close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

uploaded 0C4FD9B10B

код для вставкиСкачать
На правах рукописи
Борзикова Наталья Сергеевна
ИЗУЧЕНИЕ МАРКЕРОВ ВОСПАЛЕНИЯ В РОТОВОЙ
ЖИДКОСТИ БОЛЬНЫХ ХРОНИЧЕСКИМ
ГЕНЕРАЛИЗОВАННЫМ ПАРОДОНТИТОМ
14.01.14 – Стоматология (мед. науки)
Автореферат
диссертации на соискание ученой степени
кандидата медицинских наук
Москва, 2015
Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего
профессионального образования «Московский государственный медико-стоматологический
университет имени А.И. Евдокимова» Министерства здравоохранения Российской Федерации
(ГБОУ ВПО МГМСУ им. А.И. Евдокимова Минздрава России).
Научные руководитель:
Заслуженный врач РФ, доктор медицинских наук, профессор Янушевич Олег Олегович.
Научный консультант:
Лауреат Государственной премии, член-корреспондент РАН, доктор медицинских наук,
профессор Кушлинский Николай Евгеньевич.
Официальные оппоненты:
Рабинович Илья Михайлович – Заслуженный врач РФ, доктор медицинских наук, профессор,
заведующий
отделом
терапевтической
стоматологии
ФГУ
«Центральный
научно-
исследовательский институт стоматологии и челюстно-лицевой хирургии Минздравасоцразвития
России»;
Трунин
Дмитрий Александрович - доктор
медицинский наук, профессор, директор
Стоматологического института Самарского Государственного Медицинского Университета, вицепрезидент стоматологической ассоциации России.
Ведущее учреждение:
ФГБОУ ДПО «Институт повышения квалификации Федерального медико-биологического
агентства России»
Защита состоится « 19 » января 2016 г. в 10 часов на заседании диссертационного совета
Д 208.041.03, созданного на базе ГБОУ ВПО МГМСУ имени А.И. Евдокимова Минздрава России
по адресу: 127006, Москва, ул. Долгоруковская д. 4.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Московского государственного медикостоматологического университета имени А.И. Евдокимова (127206, г. Москва, ул. Вучетича, д.
10а) и на сайте университета http://dissov.msmsu.ru.
Автореферат разослан _____ ________________2015г.
Ученый секретарь
диссертационного совета
доктор медицинских наук,
профессор
Гиоева Юлия Александровна
3
Общая характеристика работы
Актуальность проблемы
Среди важнейших проблем современной стоматологии воспалительные
заболевания пародонта занимают одно из ведущих мест. Пародонтит является одной
из причин разрушения соединительной ткани, резорбции кости и образования
пародонтальных карманов, что приводит к патологической подвижности и потери
зубов у взрослого населения.
Данные эпидемиологических исследований свидетельствует о неуклонном
росте
воспалительных
заболеваний
пародонта
у
молодых
людей.
Так,
сравнительный анализ состояния пародонта, проведенный при эпидемиологических
исследованиях в трех возрастных группах (20-29, 30-44 и старше 60 лет), показал,
что в возрасте от 29 до 44 лет только 4-5% людей имеют клинически здоровый
пародонт и поддерживают адекватную гигиену полости рта (Орехова Л.Ю., 2004).
Широкая распространенность данной патологии, прогрессирующее течение и
недостаточная эффективность лечебно-профилактических мероприятий выделяют
проблему лечения воспалительных заболеваний пародонта в одну из наиболее
актуальных и значимых как с медицинской, так и социальной точек зрения.
В связи с вышеуказанным изучение механизмов развития воспалительных
заболеваний пародонта, характера их клинического течения и прогноза считают
весьма актуальной проблемой. При этом, прогнозирование развития заболеваний
пародонта исключительно необходимо для ранней диагностики и возможного
предупреждения развития пародонтита. Традиционно диагностика заболеваний
пародонта основана на данных клинического (зондирование, измерение глубины
пародонтальных
карманов,
определение
степени
подвижности
зубов)
и
рентгенологического обследования, которые позволяют определить степень тяжести
уже развившегося заболевания. Но не всегда возможно определить, каким будет
клиническое
течение
болезни
–
длительным
хроническим
или
быстропрогрессирующим. Вместе с тем, возможность прогнозирования течения
заболевания позволит определить содержание и объем лечебных мероприятий, а
4
также предупредить обострения пародонтита. В связи с этим, необходим поиск
дополнительных диагностических критериев, которые представят информацию о
принадлежности пациента к той или иной группе риска, о характере течения
заболевания и об эффективности проводимого лечения.
Помимо факторов риска для оценки индивидуального прогноза необходимо
выявление
биохимических
маркеров,
степень
информативности
которых
характеризует воспалительный процесс в пародонте у конкретного больного. Эти
маркеры, с одной стороны, должны отражать специфические особенности индивида,
а с другой – служить прогностическими признаками развития возможной патологии
в будущем. Поиск прогностически значимых показателей клинического течения
воспалительных
заболеваний
пародонта
тесно
связан
с
ключевыми
провоспалительными биохимическими маркерами, по содержанию которых можно
судить об активности воспалительных деструктивных процессов в тканях пародонта
(Мухамеджанова Л.Р. и соавт., 2003). В связи с этим, особое внимание заслуживает
изучение состава слюны и десневой жидкости у больных хроническими
воспалительными заболеваниями пародонта (Слободина Е.В., 2008), при этом,
установлена важная роль про- и противовоспалительных цитокинов, факторов роста
и протеолитических ферментов в регуляции воспаления в пародонтальном
комплексе (Rawlinson, 2000; Kamma, 2004; Tervahartiala, 2001). В последнее
десятилетие
внимание
исследователей
привлекает
изучение
мультигенного
семейства матриксных металлопротеиназ (ММП), состоящего из более 30 цинкзависимых эндопептидаз, субстратами которых помимо большинства компонентов
внеклеточного матрикса (ВКМ) могут быть другие протеазы, хемотаксические
молекулы, латентные формы факторов роста, растворимые и мембранноассоциированные белки, связывающие факторы роста, цитокины, способные
разрушать ВКМ в тканях пародонта, поддерживая хронический воспалительный
процесс. Продемонстрировано значительное увеличение содержания ММП-1,
ММП-2, ММП-3, ММП-9 и активной формы ММП-9 в ротовой жидкости у
пациентов с воспалительными заболеваниями пародонта по сравнению со
здоровыми людьми с клинически интактным пародонтом (Séguier S. et al., 2001).
5
Имеются данные, указывающие на высокую информативность показателей ММП-8,
ИЛ-1β, содержащихся в слюне и коррелирующих с клиническими проявлениями
хронических воспалительных заболеваний пародонта (Craig S. Miller et al., 2006).
Сочетанное определение концентрации цитокинов и активности ММП в десневой
жидкости
позволяют
всесторонне
оценить,
как
степень
выраженности
патологических нарушений при наличии заболевания, так и положительные сдвиги
в процессе лечения (Патрушева М.С. и соавт., 2012). Однако, несмотря на
проводимые
исследования,
посвященные
этому
вопросу,
роль
ММП,
провоспалительных цитокинов (ИЛ-6, ИЛ-1β) и факторов воспаления (ФНО-α), а
также их взаимосвязь с клинико-морфологическими показателями в воспалительной
деструкции структур пародонта на сегодняшний день изучены недостаточно.
Вопросы взаимосвязи этих маркеров с особенностями клинического течения
воспалительного процесса и предрасположенностью к развитию пародонтита
требуют дальнейшего изучения в целях разработки новых методов диагностики и
поиска мишеней для эффективного лечения этой патологии.
Цель исследования
Выявить
корреляцию
экспозиции
маркеров
воспалительных
процессов
с
клинической картиной болезни пародонта.
Задачи исследования
1. Провести сравнительную оценку биохимических показателей у лиц с клинически
интактным пародонтом и у лиц с воспалительными заболеваниями пародонта с
помощью клинических, рентгенологических и лабораторных методов исследования.
2. Выявить взаимосвязь между возрастом и биохимическими показателями у лиц с
клинически интактным пародонтом и у лиц с воспалительными заболеваниями
пародонта на основе клинических, рентгенологических и лабораторных методов
исследования
3.
Изучить
экспрессию
металлопротеиназы-8,
металлопротеиназы-9,
металлопротеиназы-2, интерлейкина-1β, фактора некроза опухоли (ФНО-α) в
ротовой жидкости у лиц с клинически интактным пародонтом и у больных
пародонтитом.
6
4.
Изучить
взаимосвязь
между
экспрессией
металлопротеиназы-8,
металлопротеиназы-9, металлопротеиназы-2, интерлейкина-1β, фактора некроза
опухоли (ФНО-α) и тяжестью пародонтита.
Научная новизна исследования
Впервые
проведен
сравнительный
анализ
содержания
трех
ключевых
коллагеназ - ММП-2, ММП-8, ММП-9, а также провоспалительных цитокинов
ИЛ-1β и ФНО-α в ротовой жидкости здоровых людей с клинически интактным
пародонтом и больных хроническим генерализованным пародонтитом.
Выявлена тесная взаимосвязь между уровнями исследуемых биохимических
маркеров воспаления и основными клиническими симптомами и степенью тяжести
хронического генерализованного пародонтита, что является наглядным фактом
участия выше указанных протеиназ и цитокинов в патогенетических механизмах
воспалительного процесса при пародонтите.
Обнаружена достоверная положительная корреляционная связь уровней
ММП-2, ММП-8, ММП-9, ИЛ-1β и ФНО-α в ротовой жидкости с возрастом больных
хроническим генерализованным пародонтитом.
Установлено, что уровни ММП-2, ММП-8, ММП-9, ИЛ-1β, ФНО-α в ротовой
жидкости больных хроническим генерализованным пародонтитом не имеют
гендерных различий.
Теоретическая и практическая значимость
В результате проведенного исследования впервые получены данные,
позволяющие охарактеризовать взаимосвязь таких маркеров воспаления, как
ММП-2,
ММП-8,
ММП-9,
ИЛ-1β,
ФНО-α,
и
основными
клиническими
проявлениями заболеваний пародонта.
Определена взаимосвязь между ММП-2, ММП-8 и ММП-9 и степенью
тяжести пародонтита, степенью кровоточивости десны и глубиной пародонтальных
карманов.
Клинико-лабораторное обоснование взаимосвязи между ММП-2, ММП-8 и
ММП-9 и степенью тяжести пародонтита, степенью кровоточивости десны и
глубиной пародонтальных карманов позволит повысить эффективность ранней
7
диагностики воспалительных заболеваний пародонта путем определения наиболее
информативных клинико-лабораторных показателей для своевременной коррекции
лечения.
Методология и методы исследования
Выполненная
работа
является
комплексным
клинико-лабораторным
исследованием, связанным с изучением содержания уровней биохимических
маркеров воспалительных процессов в ротовой жидкости у больных хроническим
генерализованным пародонтитом и их роли в прогрессировании заболевания. Для
решения
поставленных
задач
проведена
совокупность
клинических
и
биохимических лабораторных методов исследования: анкетирование, осмотр,
измерение
глубины
пародонтальных
карманов,
определение
степени
кровоточивости десневой борозды при помощи индекса SBI, определение уровня
гигиены полости рта с помощью упрощенного индекса гигиены полости рта по
Грин-Вермиллиону,
определение
биохимических
показателей
в
образцах
нестимулированной ротовой жидкости.
Положения, выносимые на защиту
1. Содержание ММП-2, ММП-8, ММП-9, ИЛ-1β в ротовой жидкости не
связано с полом, но связано с возрастом обследованных лиц.
2. Содержание ММП-2, ММП-8, ММП-9 в ротовой жидкости достоверно выше
у лиц с хроническим генерализованным пародонтитом, чем у лиц с клинически
интактным пародонтом.
3. Содержание ММП-2, ММП-8, ММП-9, ИЛ-1β, ФНО-α достоверно связаны
со степенью тяжести пародонтита, глубиной пародонтальных карманов и степенью
кровоточивости десны.
4. Стадию пародонтита (обострение, ремиссия) не отражает ни один из
исследуемых показателей.
Личный вклад автора в получении научных результатов
Автором сделан аналитический обзор отечественной и зарубежной литературы
по изучаемой проблеме, лично обследовано и проанализировано 79 пациентов (из
них 69 человек больных хроническим генерализованным пародонтитом и 10
8
практически
здоровых
людей
с
клинически
интактным
пародонтом),
самостоятельно проведена статистическая обработка полученных во время
исследований биохимических данных, на основании которых сделаны выводы и
практические рекомендации, написана и оформлена диссертационная работа,
опубликованы статьи по теме диссертации.
Внедрение результатов исследования
Результаты диссертационной работы внедрены в учебный процесс и научноисследовательскую
деятельность
кафедры
пародонтологии
ГБОУ
ВПО
«Московский Государственный медико-стоматологический Университет им. А.И.
Евдокимова» Минздрава России и кафедры клинической биохимии и лабораторной
диагностики
ФДПО
ГБОУ
ВПО
«Московский
Государственный
медико-
стоматологический Университет им. А.И. Евдокимова» Минздрава России.
Апробация диссертации
Результаты работы доложены на заседании кафедры пародонтологии ГБОУ
ВПО «Московский Государственный медико-стоматологический Университет им.
А.И. Евдокимова» Минздрава России 24 апреля 2015 года.
Объем и структура диссертации
Диссертация изложена на 127 страницах машинописи, состоит из введения,
четырех глав: обзора литературы, материалов и методов исследований, результатов
собственных
исследований,
обсуждения
результатов,
а
также
выводов,
практических рекомендаций и списка литературы. Работа иллюстрирована 60
таблицами, 33 рисунками и диаграммами. Указатель литературы содержит 101
источник в том числе 40 отечественных и 61 иностранный.
9
ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ
Материалы и методы исследования
В исследование включили 69 больных хроническим генерализованным
пародонтитом в возрасте от 27 до 54 лет, которые составили основную группу.
Контрольную группу составили 10 практически здоровых людей с клинически
интактным пародонтом в возрасте от 27 до 44 лет.
Подбор пациентов проходил по определенным критериям: во-первых,
обязательным условием для основной группы было наличие в анамнезе
хронического генерализованного пародонтита; во-вторых, отсутствие системных
хронических заболеваний. Противопоказанием для включения в исследование было
наличие в анамнезе состояний, требующих регулярного профилактического
введения антибактериальных препаратов, а также антибактериальная терапия в
течение последних 6 месяцев; прием медикаментов, оказывающих влияние на
иммунный статус пациента; беременность или лактация.
Постановка диагноза базировалась на данных, полученных из жалоб пациента,
анамнеза его жизни, анамнеза настоящего заболевания, а также данных
объективного обследования (основных и дополнительных методов). Особое
внимание уделяли измерению таких клинических параметров как глубина
пародонтальных карманов, кровоточивость десны при зондировании, уровень
гигиены полости рта.
Глубину пародонтальных карманов измеряли с помощью пародонтального
зонда в 6 точках вокруг каждого зуба, фиксируя наибольшую ее величину. На
основании результатов зондирования пациентов разделили на три группы: глубина
пародонтального кармана (ПК) ≤3мм, глубина ПК = 4-5мм, глубина ПК ≥6 мм.
Кровоточивость десны выявляли по результатам анкетирования исследуемых
пациентов, где они отмечали наличие самопроизвольной или появляющейся во
время чистки зубов и приема пищи кровоточивости десны в настоящий период
времени или в прошлом. Клинически кровоточивость десны определяли при
зондировании. Пародонтальным зондом проводили вертикальное зондирование
десневой борозды и через 30 секунд определяли степень ее кровоточивости. Степень
10
кровоточивости десневой борозды дифференцировали при помощи индекса
кровоточивости десневой борозды (SBI) по Мюлеманну и Сону (1971).
Уровень гигиены полости рта определяли с помощью упрощенного индекса
гигиены полости рта по Грину-Вермиллиону (УИГР, OHI-S) (Green et al., 1964).
Для определения наличия, характера, степени и распространенности
патологических изменений в костной ткани челюстей использовали вне- и
внутриротовую рентгенографию.
Результаты
осмотра
и
всех
проведенных
клинических
исследований
пародонта регистрировали в упрощенной графической форме - пародонтограмме.
Окончательный диагноз устанавливали в соответствии с действующей
классификацией заболеваний пародонта, принятой XVI-м Пленумом правления
Всесоюзного
научного
общества
стоматологов
(1983г.)
и
дополненной
Президиумом секции пародонтологии Академии стоматологии (2001г.).
Для проведения биохимических исследований у обследованных пациентов
утром натощак собирали нестимулированную ротовую жидкость, в которой
определяли содержание маркеров: ММП-2, ММП-8, ММП-9, ИЛ-1β, ФНО-α.
Таблица 1
Наборы реактивов для иммуноферментного анализа, использованные в работе
Показатель
Название набора
Матриксная
металлопротеиназа 2
(ММП-2)
Матриксная
металлопротеиназа 8
(ММП-8)
Матриксная
металлопротеиназа 9
(ММП-9)
Интерлейкин-1β
(ИЛ-1β)
Фактор некроза опухолиальфа
(ФНО-α)
Quantikine®,
«Human/Mouse/Rat ММП2 (total) ELISA»
Quantikine®, «Human
ММП-8 (total) ELISA»
Фирма и страна
производитель
R&D systems,
США
R&D systems,
США
Quantikine®, «Human
ММП-9 (total) ELISA»
R&D systems,
США
«Human IL-1β Platinum
ELISA»
«Human TNF-α (total)
Platinum ELISA»
eBioscience,
Австрия
eBioscience,
Австрия
11
Все использованные наборы реактивов представляют собой классические
тест-системы «сэндвичевого» типа для прямого иммуноферментного определения
концентрации ММП-2, ММП-8, ММП-9, ИЛ-1β, ФНО-α (табл. 1). Измерения
проводили на автоматическом универсальном ридере для микропланшет ELX800
(Bio-Tek Instruments, Inc., США). Обработку результатов измерений выполняли по
формуле: Y = a + bX + cX2, где X - концентрация анализируемого белка (нг/мл –
для ММП-2, ММП-8, ММП-9; пг/мл – для ИЛ-1β, ФНО-α), а Y - оптическая
плотность.
Поскольку в большинстве случаев распределение исследованных показателей
отличалось
от
нормального,
в
статистическом
анализе
использовали
непараметрические критерии: Манна-Уитни при сравнении двух независимых
подгрупп, медианный тест или тест Краскелла-Уоллиса при сравнении нескольких
подгрупп (оценка роли признака в целом), тест корреляции рангов Спирмена (R) при
анализе взаимосвязей между различными показателями. Также использовали
регрессионную многофакторную модель Кокса. Статистическую обработку данных
осуществляли с помощью программного пакета «Statistica 7.0» (StatSoft Inc).
Результаты исследования и их обсуждение
В настоящем исследовании предпринята попытка выявить взаимосвязь
содержания ММП-2, ММП-8, ММП-9, ИЛ-1β и ФНО-α в нестимулированной
ротовой жидкости с основными клиническими симптомами и степенью тяжести
хронического генерализованного пародонтита.
Показано, что содержание ММП-2 и ММП-9 в ротовой жидкости 69 больных
хроническим генерализованным пародонтитом достоверно выше, чем у 10 людей с
клинически интактным пародонтом (табл. 2). При этом в ротовой жидкости
большинства представителей группы контроля (70%) ММП-2 не обнаружен, тогда
как у больных пародонтитом ММП-2 не был выявлен только в 17,4% (р=0,003).
Медианы ММП-2 составили 4,3 и 0 нг/мл соответственно (р=0,012). Содержание
ММП-8 в ротовой жидкости больных и в контроле достоверно не различалось.
Медианы ММП-8 составили 446 и 211 нг/мл соответственно (р=0,14), а ММП-9 693 и 303 нг/мл соответственно (р=0,049) (табл. 2).
12
Таблица 2.
Содержание ММП-2, ММП-8, ММП-9 в ротовой жидкости больных
хроническим генерализованным пародонтитом и контрольной группе
Группы
Медиана
Контрольная1
0
2
Основная
4,3
Mann-Whitney U Test р=0,012
Контрольная
211
Основная
446
Mann-Whitney U Test р=0,14
Контрольная
303
Основная
693
Mann-Whitney U Test р=0,049
Квартили
ММП-2, нг/мл
0-1,5
0,9-9,3
Пределы
0-36,8
0-51,7
ММП-8, нг/мл
158-316
129-1216
104-469
20-6461
ММП-9, нг/мл
272-495
280-693
135-628
12-3772
Содержание исследуемых маркеров в ротовой жидкости не было связано с
полом больных, однако обнаружена взаимосвязь между уровнем изученных
маркеров и возрастом обследованных пациентов. В контрольной группе выявлена
достоверная обратная корреляционная зависимость между уровнями ФНО-α в
ротовой жидкости и возрастом обследованных (р=0,024). У здоровых людей с
клинически интактным пародонтом более старшему возрасту соответствовали
меньшие значения ФНО-α в ротовой жидкости, тогда как у больных хроническим
генерализованным пародонтитом такая зависимость отсутствовала.
С увеличением возраста больных отмечено повышение содержания ММП-2 в
ротовой жидкости. Медиана ММП-2 была достоверно выше в группе больных
старше 40 лет и составила 7,3 против 2,5 нг/мл у больных в возрасте до 40 лет
(р=0,003). Число пациентов с нулевым уровнем ММП-2 в ротовой жидкости было
ниже в группе больных до 30 лет, чем у больных старше 50 лет (25% и 11,1%
соответственно; различие не достигает уровня статистической значимости).
В группе больных хроническим генерализованным пародонтитом обнаружена
достоверная прямая корреляционная зависимость между показателями ММП-8 и
13
возрастом (rs=0,45; p=0,015). Стало быть, высокие уровни ММП-8 в ротовой
жидкости чаще выявляли у пациентов старшего возраста. Обнаружена также
выраженная тенденция к большему содержанию ММП-9 в ротовой жидкости
больных старше 40 лет. В ротовой жидкости обследованных в возрасте старше 40
лет различия медиан ММП-9 в группе контроля и у больных пародонтитом были
более выраженными (272 и 1037 нг/мл). Выявлена также тенденция к большему
содержанию ИЛ-1β в ротовой жидкости больных старше 40 лет (382 пг/мл против
266 пг/мл у больных моложе 40 лет, р=0,07).
Стадию заболевания (обострение, ремиссия) достоверно не отражал ни один
из исследуемых биохимических показателей. Содержание ИЛ-1β в стадии ремиссии
было недостоверно ниже, чем в стадии обострения: медианы содержания ИЛ-1β в
ротовой жидкости составили 309 и 352 пг/мл соответственно (р=0,5). Слабо
отражало стадию заболевания и содержание ММП-9 (737 нг/мл в стадии обострения
и 693 нг/мл в стадии ремиссии, р>0,05).
Проведенное исследование показало, что содержание всех исследуемых
маркеров (ММП-2, ММП-8, ММП-9, ИЛ-1β и ФНО-α) в ротовой жидкости
достоверно связано со степенью тяжести пародонтита. Так, медиана содержания
ФНО-α в ротовой жидкости больных при легкой степени тяжести хронического
генерализованного пародонтита достоверно ниже, чем при высокой степени тяжести
– 44,7 пг/мл, 87,7 пг/мл и 82,6 пг/мл соответственно (р=0,02) (табл. 3). Наименьшая
медиана
уровня
маркера
выявлена
в
группе
больных
хроническим
генерализованным пародонтитом легкой степени тяжести в стадии ремиссии –
медиана 39,0 пг/мл.
14
Таблица 3.
Содержание ФНО-α в ротовой жидкости больных хроническим
генерализованным пародонтитом с учетом степени тяжести процесса
Степень
пародонтита
Легкая1
N
ФНО-α, пг/мл
Медиана
Квартили
44,7
19,9-97,6
29
Средняя2
25
87,7
38,3-140
17,1-1612
Тяжелая3
15
82,6
37,2-209
5,7-785
Пределы
0-396
LSD Test (log ТНФ) p1vs2=0,027; p1vs3=0,09
Медиана содержания ММП-2 в ротовой жидкости больных с тяжелой
степенью выраженности пародонтита была наиболее высокой – 14,4 нг/мл, при этом
частота нулевых значений была минимальной и составила 6,7% (табл. 4).
Наименьшая медиана содержания ММП-2 в ротовой жидкости выявлена в группе
больных с легкой степенью тяжести пародонтита в стадии ремиссии – 2,7 нг/мл.
Таблица 4.
Содержание ММП-2 в ротовой жидкости больных хроническим
генерализованным пародонтитом с учетом степени тяжести процесса
Степень
пародонтита
Легкая1
N
ММП-2, нг/мл
Медиана
Квартили
3,0
0,9-5,2
29
Не выявлена
4 (13,8%)
Средняя2
25
7 (28,0%)
2,5
0-6,7
0-19,5
Тяжелая3
15
1 (6,7%)
14,4
5,2-26,7
0-51,7
Пределы
0-18,0
Kruskal-Wallis ANOVA by Ranks p1vs2,3=0,002
Продемонстрирована достоверная связь уровней ММП-8 с тяжестью
пародонтита (табл. 5). Так, при легкой степени тяжести пародонтита медиана
содержания ММП-8 в ротовой жидкости составила 325 нг/мл, при средней – 367
нг/мл и при тяжелой – 1256 нг/мл (р=0,005). Наименьшие уровни ММП-8 выявлены
у больных в возрасте до 40 лет с легкой степенью тяжести пародонтита – 225 нг/мл,
15
а наибольшие – у больных с тяжелой степенью пародонтита в возрасте старше 40
лет – 3498 нг/мл, что свидетельствует о взаимосвязи уровней ММП-8 с тяжестью
пародонтита и возрастом пациентов.
Таблица 5.
Содержание ММП-8 в ротовой жидкости больных хроническим
генерализованным пародонтитом с учетом степени тяжести процесса
Степень
пародонтита
Легкая1
N
29
Медиана
325
ММП-8, пг/мл
Квартили
169-1083
Пределы
51-3888
Средняя2
25
367
84-1029
20-6461
Тяжелая3
15
1256
372-5225
55-6087
Kruskal-Wallis ANOVA by Ranks p1vs3=0,013; p2vs3=0,004
Медиана содержания ММП-9 в ротовой жидкости больных с легкой степенью
тяжести пародонтита была достоверно ниже, чем при тяжелой степени (539 и 1629
нг/мл соответственно; р=0,032) (табл. 6).
Таблица 6.
Содержание ММП-9 в ротовой жидкости больных хроническим
генерализованным пародонтитом с учетом степени тяжести процесса
Степень
пародонтита
Легкая1
N
29
Медиана
539
ММП-9, пг/мл
Квартили
299-1184
Пределы
14-3051
Средняя2
25
693
234-1303
12-2214
Тяжелая3
15
1629
446-3036
28-3772
Kruskal-Wallis ANOVA by Ranks p1vs3=0,032
Уровень ММП-9, также как и уровень ММП-2 был связан и с тяжестью
заболевания и с возрастом больных пародонтитом. Так, наименьшие уровни ММП-9
выявлены у больных моложе 40 лет с легкой степенью тяжести пародонтита, а
наибольшие - у больных с тяжелой степенью выраженности процесса в возрасте
старше 40 лет (417 и 1906 нг/мл соответственно).
16
Содержание ИЛ-1β в ротовой жидкости также повышалось при увеличении
степени тяжести пародонтита - с 290 пг/мл при легкой степени тяжести до 313 пг/мл
при средней и до 397 пг/мл при тяжелой степени (р=0,01) (табл. 7). Наименьшая
медиана содержания ИЛ-1β выявлена в группе больных с легкой степенью тяжести
пародонтита в стадии ремиссии - 283 пг/мл.
Таблица 7.
Содержание ИЛ-1β в ротовой жидкости больных хроническим
генерализованным пародонтитом с учетом степени тяжести процесса
Степень
пародонтита
Легкая1
N
29
Медиана
290
ИЛ-1β, пг/мл
Квартили
192-376
Пределы
8,5-402
Средняя2
25
313
61,2-382
4,6-402
Тяжелая3
15
397
308-402
37,8-409
Kruskal-Wallis ANOVA by Ranks p1vs3=0,006; p2vs3=0,01
Дальнейший сравнительный анализ взаимосвязи исследуемых факторов
воспаления с основными клиническими проявлениями пародонтита, показал, что все
исследуемые
биохимические
маркеры
достоверно
связаны
с
глубиной
пародонтальных карманов. Их медианы достоверно повышались при увеличении
глубины
пародонтальных
карманов.
Так,
содержание
ФНО-α
достоверно
повышалось пропорционально увеличению глубины пародонтальных карманов с
42,4 нг/мл при глубине менее 3 мм до 82,6 нг/мл при глубине 6 мм и более (р=0,046).
Нами также обнаружено, что показатели ММП-2 в ротовой жидкости и
глубина пародонтальных карманов были связаны достоверной корреляционной
зависимостью (rs=0,58; p=0,0001). Достоверное повышение ММП-2 выявлено при
увеличении глубины пародонтальных карманов с 1,9 нг/мл при глубине менее 3 мм
до 13,1 нг/мл при глубине от 6 мм и более (р=0,0003). При этом частота выявления
нулевых значений ММП-2 снижалась с 29% до 0%. Следует отметить, что
концентрация ММП-8 в ротовой жидкости больных пародонтитом также была
достоверно связана с глубиной пародонтальных карманов (медианы равнялись 170
17
нг/мл – при глубине менее 3 мм, 532 нг/мл – при глубине 4-5 мм, 1256 нг/мл – при
глубине 6 мм и более; р=0,005). Отмечено также достоверное повышение ММП-9 в
ротовой жидкости при увеличении глубины пародонтальных карманов с 383 нг/мл
при глубине менее 3 мм до 1303 нг/мл при глубине от 6 мм и более (р=0,017).
Обнаружено, что концентрация ИЛ-1β в ротовой жидкости также была достоверно
связана с глубиной пародонтальных карманов. Его медиана составила 202 пг/мл –
при глубине менее 3 мм, 311 пг/мл – при глубине 4-5 мм, 395 пг/мл - при глубине 6
мм и более (р=0,0008).
При анализе взаимосвязи между изучаемыми биохимическими показателями и
степенью кровоточивости десны у больных пародонтитом нами установлена
зависимость.
Так,
содержание
повышалось
пропорционально
ММП-2,
ММП-8,
увеличению
степени
ММП-9,
ИЛ-1β,
ФНО-α
кровоточивости
десны.
Медиана содержания ФНО-α в ротовой жидкости больных пародонтитом
увеличивалась пропорционально степени кровоточивости десны с 37,4 пг/мл при
отсутствии кровоточивости десны до 77,5 пг/мл при кровоточивости во время еды
или спонтанной (р-=0,07). В общей группе больных хроническим генерализованным
пародонтитом корреляционная зависимость между уровнями ММП-2 в ротовой
жидкости и степенью кровоточивости десны была достоверной (rs=0,34; р=0,004).
Причем эта зависимость прослеживалась как в стадии ремиссии, так и в стадии
обострения воспалительного процесса.
Содержание ММП-2 достоверно повышалось при увеличении степени
кровоточивости с 1,3 нг/мл при отсутствии кровоточивости до 5,9 нг/мл при
кровоточивости во время еды и спонтанной (табл. 8). Выявлено, что частота
нулевых значений этого маркера снижалась пропорционально увеличению их
степени кровоточивости с 50% до 0%. Нами обнаружено, что в общей группе
больных пародонтитом корреляционная зависимость между показателями ММП-8 и
степенью кровоточивости десны была достоверной (rs=0,36; p=0,02). Содержание
ММП-8 достоверно повышалось при увеличении степени кровоточивости десны с
302 нг/мл при отсутствии кровоточивости до 775 нг/мл при кровоточивости во
время еды и спонтанной (р=0,002).
18
Таблица 8.
Содержание ММП-2 в ротовой жидкости больных хроническим
генерализованным пародонтитом с учетом степени кровоточивости десны
Степень
кровоточивости
десны
0
N
8
4 (50,0%)
1,3
0-5,3
0-10,6
1
12
4 (33,3%)
0,7
0-6,0
0-51,5
2
38
4 (10,5%)
4,6
1,9-9,6
0-51,7
3
11
0 (0%)
5,9
1,7-15
1-27,9
Не выявлена
ММП-2, нг/мл
Медиана
Квартили
Пределы
Kruskal-Wallis ANOVA by Ranks p1vs2=0,08; p1vs3=0,036
Корреляционная зависимость между уровнями ММП-8 в ротовой жидкости и
степенью кровоточивости десны была тесно выражена при обострении процесса
(rs=0,61; p=0,0006).
Таблица 9.
Содержание ММП-9 в ротовой жидкости больных хроническим
генерализованным пародонтитом с учетом степени кровоточивости десны
Степень
кровоточивости
десны
0
N
Медиана
ММП-9, пг/мл
Квартили
Пределы
8
560
455-1215
299-1784
1
12
337
39-1072
12-1872
2
38
689
190-1655
14-3772
3
11
1420
1260-1918
446-3532
Kruskal-Wallis ANOVA by Ranks p0vs3=0,03; p2vs3=0,003
Содержание ММП-9 достоверно повышалось при увеличении степени
кровоточивости десны с 560 нг/мл при отсутствии кровоточивости до 1420 нг/мл
при кровоточивости во время еды и спонтанной (табл. 9). В общей группе больных
хроническим генерализованным пародонтитом корреляционная зависимость между
показателями ММП-9 в ротовой жидкости и степенью кровоточивости десны была
19
достоверной в стадии ремиссии процесса (rs=0,3; p=0,01), а в стадии обострения
усиливалась до значения rs=0,62; p=0,0004. Содержание ИЛ-1β в ротовой жидкости
было достоверно ниже при отсутствии кровоточивости десны, но в общей группе
больных пародонтитом корреляционная зависимость между содержанием ИЛ-1β в
ротовой жидкости и степенью кровоточивости десны была слабой, как у больных в
стадии ремиссии (rs=0,3; p=0,01), так и у пациентов в стадии обострения (rs=0,4;
p=0,03).
Сопоставляя уровни исследуемых биохимических маркеров и значения
индекса кровоточивости десневой борозды SBI, достоверных закономерностей мы
не выявили. Так, медиана ФНО-α недостоверно увеличивалась при повышении
индекса SBI и достигала наибольшего значения (95,1 пг/мл) при SBI равном 5.
Содержание ММП-2 было заметно выше у больных хроническим генерализованным
пародонтитом при индексе SBI равном 5 (медиана 11,1 нг/мл), нулевые уровни
маркера при SBI равном 4-5 не обнаружены. Однако, в целом содержание ММП-2 в
ротовой жидкости слабо отражало индекс SBI, корреляционная связь между ними
отсутствовала. Содержание ММП-8 также было заметно выше при значении
индекса SBI равном 5 (2206 нг/мл). Но, несмотря на это, корреляционная связь
между концентрацией ММП-8 в ротовой жидкости больных и индексом SBI
отсутствовала. Следовательно, содержание ММП-8 слабо отражает индекс SBI.
Уровень ММП-9 также слабо отражал индекс SBI. Содержание ММП-9 в ротовой
жидкости было заметно выше при показателе индекса равном 5 (1595 нг/мл), но при
этом отсутствовала корреляционная зависимость между уровнями ММП-9 и
значениями индекса SBI.
Анализируя содержание ИЛ-1β, мы выявили корреляционную связь между
уровнем этого цитокина и показателями индекса SBI. Она была достоверной и
положительной в стадии обострения (rs=0,47; p=0,01), но отсутствовала в стадии
ремиссии (r=0,19). Уровни ИЛ-1β в ротовой жидкости были достоверно выше при
индексе SBI равном 5 (396 пг/мл) по сравнению с показателем индекса SBI равном 0
(152 пг/мл; р=0,01).
20
Таблица 10.
Содержание ММП-8 в ротовой жидкости больных хроническим
генерализованным пародонтитом с учетом показателя индекса OHI-S
Показатель
OHI-S
1
N
20
Медиана
303
ММП-8, нг/мл
Квартили
91,5-1105
Пределы
33-5225
2
30
294
114-854
30-6461
3
11
885
239-1946
20-5664
4
8
1256
617-3074
372-5120
Kruskal-Wallis ANOVA by Ranks p2vs4=0,009; p1vs4=0,037
При сравнительном анализе содержания исследуемых маркеров и значений
индекса OHI-S выявили, что только уровни ММП-8 и ММП-9 достоверно связаны с
индексом OHI-S. Медианы ММП-8 составили 303, 294, 885 и 1256 нг/мл
соответственно при низком, среднем, высоком и очень высоком значении индекса
OHI-S (р=0,045) (табл. 10). Отметим, что повышение как медиан, так и нижнего и
верхнего квартилей содержания ММП-8 пропорционально индексу OHI-S.
Таблица 11.
Содержание ММП-9 в ротовой жидкости больных хроническим
генерализованным пародонтитом с учетом показателя индекса OHI-S
Показатель
OHI-S
1
N
20
Медиана
596
ММП-9, пг/мл
Квартили
267-1240
Пределы
12-3051
2
30
553
157-1629
14-3772
3
11
1036
280-1917
185-2217
4
6
1340
828-2427
446-3532
Kruskal-Wallis ANOVA by Ranks p1vs4=0,037; p2vs4=0,06
Также выявлено повышение уровней ММП-9 в ротовой жидкости при
увеличении индекса OHI-S с 596 нг/мл при низком значении индекса OHI-S до 1340
нг/мл при очень высоком значении индекса OHI-S (р=0,037) (табл. 11).
21
Корреляционная взаимосвязь между уровнями ФНО-α в ротовой жидкости и
индексом OHI-S у больных хроническим генерализованным пародонтитом
отсутствовала. Таким образом, показатель ФНО-α в ротовой жидкости слабо
отражал индекс OHI-S.
Обнаружена тенденция к снижению частоты выявления нулевых уровней
ММП-2 в ротовой жидкости больных пародонтитом при увеличении индекса OHI-S
с 35% при низком до 0% при очень высоком значении индекса OHI-S (р=0,07). При
этом медиана уровня маркера увеличивались недостоверно. Также не было
обнаружено достоверной связи уровней ИЛ-1β в ротовой жидкости со значениями
индекса OHI-S. Корреляционная связь между уровнями ИЛ-1β в ротовой жидкости и
показателями индекса OHI-S была слабо положительной, но достоверной (rs=0,29;
p=0,013).
Проводя
корреляционный
анализ
взаимосвязей
между
содержанием
различных исследованных маркеровв ротовой жидкости у больных хроническим
генерализованным пародонтитом и у людей с интактным пародонтом, мы выявили
определенные корреляционные зависимости, причем структура взаимосвязей между
показателями в контрольной группе и основной группе различалась незначительно.
Наиболее тесными были взаимосвязи между показателями ФНО-α и ММП-9, а
также между уровнями ИЛ-1β и ММП-8. Динамика вышеуказанных взаимосвязей не
изменялась значимо по мере усиления тяжести заболевания и при различных
стадиях хронического генерализованного пародонтита.
Заключение
Результаты иммуноферментного исследования содержания ММП-2, ММП-8,
ММП-9,
ИЛ-1β
и
ФНО-α
в
ротовой
жидкости
больных
хроническим
генерализованным пародонтитом и здоровых людей с клинически интактным
пародонтом свидетельствуют о тесной связи исследованных биохимических
маркеров
воспаления
с
развитием
данного
патологического
процесса.
Продемонстрировано достоверное повышение уровней ММП-2 и ММП-9, которые
играют важную роль в деструкции матрикса, с увеличением тяжести процесса. Это
может иметь не только научную, но и практическую значимость, поскольку в
22
последнее время стали появляться «таргетные» препараты, целенаправленно
подавляющие активность этих протеиназ, что может иметь перспективу для
целенаправленной таргетной терапии воспалительных заболеваний пародонта.
Выводы
1.
Исследуемые показатели иммунновоспалительного ответа (ФНО-α,
ММП-2, ММП-8, ММП-9, ИЛ-1β) не имеют гендерных различий и достоверно не
отражают стадию пародонтита (обострение, ремиссия). Только содержание ИЛ-1β в
стадии ремиссии было недостоверно ниже, чем в стадии обострения (медианы 309 и
352пг/мл соответственно).
2.
Установлена взаимосвязь между возрастом пациентов и такими
показателями, как ММП-2, ММП-9 и ИЛ-1β. Их содержание достоверно выше у
больных старше 40 лет (7,3 нг/мл против 2,5 нг/мл, 1037 нг/мл против 539 нг/мл, 382
пг/мл против 266 пг/мл соответственно). Сильная тенденция к большему
содержанию этих показателей у обследуемых старше 40 лет также выявлена и в
группе сравнения.
3.
Содержание ММП-2, ММП-8 и ММП-9 в ротовой жидкости достоверно
выше в группе больных хроническим генерализованным пародонтитом (медианы
4,3 нг/мл, 446 нг/мл, 693 нг/мл, соответственно) по сравнению с группой сравнения
(медианы 0 нг/мл, 211 нг/мл, 303 нг/мл, соответственно).
4.
Содержание в ротовой жидкости всех исследуемых показателей (ФНО-
α, ММП-2, ММП-8, ММП-9, ИЛ-1β) достоверно связано со степенью тяжести
пародонтита, глубиной пародонтальных карманов и степенью кровоточивости
десны. Показатели достоверно повышались с увеличением степени тяжести
заболевания (легкая, средняя, тяжелая: 44,6 пг/мл, 82,6 пг/мл, 87,7 пг/мл; 2,7 нг/мл, 3
нг/мл, 14,4 нг/мл; 325 нг/мл, 367 нг/мл, 1256 нг/мл; 539 нг/мл, 693 нг/мл, 1629 нг/мл;
290 пг/мл, 313 пг/мл, 397 пг/мл, соответственно) и повышались пропорционально
увеличению
степени
кровоточивости.
Особенно
сильная
корреляционная
зависимость выявлена у больных в стадии обострения между ММП-9, ММП-8 и
степенью кровоточивости. Медианы всех показателей достоверно повышались при
увеличении глубины пародонтальных карманов.
23
5.
Содержание ММП-8 и ММП-9 достоверно связано с индексом OHI-S.
Выявлено повышение уровней содержания показателей в ротовой жидкости: для
ММП-8 с 303 нг/мл при низком значении индекса OHI-S до 1256 нг/мл при очень
высоком и для ММП-9 с 596 нг/мл до 1340 нг/мл соответственно.
Практические рекомендации
1. Показатели ММП-2, ММП-8 и ММП-9 можно использовать в практической
стоматологии в качестве дополнительного параметра оценки эффективности
проводимого лечения хронического генерализованного пародонтита. Концентрация
ММП-8 и ММП-9 в ротовой жидкости достоверно различалась в контроле и у
больных хроническим генерализованным пародонтитом, отражала основной фактор
заболевания – тяжесть патологического процесса, степень кровоточивости десны,
глубину пародонтальных карманов и показатели индекса OHI-S. К недостаткам
ММП-8 и ММП-9 следует отнести слабую связь со стадией заболевания и более
высокое содержание у больных пожилого возраста. К недостаткам ММП-2, ММП-8
и ММП-9 следует отнести слабую связь со стадией заболевания и более высокое
содержание у больных пожилого возраста.
2. Значения ММП-2 в ротовой жидкости от 0 нг/мл до 5 нг/мл и, особенно,
нулевые его значения, следует считать благоприятными.
Список опубликованных работ по теме диссертации
По материалам диссертации опубликовано 4 научные работы, из них 3 работы в
изданиях, рекомендованных ВАК Минобрнауки РФ:
1.
Янушевич
металлопротеиназы
О.О.,
Почтаренко
и пародонтит:
В.А.,
Борзикова
Н.С.
состояние проблемы и
Матриксные
перспективы //
Клиническая стоматология. – 2011. – № 3. – С. 80-82.
2.
Янушевич
О.О.,
Почтаренко
В.А,
Борзикова
Н.С.
Матриксные
металлопротеиназы-новый взгляд на этиологию и лечение заболеваний пародонта //
актуальные
проблемы
стоматологии.
Материалы
всероссийской
научно-
практической конференции, посвященной 100-летию со дня рождения профессора
Е.Е.Платонова и 85-летию со дня рождения профессора Т.И.Лемецкой. – М., 2011. –
С.184-186.
24
3. Борзикова Н.С. Анализ содержания маркеров воспаления в ротовой
жидкости больных хроническим генерализованным пародонтитом // Российская
стоматология. – 2014. - №2. – С. 57-59.
4. Борзикова Н.С. Маркеры воспалительных процессов при болезнях пародонта
// Медицинский совет. – 2015. - №2. – С. 78-79.
ɉɨɞɩɢɫɚɧɨɜɩɟɱɚɬɶ
ɌɢɪɚɠɷɤɡɁɚɤɚɡʋ
ɈɬɩɟɱɚɬɚɧɨɜɊɂɈɆȽɆɋɍ
ɝɆɨɫɤɜɚɭɥȾɟɥɟɝɚɬɫɤɚɹɞɫɬɪ
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
1
Размер файла
253 Кб
Теги
0c4fd9b10b, uploaded
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа