close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Эффективность коррекции «Фосфогливом» в различных лекарственных формах нарушений структурно-функциональных свойств эритроцитов при острой токсической гепатопатии

код для вставкиСкачать
ФИО соискателя: Белоконова Оксана Николаевна Шифр научной специальности: 14.03.06 - фармакология, клиническая фармакология Шифр диссертационного совета: Д 208.039.03 Название организации: Курский государственный медицинский университет Адрес организ

На правах рукописи
Белоконова Оксана Николаевна
ЭФФЕКТИВНОСТЬ КОРРЕКЦИИ "ФОСФОГЛИВОМ" В РАЗЛИЧНЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМАХ НАРУШЕНИЙ СТРУКТУРНО-ФУНКЦИОНАЛЬНЫХ СВОЙСТВ ЭРИТРОЦИТОВ ПРИ ОСТРОЙ ТОКСИЧЕСКОЙ ГЕПАТОПАТИИ
14.03.06 - фармакология, клиническая фармакология
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук
Курск - 2012
Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования "Курский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации
Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор,
заслуженный деятель науки РФ Конопля Александр Иванович
Официальные оппоненты: Филиппенко Николай Григорьевич - доктор медицинских наук, профессор, Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Курский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации, заведующий кафедрой клинической фармакологии Филиппова Ольга Всеволодовна - доктор медицинских наук, Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Воронежский государственный университет", профессор кафедры фармации последипломного образования Учебного центра "Фармация" Ведущая организация: Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н.И. Пирогова" Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации
Защита диссертации состоится "_29_" ___июня___ 2012 г. в "14:30" часов на заседании диссертационного совета Д 208.039.03 при Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования "Курский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации (305041, г. Курск, ул. К. Маркса, 3).
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГБОУ ВПО КГМУ Минздравсоцразвития России.
Автореферат разослан "_28_" __мая__ 2012 г. Ученый секретарь диссертационного советаПашин Евгений Николаевич
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность проблемы. В настоящее время имеет место существенное учащение токсических, в том числе и лекарственных, поражений различных органов и тканей. Значение этих поражений возросло в связи с либерализацией доступа населения к медикаментам, появлением в свободной продаже большого количества безрецептурных лекарственных средств, широким распространением агрессивной рекламы при отсутствии объективной информации о возможном побочном действии (Конопля Н.А., 2001; Топорков А.С. , 2004; Колпаков М.А. и др., 2006).
Известно, что поражения печени, как инфекционной, так и токсической этиологии, характеризуются нарушением иммунной реактивности организма в отношении Т-зависимых антигенов (Конопля А.И., 2008; Долгарева С.А., 2011). Важное значение имеет нестабильность течения патологического процесса как при повышении иммунной реактивности организма на эндо- и экзогенные антигены (активация функции клеток-киллеров, усиление аутоиммунных компонентов заболевания), так и при снижении иммунного ответа (повышение чувствительности к возбудителям инфекционных заболеваний, нарушение иммунологической регуляции процессов физиологической и репаративной регенерации) (Курилович С.А., 2010).
Сегодня можно говорить о том, что эритроциты вовлекаются в пато-логический процесс не только при гематологических заболеваниях, но и претерпевают серьезные изменения структуры и функции при болезнях разного генеза: злокачественных новообразованиях, воспалении, нарушениях обмена веществ, заболеваниях сердечно-сосудистой системы, психических расстройствах, инфекционной патологии и др. (Новицкий В.В., Рязанцева Н.В., 2002; Рязанцева Н.В. с соавт., 2002, 2003; Терещенко С.Ю., 2002; Долгарева С.А. и др., 2011). В настоящее время остается малоизученной роль изменений физико-химических параметров эритроцитов в условиях острой токсической гепатопатии, отсутствуют данные об эффективных способах их фармакологической и нефармакологической коррекции. Большой интерес авторов привлекают лекарственные препараты на основе глицирризиновой кислоты, поскольку это соединение с выраженной иммуномодулирующей, противовирусной активностью. При этом отсутствуют экспериментальные, а тем более и клинические исследования, посвященные изучению влияния данной группы препаратов на структурно-функциональные свойства эритроцитов (Коротаева Т.В., 2004).
Цель работы: разработка способов фармакологической коррекции с использованием "Фосфоглива" в различных лекарственных формах нарушений структурно-функциональных свойств эритроцитов при экспериментальной острой токсической гепатопатии Задачи исследования. 1. Оценить изменения белкового и липидного спектра мембран эритроцитов в условиях острого токсического поражения печени, вызванного индометацином и четыреххлористым углеродом.
2. Определить сорбционную способность эритроцитов на различных моделях острого токсического поражения печени.
3. Сопоставить влияние "Фосфоглива", "Фосфоглива Форте" и "Фосфоглива" для инъекций на содержание белков и липидов в мембране эритроцитов, сорбционную способность эритроцитов при остром индометациновом поражении печени. 4. Определить эффективность "Фосфоглива" в различных лекарственных формах в коррекции нарушений белкового и липидного спектра мембран эритроцитов, их сорбционных свойств в условиях гепатопатии, вызванной четыреххлористым углеродом. 5. Провести сравнительную оценку фармакологической коррекции нарушений структурно-функциональных свойств эритроцитов с использованием "Фосфоглива" в различных лекарственных формах при токсическом поражении печени, вызванном введением индометацина и четыреххлористого углерода. Научная новизна. Впервые установлены выраженные нарушения белкового и липидного спектра мембран эритроцитов и их сорбционных свойств в условиях острого индометацинового и тетрахлорметанового поражения печени. Впервые выявлено корригирующее влияние "Фосфоглива", "Фосфоглива Форте" и "Фосфоглива" для инъекций нарушений содержания белков и липидов в мембране эритроцитов, сорбционные свойства красных клеток крови при остром токсическом поражении печени, вызванном индометацином и четыреххлористым углеродом. Впервые установлено, что в условиях острой индометациновой токсической гепатопатии более эффективна в коррекции нарушений структурно-функциональных свойств эритроцитов инъекционная форма "Фосфоглива", а при поражении печени тетрахлорметаном - "Фосфоглив" для инъекций и "Фосфоглив Форте".
Определено, что критериями прогнозирования и оценки выраженности острого токсического поражения печени различными по химической структуре и механизму повреждающего действия токсикантами являются: сорбционная способность эритроцитов, содержание в мембране β-спектрина и триглицеридов. Практическая значимость. Установлена зависимость выраженности нарушений структурно-функциональных свойств эритроцитов от химической природы и механизма повреждающего действия гепатотропных токсикантов. Экспериментально доказана эффективность "Фосфоглива" в различных лекарственных формах в коррекции нарушений белкового и липидного спектра мембраны красных клеток крови, их сорбционных свойств на различных моделях острой токсической гепатопатии. Применение "Фосфоглива", в отличие от "Фосфоглива Форте" и инъекционной формы препарата, в условиях экспериментального острого токсического поражения печени оказалось менее эффективным вне зависимости от химической природы и механизма повреждающего действия гепатотропного токсиканта. Расширены рекомендации назначения в клинической практике "Фосфоглива" для инъекций с целью коррекции нарушений структурно-функциональных свойств эритроцитов при остром токсическом поражении печени.
Показана перспектива дальнейшего совершенствования способов фармакологической коррекции нарушений структурно-функциональных свойств эритроцитов при заболеваниях печени. Материалы диссертации вошли в учебные рабочие программы и используются в лекционных курсах и на практических занятиях ряда кафедр Курского, Российского, Самарского государственных медицинских университетов и академий и медицинского факультета Белгородского государственного университета. Положения, выносимые на защиту. 1. Структурно-функциональные свойства эритроцитов при остром токсическом поражении печени изменяются дифференцированно в зависимости от химической природы и механизма повреждающего действия гепатотропного токсиканта. 2. При острой токсической индометациновой гепатопатии наибольшей эффективностью в коррекции нарушений белкового и липидного спектров мембраны и сорбционных свойств эритроцитов обладает "Фосфоглив" для инъекций. 3. У животных с тетрахлорметановым острым токсическим поражением печени эффективными в коррекции структурно-функциональных свойств красных клеток крови являются инъекционная форма "Фосфоглива" и "Фосфоглив Форте". 4. Для прогнозирования и оценки степени выраженности острого токсического поражения печени различными по химической структуре и механизму повреждающего действия токсикантами, наиболее диагностически ценными являются определение сорбционной способности эритроцитов и содержание в мембране β-спектрина и триглицеридов. Апробация работы. Основные положения диссертации представлены на XVI Российском национальном конгрессе "Человек и лекарство" (Москва, 2009), IV Международной научной конференции молодых ученых-медиков (Курск, 2010), XV Международном конгрессе по реабилитации в медицине и иммунореабилитации (Дубай, 2010), Межрегиональном форуме "Актуальные вопросы аллергологии и иммунологии - междисциплинарные проблемы" (Санкт-Петербург, 2010), совместном заседании кафедр фармакологии, биологической химии, хирургических болезней № 2, акушерства и гинекологии Курского государственного медицинского университета (2012).
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 8 работ, 6 из которых в рекомендуемых изданиях ВАК РФ; в работах содержится полный объем информации, касающейся темы диссертации.
Личный вклад автора. Автором составлены план и дизайн исследования, проведен анализ отечественных и зарубежных источников литературы по теме диссертации, лично проводились экспериментальные исследования, анализировались показатели структурно-функциональных свойств эритроцитов. Диссертантом самостоятельно выполнялся анализ и обобщение результатов, составление таблиц и графиков, написание диссертации, сопоставление с литературными данными. Доля автора в совместных публикациях составила 75-95%. Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 119 страницах машинописного текста, иллюстрирована 9 таблицами и 9 рисунками, состоит из введения, обзора литературы (2 главы), описания методов исследования, изложения собственных результатов (3 главы), заключения, выводов, практических рекомендаций, библиографического указателя, включающего 106 отечественных и 97 иностранных источников.
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
Материалы и методы исследования Экспериментальные исследования. Эксперименты проводили на 296 здоровых половозрелых крысах линии Вистар, массой 150-200 г. В опытах использовали животных, прошедших карантинный режим вивария Курского государственного медицинского университета и не имевших внешних признаков каких-либо заболеваний. Все животные содержались в одинаковых условиях, на обычном пищевом режиме. Для получения статистически достоверных результатов группы формировали из 10-12 животных. В контрольные и опытные группы входили животные одного возраста, полученные из питомника РАМН "Столбовая" одновременно. Разброс в группах по исходной массе не превышал 10%. Все исследования проводили в одно и то же время суток, с 8 до 12 ч, с соблюдением принципов, изложенных в Конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и других целей (г. Страсбург, Франция, 1986), и согласно правилам лабораторной практики РФ (приказ МЗ РФ № 267 от 19.06.2003 г.). Животных умерщвляли передозировкой средств для наркоза через 24 часа после последнего введения препарата и/или токсиканта. Дизайн исследования. Способы введения и дозировки фармакологических препаратов. Расчет дозировок препаратов для введения экспериментальным животным проводили при помощи коэффициентов пересчета доз (мг/кг на мг/м2) для крысы и человека в зависимости от массы тела (FreIreich E.J., 1966) (табл. 1). Токсическое поражение печени моделировали внутрижелудочным введением индометацина в дозе 5 мг/кг, внутрижелудочно, трехкратно, через 24 часа (Саратиков А.С., 1995) или внутримышечным введением 3 мл/кг четыреххлористого углерода в виде 50% раствора в оливковом масле, трехкратно, через 24 часа (Алексеева Н.Н., 1991). Токсикант вводили в последние 3 дня получения препаратов "Фосфоглива". Таблица 1
Использованные препараты, дозировки, способы и кратность введения интактным крысам и животным с острым токсическим поражением печени
ПрепаратДоза, мг/кг, в пересчете на:ВведениеЛецитинГКСпособКоличествоКратность"Фосфо-глив"1500800внутрижелудочно в 1% крахмальной суспензии14Через 24 часа"Фосфоглив Форте"1500240внутрижелудочно в 1% крахмальной суспензии14Через 24 часа"Фосфо-глив" для инъекций1500600внутрибрюшинно14Через 24 часа Информация о лекарственных формах "Фосфоглива", изученных в работе. "Фосфоглив" - препарат, состоящий из липоида С80 (0,065 г), глицирата (0,035 г), микрокристаллической целлюлозы HP 101 (0,08 г), кальция карбоната (0,2636 г), аэросила А300 (0,0032), кальция стеарата (0,0032 г), талька (0,01). "Фосфоглив Форте" - состоит из липоида PPL-400 (0,300 г), глицирата (0,065 г), бутилгидрокситолуола (0,0001 г), масла подсолнечного (0,0229 г), спирта этилового ректификата (0,012 г).
"Фосфоглив" для инъекций - лиофилизированный порошок, состоящий из лецитина (0,5 г) и глицирризиновой кислоты (0,2 г). Исследование структурно-функциональных свойств эритроцитов. Эритроциты получали из 5 мл гепаринизированной крови по методу E. Beutler (1985) с незначительной модификацией. Цельную кровь отстаивали дважды в 10 мМ Na-фосфатном буфере (рН=7,4), содержащем 0,9% хлорида натрия и 3% декстрана Т-500, в течение 30 минут при температуре 37ºС. После этого кровь центрифугировали, удаляли надосадочную жидкость аспирацией. Эритроцитарную массу подвергали дополнительной очистке на хроматографической колонке через НВS-целлюлозу.
Определялась общая сорбционная способность эритроцитов, обусловленная наружной архитектоникой клеточной мембраны (Тогайбаев А.А. и др., 1988), сорбционная емкость гликокаликса эритроцитов для альцианового синего (Семко Г.А., 1998) и уровень малонового диальдегида в эритроцитах (Банкова В.В. и др., 1987). Мембраны эритроцитов получали методом G.T. Dodge (1963), разрушая эритроциты осмотическим и механическим гемолизом в 10 мМ Na-фосфатном буфере, после чего проводили отмывку теней от гемоглобина в 10 мМ и 5 мМ Na-фосфатном буфере. Электрофорез проводили в присутствии додецилсульфата натрия в вертикальных пластинах полиакриламидного геля по методу U.K. Laemmli (1970). Белки окрашивали кумаси голубым R-250 по модифицированной методике G. Fairbanks (1971). Количественное содержание белковых фракций рассчитывали через площадь и известную концентрацию яичного альбумина, выступающего в качестве маркерного белка. Полученные значения пересчитывали на 1 мг общего белка в исследуемом образце сухих мембран эритроцитов. Липиды выделяли методом тонкослойной хроматографии (Крылов В.И. и др., 1984).
Статистическая обработка полученных результатов. Статистическую обработку результатов исследования проводили, используя параметрические и непараметрические методы, факторный анализ, кластерный анализ, критерий χ2, а также коэффициент ранговой корреляции Спирмена (Гублер Е.Г., Генкин А.Р., 1973; Лакин Г.Ф., 1980). Статистически значимыми считали различия с p<0,05. ___________________________
Примечание. Определение белкового и липидного спектра мембран эритроцитов проведено в лаборатории иммуноферментного анализа НИИ экологической медицины Курского государственного медицинского университета, за что выражаем сотрудникам соответствующего подразделения глубокую признательность.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Структурно-функциональные свойства мембраны эритроцитов при четыреххлористом токсическом поражении печени и использовании "Фосфоглива". При ОТПП у экспериментальных животных снижается представительность в мембране эритроцитов обеих подфракций спектрина, анкирина, анионтранспортного белка (АТБ), белка полосы 4.5, глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы (Г-3-ФД), тропомиозина, глутатион-S-трансферазы и повышается уровень белка полосы 4.1 и паллидина (табл. 2). Кроме этого, в данной группе животных снижена ССЭ, СЕГ и повышена концентрация внутри красных клеток крови малонового диальдегида (МДА) (табл. 2).
В группе животных, получавших "Фосфоглив" внутрь, отмечалась частичная коррекция представительности α-спектрина, анкирина, АТБ, белка полосы 4.5, Г-3-ФД. Изменения белкового спектра на фоне применения "Фосфоглива" приводят к повышению СЕГ до уровня нормы (табл. 2).
При использовании "Фосфоглива Форте" у животных в условиях ОТПП выявлена нормализация уровня β-спектрина, белка полосы 4.1, СЕГ, коррекция не до уровня нормы α-спектрина, анкирина, белка полосы 4.5, Г-S-Т, ССЭ и концентрация внутри клеток МДА (табл. 2).
Инъекции препарата "Фосфоглив" нормализовали у животных, получавших четыреххлористый углерод, представительность β-спектрина, белка полос 4.1 и 4.5, паллидина, Г-3-ФД, Г-S-Т, СЕГ и корригировали другие измененные показатели структурно-функциональных свойств эритроцитов (табл. 2).
Таким образом, в условиях ОТПП четыреххлористым углеродом выявлены изменения целого ряда белковых фракций в мембране эритроцитов и ее сорбционных свойств, а использование "Фосфоглива" позволяет корригировать и нормализовать выявленные изменения, при этом максимальной эффективность обладает форма "Фосфоглива" для инъекций.
После отравления четыреххлористым углеродом у животных в эритроцитарной мембране повышен уровень холестерина, свободных жирных кислот, моно- и диглицеридов, лизофосфатидилхолина и снижена концентрация эфиров жирных кислот, триглицеридов, фосфатидилхолина и сфингомиелина (табл. 3).
Таблица 2
Структурно-функциональные свойства мембраны эритроцитов при ОТПП ЧХУ(M±m) Показатели12345Острое токсическое поражение печени (ОТПП) ЧХУКонтрольОТПП ЧХУ ОТПП ЧХУ + "Фосфоглив"ОТПП ЧХУ + "Фосфоглив форте"ОТПП ЧХУ + "Фосфоглив" для инъекцийα-Спектрин, мг%110,3±5,2174,3±3,8*181,5±3,22*1,285,6±4,2*1,290,3±3,71*1,2β-Спектрин, мг%93,1±4,3179,5±4,3*182,3±4,7*188,1±4,05*290,2±5,0*2Анкирин, мг%71,0±2,0452,6±2,74*162,1±4,21*1,259,4±3,05*1,264,1±3,08*1,2Анионтранспортный белок, мг% 169,6±6,22142,7±5,47*1156,3±4,8*1,2150,6±5,91*1158,2±4,97*1,24.1, мг%81,4±4,196,1±5,3*185,7±4,983,1±3,14*284,2±4,81*2Паллидин, мг%62,13±4,0974,7±4,8*167,8±5,169,3±4,9260,31±3,9*24.5, мг%69,79±3,1352,6±3,82*160,1±3,72*1,261,1±2,93*1,264,5±5,17*2Дематин, мг%41,2±2,0545,6±3,3340,4±2,746,9±4,7139,5±3,75Актин, мг%101,1±4,15117,7±5,64108,7±4,399,6±8,21112,6±6,41Глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназа, мг%54,3±2,040,7±3,14*146,4±2,07*1,245,9±3,12*150,1±3,84*2Тропомиозин, мг%65,3±3,0956,2±3,81*160,7±3,1562,7±4,163,2±3,7Глутатион-S-трансфераза, мг%59,2±2,4544,3±2,91*146,4±3,31*151,7±3,0*1,255,6±4,71*2,3СЕГ, 10-12 г/эр.2,4±0,121,8±0,09*12,1±0,19*22,4±0,20*22,2±0,10*2ССЭ, %46,2±3,012,2±4,84*119,6±1,21*121,5±2,37*1,228,6±2,89*1-4МДА, нмоль * 106 эр.3,21±0,097,27±0,39*16,06±0,25*1,25,91±0,29*1,24,1±0,17*1-4Примечание. Звездочкой отмечены достоверные отличия средних арифметических (p < 0,05); цифры рядом со звездочкой - по отношению к показателям какой группы даны эти различия; ТЛ - традиционное лечение.
Таблица 3
Липидный спектр мембраны эритроцитов при ОТПП ЧХУ (мг%, M±m) Показатели12345Острое токсическое поражение печени (ОТПП) ЧХУКонтрольОТПП ЧХУОТПП ЧХУ + "Фосфоглив"ОТПП ЧХУ + "Фосфоглив форте"ОТПП ЧХУ + "Фосфоглив" для инъекцийХолестерин43,0±2,1454,4±2,39*148,4±2,41*1,247,3±2,08*1,245,6±1,97*2Эфиры холестерина38,03±2,2132,6±1,74*134,6±1,92*133,7±2,03*135,6±2,52Свободные жирные кислоты4,3±0,175,09±0,12*14,81±0,15*1,24,52±0,18*24,42±0,16*2Моно- и диглицериды10,43±0,4211,31±0,38*110,3±0,24*29,45±0,41*210,21±0,27*2Триглицериды15,63±1,1711,21±1,31*116,2±1,12*217,4±2,31*216,31±1,38*2Фосфатидилхолин24,0±1,8717,1±2,01*117,31±1,24*118,32±1,12*120,41±1,29*1-4Фосфатидилэтаноламин24,63±2,1222,3±2,0723,2±1,3825,6±2,3324,8±2,51Лизофосфатидилхолин22,3±0,1324,7 ±0,23*121,9±0,31*222,8±0,18*222,71±0,35*2Фосфатидилинозитол5,1±0,064,94±0,125,2±0,145,07±0,174,88±0,22Сфингомиелин11,8±0,499,31±0,33*19,07±0,19*110,52±0,25*1-312,04±0,51*2-4 Примечание. Звездочкой отмечены достоверные отличия средних арифметических (p < 0,05); цифры рядом со звездочкой - по отношению к показателям какой группы даны эти различия; ТЛ - традиционное лечение.
Использование "Фосфоглива" внутрь у животных, подвергнутых воздействию четыреххлористого углерода, позволило снизить, но не до уровня нормы, концентрацию в эритроцитарной мембране холестерина и свободных жирных кислот, нормализовать уровень моно- и диглицеридов, лизофосфатидилхолина и триглицеридов (табл. 3).
Применение у животных в условиях ОТПП "Фосфоглива Форте" нормализует уровень в мембране красных клеток крови свободных жирных кислот, моно- и диглицеридов, лизофосфатидилхолина и триглицеридов, возрастает, но не до уровня нормы содержание холестерина и сфингомиелина, (табл. 3).
Максимальной эффективностью у данной группы животных обладает "Фосфоглив" для инъекций - его использование нормализует липидный спектр в мембране эритроцитов, за исключением концентрации фосфатидилхолина, уровень которого возрастает, но не до уровня нормы (табл. 3).
Мембранопротективная эффективность "Фосфоглива" в различных лекарственных формах при индометациновом токсическом поражении печени. В условиях ОТПП, вызванного введением индометацина, у животных установлено снижение представительности α-спектрина, анкирина, белка полосы 4.5, Г-3-ФД, триглицеридов, сфингомиелинов и повышение количества белка полосы 4.1, паллидина, холестерина, свободных жирных кислот, что приводит к снижению общей сорбционной способности эритроцитов и накоплению в них МДА (рис. 1).
Введение животным "Фосфоглива" per os на фоне токсического воздействия индометацина позволило нормализовать в мембране красных клеток крови концентрацию триглицеридов и частично корригировать представительность α-спектрина, анкирина, белка полосы 4.5, глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы, свободных жирных кислот и МДА внутри клеток (табл. 4).
Применение "Фосфоглива Форте" у животных в условиях ОТПП дополнительно, в отличие от предыдущей группы животных, нормализует в эритроцитарной мембране уровень анкирина и корригирует представительность паллидина и повышает, но не до уровня нормы, ССЭ (табл. 4, 5).
Рис. 1. Представительность белков и липидов в мембране эритроцитов, ССЭ, СЕГ и концентрация МДА у животных в условиях ОТПП.
Примечания.
1. Радиус окружности - показатели у контрольной группы животных (1 группа).
2. - показатели у животных с ОТПП (2 группа).
3. - р < 0,05 между показателями по отношению к 1 группе.
4. АТБ - анионтранспортный белок, Г-3-ФД - глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназа, Г-S-Т - глутатион-S-трансфераза; ЭХ - эфиры холестерина, СЖК - свободные жирные кислоты, МДГ - моно- и диглицериды, ТГ - триглицериды, ФХ - фосфатидилхолин, ФЭ - фосфатидилэтаноламин, ЛФХ - лизофосфатидилхолин, ФИ - фосфатидилинозитол, СМ - сфингомиелин.
Инъекции "Фосфоглива" более эффективно корригируют и нормализуют нарушенные показатели белково-липидного спектра мембран красных клеток крови в условиях ОТПП: нормализуют количество паллидина, белка полосы 4.5, Г-3-ФД, холестерина и сфингомиелина, корригируя остальные изменённые показатели, за исключением представительности белка полосы 4.1 (табл. 4, 5).
Таблица 4
Структурно-функциональные свойства мембраны эритроцитов при ОТПП ИМ (M±m) Показатели12345Острое токсическое поражение печени (ОТПП)КонтрольОТПП ИМОТПП ИМ + "Фосфоглив"ОТПП ИМ + "Фосфоглив Форте"ОТПП ИМ + "Фосфоглив" инъекцииα-Спектрин, мг%110,3±5,2163,8±3,2*181,6±3,11*1,285,4±4,1*1,287,1±3,2*1,2β-Спектрин, мг%93,1±4,3189,7±4,592,3±4,792,9±4,0591,1±5,0Анкирин, мг%71,0±2,0457,4±2,3*163,7±4,1*1,269,4±4,25*269,8±3,1*2Анионтранспортный белок, мг% 169,6±6,22172,7±5,5166,3±5,9170,6±8,9168,2±4,64.1, мг%81,4±4,1106,5±8,7*1103,6±5,9*199,7±4,2*181,2±4,25*1Паллидин, мг%62,13±4,0985,7±5,1*186,3±4,2*175,3±2,42*1,261,45±3,7*24.5, мг%69,79±3,1350,1±3,8*161,4±3,4*1,260,5±2,8*1,268,5±4,2*2Дематин, мг%41,2±2,0543,1±3,2540,4±2,746,9±3,239,5±3,4Актин, мг%101,1±4,15107,1±5,61108,7±6,4102,6±8,3107,6±8,1Глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназа, мг%54,3±2,041,3±3,11*145,9±1,86*1,246,3±3,3*1,252,7±3,2*2Тропомиозин, мг%65,3±3,0966,2±4,662,7±3,1562,7±4,163,2±3,4Глутатион-S-трансфераза, мг%59,2±2,4554,3±3,559,4±3,3158,7±4,056,6±4,3СЕГ, 10-12 г/эр.2,4±0,122,6±0,112,5±0,192,5±0,20*22,4±0,10ССЭ, %46,2±3,022,2±2,1*120,9±1,3*129,5±2,11*1,228,6±2,89*1-4МДА, нмоль * 106 эр.3,21±0,096,21±0,52*15,12±0,281,25,3±0,2*1,24,4±0,2*1-4Примечание. Звездочкой отмечены достоверные отличия средних арифметических (p < 0,05); цифры рядом со звездочкой - по отношению к показателям какой группы даны эти различия; ТЛ - традиционное лечение.
Таблица 5
Липидный спектр мембраны эритроцитов при ОТПП ИМ (мг%, M±m) Показатели12345Острое токсическое поражение печени (ОТПП)КонтрольОТПП ИМОТПП ИМ + "Фосфоглив"ОТПП ИМ + "Фосфоглив Форте"ОТПП ИМ + "Фосфоглив" инъекцииХолестерин43,0±2,1459,1±3,25*158,1±2,5*157,2±2,3*144,7±1,6*2-4Эфиры холестерина38,03±2,2137,8±1,738,1±1,536,7±2,237,1±2,3Свободные жирные кислоты4,3±0,175,27±0,17*14,89±0,19*1,24,91±0,12*1,24,89±0,12*1,2Моно- и диглицериды10,43±0,4211,2±0,610,9±0,710,5±0,910,7±0,8Триглицериды15,63±1,1710,12±1,25*115,8±1,15*216,4±2,1*216,6±1,5*2Фосфатидилхолин24,0±1,8727,1±2,225,9±1,228,32±1,1223,4±1,29Фосфатидилэтаноламин24,63±2,1222,3±2,323,2±1,325,6±2,3324,2±2,51Лизофосфатидилхолин22,3±0,1321,7±1,221,9±0,322,8±0,1822,2±0,35Фосфатидилинозитол5,1±0,065,2±0,125,0±0,35,07±0,174,9±0,22Сфингомиелин11,8±0,498,28±0,42*19,0±0,18*18,9±0,21*111,74±0,81*2-4 Примечание. Звездочкой отмечены достоверные отличия средних арифметических (p < 0,05); цифры рядом со звездочкой - по отношению к показателям какой группы даны эти различия; ТЛ - традиционное лечение.
Сравнительная эффективность "Фосфоглива" в различных лекарственных формах при различных моделях экспериментальной токсической гепатопатии. Сравнивая мембранопротективную эффективность различных форм "Фосфоглива" в условиях токсического поражения печени, выявлено, что максимальной эффективностью в отношении нарушенных показателей структурно-функциональных свойств мембраны эритроцитов обладает "Фосфоглив" для инъекций как при ИМ, так и ЧХ токсическом поражении печени, так как позволяет снизить количество измененных показателей с 80% до 24% при четыреххлористом токсическом поражении печени и с 48% до 20% при индометациновом (табл. 6).
Представленные выше данные позволяют сделать заключение, что в условиях острой токсической гепатопатии имеет место нарушение метаболического гомеостаза, что проявляется изменением структурно-функциональных свойств эритроцитов, в первую очередь белково-липидного спектра. При этом использование различных форм препарата "Фосфоглив" позволяет корригировать и нормализовать представительность белков и липидов в мембране красных клеток крови. Максимальной эффективностью в условиях ОТПП обладает "Фосфоглив" для инъекций, минимальной - "Фосфоглив", тогда как "Фосфоглив Форте" занимает промежуточное положение (табл. 6).
Таблица 6
Сравнительная мембранопротективная эффективность различных форм "Фосфоглива" в условиях острого токсического поражения печени
Измененные показатели (%)ЧХУИМОтравление гепатотоксическим ядом80,048,0Отравление + "Фосфоглив"64,044,0Отравление + "Фосфоглив Форте"52,040,0Отравление + "Фосфоглив" инъекции24,020,0 В целом эффекты препарата обусловлены антиоксидантной активностью лецитина, который замещает и стабилизирует мембраны гепатоцитов, а глицирризиновая кислота не только дополнительно стабилизирует лецитин, но и обладает прямым иммуномодулирующим эффектом на клетки иммунной системы, что совместно ускоряет репаративные процессы в гепатоцитах. В данном случае благодаря своей высокой биодоступности оказался более эффективным "Фосфоглив" для инъекций, введение которого, вероятно, позволяет стабилизировать мембранные структуры гепатоцитов, уменьшить процессы перекисного окисления липидов и снизить выход в кровеносное русло иммуностимулирующих соединений, что сопровождается нормализацией большинства исследованных показателей иммунного статуса. Полученные результаты диктуют необходимость апробирования данных форм препарата "Фосфоглив" в клинических исследованиях с целью разработки эффективных способов фармакокоррекции метаболических нарушений при острой токсической гепатопатии.
Другой сферой интересов, позволяющей косвенно оценить механизм влияния тех или иных препаратов на изучаемые показатели, служит факторный анализ. С его помощью него удалось редуцировать лабораторные показатели, на которые предложенные схемы оказывают минимальное влияние, и выделить те, которые максимально чувствительны к воздействию препаратов.
Построение графиков факторной нагрузки лабораторных данных установило, что наиболее чувствительными к воздействию "Фосфоглива" вне зависимости от токсического агента, является содержание β-спектрина, триглицеридов и сорбционная способность эритроцитов, что позволяет использовать данные показатели для прогнозирования и оценки выраженности острого токсического поражения печени различными по химической структуре и механизму повреждающего действия токсикантами.
ВЫВОДЫ
1. При экспериментальной острой токсической гепатопатии, вызванной введением четыреххлористого углерода, в эритроцитарной мембране повышен уровень холестерина, свободных жирных кислот, моно- и диглицеридов, лизофосфатидилхолина, белка полосы 4.1, паллидина, внутриклеточного малонового диальдегида, снижена мембранная концентрация эфиров жирных кислот, триглицеридов, фосфатидилхолина и сфингомиелина, обеих подфракций спектрина, анкирина, анионтранспортного белка, белка полосы 4.5, глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы, тропомиозина, глутатион-S-трансферазы, общая сорбционная способность эритроцитов и их гликокаликс.
2. В условиях острого индометацинового токсического поражения печени в мембране эритроцитов снижен уровнь триглицеридов, сфингомиелинов, α-спектрина, анкирина, белка полосы 4.5, глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы, повышено количество холестерина, свободных жирных кислот, белка полосы 4.1, паллидина, снижена общая сорбционная способность клеток.
3. Введение "Фосфоглива" при токсическом индометациновом поражении печени нормализует в мембране эритроцитов концентрацию триглицеридов, применение "Фосфоглива Форте" дополнительно нормализует уровень анкирина, инъекции "Фосфоглива" - количество паллидина, белка полосы 4.5, глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы, холестерина и сфингомиелина.
4. Использование "Фосфоглива" в условиях тетрахлорметанового токсического поражения печени нормализует в мембране эритроцитов представительность паллидина и белка полосы 4.1, "Фосфоглив Форте" дополнительно нормализует уровень свободных жирных кислот, тропомиозина и сорбционную емкость гликокаликса, "Фосфоглив" для инъекций - содержание всех липидов, β-спектрина, белка полосы 4.5, глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы и глутатион-S-трансферазы.
6. В условиях острой токсической индометациновой гепатопатии наиболее эффективно нормализует нарушения структурно-функциональных свойств эритроцитов инъекционная форма "Фосфоглива", а при токсическом тетрахлорметановом поражении печени - "Фосфоглив" для инъекций и "Фосфоглив Форте".
7. Для прогнозирования развития и оценки степени выраженности острого токсического поражения печени наиболее диагностически ценным является определение сорбционной способности эритроцитов и содержания в мембране β-спектрина и триглицеридов. ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
1. Рекомендовать применение "Фосфоглива" для инъекций для коррекции нарушений структурно-функциональных свойств эритроцитов при остром токсическом поражении печени.
2. Использовать для прогнозирования развития и оценки степени выраженности токсического поражения печени определение сорбционной способности эритроцитов и содержание в мембране β-спектрина и триглицеридов. 3. Использовать в учебном процессе медицинских вузов знания о нарушениях структурно-функциональных свойств эритроцитов при экспериментальной острой токсической гепатопатии и способах их фармакологической коррекции с использованием "Фосфоглива" в различных лекарственных формах.
СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
1. Белоконова, О.Н. Применение фосфоглива для коррекции иммунных нарушений при острой экспериментальной токсической гепатопатии / Н.А. Кедровская, О.Н. Белоконова // Тез. докл. XVI Росс. нац. конгр. "Человек и лекарство". - 2009. - С. 232.
2. Белоконова, О.Н. Влияние различных лекарственных форм "Фосфоглива" на сорбционные показатели эритроцитов в условиях токсического поражения печени / О.Н. Белоконова, Н.А. Кедровская // Материалы IV Международной научной конференции молодых ученых-медиков. 25-26 февраля 2010 года. Том I / Под ред. В.А. Лазаренко - Курск: ГОУ ВПО КГМУ Росздрава, 2010. - С. 82-85.
3. Белоконова, О.Н. Иммуномодулирующие и гепатопротекторные эффекты различных лекарственных форм "Фосфоглива" в условиях индометацинового токсического поражения печени / Н.А. Кедровская, О.Н. Белоконова // Курский науч.-практ. вестн. "Человек и его здоровье". - 2009. - № 4. - С. 5-8.
4. Иммуномодулирующие эффекты фосфоглива при экспериментальном токсическом поражении печени / Н.А. Быстрова, О.Н. Белоконова, А.Л. Локтионов, Н.А. Кедровская // Международный журнал по иммунореабилитации. - 2010. - Т. 12, № 2. - С. 159.
5. Применение различных лекарственных форм фосфоглива в коррекции нарушений иммунитета при экспериментальном токсическом поражении печени / Е.В. Орлова, О.Н. Белоконова, В.А. Рагулина, Е.В. Авдеева // Российский аллергологический журнал. - 2010. - № 5, Вып. 1. - С. 36-37.
6. Коррекция функциональной активности нейтрофилов периферической крови производными 3-гидроксипиридина при остром токсическом поражении печени / О.Н. Белоконова, В.А. Рагулина, Е.А. Орлова и др. // Российский аллергологический журнал. - 2010. - № 5, Вып. 1. - С. 236-237.
7. Эффективность различных лекарственных форм "Фосфоглива" в коррекции структурно-функциональных нарушений мембраны эритроцитов при остром токсическом поражении печени / В.П. Гаврилюк, О.Н. Белоконова, А.И. Конопля, Н.А. Быстрова // Системный анализ и управление в биомедицинских системах. - 2011. - Т. 10, № 2. - С. 269-273.
8. Нарушения белково-липидного спектра мембраны эритроцитов при экспериментальной гепатопатии, коррекция различными формами препарата "Фосфоглив" / О.Н. Белоконова, А.И. Конопля, В.П. Гаврилюк и др. // Фундаментальные исследования. - 2011, № 11 (3). - С. 481-484.
ПРИНЯТЫЕ СОКРАЩЕНИЯ
1α - α-спектрин, мг%
1β - β-спектрин, мг%
АТБ - анионтранспортный белок или белок полосы 3
Г-3-ФД - глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназа
Г-S-Т - глутатион-S-трансфераза
ИМ - индометацин
ЛФХ - лизофосфатидилхолин, мг%
МДА - малоновый диальдегид, нмоль * 106 эр.
МДГ - моно- и диглицериды, мг%
ОТПП - острое токсическое поражение печени
ПОЛ - перекисное окисление липидов
СЕГ- сорбционная емкость гликокаликса, 10-12 г/эр.
СЖК - свободные жирные кислоты, мг%
СМ - сфингомиелин, мг%
ССЭ - сорбционная способность эритроцитов, %
ТГ - триглицериды, мг%
ФИ - фосфатидилинозитол, мг%
ФХ - фосфатидилхолин, мг%
ФЭ - фосфатидилэтаноламин, мг%
ЭХ - эфиры холестерина, мг%
Лицензия ЛР № 020862 от 30.04.99 г.
Сдано в набор 26.05.2012 г. Подписано в печать 26.05.2012 г.
Формат 30х421/8. Бумага офсетная. Гарнитура Times New Rom.
Печать офсетная. Усл. печ. л. 1,0.
Тираж 100 экз. Заказ № 206"А"
Издательство Курского государственного медицинского университета
305041, г. Курск, ул. К. Маркса, 3.
2
5
22
23
Документ
Категория
Медицинские науки
Просмотров
62
Размер файла
272 Кб
Теги
кандидатская
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа