондоиновой (С20:1) ЖК (у всех лиц, за исключением женщин,
принимавших препарат в суточной дозе 40 мг), пальмитиновой (С16:0),
маргариновой (С17:0), арахиновой (С20:0) НасЖК, ЖК-субстратов витамина F
и глицерофосфолипидов (ГФЛ).
Впервые установлены изменения ЖК мембран эритроцитов в зависимости
от пола и дозы препарата. Если у женщин прием препарата приводил к
снижению отношения 20:3 ω6+20:5 ω3/22:6 ω3, то у мужчин - к повышению
уровня дигомо-γ-линолевой (С20:2) ω6 ЖК и гексакозановой (С26:0) ЖК. При
лечении суточной дозой симвастатина равной 40 мг выявлено увеличение
маргариновой (С17:0) ЖК, тогда как при лечении дозой 80 мг/сутки
наблюдалось снижение пальмитиновой (С16:0) ЖК.
В результате приема симвастатина выявлены различия по отдельным
показателям и комплексам ЖК. У женщин терапия в суточной дозе 40 мг
приводила к увеличению пентадекановой (С15:0) ЖК. Отмечено уменьшение
содержания стеариновой (С18:0) ЖК, соотношения С20:4 ω6/С22:6 ω3,
коэффициента эффективности метаболизации (КЭМ) эссенциальных ЖК и
увеличение соотношения сумм ω3/ω6 у женщин после приема препарата в дозе
80 мг/сутки. Снижение суммы ω3 ЖК и увеличение миристиновой (С14:0) ЖК
выявлено у мужчин при лечении симвастатином дозой 40 мг/сутки.
Теоретическая и практическая значимость работы. Результаты
исследования могут быть использованы в клинической практике для
назначения оптимальных дозировок симвастатина, а также в комбинированной
терапии с препаратами полиненасыщенных ЖК (ПНЖК) с целью улучшения
терапевтического эффекта. По результатам исследования, в большинстве
случаев, установлен равнозначный эффект от используемых дозировок
препарата на отдельные показатели ЖК и их комплексные параметры, что
указывает на предпочтительность использования симвастатина в меньшей дозе,
с точки зрения экономической целесообразности, а также с целью
предупреждения побочных эффектов от лечения в максимальных дозах, таких
как миопатия, рабдомиолиз. Полученные результаты расширяют имеющиеся
представления о спектре фармакологического действия симвастатина.
На основе исследования оформлены патенты (RU) на изобретения №
2503405 и «способ индивидуальной количественной оценки развития
ишемической болезни сердца» и №2535025 «способ индивидуальной
количественной оценки риска развития гипертонической болезни». Результаты
исследования внедрены в научный процесс на кафедрах биологической химии с
курсом медицинской, фармацевтической и токсикологической химии и
фармакологии с курсами клинической фармакологии, фармацевтической
технологии и курсом последипломного образования КрасГМУ.
Методология и методы исследования. Согласно поставленным задачам
выбраны современные высокоинформативные методические подходы,
имеющиеся в научно-исследовательской лаборатории ГБОУ ВПО КрасГМУ им.
проф. В.Ф. Войно-Ясенецкого Минздрава России. В качестве объекта
исследования были использованы образцы выделенных эритроцитов у
пациентов мужского и женского пола с диагнозом ИБС до начала лечения и
6
через 2 месяца терапии симвастатином в разных дозировках. В исследовании
применялись лабораторные методы, включающие биохимический и
развернутый анализ крови с целью исключения инфаркта миокарда, для оценки
функционального состояния печени и почек, а также контроля побочных
эффектов симвастатина. Состояние сердечно-сосудистой системы оценивалось
с помощью функциональных методов, включающих электрокардиографию,
велоэргометрию и эхокардиографию. Жирнокислотный состав мембран
эритроцитов определяли методом газожидкостной хроматографии.
Положения, выносимые на защиту:
1. Симвастатин, у пациентов с ишемической болезнью сердца, не влияет на
содержание заменимых ω7, незаменимых дигомо-γ-линоленовой (С20:3) ω6 и
тимнодовой (С20:5) ω3 жирных кислот. Реализация фармакологического
эффекта происходит за счет нормализации производных ω6 жирных кислот
(дигомо-γ-линолевой (С20:2) у мужчин, арахидоновой (С20:4) у женщин), ω9
гондоиновой (С20:1) (за исключением женщин при лечении дозой 40 мг/сутки),
уровня насыщенных жирных кислот (пальмитиновой (С16:0), маргариновой
(С17:0), арахиновой (С20:0)), жирных кислот-субстратов витамина F и
субстратов глицерофосфолипидов.
2. Снижение уровня холестерола-липопротеинов низкой плотности, а также
взаимные превращения жирных кислот, на фоне лечения, являются причинами
уменьшения содержания пальмитиновой (С16:0) и олеиновой (С18:1) ω9
жирных кислот и повышения отдельных длинноцепочечных и суммы
насыщенных жирных кислот, мононенасыщенных за счет заменимых ω9
жирных кислот, а также жирных кислот-субстратов сфингофосфолипидов.
Дефицит незаменимых ω6 жирных кислот не компенсируется повышением ω9
жирных кислот и приводит к уменьшению суммы ненасыщенных жирных
кислот, индекса ненасыщенности и жирных кислот-субстратов мембран.
3. В большинстве случаев (75%), у пациентов с ишемической болезнью сердца,
влияние симвастатина в вышеуказанных дозах вызывало одинаковые эффекты
на исследуемые параметры жирных кислот. Наличие изменений по их
отдельным показателям у женщин, связанных с уменьшением коэффициента
эффективности метаболизации эссенциальных жирных кислот после лечения
дозой 80 мг/сутки, а у мужчин - с повышением уровня гексакозановой (С26:0)
жирной кислоты, указывает на предпочтительность использования более
низкой дозы препарата.
Степень достоверности и апробация результатов. Высокая степень
достоверности полученных результатов подтверждается достаточным объемом
исследуемого материала с привлечением современных лабораторных и
инструментальных методов, а также использованием адекватных критериев
статистического анализа.
Результаты исследования представлены на международных научных
конференциях «Современные проблемы экспериментальной и клинической
медицины» (Банкок, 2009), «Фундаментальные и прикладные исследования в
медицине» (Сочи, 2011), «Фундаментальные и прикладные проблемы
медицины и биологии» (Дубай, 2012). Основные положения работы доложены
7
и обсуждены на заседании проблемной комиссии по «Фундаментальной
медицине» на кафедре биологической химии с курсом медицинской,
фармацевтической и токсикологической химии ГБОУ ВПО КрасГМУ им. проф.
В.Ф. Войно-Ясенецкого Министерства здравоохранения РФ (Красноярск, 2014)
и ФГБУ «НИИ фармакологии» СО РАМН (Томск, 2014).
По теме диссертации опубликовано 11 печатных работ, из них 8 – в
рецензируемых журналах, рекомендованных ВАК Минобрнауки РФ.
Объем и структура работы. Диссертация написана в традиционном
стиле и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований
изложенных в третьей главе, заключения и выводов. Работа изложена на 160
страницах компьютерного текста, содержит 27 таблиц и 15 рисунков.
Библиографический список включает 442 источника, из них 167 отечественных
и 255 иностранных.
Личное участие автора состояло в сборе, проведении исследования,
анализе полученных результатов для диссертационной работы. Автором лично
осуществлен анализ литературных данных, получение и интерпретация
основных результатов исследования, их статистическая обработка и подготовка
к печати статей и тезисов по теме диссертации.
ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ
Во
введении
обоснована
актуальность
темы
диссертации,
сформулированы цель и задачи исследования, научная новизна, теоретическая
и практическая значимость работы.
В первой главе проведен анализ отечественной и зарубежной научной
литературы по теме диссертации. В первом разделе представлены сведенья об
эпидемиологии и этиологии ИБС, изложены основные представления о
патогенезе атеросклероза. Представлены основные данные клинических
исследований по эффективности лечения статинами пациентов с
гиперлипидемией и ИБС, механизмы основного и плейотропных эффектов, а
также побочные действия от приема препаратов данной группы. Последние
разделы посвящены роли жирных кислот и их метаболитов в развитии и
формировании сердечно-сосудистой патологии.
Вторая глава диссертации посвящена описанию материалов и методов
исследования. Оценка эффектов симвастатина проведена у 95 пациентов с
диагнозом ИБС (37 женщин и 58 мужчин), жителей города Красноярска, в
рамках открытого, рандомизированного, контролируемого и параллельного
исследования продолжительностью 2 месяца на базе ЦНИЛ ГБОУ ВПО
КрасГМУ им. проф. В.Ф. Войно-Ясенецкого Минздрава России и КГБУЗ
«КМКБ № 20 имени И.С. Берзона» г. Красноярска. Исследование утверждено
на заседании локального этического комитета ГБОУ ВПО КрасГМУ им. проф.
В.Ф. Войно-Ясенецкого Минздрава России (выписка из протокола №12/2008 от
26 ноября 2008 г.). Средний возраст женщин составлял 56,2±6,3 лет, мужчин −
55,2±6,1 лет. Критериями включения в основную группу являлись: возраст - от
40 до 70 лет, пол - мужчины и женщины, верифицированный диагноз ИБС
8
(стенокардия напряжения 1-2 функционального класса и инфаркт миокарда
давностью более 6 месяцев), наличие дислипидемии (IIa, IIв, III, IV типов, при
ОХ > 5,2 мМ/л, ТГ > 1,7 мМ/л), неэффективность гиполипидемической
(гипохолестериновой) диеты, добровольное информированное согласие на
участие в исследовании. Критериями исключения пациентов из исследования
являлись: инфаркт миокарда, прогрессирующая стенокардия, острое нарушение
мозгового кровообращения и транзиторная ишемическая атака, тромбоэмболия
легочной артерии менее чем за 6 месяцев до обследования, стенокардия
напряжения 3-4 функционального класса, тяжелые нарушения функции печени,
почек, острые и хронические заболевания в стадии обострения, ожирение более
1 степени, сахарный диабет 1-го и 2-го типа тяжелой степени, гипотиреоидизм,
порфирия,
миопатия,
повышенная
активность
ферментов
аспартатаминотрансферазы (АЛТ) и аланинаминотрансферазы (АСТ) более 3
верхних пределов норм и злоупотребление алкоголем.
Критерии преждевременного прекращения исследования включали
выраженные побочные эффекты от приема симвастатина и отсутствие
дальнейшего желания к сотрудничеству.
Группу контроля составили условно здоровые лица в количестве 51
человека (31 женщина и 20 мужчин), жителей города Красноярска, результаты
исследования которых принимались за норму. Средний возраст женщин
составлял 49,4±5,6 лет, мужчин − 47,6±7,7 лет. Критериями включения для
данной группы являлись: возраст – от 40 до 65 лет, пол – мужчины и женщины.
Критериями исключения являлись: наличие ИБС, острые заболевания,
хронические заболевания в стадии обострения, наличие сахарного диабета,
нарушения липидного обмена, тяжелые нарушения функции печени и почек,
артериальная гипертензия.
Все
больные
получали
рекомендации
по
соблюдению
гиполипидемической диеты и базисную терапию антиангинальными и
гипотензивными препаратами (β-адреноблокаторы, антагонисты кальция,
нитраты, ингибиторы ангиотензин-превращающего фермента, диуретики),
антиагреганты по показаниям (ацетилсалициловую кислоту), а также
сахароснижающие препараты у пациентов с диагнозом НТУ и сахарный диабет.
Клиническая
таблице 1.
характеристика
обследованных
лиц
представлена
в
Таблица 1
Общая клиническая характеристика исследуемых групп
Показатели
1
Количество пациентов
Женщины
Пол
Мужчины
Основная группа
абс.число
%
2
3
95
100
37
39
58
61
Контрольная группа
абс.число
%
4
5
51
100
31
61
20
39
9
Продолжение таблицы 1
1
Средний возраст (лет)
Гипертоническая болезнь (III стадия)
Достигнутый целевой уровень АД
Достигнутая степень АГ 1
Стенокардия напряжения:
I ФК
II ФК
III ФК
IV ФК
Постинфарктный кардиосклероз
НТУ и сахарный диабет
2
55,53±6,17
36
24
12
95
28
67
0
0
95
15
3
38
67
33
100
29
71
0
0
100
16
4
48,53±6,33
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
5
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
Целевой уровень АД, равный величине менее 140/90 мм.рт.ст., был
достигнут у большинства пациентов основной группы.
После месяца отсутствия гиполипидемической терапии первая подгруппа
больных ИБС в количестве 48 человек (20 женщин и 28 мужчин) в течение 2-х
месяцев получала препарат «СимваГЕКСАЛ®», с действующим веществом
симвастатин в дозировке 40 мг/сутки. Средний возраст данной подгруппы
составлял 58,3±6,0 лет у женщин и 56,1±6,8 лет у мужчин. Вторую подгруппу
больных ИБС составили 47 пациентов (17 женщин и 30 мужчин), которым
назначали данный препарат в дозировке 80 мг/сутки. Средний возраст женщин
данной подгруппы составил 52,9±5,6 лет, у мужчин 54,4±5,5 лет. Выбор
используемого дженерика определялся высокой степенью соответствия по
эффективности и безопасности влияния на уровень липидов оригинальному
препарату [Аронов Д.М. и др., 2003; Марцевич С.Ю., 2006; 2008]. При
назначении симвастатина в дозировке 40 мг/сутки, с целью предупреждения
осложнений, после месяца приема осуществляли контроль над соблюдением
рекомендаций, проводили развернутый и биохимический анализ крови, тогда
как при лечении дозой 80 мг/сутки контроль в первый месяц исследования
осуществлялся раз в две недели.
Общеклиническое обследование на ранних этапах работы включало
опрос, физикальный осмотр, определение антропометрических параметров тела
(рост, масса, индекс массы тела, отношение окружности талии и окружности
бедер и др.).
Для оценки функционального состояния печени и почек у пациентов, а
также для контроля за побочными эффектами симвастатина, проводили
биохимический анализ сыворотки крови на автоматическом анализаторе «Star
Fax 1904+» (США), включающий определение уровня глюкозы, альбумина,
общего белка, мочевой кислоты, креатинина, мочевины, общего и прямого
билирубина, активности АЛТ, АСТ, креатинфосфокиназы, α-амилазы,
щелочной фосфатазы и лактатдегидрогеназы. Для оценки липидного обмена
определяли уровни общего холестерола (ОХ), ТГЛ и ХС-ЛПВП. Содержание
ХС-ЛПНП и ХС-ЛПОНП рассчитывали по формуле Фридвальда (1972)
10
[Friedwald W.T. et al., 1972]. Для расчета коэффициента атерогенности (КА)
применяли формулу Климова (1999) [Климов А.Н. и др., 1999]. Развернутый
анализ крови проводили на гематологическом анализаторе «Medonic CA 620»
(Швеция). Состояние углеводного обмена оценивали с помощью теста
толерантности к глюкозе [Дедов И.И. и др., 2003].
Исследование состояние сердечно-сосудистой системы включало
электрокардиографию (ЭКГ), велоэргометрию (ВЭМ) на базе диагностической
системы «Валента» (Россия) и эхокардиографию (ЭхоКГ) на аппарате УЗ
диагностики «Aloka 900» (Япония).
Жирнокислотный
состав
эритроцитов
определяли
методом
газожидкостной хроматографии с предварительной пробоподготовкой [Ланкин
В.З. и др., 1971]. Очистку ЖК проводили методом тонкослойной хроматографии
[Ruggieri S., 1962]. Для определения и количественного анализа эфиров ЖК
использовали газожидкостный хроматограф «Agilent technologies 6890N» и
масс-спектрометр «Agilent technologies 5975С VL MSD» (США). Разделение
смеси эфиров ЖК производили на капиллярной колонке «OMEGA WAX TM»
(США) длинной − 30 м, внешним диаметром − 0,25 мм и толщиной пленки −
0,25 мкм.
Идентификацию ЖК осуществили на основании времен удерживания
стандартных образцов ЖК и «библиотек» масс-спектрометрических параметров
«NIST MS Search 2.0» и «AMDIS Analysis» с применением компьютерной
программы «MSD ChemStation D.02.00.275» (США) по методу нормализации
пиков. Единицы измерения ЖК выражались в процентах от общей суммы
площадей пиков ЖК.
Проведено исследование содержания отдельных НЖК и НасЖК и их
суммарных показателей. В сумму мононенасыщенных ЖК входили заменимые
ЖК такие, как С16:1 ω7, С18:1 ω9, С18:1 ω7, С20:1 ω9, С22:1 ω9, С24:1 ω9 ЖК.
В качестве интегрального показателя, указывающего на перераспределение ЖК
состава, использовался индекс ненасыщенности (ИН), рассчитанный как
отношение процентного содержания НЖК к НасЖК умноженное на 100.
Содержание в клетках ЖК-субстратов витамина F вычисляли как сумму
незаменимых ЖК, включающую С18:2 ω6, С18:3 ω3, С20:4 ω6, С20:5 ω3, С22:6
ω3 ЖК [Ford E.S. et al., 2000; Таганович А.Д., 2008]. Содержание ЖКсубстратов ГФЛ рассчитывали как сумму С14:0, С16:0, С18:0, С20:0, С22:0, ω7
ЖК - С16:1, С18:1, ω9 ЖК - С18:1, С20:1, ω6 ЖК - С18:2, С20:2, С20:3, С20:4 и
ω3 ЖК - С18:3, С20:5, С22:6 ЖК. Состав ЖК-субстратов СФЛ рассчитывали
как сумму С24:0 и С24:1 ЖК. В качестве субстратов мембран эритроцитов
использовали процентное содержание НЖК с 2-мя и более двойными связями
ЖК [Казимирко В.К., 2004; Титов В.Н. и др., 2006].
Способность ЖК, в составе липидов, наиболее полно обеспечивать синтез
структурных компонентов клеточных мембран характеризовал коэффициент
эффективности метаболизации (КЭМ) ПНЖК, рассчитанный как отношение
С20:4/ С20-С22 ω6 и ω3 [Нечаев А.П., 2007].
Статистическую обработку полученных результатов проводили с
использованием пакета прикладной программы «SPSS 11.5». Проверку
11
нормальности распределения показателей осуществляли с помощью теста
Колмогорова-Смирнова и Шапиро-Уилкоксона. С учетом значительных
отклонений отдельных значений процентного содержания ЖК мембран
эритроцитов была сформирована группа из 69 пациентов (26 женщин и 43
мужчины), из которых первая подгруппа в количестве 34 человек (14 женщин и
20 мужчин), принимала симвастатин в дозе 40 мг/сутки, тогда как вторая - в
количестве 35 человек (12 женщин и 23 мужчины) принимала препарат в дозе
80 мг/сутки. Для оценки достоверности различий несвязанных выборок
использовали t-критерий Стьюдента-Фишера. Для сравнения изменений между
группами больных ИБС до и после лечения использовали T-тест Стьюдента для
парных выборок. Различия сравниваемых величин считали достоверными при
уровне значимости р<0,05.
Третья глава диссертации посвящена описанию полученных результатов
влияния симвастатина на содержание жирных кислот мембран эритроцитов.
Числовые данные представлены в виде таблиц и рисунков.
Четвертая глава диссертации посвящена обсуждению полученных
результатов исследования с привлечением литературных данных.
Влияние симвастатина на липидный спектр сыворотки крови у
исследуемых пациентов
Первый раздел исследований предусматривал изучение исходных
показателей липидного профиля сыворотки крови у больных ИБС в сравнении
с таковыми в контрольной группе. Результаты показали более высокий уровень
ХС-ЛПНП, ХС-ЛПОНП, ТГЛ, ОХ и показателя КА. Только у женщин отмечено
снижение уровня ХС-ЛПВП (Таблица 2).
Таблица 2
Показатели липидного спектра сыворотки крови у лиц, условно здоровых и
больных хронической формой ИБС (М±m)
Липидный
спектр крови
1
ТГЛ
ХС-ЛПВП
ХС-ЛПНП
ХС-ЛПОНП
ОХ
КА
Содержание в мМ/л
женщины
условно
больные ИБС
здоровые
(n=31)
(n=23)
2
3
0,96±0,05
1,94±0,10 ***
1,48±0,06
1,31±0,05*
3,27±0,11
3,90±0,26*
0,49±0,03
0,93±0,11***
5,00±0,11
5,90±0,29*
4,18±0,11
4,93±0,30*
условно
здоровые
(n=20)
4
1,05±0,06
1,21±0,03
2,95±0,11
0,49±0,04
4,70±0,15
3,86±0,16
мужчины
больные ИБС
(n=43)
5
1,47±0,09***
1,33±0,05
3,42±0,19*
0,67±0,04**
5,22±0,15*
4,35±0,17*
Примечание: Здесь и далее: М – среднее значение, m – ошибка среднего; n – количество пациентов;
звездочками обозначена степень достоверности отличий сравниваемых значений (* ,** и *** соответствуют
p<0,05, p<0,01, p<0,001), КА-коэффициент атерогенности в у.е.
Все изменения липидного спектра согласуются с представлениями о
наличии гиперлипидемии у исследуемых лиц [De Backer G. et al., 2003; Grundy
12
S.M., 2004; Нарышкина С.В. и др., 2005; Сусеков А.В., 2007; Буеверова Е.Л. и
др., 2008; Лиходед В.Г. и др., 2010].
На фоне приема симвастатина в дозировке 40 мг/сутки у женщин
выявлено снижение уровня ХС-ЛПНП на 50%, ОХ на 31% и КА на 36,4% по
сравнению с исходными данными (Рисунок 1).
мМ/л
8
6
4
2
0
***
**
34%
50%
*
16,7%
ТГЛ
***
***
31%
***
**
25%
36,4% 25,6%
ХС ЛПВП
ХС ЛПНП
ХС ЛПОНП
ОХ
КА
женщины с ИБС, исходно
женщины с ИБС, лечение в дозе 40 мг/сутки
мужчины с ИБС, исходно
мужчины с ИБС, лечение в дозе 40 мг/сутки
Рисунок 1 - Изменение липидного спектра сыворотки крови у больных ИБС
после приема симвастатина в дозе 40 мг/сутки.
Примечание. Здесь и далее: значимые отличия между исследуемыми группами
* -р<0,05; ** -р <0, 01 ***-р<0,001 – по сравнению с больными ИБС, до приема препарата
У мужчин лечение суточной дозой 40 мг приводило к снижению
показателей ТГЛ на 16,7%, ХС-ЛПНП на 34%, ОХ на 25% и КА на 25,6%
относительно исходных значений (Рисунок 1).
После приема препарата в дозировке 80 мг/сутки у женщин снизился
уровень ХС-ЛПНП на 39,1%, ОХ на 29,4% и КА на 36,6% по сравнению с
исходными показателями (Рисунок 2).
7
6
5
4
3
2
1
0
мМ/л
*
**
**
23,7%
39,1%
29,4%
***
54%
** ***
36,6%
***
30%
38,3%
**
23,4%
ТГЛ
ХС ЛПВП
ХС ЛПНП
ХС ЛПОНП
ОХ
КА
женщины с ИБС, исходно
женщины с ИБС, лечение в дозе 80 мг/сутки
мужчины с ИБС, исходно
мужчины с ИБС, лечение в дозе 80 мг/сутки
Рисунок 2 - Изменение липидного спектра сыворотки крови у больных ИБС
после приема симвастатина в дозе 80 мг/сутки.
На фоне проведенной терапии симвастатином в дозе 80 мг/сутки у
мужчин уровень ТГЛ снизился на 23,7%, ХС-ЛПНП на 54%, ХС-ЛПОНП на
23,4%, ОХ на 30% и КА на 38,3% по сравнению с исходным.
Анализ литературных данных подтвердил наличие гиполипидемического
эффекта симвастатина, который характеризовался снижением уровня
атерогенных липидных фракций сыворотки крови [Group SSSS, 1994; Collins R.
et al., 2002]. Стоит отметить, что в группе мужчин эффект от лечения
характеризовался более выраженным снижением уровня ОХ, ХС-ЛПНП, КА,
13
ТГЛ и дополнительным уменьшением фракции ХС-ЛПОНП при лечении дозой
80 мг/сутки, чем при меньшей дозе препарата. В то же время в группе женщин
не наблюдалось дозозависимого эффекта на показатели липидного спектра.
В результате приема симвастатина в течение 2 месяцев целевой уровень
ОХ (<5 мМоль/л) был достигнут у 77% женщин и у 100% мужчин, при лечении
дозой 40 мг/сутки, у 50% женщин и у 91% мужчин, после лечения суточной
дозой 80 мг. Целевой уровень ХС-ЛПНП (<1,8 мМоль/л) был достигнут у 55%
женщин и у 33% мужчин, после приема дозы 40 мг/сутки, у 33% женщин и 55%
мужчин, в результате лечения дозой 80 мг/сутки. Целевой уровень ТГЛ (<1,7
мМоль/л) был достигнут у 22% женщин и у 60% мужчин, при лечении дозой 40
мг/сутки, у 80% у женщин и у 67% мужчин, при лечении более высокой дозой
препарата.
Влияние симвастатина на содержание ω3 НЖК в мембранах эритроцитов
Второй раздел исследований связан с оценкой влияния симвастатина на
содержание ЖК мембран эритроцитов. Как видно из рисунка 3, симвастатин не
оказывал влияния на уровень тимнодовой (С20:5) ω3 ЖК у исследуемых лиц.
Необходимо отметить, что данный показатель был низким до назначенного
лечения (у женщин 0,66±0,05% при норме 0,85±0,06%, p<0,05; у мужчин
0,68±0,05% при норме 0,95±0,11%, p<0,05).
%
10
**
8
*
6
4
2
0
С20:5ω3
С22:6ω3
сумма ω3
женщины с ИБС, исходно
женщины с ИБС, лечение в дозе 40 мг
женщины с ИБС, исходно
мужчины с ИБС, исходно
мужчины с ИБС, исходно
женщины с ИБС, лечение в дозе 80 мг
мужчины с ИБС, лечение в дозе 40 мг
мужчины с ИБС, лечение в дозе 80 мг
Рисунок 3 - Изменение ω3 НЖК мембран эритроцитов у больных ИБС на фоне
терапии симвастатином.
Примечание: Здесь и далее: результаты до и после лечения получены на связанных выборках. Звездочками
обозначена степень достоверности отличий сравниваемых значений (* ,** и *** соответствуют p<0,05, p<0,01,
p<0,001.
Данные литературы свидетельствуют о том, что дефицит С20:5 ЖК связан
с нарушением обмена эссенциальных ЖК и риском развития ИБС [Albert C.M.
et al., 2002; Harris W.S. et al., 2004; Rizzo A.M. et al., 2010; Ohnishi H. et al.,
2013], а также со снижением противовоспалительной защиты [Farrow J.W. et al.,
1975; Эндакова Э.А., 2002].
После проведенного лечения суммарный уровень ω3 ЖК не изменялся и
соответствовал исходному показателю у всех лиц за исключением мужчин, у
которых прием препарата в суточной дозе 40 мг приводил к снижению суммы
за счет цервоновой (С22:6) ω3 ЖК (Рисунок 3). Дефицит ω3 ЖК может
14
указывать на слабое проявление защитного, антиатероматозного действия
ПНЖК в специализированных клетках организма [Barben M.L. et al., 1997].
Влияние симвастатина на содержание ω6 НЖК в мембранах эритроцитов
Независимо от пола пациента и дозы препарата выявлено снижение
процентного содержания линолевой (С18:2) ω6 ЖК, арахидоновой ЖК (С20:4)
ω6 ЖК и суммарного уровня ω6 ЖК (Рисунок 4). При этом до начала лечения
показатель последнего был выше такового в группе контроля за счет
повышенного уровня линолевой (С18:2) ω6 ЖК у мужчин (10,24±0,22% при
норме 8,98±0,32%, p<0,01) и арахидоновой ЖК (С20:4) ω6 ЖК у женщин
(15,77±0,30% при норме 13,94±0,25%, p<0,01). В результате терапии
полученные изменения приводили к нормализации исследуемых показателей.
35
%
*** ** *** ***
30
25
20
15
*** *** ** ***
* *** *
2
1,5
1
0,5
0
*
10
5
0
С18:2ω6
С20:4ω6
сумма ω6
%
* **
С20:2ω6
женщины с ИБС, исходно
женщины с ИБС, исходно
женщины с ИБС, лечение в дозе 40 мг
женщины с ИБС, лечение в дозе 80 мг
мужчины с ИБС, исходно
мужчины с ИБС, исходно
мужчины с ИБС, лечение в дозе 40 мг
мужчины с ИБС, лечение в дозе 80 мг
С20:3ω6
Рисунок 4 - Изменение ω6 НЖК мембран эритроцитов у больных ИБС на фоне
терапии симвастатином.
Кроме этого, после лечения мужчин, независимо от дозы препарата,
выявлен рост показателя дигомо-γ-линолевой (С20:2) ω6 ЖК (Рисунок 4),
уровень которого был ниже до назначенного приема симвастатина у всех
пациентов основной группы (у женщин 0,29±0,02% при норме 0,38±0,02%,
p<0,01; у мужчин 0,33±0,01% при норме 0,38±0,02 %, p<0,05).
Дефицит С18:2 ЖК после приема статинов подтвержден ранними
исследованиями [Jula A. et al., 2005; Risé P. et al., 2005; Галявич А.С. и др., 2011;
de Lorgeril M. et al., 2013] и, вероятно, связан с уменьшением в кровотоке
основного транспортера – ХС-ЛПНП. Возможен механизм влияния
симвастатина на активность ∆6-десатуразы в клетках печени [Notarbartolo A. et
al., 1995; Risé P. et al., 1997; Ferretti A., et al. 1997; Zhou G., et al., 2010; Nozue T.
et al., 2013] и синтез в избыточном количестве дигомо-γ-линолевой (С20:2) ω6
из предшественника [Huang Y. et al., 2011], отмеченный в группе мужчин
(Рисунок 4). По литературным данным, С20:2 является ингибитором фермента
циклооксигеназы 2 [Huang Y., 2011], участвующего в продукции простаноидов
с сосудосуживающими и агрегационными эффектами из арахидоновой (С20:4)
ω6 ЖК [Эндакова, Э. А.,2002; Novgorodtseva T.P. et al., 2010], что, вероятно,
является механизмом антивоспалительного эффекта симвастатина.
15
У всех исследуемых пациентов, после проведенной терапии
симвастатином, не выявлено достоверных изменений по содержанию дигомо-γлиноленовой (С20:3) ω6 ЖК (Рисунок 4), как и до назначенной терапии.
Влияние симвастатина на соотношения НЖК в мембранах эритроцитов
Показатели соотношений 20:4 ω6/22:6 ω3, С20:3 ω6+С20:5 ω3/С22:6 ω3,
20:4 ω6/20:5 ω3 и сумм ω3/ω6 у мужчин после терапии симвастатином не имели
достоверных отличий относительно исходных значений (Рисунок 5).
До начала приема симвастатина у женщин показатель соотношения 20:3
ω6+20:5 ω3/22:6 ω3 соответствовал таковому в группе контроля, однако,
наблюдалось его снижение после лечения в исследуемых дозах препарата
(Рисунок 5). Данные изменения указывают на преобладающее содержание в
клетках организма ингибитора синтеза простаноидов 1 серии с
антивоспалительными и тромболитическими свойствами [Farrow J.W. et al.,
1975].
%
3
2,5
2
1,5
1
0,5
0
%
*
50
*
*
*
40
30
20
10
0
С20:4 ω6/С22:6 ω3
С20:3ω6+С20:5ω3/С22:6ω3
С20:4 ω6/С20:5 ω3
женщины с ИБС, исходно
женщины с ИБС, лечение в дозе 40 мг
женщины с ИБС, исходно
женщины с ИБС, лечение в дозе 80 мг
мужчины с ИБС, исходно
мужчины с ИБС, лечение в дозе 40 мг
мужчины с ИБС, исходно
мужчины с ИБС, лечение в дозе 80 мг
сумма ω3/сумма ω6
Рисунок 5 - Изменение соотношений НЖК мембран эритроцитов у больных
ИБС на фоне терапии симвастатином.
В тоже время, в рассматриваемой группе до назначения терапии были
отмечены более высокие показатели соотношений 20:4 ω6/22:6 ω3 (2,59±0,11%
при норме 2,31±0,09%, p<0,05) и 20:4 ω6/20:5 ω3 (23,17±2,12% при норме
17,44±1,60, p<0,05), что может указывать на сдвиги в системе синтеза
эйкозаноидов в сторону избыточного образования простаноидов 2-й серии и
лейкотриенов 4-й серии, проявляющих вазоконстрикторные и агрегационные
свойства [Мевх Т.А. и др., 1990; Holler C. et al., 1996; Новгородцева Т.П. и др.,
2001; Конь И.Я. и др., 2006; Ohnishi H. et al., 2013], тем самым обусловливая
негативную роль в развитии патологии. Кроме того, отмечалось пониженное
соотношение сумм ω3/ω6 ЖК (24,61±1,02% при норме 28,42±1,42%, p<0,05), а
значит нарушение метаболизма ЖК ω3 ряда за счет роста уровня его
ингибитора - ω6 ЖК [Новгородцева Т.П. и др., 1993].
Вероятно, проявление антивоспалительного эффекта симвастатина
отражено в снижении соотношения С20:4 ω6/С22:6 ω3, которое
16
прослеживалось у женщин после лечения симвастатином в дозе 80 мг/сутки.
Увеличение соотношения сумм ω3/ω6 ЖК в данной группе является признаком
относительного преобладания в мембранных фосфолипидах ω3 НЖК (Рисунок
7).
Влияние симвастатина на содержание ω7 НЖК в мембранах эритроцитов
Не наблюдалось достоверных отличий по содержанию пальмитолеиновой
(С16:1) ω7 ЖК, вакценовой (С18:1) ω7 ЖК и сумме ω7 ЖК у пациентов после
приема симвастатина по сравнению с исходным уровнем (Рисунок 6), также как
между контрольной и основной группой до начала лечения.
1,6
%
1,4
1,2
1
0,8
0,6
0,4
0,2
0
С16:1ω7
женщины с ИБС, исходно
женщины с ИБС, исходно
мужчины с ИБС, исходно
мужчины с ИБС, исходно
С18:1ω7
сумма ω7
женщины с ИБС, лечение в дозе 40 мг
женщины с ИБС, лечение в дозе 80 мг
мужчины с ИБС, лечение в дозе 40 мг
мужчины с ИБС, лечение в дозе 80 мг
Рисунок 6 - Содержание ω7 НЖК мембраны эритроцитов у больных ИБС на
фоне терапии симвастатином.
Влияние симвастатина на содержание ω9 НЖК в мембранах эритроцитов
Во всех группах после назначенной терапии выявлено снижение
процентного содержания олеиновой (С18:1) ω9 ЖК (Рисунок 7) и рост уровня
гондоиновой (С20:1) ω9 ЖК, нервоновой (С24:1) ω9 ЖК и показателя суммы ω9
ЖК относительно исходных значений (Рисунок 7). При этом, до начала
лечения, уровень двух последних соответствовал контролю, в то время, как
содержание гондоиновой (С20:1) ω9 ЖК было ниже такового (у женщин
0,18±0,01% при норме 0,33±0,02%, p<0,001; у мужчин 0,21±0,01% при норме
0,28±0,01%, p<0,01). Необходимо отметить, что полученные изменения
приводили к нормализации гондоиновой ЖК у всех исследуемых лиц, за
исключением женщин, у которых, после приема препарата в суточной дозе 40
мг, содержание ЖК оставалось ниже нормы (0,18±0,01% при норме 0,33±0,02%,
p<0,001).
Дефицит олеиновой (С18:1) ω9 ЖК в мембранах клеток в результате
лечения симвастатином подтвержден ранними исследованиями [Reaven P.D. et
al., 1994] и, возможно, является следствием не только снижения уровня ХСЛПНП, но и недостатком первичного субстрата эндогенных предшественников
– пальмитиновой ЖК [Risé P., 1997; Jula A. et al., 2005]. Способностью
симвастатина активировать экспрессию ферментов ∆5 и ∆6-десатураз с
образованием длинноцепочечных ω9 ЖК также объясняется недостаток
17
олеиновой ЖК. Необходимо отметить, что в составе ХС-ЛПНП
рассматриваемый метаболит, благодаря наличию единственной двойной связи,
понижает восприимчивость к окислению, а в составе ХС-ЛПВП повышает
текучесть, стимулируя отток холестерина из клеток [Ginsberg H.N. et al., 1994;
Nydahl, М.С. et al., 1994; Kris-Etherton P.M. et. al., 1997].
В научной литературе отсутствуют сведения об изменении нервоновой
ЖК под влиянием статинов, однако доказано ранее, что метаболит обратно
коррелирует с потреблением НасЖК [Takkunen M. et al., 2013] и оказывает
положительное профилактическое воздействие на ССЗ [Deutschman D.H. et al.,
2003; Oda E. et al., 2005]. Очевидно, нервоновая ЖК влияет на повышение
функциональной активности сфинголипидов, которые, в составе молекул
антигенов и рецепторов, участвуют в регуляции адгезии, роста клеток и
иммунологических процессах [Jin F.Y. et al., 1998; Li Z. et al., 2005; Комов В.П.
и др., 2008].
%20
15
10
** ** * **
*** ** * ***
** * ** *%
0,4
0,3
**
**
*
*
0,2
5
0,1
0
0
С18:1 ω9
С24:1ω9
сумма ω9
С20:1ω9
женщины с ИБС, исходно
женщины с ИБС, лечение в дозе 40 мг
женщины с ИБС, исходно
женщины с ИБС, лечение в дозе 80 мг
мужчины с ИБС, исходно
мужчины с ИБС, лечение в дозе 40 мг
мужчины с ИБС, исходно
мужчины с ИБС, лечение в дозе 80 мг
Рисунок 7 - Изменение ω9 НЖК в мембране эритроцитов больных ИБС на фоне
терапии симвастатином.
В результате лечения наблюдался рост суммарного содержания ω9 ЖК
(Рисунок 7), направленный на компенсацию снижения уровня ω6 НЖК путем
«замены» экзогенных НЖК на эндогенные длинноцепочечные МНЖК.
Увеличение же афизиологичных ω9-эйкозаноидов с выраженными
провоспалительными, агрегационными и вазоконстрикторными свойствами
[Титов В.Н., 2002] может являться «платой» за эту компенсацию.
Влияние симвастатина на содержание НасЖК в мембранах эритроцитов
У мужчин лечение симвастатином в дозе 40 мг/сутки не сказывалось на
изменении пальмитиновой (С16:0) ЖК, тогда как в остальных группах
выявлено снижение данного показателя относительно исходного уровня
(Рисунок 8). Необходимо уточнить, что уровень данного показателя у
пациентов до приема симвастатина был выше относительно полученного в
контрольной группе (у женщин 15,27±0,30% при норме 11,43±0,64%, p<0,001; у
мужчин 14,50±0,29% при норме 11,13±0,50%, p<0,001), что согласуется с
литературными данными [Allman-Farinelli M.A. et. al., 2005; Осипенко А.Н.,
18
2012]. В результате проведенной терапии выявлена нормализация по
содержанию С16:0 ЖК во всех исследуемых группах.
У женщин, после проведенной терапии дозой препарата 80 мг/сутки,
отмечалось снижение стеариновой (С18:0) ЖК относительно исходного уровня
(Рисунок 8).
25
20
15
10
5
0
%
*
*
**
С16:0
С18:0
женщины с ИБС, исходно
женщины с ИБС, лечение в дозе 40 мг
женщины с ИБС, исходно
женщины с ИБС, лечение в дозе 80 мг
мужчины с ИБС, исходно
мужчины с ИБС, лечение в дозе 40 мг
мужчины с ИБС, исходно
мужчины с ИБС, лечение в дозе 80 мг
Рисунок 8 - Изменение пальмитиновой (С16:0) и стеариновой (С18:0) НасЖК в
мембране эритроцитов больных ИБС на фоне терапии симвастатином.
Поскольку
избыток
пальмитиновой
ЖК
способен
вызывать
провоспалительные реакции и инициировать начало апоптоза эндотелиальных
клеток аорты человека [Harvey K.A. et al., 2010], способствуя
прогрессированию атеросклероза [Shimokawa H., 1999; Davignon J. et. al., 2004;
Hansson G.K., 2005], очевидно, что снижение уровня данного метаболита, равно
как и стеариновой ЖК, является положительным эффектом лечения,
направленным на регрессию атеросклеротических бляшек [Jula A. et al., 2005].
После проведенного лечения у женщин уровень миристиновой (С14:0)
ЖК не изменялся и достоверно не отличался от исходного показателя, тогда как
у мужчин, прием симвастатина в суточной дозе 40 мг приводил к повышению
содержания метаболита (Рисунок 9).
0,1 %
**
0,08
**
0,06
0,04
0,02
0
женщины с ИБС, исходно
С14:0
женщины с ИБС, лечение в дозе 40 мг
женщины с ИБС, исходно
женщины с ИБС, лечение в дозе 80 мг
мужчины с ИБС, исходно
мужчины с ИБС, лечение в дозе 40 мг
мужчины с ИБС, исходно
мужчины с ИБС, лечение в дозе 80 мг
С15:0
Рисунок 9 - Изменение миристиновой (С14:0) и пентадекановой (С15:0) НасЖК
в мембране эритроцитов больных ИБС на фоне терапии симвастатином.
Необходимо отметить, что у женщин до назначенного лечения
процентное содержание миристиновой ЖК (С14:0) было ниже, чем у здоровых
лиц (0,05±0,004% при норме 0,07±0,01%, p<0,05), тогда как у мужчин не
19
отличалось от контроля. Подобные изменения подтверждены у пациентов с
признаками АГ и дислипидемией [Novgorodtseva T.P. et al., 2011]. Содержание
С14:0 НасЖК связано с активностью клеточных функций и белковых
взаимодействий в мембранах и может влиять на регуляцию сигнальных
молекул, трансдукцию и др. [Thalia A. et al., 2001], поэтому уменьшение этой
ЖК может играть негативную роль в развитии патологии.
Выявлено повышение процентного содержания пентадекановой (С15:0)
ЖК у женщин после терапии симвастатином в дозе 40 мг/сутки (Рисунок 9),
уровень которой до начала приема препарата соответствовал контролю.
Только у мужчин терапия симвастатином в дозе 40 мг/сутки приводила к
незначительному повышению уровня миристиновой ЖК (Рисунок 9), однако в
пределах контроля.
Согласно литературным данным, С15:0 положительно коррелирует с ХСЛПВП [Smedman A. et al., 1999] и отрицательно с соотношением ЛПНП/ЛПВП,
ТГЛ и риском ССЗ [Warensjö E. et al., 2010; Wang H. et al., 2011].
На фоне лечения симвастатином наблюдалось повышение содержания
маргариновой (С17:0) ЖК у всех исследуемых пациентов, за исключением
мужчин, у которых терапия дозой препарата 80 мг/сутки не влияла на
изменение данного показателя относительно исходного (Рисунок 10). Стоит
отметить, что уровень маргариновой (С17:0) ЖК до назначенного лечения был
ниже такового относительно группы условно здоровых лиц (у женщин
0,19±0,02% при норме 0,26±0,01%, p<0,001; у мужчин 0,21±0,01% при норме
0,25±0,01%, p<0,05). Подобные изменения были показаны в эритроцитах у
пациентов с ИБС [Эндакова Э.А., 2002]. Известно, что маргариновая ЖК
является полезным маркером молочного жира, показатель которой
отрицательно коррелирует с развитием ИБС [Khaw K.T. et al., 2012].
3
%
***
2,5
***
*
2
***
1,5
1
0,5
*** ** *
*** **
***
*** * * ***
***
0
С17:0
С20:0
С22:0
12
10
8
6
4
2
0
%
*** ** **
***
С23:0
женщины с ИБС, исходно
женщины с ИБС, лечение в дозе 40 мг
женщины с ИБС, исходно
женщины с ИБС, лечение в дозе 80 мг
мужчины с ИБС, исходно
мужчины с ИБС, лечение в дозе 40 мг
мужчины с ИБС, исходно
мужчины с ИБС, лечение в дозе 80 мг
* **
С24:0
С26:0
Рисунок 10 - Изменение маргариновой (С17:0), арахиновой (С20:0), бегеновой
(С22:0), трикозановой (С23:0), лигноцериновой (С24:0) и гексакозановой
(С26:0) НасЖК в мембране эритроцитов больных ИБС на фоне терапии
симвастатином.
20
Во всех исследуемых группах процентное содержание арахиновой (С20:0)
ЖК было сниженным до назначения терапии (у женщин 0,26±0,02% при норме
0,50±0,03%, p<0,001; у мужчин 0,27±0,01% при норме 0,40±0,02%, p<0,001),
однако после лечения наблюдался рост данного показателя (Рисунок 10).
Согласно литературным данным, арахиновая ЖК в мембранах клеток
является модулятором активности △6-десатуразы, направленной на синтез
длинноцепочечных ω3 и ω6 ЖК [Erasmus U., 1993], уменьшение которой,
может затруднять регуляцию и усиливать развитие воспалительного процесса.
В результате приема препарата отмечалась нормализация по содержанию
маргариновой и арахиновой ЖК.
Независимо от пола пациента и дозы препарата отмечено увеличение
бегеновой (С22:0) ЖК, трикозановой (С23:0) ЖК и лигноцериновой (С24:0) ЖК
по сравнению с исходными данными (Рисунок 10). Только у мужчин лечение
приводило к росту гексакозановой (С26:0) ЖК, достоверно более значимому по
уровню при использовании максимальной дозировки (Рисунок 10).
Согласно литературным данным, повышение уровня НасЖК
длинноцепочечного ряда делает более жесткой структуру клеточных мембран
[de Vries J.E. et al., 1997].
Влияние симвастатина на комплексы ЖК
У исследуемых пациентов после лечения выявлено снижение суммарного
значения НЖК, ИН, ЖК-субстратов мембран и увеличение содержания ЖКсубстратов СФЛ (Рисунок 11).
%
150
* ** *** **
*** * *** ***
100
50
* *** *** ***
** ** *** *** *** * *** *
*** * ** **
0
сумма НЖК
ИН
ЖК - субстрат
мембран
ЖК- субстрат вит. F ЖК- субстрат ГФЛ
женщины с ИБС, исходно
женщины с ИБС, лечение в дозе 40 мг
женщины с ИБС, исходно
женщины с ИБС, лечение в дозе 80 мг
мужчины с ИБС, исходно
мужчины с ИБС, лечение в дозе 40 мг
мужчины с ИБС, исходно
мужчины с ИБС, лечение в дозе 80 мг
ЖК-субстрат СФЛ
Рисунок 11 - Изменение комплексных параметров ЖК в мембране эритроцитов
больных ИБС на фоне терапии симвастатином.
В то же время, наблюдалось снижение и, в соответствии с этим,
нормализация процентного содержания ЖК-субстратов ГФЛ и ЖК-субстратов
витамина F (Рисунок 11), уровень которых до начала лечения был выше
показателей контроля (соответственно у женщин 86,51±0,61% при норме
83,26±0,76, p<0,01; у мужчин 86,50±0,40% при норме 83,05±0,53%, p<0,001; у
21
женщин 33,11±0,41% при норме 30,99±0,39%, p<0,001, у мужчин 33,83±0,40%
при норме 31,89±0,81%, p<0,01).
Во всех исследуемых группах терапия симвастатином приводила к росту
суммарного показателя НасЖК и МНЖК (Рисунок 12), уровень которого до
приема препарата сравним с таковым в группах условно здоровых лиц.
60
50
40
%
*
*
***
30
**
***
20
10
**
*
*
0
сумма НасЖК
женщины с ИБС, исходно
женщины с ИБС, исходно
мужчины с ИБС, исходно
мужчины с ИБС, исходно
МНЖК
женщины с ИБС, лечение в дозе 40 мг
женщины с ИБС, лечение в дозе 80 мг
мужчины с ИБС, лечение в дозе 40 мг
мужчины с ИБС, лечение в дозе 80 мг
Рисунок 12 - Изменение комплексных параметров ЖК в мембране эритроцитов
больных ИБС на фоне терапии симвастатином.
В связи с вышесказанным необходимо отметить, что у пациентов после
лечения
мембранная
компонента
эритроцитов
характеризовалась
модификацией ЖК состава, что отразилось на изменении ИН. Его снижение
подтверждает дефицит содержания НЖК в составе фосфолипидов клеточных
мембран за счет избыточного содержания НасЖК длинноцепочечного ряда.
Необходимо отметить, что данные изменения влияют на физико-химические
свойства мембраны эритроцита, нарушают упорядоченность липидного бислоя,
липид-липидные и белок-липидные взаимодействия [Титов В.Н., 1998;
Эндакова Э.А., 2002; Титов В.Н., 2004]. С другой стороны НасЖК
длинноцепочечного ряда и МНЖК являются субстратами получения энергии в
митохондриях тех клеток, где данный процесс реализован. Возможно,
увеличение НасЖК в мембранах эритроцитов происходит за счет накопления
метаболитов в плазме крови, что было показано в раннем исследовании
[Котловский М.Ю., 2009] и таким образом, косвенно позволяет судить о
скорости окисления НасЖК в кардиомиоцитах, клетках скелетной
мускулатуры, печени и почек.
Известно, что статины уменьшают фракцию холестерола в составе
мембран эритроцитов [Liang K., 2005; Adekunle A.S. et al., 2013], выполняющую
роль каркаса и обуславливающего жесткость их мембран. В связи с этим можно
предположить, что увеличение НасЖК является своеобразной «платой» по
улучшению пластичности эритроцитов. Кроме этого, доказано влияние
статинов на фосфолипидный обмен в мембранах, в первую очередь на
ограничение активности холинфосфатцитидилтрансферазы, в результате чего
может возникнуть уменьшение фракции фосфотидилхолина во внешнем слое
эритроцитарных мембран [Verd J.C. et al., 1999], отраженное в снижении
содержания отдельных показателей ЖК в составе ГФЛ [Marai L. et al., 1969] и, в
22
соответствии с этим, ростом уровня ЖК-субстратов СФЛ (Рисунок 11). Хотя
относительные пропорции СФЛ в количественном составе по отношению к
ГФЛ имеют меньший удельный вес, тем не менее, они играют важную роль в
клеточной адгезии, распознавании и регулировании клеточного окружения,
способствуя защите клетки [van Meer G. et al., 2005].
Повышение процентного содержания арахидоновой (С20:4) ω6 ЖК у
женщин до приема симвастатина приводило к увеличению КЭМ эссенциальных
ЖК (1,47±0,06% против нормы 1,30±0,06%, p<0,05) по сравнению с контролем,
однако, после лечения дозой 80 мг/сутки отмечено снижение коэффициента по
сравнению с его исходным уровнем (1,05±0,03 против исходного 1,33±0,06,
p<0,05), что свидетельствовало о низком уровне метаболизации алиментарных
предшественников в полиеновые ЖК.
Лечение суточной дозой 40 мг симвастатина у женщин приводило к
нормализации КЭМ. В тоже время у мужчин изменений КЭМ не отмечалось,
что указывало на нормальную функциональную активность метаболических
процессов в отношении эссенциальных ЖК, несмотря на уменьшение уровня
ЖК-субстратов мембран.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Терапия симвастатином в дозах 40 и 80 мг/сутки влияла на метаболизм
ЖК мембран эритроцитов, что подтверждается снижением суммы
ненасыщенных жирных кислот, индекса ненасыщенности, ЖК-субстратов
мембран
одновременно
с
повышением
уровня
ЖК-субстратов
сфингофосфолипидов,
длинноцепочечных
насыщенных,
а
также
мононенасыщенных жирных кислот за счет роста суммарного показателя ω9
ЖК. Положительный эффект препарата проявился в нормализации уровня
пальмитиновой, маргариновой, арахиновой насыщенных жирных кислот, ЖКсубстратов витамина F и глицерофосфолипидов, а также показателя дигомо-γлинолевой (С20:2) ω6 ЖК у мужчин, арахидоновой (С20:4) ω6 ЖК у женщин,
гондоиновой (С20:1) ω9 ЖК у всех пациентов, за исключением женщин, после
приема симвастатина в суточной дозе 40 мг. Наличие половых и дозозависимых
эффектов симвастатина на содержание ЖК мембран эритроцитов, у женщин,
связанных с уменьшением коэффициента эффективности метаболизации
эссенциальных жирных кислот при терапии дозой 80 мг/сутки и у мужчин с
повышением уровня гексакозановой (С26:0) ЖК, указывают на
предпочтительность использования симвастатина в меньшей дозе. Полученные
результаты могут быть использованы в клинической практике для назначения
оптимальных дозировок симвастатина.
ВЫВОДЫ
1. На фоне высокого содержания ω6 ЖК за счет линолевой (С18:2) (у мужчин)
и арахидоновой (С20:4) ЖК (у женщин) выявлен низкий уровень дигомо-γлинолевой (С20:2) ω6 ЖК, тимнодовой (С20:5) ω3 и гондоиновой (С20:1) ω9
ЖК в составе фосфолипидов мембран эритроцитов у больных ИБС. Изменения
содержания НасЖК характеризуются высоким уровнем пальмитиновой (С16:0)
23
ЖК и одновременно низким - маргариновой (С17:0) ЖК и арахиновой (С20:0)
ЖК у всех пациентов, а также миристиновой (С14:0) ЖК у женщин.
2. У больных ИБС симвастатин не оказывал влияния на содержание ω7производных ЖК, дигомо-γ-линоленовой (С20:3) ω6 ЖК, а также ω3производных ЖК мембран эритроцитов, за исключением мужчин,
принимавших симвастатин в дозе 40 мг/сутки.
3. Независимо от пола и дозы прием препарата способствовал снижению
уровня олеиновой (С18:1) ω9 ЖК, увеличению показателя нервоновой (С24:1)
ω9 ЖК, бегеновой (С22:0) ЖК, трикозановой (С23:0) ЖК, лигноцериновой
(С24:0) ЖК и нормализации содержания пальмитиновой (С16:0) ЖК,
маргариновой (С17:0) ЖК, арахиновой (С20:0) ЖК. После проведенной терапии
нормализован показатель дигомо-γ-линолевой (С20:2) ω6 у мужчин и
арахидоновой (С20:4) ω6 ЖК у женщин, а также гондоиновой (С20:1) ω9 ЖК у
всех пациентов, за исключением женщин, принимавших симвастатин в
суточной дозе 40 мг.
4. Характерным для больных ИБС является высокий уровень ЖК-субстратов
витамина F и глицерофосфолипидов в мембранах эритроцитов, а также
повышенный КЭМ эссенциальных ЖК у женщин.
5. Независимо от пола и дозы прием препарата способствовал снижению
суммарного уровня НЖК, ИН и ЖК-субстратов мембран, увеличению ЖКсубстратов СФЛ, НасЖК и МНЖК, а также нормализации содержания ЖКсубстратов витамина F и ЖК-субстратов глицерофосфолипидов в составе
мембран эритроцитов.
6. Курсовая терапия симвастатином в дозе 40 мг/сутки у женщин приводила к
росту уровня пентадекановой (С15:0) ЖК, тогда как прием более высокой дозы
- к уменьшению содержания стеариновой (С18:0) ЖК, соотношения сумм
ω3/ω6 ЖК, 20:4 ω6/22:6 ω3 и КЭМ эссенциальных ЖК в мембранах
эритроцитов. После проведенной терапии суточной дозой препарата 40 мг у
мужчин наблюдалось снижение суммы ω3 ЖК за счет цервоновой (С22:6) ω3
ЖК и увеличение миристиновой (С14:0) ЖК.
7. Половые особенности жирнокислотного состава мембран характеризовались
снижением соотношения 20:3 ω6+20:5 ω3/22:6 ω3 у женщин и повышением
уровня дигомо-γ-линолевой (С20:2) ω6 ЖК и гексакозановой (С26:0) ЖК у
мужчин. Прием симвастатина в дозе 40 мг/сутки приводил к повышению
уровня маргариновой (С17:0) ЖК, тогда как после применения более высокой
дозы препарата наблюдалось снижение показателя пальмитиновой (С16:0) ЖК.
СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
1. Новицкий, В.В. Роль жирных кислот плазмы крови в патогенезе стабильной
стенокардии / В.В. Новицкий, Р.С. Карпов, С.В. Клименков, А.Б. Салмина,
М.Ю. Котловский, С.В. Машковская, Д.А. Кириченко и др. // Бюллетень
сибирской медицины. - Т. 6, № 4. - 2007. - С.41-45.
24
2. Новицкий, В.В. Изменение жирных кислот плазмы крови у больных ИБС
принимающих симвастатин/ В.В. Новицкий, Р.С. Карпов, М.Ю. Котловский,
С.В. Клеменков, В.А. Шульман, С.Ю. Никулина, С.В. Машковская, Д.А.
Кириченко и др. // Сибирское медицинское обозрение. - №3. - 2008. - С.15-18.
3. Новицкий, В.В. Изменение спектра жирных кислот плазмы крови больных
ИБС при приеме симвастатина/ В.В. Новицкий, Р.С. Карпов, М.Ю. Котловский,
С.В. Машковская, Д.А. Кириченко и др. // Современные наукоемкие
технологии.- №12. - 2009. - С.60-61.
4. Новицкий, В.В. Содержание ненасыщенных жирных кислот в плазме и
эритроцитах крови у больных с хронической формой ишемической болезни
сердца / В.В. Новицкий, Р.С. Карпов, М.Ю. Котловский, Д.А. Кириченко,
Ю.В. Котловский // Сибирское медицинское обозрение.- №6. - 2010. - С.18-21.
5. Котловский, М.Ю. Влияние симвастатина на спектр жирных кислот
эритроцитов у пациентов с хронической формой ишемической болезни сердца/
М.Ю. Котловский, Д.А. Кириченко, О.С. Усольцева, О.Я. Оседко, А.А.
Покровский,
А.В.
Оседко,
Ю.В.
Котловский,
И.Ю. Якимович //
Фундаментальные исследования. - №10, (часть 3). - 2011.- С.513-516.
6. Котловский, М.Ю. Спектр жирных кислот эритроцитов у больных с ИБС при
лечении симвастатином/ М.Ю. Котловский, Д.А. Кириченко, О.С. Усольцева,
О.Я. Оседко, А.А. Покровский, А.В. Оседко, Ю.В. Котловский,
И.Ю. Якимович // Успехи современного естествознания. - №10. - 2011. - С.3940.
7. Новицкий, В.В. Изменение спектра жирных кислот эритроцитов у больных
хронической формой ишемической болезни сердца при лечении
симвастатином/ В.В. Новицкий, М.Ю. Котловский, Д.А. Кириченко, Р.С.
Карпов, Ю.В. Котловский, И.Ю. Якимович// Бюллетень сибирской медицины. Т.11, № 1.- 2012. - С.46-51.
8. Дыгай, А.М. Эффективность лечения больных ИБС с гипертонической
болезнью/ А.М. Дыгай, М.Ю. Котловский, О.С. Котловская, Д.А. Кириченко,
Ю.В. Котловский // Успехи современного естествознания.- №10.- 2012. - С. 9596.
9. Котловский, М.Ю. Дозозависимое влияние симвастатина на содержание
жирных кислот мембран эритроцитов у мужчин, больных хронической формой
ишемической болезни сердца/ М.Ю. Котловский, Д.А. Кириченко, Ю.В.
Котловский, И.Ю. Якимович, Д.С. Терешина, А.М. Дыгай // Фундаментальные
исследования. - №7, (часть 1), 2013. - С.72-76.
10. Дыгай, А.М. Влияние симвастатина на состав жирных кислот мембран
эритроцитов у женщин с хронической формой ишемической болезни сердца /
А.М. Дыгай, М.Ю. Котловский, Д.А. Кириченко, И.Ю. Якимович, Д.С.
Терешина, Ю.В. Котловский, В.Н. Титов // Бюллетень ВСНЦ СО РАМН. - № 5,
(93). - 2013. - С. 22-28.
11. Дыгай, A.M. Жирные кислоты мембран эритроцитов у женщин с
ишемической болезнью сердца при действии статинов / A.M. Дыгай, М.Ю.
Котловский, Д.А. Кириченко, И.Ю. Якимович, Д.С. Терешина, Ю.В.
25
Котловский, В.Н. Титов // Клиническая лабораторная диагностика. - №3. - 2014.
- С.42-47.
Патент на изобретение
Пат. № 2503405 Российская федерация. Способ индивидуальной
количественной оценки развития ишемической болезни сердца / А.М. Дыгай,
М.Ю. Котловский, О.С. Котловская, Д.А. Кириченко и др.; заявители и
патентообладатели ФГБУ "НИИ фармакологии" СО РАМН. - опубл. 10.01.2014.
Пат.
№2535025
Российская
федерация.
Способ
индивидуальной
количественной оценки риска развития гипертонической болезни / А.М.
Дыгай, М.Ю. Котловский, О.С. Котловская, Д.А. Кириченко и др.; заявители и
патентообладатели ФГБУ "НИИ фармакологии" СО РАМН. - опубл. 10.12.2014
Список сокращений, встречающихся в диссертации
БСК – болезни системы кровообращения
ССЗ – сердечно-сосудистые заболевания
ИБС – ишемическая болезнь сердца
ХС-ЛПНП – холестерол-липопротеины низкой плотности
ХС-ЛПВП – холестерол-липопротеины высокой плотности
ХС-ЛППП – холестерол-липопротеины промежуточной плотности
ХС-ЛПОНП – холестерол-липопротеины очень низкой плотности
ТГЛ – триацилглицерол
ЖК – жирные кислоты
ПНЖК – полиненасыщенные жирные кислоты
МНЖК – мононенасыщенные жирные кислоты
НЖК – ненасыщенные жирные кислоты
НасЖК – насыщенные жирные кислоты
ИН – индекс ненасыщенности
ФЛ – фосфолипиды
ГФЛ – глицерофосфолипиды
СФЛ – сфингофосфолипиды
КЭМ – коэффициент эффективности метаболизации
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа