close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Роль нормальной микрофлоры и лизоцима в выборе пробиотических штаммов для профилактики аллергических заболеваний у студенческой молодежи Севера

код для вставкиСкачать
На правах рукописи
Куяров Артём Александрович
РОЛЬ НОРМАЛЬНОЙ МИКРОФЛОРЫ И ЛИЗОЦИМА В ВЫБОРЕ
ПРОБИОТИЧЕСКИХ ШТАММОВ ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ
АЛЛЕРГИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ У СТУДЕНЧЕСКОЙ
МОЛОДЕЖИ СЕВЕРА
03.02.03 — микробиология
03.01.06 – биотехнология (в том числе бионанотехнология)
Автореферат
диссертации на соискание учёной степени
кандидата биологических наук
Москва - 2015
Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Сургутский государственный
университет Ханты-Мансийского автономного округа – Югры»
Научные руководители:
доктор медицинских наук, профессор Миронов Андрей Юрьевич
доктор биологических наук Алешкин Андрей Владимирович
Официальные оппоненты:
Королюк Александр Михайлович доктор медицинских наук, профессор, лауреат Государственной премии СССР, Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Санкт-Петербургский государственный педиатрический медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации, кафедра микробиологии, вирусологии и иммунологии, заведующий кафедрой
Шепелин Анатолий Прокопьевич доктор биологических наук, Федеральное
бюджетное учреждение науки «Государственный научный центр прикладной
микробиологии и биотехнологии» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, заместитель директора по
научно-производственной работе
Ведущая организация: Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н.И. Пирогова" Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации
Защита состоится « » ______________ 2015 г. в _____ часов на заседании
диссертационного совета Д 208.046.01 при Федеральном бюджетном учреждении науки «Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и
микробиологии им. Г. Н. Габричевского» Федеральной службы по надзору в
сфере защиты прав потребителей и благополучия человека по адресу: 123212, г.
Москва, ул. Адмирала Макарова, 10.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке и сайте Федерального
бюджетного учреждения науки «Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г. Н. Габричевского» Федеральной
службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека
по адресу: 123212, г. Москва, ул. Адмирала Макарова, 10, http://www.gabrich.ru
Автореферат разослан «
» __________________2015 г.
Учёный секретарь
диссертационного совета,
доктор медицинских наук
Борисова Ольга Юрьевна
2
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность темы исследования
Среди базовых защитных систем, определяющих устойчивость человека к
неблагоприятным физическим, химическим, биологическим факторам среды
обитания или их комплексу, в последнее время наибольшее внимание уделяют
его иммунной системе и симбиотической микробиоте, постоянно обитающей на
коже и слизистых (Алёшкин В. А., 2008; Афанасьев С. С., 2009; Кафарская Л.
И., 2009; Кочеровец В. И., 2011).
Эти две системы находятся между собой во взаимовыгодных взаимоотношениях. Нарушение их согласованной работы обязательно влечет за собой не
только модификацию функций и реакций каждой из них, но и негативно отражается на общей эффективности защиты организма (Ефимов Б. А., 2005; Королюк А. М., 2008; Лахтин В. М., 2013).
Микроорганизмы, попадающие в организм извне, и представители индигенной (симбиотической) микробиоты, контактируя с образраспознающими рецепторами эпителиальных и иммунокомпетентных клеток, в частности, с Tollподобными рецепторами, индуцируют в клетках продукцию широкого спектра
различных медиаторов, включая провоспалительные и противовоспалительные
цитокины (Бондаренко В. М., 2010; Ковальчук Л. В., 2005). Их количество и соотношение, в конечном счете, ответственны за развитие инфекционно-воспалительных заболеваний или за элиминацию возбудителя из очага внедрения (Воропаева Е. А., 2013; Лебедев К. А., Понякина И. Д., 2013).
Длительное проживание в неблагоприятных условиях урбанизированного
Севера приводит к глубоким нарушениям микробной экологии и иммунитета
человека. Это способствует возникновению у некоренных жителей Севера хронического воспаления, одного из ведущих факторов риска инфекционных, аллергических, хронических аутоиммунных и метаболических заболеваний (Коваленко Л. В., 2010; Карпин В. А., 2003). По данным ряда исследований, частота
аллергического ринита (Матвеева Н. И., 2005), атопического дерматита (Фокина Р. А., 2009), бронхиальной астмы (Мещеряков В. В., 2012) среди пришлого
населения Севера намного выше, чем у лиц, проживающих в центральных областях Российской Федерации (Хаитов Р. М., 2008). Особенно актуальна эта
проблема для здоровья в юношеском возрасте, в период онтогенетического развития между подростковым возрастом и взрослостью (Литовченко О. Г., 2009;
Нефедовская Л. В., 2007; Хадарцев А. А., 2008).
При оценке микроэкологических последствий неблагоприятных факторов
урбанизированного Севера на здоровье студенческой молодежи считаем целесообразным определять уровень стафилококкового бактерионосительства в популяции жителей Севера, поскольку изменения количества этих микроорганизмов
или их биологических и патогенных свойств могут рассматриваться как показатели, позволяющие тестировать интенсивность внешнего воздействия на гомеостатическое состояние человека (Грачева Н. М., 2004; Миронов А. Ю., 2010;
Несвижский Ю. В., 2009).
Имеются данные о способности микрофлоры не только изменить пул гистамина в организме человека (Воропаева Е.А., 2002), но и продуцировать фер3
менты инактивирующие лизоцим (Бухарин О. В., 2009). Важным, с нашей точки
зрения, является также оценка содержания гистамина, как медиатора воспалительных и аллергических реакций (Гущин И. С., 2010), и лизоцима, как фактора врожденного иммунитета у студентов, страдающих аллергическими заболеваниями, так и не имеющих их.
Вопросы профилактики и коррекции нарушений микрофлоры организма
человека в настоящее время приобретают повсеместный характер (Крамарь В.
О., 2012; Лобзин, Ю. В., 2003; Онищенко Г. Г., 2002; Шендеров Б. А., 2008). При
этом важное значение все более придают пробиотикам, способным восстанавливать нарушенный микроэкологический статус человека и повышать степень
иммунной защиты (Алешкин А. В., 2011; Амерханова А. М., 2009; Червинец Ю.
В. с соавт., 2012; Шмелева Е. А., 2010).
Необходимость изучения влияния потенциала патогенности микрофлоры
слизистой оболочки носоглотки и кишечника на взаимосвязь факторов врождённого иммунитета, одним из которых является лизоцим, с медиатором воспалительных и аллергических реакций гистамином для оптимизации выбора
пробиотических штаммов и препаратов определяет актуальность избранной
темы.
Степень разработанности темы исследования
Пробиотики находят всё более широкое применение в медицинской практике для профилактики и лечения различных заболеваний, связанных с нарушением микрофлоры организма человека (Алешкин А. В., 2011; Амерханова А.
М., 2009; Кулакова Ю. В., 2013; Митрохин С. Д., 2011; Boirivant M., 2007).
В работах отечественных и зарубежных исследователей показано, что общий геном бактерий, обнаруженных в ЖКТ, получивший обозначение как «микробиом», насчитывает 400 тыс. генов, что в 12 раз превышает размер генома
человека, насчитывающего 35 тыс. генов. Выполнение программам международного консорциума «Микробиом человека» свидетельствует, что стабильность микробиома человека тесным образом связана с состоянием его здоровья.
Возможность стабилизации микробиома, т. е. микробиоты человека, определяет
в настоящее время эру метабиомики в гастроэнтерологии (Алешкин В. А.,
2005).
Механизм и эффективность действия пробиотиков тесным образом связан
с биологическими характеристиками вводимых в организм человека бактерийсимбионтов и, в частности, с их антагонистической и иммуностимулирующей
активностью (Бакшеева С. С., 2011; Караулов А. В., 2013; Козлов Л. В., 2002;
Николаева Т. Е., 2004). Приводятся сведения о лектинах пробиотиков, как о новом классе сигнальных молекул чувства кворум у бактерий (Лахтин М. В.,
2012). Убедительно показано лиганд-рецепторное взаимодействие микроорганизмов с Toll-подобными рецепторами с последующей активацией клеточного и
гуморального звеньев врождённого иммунитета (Кафарская Л. И., 2007; Ковальчук Л. В., 2005).
Среди антибиотических веществ определённое внимание исследователей
уделено лизоциму, как регулятору микробного биоценоза (Клюева Л. А., 2008;
4
Куяров А.В., 2008; Царев В. Н, 2012). Лизоцимная активность нормальной микрофлоры, возможно, совместно с лизоцимом секрета слизистой оболочки
способствует стабилизации индигенной микрофлоры желудочно-кишечного
тракта. Изучение лизоцимной активности лактобактерий, как представителей
нормальной микрофлоры, показало, что лактобактерии образуют своего рода защитный биослой на слизистых оболочках (Леванова Г. Ф., 2009).
Проведены исследования микробной экологии и гистаминобразующей активности микроорганизмов задней стенки глотки детей, больных бронхиальной
астмой (Воропаева Е. А., 2002) и разработаны композиции, понижающие уровень гистамина, на основе новых штаммов Lactobacillus acidophilus и их консорциума (Рубальский Е. О., 2012).
Наряду с проведёнными исследованиями роли бактерий в механизмах
врождённого иммунитета организма, ряд теоретических и практических вопросов данной проблемы остаются неизученными. К их числу следует отнести
оценку влияния бактерионосительства на взаимосвязь содержания лизоцима и
гистамина в слюне и оценку этой взаимосвязи в группах риска у лиц с аллергическими заболеваниями верхних дыхательных путей и кожи. Важно также и
определение особенностей видового состава и лизоцимной активности лактобацилл микрофлоры кишечника в этих группах риска.
Обоснованная позиция диктует необходимость и важность изучения иммуномодулирующей активности пробиотических бактерий, значительно зависящей от используемого на практике вида и штамма пробиотика.
Цель исследования
Оптимизировать выбор пробиотических штаммов для профилактики аллергических заболеваний у студенческой молодёжи Севера на основании оценки состояния их нормальной микрофлоры и содержания лизоцима и гистамина
в слюне.
Задачи исследования
1. Оценить влияние бактерионосительства на взаимосвязь содержания лизоцима
и гистамина в слюне, изучив микрофлору слизистой оболочки носа и зева у
студенческой молодежи.
2. Дать оценку ферментам патогенности изолятов рода Staphylococcus со слизистой оболочки верхних дыхательных путей, содержания лизоцима и гистамина в слюне у лиц групп риска по аллергическому риниту и атопическому дерматиту.
3. Определить видовой состав и лизоцимную активность лактобактерий микрофлоры кишечника в группах риска по аллергическому риниту и атопическому
дерматиту, разработать критерии к коррекции нарушений микрофлоры.
4. Изучить диаминооксидазную, лизоцимную, антагонистическую активность
лактобацилл, используемых в качестве пробиотических штаммов и оценить
их эффективность.
5
Научная новизна
Впервые доказано, что бактерионосительство Staphylococcus аureus и
Staphylococcus еpidermidis с гемолитической активностью сопровождается снижением содержания лизоцима и значительным увеличением содержания гистамина в ротовой жидкости, их соотношение в этой среде находятся в обратной
сильной корреляционной зависимости.
Установлено, что показатели диагностических коэффициентов ферментов
колонизационной активности Staphylococcus аureus и Staphylococcus
еpidermidis, выделенных со слизистой носа и зева, позволяют диагностировать
и прогнозировать потенциал патогенности микроорганизмов в развитии воспаления слизистой оболочки и аллергических реакций.
В группах риска по аллергическим заболеваниям наблюдается значительное снижение (в 1,8-1,9 раза) содержания лизоцима, по сравнению с группой
сравнения, при достоверном увеличении (в 1,6-1,7 раза) содержания гистамина
в слюне.
Впервые установлено, что состояние дисбактериоза кишечника у жителей
Севера характеризуется уменьшением видового разнообразия бактерий рода
Lactobacillus и низкой их лизоцимной активностью. Относительно других
регионов наиболее часто идентифицируются представители Lactobacillus
delbrueskii, Lactobacillus сasei, Lactobacillus brevis, Lactobacillus rhamnosus,
реже Lactobacillus fermentum, Lactobacillus corynoformis. В единичных случаях
идентифицируются представители видов Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus
lactis, Lactobacillus jensenii, Lactobacillus cellobiosus, Lactobacillus plantarum.
Теоретическая и практическая значимость работы
Теоретически обоснованы и разработаны диагностические критерии нарушений состояния нормальной микрофлоры и соотношения лизоцима и гистамина в слюне, которые являются биомаркерами в коррекции нарушений микрофлоры слизистой оболочки верхних дыхательных путей и кишечника.
Включение в комплекс методов оценки иммуномодулирующей активности пробиотических штаммов лактобацилл определение их диаминооксидазной,
лизоцимной и антагонистической активности может определить выбор оптимального варианта для персонализированной коррекции нарушений микрофлоры студенческой молодежи групп риска по круглогодичному аллергическому
риниту и атопическому дерматиту, проживающих в условиях урбанизированного Севера.
Разработанные и апробированные диагностические коэффициенты ферментов патогенности микрофлоры слизистой оболочки верхних дыхательных
путей, содержания лизоцима и гистамина рекомендуются для прогнозирования
риска возникновения круглогодичного аллергического ринита и атопического
дерматита.
Оптимизация выбора пробиотических штаммов лактобацилл, потенциально способных уменьшать риск по круглогодичному аллергическому риниту и
атопическому дерматиту у студенческой молодежи Севера, подтверждается результатами клинико-лабораторных исследований и актами внедрения в лечебно6
профилактический процесс ряда учреждений здравоохранения города Сургута:
МУЗ «КГБ № 1»; МУЗ «Городской врачебно-физкультурный диспансер» (акты
внедрения от 12. 11. 2012 и 21. 04. 2013 г).
Материалы диссертации используются в учебном процессе на кафедрах
физиологии, детских болезней, в научно – исследовательской лаборатории
«Клиническая и экспериментальная патология» ГБОУ ВПО СурГУ ХМАОЮгры (акт внедрения от 11.02. 2013 г.).
Методология и методы исследования
Методология данной работы спланирована согласно поставленной цели
исследования и включает современные методы научного познания для определения характеристик компонентов, необходимых для решения поставленных задач.
Теоретической основой исследования являются данные научной литературы по проблеме факторов врождённого иммунитета и оптимизации выбора пробиотических штаммов лактобацилл.
Предметом исследования явилась взаимосвязь содержания лизоцима и гистамина в слюне у бактерионосителей и студенческой молодежи групп риска по
круглогодичному аллергическому риниту и атопическому дерматиту, проживающих в условиях урбанизированного Севера.
Объектом исследования послужила микрофлора слизистой оболочки носоглотки и кишечника, а также ротовая жидкость от практически здоровых лиц
и лиц группы риска по круглогодичному аллергическому риниту и атопическому дерматиту.
В работе применялся комплекс бактериологических, биохимических, статистических методов исследования.
Материалы и методы
Результаты работы основаны на клинико-лабораторном исследовании лиц
в возрасте от 18 до 22 лет, проживших в условиях Севера не менее 10 лет. Исследования проводились на базе лаборатории «Клиническая и экспериментальная патология» ГБОУ ВПО «СурГУ ХМАО-Югры» (зав. лабораторией д.м.н.,
профессор А. В. Куяров) и бактериологических лаборатории БУ ХМАО-Югры
«Сургутская окружная клиническая больница» (зав. лабораторией О. Е. Хорева)
и БУ ХМАО-Югры «Сургутская городская клиническая поликлиника № 1» (зав.
лабораторией Е. Ф. Дудко).
Этапы и методы исследования
Этап №1. Использованы результаты анкетирования 384 студентов СурГУ
по специально разработанному опроснику с включением в анкету наиболее распространённых симптомов аллергического ринита, атопического дерматита, заболеваний желудочно-кишечного тракта, признаков атопии в семейном анамнезе в соответствии с методом популяционных исследований, разработанного в
НИИ педиатрии РАМН и опросника анкеты программ «ISAAC» и «SCORAD».
Этап №2. Методом сплошной выборки проведено бактериологическое исследование микрофлоры слизистой оболочки носа и зева, определение лизоцима и гистамина в слюне (n=192 человека). В соответствии со статьями 30-34, 61
7
Основ законодательства РФ об охране здоровья граждан от 22.07.1993 г. №
5487-1, ст. 18, 20-22, 28, 41 Конституции Российской Федерации все исследуемые лица давали информационное добровольное согласие на выполнение диагностических исследований и лечебных мероприятий, а в соответствии с требованиями статьи 9 Федерального закона от 27.07.2006 «О персональных данных»
№ 152-ФЗ - на обработку персональных данных.
Этап № 3. По результатам анкетирования определены группы риска по
круглогодичному аллергическому риниту (АР, n=31; врач-консультант к.м.н.
Ю.С. Гацко) и атопическому дерматиту (АтД, n=32; врач-консультант Д.С. Тышкевич). Критерии включения студентов в исследование: наличие АР или АтД с
верифицированным диагнозом, в соответствии с Российскими национальными
рекомендациями по диагностике и лечению АР и АтД (2008-2012 гг.), активный
трудоспособный возраст (18-23 года), длительность проживания на Севере не
менее 10 лет.
В группах риска проведено бактериологическое исследование микрофлоры слизистой оболочки носа и зева с определением ферментов патогенности.
Группу сравнения (ГС, n=31) составили лица, которые не болели в течение года
и не стоящие на медицинском учёте.
Этап №. 4. Исследование лиц группы риска на дисбактериоз кишечника,
выделение и идентификация лактобацилл с определением их лизоцимной активности, n=63.
Этап № 5. Бактериологическая оценка пробиотических штаммов (n=6), рекомендуемых для коррекции, и оценка эффективности коррекции по показателям микрофлоры слизистой оболочки носа и зева, концентрации лизоцима и гистамина в ротовой жидкости.
Бактериологические методы
Подготовка материала для оценки микрофлоры выполнялась в соответствии с приказом МЗ СССР № 535 от 22.04.1985 г. «Об унификации микробиологических (бактериологических) методов исследования, применяемых в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений».
Идентификация микроорганизмов проводилась методом времяпролетной массспектрометрии (MALDI TOF MS) с помощью анализатора микроорганизмов
BioMerieux VITEK MS MALD1-TOF. Экстракция белков осуществлялась на одноразовом слайде с использованием готового матрикса для VITEK MS. Интерпретация результатов проводилась с использованием базы данных VITEK MS,
состоящей из клинически значимых видов и расширенного классификатора
спектров.
Изучение видового состава кишечной микрофлоры проведено с использованием дифференциально-диагностических питательных сред и критериев
оценки степени дисбиотических нарушений кишечника, в соответствии с ОСТ
МЗ РФ «Протокол ведения больных. Дисбактериоз кишечника» (2003).
Биохимические методы
Проведено определение антагонистической активности лактобацилл и
слюны к Micrococcus luteus (штамм 2665) в единицах лизоцимной активности
фотометрическим методом в мкг/мл (Бухарин О. В., 2006).
8
Гистидиндекарбоксилазную активность микроорганизмов исследовали количественным методом по методике с диазотированным n-нитроанилином (Куяров А. В., 2005). Диаминооксидазную активность лактобактерий определяли по
разности содержания гистамина в жидкой питательной среде до и после инкубации в течение 24 часов с добавлением определённого количества гистамина.
Определение концентрации гистамина в ротовой жидкости проводили количественным иммуноферментным методом (ИФА) с использованием тестнаборов фирмы «LDN» (Labor Diagnostika Nord, GmbH).
При проведении коррекции дисбактериоза в группе риска рекомендовались лактосодержащие препараты «Лактобактерин» (Леванова Г. Ф., Ефимов Е.И., 2009) и кисломолочные смеси в качестве биологически активных добавок на основе заквасок лактобацилл в соответствии с Патентом РФ на изобретение № 2393214 от 27 июня 2010
«Иммунобиологическое противоаллергическое средство (варианты), штамм
Lactobacillus acidophilus NKJC, штамм Lactobacillus acidophilus JCH, штамм
Lactobacillus acidophilus KAA» и Патентом на изобретение РФ № 2460781 от
29.01.2009 «Иммунобиологическое противоаллергическое средство (варианты),
штамм Lactobacillus acidophilus , используемый при приготовлении иммунобиологического противоаллергического средства».
Статистическая обработка, анализ данных и программное обеспечение. Результаты проведенных исследований статистически обрабатывались с
использованием программ MS Excel и «Statisticа, 6.1» с применением параметрических и непараметрических методов. Тип распределения для выборки определяли по показателям коэффициентов вариации, симметрии и эксцесса. Для
описания количественных данных, имеющих нормальное распределение, вычисляли среднее арифметическое (х), ошибку средней арифметической (m). Достоверность различия изучаемых параметров анализировали с применением
критериев Стьюдента (РS) и метода χ2 (Р χ2). Рассчитывались коэффициент линейной корреляции (Пирсон-r) и коэффициент вариации (V),
Оценка сходства бактериальных сообществ проводилась по показателям
коэффициента общности (КО) и процентного сходства (ПС) (Клюева Л. А.,
2005).
Для решения задач по дифференциальной диагностике и прогнозированию использован метод последовательной диагностической процедуры, разработанный А. Вальдом (Гублер Е. В., 2010).
Личное участие автора в получении результатов
Автором составлен план исследования, аналитический обзор литературы,
проведены исследования, статистическая обработка полученных данных.
Бактериологические исследования микрофлоры на дисбактериоз кишечника и выделение лактобацилл в группе риска по аллергическим заболеваниям
среди студентов проведены на базе бактериологической лаборатории БУ
ХМАО-Югры «Сургутская окружная клиническая больница» совместно с заведующей лабораторией О. Е. Хоревой.
Соискатель провел систематизацию полученных данных, сформулировал
выводы и практические рекомендации.
Положения, выносимые на защиту:
9
1. Показатели изменения эубиоза и потенциала патогенности микрофлоры верхних дыхательных путей ассоциируют со степенью нарушения соотношения
лизоцима и гистамина в слюне.
2. Дисбактериоз кишечника в группах риска по круглогодичному аллергическому риниту и атопическому дерматиту у студенческой молодежи Севера характеризуется изменением видового разнообразия бактерий рода Lactobacillus и
снижением их лизоцимной активности.
3. Отбор пробиотических штаммов лактобацилл с учетом их диаминооксидазной, лизоцимной и антагонистической активности к микроорганизмам с наибольшим потенциалом патогенности, выделяемых в регионе, является эффективным для коррекции нарушений микрофлоры и нормализации соотношения содержания лизоцима и гистамина в слюне у лиц групп риска по круглогодичному аллергическому риниту и атопическому дерматиту.
Степень достоверности и апробация результатов исследования
Достоверность полученных результатов основана на достаточном объёме
материала и современных методах сбора и обработки информации (анализ 384
разработанных карт; бактериологическое исследование микрофлоры слизистой
оболочки носа и зева, определение лизоцима и гистамина в слюне, n=192 человека; оценка степени дисбактериоза, выделение и идентификация лактобацилл в
группе риска по аллергическому риниту и атопическому дерматиту, n=63 человека). В работе использовано сертифицированное и поверенное оборудование.
Положения диссертационной работы научно обоснованы данными литературы,
результаты подтверждены статистически и документированы таблицами и рисунками. Предложены рекомендации для дальнейшего использования пробиотических штаммов потенциально, способных снижать риск аллергических заболеваний.
Диссертационная работа апробирована на расширенном заседании научного проблемного совета № 1 по специальностям медико-биологического и профилактического профиля Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Сургутский государственный университет ХМАО - Югры» (протокол № 4 от 25.13 г.).
Материалы исследования доложены на: Окружной конференции молодых
учёных «Наука и инновации Ханты-Мансийского автономного округа» (Сургут,
2004; 2006; 2008); VI, VIII, ХII Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Совершенствование системы физического
воспитания, спортивной тренировки и оздоровления различных категорий населения» (Сургут, 2007; 2009; 2013); Открытой научно-практической конференции
молодых учёных и студентов с международным участием (Волгоград, 2009;
2010; 2012); Научно-практической конференции, посвящённой 10-летию кафедры экологии СурГУ (Сургут, 2009); Научно-практической конференции, посвящённой 15-летию медицинского образования в ГБОУ ВПО «Сургутский государственный университет ХМАО-Югры» (Сургут, 2010); II международной
студенческой научной конференции с участием молодых учёных РУДН (Москва, 2010); Всероссийской научной конференции, посвящённой 15-летию биоло10
гического факультета СурГУ (Сургут, 2011.)
Публикации
По теме диссертации опубликовано 26 печатных работ, в том числе 6 работ
в рецензируемых изданиях, в монографиях – 2, в патенте РФ на изобретение, в
других изданиях – 6, в материалах конференций – 11.
Структура и объём диссертации
Диссертационная работа состоит из введения, включающего характеристику объема, материала и методов исследования, обзора литературы, 3 глав собственных исследований, заключения и указателя литературы, включающего 243
источника, в том числе 147 отечественных и 96 зарубежных авторов. Работа изложена на 121 странице машинописного текста, иллюстрирована 25 таблицами
и 5 рисунками.
СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ
Оценка содержания лизоцима и гистамина в слюне бактерионосителей
Staphylococcus spp.
Среди студенческой молодежи выделение со слизистой оболочки носа
Staphylococcus spp. с количеством колониеобразующих элементов (КОЭ) lg>3 на
тампон отмечено у 47,9% лиц (Рисунок 1). Индикация S. aureus со слизистой
оболочки носа наблюдалась у 32,5% исследуемых лиц. Из этого количества лиц
в 63,6% (35 человек) случаях отмечена плотность бактерий КОЭ lg>3 на
тампон. Установлена высокая частота выделения бактерионосительства S. epidermidis с гемолитической активностью (у 48,4% исследуемых лиц).
Рисунок 1 - Показатели видового и количественного состояния микрофлоры
слизистой оболочки носа и зева у студенческой молодежи
Примечание: 1. Staphylococcus spp. КОЕ lg>3; 2. S. aureus; 3. S. aureus КОЕ lg>3; 4. S. epidermidis, Hly+; 5. S. epidermidis, Hly+ КОЕ lg>3; 6. S. epidermidis, Hly- ; 7. Другие виды
Микрофлора слизистой оболочки зева у студенческой молодежи характеризовалась меньшим количеством микробных клеток КОЭ lg>103. Для изолятов
Staphylococcus spp. этот показатель составлял 32,3%, для S. aureus - 15,6% случаев.
Сравнение сообщества микроорганизмов на слизистой оболочке носа и
зева по показателю процентного сходства показало, что сходство количественного участия популяций Staphylococcus spp. в образующихся биоценозах составляло 79,5%.
11
Показатели содержания лизоцима в слюне у студенческой молодежи в
условиях урбанизированного Севера находились в диапазоне от 0,0 до 14,9
мкг/мл при средней арифметической 4,7±0,3 мкг/мл (Рисунок 2).
Рисунок 2 - Показатели содержания лизоцима (мкг/мл), гистамина (нг/мл) и их
отношение в слюне у бактерионосителей (Л/Г)
Соотношение моды, медианы и средней арифметической содержания лизоцима (Mo<Me<М→2,4<3,4<4,7 мкг/мл) позволяет оценить характер распределения признака как правосторонняя асимметрия и сделать заключение, что наиболее распространённым является показатель 2,4 мкг/мл. Наибольшее содержание
лизоцима отмечено в группе бактерионосителей S. еpidermidis без гемолитической активности (7,5 мкг/мл). У бактерионосителей S. еpidermidis с гемолитической активностью содержание лизоцима в слюне значительно снижалось и составляло 4,4 мкг/мл (Р<0,05). Самое низкое содержание лизоцима отмечено у
лиц-носителей S. аureus (3,3 мкг/мл, Р<0,05).
Содержание гистамина в слюне указывало на характер распределения признака также по признаку правосторонней асимметрии (Mo<Me<М→0<1,3<1,9
нг/мл). Средний уровень содержания гистамина в слюне составил 1,9 нг/мл. Половина исследуемых имели показатель содержания гистамина свыше 1,3 нг/мл.
Самые низкие концентрации гистамина отмечены в группе бактерионосителей S. еpidermidis без гемолитической активности (1,1 нг/мл) и значительно
возрастали в группах бактерионосителей S. еpidermidis с гемолитической активностью и S. aureus (2,1 нг/мл и 2,3 нг/мл, соответственно).
Соотношение величин концентрации лизоцима и гистамина для бактерионосителей S. еpidermidis, Hly- без гемолитической активности составляла 6,8 и
существенно изменялась у бактериносителей S. epidermidis, Hly+ и S. aureus (2,1
и 1,4, соответственно). Полученная величина коэффициента линейной корреляции (Пирсон-r) - 0,9 указывает на сильную обратную связь концентрации лизоцима и гистамина в слюне.
Расчёт диагностических коэффициентов на основании оценки профиля содержания лизоцима позволил получить наибольшие величины диагностического коэффициента в 6 баллов и 9 баллов при достоверной величине информативности (I от 0,9 до 1,06) для диапазона с содержанием лизоцима «ниже среднего»
и «низкое» у бактерионосителей S. аureus. Диагностические коэффициенты в 4
балла и 6 баллов при статистически достоверной информативности (I равное
12
0,9) указывают на диагностически значимое снижение содержания лизоцима у
бактерионосителей S. epidermidis, Hly+.
Расчёт диагностического коэффициента концентрации гистамина показал,
что в диапазоне «выше среднего» величина диагностического коэффициента составила 1 и 2 балла. Наибольшие величины диагностического коэффициента в 6
и 8 баллов отмечены для диапазона с содержанием гистамина «высокое» при
достоверной величине информативности.
Биоценоз слизистой оболочки носа и зева, содержание лизоцима и
гистамина в группах риска по аллергическому риниту и
атопическому дерматиту
При оценке состояния биоценоза слизистой оболочки носа (Рисунок 3) в
группах риска по аллергическим заболеваниям среди студенческой молодежи
установлено, что в группах риска наблюдалось достоверное увеличение числа
случаев с повышенным содержанием Staphylococcus spp. (КОЕ/мл более 3lg
74,2% в группе риска АР и 75,0% в группе риска АтД, Р<0,05).
Выделение S. aureus со слизистой оболочки носа в группе сравнения составило 12,9%. В группах риска носительство S. aureus значительно выше и составляло 46,9±8,8% в группе АтД и 48,3±9,0% в группе АР (Р<0,05). В исследуемых группах наблюдалось значительное увеличение частоты выделения со
слизистой оболочки носа S. aureus в количестве более lg>3. В группах риска с
аллергическими заболеваниями носительство S. aureus КОЕ/мл более lg3 составляло 35,5% в группе АР и 37,5% в группе АтД случаев (6,5% в группе ГС,
Р<0,05).
Рисунок 3 - Состояния биоценоза микрофлоры слизистой оболочки носа
Примечание: 1. Staphylococcus spp. КОЕ/мл lg более 3; 2. S. aureus; 3. S. aureus КОЕ/мл более
lg3; 4. S. еpidermidis, Hly+; 5. S. еpidermidis, Hly+ КОЕ/мл lg>3.
При оценке потенциала патогенности микрофлоры слизистой оболочки
носа отмечено значительное увеличение частоты выделения в группах риска S.
epidermidis, гем+ плотностью КОЕ/мл более lg 3 (29,0 в группе АР и 32,3 в группе АтД; Р<0,05).
В группах риска со слизистой оболочки зева наблюдалось достоверное
увеличение числа случаев с повышенным содержанием микроорганизмов рода
Staphylococcus spp. (КОЕ/мл lg>3 74,2% в группе риска АР и 75,0% в группе
13
риска АтД, Р<0,05).
Выделение S. aureus со слизистой оболочки зева в группе сравнения составило 9,7%. В группах риска показатель частоты носительства S. aureus значительно выше и составлял 48,4% в группе АР и 50,0% в группе АтД (Р<0,05).
В группах риска наблюдалось значительное увеличение частоты выделения со
слизистой оболочки зева S. aureus в количестве lg>3, что составило от 19,4% до
21,9% случаев (Р<0,05).
Со слизистой оболочки зева, как и со слизистой оболочки носа, отмечалось значительное увеличение частоты выделения в группах риска S. epidermidis, Hly+ с плотностью микроорганизмов КОЕ/мл lg>3 (32,3 в группе АР и
37,5 в группе АтД; Р<0,05), что соответствовало диагностическим коэффициентам в группах риска в 7 и 8 баллов, соответственно.
Высокую диагностическую значимость имело носительство S. aureus, что
определяло диагностический коэффициент в 7 баллов, как для группы риска АР,
так и для группы АтД. Увеличение количества S. aureus КОЕ/мл более lg 3 соответствовало диагностическому коэффициенту в 8 баллов.
Расчёт диагностической информативности факторов патогенности микрофлоры слизистой оболочки носа и зева позволил установить, что для S. aureus
характерна достаточно высокая частота таких ферментов патогенности как протеаза, уреаза и антилизоцимная активность (ДК равнялись 4-5 баллам). У подавляющего большинства изолятов S. epidermidis наблюдалась гемолитическая и
уреазная активность (ДК равнялись 3-4 баллам).
Микробное сообщество и лизоцимная активность лактобацилл при
дисбактериозе кишечника в группах риска по аллергическому риниту и атопическому дерматиту
У всех исследуемых лиц групп риска диагностирован дисбактериоз кишечника (Рисунок 4).
При оценке результатов каждого анализа на дисбактериоз по количеству
отклонений от параметров эубиоза, установлено, что изменения биоценоза по
одному показателю отмечено в 14,3% и по двум показателям в 19,0% наблюдений. Значительно увеличивалась доля лиц с изменениями биоценоза кишечника
по трём показателям (30,2%) и наиболее часто по четырём и более показателям
(36,5% случаев).
Оценка микробного сообщества при дисбактериозе кишечника позволила
установить, что среди исследуемых с проявлением дисбактериоза кишечника по
одному показателю преобладали случаи со сниженным количеством лактобацилл (ЛКБ, 33,3%) и с повышенным содержанием Е. coli, Hly+ (КПГ, 33,3%).
Реже отмечалось уменьшение количества типичных кишечных палочек (КПТ
22,2%) и увеличение количества лактозонегативных кишечных палочек (КПЛН
11,1%).
14
Рисунок 4 - Показатели дисбактериоза по количеству отклонений от параметров
эубиоза
Примечание: ЛКБ - уменьшение количества лактобацилл; КПГ – повышение количества E.
coli, Hly+; КПТ – уменьшение количества типичных E. coli; Кл – повышение количества клостридий; КПЛН – повышение количества лактозонегативных E. coli; ДрГ – повышение количества грибов рода Candida; БФБ – уменьшение количества бифидобактерий; КФМ – повышение количества кокковых форм микроорганизмов.
Изменения эубиоза кишечника по двум показателям также сопровождались преобладанием лиц со сниженным количеством лактобацилл (50,0%) и лиц
с повышенным содержанием Е. coli, Hly+ (41,7%). Нарушение эубиоза связано и
с увеличением количества грибов рода Candida (ДГ 25,0%) и лактозонегативных E. coli (КПЛН 25,0%).
При изменении видового состава биоценоза кишечника по трём и четырём
показателям наряду с вышеперечисленными изменениями отмечено повышенное количество кокковых форм микроорганизмов (КФМ 21,7%) и уменьшение
количества бифидобактерий (БФБ 34,8%).
У подавляющего большинства исследуемых лиц группы риска нарушение
биоценоза проявлялось в уменьшении количества лактобацилл (68,3% исследуемых лиц), снижением количества типичных Е. coli и увеличением количества
Е. coli, Hly+.
Наиболее часто из выделяемых лактобацилл при дисбактериозе кишечника (Рисунок 5) были L. delbrueskii (22,2% случаев), L. сasei (19,0% случаев) и L.
rhamnosus (12,7% случаев). Реже выделялись L. brevis (11,1% случаев), L.
рlantarum (7,9% случаев), L. trichodes (6,5%). L. аcidophilus выделялись в единичных случаях (3,2%).
Из идентифицированных лактобацилл наибольшей лизоцимной активностью обладали: L. jensenii (1,91±0,06 мкг/мл), L. fermentum (1,47±0,05 мкг/мл),
L. plantarum (1,35±0,04 мкг/мл).
В группу со средней лизоцимной активностью вошли L. rhamnosus
(1,2±0,04 мкг/мл) и L. delbrueskii (1,2±0,04 мкг/мл). У L. acidophilus лизоцимная
активность составила 0,8±0,3 мкг/мл. Наименьшая лизоцимная активность от15
мечена у L. cellobiosus и L. сorynoformis (0,3±0,01 мкг/мл). Отсутствие лизоцимной активности наблюдалось у L. lactis.
Рисунок 5 - Lactobacillus spp., выделенных из кишечника исследуемых лиц
группы риска, n=63
Лизоцимная активность лактобацилл, выделенных из кишечника при нарушении эубиоза по 1 показателю, составила 1,36±0,07 мкг/мл. По степени увеличения нарушения эубиоза в кишечнике отмечено значительное снижение лизоцимной активности лактобацилл (0,77 мкг/мл, Р<0,05).
Коррекция нарушений нормальной микрофлоры с использованием
пробиотических штаммов лактобацилл
Определение диагностических коэффициентов послужило основанием для
формирования таблицы с наиболее информативными показателями к коррекции
микробной экологии (Таблица 1).
Таблица 1. Показатели диагностической значимости признаков
Наименование
Симптомы дисбактериоза (расстройство стула, метеоризм, боли разного характера)
Микрофлора слизистой носа и зева:
Staphylococcus, КОЕ/мл lg >3
S. aureus
S. aureus, КОЕ/мл lg >3
S. epidermidis Hly+КОЕ/мл lg >3
Содержание лизоцима в ротовой жидкости <4,6 мкг/л
Содержание свободного гистамина в ротовой жидкости более 3,9
нг/мл
ДК *
6 1,15
4
5
8
5
6
6
0,55
0,83
0,93
0,6
0,6
0,54
Примечание: * - Достаточная информативность показателей при Imin=0,5.
Среди исследуемых пробиотических штаммов лактобацилл, рекомендуемых в
качестве биологически активной добавки, установлен диаминооксидазный эффект с
16
различной степенью выраженности. Согласно условию методического приёма, предусматривающего контроль уровня гистамина в питательной среде, после суточной инкубации отмечено выраженное уменьшение гистамина при культивировании штаммов
L. helveticus ГРК-08, L. helveticus NKJC, L. helveticus JCH, L. casei KAA.
Антибактериальный эффект к наиболее часто выделяемым при дисбактериозе кишечника изолятов S. aureus наблюдался у исследуемых культур L. helveticus в подавляющем большинстве случаев с преобладанием антагонизма
средней (53,8-61,5%) и высокой степени (15,4-38,5% случаев).
Коррекции нарушений эубиоза и оценка эффективности пробиотических
штаммов проводилось амбулаторно в трёх группах: контрольная группа (ГК),
две группы сравнения ГСАД и ГСАтД. В группе контроля (ГК, n=15 из группы
АтД) применяли пробиотики согласно прописи коррекции лактосодержащими
препаратами «Лактобактерин». В группах сравнения под наблюдением находилось 15 человек из группы риска АР (ГСАР) и 16 человек из группы АтД (ГСАтД).
В этих группах сравнения применялась схема коррекции нарушений эубиоза с
назначением кисломолочного продукта на основе пробиотических штаммов
лактобацилл, обладающих наиболее выраженной антагонистической, лизоцимной и диаминооксидазной активностью, 1-2 раза в день по 150 мл.
Результаты оценивались клинически и подтверждались бактериологическими (Рисунок 6) и биохимическими исследованиями (Рисунок 7), которые
проводились до коррекции и после окончания курса (45 дней).
Рисунок 6 - Бактериологические показатели оценки эффективности коррекции
микрофлоры в группе ГСАтД
Примечание: 1. Staphylococcus spp. КОЕ/мл lg более 3; 2. S. aureus; 3. S. aureus КОЕ/мл более
3lg; 4. S. epidermidis, Hly+; 5. S. epidermidis, Hly+ КОЕ/мл более 3lg.
Уровень эффективности значительно отличался в группе ГК от показателей
в группах ГСАД и ГСАтД . В контрольной группе показатель Staphylococcus spp.
КОЕ/мл lg > 3 уменьшался в 1,4 раза. В группе ГСАР данный показатель изменился в 2,4 раз и в 2,2 раза в ГСАтД (Рисунок 7).
Частота бактерионосительства S. aureus КОЕ/мл lg > 3 в группах сравнения
снижалась в 2,5-4,0 раза при показателе 1,5 раза в контрольной группе.
В группах сравнения по отношению к контрольной группе отмечено более
выраженное снижение показателя биологического профиля, что свидетельству17
ет о доминировании на слизистой носа S. aureus и S. epidermidis с меньшим потенциалом патогенности.
Рисунок 7 - Биохимические показатели ротовой жидкости до и после коррекции
микрофлоры в группе ГСАтД
В процессе коррекции наблюдалось достоверное увеличение содержание
лизоцима и по уровню значительно превышало показатели до коррекции
(Р<0,05). Содержание гистамина после коррекции значительно снижалось
(Р<0,05). Соотношение лизоцима к гистамину в процессе коррекции увеличивалось с 2,1 до 5,0.
18
Выводы
1. Для студенческой молодёжи в условиях Севера характерно повышенная частота индикации со слизистой оболочки носа и зева представителей вида S.
аureus и S. epidermidis с гемолитической активностью (50,5% исследуемых
лиц) при высокой частоте случаев с плотностью бактерий КОЭ lg 103 и более
микробных клеток (64,3%). Бактерионосительство этих видов сопровождается снижением содержания лизоцима и значительным увеличением содержания гистамина в слюне (р<0,05), их соотношение находится в обратной сильной корреляционной зависимости (r = - 0,9) .
2. Диагностические коэффициенты активности ферментов патогенности микрофлоры слизистой оболочки носа и зева, содержания лизоцима и гистамина в
слюне имеют достаточный диагностический и информационный уровень (6-8
баллов, I>0,5) для определения риска возникновения круглогодичного аллергического ринита и атопического дерматита.
3. Микробиоценоз кишечника в группах риска по круглогодичному аллергическому риниту и атопическому дерматиту характеризуется уменьшением количества и лизоцимной активности бактерий рода Lactobacillus (87,2 % исследуемых лиц) при увеличении атипичных Е. coli с декарбоксилирующей активностью. Наиболее часто идентифицируются L. delbrueskii (22,5%), L. сasei
и L. rhamnosus, реже выделяются L. brevis (11,3%) и в единичных случаях L.
рlantarum, L. trichodes, L. аcidophilus, характерные для нормальной микрофлоры человека (3,2%). Среди этих изолятов в большинстве случаев (61,3%
изолятов) преобладали штаммы с «низкой» и «ниже среднего» лизоцимной
активностью.
4. Использование пробиотических штаммов лактобацилл с учетом их диаминооксидазной, лизоцимной и антагонистической активности к микроорганизмам с наибольшим потенциалом патогенности, выделяемых в регионе, является эффективным для коррекции нарушений микрофлоры и нормализации
соотношения содержания лизоцима и гистамина в слюне у лиц групп риска
по круглогодичному аллергическому риниту и атопическому дерматиту.
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
1. Разработанные и апробированные диагностические коэффициенты ферментов
патогенности микрофлоры слизистой оболочки верхних дыхательных путей,
содержания лизоцима и гистамина рекомендуются для прогнозирования риска
возникновения круглогодичного аллергического ринита и атопического дерматита.
2. Определение степени диаминооксидазной и лизоцимной активности лактобацилл и их антагонистической активности к микроорганизмам с наибольшим
потенциалом патогенности в регионе при отборе пробиотических штаммов
рекомендуется для повышения эффективности коррекции нарушений микрофлоры в группах риска по возникновению круглогодичного аллергического
ринита и атопического дерматита.
19
ПЕРСПЕКТИВЫ ДАЛЬНЕЙШЕЙ РАЗРАБОТКИ ТЕМЫ
1.Необходимо продолжить изучение разнообразия микрофлоры организма человека в различных регионах Российской Федерации у лиц при отсутствии
клинических проявлений и при различных заболеваниях, обусловленных нарушением эубиоза.
2.Исследовать эффективность расширения спектра применения пробиотических штаммов лактобацилл для персонизированной профилактики нарушений микрофлоры организма человека и в комплексе лечения заболеваний.
3.Продолжить разработку новых алгоритмов селекционирования и использования пробиотических штаммов с учётом их фенотипической активности и
полногеномного секвенирования.
20
Список работ, опубликованных по теме диссертации:
1. Куяров, А. А. Медицинская статистика в бактериологических исследованиях
для определения биопрофиля микроорганизмов / А. А. Куяров, Л. А. Клюева,
Н. И. Сереброва // Наука и инновации XXI века: мат-лы окр. конф. молодых
учёных / Сургут. гос. ун-т. - Сургут: Изд-во СурГУ, 2004. – С. 163–164.
2. Харева, А. Г. Содержание гистамина в кисломолочной продукции / А. Г. Харева, Д. С. Тышкевич, А. А. Куяров, А. Р. Овчинникова // Естественные науки: cб. науч. тр. биологического факультета. Вып. 5 / Сургут. гос. ун-т ХМАО
– Югры. - Сургут: ИЦ СурГУ, 2008. - С. 161-166.
3. Тышкевич, Д. С. Значение пробиотических микроорганизмов в современных
технологиях профилактической и восстановительной медицины / Д. С. Тышкевич, А. Г. Харева, А. А. Куяров, А. Р. Овчинникова // Региональный университет: инноватика: науч. журнал Сургут. гос. ун - та // Сургут. гос. ун-т
ХМАО – Югры. – Сургут: ИЦ СурГУ, 2009. - С. 49-51.
4. Куяров, А. А. Факторы естественной резистентности у студенческой молодежи в условиях Севера / А. А. Куяров, Л. А. Сайгушева, А. В. Куяров // Материалы XIV междунар. симпозиума «Эколого-физиологические проблемы
адаптации», 9-10 апреля 2009 г. - Москва, 2009. - С. 269-271.
5. Куяров, А. А. Микробная экология и факторы естественной резистентности
организма человека в условиях Севера /А. А. Куяров, А. Г. Харева, А. А.
Подкорытов, Н. А. Крюков // Экология и природопользование в Югре: Матлы науч.-практ. конф., посвящённой 10-летию кафедры экологии СурГУ. Cургут. гос. ун-т ХМАО-Югры. - Сургут: ИЦ СурГУ, 2009. - С. 63-64.
6. Куяров, А. А. Факторы неспецифической защиты при бактерионосительстве
стафилококка в условиях Севера / А. А. Куяров, А. Г. Харева // Актуальные
проблемы экспериментальной и клинической медицины: мат.-лы 67-й открытой науч.-практ. конф. молодых учёных и студентов с междунар. участием.Волгоград, 2009. – С. 158-159.
7. Сухарев, Д. А. Значение факторов неспецифической защиты в комплексной
оценке состояния здоровья спортсменов в условиях Севера / Д. А. Сухарев,
А. А. Куяров, Л. В. Коваленко, А. В. Морозкина // Совершенствование системы физического воспитания, спортивной тренировки, туризма и оздоровления различных категорий граждан: Сб. мат-ов VIII Всерос. науч.-практ. конф.
с междунар. участием. - Сургут, 2009.- Т. 2. - С. 210-213.
8. Куяров, А. В. Этиологический подход к коррекции нарушений микрофлоры
кишечника / А. В. Куяров, А. Г. Харева, Д. С. Тышкевич, А. Р., А. А. Куяров,
А. Р. Овчинникова // Вестник СурГУ. - 2009. - № 2. - С. 10-13.
9. Коваленко, Л. В. Системный анализ оптимизации выбора пробиотических
препаратов для жителей Севера / Л. В. Коваленко, О. Е. Хорева, А. А. Куяров
// Экологический вестник Югории. - 2009. - Т. VI, № 3. – С. 81-85.
10. Куяров, А. А. Системный анализ передачи информации в системе
«неспецифические факторы защиты – воспаление - иммунные
реакции» /А. А. Куяров, Л. А. Сайгушева // Информатика и системы
управления. 2009. - № 4 (22). - С. 31-33.
21
11. Коваленко, Л. В. Факторы неспецифической защиты в группах риска с неспецифическими гастроинтестинальными и аллергическими заболеваниями
студенческой молодежи в условиях Севера / Л. В. Коваленко, А. А. Куяров,
Л. А. Сайгушева // Вопросы патогенеза типовых патологических процессов:
Труды II Всероссийской науч.-практ. конф. с международным участием. – Новосибирск, 2010. – С. 197-201.
12. Куяров, А. А. Бактерионосительство стафилококка и факторы неспецифической защиты у студенческой молодежи в условиях Севера / А.А. Куяров // Университетское образование: материалы международного научного
форума: 26 января 2010 – Ульяновск, Часть II / Отв. ред. А. В. Ильина - Ульяновск: УлГПУ, 2010. – С. 457-461.
13. Куяров, А. В. Микрофлора верхних дыхательных путей и кожных покровов организма и показания к коррекции ее нарушений у спортсменов
/ А. В. Куяров, Л. А. Сайгушева, Д. А. Сухарев, В. В. Апокин. А. А. Куяров // Теория и практика физической культуры. - 2010. - № 7. – С. 102104.
14. Куяров, А. А. Факторы неспецифической защиты у студенческой молодежи в условиях Севера / А.А. Куяров, Л. А. Сайгушева // Фундаментальные и
клинические аспекты охраны здоровья человека на Севере: Материалы междун. науч.-практ. конф. посвященной 15-летию медицинского образования в
ГОУ ВПО «Сургутский государственный университет ХМАО – Югры». Сургут, 2010. – С. 113-117.
15. Куяров, А. А. Микрофлора верхних дыхательных путей в группах риска с
неспецифическими гастроинтестинальными и аллергическими заболеваниями у студентов в условиях Севера / А.А. Куяров // Клинические и теоретические аспекты современной медицины: II международная студенческая научная конференция с участием молодых учёных, Москва, 22-23 апреля 2010 г. –
Москва, 2010. - С. 51-52.
16. Куяров, А. А. Видовой состав лактобактерий при дисбактериозе кишечника и оптимизация выбора пробиотических препаратов для жителей Севера
/ А.А. Куяров / Актуальные проблемы экспериментальной и клинической медицины: Материалы 68-й открытой научно-практической конференции молодых учёных и студентов с международным участием, посвящённой 75-летию
ВолГМУ. - Волгоград, 2010. – С. 164-165.
17. Куяров, А. В. Факторы неспецифической защиты у спортсменов в
условиях Севера / А. В. Куяров, Л. А. Сайгушева, Д. А. Сухарев, В. В.
Апокин, А. А. Куяров // Теория и практика физической культуры. - 2010.
- № 12. – С. 98-100.
18. Брагинский, М.Я. Системный анализ, управление и обработка информации в биологии и медицине: Часть IX. Биоинформатика в изучении физиологических функций жителей Севера / М. Я. Брагинский, И. В. Буров, В. Н. Голушков, Ю. В. Добрынин, Е. В. Дрожжин, В. В. Козлова, А. А. Куяров, А. С.
Пашнин, О. Е. Филатова, М. А. Филатов, А. А. Хадарцев, С. П. Шумилов;
под ред. В.М. Еськова, А.А. Хадарцева. – Самара : ООО «Офорт», 2011. -173
с.
22
19. Куяров, А. А. Особенности состояния факторов неспецифической защиты у жителей Севера / А. А. Куяров, Л. А. Сайгушева, И. Р. Базиева, Ф. М.
Хулатаева // Современные проблемы биологических исследований в Западной Сибири и на сопредельных территориях: Материалы Всероссийской
научн. конф., посвящённой 15-летию биологического факультета СурГУ, Сургут, 2-4 июня 2011 г. - Сургут, 2011 г. - С. – 251-254.
20. Куяров, А. А. Идентификация и значение бактерий рода Lactobacillus в
биоценозе кишечника у жителей Севера / А. А. Куяров, Л. А. Сайгушева, А.
В. Куяров, Е. Ф. Дудко // Материалы X съезда Всероссийского научно-практического общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов. – Москва,
2012. - С. 319-320.
21. Куяров, А. А. Видовой состав и лизоцимная активность бактерий
рода Lactobacillus при нарушении биоценоза кишечника у жителей Севера / А. А. Куяров, А. Ю. Миронов, Л. А. Сайгушева, Е. О. Рубальский //
Астраханский медицинский журнал. - 2012. -Том 7, № 1. - С. 61-63.
22. Куяров, А. А. Бактериологическое выделение и идентификация бактерий
рода Lactobacillus при нарушении биоценоза кишечника у жителей Севера /
А. А. Куяров, Л. А. Сайгушева, А. Г. Харева // Вестник СурГУ Медицина. 2012. - № 11. - С. 12-15.
23. Куяров, А. В. Диагностическая информативность показателей микрофлоры слизистой оболочки носа и зева в группе риска с аллергическими
заболеваниями / А. В. Куяров, Л. А. Сайгушева, А. А. Куяров, Д. А. Сухарев, З. Ф. Низамутдинова, С. Н. Нохрина // Врач-аспирант. - 2013. - № 6.1
(61). – С. 170-174. .
24. Куяров, А. В. Пробиотическая микробиология на службе здоровья жителей Севера: монография / А. В. Куяров, Г. Н. Куярова, А. А. Куяров, З. Ф. Низамутдинова, С. Н. Нохрина, Л. А. Сайгушева, Д. А. Сухарев; Сургут. гос. ун-т
ХМАО-Югры. – Сургут: ИЦ СурГУ, 2013. – 223 с.
25. Kuyarov, A. A. Discription of Changes in Species Composition of Intestinal Bacterial Community in the Urbanized North Environment / A. A. Kuyarov, L. A. Saygusheva, G. N.Kuyarova, Z. F. Nizamutdinova, S. N.
Nohrina // World Applied Sciences Journal. - 2013. -V.27 (3). - Р. 376-380.
Изобретение
26. Пат. № 2393214 Рос. Федерация: МПК C12N 1/20, A 61 K 35/74, C1 2 P
37/00. Иммунобиологическое противоаллергическое средство (варианты),
штамм Lactobacillus acidophilus NKJC, штамм Lactobacillus acidophilus JCH,
штамм Lactobacillus acidophilus KAA / Черепанова Ю. В., Поспелова В.В.,
Алёшкин В.А., Афанасьев С.С., Лахтин В.М., Амерханова А. М., Куяров А.
В., Рубальский О. В., Ульянова Л. П., Алёшкин А. В., Волкова Е. В., Лахтин
М.В. Ахминеева А. Х., Рубальский Е. В., Куяров А. А., Афанасьев М. С.,
Афанасьев Д. С.; заявитель и патентообладатель ООО «ИнноПроб». 2009102950/13; заяв. 29.01.2009; опубл. 27.06.2010, Бюл. № 3. – 7 с.
23
Список сокращений:
АР - группы риска с круглогодичным аллергическим ринитом;
АтД - группа риска с атопическим дерматитом;
БФБ - бифидобактерии;
БФБ - уменьшение количества бифидобактерий;
ГК
- группа контроля при оценке эффективности;
ГС - группа сравнения;
ГСАР - группа сравнения из лиц с аллергическим ринитом;
ГСАтД - группа сравнения из лиц с атопическим дерматитом;
ДК - диагностический коэффициент;
ДрГ - повышение количества дрожжеподобных грибов рода Candida;
Кл - повышение количества клостридий;
КОЕ - колониеобразующие единицы;
КПГ - повышение количества E. coli Hly+;
КПЛН - повышение количества лактозонегативных E. col;
КПТ - уменьшение количества типичных E. coli;
КФМ – повышенное количество кокковых форм микроорганизмов;
ЛКБ - уменьшение количества лактобактерий;
НГИЗ - неспецифические гастроинтестинальные заболевания.
24
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа