close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY2637

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
(19)
BY (11) 2637
(13)
C1
6
(51) G 01N 33/86
(12)
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ПАТЕНТНЫЙ
КОМИТЕТ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ
(54)
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФУНКЦИОНАЛЬНОГО ОТВЕТА
ЛЕЙКОЦИТОВ НА ПРОЦЕССЫ КОАГУЛЯЦИИ И ФИБРИНОЛИЗА
(21) Номер заявки: 950133
(22) 1995.03.09
(46) 1999.03.30
(71) Заявитель: Научно-исследовательский
институт радиационной медицины Минздрава
Республики Беларусь (BY)
(72) Авторы: Кручинский Н.Г., Тепляков А.И., Горчаков А.М. (BY)
(73) Патентообладатель: Научно-исследовательский
институт радиационной медицины Минздрава
Республики Беларусь (BY)
(57)
Способ определения функционального ответа лейкоцитов на процессы коагуляции и фибринолиза путем
постановки реакции морфологической диссоциации крови, отличающийся тем, что проводят микрофлюориметрическое исследование лейкоцитов из третьей фракции реакции морфологической диссоциации крови
и при уменьшении интенсивности красного свечения по отношению к контрольному исследованию диагностируют первый полноценный тип функционального ответа, а при отсутствии изменений или увеличении
интенсивности красного свечения - второй неполноценный, тип функционального ответа лейкоцитов.
(56)
1. Иванов Е.П. Морфологическая диссоциация при свертывании: Aвтореф. дис. канд. мед. наук. - Л.,
1965.
Изобретение относится к медицине, в частности к лабораторной диагностике в кардиологии, коагулологии, реаниматологии и может быть использовано для раннего определения типа функционального ответа
лейкоцитов (в частности полиморфноядерных нейтрофилов) на процессы коагуляции и фибринолиза.
Известен способ постановки реакции морфологической диссоциации крови [1].
Однако этот способ не может быть использован для определения функционального состояния лейкоцитов, в частности полиморфноядерных нейтрофилов (ПМЯЛ), в ответ на процессы коагуляции и фибринолиза.
Задачей изобретения является определение типа функционального ответа ПМЯЛ в ответ на процессы
коагуляции и фибринолиза.
Поставленная задача достигается тем, что в способе определения функционального ответа лейкоцитов на
процессы коагуляции и фибринолиза путем постановки реакции морфологической диссоциации крови, проводят микрофлюориметрическое исследование лейкоцитов из третьей фракции реакции морфологической
диссоциации крови и при уменьшении интенсивности красного свечения по отношению к контрольному исследованию диагностируют первый полноценный, тип функционального ответа, а при отсутствии изменений
или увеличении интенсивности красного свечения - второй неполноценный тип функционального ответа
лейкоцитов.
Предложенный способ осуществляется следующим образом.
Получают пробу венозной крови с соблюдением правил забора и температурных режимов. Соотношение
кровь: антикоагулянт 1 - 2 ME гепарина на 1,0 мл крови. Приготавливают препараты крови на предметном
стекле: смешивают каплю крови с раствором акридинового оранжевого (концентрация 1 х 10 - 5 М) в соотношении 1:1 (например: 0,1 мл крови и 0,1 мл красителя). Указанную смесь крови и акридинового оранжевого накрывают покровным стеклом, а избыток смеси удаляют с помощью фильтровальной бумаги.
Исследуют интенсивность флуоресценции ПМЯЛ в приготовленных препаратах крови с помощью двухканального микрофлюориметра - фотометра (ДМФ - 2). Измеряют интенсивность красной флуоресценции на
длине волны в 640 нм., которая выражается в относительных оптических единицах (отн. опт. ед.). Это значение интенсивности флуоресценции является контрольным, по отношению к которому в дальнейшем определяют функциональный ответ ПМЯЛ.
BY 2637 C1
Параллельно у пациента забирают 2,0 мл венозной крови в сухую центрифужную пробирку с делениями
для постановки реакции морфологической диссоциации крови. Пробирку с делениями закрывают резиновой
пробкой ¹ 16, обрезанной на половину. В пробку предварительно вставлен металлический якорь и эксцентрично игла для внутримышечных инъекций. Пробирка с кровью переворачивается так, чтобы кровь натекала на якорь и образовала пирамиду, основание которой упирается в пробирку, и вершина находится на конце
якоря. Отмечается момент, когда кровь свернется. Для этого пробирка постоянно наклоняется в руке (каждые
20 - 30 секунд) и проверяется натекает ли кровь на якорь. После свертывания крови в пробирке ее (пробирку)
помещают под углом в 45° в термостат при 37°С на 2,0 часа. За время нахождения пробирки в термостате
происходит реакция морфологической диссоциации крови. Кровь разделяется на три фракции: 1-я - собственно сгусток крови, 2-я - объем сыворотки и 3-я - объем форменных элементов крови. После окончания
времени термостатирования пробирка ставится в штатив пробкой вверх. Пробка осторожно вращается так,
чтобы отделить от стенки пробирки закрепившийся на якоре сгусток. Затем пробирку снова ставят в штатив
на 10 - 15 минут и после этого пробирку с укрепившимся на ней сгустком удаляют, а пробирку с жидкой
кровью центрифугируют в течение 15 - 20 минут при 1500 - 2000 об/мин. После центрифугирования кровь
разделяется на сыворотку и форменные элементы крови, которые соответствуют 2-й и 3-й фракциям реакции
морфологической диссоциации крови.
Затем из 3-й фракции крови отбирают лейкоциты, которые помещают на предметное стекло и в дальнейшем используют для приготовления препаратов (как описано выше) после окрашивания акридиновым оранжевым и проводят цитофлюориметрическое исследование ИКС (опытное измерение).
После получения значения ИКС лейкоцитов из третьей фракции реакции морфологической диссоциации
крови проводят сравнение полученных результатов двух измерений (контрольного и опытного) и рассчитывают процент изменения ИКС (при этом контрольное значение ИКС принимается равным 100 %).
При уменьшении значения ИКС, по сравнению с контролем, устанавливают 1-й (полноценный) тип
функционального ответа, а при отсутствии изменений или увеличении ИКС - 2-й (неполноценный) тип
функционального ответа ПМЯЛ крови.
Для достижения поставленной задачи заявляемого способа нами обследовано 32 пациента с ИБС. Приводим примеры использования способа:
Пример 1. Больной К., 55 лет, история болезни (и.б.) ¹ 1500/415. Поступил в клинику с диагнозом: ИБС,
кардиосклероз аорты, HI. Облитерирующий атеросклероз сосудов нижних конечностей.
24.03.93 г. проведено исследование функционального ответа ПМЯЛ: для этого проводят забор венозной
крови в соотношении кровь/антикоагулянт, как 1 - 2 ME гепарина на 1,0 мл крови. Затем готовят препарат
для цитофлюориметрического анализа, смешивая кровь с красителем (акридиновый оранжевый в соотношении 1:1. Измеряют ИКС - контроль. Параллельно забирают 2,0 мл венозной крови в сухую центрифужную
пробирку с делениями и ставят реакцию морфологической диссоциации крови. Из третьей фракции отбирают лейкоциты и готовят из них препарат крови, окрашивают его и измеряют ИКС лейкоцитов. Исходное
значение (контроль) ИКС составила у данного пациента 1,77 отн. опт. ед. Значение ИКС после реакции морфологической диссоциации крови была 0,61 отн. опт. ед. (увеличение на 10,91 % по сравнению с контролем).
Заключение: 2-й (неполноценный) тип функционального ответа лейкоцитов (на основании увеличения
значения ИКС).
Больному проведен курс лечения. Повторное исследование показало: исходное (контроль) состояния
ПМЯЛ по ИКС 0,44 отн. опт. ед. После реакции морфологической диссоциации крови ИКС составила 0,24
отн. опт. ед. (45,45 % снижения по сравнению с контролем). Обычно реакция морфологической диссоциации
крови применяется для постановки теста спонтанного фибринолиза (СФ). Лейкоциты из 3-й фракции берутся
для исследования как раз после определения СФ.
Заключение: 1-й (полноценный) тип функционального ответа ПМЯЛ. Учитывая снижение показателя
ИКС в повторном анализе, так и по сравнению с первым анализам (20 % снижения по сравнению между
ИКС в контроле при первом и втором анализах и 65,57 % снижения значений ИКС после теста СФ в первом
и втором анализах).
Таким образом, в результате проведенного лечения улучшился функциональный ответ лейкоцитов.
Пример 2. Больной М., 53 лет, и.б. ¹ 909/277. Поступил в клинику с диагнозом: ИБС, постинфарктный
(1986 г.) кардиосклероз, атеросклероз аорты, симптоматическая гипертензия, Н - 2а. Хронический обструктивный бронхит в стадии обострения. Базальный пневмосклероз. Эмфизема легких. ДН - 2. Фурункулез.
24.03.93 г. проведен цитофлюориметрический анализ функционального ответа лейкоцитов: для этого забирают пробу венозной крови (соотношение кровь/антикоагулянт, как 1 - 2 ME гепарина на 1,0 мл крови),
взятую кровь смешивают с красителем в соотношении 1:1 и измеряют ИКС. Параллельно ставят тест СФ,
отбирают после его постановки лейкоциты из третьей фракции, готовят препарат крови, окрашивают его и
измеряют ИКС.
Значение ИКС составило в венозной крови 0,66 отн. опт. ед. (контрольное значение) ИКС после теста СФ
- 0,44 отн. опт. ед. (33,33 % снижения по сравнению с контролем).
2
BY 2637 C1
Заключение: 1-й (полноценный) тип функционального ответа ПМЯЛ на процессы коагуляции и фибринолиза на основании снижения ИКС по сравнению с контрольным значением показателя.
Больному проведен курс лечения (сердечные гликозиды, салуретики, эуфиллин, антибактериальная терапия).
Повторный анализ функционального ответа лейкоцитов после окончания курса лечения: контрольное
значение ИКС составило 0,67 отн. опт. ед. После постановки теста СФ значение ИКС - 0,23 отн. опт. ед.
(65,67 снижения по сравнению с контролем).
Заключение: 1-й (полноценный) тип функционального ответа лейкоцитов, учитывая однотипность изменений изучаемого показателя до и после проведенного лечения.
Пример 3. Больной С., 57 лет, и.б. ¹ 3789/1212. Поступил в клинику с диагнозом: ИБС, стенокардия напряжения ФК II - III, постинфарктный кардиосклероз, атеросклероз аорты, симптоматическая гипертензия,
Н - 1.
19.01.93 г. проведен анализ функционального ответа лейкоцитов: для этого берут пробу венозной крови,
готовят смесь крови с красителем - акридиновый оранжевый и проводят исследование ИКС (контроль). Параллельно ставят реакцию морфологической диссоциации крови в тесте СФ.
Исходное значение ИКС (контроль) составило 1,96 отн. опт. ед. После постановки теста СФ - 1,98 отн.
опт. ед. (отсутствие изменений по сравнению с контролем).
Заключение: 2-й (неполноценный) тип функционального ответа полиморфноядерных лейкоцитов на процессы коагуляции и фибринолиза.
Пример 4. Пациент С., 61 года, и.б. ¹ 536/157. Поступил в клинику с диагнозом: ИБС, стенокардия напряжения ФК - 2, полная блокада левой ножки пучка Гиса, атеросклероз аорты, Н - 2а.
11.03.93 г. проведено исследование функционального ответа лейкоцитов: для этого берут пробу венозной
крови, стабилизированную гепарином из расчета 1 - 2 ME на 1,0 мл крови, готовят препарат крови в смеси с
красителем в соотношении 1:1, измеряют с помощью прибора ДМФ - 2 интенсивность красного свечения
(контрольное значение). Параллельно проводят постановку теста СФ, из 3-й фракции реакции морфологической диссоциации крови отбирают ПМЯЛ, готовят препарат, окрашивают его и измеряют ИКС.
Контрольное значение ИКС составило 0,18 отн. опт. ед. После постановки теста СФ значение ИКС - 0,27
(50 % увеличения по сравнению с контролем).
Заключение: 2-й (неполноценный) тип функционального ответа.
Проведено консервативное лечение (антиагреганты, антиангинальные препараты).
Проведен повторный анализ функционального ответа ПМЯЛ: контрольное значение ИКС составило 0.56
отн. опт. ед.; ИКС после постановки теста СФ - 1,51 отн. опт. ед. (169,64 % увеличения по сравнению с контролем).
Заключение: в обоих случаях 2-й (неполноценный) тип функционального ответа ПМЯЛ на процессы коагуляции и фибринолиза.
Пример 5. Больная М„ 60 лет, и.б. ¹ 905/275. Поступила в клинику с диагнозом: Дисциркуляторная энцефалопатия III-й степени с бульбарным синдромом. ИБС: кардиосклероз, атеросклероз аорты, симптоматическая гипертензия, Í - 2à. Мочекаменная болезнь.
23.03.93 г. проведено исследование функционального ответа ПМЯЛ. Для этого получают пробу венозной
крови, стабилизированную гепарином (1 - 2 ME на 1,0 мл крови), смешивают кровь с красителем (в соотношении 1:1) и измеряют показатель ИКС. Параллельно осуществляют постановку реакции морфологической
диссоциации крови в тесте СФ. После постановки теста СФ, отбирают лейкоциты из 3-й фракции, готовят
препарат крови, окрашивают его и измеряют с помощью прибора ДМФ - 2 ИКС.
Контрольное значение ИКС составило 1,25 отн. опт. ед. Значение. ИКС после постановки теста СФ - 0,93
отн. опт. ед. (25,6 % снижения по сравнению с контролем).
Заключение: 1-й (полноценный) тип функционального ответа ПМЯЛ на процессы коагуляции и фибринолиза.
Таким образом, по сравнению с известными решениями, заявляемый способ обладает следующими преимуществами:
1. Возможность динамической оценки функционального ответа ПМЯЛ на процессы коагуляции и фибринолиза.
2. Возможность оценки эффективности проводимого лечения с помощью использования заявляемого
способа.
3. Простота выполнения заявляемого способа.
Государственный патентный комитет Республики Беларусь.
220072, г. Минск, проспект Ф. Скорины, 66.
3
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
136 Кб
Теги
by2637, патент
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа