close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Стратегия методических подходов в производстве судебно-медицинских молекулярно-генетических экспертиз.

код для вставкиСкачать
22
ОИМ – 5 (31,3%), с прогрессирующей стенокардией – 11
(68,7%); 54 неврологических пациента (8,8%), из них ИИ –
37 человек (68,5%), ПНМК – 13 (24,1%), ГИ – 4 (7,4%).
Для качественного статистического учета больных,
перенесших острое нарушение мозгового кровообращения и острый инфаркт миокарда, созданы и ведутся
электронные регистры.
Заключение: Создание первичных сосудистых отделений несомненно является актуальным и перспективным направлением на данном этапе развития оказания
помощи пациентам с сосудистой патологией. ПСЦ на базе
МУЗ МСЧ «Ижмаш» это новое подразделение в структуре
больницы, но активно развивающееся. Развитие преемственности с региональными сосудистыми центрами
и республиканским кардиологическим диспансером позволяет достигать показателей по лечению пациентов на
уровне обще региональных.
Ʌɢɬɟɪɚɬɭɪɚ
ɈɫɧɨɜɧɵɟɩɨɤɚɡɚɬɟɥɢɡɞɨɪɨɜɶɹɧɚɫɟɥɟɧɢɹɢɷɮɮɟɤɬɢɜɧɨɫɬɶɢɫɩɨɥɶɡɨɜɚɧɢɹɪɟɫɭɪɫɨɜɜɫɢɫɬɟɦɟɡɞɪɚɜɨɨɯɪɚɧɟɧɢɹɍɞɦɭɪɬɫɤɨɣɊɟ
ɫɩɭɛɥɢɤɢɡɚɝɈɬɜɟɬɫɬɜɟɧɧɵɟɡɚɜɵɩɭɫɤȼɄȽɚɫɧɢɤɨɜɂȼɆɚɥɶɰɟɜɚɈȺɊɭɤɚɧɂɠɟɜɫɤ±ɫ
ɋɨɜɪɟɦɟɧɧɵɟɩɪɨɛɥɟɦɵɦɟɞɢɰɢɧɫɤɨɝɨɨɛɟɫɩɟɱɟɧɢɹɛɨɥɶɧɵɯɫɤɚɪɞɢɨɥɨɝɢɱɟɫɤɢɦɢɡɚɛɨɥɟɜɚɧɢɹɦɢɩɨɪɟɡɭɥɶɬɚɬɚɦɩɪɨɟɤɬɚ©ɉɨ
ɥɭɱɟɧɢɟ ɫɬɚɬɢɫɬɢɱɟɫɤɨɣ ɢɧɮɨɪɦɚɰɢɢ ɨ ɤɚɱɟɫɬɜɟ ɢ ɞɨɫɬɭɩɧɨɫɬɢ ɦɟɞɢɰɢɧɫɤɨɣ ɩɨɦɨɳɢ ɛɨɥɶɧɵɦ ɤɚɪɞɢɨɥɨɝɢɱɟɫɤɨɝɨ ɩɪɨɮɢɥɹª
ɊɨɫɫɢɣɫɤɢɣɫɬɚɬɢɫɬɢɱɟɫɤɢɣɟɠɟɝɨɞɧɢɤɆɨɫɤɜɚ±ɫ
+DVDL'%HJDU6:DOOHQWLQ/HWDO$SURVSHFWLYHVXUYH\RIWKHFKDUDFWHULVWLFVWUHDWPHQWVDQGRXWFRPHVRISDWLHQWVZLWKDFXWHFRURQDU\
V\QGURPHVLQ(XURSHDQGWKH0HGLWHUUDQHDQEDVLQ7KH(XUR+HDUW6XUYH\RIDFXWHFRURQDU\V\QGURPHV(XUR+HDUW6XUYH\$&6(XU
+HDUW-±±9RO±3
© Е.П. Савостина, Л.А. Арсентьева, 2011
УДК 616-082.6
Е.П. Савостина, Л.А. Арсентьева
СТРАТЕГИЯ МЕТОДИЧЕСКИХ ПОДХОДОВ В ПРОИЗВОДСТВЕ СУДЕБНО-МЕДИЦИНСКИХ
МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИХ ЭКСПЕРТИЗ
ГУЗ «БСМЭ МЗ Саратовской области»
В статье анализируются методические подходы в производстве судебно-медицинских молекулярногенетических экспертиз.
Ключевые слова: судебно-медицинские экспертизы.
THE STRATEGY OF METHODOLOGICAL APPROACHES TO THE PRODUCTION
OF FORENSIC MOLECULAR GENETIC EXAMINATIONS
E.P.Savostina, L.A. Arsent’eva
This article analyzes the methodological approaches in the production of forensic molecular genetic examinations.
Key words: forensic examinations.
Известно, что геном человека представлен набором чить колоссальное биологическое разнообразие, не говоря
из 46 хромосом – палочковидными частицами, располо- уже о ДНК типичной животной клетки, достигающей в
женными в клеточном ядре и несущими генетическую длину 1 м (3х109 н.п.). Не говоря о существовании разных
информацию. Все соматические клетки человека содержат видов животных, многообразие даже внутри одного вида
в составе ядер двойной (диплоидный) набор хромосом и (в том числе и человека), обусловлено тем, что молекулы
только половые клетки – сперматозоиды и яйцеклетки – ДНК их клеток имеют различную последовательность нунесут половинный (гаплоидный) набор – 23 хромосомы. клеотидов и, следовательно, различное информационное
Из них 22 хромосомы имеют соответственную пару и содержание генетического кода.
одна хромосома, непарная, определяющая пол человека. В
Анализ препаратов ДНК, выделенных из огромного
яйцеклетках это всегда «Х»- хромосома, в сперматозоидах множества различных видов, позволил сделать следующие
это «Х» или «У» хромосома.
выводы:
Материальным
но- препараты ДНК, выделенные из
сителем
наследственной
разных тканей представителя вида имеинформации в хромосомах
ют одинаковый состав;
является
суперскрученая
- этот нуклеотидный состав не
спираль, состоящая из двух
меняется с возрастом, не зависит от
комплементарных
цепей,
вида жизнедеятельности и изменений
дезоксирибонуклеиновой
окружающей среды.
кислоты – ДНК (рис.1).
Можно представить, каким многоГенетическая инфоробразием генетического кода обладает
мация может копироваться
новая особь Homo sapiens, получая
при разделении цепей, что
в свой диплоидный набор хромосом
позволяет каждой из них
сочетание отцовской и материнской
служить матрицей нового
генетической информации. Практичекомплементарного партнера,
ски невозможно встретить двух людей,
поэтому ДНК даже умеренобладающих одинаковым генетическим
Рис. 1 Структурная организация молекулы
ной длины способна обеспекодом, исключение составляют только
дезоксирибонукдеиновой кислоты - ДНК
23
однояйцовые или гомозиготные близнецы. Т.е. каждый
человек имеет свой уникальный генетический паспорт.
И, естественно, возникает вопрос, каким образом можно
провести геномную дифференциацию личности и определить генетический профиль человека?
В 1985 году Jeffreys A.J. и соавт. обнаружили в геноме
человека высокополиморфное семейство минисателлитных маркеров и впервые высказали идею о том, что изучение полиморфизма гипервариабельных локусов может
иметь значение для судебной медицины. Дальнейшие исследования показали, что такую дифференциацию можно
провести на выявлении индивидуальных генетических
отличий, которые можно обнаружить, исследуя эти
высокополиморфные участки молекул ДНК, например,
участки с варьирующим числом относительно коротких
нуклеотидных последовательностей, организованных
в виде блоков тандемных повторов (мини- и микросателлитных участков ДНК гена(-ов) (Рис. 2). Высокий
уровень вариабельности микро- и минисателлитов (т.н.
феномен гиперполиморфизма) основан на том, что число
полиморфных повторов, соединенных «голова к хвосту»
в единую последовательность ДНК непостоянно и варьирует в разных аллелях данного локуса (участка или фрагмента гена хромосомы) от одного до нескольких десятков.
Таким образом, для данного локуса обнаруживается набор
аллелей, отличающихся числом повторяющихся единиц. У
Рис. 2. Схема структуры полиморфных повторов,
соединенных «голова к хвосту» в единую последовательность
ДНК в разных аллелях данного локуса. VNTR или STR
повторы. Длина одного VNTR-повтора 7-10 н.п. Длина
одного STR -повтора 1-7 н.п.
каждого индивидуума имеется по два аллели – материнский
и отцовский, равной или разной длины (соответственно
гомо- и гетерозиготное состояние), которые являются
строго специфичными для данного субъекта и могут
служить индивидуализирующими личность признаками.
Класс тандемных полиморфных локусов условно разбит на
два подкласса: минисателлиты или VNTR (Variable Namber
Tandem Repead) – локусы, с длиной повтора более 7 пар
нуклеотидов, и микросателлиты или STR (Short Tandem
Repead) – локусы, у которых длина повторяющихся единиц
от 1 до 7 пар нуклеотидов, которые наиболее значимы в
производстве судебно-медицинских экспертиз.
Каким же способом можно выявить эти нуклеотидные последовательности для получения идентификационного геномного паспорта личности? Имеется несколько
базовых технологий молекулярно-генетического (геномного) идентификационного анализа, из которых самым
распространенным является определение полиморфизма
длины амплификационных фрагментов (ПДАФ) с исполь-
зованием метода энзиматической амплификации молекул
ДНК, более известному как полимеразная цепная реакция
(ПЦР). Амплификация – есть изолированное умножение
гена или его фрагмента. Это явление достаточно распространено в биологии клетки как способ ее выживания в
жестких условиях, например действия противоопухолевых или антибактериальных препаратов. Метод ПЦР, позволяющий проводить такую амплификацию в пробирке,
был разработан в 1980 г. американским исследователем
Mullis. Этот метод используется как в решении задач
молекулярной биологии и генетики, так и в практической
медицине, в том числе и в судебной, оказавшись доступным в региональных экспертных лабораториях.
Молекулярно-генетический
идентификационный
анализ, в основе которого лежит ПДАФ-типирование
ДНК, является одним из наиболее доказательных методов
анализа биологического материала при идентификации.
ПДАФ-типирование отличается высокой дифференцирующей способностью, специфичностью и чувствительностью, благодаря технологии ПЦР. При ПЦР-амплификации
гипервариабельных мини- и микросателлитных генетических матриц (локусов), присущих в геноме каждого
человека, в ходе реакции образуются фрагменты ДНК,
которые у разных людей имеют различную длину и поэтому оказываются индивидуально-специфичными. Эти
полиморфные по длине фрагменты, по сути представляющие разные аллельные варианты локусов геномной ДНК,
становятся доступными для сравнительного анализа в
качестве индивидуализирующих личность признаков.
При этом важно, что каждый ПДАФ-вариант наследуется
как простой менделевский кодоминантный признак, т.е.
напрямую половину от отца, половину от матери. Все это
создает хорошие предпосылки для решения экспертных
задач, связанных с индивидуализацией и идентификацией, так и установлением биологических родственных
связей индивидуума с другими лицами (установление
факта отцовства или материнства.
Исследование вещественных доказательств биологической природы и идентификация личности, основанные на молекулярно-генетической индивидуализации
человека достаточно широко внедряется в практику.
Ключевым для судебной медицины явилась показанная в
1985 году Gill P. и соавт. возможность применения ДНКанализа для исследования биологического материала
- сухой крови и выделений из других объектов судебномедицинской экспертизы. А в качестве доказательного
этот метод впервые был использован с целью проведения судебно-медицинской экспертизы в Англии в 1989
г. Джагертом с соавт. был описан случай идентификации
личности преступника методом типирования по VNTRлокусам. В небольшом городке была изнасилована и
убита учительница местной школы. По требованию населения городка была проведена геномная дактилоскопия
всего мужского населения репродуктивного возраста, и
на основании сравнения ПДАФ-профиля спермальной
фракции, выделенной в биологическом материале жертвы, и профилей ДНК исследуемых образцов крови, был
выявлен преступник.
Судебно-медицинской экспертиза основанная на
молекулярно-генетической индивидуализации человека
имеет особенности в разделе исследовательской части и
экспертного анализа.
Исследовательская часть судебно-медицинской экспертизы (исследования) включает следующие этапы:
t ӟӞӛӣӧӕӝӘӕ ӟӠӕӟӏӠӏӢӞӑ ӥӠӞӜӞӡӞӜӝӞә ҢҫҨ Әӗ ӞӐӪектов судебно-медицинского исследования;
tҭҴҮӏӜӟӛӘӤӘӚӏӦӘӯӝӏӜӏӢӠӘӦӕӭӢӞәҢҫҨ
24
tӠӕӒӘӡӢӠӏӦӘӯӏӜӟӛӘӤӘӚӏӦӘӞӝӝӫӥӡӘӒӝӏӛӞӑ
tӟӞӗӘӦӘӞӝӝӫәӏӝӏӛӘӗӏӜӟӛӘӤӘӚӏӦӘӞӝӝӫӥӡӘӒӝӏӛӞӑ
установление амплификационного (ПДАФ) – профиля.
Экспертный анализ включает интерпретацию результатов генотипирования, оценку индивидуализирующего
значения ПДАФ- профиля и вычисления вероятности
генетической идентичности объектов экспертизы или
вероятности отцовства с целью разрешения вопросов,
поставленных перед экспертизой.
Предметом судебно-медицинского молекулярногенетического исследования являются объекты биологического происхождения от трупов и живых лиц, а также
следы и иные вещественные доказательства, содержащие
биологический материал. Хромосомная ДНК содержится
во всех клетках человека, поэтому для исследования пригодны практически любые биологические субстраты, в
которых сохранен ядерный материал: кровь, буккальный
соскоб, сперма, высохшие следы крови и спермы, зубы и
волосы человека, отчлененные части тела и фрагменты частей тела, фрагменты скелетированных трупов, отдельные
кости и т.д. За время работы из множества объектов нам
запомнились:
tӗӣӐӔӕӛӞjӧӕӠӝӞәӑӔӞӑӫx
tӔӑӏӑӞӛӞӡӏӝӏӑӠӣӚӕӢӠӣӟӏӣӐӘәӡӢӑӞӝӏӟӞӧӑӕӠӕӑности;
t ӑӏӒӘӝӏӛӬӝӫӕ Ә ӠӕӚӢӏӛӬӝӫӕ ӢӏӜӟӞӝӫ jӐӏӝӝӞӕx
дело;
tӖӕӑӏӢӕӛӬӝӏӯӠӕӗӘӝӚӏoӣӐӘәӡӢӑӞӑӜӏӨӘӝӕ
Для получения препаратов хромосомной ДНК из
объектов исследования используют методы представленные на схеме (Рис. 3).
Ȼɢɨɥɨɝɢɱɟɫɤɢɣɨɛɪɚɡɟɰ
_
ɇɚɧɟɫɟɧɢɟɩɪɨɛ
(ɚɥɢɤɜɨɬɧɚ
ɝɟɥɶ
Ⱦɨɛɚɜɥɟɧɢɟɥɢɬɢɱɟɫɤɨɣ
ɫɦɟɫɢɥɢɡɢɫɤɥɟɬɨɤ
+
Ɉɫɚɠɞɟɧɢɟɤɥɟɬɨɱɧɨɝɨ
ɞɟɛɪɢɫɚ
ɞɟɩɪɨɬɟɢɧɢɡɚɰɢɹ
ɤɨɧɰɟɧɬɪɢɪɨɜɚɧɢɟɢ
ɨɫɚɠɞɟɧɢɟȾɇɄ
_
ɉɪɨɜɟɞɟɧɢɟ
ɷɥɟɤɬɪɨɮɨɪɟɡɚ
+
Ⱥɦɩɥɢɮɢɤɚɰɢɹ
ɢɫɫɥɟɞɭɟɦɨɣȾɇɄ
Ɉɤɪɚɲɢɜɚɧɢɟ
ɝɟɥɹAgNO3
Рис. 3. Общая схема выделения ДНК из образца.
Фенол-хлороформная экстракция – классический
метод выделения и очистки ДНК, включающий лизис клеточных структур, депротеинизацию и выделение водной
фазы, содержащей ДНК, концентрирование и осаждение
ДНК. Метод достаточно прост, обеспечивает стабильность
препарата ДНК в процессе хранения, однако применим в
том случае, если материала для исследования много.
Если биологического материала очень мало (волос,
следы крови или спермы) существуют другие варианты
экстракции ДНК. Метод с использованием хелатирующей
синтетической смолы «Chellex», который не предполагает
выделение препарата ДНК в чистом виде, его получают
в виде клеточного лизата, содержащего все исходные
компоненты, но в инактивированной форме. Метод с использованием нуклеосорбента, где в результате химикотемпературных условий из лизата ДНК сорбируется на
гранулы сорбента, а затем смывается буферным раствором. Оба этих подхода достаточно просты и не требуют
много времени, но их надежность, а также качество и
стабильность полученных препаратов ДНК намного ниже,
чем у фенольно-хлороформной экстракции.
В настоящий момент эксперты – генетики располагают рядом типовых протоколов получения препаратов
ДНК из различных объектов – костей, мышечной ткани,
волос, смешанных следов соматических (эпителиальных)
и спермальных клеток при половых преступлениях
(т.н. дифференциальный лизис), регламентированных
стандартными операционными процедурами (РЦСМЭ
Минздрава РФ, 1999).
Следующий этап – постановка ПЦР с полученными
образцами ДНК. Чувствительность ПЦР настолько высока, что для получения молекулярных копий (ампликона)
исследуемого локуса достаточно наличия в реакционной
смеси 1-2 нг матричной ДНК- это 10-9 г. Специфическими
компонентами реакции и амплификации в целом являются олигонуклеотидные (15-30 н.п.) праймеры. Важной
характеристикой является именно их специфичность,
т.е. только конкретная пара праймеров определяет, какой
аллельный локус будет избирательно нарабатываться
в данной ПЦР (праймеры называют молекулярногенетическими ПДАФ-системами).
В настоящее время разработано несколько десятков
систем на основе микросателлитных полиморфных локусов. Именно эти системы, сконструированные на основе
коротких тандемных повторов, имеют преимущество при
исследовании малых количеств ДНК или ее деградированных (разрушен- “CODIS”
PowerPlex 16
ǩǰǶǺǭǽ
Penta E
Amelogenin
ных) препаратов, CSF1PO
D18S51
CSF1PO
а такие часто FGA
TH01
D21S11
D2S1338
встречаются
в TPOX
TH01
D3S1358
D3S1358
D5S818
материале веще- vWA
FGA
D7S820
ственных доказа- D3S1358
D5S818
TPOX
D8S1179
тельств, трупного D7S820
D8S1179
D13S317
vWA
D16S539
материала, кост- D8S1179
Amelogenin
D18S51
ных останков, т.е. D13S317
D16S539
Penta D
D19S253
п о д в е р г ш и х с я D18S51
CSF1PO
F13A01
D16S539
F13B
разложению под D21S11
D7S820
FESFPS
воздействием
D13S317
FGA
D5S818
HPRTB
разрушающих
LPL
биологических и
физико-химических факторов. Наш опыт указывает, что
сложно получить хорошие препараты ДНК из гнилостно
измененных материалов - крови, мышечной ткани, фрагментов органов и т.п. Практически невозможно выделить
ДНК из биологических объектов, обнаруженных на изделиях из натуральной кожи или дереве. Деградированное
состояние ДНК, выделенной из объекта, может повлечь за
собой преимущественную амплификацию, ведущую к несбалансированности аллельных сигналов у гетерозиготы
или полному «выпадению» фрагмента, что в свою очередь
может привести к прочтению ложного генотипа.
На этом этапе необходимо особо уделить внимание
технике постановки ПЦР - специфичность реакции
зависит от условий ее проведения – концентрации
реагентов, их качества, заданных параметров циклов
амплификации и точности их воспроизведения. При
исследовании судебно-медицинских объектов не всегда
удается полностью уравнять вводимые в ПЦР количества
ДНК (особенно в условиях ее деградации), и нарушение
соотношений праймер-матрица также приводит к появлению артефактов. Необходимо отметить и проблемы,
возникающие из-за предмета-носителя, который может
оказать ингибирующее действие на ПЦР, например из-за
наличия красителя.
Следующий этап включает регистрацию ПЦРпродуктов и установление амплификационых геномных
профилей. В данной аналитической системе индивидуальный образец крови человека характеризуется нали-
25
№ 3 к «Порядку организации и производства судебномедицинских экспертиз в государственных судебноэкспертных учреждениях Российской Федерации» (приказ
МЗиСР РФ № 346н от 12.05.2010 г.) для обоснованного
вывода о безусловном исключении отцовства аллели
ребенка, не свойственные предполагаемому отцу, должны
быть зарегистрированы не менее чем в двух несцепленных
локусах, т. е. расположены на разных хромосомах. Несовпадение аллельных профилей в исследуемых препаратах
ДНК имеет доказательное исключающее значение.
Если же в ходе экспертизы установлен факт совпадения ДНК-профилей, характеризующих объекты экспертизы и проведено их типирование, встает вопрос
t ӕӡӛӘ ӒӕӝӞӢӘӟӘӧӕӡӚӘӕ ӏӛӛӕӛӬӝӫӕ ӚӞӜӐӘӝӏӦӘӘ Ӕӑӣӥ
препаратов ДНК совпадают, то какова вероятность того,
что они произошли от одного человека;
tӑӡӛӣӧӏӕӭӚӡӟӕӠӢӘӗӫӡӟӞӠӝӞӒӞӟӠӞӘӡӥӞӖӔӕӝӘӯӔӕӢӕә
если все аллели ребенка находят комплементарное соответствие в генотипах матери и предполагаемого отца, то
какова вероятность того, что предполагаемый отец является биологическим отцом этого ребенка.
Cтрого обязательна вероятностная оценка генетической идентичности объектов экспертизы при условии
зарегистрированного совпадения их ПДАФ-профилей.
Для того, чтобы определить индивиɄ- ɦ ɪ ɩɨ A Ʉ Ʉ A ɩɨ ɪ ɦ ɄɊɚɡɞɟɥɟɧɢɟ ɩɪɨɞɭɤɬɨɜ ɚɦɩɥɢɮɢɤɚɰɢɢ
дуализирующее значение выявленного
ɩɪɨɜɟɞɟɧɨ ɜ ɚɤɪɢɥɚɦɢɞɧɨɦ ɝɟɥɟ ɫ
геномного
профиля,
необходимо
ɩɨɫɥɟɞɭɸɳɟɣ ɨɤɪɚɫɤɨɣ ɧɢɬɪɚɬɨɦ ɫɟɪɟɛɪɚ
определить его распространенность в
Ʉ ɦ ɪ ɩɨ Ⱥ ɦ ɪ ɩɨ
популяции – аллельную частоту (p). Ее
определяют эмпирически на основании
результатов популяционных исследований. Другой важной характеристикой
1. ɉȾȺɎ-ɩɪɨɮɢɥɶ ɨɛɪɚɡɰɨɜ ȾɇɄ ɩɨ ɥɨɤɭɫɚɦ FGA ɢ D2S1338
является частота встречаемости аллеля
A- ɚɥɥɟɥ
ɚɥɥɟɥɶɧɚɹ
ɚ ɥɟɫ
ɥɟɫɬɧɢɰɚ,
ɰɚ, Ʉ – ɤɨɧɬɪɨɥɶɧɚɹɹ
ɨ ɪɨɥ ɚ ɚɥɥɟɥ
ɚɥɥɟɥɶ
в популяции – статистическая частота
аллеля: это отношение числа генотипов,
Ʉ ɉɈ Ɋ2 Ɋ1 Ɇ ɉɈ Ɋ Ɇ Ⱥ ɉɈ Ɋ Ɇ
3. ɉȾȺɎ-ɩɪɨɮɢɥɶ ɨɛɪɚɡɰɨɜ ȾɇɄ ɩɨ ɥɨɤɭɫɭ
в которой присутствует данный аллель,
D8S1179
к общему числу возможных генотипов
Ⱥ- ɚɥɥɟɥɶɧɚɹ ɥɟɫɬɧɢɰɚ,
Ʉ – ɤɨɧɬɪɨɥɶɧɚɹɹ ɚɥɥɟɥɶ
в популяционной выборке (q). Для
каждой ПДАФ-системы свои частоты
встречаемости представлены в виде таблиц частотных величин для популяций,
находящихся в условиях равновесия
2 ɉȾȺɎ
2.
ɉȾȺɎ-ɩɪɨɮɢɥɶ
ɩɪɨɮɢɥɶ ɨɛɪɚɡɰɨɜ ȾɇɄ ɩɨ ɥɨɤɭɫɭ D13S317
Ⱥ- ɚɥɥɟɥɶɧɚɹ ɥɟɫɬɧɢɰɚ, Ʉ – ɤɨɧɬɪɨɥɶɧɚɹɹ ɚɥɥɟɥɶ
Харди-Вайнберга. Для количественной
Рис. 4. Получение ПДАФ-профилей исследуемой ДНК по STR системам.
оценки индивидуализирующего значения
В процессе судебно-медицинской идентификацион- признака используют статистическую частоту генотипа, а
ной экспертизы проводят позиционное сопоставление именно - частоту встречаемости конкретного ДНК проамплификационных профилей сравниваемых ДНК: а) филя в популяции.
картины распределения полос на сравниваемых дорожках геля похожи или
непохожи; б) позиции соответствующих
фрагментов совпадают или не совпадают. Ключевым является вопрос о том,
одинаковы или неодинаковы амплификационные профили ДНК, выделенные из
объектов экспертизы: в одном случае – это
не исключение, а в другом – исключение
причастности данного лица к происхождению следов. Обязательное нанесение
локусспецифичных аллельных маркеров
(аллельных «лестниц») и стандартов
молекулярных масс - фрагментов ДНК с
заранее известными размерами, на тот же
гель, где фрагментируются амплификационные фрагменты исследуемой ДНК, что
позволяет просто осуществлять генотипиРис. 5. Пример детекции амплификационных сигналов, меченных в процессе
рование аллельных профилей.
ПЦР многоцветными флюоресцирующими метками, регистрируемые лазерным
В соответствии с п. 80.4. приложения
датчиком в установке для капиллярного электрофореза.
чием двух амплифицированных фрагментов разной или
одинаковой длины (гетеро- и гомозиготное состояние),
поскольку каждая из двух гомологичных хромосом несет
свой вариант гипервариабельного локуса. Синтезированные в ходе ПЦР продукты – молекулярные копии
полиморфных участков геномной ДНК накапливаются
в реакционной цепи, вследствие чего количественно
становятся доступными для сравнительного анализа.
Продукты амплификации разделяют с помощью электрофореза в полиакриламидном геле (STR- локусы) (Рис. 4)
в денатурирующих условиях. Детекцию осуществляют
путем окрашивания нитратом серебра в акриламидных
гелях, с последующей их фиксацией.
Более эффективна детекция амплификационных
сигналов, помеченных в процессе ПЦР многоцветными
флюоресцирующими красителями. Эти красители в
момент электрофореза излучают определенные длины
волн, регистрируемые лазером в установке для капиллярного электрофореза. Сигналы выводятся в виде пиков на
экран монитора (Рис. 5). Комбинация из двух фрагментов
ДНК - полос (или пиков) на электрофореграмме, которые
определенным образом расположены на дорожке геля,
являются амплификационным профилем ДНК, индивидуализирующей характеристикой человека.
26
,9,QFULPLQDWLQJ9DOXH
,9
,QFULPLQDWLQJ9DOXH
Q4
Q4
ȋȌȍ 4 - ȟȈșȚȖȚȣ ȋȍȕȖȚȐȗȈ ș ȌȈȕȕȣȔȐ ȈȓȓȍȓȧȔȐ Ȋ ȗȖȗțȓȧȞȐȐ.
ȗȖȗțȓȧȞȐȐ
Ǭȓȧ ȋȖȔȖȏȐȋȖȚ ȊȍȓȐȟȐȕȈ 4 S , Ȉ Ȍȓȧ ȋȍȚȍȘȖȏȐȋȖȚ
ȊȍȓȐȟȐȕȈ 4 SDȝ SEȋȌȍ S - ȟȈșȚȖȚȈ Ȉȓȓȍȓȧ Ȋ ȗȖȗțȓȧȞȐȐ.
„ ȜȖȘȔțȓȈ țșȓȖȊȕȖȑ ȊȍȘȖȧȚȕȖșȚȐ ǩȈȑȍșȈ ȐȓȐ
«ȐȕȒȘȐȔȐȕȐȘțȦȡȈȧ ȊȍȘȖȧȚȕȖșȚȤ»:
,3
,3
,3,QFULPLQDWLQJ3UREDELOLW\
,QFULPLQDWLQJ
,QFULPLQDWLQJ
,QFULPLQDWLQJ3UREDELOLW\
3UREDELOLW\
,9
Далее пример расчета Q - частоты генотипа с данными аллелями в популяции при неисключающей экспертизе
спорного отцовства. Байесова вероятность при наблюдаемом совпадении отцовского аллеля в геномном профиле
ребенка с одним из аллелей предполагаемого отца что
этот мужчина является его биологическим отцом, называется вероятностью отцовства PP (Paternity Probability),
вычисляемой по формуле:
ǹȚȈȚȐșȚȐȟȍșȒȐȊȍȘȖȧȚȕȖșȚȕȣȍȜȖȘȔțȓȣ
ǹȚȈȚȐșȚȐȟȍșȒȐ
ȊȍȘȖȧȚȕȖșȚȕȣȍ ȜȖȘȔțȓȣ
ȐșȗȖȓȤȏțȍȔȣȍȌȓȧȥȒșȗȍȘȚȕȖȋȖȈȕȈȓȐȏȈǷǬǨǼȗȘȖȜȐȓȍȑ Ȋ
ȐșȗȖȓȤȏțȍȔȣȍȌȓȧȥȒșȗȍȘȚȕȖȋȖȈȕȈȓȐȏȈǷǬǨǼ
ȥȒșȗȍȘȚȐȏȍșȗȖȘȕȖȋȖȖȚȞȖȊșȚȊȈ
Ɏɨɪɦɭɥɵ ɪɚɫɫɱɟɬɚ ɱɚɫɬɨɬɵ ɝɟɧɨɬɢɩɚ
ȼȺɊɂȺɇɌ 1 :
Ʉ- Ʉ
Ɇ Ɉ Ⱥ
1
2
3
4
5
6
Ʉ
Ⱥ
Ʉ- Ʉ
Ɇ Ɉ Ⱥ
1
2
3
4
5
6
Ʉ
Ⱥ
D3S135
58
D5S818
где Q - частота генотипа с данными аллелями в популяции
по конкретной ПДАФ-системе.
В случае неисключения отцовства при достижении
вероятности отцовства не ниже 99,90% экспертное исследование следует считать завершенным в соответствии
Ʉ- Ʉ
D7S820
0
PP (Paternity Probability) = 1/[1+(Qa x Qb x Qc …)},
ǹțȌȍȉȕȖ-ȔȍȌȐȞȐȕșȒȈȧ ȔȖȓȍȒțȓȧȘȕȖ-ȋȍȕȍȚȐȟȍșȒȈȧ ȥȒșȗȍȘȚȐȏȈ
ȐȌȍȕȚȐȜȐȒȈȞȐȐ
Ȝ
ȖșȚȈȕȒȖȊ ȕȍȐȏȊȍșȚȕȖȋȖ ȟȍȓȖȊȍȒȈ
(ȚȖȎȌȍșȚȊȖ ȖȉȢȍȒȚȖȊ Ȑ ȐȌȍȕȚȐȜȐȒȈȞȐȧ ȓȐȟȕȖșȚȐ ȟȍȘȍȏ
ȗȘȧȔȖȍ ȉȐȖȓȖȋȐȟȍșȒȖȍ ȘȖȌșȚȊȖ)
Ʉ- Ʉ
Ɇ Ɉ Ⱥ
1
2
3
4
5
6
Ʉ
Ⱥ
D8S11
179
șȚȈȚȐșȚȐȟȍcȒȐ
șȚȈȚȐșȚȐȟȍc
ȒȐ--ȊȍȘȖȧȚȕȖșȚȕȈȧ ȜȖȘȔțȓȈ ȊȍȓȐȟȐȕȣ
«ȐȕȒȘȐȔȐȕȐȘțȦȡȍȋȖ ȏȕȈȟȍȕȐȧ»:
Ʉ- Ʉ Ɇ Ɉ Ⱥ
1
2
3
4
5
6
Ʉ
D13S317
„
с п. 80.6.1 (приказ МЗиСР РФ № 346н от 12.05.2010 г.). Для
достижения доказательной вероятности 99,90% бывает
достаточно 8-9 ПДАФ-систем. Однако частота встречаемости аллелей гр. Иванова и гр. Сидоровой в популяции
настолько велика, что используя 12-15-18 ПДАФ-систем
трудно достичь желаемой вероятности. Так, мы знаем кто
отец, а статистика не достигает желаемой вероятности.
И, наоборот, встречаются настолько редкие аллели, что с
трудом можем их идентифицировать. И в качестве примера (Аракелян) можно привести судебно-медицинскую
экспертизу, включающую в себя экспертизу тождества
объектов и идентификацию личности по прямому биологическому родству.
Производство молекулярно-генетических экспертиз
требует оснащение лаборатории автоматизированными
системами анализа (секвенаторами, приборами для капиллярного электрофореза, термоциклерами для постановки
ПЦР в реальном времени), позволяющими применять
совершенные технологии исследования как ядерной,
так и митохондриальной ДНК. Также важен специально
подготовленный персонал, владеющий техникой работ с
молекулой ДНК.
Ɇ Ɉ Ⱥ
1
2
3
4
5
6
Ʉ
Ⱥ
D16S53
39
В случае проведения сравнительного анализа образцов ДНК, полученных из материала вещественных доказательств и подозреваемых, или с случае идентификации
останков используется статистичеcки-вероятностная
формула величины «инкриминирующего значения»:
Используя формулу условной вероятности Байеса отвечают на вопрос какова вероятность, что это совпадение
закономерно, а не произошло по воле случайности. Эта
вероятность генетической идентичности геномных профилей называют инкриминирующей вероятностью IP
(Incriminating Probability).
Для статистического анализа в экспертизе спорного
отцовства используются следующие формулы:
4 SS
ȼȺɊɂȺɇɌ 2 : 4 SSTT
ɝɞɟ S - ɨɬɰɨɜɫɤɚɹ ɱɚɫɬɨɬɚ ɚɥɥɟɥɹ ɜ
ɩɨɩɭɥɹɰɢɢ, T- ɦɚɬɟɪɢɧɫɤɚɹ ɱɚɫɬɨɬɚ
ɚɥɥɟɥɹ ɜ ɩɨɩɭɥɹɰɢɢ, ɚ 4 - ɱɚɫɬɨɬɚ
ɝɟɧɨɬɢɩɚ ɫ ɞɚɧɧɵɦɢ ɚɥɥɟɥɹɦɢ ɜ
ɩɨɩɭɥɹɰɢɢ.
Ɏɨɪɦɭɥɚ ɭɫɥɨɜɧɨɣ ɜɟɪɨɹɬɧɨɫɬɢ
Ȼɚɣɟɫɚ ɢɥɢ «ɜɟɪɨɹɬɧɨɫɬɶ ɨɬɰɨɜɫɬɜɚ»:
33 3DWHUQLW\3UREDELOLW\ >4D [
4E [4F «@,
ɝɞɟ 4 - ɱɚɫɬɨɬɚ ɝɟɧɨɬɢɩɚ ɫ ɞɚɧɧɵɦɢ
ɚɥɥɟɥɹɦɢ ɜ ɩɨɩɭɥɹɰɢɢ ɩɨ ɤɨɧɤɪɟɬɧɨɣ
ɉȾȺɎ-ɫɢɫɬɟɦɟ.
© В.А. Спиридонов, К.Е. Санников, А.И. Жолобов, 2011
УДК 340.67
В.А. Спиридонов, К.Е. Санников, А.И. Жолобов
ИСПОЛЬЗОВАНИЕ В СУДЕБНО-МЕДИЦИНСКОЙ ПРАКТИКЕ ИНТЕРАКТИВНОЙ БАЗЫ
ДИАТОМОВОГО ПЛАНКТОНА
ГАУЗ «Республиканское бюро судебно-медицинской экспертизы МЗ РТ» (нач. бюро – к.м.н. Н.Ш. Нигматуллин);
Кафедра судебной медицины (зав. кафедрой – проф. Г.М. Харин)
ГОУ ВПО «Казанский государственный медицинский университет»
В статье проведена оценка использования в судебно-медицинской практике интерактивной базы данных
диатомового планктона в Республиканском бюро судебно-медицинской экспертизы МЗ РТ.
Ключевые слова: база данных, диатомовый планктон, судебно-медицинская экспертиза.
Ⱥ
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа