close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Интраорганные кровеносные и лимфатические сосуды желудка и кишечника при острой и хронической лучевой болезни В А Чернова Томск 1975 31 c 3031

код для вставкиСкачать
ЛиШОПЕГРОВСКИД
ордена трудового красного знашини
иЕ& ицинсш и н с т и т
На правах рукописи
ЧЕРНШО »)рий Петрович
УЛЬТРАЭТРУНТУРА К0ЦГАК10В ГШХГОЦИГОВ
( 1 4 .0 0 .2 3 - гистология)
Автореферат
жиссертацни на соискание
учоаоя степени кандидата
иедицянских наук
Дпепропетровок
1975
Б^^ь
: .( А
В е17ал1кн 1.^ и н с Г к У » .•
'
Ра(5ота выполнена на кафедре гистологии е в центральноЗ научно-исследовательской лаборатории Днепропетровского
ордена Трудового Красного Знамени медицинскогс' института
Научный руководитель
- доктор медицинских наук, профессор В.И.Архипенко
Официальные оппоненты:
Доктор биологических н аук, профессор Я.А.Бшшиков
Доктор медицинских н ау к, профессор Ю.Н.Шаповалов
Отзыв о научно-практической пенности работы получен
от И осковского института экспериментальной и клинической
онкологии АН СССР.
Автореферат разослан
Защита состои тся
1975 г .
.1 9 7 6 г . на за с е д а ­
нии Совета Днепропетровского ордена Трудового Красного Зна­
мени медиш нскогс института (у л .С ева сто п о л ьск а я,1 7 ) .
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке инсти­
тута (ул.Д зержинского. 9 ) .
Ученый секретарь Совета
допент
Е.Ф.ДУКАШЕВИЧ
;.'езклеточкне контакты представляют собой структур», об разозанныб соприкасающшдся псверхаоотя1.4и клеток , и состо ят из
ряда элементов - межклеточных соединений, В настоящее время
стало очевидным, что межклеточные контакты осуществляют ваяу;т?
биологическую ^ушшив - интеграцию к л еток. Эго позволяет р а с­
сматривать межклеточные контакты как
з у ю щ и е
э л е м е н т ы ,
с и с т е м о о б р а ­
участвум ш е в развитии и поддор-
жакЕи структурной и функциональной интеграции тканевых си стем ,
а таюже в процессах тканевой р егуляш и . Благодаря межклеточным
контакта/-! клетки в тканях объединены многочисленными механичес­
кими и метаболическими свяэягм!, что превращает ткань в единую
функциональную систему (Ю.М.Васильев, А,Г.1«!аленкоВг1968; В .П .
Божкова и д р ,, 1 9 7 0 ; ^.Я. $ о т т е г
1ое»епз^е1п
, Е.А. ^оI^п5оп
,1 9 7 0 ;
,1 9 7 0 ) .
Изменения структуры и сво й ств межклеточных контактов мо­
гу т лежать в основе различных заболеваний: овкологичесвих, кар­
диологических и д р .
Еоеч/епькт
л о у с о в а ,1 9 7 1 ; К. К^VV'ати^и
МсNии
,Т.М. ^ а т « з
,У . К аппо
,1 9 6 7 ; Т .А .Б е ­
, 1 9 7 1 ; Я 5. Ше1п51е1п,
,1 9 7 2 ; Л .С .С ал ям о н .1974). Поэтому глубокое и в с е ­
стороннее исследование структуры и функвдй межклеточных контак­
т о в я вл яется актуальной проблемой современной биологии и меди цины.
Выяснение особенностей структурной организации межклеточ­
ных контактов стало возможным только благодаря развитию элек тронной микроскопии. К настояще?лу времени достаточно подробно
исследована ультраструктура контактных элементов 1 К.УУе1 пз 1 е 1 п,
N.5. МсМиП
, 1972 ; N.5.
,Я5.\Уе1п5{е1п
,1 9 7 3 ) . В р а з ­
ной степени изучена их функциональная роль.У становлено,что струк­
тура и свой ства межклеточных контактов динамичны и зави сят от
2 ряда внутри- и внеклеточных факторов: генетического аппарата,
белкового си н те за , уровня энергетических процессов,состояния
цитоплазматических микрофилаыентов, концентращи гормонов, ме­
таболитов, ионного с о с т а в а среды, наличия ферментов, спосо<№нх
лизировать различные элементы контакта ( 5 . Х
,1 9 6 7 ; А Л .М о з с о п а ,1 9 6 Ь ;Л . КоНп
Л.В.О льш евская, Е.А.\к)ДЯНОва,1971;
М.
1 ;е к в г т а п
а [. .1 9 7 3 ;
Р.О.
5 о с о 1 а г , А .и .Р о ,Р. Р и с Ь з
Г б . М е гк
5е21еп
,1 9 7 0 ;
,1 9 7 2 ;
.1 9 7 3 ) .
Однако несмотря ва т о , что морфофункциональная организа­
ция межклеточноХ контактов в настоящее время изучена довольно
глубоко, о с т а е т с я нерешенным целый ряц важных вопросов, свя зан ­
ных с формированием контактов и с нарушением механизмов, под­
держивающих нормальную структуру кон тактов. Т а к , результаты
исследований динамики формирования структуры межклеточных кон­
тактов в онтогенезе остаю тся фрагментарными и не позволяют чет­
ко представить этапности формирования кон тактов.
Не выяснены характер и динамика нарушения ультраструктуи свой ств межклеточных контактов при торможении синтеза РНК.
Решение это го вопроса позволило бы приблизиться к пониманию ме­
ханизмов поддержания нормальной структуры контактов. Достаточно
исследована последовательность разрушения элементов межклеточ­
ного контакта при дефиците двухвалентных катионов во внеклеточ­
ной ср е д е, однако характер нарушения при этом отдельных контакт­
ных элементов о ст а е т ся невыясненным. Кроме т о г о , можно оредполоиить, что динамика разрушения структуры контактов должна зави ­
се ть от свой ств контактных поверхностей. Такого рода и сследова­
ния на ультраструктурвом уровне не цроводились.
‘ И звестно, что разрушение цитоплазматических микрофиланентов приводит к нарушению структ уры межклеточных контактов
- 3 М. и1еЬегтопе1 о 1 ,1 9 7 3 ;. Можно сч и тать, что состояние цитоплаэ1ла7ичесхих микротрубочек также должно оказывать влияние на
структуру контактов, так как микротрубочки принимают участие
в поддержании специфической формы клеток < N.К. и/еззеИз
о1.
1у 7 1 ; , в агрегаю ш клеток ( А.^/. \^^с^с^еи е ! а!.. ,1 9 7 4 ) . Этот воп­
рос до настоящего времени не решен.
Ьшеперечисленные вопросы определили задачи настоящего
исследования. Наиболее иэученныш являются контакты эггителиопитов и , в частн ости , контакты гепатоцитов. Поэтому мы ссчли
целесообразным использовать в качестве объекта исследования
контакты гепатоцитов. В работе изучены следующие вопросы:
1 . Особенности ультраструктурной организации контактов
гепатоцитов интактных к|мс.
2 . Динамика фор?лирования контактов гепатоцитов в онтоге­
н езе на примере метаморфозирующшс личинок амФиби;^ а также в
н ео - и постнатальном периодах онтогенеза у крыс.
3 . Характер нарушения контактов гепато:дггов крыс при
действии актяномицина.
4 . Динамика и характер разрушения контактов гепатосщтов
интактных крыс и к р л с, подвергнутых действию актиномицина, при
дефиците ионов кальция во внеклеточной ср ед е.
5 . Влияние колхицина на ультраструктуру контактов геп ато­
цитов К1ИС.
;/ЛГЕИ1АЛ и .'СЛ'ОДЫ ИССШ0ВАН11Я
1у1атерЕалои для исследования служила печень крыс и амфибий.
Использовано 62 крысы Бистар и 16 амфибий [^апа
би^о Ьи^о
г1с1'|Ьип(^п и
. Для исследования но1мальной ультраструктуры кон -
тактов гепатоцитов было в зя т о 8 1ф ы с-сам цов,весом 8 0 -1 2 0 г . й 1-
- 4 во тш д забивали пзггем декап и таш и , за тем , после лаларотош и , из
левой латеральнсЛ доли л е ч ега вырезали кусочка для электронномикроскопического исследования.
Для изучения динамики фо;Ешроваяия контактов
гепатоцитов
использовали 8 метаморфозирующих личинок лягушки Яапа гМгЬипс1а
и двутс взрослых лягушек (с е г о л е т о к ), 6 метаморфозиругощих личи­
нок жабы & и{о Ь и {о
, трех новорожденных и трех двухнедельных
к р 4с. Стадии метаморфоза личинок Я а п а
р|<11Ьцп4а
выделяли у с ­
ловно. Выделено пять стадий; I - нет почки задней конечности
(прометаыорфоз), П - почка задней конечности (ранний метамор ф о з), Ш - задняя конечность длиной 0 , 5 см (средний метаморфоз),
1 7 - задняя конечность длиной I см (поздний метаморфоз), У взрослая лягушка (с е г о л е т к а ). Каждая сталия была представлена
двумя особями. Стадии метаморфоза личинок Ви{о
Ьи {о
опреде-
ЛЯ.1 И по Л .й .Б л яхер у ( 1 9 2 8 ) . Три личинки находились на П стадии
(задние конечности дифференцированы, но малоподвижны), три дру­
гие на 7 стадии (резорбция х в о с т а ) . Для электронномикроскопичес.к ого исследования у личинок аьфибий вырезали всю печень, у но­
ворожденных крыс - всю долю.
С целью решения вопроса о влиянии подавления си н теза РНК
на ультраструктуру межклеточных контактов нами исследовано вли­
яние актино.'яглгаа на ультраструктуру контактов гепатоцитов кры­
сы. лдтиномицин я в л я е тся антибиотиком, специфично ингибируввдш
днк-зависимый синтез РНК ( С.Ю .Лукьянов, Н.Г.Шуппе.ДЭбб). Нами
был црименен отечественный препарат - аурантин, являющийся
смесью актиномииинов и близкий по своевву с о с т а в у к "актююмицину С" (Ю .0.С азы к и н ,1988). Для эксперимента использовано 3 4 крысы.
16 крысам обоего пола, весом 8 0 -1 2 0 г однократно, внутрибршинно
вводили аурантин в растворе Рингера в д о зе 100 мкг на 100 г в е -
- 5 с а . Через 1 , 2 , 3 , 4 , 6 , 1 0 , 2 4 и 4 8 часов забивали по д ва животных
для эдектронноюпфоскопичесхого исследования печени. 18 крысаысамш м, весоы 1 8 0 -2 0 0 г ежедневно, подкожно вводили аурантин в
д о зе 8 мкг/100 г в е с а . Забой проводили ч ер ез 1 , 2 , 3 , 4 , 5 и 6 с у ­
ток после начала эксперимента, сп устя 24 ч а с а после последней
инъекщи.
Исследование влияния аураятина на динамику разрушения
контактов гепатош ггов в б ескальш евой среде проводили с помощью
пер1узии печени. Для этой цели использовано 6 кры с-самцов,весом
1 8 0 -2 0 0 г . Двум красам ежедневно, подкожно, в течение 6 дней
вводили аурантин в д о зе 8 мкг/100 г . Через 24 ч аса после послед­
ней инъекции крыс наркотизировали эфиром, вскрывали брюшную по­
л ость к перфузировали печень 1г\
ч ерез воротную вену
раствором Хенкса, содержащим О, 0 0 3 М этилендиаминтетрааиетата
(ЭДГА). Перфузию проводили с помощью установки оригинальной кон­
струкции, изготовленный на б а зе микротерлостата йГТ-З. Температу­
ра перфузата автоглатически поддерживалась в пределах 3 6 + 0 ,5 ^ 0 ,
скорость перфузии со ставл я л а 8 мл на 10 г в е с а печени,давление
перфузата со о тветство вал о 1 6 0 м:/ водяного столба (Л.Куе^^по.А.био 1 ^ап{
,1 9 6 9 ) , рй - ? , 4 , ЭДТА применен в к ач естве вешествав^’к -
тивно связывазипего ионы кальция (Р .В . А г т 5 ^ г о п ^ . О.Р. З о п « 5 ,
1 9 6 8 ). Концентрация ЭДГА в 0 ,0 0 3 М обеспечивает связывание ионов
калышя как в самом растворе Х енкса, так и в экс трэде ллюлярных
пространствах в печеночной ткани, через 1 0 ,1 5 и 20 мин после на­
чала перфузии из центральной доли печени вырезали кусочки для
электронномикроскопяческого исследования.
Для исследования влияния колхицина на ультраструктуру
контактов гесатоаи то в использовали 8 крыс-самцов весом 120 г .
Шести крялсам колхипиы вводили однократно, подкожно в 0 , 5 мл р аст-
- 6 вора Рин1 *ера в д озе 100 мкг на 100 г в е с а . Через 1 ,2 и 3 дня
забивали по д ве к]жсы. Двум крысам колхишн вводияи в д озе
250 мкг/100 г , забой проводили через 24 ч а с а .
Для приготовления электроЁноыикроскопических препаратов
кусочки печени переносили в охлажденный раствор фиксатора. Фикс а ш г производили в течение 1 ,5 часа в 2 ,5 ^ растворе глю таровог о альдегида на 0 ,1 М фосфатном буфере, рН фиксатора 7 , 3 - 7 , 4
{ М.А.
(
,1 9 7 2 ) с дофиксацией 1% четырехокисью осмия, 2 часа
Сац1(|€1с{
,1 у5 7 ) . Обезвоживали кусочки в этаноле в о зр а с -
тапцей кон 11ентра 1Я и . В процессе обезвоживания кусочки печени
контрастировали 1 ,5 ^ раствором уксуснокислого уранила в 70®
спирте, 2 часа ( М.6. Гаг<]и11аг, б.Ь, Ра1ос1е
,1 9 6 Ь ) , До 96® спир­
та и с п о л ь з у е т е для проводки растворы охлаждали до +4®С, начи­
ная с 96® спирта растворы имели коглнатнуго температуру. После
обезвоживания кусочки печени переносили в окись пропилена и
заключали в аралдит (О .М .Г л а у эр г,1 5 6 5 ). Ультратонкие среды по­
лучали на ультрамикротоые УШ‘П -2. Срезы сер ого и серебристого
ц вета монтировали на медные сетк и , покрытые плшпюй-подложкой
и з фсфмвара, контрастировали раствором лимоннокислого свинца
СЕ.5. Ке^по1(^5
,1 9 6 3 ) и просматривали в электронном микроскопе
УЗЛВ-100-К. Фотографирование осуществляли на фотопластинки ти О
па МР в диапазоне увеличений 8 -2 0 *1 0 . В ряде случаев проводили
прицельную ультрамикротогшо. С целью предварительного сравнения
размеров исследуемых ультраструктур на люминесцентный экран
электронного микроскопа простым карандашом была нанесена сетк а
с шагом 5 мм. При увеличении в 10000 раз 5 мм на экране со о т ве т ­
ствовали 0 , 5 мкм на изображении. Это позволяло судить о размере
исследуемых структур в процессе щюсматривания ср езо в.
- 7 РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУДДЕНИЕ
I , Ультраструктура контактов ге п а т о ш то в и ^актны х крыс
При исследовании нормальной ультраструктуры контактов г е натоцЕтов мы пытались выяснить особенности ультраструктурной
организации кон тактов. Это, по нашему мнение, позволит получить
более определенные результаты 1фи исследовании контактов в эк с­
перименте. Учитывая, что центральные и пер^ ер ически е гепатоцигы
различаются по своей ультраструктуре и метаболизму I А.В. Мо у 1 к о {{, Е.Еэбпег
,1 9 6 0 ; Е .В .К ап у сти н а,1 9 6 5 ; X
е 1 а 1 .,1 9 б 9 ),
мы, кроме в с е г о прочего, сравнили ультраструктуру контактов
центральных и периферических гепатоцитов. Нами просмотрено 167
областей контакта гепатоци тов. Однако каких-либо различий в
структуре контактов центральных и периферических гепатоцитов не
обнаружено. В печени крысы контакты гепатоцитов имеют, т а ­
ким образом, достаточно однородную структуру.
Контакты гепатоцитов К1жсы со сто ятт из ряда элементов .ти ­
пичных для контактов эпителиоцитов позвоночных. Это
т ые
с о е д и н е н и я ,
" з а м к а ”,
п л о т н ы е
о б л а с т и
и
с о е д и н е н и я
с л и п а н и я ,
щ е л е в и д н ы е
п р о с ­
т и п а
д е с м о с о м ы ,
с о е д и н е н и я . В
отдельных участках контактирующие поверхности геп атош то в рг го ­
д я т ся , образуя желчные капилляры. Полости желчных капилляров о г­
раничены
н е н и я
соединительными коАШдексаш. П р о с т ы е
с о е д и ­
имеют наибольшую протяженность по сравнению с о стал ь­
ными элементами кон такта, длина их д о сти гает 10 мкм. Пчаэматкческие мембраны в области простых соединений расположены компле­
ментарно относительно Д1^ т друга и разделены п р ш ея ^ к о м , межмембранным пространством, шириной 1 5 0 -2 0 0 А. Содержимое межмеыбранного пространства имеет низкую электронную плотность. 3 о т -
- 8 дельвых уч астк ах простых соедкнениЁ, обычно вблизи субэвд отел вального пространства, наблЕщастся расширения иехмембранного
пространства д о 4 0 0 -5 0 0 А и протякенностью до 0 , 3 мкм. В различ­
ных областях к оетакта встречах)тся
” з а м к а
с о е д и н е н и я
т и п а
” . Ши^шна мехыембранного пространства этих со ед и ве-
НЕЁ и ШЕотвость 61*0 содержимого такая х е , как у простых соедине­
ний. П л о т н ы е
н и я
и
с о е д и н е н и я , з о н ы
д е с м о с о м ы
с л и п а ­
ограничивают желчные капнллях», об­
р азуя типичные соединительные кш плексы. В плотных соединениях
наружные листки плазматических мембран слиты в общий слой тол диной 3 0
А.
Длина плотных соединений от
200
до 1500
А.
Зоны ели-
О
панЕя имеют протяженность до 1000 А и мехмембранное пространство
шириной 200 1 , алектронная плотность которого выше по сравнению
с щюстым соединениа^. Помимо десмосом, входящих в со ст а в соеди­
нительных комплексов, в контакте гепатопитов обнаруживаются ред­
ко расположенные олиночные десмосомы. Десмосомы имеют типичную
структуру, длина их 5 0 0 -1 0 0 0
л е в и д я ы е
А.
Регуля^що обнартииваются
с о е д и н е н и я .
ще -
Пространство между плазма­
тическими мембранами этих соединений редуцировано до 2 5 -3 0
А.
Длина цележдиых соединений составляет 0 , 1 - 2 , 0 вмк.
Говоря о структуре контактных элем ентов, нельзя не о ст а ­
новиться на их функциональной роли. Пока невозможно каждому эле­
менту хоитакта приписать одну определенную функцию
5^е1п. М.$. МсNи^^
(Й.5.и/е1п-
,1 У 7 2 ). Эго связано с тем , что в настоящее
время отсутствую т методы фунКцисшального исследования отдельных
элементов кон такта. Тем не менее,существующие данные позволяют
судить о значении элементов межклеточных контактов. Т ак, а д г е зж ш ая с в я зь клеток а <шределенной степени обеспечивается всеми
соединениями, однако некоторым из них принадлежит ведущая р а т ь .
- 9 К таким соединениям следует отнести шютные соединения,области
слипания и в меньшей степени щелевидные соединения, простые со е­
динения и соединения типа "зам ка” . Ионная, метаболическая и
макрсжолекудярная с в я зь между клеткш«в обеспечивается только
пдотш видом соединений - щелевидныыи соединениями (М.У. Веппе^^,
1 9 7 3 ).
Представляет интерес расположение органоидов относительно
контактных элементов. Очевидно, межклеточные кош уникащи о б ес­
печиваются не только контактными элементами,а сложныш контактнооргавоидными
объединениями. Расположение органоидов относитель­
но контактных поверхностей клетки можно рассмат|Я!вать как морфо­
логическое выражение взаимодействия органоидов и межклеточного
кон такта. Под плазматическими мембранами контактных эл е м ^ т о в
располагаются митохондрии, ыикротельца, цистерны эндоплазмати­
ческого ретикулума, микропуэнрьки, гранулы гли когена, полисомы,
микротрубочки. Встречаются митохондрии, симметрично расположедные по обе стороны простого соединения. Непосредственно под
плазматической мембраной контактной поверхности р асполагается
область с повышенной по сравнению с гиалоплазыой электронной
плотностью - подмембранвый компонент. Он наиболее шражен в
местах плотных слединений, областях слипания и десмосом и имеет
микрофибрил.'хяраую структуру.
. .
Поскольку каждый гепатоцит благодаря контактным структу­
рам свя зан с несколькими соседними гепатоцитами, гф едставдяетс я целесообразным выделить ч а ст ь его контакт
поверхности,
используемой для контакта с одной соседней клеткой. Этой облас­
ти можно д ать название " к о н т а к т н а я
п л о щ а д к а " .
Контактная площадка об р азу ет, таким образом, совокупность со е­
динений и их комплексов, участвупцих в контакте данного г е п а т о цита с одним из соседних. Оовокупнссть контактных площадок г е -
- 10 п атощ та образует его контактную поверхность* С псяющью несколь­
ких своих контактных площадок каждый гепатодит оказывается
"подключенным" к соседним. Можно выделить четыре структурашх
урош я организации контакта гепатоцитов: I )
элементы контакта
- соединения; 2 ) комплексы элементов; 3 ) совокупность элемен­
т о в . образованных контактной площадкой; 4 ) ксятактные структу­
ры, образованные всей контактной поверхностью клетки. Представ­
ление об уровнях организации межклеточного контакта должно п оз­
волить более последовательно подходить к иззгчению его с т руктуры
и сво й ств.
При исследовании ультратонких ср езо в печени мы столкну­
лись с тем фактом, что д ля анализа структуры контакта ге п а т о цитов могут сЪть использованы далеко не в с е его сечения. Наи­
более репрезентативными оказали сь сечен и я, содержащие желчные
капилляры. В этих сечениях ширшг межмеыбранных пространств
простых соединеЕ01й о с т а е т с я постоянной. Селения, проходящие
вблизи и параллельно переходам субэцпотелнальш х пространств
в межмембранные пространства простых соединений или вдоль об­
ластей стыка трех гепатоцитов содержат кроме простых соединений
и межклеточные щели переменной ширины. Такая картина объясняет­
ся тем .что субэндотелнальное пространство "з а т е к а е т " межцу г е патоцитами в м еста их контактов и сты ков. Сечения контактов,
полученные в районе этих границ, не передают адекватно д ей ст­
вительного состояния структуры контактов. В экспехименте и ссл е­
дование этих сечений, наряду с другими, может созд ать иллюзию
нарушения нормальной стгуктуры по крайней мере у части контак­
тов.
2 . Формирование контактов гепатопитов в онтогенезе
Исследование динамики формирования межклеточных к о к т а к -
- II тов» представляет большой и н терес, поскольку она в какой-то ме­
ре отражает характер контактных взаныслействий м ек 1^' клетками
при развитии тканевой структуры. Нами устан овлен о, что стан ов­
ление структуры контактов гепатопитов происходит в эакономерн<Л
последовательности. В этом отв(жении наиболее демонстративным
обьектсш ок азал ась печень метаморфозжрующих личинок ам|а!бЕй.
7x6 на стадии прометаморфоза л и ч и н т Копа г 1<1 1 Ьип(1 а
гепатоп и -
ты связаны соединит 01 ьными к<жиексами и обширными щелевидными
соединениями протяхенносты) д о 2 мкн. Остальные элементы хон так та не обнарухивастся. Обрашенные друг к другу хговерошости
гепатопитов разделены широкими мехклеточными щелявш. Таким об­
разом, на стадии прометаморфоза кснхтакты гепатоцитов имеют
СТ17 КТУРУ, д а л е ! ^ от дефинитивной. Под мембранами щелешшшх
соединений обычно р асп ол агается скопление цистерн гранулярвого
эндоплазматического
ретикулума. Близкое расположение от щеле­
видных соединений бедоксинтезирущ его аппарата клетки можно
рассм атргаать как морфологическое выражение развитой метаболи­
ческой СВЯЗИ мехлу клеткамй. На стадоо! раннего метаморфоза на­
чинается формирование простых соединений и десмосом. П о в ^ х ности гепатоцитов сближаются, образуя простые соединения и д е с мосомы. На стадии среднего метаморфоза протяженность простых
соединений н ар аста ет, обнаруживаются группы десмосом. На с т а ­
дии позднего метаморфоза структура контактов приближается к д е­
финитивной.
Аналогичным образом изменяется структура контактов геп а­
тоцитов иетаморфозирующих личинок Ви^о У>и{о . На П стадии сфорV
мированы только соединительные комплексы и шелевидные соедине­
ния, изредка встречаются единичные десмосомы и короткие участки
простых соединений. На 7 стадии появляются группы десмосом.
-1 2 большинство контактов ге п а т о щ т о в имеет дефийггивную с т ^ к т у р у .
Таким образом, при фо^шировашш контактов геп а то ш то в ыетаморфозирухщих личинок а^41ибий элементы контакта появлягтся в следух»щей последовательности: соединительные ксшплексы и щелевцдные
соединения, простые соединения, десм осом а, группы десмосом, с о ­
единения типа "за м к а ".
В контактах гепатоцитов л ягушки 1^опа п'с11^ипс1а
обнару-
хи вастся в с е перечисленные выше соединения, однако щелевидные
соединения в с т р е ч а й с я значительно реже, чем у крысы и длина юс
не превышает 0 ,5 мкм. Это д а ет основание сч и т а ть , что между г е патоцитами крысы имеет м есто более тесн ая функциональная с в я з ь ,
чем между гепатоцитами лягушки. Ха1>актерно, ч т о в гфоцесое м ета­
морфоза щелевидные соединения между гепатоцитами достигают
2 мкм длины. В де^^шнитивном контакте шелевидные соединения обна­
руживаются редко и протяженность их значительно меньше. По-види-
т щ , после завершения фондирования тканевой структуры обкем
функциональных связей между клетками снижается.
В литературе динамика формирования контактов гепатоцитов
метаморфозирунщюс личинок амфибий практически не описана. И звест­
но, что при индуцированном метаморфозе личинок лягушки Капа р1р(сп8
между гепатоцитами появляются соединения типа "за м к а "
(Е-З-Зр^е^еи
М.3р(е§е1
,1 9 7 0 ) . Эти данные представляют собой
описание одного из последних этапов формирования контакта г е п а топитов и ничего не говорят о динамике становления структуры
контактов. Полученные нами результаты показывают, что стан овле­
ние структуры контакта сопровождается усложнением его организа­
ции.
Естественно предположить, что фо|»шрование контактов долж­
но коррелировать с возрастанием величины клеточной ад гези и . Было
- 13 показано* что в пропессе естествен н ого метаморфоза величина а д ге­
зии гепатощ1ТОВ личинок Я ап а г[с11Ьипс]а р езк о в о зр а с т а е т . В конпе метаморфоза сцепленность геп а то ш то в в три р а за выше* чем в
е го начале ^Ю.П.чехненко и д р .,1 9 7 3 ) . Корреляпия между во!зрастанием адгезии гепатоцитов и ^ю^жсированием простых соединений и
десмосом позволяет счи тать* что именно эти структуры о тв етствен ­
ны з а возрастание сцеппенности клеток.
7 крыс в неонатальном перисде он тоген еза стр 5'ктура контак­
то в гепатоцитов имеет ряд особенностей,отличающих ее от дефини­
тивной. Желчные капилляр! в печени новорожденных кр!С ограниче­
ны соединительными комплексами в со ста ве которых редко обнару живаются десмосо 1ш . Простые соединения к соединения типа "за и к а ”
характеризуются расширеннш в ряде сл уч аев до 400 А межмеыбранным пространствсм. Обнаруживаются межклеточные полости шир1 ной
д о 1000 А и более. Плазматические мембраны простых соединений
располагаются в большинстве случаев некомплементарю относитель­
но друг Д1^ а . Десыосомы обнаруживаются редко. Гепатош тн свя ­
заны обширными длиной до 3 мкм щелевидиыгли соединепишс!. Эти
результаты снндетельствуют о том , что процесс формирования
контактов между гепатоцитами новорожденных крыс о с т а е т с я н еза ­
вершенным. О тсутствие сформированных контактов между неонаталт
ными гепатоцитагли отраж ает. по нашему мнению, продолжающийся
процесс становления тканевой структур ! печени.
Структура контактов гепатодатов двухнедельных крыс не от­
ли чается от дефинитивной. Соединитслыше комплексы желчтсс капи­
лляров имеют обычный вид. Ширина межмембранных пространств
простых соединений имеет постоянную величину, длина щелевидных
соединений не превышает 2 мкм. Таким образом, в течение первых
д^ух недель постнатального периода структура контактов ге п а т о -
- 14 цвтов к|жсы существенно изы еняется: закан чи вается бозмирование
соединительных комплексов, простьк соединений, соединений типа
“замка**, уменьшается длина щелевидных соединений. Уменьшение
1фотякенности щелевтршх соединений может сви детельствовать о
снижении величины функциональной связи между гепвтош тами по ме­
ре завершения процесса г е п а т о ге н е за .
Литературные данные по всследаван и г ультраструктуры контак­
т о в гепатоцитов крысы в неонатальнси и раннем постнатальвом перисщах он тоген еза крайне малочисленны. И звестно, что в период рож­
дения и в течение первой недели постнатального периода ширина
межиембранных пространств простых соединений гепатоцитов состг[Вляет 2ЬО-ЗООА, а у взрослых крыс 2 0 0 -2 5 0
1.
Соединения типа “зам­
к а " и десмосомы оонаруживаются редко (Р. Ма1е1 г\ а1.
,1 9 7 2 ) . Эго
со гл асу е т ся с нашими данными.
Механизм формирования межклеточных контактов ввиду н едостат­
ка фактического материала о ст а е т ся до настоящего времени н еи звест­
ным. Однако данные литературы по развитию межклеточных контактов
в щ ю цессе он тоген еза позволяют сч и тать, что структура контактов
детерминирована генетически и что развитие межклеточных контак­
то в представляет собой этапы реализации соответствующих ген ети ­
ческих программ.
3 . Влияние актиноыишша на ультраструктуру контак­
то в гепатоцитов
Нами установлено, что применение актиномишгаа '^аурантина),
специфически ингибирующего транскрипцию, приводит к нарушению
нормальной структуры контактов гепатошггов кршсы. Нарушение у л ь т р аст р у к т у !» контактов начинается через 6 ч асов после инъекции
1С0 мкг/100 г аурантина. Появляются участки расхождения мембран
простых соединений шириной до 4 5 0
1и
длиной до 2 м ш . Через 10
- 15 часов межмембранные пространства простых соединений увеличиваются до 5 0 0 -6 0 0
X.
В р езу л ьтате отдельные гепатош ты оказываются
разделены мекклеточньрл! щелями. В последуидем, через л4 и 4 8 ч а­
с о в , расхождения мембран простых соединений и соединен^:, типа
"зам ка" увеличиваются до 6 0 0 -8 0 0 А. В отдельных случаях области
ртсховдения простых соединений простираются от соединительных
комплексов желчных капилляров к субэндотелиальным пространствам,
'Межклеточные щели заполнены кихровыростаии клеточных поверхнос­
т ей . Отмечается редуцирование подмембранного компонента в м естах
нарушения простых соединений. В этих случаях е го электронная
плотность не отличается от плотности гиалоплазмы. Другие элемен­
ты кон такта: десмосомы, соединительные комплексы, щелевидные
соединения не нарушах)тся. При осмотре большого числа срезов
(Х64 с р е з а ) было обнаружено, что через 24 и 4 8 ч асов после в в е ­
дения аураятина длина щелевидкых соединений уменьшается. Вели
в норше щелевидные соединения имеют длину 0 , 1 - 2 , 0 мкм, то после
введения аурантина их длина не превышает 0 , 1 - 1 , 0 мгал
.
Вместе с нарушением структура контактов обнаруживаются
характерные изменения в цитоплазме гепатоци тов. Расширяются
цистерны эндоплазматического ретикулума, уменьшается количество
гли когена, появляются аутофагические вакуоли и миелиноподобк’•'
(ламеллярные) тел ьц а. Эти изменения свидетельствую т о разштиу.
дегенеративных измененш^ в гепатоцитахХН.1)ау1<1
,1 9 6 7 ;1 9 6 9 ) .
Применение малой дозы аурантина (8 мкг/100 г ) вызывает
аналогичные изменения в ультраструктуре контактов гепатоцитов.
После трехкратного введения аурантина нарушаются простые соеди­
нения и соединения типа "з а м к а ". ?.!ежмембранные прюстранства
этих соединений увеличиваются до 6 0 0 -1 , прютяженность участков
расхождения простых соединений со ставл я ет 5 -1 0 1лкм. При дольней-
- 16 шем введении азфантиыа более глзгбокого нарушения структуры
простыл соединений и соединений типа "зам к а" не происходит.
Появляются широкие щели в м естах стыков гепатоцитов. Соедини­
тельные комплексы, десмосомы и щелевидвые соединения сохраня­
ются. Обнарухиваются десмосомы с измененной структурой. Элек­
тронная плотность их цитоплазматических площадок снижена, меж­
мембранное пространство расширено до 400 1 . 5 цитоплазме ге п а ­
тоцитов появляются резко набухшие ш тохондряи.
Таким образом, простые соединения и соединения типа " з ш к а " оказываются наиболее динамичными контактными элементами.
6 меньшей степени это относится к десмосомаы и к шелевидяым
соединенияг.1 .
не обнаружили в литературе данных о влиянии актинсмкшша на ультраструктуру межклеточных кон тактов. Известно только,
что актиномицин тормозит фохялирование клеточных агр егатов и вы­
зывает разрушение уже сформированных ( А А .М озсоаа
,1 9 6 8 ;
М^,Т)ипп е !а !,.,1 9 7 0 ). Некоторой аналогией нашим результатам могз'т
служить данные К.^. В и асК щ ап .А .В . Та^1ог ( 1 9 7 1 ) , ксугорыми оыло
показано, что пригленение динитроф-енола приводит к появлению
широких межклеточных щелей меаду энтерсцитатли крщсы.
Нарушение ультраструктуры контактов ге п а т о ю т с в должно
коррелировать со снйжениоы адгезии гепатоцитов. Это предполокение нами Оыло экспериментально проверено. Было показано, что
через 24 ч аса после инъекции аурантина величина адгезии геп ато­
цитов снижалась в два р аза (Ю.П.Черненко и д р . ,1 9 7 3 ).
Объяснить обнаруженные нами нарушения структуры контактовгепатоцитов при действии аурантина можно следующим образом. Из­
вестн о , ч то щюисходит постоянное обновление плазматических
мембран и-надмембранных компонентов клеток (С.С и/!п^е1, Р. $ 1 € -
- 17 к е у 1^2
,1 9 6 7 ; Я .А .Ш н н иков,1971; А .к. НиЬЬагс!, 2 .
,1 9 7 2 ;
Г.А. В о1^оп 5к1 ,1 9 7 3 ) . По-видимшу, частичное подавление актиномищном транскрипции вызывает метаболические нарзппения, щ ш водящие к торможению новообразования клеточной поверхности и к
нарушению, таким образом, ее нормальных сво й ств . Установлено,
например, что актияомицин и пуромишн тормозят включение мече­
ных аьданокислот и углеводов в плазматическую мембрану и надмемОранный компонент Ч.и/аггеп, М. С и ск ,1 9 6 9 ; Р. Р о з ^
,^ 9 7 3 ).
Обнаруженные нами изменения структуры контактов гепатоцитов
отражают, по нашему мнению, нарушение структуры и свойств по­
верхностей гепатоцитов и , в частн ости , их контактных поверх н остей.
Изменение свой ств контактных поверхностей гепатовдтов
при действии актиномицина подвтерадают и эксперименты с перфу­
зией печени. Нами показано, что при перфузии печени интактных
крыс раствором Хенкса нарушений структуры контактов гепатоци­
то в не н аблвдается. Эго и звестн о из данных литература (Л. В.
0лы 1евская, Е.А.?Лодянова,1971; Я.Ю.Комиссарчик и д р . ,1 9 7 5 ) . Од­
нако при перфузии печени раствором Хенкса с 0 ,0 0 3 М ЭОТА через
10 мин появляются первые признаки нарушения контактов гепато цитов - расхождение плазматических мембран в области простш?
соединений. Через 15 мин появляются широкие межклеточные щели,
разрушаются десмосомк и области слигшшя. Через 20 1Ш 1 обнару­
живаются отдельные гепатопиты, полностью изолированные друг
от д р у га. Аналогичная картина нарушения контактов гепатоцитов
при перфузии печени мыши бескалышевым раствором описана в вы­
шеприведенной работе (Л.В.О льш евская, Е .А .;.'о д ян ова,1971). При
разрушении контактов мембраны плотных и щелевидных соединений
не р асх о д ятся, как
в случае простых соединений, "за м к о в", д е ■
БИЬ
{ *рСУ
КА
и н е т ВТ у
- 18 смоссы п зон слипания, а разрываются. Обычно плаз^аатическая мем­
брана отры вается вблизи этих соединеш!?:. Это со о тветству ет д а н ншл Я. Вге1{и&5
о1. С1966) полученным при персТуэии миокарда.
После инъекции крысам аурантина динамика разрушения кон­
так то в гепатоцитоЕ при перфузии печени и зм ен яется. В этом слу­
чае цропесс разрушения контактов значительно у ск ор я ется, хотя
последовательность и характер разрушения контактных структур
остаются прежними. Уже ч ер ез 10 мин поате начала перфузии с
ЭДТА обнаруживаются полностью изолированные друг от друга г е п а тоциты, контакты меаду гепатоцитами оказываются полностью р а з рушеннк1.01. Такое ускоренное разрушение контактов гепатоцитов
при перфузии печени после применения актиномишна сви д етел ьст­
вует об изменении сво й ств контактных поверхностей {слеток. Полу­
ченные результаты позволяют сд елать вывод о том , что структура
и свой ства межклеточных контактов зави сят от состояния ген ети ­
ческого аппарата клеток. По-видимому, стабилизация структуры
межклеточных контактов обеспечи вается функционированием части
генома клетки . Эго предполагает возможность эпигенетической
регуляции структуры и сво й ств межклеточных контактов.
4 . Влияние колхицина на ультраструктуру контактов
гепато]{Итов
При нарушении структуры контактов гепатоцитов наиболее
очевидные изменения щ юисходят со сторюны простых соединений.
При этом наблюдается сглаживание характерного многоугольного
контура гепатоц и тов. Нарушение контактов приводит, таким обра­
зом , к изменению фор»4ы к л ет о к . ^)сли эти д в а явления взаим освя­
заны, то первичное нарушение фораш клеток должно отрази ться на
состоянии их контактов.
Нагли обнаружено, что применение 1п V^VО
колхицина, пре­
- 1У парата избирательно разруш ащ его цитоплазматические мшфотрубочки, вызывает н арр 1енив нормальной ультраструктурт контактов
гепатоцитов крысы. Через 2 дня после инъекции 100 мкг/100 г
колхицина межыембраннне пространства простых соединений расши­
ряется до 800
X.
Через 3 дня плазматические мембраны простых
соединений и соедин^ий типа "зам к а" р асход ятся до 8 0 0 -1 0 0 0
X.
После введения 250 мкг/100 г колхицина меаду гепатоцитами появ­
л яется межклеточные щели шириной до 0»5 мкм. Остальные контакт­
ные элементы сохраняются и не изменяют своей структуры.
Из данных литературы и зв естн о , что ш тсплазматические
микротрубочки принимают участие в поддержании специфической
формы клетки ( 1 . 6 .
, 1 9 7 1 ) . Показано, что применение кол­
хицина или е го производных вызывает округление клеток (К.К.\//е5зеЦз
е!
о1.
,1 9 7 1 ; В.И.Гелыптейн, А .А .С та б р о вск а я ,1 9 7 2 ).
Колхшжн подавляет агглютинацию конканавалином А полинорс[ноядерных лейкоцитов ( Р..0. В е г и л , Т. У к е п а ,1 9 7 2 ) и агрегацию
клеток Ш К-21 (А.У/.
е^о1,1974). Однако влияние, колхицина
на ультрасгруктуру межклеточных контактов в литературе не опи­
сан о.
Таким образом, наряду с таким фактором как уровень основ­
ных метаболических щ ю и ессов, в поддержании структуры контактов
гепатоыитов и , весыла вероятно, других клеток принимают участие
и цитоплазматические микротрубочки. Ло-видимому, прилежащие к
области контакта микротрубочки сообщают кконтактной поверхности
01феделенные сво й ств а , например, повышают ее ригидность.
В ы в о д ы
I.
Межклеточные контакты в ткани являю тся системообр)азую-
ошми элементами, обеспечивающими интеграцию клеток в единую
функциональную систеилу.
- 20
На контактной поверхности ге п а т о ш т а ввделена об л асть,
учеса:;угоуая з контакте с одной и - соседних клеток, этой области
дано чазвание "контактная плоцади'а".
с.
йщ елеко четыре уровня организации межклеточного кон­
т а к та : I ) контактные элементы - соединения; 2 ) комплексы элемепт о е ; о)
совокупность элем ентов, образеваяных контактной площад­
кой; 4 ) контактные струастуры, образованные всей контактной п сверхчостьЕ клетки.
4 , Впервые описана ультраструктура контактов гепатодктов
лягушки
о,
Формирование контактов гепатоиитов личинок метамерфо-
эир:тшкх акфабий ( К о п а
г1с11Ьипс^а и &и[о
Ьи{ о ) происходит Б
следухчцей закономерной последовательности: соединительные ког^п1лексы и делещпные соединения, простые соединения, д есм о со ш ,
груш и десм осом , соединения типа "за м к а ".
6 . У крыс формирование коктактоз гепатоцитсв заверош ется
в течение первых двух недель постнатальнох'о перисда.
7 . Пригленение 1п у 1уо
аурантина вызывает нарушение в
контакте ге п ат о ш то в крыс простых соединений, соединений типа
"за^эсэ" и уменьшение протяженности щелевидных соединений.
В, Установлено, что в р езультате применения
аурангина резко у ск о р я ется, по сравнению с контролем,разрушение
контактов геп ато; 1л то в крысы при перфузии печени бескалышевым
раствором.
•а. Обнаружено, чте при перфузии печени крысы бескалыгиевк;.5 растворо.м разрушение контактов гепатоиитов сопровождается
рV1 з;жвом плазматических мембран вблизи плотных и щелевидных с о елшений.
1 0 .Применение
V^VО колхшшна щ^иводит к нарутиению
простых соединений; я соединений типз "зах-га" в контакте г е п а ^с итов крысн.
- 21 СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОЕАКНЫХ ПО 1ИТЕРЮГ1АМ ДЙССЕКГАда:
1. Ультраструкт^фа межклрточишс контактов ге п а т о ю т о в м етаыорфознруЕШХ личинок. Совереиенныв вопросы клинической и
теоретической ыедишны. Днепропетровск, 1 9 7 2 , 2 4 5 -2 4 6 ( в
соавтор стве с Л .Б.ГерС илвскиы ).
2 . Ультраструктурные изыеяения мегклеточных яоятактоЕ ге п а т о цитов К1 « с при действии аурантина. Гистологическая конфе ренция, посвященная 50-летию СССР, Ленинград, 1 9 7 2 ,1 4 -1 5
(в соавтор стве с В.И.Архипенко и Г .А .Ч у и ч ).
3 . Влияние тнреоадшд гормонов на мекклеточяьй кон такт. Архив
анатоиЕИ, гистологии к эмбриологии, 1 9 7 3 ,6 5 ,1 0 ,5 5 - 6 7 'в
соавтор стве с В.И.Архипенко, Л.В.Гербильским , В.М.Пинской,
Л.Я.Погореловой и Г .А .Ч у и ч ).
4 . Зависимость морфогенетических еффектов тиреоидных гормонов
от состояния ядро клетки . Тезисы симпозиума "Морфогенез и
ге н ет и к а ". Горький, 1 9 7 3 ,4 - 5 (в соавторстве, с В.И.Архипенко.
Л.В.Гербильокиы, В.М.Пинской, Л.Я.П огореловой, Г.А .П у тч ).
5 . Состояние клеточной поверхности щзи д е й с т и л гормонов. Т е­
зисы УШ Всесоюзного съ езд а ан атс«о в, ги стологов и эмбриоло­
г о в , Ташкент, 1 9 7 4 , 4 0 8 ( в соавтор стве с А.С.Корслеккс.
В.М.Ш шской, С.И.Пушкарь, В.Ф.Ушаковым).
?|4атерй&лы диссерта::А:.» л о .'С'<р н ы :
1 . На симпозиуме ВНОАГЭ "Клеточные мембраны". Днепропегро.^ск.
1972.
2 . На симпозиуме "Морфогенез и ге н ети к а ". Горький.1973.
Покпиеаво к аечатя 12.7.1975 года.* Захаа 145. Тираж адо.
Двепропмро аса Д евчевхо. 59.
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа