close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Otchet o validatsii Bioprost

код для вставкиСкачать
ГОСУДАРСТВЕННОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ "НИЖЕГОРОДСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ МЕДИЦИНСКАЯ АКАДЕМИЯ ФЕДЕРАЛЬНОГО АГЕНТСТВА ПО ЗДРАВООХРАНЕНИЮ И СОЦИАЛЬНОМУ РАЗВИТИЮ"
(ГОУ ВПО НижГМА Росздрава)
603005, Российская Федерация, г. Нижний Новгород, пл. Минина и Пожарского, 10/1
телефоны: (8312) 39-09-43; 39-06-43; факс: (8312) 39-09-43
e-mail: nnsma@sandy.ru
ИСПЫТАТЕЛЬНАЯ ЛАБОРАТОРИЯ "ПРОВИЗОР"
603047, Российская Федерация, г. Нижний Новгород, ул. Люкина, д.5а
телефон: (8312) 79-12-13
e-mail: chem_pharm@list.ru
ОТЧЕТ ВАЛИДАЦИЯ МЕТОДИК
ПО ФСП 42-0470-3909-03, ИЗМЕНЕНИЕ №1
"БИОПРОСТ", СУППОЗИТОРИИ РЕКТАЛЬНЫЕ
ЗАО "ИНТЕЛФАРМ"
Нижний Новгород
2007
ОТЧЕТ О ВАЛИДАЦИИ МЕТОДИК
ПО ФСП 42-0470-3909-03, ИЗМЕНЕНИЕ №1
"БИОПРОСТ", СУППОЗИТОРИИ РЕКТАЛЬНЫЕ
ЗАО "ИНТЕЛФАРМ"
Валидация была проведена в испытательной лаборатории "Провизор", аккредитованной в системе ГОСТ Р ИСО/МЭК 17025-2000 (аттестат № POCC RU 0001.21ФМ92). Испытательная лаборатория (ИЛ) "Провизор" аккредитована на техническую компетентность и независимость. ИЛ "Провизор" оснащена всем необходимым оборудованием для валидации методик по ФСП 42-0470-3909-03, изменение №1 суппозиториев "Биопрост".
К работе привлекались высококвалифицированные специалисты ИЛ "Провизор" и независимые эксперты ОАО "НМЖК" (директор экспериментального центра, к.х.н. Игнатов В.И.), Нижегородского областного центра контроля качества лекарственных средств (зам. директора НОЦККЛС, к.х.н. Пожидаев В.М.) и ГОУ ВПО "Нижегородский государственный университет им. Н.И. Лобачевского" (ст. науч. сотр., к.х.н. Карякина Л.Н.). Валидация осуществлялась в соответствии со следующей документацией:
1. ОСТ 42-510-98
2. МУ 64-04-001-2002
3. МУ 64-02-002-2002
4. ГОСТ Р 8.563-96
5. ФСП 42-0470-3909-03, изменение №1
6. ГФ XI, вып. 1. М.: Медицина, 1987
7. ГФ XI, вып. 2. М.: Медицина, 1990
Метрологические характеристики и формулы, используемые для статистической обработки результатов
n - количество опытов (или количество измерений)
- среднее арифметическое из результатов, полученных при всех измерениях
;
S2 - выборочная дисперсия - это рассеяние результатов относительно среднего значения
;
S - средняя квадратичная ошибка отдельного определения (или стандартное отклонение, или стандартное выборочное отклонение)
;
S- средняя квадратичная ошибка среднего арифметического (или стандартное отклонение среднего результата)
;
∆- доверительный интервал среднего значения (или точность прямого измерения) ∆= t(P,f)·S , где (p, f) - коэффициент нормированных отклонений (критерий Стьюдента) при Р = 95% и f = n -1 (число степеней свободы). Находится по специальным таблицам (ГФ XI, ч. 1, с. 249);
∆ - достоверность (правильность): ∆ =/-µ /, где µ - истинное значение - находят по ГФ или ФС;
Eотн. - относительная ошибка опыта (относительное стандартное отклонение), выражается в %: ;
± - интервальное значение определяемой величины (или граничные значения доверительного интервала среднего результата).
1. Подлинность
1.1. Цель: проведение валидации методик определения подлинности основных действующих веществ в суппозиториях "Биопрост". К действующим веществам относятся:
масла семян тыквы (ВФС 42-3002-97)
тимол (ФС 42-1010-75)
Вспомогательные вещества:
Витепсол марки H-15 и W-35 (НД 42-9583-98).
1.2. Материалы, оборудование, реактивы
Используемые приборы и материалы:
1. Весы аналитические KERN 770-13 (поверен 02.08.06)
2. Термостат (поверен 02.08.06)
3. Колонка стеклянная 200х 0,3 см, подвижная фаза полиэтиленгликольсукцинат, хроматон N-AW-DMCS (0,16-0,20 мм), (0,20-0,25 мм или 0,250-0,315 мм) (поверен 02.08.06)
4. Жидкостной хроматограф "Shimadsu" с УФ-детектором, инжектор с дозирующей петлей, колонка LiChrospher 100 RP - 18 размером 124х4 мм, с размером частиц 5 мкм. (поверен 02.08.06)
5. Газовый хроматограф Pue-Unicam 304, колонка 1,5m 2mm с сорбентом 10% Apiezon-L on 100-1200 mesh Diatoom C-AW (поверен 02.08.06)
6. Колба круглодонная на 25 мл ГОСТ 1770-74
7. Колба коническая на 250 мл ГОСТ 1770-74
8. Колба коническая на 100 мл ГОСТ 1770-74
9. Цилиндр мерный на 10, 50, 100 мл ГОСТ 1770-74
10. Колба мерная на 25, 50 мл ГОСТ 1770-74
11. Фильтры бумажные ТУ 2642-001-42624157-98
Используемые реактивы:
1. Спирт этиловый ГОСТ 5962-67
2. Спирт метиловый ГОСТ 6995-77
3. Ацетилхлорид ГОСТ 5869-77
4. Гексан ТУ - 6-09-3375-78
5. Калий едкий ГОСТ 24363-80 (СТ СЭВ 1439-78)
6. Кислота аскорбиновая (производитель ОАО "СN Марбифарм" серия 8831201, содержание действующего вещества 99,3%)
7. Диэтиловый эфир ОСТ 84-2006-88
8. Фенолфталеин ГОСТ 5850-72.
9. Хлороформ TУ - 2631-066-44493179-01
Приготовление растворов:
Калий едкий 10% спиртовой: 10 г кали едкого растворяют в спирте и доводят объем раствора спиртом до 100 мл. (ГФ XI, вып. 2, с. 111).
Спиртовой раствор фенолфталеина: 1% раствор в 95% спирте (ГФ XI, вып. 2, с. 98).
1.3. Методика проведения эксперимента:
1.3.1. Определение подлинности олеиновой и линолевой кислот.
Две свечи растворяют в 50 мл спирта этилового 95% при нагревании (40±1)0С в конической колбе вместимостью 100 мл. колбу с раствором помещают в холодильник при температуре (2-8) 0С и выдерживают в течение 30 мин. При охлаждении триглицериды основы свечей образуют плотный шар, который удаляют. Затем колбу с раствором помещают в холодную камеру при -(4-8) 0С и выдерживают в течение 20 минут. Жидкость удаляют фильтрованием, твердый остаток оставляют на воздухе до удаления запаха спирта и используют для анализа. Сухой остаток в количестве 0,10-0,15 г помещают в круглодонную колбу вместимостью 25 мл, прибавляют 1 мл спирта метилового,3-5 капель ацетилхлорида и нагревают на кипящей бане с обратным холодильником в течение 1 часа. Избыток спирта метилового отгоняют. В реакционную смесь прибавляют 0,2 мл гексана и перемешивают.
Отбирают 1,0мкл смеси метиловых эфиров жирных кислот с помощью микрошприца и вводят в газожидкостной хроматограф с детектором по ионизации в пламени и хроматографируют в следующих условиях: температура колонки 1900С, температура испарителя 2500С, скорость газа - носителя (гелия или азота ) и водорода - 30 мл/мин, колонка стеклянная 200х 0,,3 см, неподвижная фаза -15% полиэтиленгликольсукцината на хроматоне N-AW-DMCS (0,16-0,20 мм), (0,20-0,25 мм или 0,250-0,315 мм).
На хроматограмме идентифицируют пики метиловых эфиров олеиновой (время удерживания 8,3 мин) и линолевой (11,0 мин)
Результаты измерений сведены в таблицы 1 и 2:
1.3.1.1. Результаты измерений на подлинность олеиновой кислоты Таблица 1. Определение подлинности олеиновой кислоты.
№ опытаУсловия выбораВремя удерживания t, минS2SSEотн+1. Серия
№ 0103078,48,40000,108,42. 8,43. 8,44. Серия
№ 0303078,48,40000,108,45. 8,46. 8,47. Серия
№ 0503078,48,40000,108,48. 8,4 9. 8,4 Правильность характеризует близость результатов испытаний, полученных данным методом, к истинному значению. Показателем правильности служит разница среднего арифметического и истинного значения = / - µ/,
По данным произведенных расчетов можно сделать вывод о правильности метода.
Точность (сходимость) характеризует близость отдельных измерений к их среднему арифметическому значению. Она выражается величиной стандартного отклонения S.
В соответствии с рассчитанной величиной S методика обладает высокой степенью точности получаемых результатов.
Специфичность способность измерять точно и селективно аналитически определяемое вещество в присутствии компонентов, которые могут ожидаться в матрице образца (примеси, родственные химические соединения), также оценивается погрешность их определения.
Применение данной методики позволяет точно и селективно измерять аналитически определяемое вещество в присутствии компонентов, которые могут ожидаться в матрице образца (примеси, родственные химических соединений: пальмитиновая, стеариновая, линоленовая и линолевая кислоты)
1.3.1.2. Результаты измерений на подлинность линолевой кислоты Таблица 2. Определение подлинности линолевой кислоты.
№ опытаУсловия выбораВремя удерживания t, минS2SSEотн+1. Серия
№ 01030711,011,00000011,02. 11,03. 11,04. Серия
№ 03030711,011,00000011,05. 11,06. 11,07. Серия
№ 05030711,011,00000011,08. 11,09. 11,0 Правильность. По данным произведенных расчетов можно сделать вывод о правильности метода.
Точность (сходимость). В соответствии с рассчитанной величиной S методика обладает высокой степенью точности получаемых результатов.
Специфичность. Применение данной методики позволяет точно о селективно измерять аналитически определяемое вещество в присутствии компонентов, которые могут ожидаться в матрице образца (примеси, родственные химических соединений: пальмитиновая, стеариновая, линоленовая и олеиновая кислоты).
1.3.2. Определение подлинности α-Токоферола
Шесть суппозиториев, предварительно разрезанных на куски, вносят в коническую колбу вместимостью 250 мл, растворяют в 100 мл спирта этилового 95% при нагревании (40±1) 0С. Колбу с раствором помещают в холодильник при температуре (2-8) 0С и выдерживают в течение 30 мин. При охлаждении триглицериды основы свечей образуют плотный шар, который удаляют. Затем колбу с раствором помещают в холодную камеру при -(4-8) 0С и выдерживают в течение 20 минут. Жидкость удаляют фильтрованием, твердый остаток переносят в коническую колбу вместимостью 100 мл, добавляют 50 мл 10% раствора калия едкого спиртового, 0,1 г кислоты аскорбиновой и нагревают с обратным холодильником при температуре кипения смеси на водяной бане в течение 30 мин. Содержимое охлаждают, количественно переносят 50 мл дистиллированной воды в делительную воронку. α-Токоферол извлекают диэтиловым эфиром один раз в количестве 50 мл и два аза по 50 мл до отсутствия щелочной реакции промывных вод (проба со спиртовым раствором фенолфталеина). Раствор фильтруют через бумажный фильтр с 8 г натрия сульфата безводного в колбу для отгона. Сульфат натрия промывают три раза эфиром по 10 мл, сливая в ту же колбу. Эфир отгоняют в вакууме при температуре не выше 400С. Сухой остаток растворяют в спирте этиловом 95% и количественно переносят в мерную колбу вместимостью 25 мл, доводят объем до метки спиртом этиловым 95% и перемешивают.
Полученный раствор в количестве 20 мкл вводят в жидкостной хроматограф с помощью инжектора с дозирующей петлей. Хроматографирование проводят на приборе "Shimadsu" с УФ-детектором при длине волны 292 нм на колонке LiChrospher 100 RP - 18 размером 124х4 мм, с размером частиц 5 мкм. Элюент: спирт этиловый 95% - вода (9:1), скорость потока 1 мл/мин, масштаб регистрации 1 mV.
Параллельно хроматографируют 20 мкл раствора стандартного образца α-Токоферола. На хроматограмме испытуемого раствора время удерживания пика α-Токоферола в экстракте из свечей должно соответствовать времени удерживания пика раствора ГСО α-Токоферола.
Приготовление РСО α-Токоферола. Около 0,1 г (точная навеска) ГСО α-Токоферола ацетата (ФФС 42-1522-98) помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, прибавляют 20 мл 10% раствора калия едкого спиртового , 0,1 г кислоты аскорбиновой, содержимое колбы перемешивают и доводят объем до метки 10% раствором калия едкого спиртового и нагревают с обратным холодильником при температуре кипения смеси на водяной бане в течение 30 мин. Содержимое колбы охлаждают. Затем 0,5 мл раствора переносят в мерную колбу вместимостью 10 мл, доводят спиртом этиловым 95% до метки и перемешивают. От полученного раствора отбирают пробу для ввода в хроматограф. Раствор используют свежеприготовленным.
Результаты измерений на подлинность α-Токоферола
Таблица 3. Определение подлинности α-Токоферола.
№ опытаУсловия выбораВремя удерживания t, минS2SSEотн+1. Серия
№ 01030711,311,30000,1011,32. 11,33. 11,34. Серия
№ 03030711,311,30000,1011,35. 11,36. 11,37. Серия
№ 05030711,311,30000,1011,38. 11,39. 11,3 Правильность. По данным произведенных расчетов можно сделать вывод о правильности метода.
Точность (сходимость). В соответствии с рассчитанной величиной S методика обладает высокой степенью точности получаемых результатов.
Специфичность. Применение данной методики позволяет точно о селективно измерять аналитически определяемое вещество в присутствии компонентов, которые могут ожидаться в матрице образца (примеси, родственные химических соединений: β-токоферол, δ-токоферол, γ-токоферол).
1.3.3. Определение подлинности тимола
Взвешивают предварительно разрезанный на кусочки 1 суппозиторий (точная навеска), переносят в мерную колбу вместимостью 25 мл и растворяют в хлороформе. От полученного раствора отбирают пробу для ввода в хроматограф.
Анализ проводят в газовом хроматографе Pue-Unicam 304, колонка 1,5m 2mm с сорбентом 10% Apiezon-L on 100-1200 mesh Diatoom C-AW в следующих условиях: температура колонки 165 0С; температура испарителя -2000С; скорость газа - носителя (азот) - 20 мл/мин. Объем пробы - 1 мкл. На хроматограмме испытуемого раствора, полученного при определении тимола в свечах время удерживания основного пика должно соответствовать времени удерживания пика тимола на хроматограмме раствора РСО тимола.
Приготовление РСО тимола. Около 0,16 г (точная навеска) тимола (ФС 42-1010-75) помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в хлороформе, объем доводят до метки хлороформом и перемешивают. От полученного раствора отбирают пробы для ввода в хроматограф. Раствор используют свежеприготовленным.
Проверка пригодности хроматографической системы.
Хроматографическая система считается пригодной, если выполняются следующие условия:
* эффективность хроматографической колонки, рассчитанная по пику тимола на хроматограммах раствора РСО тимола должна быть не менее 2500 теоретических тарелок (ГФXI, вып 1, с. 110);
* относительное стандартное отклонение, рассчитанное для площади пика тимола должно быть не более 2% (ГФ XI, вып. 1, с. 110).
Результаты исследований представлены в таблице 4.
Таблица 4. Определение подлинности тимола.
№ опытаУсловия выбораВремя удерживания t, минS2SSEотн+1. Серия
№ 0103071,61,6000001,62. 1,63. 1,64. Серия
№ 0303071,61,60000005. 1,66. 1,67. Серия
№ 0503071,61,60000008. 1,69. 1,6 Правильность. По данным произведенных расчетов можно сделать вывод о правильности метода.
Точность (сходимость). В соответствии с рассчитанной величиной S методика обладает высокой степенью точности получаемых результатов.
Специфичность. Применение данной методики позволяет точно о селективно измерять аналитически определяемое вещество в присутствии компонентов, которые могут ожидаться в матрице образца.
2. Определение средней массы суппозитория.
2.1. Цель: проведение валидации методики определения средней массы суппозиториев "Биопрост".
2.2. Материалы, оборудование, реактивы
Используемые приборы:
Весы аналитические KERN 770-13 (поверен 02.08.06).
2.3. Методика проведения эксперимента:
Масса суппозитория должна быть 2,0±0,1 г. По ГФ XI, вып. 2, с. 151.
Среднюю массу определяют взвешиванием 20 суппозиториев с точностью до 0,01 г. Отклонение в массе суппозиториев не должно превышать ± 5% и только два суппозитория могут иметь отклонение ± 7,5%.
Измерение средней массы суппозиториев проводили для трех разных серий препарата "Биопрост". Результаты измерений сведены в таблицу 5:
Таблица 5. Определение средней массы суппозиториев.
№ опытаУсловия выбораМасса, гизм
(ФСП)S2 изм
(S2ФСП)Sизм
(SФСП)Sизм
(SФСП)изм
(ФСП)Eотн изм
(Eотн ФСП)(±)изм
((±))ФСПизмеряемаяпо ФСП 1. Серия
№ 0103071,952,01,97
(2,0)0,000433
(0)0,020817
(0)0,00658
(0)0,03
(0)0,76
(0)1,97±0,01
(2,0±0,0)2. 1,962,0 3. 1,952,0 4. 1,962,0 5. 1,952,0 6. 1,962,0 7. 1,962,0 8. 1,962,0 9. 1,962,0 10. 1,962,0 11. 1,992,0 12. 1,992,0 13. 1,992,0 14. 1,992,0 15. 1,992,0 16. 1,972,0 17. 1,972,0 18. 1,972,0 19. 1,972,0 20. 1,972,0 21. Серия
№ 0303071,962,01,97
(0)0,000378
(0)0,019437
(0)0,00615
(0)0,03
(0)0,71
(0)1,97±0,01
(2,0±0,0)22. 1,992,0 23. 1,982,0 24. 1,962,0 25. 1,952,0 26. 1,962,0 27. 1,972,0 28. 1,962,0 29. 1,972,0 30. 1,962,0 31. 1,972,0 32. 1,992,033. 1,952,0 34. 1,992,0 35. 1,992,0 36. 1,972,0 37. 1,972,0 38. 1,952,0 39. 1,972,0 40. 1,992,0 41. Серия
№ 0503071,992,01,97
(0)0,000411
(0)0,020276
(0)0,00641
(0)0,03
(0)0,74
(0)1,97±0,01
(2,0±0,0)42. 1,962,0 43. 1,982,0 44. 1,952,0 45. 1,972,0 46. 1,962,0 47. 1,972,0 48. 1,952,0 49. 1,982,0 50. 1,962,0 51. 1,992,0 52. 1,962,0 53. 1,952,0 54. 1,992,0 55. 1,982,0 56. 1,972,0 57. 1,962,0 58. 1,952,0 59. 1,982,0 60. 1,982,0 Правильность характеризует близость результатов испытаний, полученных данным методом, к истинному значению. Показателем правильности служит разница среднего арифметического и истинного значения.
= / - µ/,
Если <, то систематические ошибки отсутствуют, и можно сделать вывод о правильности метода.
В соответствии с требованиями ФСП ( = 0) данную методику можно считать правильной.
Точность (сходимость) характеризует близость отдельных измерений к их среднему арифметическому значению. Она выражается величиной стандартного отклонения S.
Согласно ФСП стандартное отклонение S= 0. В соответствии с рассчитанной величиной S методика обладает высокой степенью точности получаемых результатов.
3. Определение температуры плавления.
3.1. Цель: проведение валидации методики определения температуры плавления суппозиториев "Биопрост". 3.2. Материалы, оборудование, реактивы
Используемые приборы и материалы:
1. Мешалка магнитная ММ-5
2. Термометр ртутный стеклянный с ценой деления 0,5 0С
3. Стакан стеклянный 500 мл ГОСТ 1770-74
4. Стакан стеклянный 100 мл ГОСТ 1770-74
3.3. Методика проведения эксперимента:
Не выше 370С. Метод 2а (ГФ XI, вып. 1, с. 16)
Измерение температуры плавления суппозиториев проводили для трех разных серий препарата "Биопрост". Результаты измерений сведены в таблицу 6:
Таблица 6. Определение температуры плавления суппозиториев.
№ опытаУсловия выбораТемпература плавления, 0СS2SSEотн±1. Серия
№ 01030732,532,5000-032,5±0,02. 32,53. 32,54. Серия
№ 03030732,532,5000-032,5±0,05. 32,56. 32,57. Серия
№ 05030732,532,5000-032,5±0,08. 32,5 9. 32,5 Правильность. В соответствии с представленными данными методику можно считать правильной.
Точность (сходимость) характеризует близость отдельных измерений к их среднему арифметическому значению. Она выражается величиной стандартного отклонения S. S = 0. В соответствии с рассчитанной величиной S методика обладает высокой степенью точности получаемых результатов.
4. Определение кислотного числа.
4.1. Цель: проведение валидации методики определения кислотного числа суппозиториев "Биопрост". 4.2. Материалы, оборудование, реактивы
Используемые приборы и материалы:
1. Колба коническая 250 мл ГОСТ 1770-74.
2. Бюретка 25 мл. ГОСТ 29251-91.
Используемые реактивы:
1. Спирт этиловый 95%. ГОСТ 5962-67
2. Диэтиловый эфир. ОСТ 84-2006-88.
3. Фенолфталеин ГОСТ 5850-72.
Используемые растворы:
1. Смесь спирт этиловый 95%: диэтиловый эфир (1:1).
2. Раствор фенолфталеина: 1% раствор в 95% спирте (ГФ XI, вып. 2, с. 98).
3. Раствор гидроксида натрия 0,1 М. Приготовлен из стандарт-титра. ТУ 2642-001-33813273-97.
4.3. Методика проведения эксперимента:
Кислотное число должно быть не более 4,0 (ГФ XI, вып. 1, с. 191).
Точную навеску (около 6 г) предварительно разрезанного на куски суппозитория помещают в коническую колбу вместимостью 250 мл, прибавляют 40 мл смеси спирта этилового 95% и диэтилового эфира (1:1), предварительно нейтрализованной по фенолфталеину 0,1 М раствором гидроксида натрия.
Прибавляют 1 мл раствора фенолфталеина и титруют при постоянном перемешивании 0,1 М раствором гидроксида натрия до появления розового окрашивания, не исчезающего в течение 30 с.
Кислотное число (Кч) вычисляют по формуле:
, где
5,61 - количество мг гидроксида калия, соответствующее 1 мл 0,1 М раствора гидроксида натрия;
V - объем, 0,1 М раствора гидроксида натрия, пошедшего на титрование, мл;
М - навеска препарата, г.
Измерение кислотного числа суппозиториев проводили для трех разных серий препарата "Биопрост". Результаты измерений сведены в таблицу 7:
Таблица 7. Определение кислотного числа суппозиториев.
№ опытаУсловия выбораМ, гV, млКчS2SSEотн±1. Серия
№ 0103075,87901,01,01,0000-01,0±0,02. 1,11,03. 1,01,04. Серия
№ 0303075,89971,21,11,00,0050,070711 0,040825-17,551,0±0,25. 1,11,06. 1,11,07. Серия
№ 0503075,88541,00,91,00,0050,0707110,040825-17,551,0±0,28. 1,21,0 9. 1,11,0 Правильность. В соответствии с представленными данными методику можно считать правильной.
Точность (сходимость) характеризует близость отдельных измерений к их среднему арифметическому значению. Она выражается величиной стандартного отклонения S (данные представлены в таблице).
В соответствии с представленными данными методика имеет достаточно высокую точность.
Специфичность - способность измерять точно и селективно определяемое вещество в присутствии примесных компонентов. Специфичность оценивается по погрешности определения.
Определение кислотного числа методом алкалиметрического титрования в присутствии примесных компонентов (витаминов А, Е и др. маслорастворимых компонентов) обуславливает высокую точность и правильность, что позволяет считать методику специфичной.
Предел количественного обнаружения - минимальная концентрация вещества в образце, которая может быть определена с определенной точностью в условиях анализа. Для данного метода анализа предел количественного обнаружения кислотного числа составляет 0,1.
Диапазон - интервал между верхними и нижними уровнями, для которых продемонстрировано, что они определяются с правильностью, точностью и линейностью, при использовании данного метода. Для данного метода анализа диапазон количественного определения составляет от 0,1 до 10,0.
5. Количественное определение тимола.
5.1. Цель: проведение валидации методики количественного определения тимола в суппозиториях "Биопрост".
5.2. Материалы, оборудование, реактивы
Используемые приборы и материалы:
1. Газовый хроматограф Pue-Unicam 304, колонка 1,5m 2mm с сорбентом 10% Apiezon-L on 100-1200 mesh Diatoom C-AW (поверен 02.08.06)
2. Колба коническая на 100 мл ГОСТ 1770-74
3. Колба мерная на 25 мл ГОСТ 1770-74
Используемые реактивы:
Хлороформ TУ - 2631-066-44493179-01
5.3. Методика проведения эксперимента:
Взвешивают предварительно разрезанный на кусочки 1 суппозиторий (точная навеска), переносят в мерную колбу вместимостью 25 мл и растворяют в хлороформе. От полученного раствора отбирают пробу для ввода в хроматограф.
Анализ проводят в газовом хроматографе Pue-Unicam 304, колонка 1,5m 2mm с сорбентом 10% Apiezon-L on 100-1200 mesh Diatoom C-AW в следующих условиях: температура колонки 1650С; температура испарителя -2000С; скорость газа - носителя (азот) - 20 мл/мин. Объем пробы - 1 мкл. Расчет содержания тимола в граммах на одну свечу проводят по формуле:
, где
m0 - навеска рабочего стандартного образца (РСО) тимола, взятая для приготовления раствора, в граммах;
S0 - площадь пика тимола на хроматограмме раствора РСО тимола;
m - навеска препарата, в граммах;
S - площадь пика тимола на хроматограмме исследуемого раствора препарата;
m1 - средняя масса свечи, в граммах.
Содержание тимола должно быть от 90 мг до 110 мг на одну свечу. Приготовление РСО тимола. Около 0,16 г (точная навеска) тимола (ФС 42-1010-75) помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в хлороформе, объем доводят до метки хлороформом и перемешивают. От полученного раствора отбирают пробы для ввода в хроматограф. Раствор используют свежеприготовленным.
Проверка пригодности хроматографической системы.
Хроматографическая система считается пригодной, если выполняются следующие условия:
* эффективность хроматографической колонки, рассчитанная по пику тимола на хроматограммах раствора РСО тимола должна быть не менее 2500 теоретических тарелок (ГФXI, вып 1, с. 110);
* относительное стандартное отклонение, рассчитанное для площади пика тимола должно быть не более 2% (ГФ XI, вып. 1, с. 110).
Результаты исследований представлены в таблице 8.
Таблица 8. Определение количественного содержания тимола.
№ опытаУсловия выбораПлощадь пикаКонцентрация, мгS2SSEотн+1. Серия
№ 0103076617,30,0970,0970000,00300,0972. 6605,50,0973. 6598,60,0974. Серия
№ 0303076725,30,0990,0990000,00100,0995. 6715,80,0996. 6734,70,0997. Серия
№ 0503076735,80,0990,0990000,00100,0998. 6794,90,0996778,20,099
Правильность характеризует близость результатов испытаний, полученных данным методом, к истинному значению. Показателем правильности служит разница среднего арифметического и истинного значения = / - µ/,
По данным произведенных расчетов можно сделать вывод о правильности метода.
Точность (сходимость) характеризует близость отдельных измерений к их среднему арифметическому значению. Она выражается величиной стандартного отклонения S. В соответствии с рассчитанной величиной S методика обладает высокой степенью точности получаемых результатов.
Специфичность способность измерять точно и селективно аналитически определяемое вещество в присутствии компонентов, которые могут ожидаться в матрице образца (примеси, родственные химические соединения), также оценивается погрешность их определения.
Линейность
Данные результатов анализа по пяти различным концентрациям представлены в таблице 9.
Таблица 9. № опытаКонцентрация г/ 100 млПлощадь пикаS2SSEотн+1. 0,081709,361741,7613026,29114,132843,13813-6,0678891636,0772. 1675,56 3. 1892,11 4. 1695,39 5. 1651,35 6. 1649,8 7. 1918,79 8. 0,122709,812580,4944149,35164,4154524,34675-2,3115552520,8459. 2554,41 10. 2525,28 11. 2596,98 12. 2519,46 13. 2593,62 14. 2563,9 15. 0,162788,392869,1167060,69184,0279231,75957-2,7120182791,30516. 2858,4117. 2863,2718. 2860,6019. 3050,0520. 2822,8821. 2842,2122. 0,203413,483440,659715,162326,7425210,10772-0,7197443415,89523. 3406,10 24. 3452,99 25. 3884,52 26. 3450,59 27. 3429,14 28. 3447,79 29. 0,244496,514332,147097,32784,2456431,84186-1,8007864254,12730. 4334,00 31. 4225,63 32. 4309,91 33. 4335,11 34. 4273,85 35. 4349,97 По найденным средним значениям был проведен расчет линии регрессии методом наименьших квадратов для результатов с различными концентрациями аналита.
Наклон регрессионной линии дает математическую степень линейности (коэффициент корреляции R2 = 0,9745, перекрывание с осью Y в точке 576, 52, тангенс угла наклона прямой 15102).
Заключение
Валидация следующих аналитических методик:
- Подлинность
- Средняя масса суппозитория
- Температура плавления
- Кислотное число
- Количественное определение
по оценке качества препарата "Биопрост" согласно ФСП 42-0470-3909-03 и изменению №1 по характеристикам правильность, точность, специфичность, предел количественного определения, линейность, диапазон показала, что все представленные в ФСП 42-0470-3909-03 и изменению №1 методики достоверно обуславливают подтверждение подлинности тимола, α-токоферола, олеиновой и линолевой кислот, а также с высокой правильностью, точностью, специфичностью позволяют количественно определить содержание тимола в суппозиториях и кислотное число. Такие характеристики как температура плавления и средняя масса суппозиториев в соответствии с методиками ФСП 42-0470-3909-03 и изменению №1 определяются с высокой степенью правильности и точности.
Исполнители:
ст. науч. сотр. ИЛ "Провизор", к.х.н.Краснова С.А.
ст. науч. сотр. ИЛ "Провизор", к.х.н.Волков А.А.
ассистент кафедры фармацевтической химии и фармакогнозии, к.х.н.Гусихина М.С.
ассистент кафедры фармацевтической химии и фармакогнозииЗимнякова О.Е.
доцент кафедры фармацевтической
химии и фармакогнозии, к.х.н.Селехов В.В.
зав. кафедрой фармацевтической
химии и фармакогнозии, профессор, д.х.н.Мельникова Н.Б.
1
Документ
Категория
Рефераты
Просмотров
88
Размер файла
556 Кб
Теги
validatsii, bioprost, otchet
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа