close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Разработка сбора нейропротективного и экстракта сухого на его основе

код для вставкиСкачать
На правах рукописи
ТУРТУЕВА ТАТЬЯНА АНАТОЛЬЕВНА
РАЗРАБОТКА СБОРА НЕЙРОПРОТЕКТИВНОГО
И ЭКСТРАКТА СУХОГО НА ЕГО ОСНОВЕ
14.04.02 – фармацевтическая химия, фармакогнозия
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени
кандидата фармацевтических наук
Улан-Удэ – 2015
Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении
науки «Институт общей и экспериментальной биологии» Сибирского
отделения Российской академии наук
Научный руководитель:
Николаева Галина Григорьевна – доктор фармацевтических наук,
профессор
Официальные оппоненты:
Анцупова Татьяна Петровна – доктор биологических наук, профессор,
Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение
высшего
профессионального
образования
«Восточно–Сибирский
государственный университет технологий и управления» Министерства
образования и науки РФ / кафедра неорганической и аналитической химии,
профессор
Рандалова Туяна Эрдэмовна – кандидат фармацевтических наук,
Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение
высшего профессионального образования «Бурятский государственный
университет» Министерства образования и науки РФ / медицинский
институт, кафедра фармации, старший преподаватель
Ведущая
организация:
Государственное
научное
учреждение
«Всероссийский научно-исследовательский институт лекарственных и
ароматических растений» Российской академии сельскохозяйственных наук
(ГНУ ВИЛАР Россельхозакадемии)
Защита диссертации состоится «22» мая 2015 г. в 15.00 часов на заседании
диссертационного совета ДМ 003.028.02 при ФГБУН «Институт общей и
экспериментальной биологии» СО РАН по адресу: 670047, г. Улан-Удэ, ул.
Сахьяновой, 6.
С диссертацией можно ознакомиться в Центральной научной библиотеке
Бурятского научного центра СО РАН и на сайте ИОЭБ СО РАН: http://igeb.ru
Автореферат разослан «___» апреля 2015 г.
Ученый секретарь диссертационного совета
доктор биологических наук, доцент
2
В.Б. Хобракова
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Одной из важнейших медико-социальных проблем современной
неврологии являются цереброваскулярные заболевания (ЦВЗ), которые
характеризуются высокими показателями заболеваемости, смертности и
инвалидности практически во всех странах мира (Живолупов С. А. и др.,
2012). Так, в России ежегодно регистрируют около 400-450 тысяч инсультов,
из которых 80 - 85% имеют ишемический характер (Скворцова В. И. и др.,
2006). Одним из основных направлений эффективной терапии
цереброваскулярных заболеваний признается применение препаратов,
обладающих ноотропными и нейропротективными свойствами (Беленичев И.
Ф. и др., 2009, Чуканова Е. И. и др., 2005). В этом плане особый интерес
представляют лекарственные средства растительного происхождения,
биологически
активные
вещества
(БАВ)
которых
обладают
антиоксидантными, гипотензивными, седативными, анксиолитическими,
нейромодулирующими и противовоспалительными свойствами (Кочикян А.
Т. и др. 2011).
Таким образом, актуальным является проведение фармакогностических
работ по созданию растительных средств, обладающих нейропротективным
действием.
Известными
фармакопейными
растениями,
широко
используемыми в лечении и профилактике цереброваскулярных заболеваний,
являются корни шлемника байкальского (Намсараева Г. Т. и др., 2003, Tang
W. et al., 2004), корневища и корни вздутоплодника сибирского (Гуляев С. М.
и др., 2008). Кроме того, перспективным растением в терапии ишемических
поражений головного мозга является астрагал перепончатый. В настоящее
время многочисленными работами зарубежных и отечественных авторов
доказано,
что
корни
астрагала
перепончатого
проявляют
кардиопротективный (Guan F. Y. et al., 2010) иммуномодулирующий (Wang
R. T. et al., 2002), антиоксидантный (Ko J. K. et al., 2005), противоопухолевый
Cui R. et al., 2003), противовирусный (Mao S. P. et al., 2004),
противовоспалительный (Choi S. I. et al., 2007), противодиабетический (Li C.
et al., 2004), нейропротективный (Шурыгин А. Я. и др., 2009) и
гепатопротекторный эффекты (Wang D. et al., 2001). Но в РФ нет
нормативной документации (НД) на данный вид растительного сырья, что
создает трудности при разработке лекарственных средств на его основе.
В ИОЭБ СО РАН разработана трехкомпонентная растительная
композиция указанных выше растений, для которой установлена
нейропротективная активность.
Цели и задачи исследования.
Целью настоящего исследования является фармакогностическое
исследование корней астрагала перепончатого, сбора нейропротективного и
разработка экстракта сухого на основе сбора.
Для достижения указанной цели необходимо было решить следующие
задачи:
– установить макро- и микроскопические признаки и химический состав
корней астрагала перепончатого;
3
– экспериментально обосновать состав и соотношение компонентов
исходного сбора, обладающего нейропротективным действием, и
провести его фармакогностическое изучение;
– выявить особенности экстрагирования действующих веществ из сбора
нейропротективного,
разработать
рациональную
технологию
получения экстракта сухого («Брэйн-профит») и изучить его
химический состав;
– разработать показатели стандартизации для корней астрагала
перепончатого, сбора нейропротективного и «Брэйн-профит» экстракта
сухого;
– разработать проекты НД: ФС на корни астрагала перепончатого, ФСП
на сбор нейропротективный, Лабораторный регламент на производство
сбора нейропротективного, ФСП на «Брэйн-профит» экстракт сухой,
Лабораторный регламент на производство «Брэйн-профит» экстракта
сухого.
Научная новизна
Впервые проведено фармакогностическое изучение корней астрагала
перепончатого, произрастающего в Восточной Сибири. Установлены макрои микроскопические признаки, позволяющие установить подлинность
растительного сырья. С использованием современных методов анализа
установлено наличие флавоноидов, фенолкарбоновых, оксикоричных,
коричной и аскорбиновой кислот, дубильных веществ, кумаринов,
тритерпеновых сапонинов, углеводов, белковых веществ и алкалоидов.
Изучен состав жирных кислот, из них в составе ненасыщенных кислот
определены линолевая, α-линоленовая, олеиновая кислоты. Определен
аминокислотный и минеральный состав. Установлено количественное
содержание основных действующих веществ: свободных аминокислот
(10,28±0,30%), тритерпеновых сапонинов (1,51±0,04%), углеводов (СУ –
9,23%, ВРПС – 8,32%, ПВ – 7,02%, Гц А – 13,17%, Гц А – 2,12%),
флавоноидов в корнях астрагала перепончатого, а также изучена зависимость
накопления свободных аминокислот от фазы вегетации, причем наибольшее
их содержание отмечено в фазу плодоношения.
Обоснован
и
разработан
оптимальный
вариант
сбора
нейропротективного, включающий три вида растительного сырья.
Определено количественное содержание БАВ в сборе: флавоноидов
9,67±0,32%, свободных аминокислот 3,66±0,18%, кумаринов 0,80±0,03%,
тритерпеновых
сапонинов
0,06±0,01%,
полисахаридов
4,59±0,20;
органических кислот 1,22±0,05%, дубильных веществ 1,38±0,02%,
аскорбиновой кислоты 1,55±0,06%, эфирных масел, жирных кислот,
свободных углеводов, макро- и микроэлементов.
Установлена зависимость выхода свободных аминокислот и
флавоноидов от режимов экстрагирования и разработана технология
получения «Брэйн-профит» экстракта сухого; изучен химический состав и
предложены критерии для оценки его качества.
Для стандартизации исследуемых средств разработаны методики
4
количественной оценки суммы свободных аминокислот в пересчете на
аспарагин для корней астрагала перепончатого; суммы флавоноидов в
пересчете на байкалин и суммы свободных аминокислот в пересчете на
аргинин для сбора нейропротективного и «Брэйн-профит» экстракта сухого;
а также установлены нормы содержания свободных аминокислот для корней
астрагала перепончатого – не менее 10,0%, нормы содержания флавоноидов
и свободных аминокислот для сбора – не менее 6,0% и 3,0%, соответственно,
и для экстракта сухого – не менее 24,0% и 7,5%, соответственно.
Предложенные методики валидированы.
Для сбора нейропротективного, «Брэйн-профит» экстракта сухого
установлена
нейропротективная
активность,
подтвержденная
фармакологическими исследованиями.
Практическая значимость работы
По результатам исследований разработаны проект Фармакопейной
статьи (ФС) на корни астрагала перепончатого, проекты Фармакопейных
статей предприятий (ФСП) на сбор нейропротективный и «Брэйн-профит»
экстракт сухой, лабораторные регламенты на производство сбора
нейропротективного и «Брэйн-профит» экстракта сухого (Утв. на засед. Уч.
Сов. ИОЭБ СО РАН, протокол № 10 от 18.12.2014). Методика
количественного определения свободных аминокислот в корнях астрагала
перепончатого апробирована на ООО «Малое инновационное предприятие
«Арура» (Акт о внедрении от 23.10.2014). Методики количественного
определения БАВ в сборе нейропротективном внедрены в учебный процесс
кафедры фармации ФГБОУ ВПО «Бурятский государственный университет»
(Акт о внедрении от 23.10.2014).
Работа выполнена в соответствии с программой и планом научноисследовательских работ Института общей и экспериментальной биологии
СО РАН по проекту № 146 «Разработка лекарственных и профилактических
препаратов для медицины. Фундаментальные основы и реализация»,
утвержденному президиумом СО РАН, а также при поддержке Фонда
Михаила Прохорова, проект «Академическая мобильность» (Решение
Экспертного Совета Фонда Михаила Прохорова, выписка № 5 из Протокола
№ 4 от 21.03.2014.).
Личный вклад автора
Автор принимал участие в выборе направления исследования,
постановке целей и задач, выборе объекта исследования, проведении
экспериментальных работ, обобщении полученных данных и их
статистической обработки.
Соответствие диссертации паспорту научной специальности
Научные положения диссертационной работы соответствуют формуле
специальности 14.04.02 – Фармацевтическая химия, фармакогнозия.
Результаты проведенного исследования соответствуют пунктам 2, 3, 6.
Апробация
работы.
Основные
результаты
исследований
докладывались и обсуждались на: IV Всероссийском научно-практическом
семинаре молодых ученых с международным участием «Современные
5
проблемы медицинской химии. Направленный поиск новых лекарственных
средств» (Волгоград, 2012); XX Российском национальном конгрессе
«Человек и лекарство» (Москва, 2013); VI International scientific conference
«Traditional medicine: ways of integration with modern health care» (Ulan-Ude,
2013).
Публикации. Основное содержание работы отражено в 7 научных
работах, из них 3 статьи – в изданиях, рекомендованных ВАК МО и науки
РФ.
Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена
на 286 страницах, состоит из введения, обзора литературы, материалов и
методов исследований, трех глав, посвященных экспериментальным
исследованиям, общих выводов, списка используемой литературы и 5
приложений. В тексте работы приведены 65 таблиц и 51 рисунок.
Библиографический указатель содержит 262 источника, из которых 121 – на
иностранных языках.
Во введении обоснована актуальность темы, определены цель и задачи
исследования, сформулированы научная новизна и практическая значимость
работы.
В первой главе изложены краткие сведения о цереброваскулярных
заболеваниях, классификации и механизмах действия ноотропов
синтетического и растительного происхождения, приведены сведения о
растениях, входящих в состав сбора, а также освещены вопросы получения
экстрактов сухих из сборов и растительных композиций.
Во второй главе приведены сведения об объектах исследований,
характеристике используемых приборов и методов, описаны методики
проведения экспериментов.
Третья глава посвящена фармакогностическому изучению корней
астрагала
перепончатого.
Установлены
особенности
макрои
микроскопического строения, проведено фитохимическое изучение с
применением качественных реакций, методов тонкослойной хроматографии
(ТСХ),
УФ-спектрофотометрии,
высокоэффективной
жидкостной
хроматографии (ВЭЖХ), газовой хроматографии – масс-спектрометрии (ГХМС), ионообменной хроматографии, эмиссионного спектрального анализа, а
также
приведены
результаты
стандартизации
корней
астрагала
перепончатого.
В четвертой главе экспериментально обоснованы состав и
соотношение
компонентов
сбора
нейропротективного.
Изложена
технологическая схема получения сбора и его товароведческие показатели.
Качественными реакциями подтверждено наличие в сборе основных БАВ.
Методами бумажной хроматографии (БХ), ТСХ, ВЭЖХ, ГХ-МС,
ионообменной хроматографии, капельного электрофореза (КЭ) и
эмиссионного спектрального анализа идентифицированы и количественно
определены фенольные соединения, аминокислоты, свободные углеводы,
6
тритерпеновые сапонины, органические кислоты, жирные кислоты, эфирное
масло, макро- и микроэлементы. Разработаны и предложены методики
количественного определения суммы флавоноидов в пересчете на байкалин,
суммы свободных аминокислот в пересчете на аргинин для сбора
нейропротективного.
Глава пятая содержит исследования по разработке способа получения
«Брэйн-профит» экстракта сухого. Обоснованы оптимальные условия
экстрагирования, представлена технологическая схема производства,
приведены результаты фитохимического исследования экстракта сухого.
Разработаны методики количественного определения суммы флавоноидов и
свободных аминокислот – по принципу сквозной стандартизации.
На защиту выносятся:
- результаты морфолого-анатомического и фитохимического изучения
корней астрагала перепончатого;
- данные по разработке рационального состава и соотношения компонентов
сбора нейропротективного;
- результаты исследований по разработке способа получения сбора
нейропротективного и «Брэйн-профит» экстракта сухого;
- результаты фармакогностического изучения сбора и фитохимического
изучения экстракта сухого;
- результаты исследований по стандартизации корней астрагала
перепончатого, сбора нейропротективного и «Брэйн-профит» экстракта
сухого.
ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ
Объекты и методы исследования
Объектами исследования служили образцы опытных партий сбора
нейропротективного, «Брэйн-профит» экстракта сухого, полученного на
основе сбора, а также корни астрагала перепончатого, корни шлемника
байкальского (ФС 42-453-91), корневища и корни вздутоплодника
сибирского (ФС 42-2667-89). Сырье приобретено в ГАУЗ РКБ ВЛ «Центр
Восточной Медицины», ПТ «Даурская заготовительная компания». Корни
астрагала перепончатого собраны в различных районах Республики Бурятия
и Прибайкальском крае в 2008-2012 гг.
Сборы готовили в соответствии с требованиями статьи «Сборы», ГФ XI
изд. (вып.1, с. 266). Измельчение воздушно-сухого сырья проводили согласно
ГФ XI изд., вып.1, с. 285; отбор средней и аналитической проб – ГФ XI изд.,
вып.1, с. 273; изучение внешних признаков – ГФ XI изд., вып.1, с. 266-267;
изучение анатомических признаков – ГФ ХI изд., вып. 1, с. 277. Для
экстракции БАВ и приготовления хроматографических систем растворителей
использовали реактивы марок «ч», «хч», «чда».
Определение экстрактивных веществ в сырье проводили согласно ГФ XI
изд., вып. 1, с. 295; определение золы общей – ГФ XII изд., ч. 1, с. 115, золы, не
растворимой в 10% растворе хлористоводородной кислоты – ГФ XI изд., вып. 2,
с. 24; определение тяжелых металлов в экстракте сухом – ГФ XI изд., вып. 1, с.
7
160; определение плотности отгона осуществляли – ГФ XI изд., вып. 1, с. 24.
Хроматографическое исследование веществ
проводили методами
восходящей хроматографии на бумаге марок «Filtrak» FN-12 и FN-16 и
тонкослойной хроматографии на пластинах ПТСХ-П-А-УФ-254 «Sorbfil» и
«Silufol UV254», используя следующие системы растворителей: 15% кислота
уксусная (1), н-бутанол-уксусная кислота-вода (4:1:2) (2), этилацетат-ледяная
уксусная кислота (80:20) (3), этанол-уксусная кислота: вода (90:9:1) (4),
гексан- бензол-метанол (5:4:1) (5), хлороформ-этанолол (9:1) (6), бензолэтилацетат (2:1) (7), хлороформ-метанол (60:40) (8), н-бутанол-95% спиртраствор аммиака (7:2:5) (9). Все величины Rf обнаруженных соединений
являются средними из пяти измерений. Спектры поглощения регистрировали
на приборе CФ-2000 и ПЭ-5400УФ в кюветах с толщиной поглощающего слоя
1 см. ВЭЖХ-анализ фенольных соединений проводили на жидкостном
хроматографе «Gilston», модель 305 (Франция), инжектор ручной
«Rheodyne», модель 7125 (США) с последующей компьютерной обработкой
результатов исследования программой «Мультихром» для «Windows».
Колонка – 25×0,46 см с октадецилсилил силикагелем (Kromasil C 18), 5 мкм.
Подвижная фаза – метанол – вода – фосфорная кислота (концентрированная)
(40:60:0,5). Температура колонки – 25ºС. Скорость потока – 0,8 мл/мин.
Детектор – спектрофотометрический «Gilston» UV/VIS, модель 131, λ 254 нм.
Объем пробы – 50 мкл. Продолжительность анализа 90 мин.
ВЭЖХ-анализ свободных углеводов и органических кислот проводили
на жидкостном хроматографе «Gilston», модель 305 (Франция), инжектор
ручной «Rheodyne», модель 7125 (США) с последующей компьютерной
обработкой результатов исследования программой «Мультихром» для
«Windows». Колонка – 30×0,65 см с сульфированным сополимером
стиролдивинилбензола (Altech OA-1000 Organic Acids), 9 мкм. Подвижная
фаза – 0,05 М раствор серной кислоты. Температура колонки – 65ºС.
Скорость потока – 0,8 мл/мин. Детектор – спектрофотометрический «Gilston»
UV/VIS, модель 131, λ 190 нм. Объем пробы – 20 мкл. Продолжительность
анализа 30 мин.
Компонентный состав эфирного масла и фракции общих липидов
исследовали на газовом хроматографе Agilent 6890 (Agilent Technologies,
США) с квадрупольным масс-спектрометром (HP MSD 5973N) в качестве
детектора. Использовалась 30-метровая кварцевая колонка НР-5MS с
внутренним
диаметром
0,25
мм
(неподвижная
фаза
фенил-:
диметилполисилоксан 5:95). Идентификацию соединений проводили путем
сравнения
полных
масс-спектров
и
времен
удерживания
с
соответствующими данными чистых соединений и по данным массспектральной библиотеки NIST 08 и NIST 11.
Качественный состав и количественное содержание аминокислот
определяли на аминокислотном анализаторе ААА-339 (Microtechina, Чехия).
Элементный состав определяли на масс-спектрометре с индуктивной
плазмой «Elan 9000» (Perkin Elmer, США) согласно МУК 4.1.1483-03.
Определение содержания витаминов группы В и свободных углеводов в
8
объектах проводили с использованием системы капельного электрофореза
«Капель-105/105М».
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Фармакогностическое изучение корней астрагала перепончатого
В связи с отсутствием НД на корни астрагала перепончатого первым
этапом наших исследований явилось их фармакогностическое изучение и
стандартизация с целью разработки проекта ФС на сырье. Известно, что
корни астрагала перепончатого содержат сапонины (астрагалозиды,
агроастрагалозиды, астрамембранозиды и др.), флавоноиды (флавоны,
изофлавоны, изофлавононы, птерокарпаны), аминокислоты и полисахариды
(астрагаланы и др.) (Wagner, 2011).
В
результате
проведенных
исследований
установлены
макродиагностические признаки: корни стержневые, ветвистые до 4 см
толщиной,
одревесневшие,
волокнистые,
поверхность
продольноморщинистая, от серовато-желтого до желтовато-бежевого цвета. Запах
слабый, специфический. Вкус водного извлечения – сладковато-горький.
Определены микродиагностические признаки: вторичное беспучковое
строение. В коровой части корня находится хорошо развитая многорядная
пробка, которая совместно с 3-5 рядами колленхимы образует феллодерму.
Камбиальный пояс сплошной, многорядный. Флоэмные лучи часто
изогнутые и потрескавшиеся. Сердцевинные лучи 2-5-рядные. В корнях
присутствуют волокна, бесцветные или оранжевато-желтые, с характерными
утолщенными стенками, продольными трещинами и щеткообразными
кончиками, расположены группами или одиночно в коровой и древесной
частях корня. Каменистые клетки изодиаметрической или вытянутой формы
с утолщенными, бороздчатыми стенками и простыми углублениями,
встречаются в феллодерме. Клетки коры, древесины и сердцевины содержат
простые крахмальные зерна.
Для порошка (0,5 мм) характерно: наличие обрывков хорошо развитой
многорядной пробки, паренхимы, бесцветных и оранжевато-желтых
механических волокон с характерными утолщенными стенками и
продольными трещинами, сетчатых сосудов древесины, групп каменистых
клеток изодиаметрической или вытянутой формы с утолщенными,
бороздчатыми стенками и простых крахмальных зерен.
При фитохимическом изучении 70% спиртовых извлечений корней
астрагала перепончатого идентифицированы фенольные соединения методом
ВЭЖХ. Обнаружены флавоноиды (дигидрокверцетин, лютеолин-7-гликозид,
рутин, кемпферол, нарингенин, катехин, (-)-эпигаллокатехингаллат, (-)эпикатехин), оксикоричные кислоты (о-кумаровая, хлорогеновая, кофейная,
цикориевая, неохлорогеновая, феруловая, изоферуловая). Обнаружены также
галловая, коричная, аскорбиновая кислоты, дубильные вещества и кумарины
(кумарин, о-метоксикумарин).
Углеводный комплекс корней астрагала перепончатого представлен
фракциями: свободные углеводы (СУ) – 9,23%, водорастворимые
9
полисахариды (ВРПС) – 8,32%, пектиновые вещества (ПВ) – 7,02%,
гемицеллюлозы А (Гц А) – 13,17%, гемицеллюлозы Б (Гц Б) – 2,12%,
компонентный состав которых представлен: СУ – мальтотриоза, ксилоза,
манноза; ВРПС – глюкоза; ПВ – манноза, глюкоза; Гц А – глюкоза, ксилоза;
Гц Б – глюкоза, ксилоза, манноза, галактоза.
Определен аминокислотный состав, идентифицировано 17 свободных и
19 связанных аминокислот, среди них 9 незаменимых кислот – треонин,
метионин, изолейцин, лейцин, лизин, гистидин, аргинин, валин,
фенилаланин. Суммарное содержание свободных аминокислот в сырье
составляет 7,09 мг/г, из них в наибольшем количестве присутствуют
аспарагин – 31,60%, аргинин – 27,11%, глютамин – 21,27% и глутаминовая
кислота – 10,14% (таблица 1).
Таблица 1 – Содержание свободных и связанных аминокислот в растительных объектах
№
п/п
Аминокислота
Корни
астрагала
перепончатого
Своб.
Аспарагиновая
кислота
0,09
1.
2.
Треонин*
0,03
3.
Серин
0,10
4.
Аспарагин
2,24
5.
Глутаминовая кислота
0,72
6.
Глютамин
1,51
7.
Глицин
0,24
8.
Аланин
0,03
9.
Валин*
10.
Цистеин
0,06
11.
Метионин*
0,02
12.
Изолейцин*
0,01
13.
Лейцин*
0,01
14.
Тирозин
15.
Фенилаланин*
16.
γ-Аминомаслянная кислота
0,02
17.
Этаноламин
18.
Орнитин
0,01
19.
Лизин*
0,01
20.
Гистидин*
0,07
21.
Аргинин*
1,92
22.
Пролин
Сумма
7,09
Примечание: * - незаменимые аминокислоты
Связ.
6,22
1,75
2,20
6,54
1,33
1,05
2,34
1,78
0,24
1,48
2,57
1,53
0,75
0,15
0,34
0,10
5,12
4,90
7,55
47,94
Сбор
нейропротективный
Содержание, мг/г
Своб.
Связ.
0,11
5,31
0,02
1,69
0,03
2,06
1,04
0,30
5,55
0,46
0,11
1,60
0,06
1,23
0,04
1,45
0,11
4,37
0,02
0,26
0,04
1,10
0,02
2,30
0,01
1,19
0,02
1,43
0,07
0,12
0,16
0,17
0,02
0,02
0,90
0,08
3,95
1,97
7,08
3,78
4,71
45,54
«Брэйн-профит»
экстракт сухой
Своб.
0,11
0,03
0,03
2,01
0,67
0,97
0,26
0,05
0,03
0,12
0,04
0,13
0,04
0,03
0,07
0,16
0,53
0,05
0,04
0,07
3,92
9,36
Связ.
7,36
0,56
0,53
5,06
0,86
0,51
0,19
1,88
0,17
0,17
0,41
0,32
0,35
0,36
0,28
0,20
0,49
9,07
28,77
Изучен состав фракции общих липидов корней астрагала
перепончатого методом ГХ – МС (рисунок 1). Идентифицировано 11 жирных
кислот, в наибольшем количестве присутствуют ненасыщенные – линолевая
10
(37,75%), α-линоленовая (14,05%), олеиновая (6,88%) и насыщенная –
пальмитиновая (25,23%) кислоты.
1
3
4
2
Рисунок 1 – Хроматограмма метиловых эфиров жирных кислот корней астрагала
перепончатого (1 – пальмитиновая кислота, 2 – олеиновая кислота, 3 – линолевая кислота,
4 – α-линоленовая кислота)
Определено наличие 28 макро- и микроэлементов в корнях астрагала
перепончатого
методом
эмиссионного
спектрального
анализа.
Макроэлементы представлены K – 0,51%, Ca – 0, 25%, Р – 0,15%, Mg – 0,11%
и Na – 0,005%. Cреди микроэлементов преобладают Fe – 168,90 мг/кг, Mn –
14,70 мг/кг, B – 13,80 мг/кг. Содержание азота общего, определенного
фотоколориметрическим методом, составило 2,30%.
Установлено количественное содержание БАВ: суммы органических
кислот 1,96±0,03%, дубильных веществ 0,44±0,02% и тритерпеновых
сапонинов
1,51±0,04%
с
использованием
титриметрических
и
спектрофотометрических методов анализа.
Разработка методики количественного определения суммы свободных
аминокислот в корнях астрагала перепончатого
Предложена спектрофотометрическая методика для количественного
определения свободных аминокислот в корнях астрагала перепончатого,
основанная на измерении максимума поглощения комплекса, образующегося
при нингидриновой реакции. Выбор аспарагина в качестве стандартного
образца обусловлен тем, что УФ-спектры нингидриновых комплексов
аминокислот извлечений корней астрагала перепончатого и РСО аспарагина
совпадают при длине волны 569 нм (рисунок 2) и данными ионообменной
хроматографии (таблица 1).
11
0,6
Absorbance (AU)
0,5
10% спиртовое
извлечение корней
астрагала
перепончатого
РСО аспарагина
0,4
0,3
0,2
Рисунок 2 – Спектры поглощения
комплексов 10% спиртового извлечения
корней астрагала перепончатого (1) и
раствора РСО аспарагина (2) с 0,4%
водным раствором нингидрина
0,1
0
400
500
600
Wavelength, nm
700
800
Оптимизированы условия анализа: степень измельчения сырья – 2 мм,
экстрагент – 10% спирт, соотношение сырье: экстрагент – 1:100, кратность и
время анализа – двукратно, 60 и 30 мин, температура проведения анализа –
40˚С, для нингидриновой реакции объем извлечения из сырья – 1 мл, объем и
концентрация раствора нингидрина – 1 мл 0,4% водного раствора
нингидрина, добавление в реакционную смесь 2 мл 0,05% водного раствора
аскорбиновой кислоты и 2 мл ацетатного буферного раствора рН=4,5 для
стабилизации нингидринового комплекса.
Содержание свободных аминокислот в корнях астрагала перепончатого
в пересчете на аспарагин и абсолютно сухое сырье должно составлять не
менее 10,0% (таблица 2).
Таблица 2 – Метрологические характеристики методики количественного определения
суммы свободных аминокислот в корнях астрагала перепончатого
f
9
Хср, %
10,28
S2
0,01760
S
0,13266
P, %
95
t (P, f)
2,26
ΔХ
0,29982
E, %
±2,92
Относительная ошибка методики  2,92%. Опытами с добавками
доказано отсутствие систематической ошибки в предложенной методике.
Методика
валидирована,
подтверждена
ее
правильность,
прецизионность, специфичность, аналитическая область, линейность и
диапазон. Полученные данные внесены в проект ФС на корни астрагала
перепончатого. Установлен предварительный срок годности корней
астрагала перепончатого – 2 года.
Фитохимическое изучение сбора нейропротективного
Исходными компонентами сбора являются растения, обладающие
нейропротективным действием: корни астрагала перепончатого, корни
шлемника байкальского, корневища и корни вздутоплодника сибирского.
При составлении сбора использовалось растительное сырье, отвечающее
требованиям НД. Изучены несколько вариантов растительной композиции,
которые оценивались по количественному содержанию экстрактивных
веществ, суммы флавоноидов и суммы свободных аминокислот. Состав
данного сбора выбран на основании результатов фитохимического анализа:
корни астрагала перепончатого – 40 частей, корни шлемника байкальского –
35 частей, корневища и корни вздутоплодника сибирского – 25 частей.
12
Разработана технологическая схема получения сбора, включающая основные
стадии: ТП 1. Измельчение и просеивание растительного сырья; ТП. 2.
Получение готового продукта; УМО.1. Фасовка и упаковка.
Для сбора нейропротективного установлены следующие показатели
качества: экстрактивных веществ, извлекаемых водой, не менее 26,0%;
суммы флавоноидов в пересчете на байкалин, не менее 6,0%; суммы
свободных аминокислот в пересчете на аргинин, не менее 3,0%; золы общей
не более 10,0%; золы, не растворимой в 10% растворе хлористоводородной
кислоты, не более 5,0%; влажность не более 10,0%; частиц, не проходящих
сквозь сито с отверстиями диаметром 2 мм, не более 3,0%; частиц,
проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 0,25 мм, не более 5,0%;
органической примеси не более 1,5 %, минеральной примеси не более 2,0%.
Для порошка сбора нейропротективного выявлены диагностически
значимые признаки его компонентов (рисунок 3).
Для корней астрагала перепончатого: сетчатые сосуды древесины (2) и
бесцветные механические волокна (3); для корней шлемника байкальского –
желтые клетки паренхимы округлой формы (4) и склереиды (5); для
корневищ и корней вздутоплодника сибирского- бесцветные клетки
паренхимы изогнутой формы (6) и сосуды (7).
Рисунок 3 – Диагностически значимые признаки компонентов сбора нейропротективного
(1 – увеличение 4×10; 2,3,4,6,7 – увеличение 10×10; 5 – увеличение 40×10; 2 – сетчатые
сосуды древесины, 3 – бесцветные механические волокна (корни астрагала
перепончатого); 4 – клетки паренхимы, 5 – склереиды (корни шлемника байкальского); 6 –
клетки паренхимы, 7 – сосуды (корневища и корни вздутоплодника сибирского))
Определены индексы участия компонентов сбора: для корней астрагала
перепончатого – 42,30±2,10, корней шлемника байкальского – 34,67±1,58,
корневищ и корней вздутоплодника сибирского – 23,03±1,02.
Согласно данным литературы и проведенному фитохимическому
исследованию преобладающей группой БАВ являются фенольные
соединения. Это подтверждается методами БХ, ТСХ, а также ВЭЖХ. Так,
методом БХ в 70% спиртовом извлечении сбора (системы 1 и 2) после
обработки раствором AlCl3 идентифицированы 4 зоны: рутин (желтая с
13
Rf1=0,56, Rf2=0,64), кверцетин (желто-зеленая с Rf1=0,05, Rf2=0,78), лютеолин
(коричневая с Rf1=0,07, Rf2=0,84), лютеолин-7-гликозид (желтая с Rf1=0,90,
Rf2=0,47).
Методом ТСХ в сборе обнаружены байкалин (система 8, Rf=0,19),
скополетин, дигидросамидин, умбеллиферон, пеуцинидин, виснадин
(система 5, Rfс=0,14, Rfд=0,25, Rfу=0,34, Rfп=0,57, Rfв=0,76), аскорбиновая
кислота (системы 3 и 4, Rf3=0,05, Rf4=0,75).
Методом
ВЭЖХ
обнаружены
флавоноиды
(байкалин,
дигидрокверцетин,
лютеолин-7-гликозид,
рутин,
кверцетин,
(-)эпигаллокатехингаллат,
(-)-эпикатехин),
фенолкарбоновые
кислоты
(галловая, вератровая), оксикоричные кислоты (хлорогеновая, кофейная,
цикориевая, неохлорогеновая, феруловая кислоты), дубильные вещества и
кумарины (дикумарин, кумарин) (рисунок 4).
Рисунок 4 – Хроматограмма 70% спиртового извлечения сбора нейропротективного, при
254 нм (1 - таннин, 2 - галловая кислота, 3 – (-)-эпигаллокатехингаллат, 4 - дикумарин, 5 хлорогеновая кислота, 6 – (-)-эпикатехин, 7 - кофейная кислота, 8 - цикориевая кислота, 9
- неохлорогеновая кислота, 10 - дигидрокверцетин, 11 - феруловая кислота, 12 - кумарин,
13 - вератровая кислота, 14 - лютеолин-7-гликозид, 15 - рутин, 16 - байкалин)
Установлен качественный состав и количественное содержание
аминокислот сбора (таблица 1). Среди них: 9 незаменимых аминокислот –
треонин, валин, метионин, изолейцин, лейцин, фенилаланин, лизин,
гистидин, аргинин. Суммарное содержание свободных аминокислот в сборе
составляет 4,71 мг/г. В наибольшем количестве присутствуют аргинин –
41,92%, аспарагин – 22,15%, глютамин – 9,86% и глутаминовая кислота –
6,47%.
При исследовании водных извлечений сбора нейропротективного
методом ВЭЖХ идентифицированы моносахариды (глюкоза, рамноза),
дисахариды (сахароза, лактоза), органическая кислота (янтарная кислота) и
многоатомный спирт (ксилит), среди которых в количественном отношении
преобладает рамноза.
Установлен
компонентный
состав
эфирного
масла
сбора
нейропротективного методом ГХ-МС. Идентифицировано 74 соединения, из
них преобладают лимонен (52,17%), терпинолен (5,21%), α-фелландрен
14
(3,84%), эвдесма-3,7(11)-диен-8-он (3,58%), 3-карен (3,39%), α-селинен
(2,82%), β-мирцен (1,96%), ацетофенон (1,72%), диметиловый эфир
тимогидрохинона (1,51%), п-цимол (1,47%), спатуленол (1,46%), α-пинен
(1,40%) (рисунок 5).
Рисунок 5 – Хроматограмма эфирного масла сбора нейропротективного (1 – гексаналь, 2 α-пинен, 3 - β-мирцен, 4 - 3-карен, 5 – лимонен, 6 – ацетофенон, 7 – терпинолен, 8 –
диметиловый эфир тимогидрохинона, 9 - α-селинен, 10 – спатуленол, 11 - эвдесма-3,7(11)диен-8-он)
Изучен компонентный состав фракции общих липидов, выделенной из
сбора. Обнаружено 15 жирных кислот, среди которых выявлено наибольшее
содержание ненасыщенных – линолевой (42,80%), олеиновой (27,15%), αлиноленовой (3,07%) и насыщенных - пальмитиновой (9,35%) кислот
(рисунок 6).
3
2
1
4
Рисунок 29 – Хроматограмма метиловых эфиров жирных кислот сбора
нейропротективного (1 – пальмитиновая кислота, 2 – олеиновая кислота, 3 – линолевая
кислота, 4 – α-линоленовая кислота)
Определено
содержание
витаминов
группы
В
в
сборе
нейропротективном, его компонентах и «Брэйн-профит» экстракте сухом
методом КЭ (таблица 3).
15
Таблица 3 – Результаты количественного определения содержания витаминов группы В в
растениях,сборе и экстракте сухом
№ Вита
мины
1.
2.
3.
4.
5.
6.
астрагал
перепончатый
(корни)
В1
В2
В3
В5
В6
Вс
0,20
2,60
3,88
1,19
Содержание, x·10-2%
шлемник
вздутоплод- сбор нейро- «Брэйнбайкальский ник
протекпрофит»
(корни)
сибирский
тивный
экстракт сухой
(корневища
и корни)
1,79
0,65
1,83
8,98
6,47
4,91
13,82
35,85
12,50
35,19
431,31
152,00
427,85
9,43
1,39
5,30
14,92
4,77
2,70
7,60
Количественное определение БАВ в сборе проведено с использованием
химических и физико-химических методов: для суммы органических кислот
и дубильных веществ – титриметрия; для аскорбиновой кислоты,
полисахаридов, тритерпеновых сапонинов – спектрофотометрия, для
кумаринов – хромато-спектрофотометрия. Результаты исследований и
данные статистической обработки приведены в таблице 4.
Таблица 4 – Содержание основных БАВ в сборе нейропротективном
БАВ
Органические
кислоты
Дубильные
вещества
Аскорбиновая
кислота
Полисахариды
Тритерпеновые
сапонины
Кумарины
f
4
Xср,%
1,22
S2
0,00027
S
0,01643
P,%
95
t(P,f)
2,78
∆X
0,04568
E,%
±3,74
4
1,38
0,00007
0,00837
95
2,78
0,02326
±1,68
4
1,55
0,00049
0,02232
95
2,78
0,06205
±3,93
4
4
4,59
0,06
0,0053
0,06*10-4
0,0728
25,1*10-4
95
95
2,78
2,78
0,2024
116,30*10-4
±4,41
±4,01
4
0,80
0,00013
0,01140
95
2,78
0,03170
±3,94
В сборе нейропротективном методом эмиссионного спектрального
анализа определено содержание 28 макро- и микроэлементов.
Макроэлементы представлены К – 0,64%, Са – 0,43%, Mg – 0,26%, P – 0,14%,
Na – 0,03%. Микроэлементный состав сбора представлен 23 элементами,
среди которых преобладают Fe – 244,00 мг/кг, Mn – 26,20 мг/кг, Zn – 17,50
мг/кг и B – 14,70 мг/кг. Содержание азота общего, определенного
фотоколориметрическим методом, составило 1,42%.
Разработка
методики
количественного
определения
суммы
флавоноидов в сборе нейропротективном
Для количественной оценки флавоноидов в сборе разработана
методика прямой спектрофотометрии. В качестве стандартного образца
16
выбран РСО байкалина, т.к. его максимум поглощения совпадает с
максимумом
поглощения
60%
спиртового
извлечения
сбора
нейропротективного (рисунок 7).
0,7
Absorbance (AU)
0,6
0,5
0,4
0,3
60% спиртовое извлечение
сбора нейропротективного
0,2
РСО байкалина
0,1
0
250
300
350
400
Wavelength, nm
Рисунок 7 – Спектры поглощения сбора нейропротективного (60% спиртового
извлечения) и раствора РСО байкалина
Оптимизированы условия анализа: степень измельчения сырья – 1 мм,
экстрагент – 60% спирт, соотношение сырье: экстрагент – 1:100, кратность и
время анализа – однократно, 60 мин, температура анализа – 100°C.
Содержание суммы флавоноидов в сборе нейропротективном в
пересчете на байкалин и абсолютно сухое сырье должно быть не менее 6,0%
(таблица 5).
Таблица 5 – Метрологические характеристики методики количественного определения
суммы флавоноидов в пересчете на байкалин в сборе
f
9
Хср,%
9,67
S2
0,02069
S
0,14384
P, %
95
t (P, f)
2,26
Δx
0,32507
E, %
±3,36
Относительная ошибка методики составляет ±3,36%. Результаты
опытов с добавками свидетельствуют об отсутствии систематической
ошибки в разработанной методике. Результаты, полученные при валидации
методики количественного определения суммы флавоноидов в сборе, в
пересчёте на байкалин, позволяют оценить ее положительно по параметрам
правильность, прецизионность, специфичность, аналитическая область,
линейность и диапазон.
Разработка методики количественного определения суммы свободных
аминокислот в сборе нейропротективном
Для количественной оценки свободных аминокислот в сборе
предложена спектрофотометрическая методика, основанная на способности
аминокислот образовывать окрашенный комплекс с нингидрином.
Выбор аргинина в качестве стандартного образца обусловлен
спектрами поглощения комплексов аргинина и аминокислот сбора с
17
Absorbance (AU)
нингидрином (рисунок 8) и данными ионообменной хроматографии (таблица
1).
0,5
0,45
0,4
0,35
0,3
0,25
0,2
0,15
0,1
0,05
0
Водное извлечение сбора
нейропротективного
РСО аргинина
400
500
600
700
800
Wavelength, nm
Рисунок 8 – Спектры поглощения комплексов водного извлечения сбора (1) и раствора
РСО аргинина (2) с 0,2% водным раствором нингидрина
Подобраны оптимальные условия анализа: степень измельчения сырья
– 1 мм, экстрагент – вода очищенная, соотношение сырье: экстрагент – 1:150,
кратность и время анализа – однократно, 60 мин, температура анализа – 90˚С,
для нингидриновой реакции объем извлечения из сбора – 1 мл, объем и
концентрация раствора нингидрина – 1 мл 0,2% водного раствора
нингидрина, добавление в реакционную смесь 2 мл 0,05% водного раствора
аскорбиновой кислоты и 2 мл ацетатного буферного раствора рН=4,5 для
стабилизации нингидринового комплекса.
Содержание свободных аминокислот в сборе нейропротективном в
пересчете на аргинин и абсолютно сухое сырье должно составлять не менее
3,0% (таблица 6).
Таблица 6 – Метрологические характеристики методики количественного определения
суммы свободных аминокислот в пересчете на аргинин в сборе
f
9
Хср,%
3,66
S2
0,00624
S
0,07902
P, %
95
t (P, f)
2,26
Δx
0,17859
E, %
±4,88
Относительная ошибка методики  4,88%. Опытами с добавками
доказано отсутствие систематической ошибки в предложенной методике.
Результаты, полученные при валидации методики количественного
определения суммы свободных аминокислот в сборе, в пересчёте на аргинин,
позволяют оценить ее положительно по параметрам правильность,
прецизионность, специфичность, аналитическая область, линейность и
диапазон. Полученные данные внесены в проект ФСП на сбор
нейропротективный. Установлен предварительный срок годности сбора – 2
года.
18
Разработка способа получения и стандартизация «Брэйн-профит»
экстракта сухого
Дальнейшей задачей нашего исследования явилась разработка способа
получения экстракта сухого из сбора. Экспериментально подобраны
оптимальные условия экстрагирования: экстрагент – 60% спирт,
соотношение сырье: экстрагент – 1:(10-12), степень измельчения сбора – 1
мм, температура экстрагирования – 60°С, кратность и время экстракции –
трехкратно, по 60 мин.
Разработана технологическая схема получения «Брэйн-профит»
экстракта сухого на 5 балансовых загрузках в лабораторных условиях,
состоящая из стадий: ТП 1. Измельчение сбора нейропротективного; ТП 2.
Получение готового продукта (приготовление 60% спирта, экстракция
измельченного сбора, фильтрация экстракта, концентрирование экстракта,
сепарирование экстракта, доупарка очищенного экстракта, сушка экстракта,
измельчение готового продукта); УМО 1. Фасовка и упаковка экстракта
сухого.
Экстракт сухой представляет собой аморфный порошок от светлокоричневого до темно-коричневого цвета со специфическим запахом.
Гигроскопичен. Комкуется. Потеря в массе при высушивании не превышает
5,0%. Растворим в спиртовых растворах (40-70%), в горячей воде.
Сульфатная зола из 1,0 г экстракта сухого должна выдерживать испытания на
тяжелые металлы — не более 0,01%.
С использованием современных методов анализа установлено наличие
в экстракте сухом основных групп БАВ, относящихся к следующим классам
соединений: флавоноиды, аминокислоты, кумарины, тритерпеновые
сапонины, фенолкарбоновые и оксикоричные кислоты, дубильные вещества,
органические кислоты, полисахариды, аскорбиновая кислота, макро- и
микроэлементы.
В экстракте сухом определены 21 свободная и 18 связанных
аминокислот, среди них 9 незаменимых аминокислот – треонин, валин,
метионин, изолейцин, лейцин, фенилаланин, лизин, гистидин, аргинин.
Суммарное содержание свободных аминокислот в экстракте составляет 9,36
мг/г. В наибольшем количестве присутствуют аргинин – 41,91%, аспарагин –
21,51%, глютамин – 10,35% и глутаминовая кислота – 7,12% (от общего
количества аминокислот).
При изучении минерального состава экстракта сухого обнаружены
макроэлементы: K – 1,84%, Mg – 0,46%, P – 0,20 %, Ca – 0,12%, Na – 0,11%.
Cреди микроэлементов преобладают Fe – 244,00 мг/кг, Mn – 26,20 мг/кг, Zn –
17,50 мг/кг, B – 14,70 мг/кг.
При исследовании липидной фракции экстракта идентифицировано 75
соединений, из них 45 отнесены к жирным кислотам, 16 – к кумариновым
соединениям, 9 – к стероидам, 5 – к производным тритерпеновых сапонинов
(рисунок 9).
19
Рисунок 9 – Хроматограмма метиловых эфиров и трисилилроизводных липидной
фракции экстракта сухого. (1 – цис-9-гексадеценовая кислота, 2 – пальмитиновая
кислота, 3 – 5,8-октадекадиеновая кислота, 4 – линолевая кислота, 5 – цис-вакценовая
кислота, 6 – стеариновая кислота, 7 – β – ситостерол)
Таким образом, состав экстракта сухого соответствует качественному
составу сбора, что подтверждает рациональность разработанной технологии
его получения. Результаты количественного содержания основных БАВ в
экстракте сухом представлены в таблице 7.
Таблица 7 – Содержание БАВ в «Брэйн-профит» экстракте сухом
БАВ
Флавоноиды
Аминокислоты
Аскорбиновая
кислота
Дубильные
вещества
Органические
кислоты
Полисахариды
f
9
9
4
Xср,%
30,28
9,26
3,32
S2
0,04853
0,02220
0,00277
S
0,22030
0,14900
0,05263
P,%
95
95
95
t(P, f)
2,26
2,26
2,78
∆X
0,49788
0,33673
0,14631
E,%
±1,64
±3,64
±4,45
4
7,62
0,00477
0.06907
95
2,78
0,19200
±2,52
4
8,22
0,00308
0,05550
95
2,78
0,15428
±1,88
4
13,93
0,00315
0,05612
95
2,78
0,15603
±1,12
Для количественной стандартизации «Брэйн-профит» экстракта сухого
предлагается использовать разработанные ранее для сбора методики
количественного определения суммы флавоноидов и свободных аминокислот
в сборе, полученные данные представлены в таблицах 8 и 9.
20
Таблица 8 – Метрологические характеристики методики количественного определения
суммы флавоноидов в «Брэйн-профит» экстракте сухом
f
9
Xср, %
30,28
S2
0,04853
S
0,22030
P, %
95
t (P,f)
2,26
∆X
0,49788
E, %
±1,64
Таблица 9 – Метрологические характеристики методики количественного определения
суммы свободных аминокислот в «Брэйн-профит» экстракте сухом
f
9
Xср, %
9,26
S2
0,02220
S
0,14900
P, %
95
t (P, f)
2,26
Δx
0,33673
E, %
±3,64
Относительная ошибка методики количественного определения суммы
флавоноидов в экстракте сухом не превышает 1,64%, для суммы свободных
аминокислот – 3,64%. Для проверки отсутствия систематической ошибки
проведены эксперименты с добавками РСО байкалина и РСО аргинина.
Предложенные методики валидированы, подтверждена их правильность,
прецизионность, специфичность, аналитическая область, линейность и
диапазон. Установлен предварительный срок годности экстракта сухого – 2
года.
ОБЩИЕ ВЫВОДЫ
1. Для растительного сырья – корней астрагала перепончатого,
установлены особенности строения, необходимые для подтверждения его
подлинности: макроскопические признаки – корни стержневые, ветвистые до
4 см толщиной, одревесневшие, волокнистые, поверхность продольноморщинистая, от серовато-желтого до желтовато-бежевого цвета;
микроскопические признаки – наличие хорошо развитой многорядной
пробки, паренхимы, бесцветных и оранжевато-желтых механических
волокон с характерными утолщенными стенками и продольными трещинами,
сетчатых сосудов древесины, каменистых клеток изодиаметрической или
вытянутой формы с утолщенными, бороздчатыми стенками и простых
крахмальных зерен; определены качественный состав и количественное
содержание БАВ (флавоноиды, свободные аминокислоты 10,28±0,30%,
тритерпеновые сапонины 1,51±0,04%, органические кислоты 1,96±0,03%,
дубильные вещества 0,44±0,02%, углеводный комплекс: СУ – 9,23%, ВРПС –
8,32%, ПВ – 7,02%, Гц А – 13,17%, Гц А – 2,12%; жирные кислоты,
элементный состав).
2. Экспериментально обоснован и предложен рациональный состав
сбора нейропротективного: корней астрагала перепончатого – 40 частей,
корней шлемника байкальского – 35 частей, корневищ и корней
вздутоплодника сибирского – 25 частей, для которого установлены
диагностически значимые признаки, заключающиеся в особенностях
строения сосудов древесины и механических волокон корней астрагала
перепончатого; клеток паренхимы (округлой формы, окрашенные в желтый
цвет) и склереид корней шлемника байкальского; клеток паренхимы
21
(изогнутой формы, бесцветные) и сосудов корневищ и корней
вздутоплодника сибирского; нормированы товароведческие показатели
сбора, определен качественный состав БАВ и их количественное содержание:
флавоноидов 9,67±0,32%, свободных аминокислот 3,66±0,18%, кумаринов
0,80±0,03%, тритерпеновых сапонинов 0,06±0,01%, полисахаридов
4,59±0,20%; органических кислот 1,22±0,05%, дубильных веществ
1,38±0,02%, аскорбиновой кислоты 1,55±0,06%, эфирных масел, жирных
кислот, свободных углеводов, макро- и микроэлементов.
3. Оптимизированы режимы экстракции сбора нейропротективного,
обеспечивающие максимальный выход БАВ: экстрагент – 60% спирт,
соотношение сырье: экстрагент – 1:(10-12), степень измельчения сбора – 1
мм, кратность и время экстракции – трехкратно, по 60 мин; разработана
технология получения «Брэйн-профит» экстракта сухого, определен его
химический состав: флавоноидов 30,28±0,49%, свободных аминокислот
9,26±0,34%, полисахаридов 13,93±0,21%; органических кислот 8,22±0,15%,
дубильных веществ 7,62±0,19%, аскорбиновой кислоты 3,32±0,15%,
исследованы жирные кислоты, липидная фракция, макро- и микроэлементы.
4. Разработаны показатели стандартизации для корней астрагала
перепончатого: влажность не более 8,0%; экстрактивных веществ,
извлекаемых водой, не менее 20,0%, золы общей не более 10,0%; золы, не
растворимой в 10% растворе хлористоводородной кислоты, не более 6,0%;
органических примесей не более 0,5%; минеральных примесей не более
1,0%; для сбора нейропротективного: влажность не более 10,0%,
экстрактивных веществ, извлекаемых водой, не менее 26,0%; золы общей не
более 10,0%; золы, не растворимой в 10% растворе хлористоводородной
кислоты, не более 5,0%; частиц, не проходящих сквозь сито с отверстиями
диаметром 2 мм, не более 3,0%; частиц, проходящих сквозь сито с
отверстиями диаметром 0,25 мм, не более 5,0%; органической примеси не
более 1,5%, минеральной примеси не более 2,0%; для «Брэйн-профит»
экстракта сухого: влажность не более 5,0%, содержание тяжелых металлов не
более 0,01%. Количественная оценка велась по сумме свободных
аминокислот в пересчете на аспарагин для корней астрагала перепончатого,
по сумме флавоноидов в пересчете на байкалин и по сумме свободных
аминокислот в пересчете на аргинин – для сбора нейропротективного и
«Брэйн-профит» экстракта сухого.
5. Разработаны и представлены проект ФС на корни астрагала
перепончатого, проекты ФСП на сбор нейропротективный и «Брэйн-профит»
экстракт сухой, лабораторные регламенты на производство сбора
нейропротективного и «Брэйн-профит» экстракта сухого.
22
СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
1. Аминокислотный состав корней Astragalus membranaceus (Fisch.) Bunge /
Т. А. Туртуева, Г. Г. Николаева, С. М. Гуляев и др. // Вестник Бурятского
государственного университета. – 2013. – №12. – С. 75 – 77.
2. Жирнокислотный состав корней Astragalus membranaceus (Fish.) Bunge,
произрастающего в Бурятии / Т. А. Туртуева, Г. Г. Николаева, Ю. В.
Жалсанов и др. // Вопросы обеспечения качества лекарственных средств. –
2013. – №1. – С. 33 – 36.
3. Изучение жирнокислотного состава растительной композиции,
обладающей нейропротективной активностью / Т. А. Туртуева, Г. Г.
Николаева, Ю. В. Жалсанов и др. // Бюллетень ВСНЦ СО РАМН. – 2012. –
№6 (88). – С. 101 – 102.
4. Исследование аминокислотного состава растительной композиции,
обладающей нейропротективным действием / Т. А. Туртуева, Г. Г.
Николаева, Ю В. Жалсанов и др. // Бюллетень ВСНЦ СО РАМН. – 2013. –
№1(89). – С. 193 – 195.
5. Туртуева Т. А. Элементный состав растительной композиции, обладающей
нейропротективной активностью / Т. А. Туртуева, Г.Г. Николаева //
Современные проблемы медицинской химии. Направленный поиск новых
лекарственных средств: тезисы докладов IV Всероссийского научнопрактического семинара молодых ученых с международным участием. –
Волгоград, 2012. – С. 73 – 74.
6. Элементный состав корней Astragalus membranaceus (Fisch.) Bunge,
произрастающего в Бурятии / Т. А. Туртуева, Г. Г. Николаева, С. М. Гуляев
и др. //Человек и лекарство: тезисы докладов ХХ Российского
Национального Конгресса. – Москва, 2013. – С. 446 – 447.
7. Quantitative determination of polysaccharide complex in roots of Astragalus
membranaceus (Fisch.) Bunge / T. A. Turtueva, G.G. Nikolaeva, I. G. Nikolaeva
et al. // VI International Scientific Conference "Traditional Medicine: Ways of
integration with modern health care» – Ulan-Ude, 2013. – P. 55.
23
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
4
Размер файла
1 005 Кб
Теги
сухого, разработка, сбор, основы, экстракт, нейропротективного
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа