close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY2049

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
(19)
BY (11) 2049
(13)
C1
6
(51) A 61K 31/51, A 61K 31/715
(12)
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ПАТЕНТНЫЙ
КОМИТЕТ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ
(54)
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА, ОБЛАДАЮЩЕГО
ПРОТИВООПУХОЛЕВОЙ И АНТИВИТАМИННОЙ АКТИВНОСТЬЮ
(21) Номер заявки: 950151
(22) 21.03.1995
(46) 30.03.1998
(71) Заявители: Институт биохимии Академии наук
Беларуси; Научно-исследовательский институт физико-химических проблем Белорусского
государственного
университета
им.
В.И.Ленина; Борисовский завод медицинских
препаратов (BY)
(72) Авторы: Зиматкина Т.И., Юркштович Т.Л., Сенчук В.В., Бычковский П.М., Зиматкин С.М., Ларин Ф.С., Капуцкий Ф.Н., Драница В.В.,
Печурова Л.И. (BY)
(73) Патентообладатели: Институт биохимии Академии
наук Беларуси; Научно-исследовательский институт физико-химических проблем Белорусского
государственного университета им. В.И.Ленина;
Борисовский завод медицинских препаратов (BY)
(57)
Способ получения препарата, обладающего противоопухолевой и антивитаминной активностью, путем
связывания окситиамина с носителем, отличающийся тем, что в качестве носителя используют окисленный крахмал, связанный с окисленным крахмалом окситиамин обрабатывают раствором метотрексата с последующим высаждением целевого продукта органическим растворителем.
(56)
1. А.с. CCCP 1601821, МКИ А61К 31/57, 1989.
Изобретение относится к биохимии, в частности к витаминологии и экспериментальной онкологии, и
может быть использовано в экспериментальной практике.
Наиболее близким по совокупности признаков и получению требуемого технического результата (прототипом) к заявленному изобретению является способ получения препарата, обладающего антивитаминной активностью,
путем
сорбции
окситиамина
полиангидроглюкуроновой
кислотой,
причем
полиангидроглюкуроновую кислоту предварительно растворяют в водном растворе щелочи при рН 13,2-14
и отношении веса полиангидроглюкуроновой кислоты к объему раствора 1:8-10 с последующей нейтрализацией раствора до рН 5,5-6,5, а сорбцию проводят при весовом отношении окситиамина и полиангидроглюкуроновой кислоты 1:(0,75-2,0) [1].
Препарат, полученный по известному способу, обладает также и противоопухолевым действием (см. Зиматкина Т.И., Зиматкин С.М., Титова С.П. и др. Доклады АН Беларуси, 1992 г., Т.36, № 6, С.552-557). Недостатком известного способа является то, что полученный препарат используют в виде мелкодисперсной
суспензии в растительном масле, что ограничивает пути введения препарата экспериментальным животным.
Кроме того, полученный препарат при однократном введении его в организм (подкожно в виде суспензии в
персиковом масле) животного обладает недостаточно сильным канцеростатическим действием.
Заявляемое изобретение направлено на решение задачи, заключающейся в получении препарата, обладающего более высоким противоопухолевым и антивитаминным действием и в расширении путей введения
препарата в организм животного.
Указанная задача решается тем, что в известном способе получения препарата, обладающего противоопухолевой и антивитаминной активностью, путем связывания окситиамина с носителем, согласно изобретению, в качестве носителя используют Nа-соль окисленного крахмала с содержанием карбоксильных групп
10-25 мас.%, а связанный с Nа-солью, окисленного крахмала окситиамин обрабатывают раствором метотрексата с последующим высаждением целевого продукта органическим растворителем.
BY 2049 C1
Примеры, подтверждающие возможность осуществления изобретения с получением положительного эффекта при
использовании всей совокупности признаков изобретения, указанной в его формуле.
Пример 1.
К 6,1 г окисленного крахмала с содержанием карбоксильных групп 20,4 мас.% добавляют 24,3 мл водного
раствора, содержащего 1,1 г гидроксида натрия и 1,3 г окситиамина, перемешивают до полного растворения
окисленного крахмала и доводят рН до 7-7,2. К полученному раствору приливают 5 мл физиологического раствора (0,9% NaCl), содержащего 5 мг метотрексата, перемешивают в течение 2-х часов и лиофильно высушивают. Содержание окситиамина и метотрексата в полученном препарате в пересчете на 1 г окисленного крахмала
составляет 210 мг/г и 0,82 мг/г.
Соотношение окисленного крахмала, окситиамина, метотрексата в образце составляет
1:0,21:0,00082.
Исследования противоопухолевой активности заявляемого препарата проводили на беспородных белых мышахсамках массой 18-21 г с быстрорастущими, высокозлокачественными опухолями. Асцитный рак Эрлиха (АРЭ) перевивали животным внутрибрюшинно, а саркому 180 (С-180) подкожно от мышей-доноров по общепринятой методике (см. Чернов В.А. "Методы экспериментальной химиотерапии." под ред. Першина Г.Н. М., 1971. С.357-382).
Через сутки после перевивки опухоли контрольным животным вводили однократно подкожно окисленный крахмал, а мышам опытных групп заявляемый препарат (лабораторный шифр АТ-10-14) с дозами окситиамина (ОТ) и
метотрексата (MT) 200:0,75 мг/кг. Мышей с АРЭ декапитировали на 5,9 и 12-e сутки после перевивки опухоли, что
соответствовало начальному, интенсивному и терминальному периодам роста неоплазмы у контрольных животных
(см. Эмануэль Н.М. Кинетика экспериментальных опухолевых процессов. М. 1977, С. 45-134). Асцитную жидкость у животных с АРЭ собирали в пробирки с гепарином, опухолевые клетки отделяли низкоскоростным центрифугированнем (1500 об/мин, мин). Измеряли объем асцита и осадка опухолевых клеток. На основании
полученных данных и значении средней массы тела животных в группах к концу определяемого срока рассчитывали индексы торможения роста неоплазмы (Iт), коэффициенты противоопухолевой активности (Ка) и индексы эффективности препаратов (Iэ) (см. Эмануэль Н.М. Кинетика экспериментальных опухолевых процессов. М. 1977. С.
45-134; Чернов В.А. "Методы экспериментальной химиотерапии." под ред. Першина Г.Н. М., 1971, С.357-382). В
отдельном эксперименте исследовали время жизни животных, рассчитывали среднюю продолжительность (Т) и
показатели времени жизни (α) опытных мышей по сравнению с контрольными. (см. Эмануэль Н.М. Кинетика экспериментальных опухолевых процессов. М. 1977, с.35). Сравнительную количественную оценку эффективности
противоопухолевого действия соединений проводили комплексно на основании всех перечисленных выше
показателей, а также на основании сроков жизни опухоленосителей. Результаты расчетов сведены в таблицы 1 и 2.
В таблицах 1 и 2 приведены данные исследований противоопухолевого действия препарата, полученного
по заявляемому способу (лабораторный шифр АТ-10-14), в сравнении с контролем (водный раствор Na-соли
окисленного крахмала), прототипом (лабораторный шифр АТ-10-4-окситиамин, связанный с полиангидроглюкуроновой кислотой) и окситиамином (лабораторный шифр AT-10-2). Среднее время жизни мышей контрольной группы с АРЭ составило 16,6±0,3 сут. При применении АТ-10-14 срок жизни опухоленосителей возрастал
в 2,8 раза и был выше, чем в случае использования AT-10-2 или АТ-10-4 (табл.1). Сопоставление силы и длительности антибластомного действия препаратов по величинам IТ и Ка, (табл.2) говорит о том, что полученный
препарат обладает выраженными пролонгированными противоопухолевыми свойствами и вызывает значительное торможение роста АРЭ. Анализ противоопухолевого действия препаратов по величине Iэ, как критерию, учитывающему также увеличение времени жизни опухоленосителей, указывает на большую
эффективность АТ-10-14 и по этому критерию.
Антиметаболитное действие препаратов исследовали в опытах на белых мышах - самках массой 18-20 г.
Мыши контрольной группы получали водный раствор окисленного крахмала (ОК) . В качестве препарата
сравнения использовали окситиамин в виде нейтрализованного водного раствора (лабораторный шифр AT-102), а также окситиамин, связанный с полиангидроглюкуроновой кислотой, -прототип (лабораторный шифр АТ10-4). Мышей содержали на стандартном рационе вивария. Декапитацию животных проводили на 1, 3, 5, 8, l2-e
сутки опытов. Об антитиаминовой активности веществ судили по степени ингибирования ими в крови и тканях
транскетолазы (ТК), наиболее чувствительного к действию AT-10-2 тиаминзависимого фермента. (см. Datta
А.G., Racker Е. // Biol. Chem, 1961. Vol. 263, N3, p.617-628; Кочетов Г.А. Тиаминовые ферменты. М., 1978), активность которого определяли по методу Брунса (см. Bruns F.H., Dunwala E., Holtmann Е. // Biochen. Z., 1958,
Vol.330. N3, p.497-507) в модификации Островского Ю.М. (см. Экспериментальная витаминология, под. ред.
Ю.М. Островского, Мн., 1979).
В качестве количественных характеристик антикоферментного действия соединений в целях стандартизации данных использовали величины приведенной активности ТК (А), соответствующие активности фермента в опытной группе при активности ТК в контрольной, равной 100 нмоль седогептулозо-7-фосфата/мл
крови, мг ткани или гемоглобина/мин., ингибирующего эффекта (ИЭ, мкмоль седогептулозо-7-фосфата мл
крови/мг ткани или гемоглобина), найденные интегрированием зависимости (100-А) = f(t) в пределах 5-12
2
BY 2049 C1
сут, и констант скорости восстановления активности ТК (k, сут.-1), рассчитанных по кинетическому уравнению для необратимых реакций псевдопервого порядка.
В табл 3. представлена динамика изменения активности ТК в различных органах животных с первых по
двенадцатые сутки опытов после введения препарата. Полученные данные говорят о более сильном и длительном в сравнении с AТ-10-2 ингибировании фермента в организме животных при применении АТ-10-14.
Максимальное снижение активности ТК наблюдалось на 5-е сутки после введения соединений. В последующие сроки отмечено постепенное восстановление активности ферментов. При применении АТ-10-14
этот процесс был более замедленным, чем в случае использования AT-10-2.
В табл. 4 приведены величины ИЭ и k, позволяющие количественно сравнить силу и длительность антитиаминового действия соединений и сопоставить их эффективность. Анализ полученных данных говорит о
том, что АТ-10-14 характеризуется гораздо меньшими, в сравнении с AT-10-2, скоростями восстановления
активности ТК в организме животных и более высокими значениями ингибирующих эффектов, т.е. проявляет в организме подобно АТ-10-4 пролонгированные антивитаминные свойства.
Таким образом, результаты исследований свидетельствуют о том, что новый комбинированный препарат, полученный заявленным способом, проявляет пролонгированное антивитаминное действие в организме животных и
превосходит окситиамин, а также прототип по своей противоопухолевой активности, вызывая более длительное и
сильное торможение роста злокачественных новообразований.
Таблица 1
Средняя продолжительность (Т) и показатели времени жизни
(α) мышей-опухоленосителей с асцитным раком Эрлиха (АТЭ).
α
1,00
1,16
2,02*
2,77*
Препараты
Т, сут
Контроль (АРЭ)
16,6 ± 0,3
AT-10-2
19,3 ± 0,3*
AT-10-4
33,5 ± 0,4*
AT-10-14
45,9 ± 0,6*
* - достоверные (P<0,05) по отношению к контролю значения.
Таблица 2
Параметры противоопухолевого действия соединений
Препараты
Iт, %
Ка, %
5-е сутки
Контроль (АРЭ)
AT-10-2
AT-10-4
AT-10-14
0
62,5
87,5
90,9
Контроль (АРЭ)
AT-10-2
AT-10-4
AT-10-14
0
38,5
74,1
84,4
Контроль (АРЭ)
AT-10-2
AT-10-4
AT-10-14
0
41,2
66,7
80,9
Iэ, %
0
49,5
86,4
86,6
0
57,4
212,5
248,2
0
31,8
75,5
76,5
0
36,9
183,3
211,9
0
25,0
53,3
69,7
0
29,0
131,1
193,0
9-е сутки
12-е сутки
3
BY 2049 C1
Таблица 3
Величины приведенной активности (А) транскетолазы
(нмоль седогептулозо-7-фосфата/мл крови или мг ткани/мин)
Препараты
Кровь
Контроль
AT-10-2
AT-10-14
AT-10-4
100±2,8
73,0±l,9*
68,4±l,9*
69,3±2,1*
Контроль
AT-10-2
AT-10-14
AT-10-4
100±2,8
58,2±l,2*
49,7±2,2*
42,0±2,7*
Контроль
AT-10-2
AT-10-14
AT-10-4
100±2,9
47,7± l,2*
42,0±2,0*
23,2±l,6*
Контроль
AT-10-2
AT-10-14
AT-10-4
100±2,9
59,6± 2,4*
40,4±3,9*
32,5±3,l*
Контроль
AT-10-2
AT-10-14
AT-10-4
100±2,9
75,5±2,6*
67,1± l,0*
46,5±2,l*
Активность фермента
Печень
l-e сутки
100±3,4
76,3±0,2*
80,0±2,8*
82,5±1,7*
3-и сутки
100±3,4
68,6±2,2*
56,l± l,5*
80,6±2,l*
5-e сутки
100±3,7
72,9±2,2*
62,9± 2,0*
47,4±2,2*
8-е сутки
100±3,7
80,7±3,l*
68,6±1,8*
59,2±2,3*
12-е сутки
100±3,7
91,4±l,6*
84,3±2,0*
71,5±3,l*
Селезенка
100±3,5
77,6±l,9*
78,3±3,8*
80,4± l,8*
100± 3,5
68,l± 3,2*
73,2±2,6*
60,3±2,7*
100±4,4
73,8±2,5*
61,l± 2,2*
30,7±l,6*
100±4,4
77,3±2,5*
67,9±2,8*
61,2±3,5*
100±4,4
94,7±3,l*
79,l±2,8*
72,8±3,5*
* - достоверные (p<0,05) по отношению к контролю значения
Таблица 4
Количественные характеристики антитиаминового действия препаратов окситиамина
Ткань
Кровь
Печень
Селезенка
Препараты
AT-10-2
AT-10-14
AT-10-4
AT-10-2
AT-10-14
AT-10-4
AT-10-2
AT-10-14
AT-10-4
(k±s)·102cyт-l
10,9±1,1
8,5± 4,4
4,9+ 0,5
16,7±2,6
11,1±2,6
9,3± 2,0
23,6± 8,9
9,0±1,2
13,2±0,8
Cоставитель А.И. Сорокин
Редактор Т.А. Лущаковская
Корректор Т.Н. Никитина
Заказ 0030
Тираж 20 экз.
Государственный патентный комитет Республики Беларусь.
220072, г. Минск, проспект Ф. Скорины, 66.
r
0,995
0,887
0,989
0,988
0,973
0,955
0,935
0,991
0,997
ИЭ, ммоль/мг
6,l±0,5
7,9± 2,3
10,4± 0,4
2,8± 0,5
4,5± 0,8
6,9±1,0
2,6± 1,3
4,9±0,4
7,2±0,4
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
174 Кб
Теги
by2049, патент
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа