close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY2693

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
(19)
BY (11) 2693
(13)
C1
6
(51) C 07C 237/26
(12)
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ПАТЕНТНЫЙ
КОМИТЕТ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ
(54)
СПОСОБ ОЧИСТКИ ОКСИТЕТРАЦИКЛИНА И АЦЕТАТ
ГИДРОХЛОРИДА ОКСИТЕТРАЦИКЛИНА
(21) Номер заявки: 2259
(22) 1994.11.04
(86) PCT/ЕР92/00778, 1992.04.06
(46) 1999.03.30
(71) Заявители: ПЛИВА Хандельс ГмбХ (DE),
ПЛИВА Фармацойтска, Хемичска, Прерамбена
и Косметичка Индустрия, с. п. о. (HR)
(72) Авторы: ЧАКАРА, Мария; ШУШКОВИЧ, Божидар
(HR)
(73) Патентообладатели: ПЛИВА Хандельс ГмбХ (DE),
ПЛИВА Фармацойтска, Хемичска, Прерамбена и
Косметичка Индустрия, с. п. о. (HR)
(57)
1. Способ очистки окситетрациклина от присутствующего в нем в качестве примеси ацетилдекарбоксамидоокситетрациклина, отличающийся тем, что окситетрациклин превращают в ацетат гидрохлорида окситетрациклина, образующийся осадок фильтруют и промывают, после чего высушивают при пониженном
давлении и температуре до 400С до достижения постоянного веса, и превращают в гидрохлорид или дигидрат окситетрациклина.
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что осадок ацетата гидрохлорида окситетрациклина получают из
гидрохлорида окситетрациклина путем суспендирования в ледяной уксусной кислоте, перемешивания полученной смеси в течение пяти часов, фильтрации образующегося осадка и его промывки ледяной уксусной
кислотой и ацетоном.
3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что осадок ацетата гидрохлорида окситетрациклина получают из
дигидрата окситетрациклина путем суспендирования в ледяной уксусной кислоте вместе с равномолярным
количеством хлористого водорода в форме концентрированной соляной кислоты, перемешивания полученной смеси в течение пяти часов, фильтрации полученного осадка и его промывки ацетоном.
4. Ацетат гидрохлорида окситетрациклина формулы:
(56)
1. Antibiotiki 11, 598, 1966.
2. Archiv der Pharmazie 300, 840, 1967.
3. Journal of Chromatography 405, 229, 1987.
4. Journal of American Chemical Society, 82, 5934, 1960.
5. Патент США 3022347, 1962.
6. Сhem. Abstr., 1964, v.60 N3 abst. 2875a.
BY 2693 C1
Настоящее изобретение относится к способу очистки окситетрациклина от ацетилдекарбоксамидоокситетрациклина, присутствующего, как загрязнение, а также к новому промежуточному продукту для осуществления этого способа.
Известно, что в результате брожения окситетрациклина указанной ниже формулы (1) в качестве побочного продукта получается также 2-ацетил-2-декарбоксамидоокситетрациклин в количестве от 3 до 12,5 % (далее ацетилдекарбоксамидоокситетрациклин) указанной ниже формулы II [1].
I
R = NH2
II
R = CH3
Используя стандартные способы выделения окситетрациклина из бульона брожения и дальнейшую его
очистку, содержание в нем ацетилдекарбоксамидоокситетрациклина снижается лишь незначительно, и он
остается, как загрязнение, в получаемом конечном продукте окситетрациклине. Присутствие ацетилдекарбоксамидоокситетрациклина, как побочного продукта в окситетрациклине, впервые продемонстрировано путем хроматографического разделения этих двух соединений методом тонкослойной хроматографии [2]. Было проведено испытание 15 образцов окситетрациклина различных изготовителей антибиотиков и было
подтверждено методом качественного анализа присутствие ацетилдекарбоксамидоокситетрациклина. Содержание ацетилдекарбоксамидоокситетрациклина в образцах окситетрациклина было определено методом
жидкостной хроматографии высокого давления (далее ЖХВД) [3].
Ацетилдекарбоксамидоокситетрациклин получали путем брожения ранее. Данный продукт выделяли и
очищали методом противоточного распределения потока и идентифицировали его химическим методом [4],
и этот продукт был запатентован как антибиотик [5]. Исследование биологической активности ацетилдекарбоксамидоокситетрациклина на 33 микроорганизмах подтвердило такой же антибактериальный спектр, как и
у окситетрациклина, в то время как сила его действия не достигала даже 10 % от силы действия окситетрациклина.
Благодаря чрезвычайно большому сходству молекул окситетрациклина с молекулами ацетилдекарбоксамидоокситетрациклина, до настоящего времени не был описан способ выделения окситетрациклина, который полностью лишен ацетилдекарбоксамидоокситетрациклина.
Наиболее близким аналогом способа по настоящему изобретению является способ заключающийся в том,
что окситетрациклин образует соли в виде молекулярных комплексов с различными органическими кислотами и основаниями [6]. Кристаллическая структура некоторых из этих солей определяется методом дифракции рентгеновских лучей. Были описаны соли в виде молекулярных комплексов гидрохлорида окситетрациклина со щавелевой кислотой, пиразином и монохлоруксусной кислотой.
Задачей настоящего изобретения является получение окситетрациклина, который полностью лишен ацетилдекарбоксамидоокситетрациклина.
Для решения поставленной задачи предложен способ очистки окситетрациклина от присутствующего в
нем в качестве примеси ацетилдекарбоксамидоокситетрациклина по настоящему изобретению, который заключается в том, что окситетрациклин превращают в ацетат гидрохлорида окситетрациклина, образующийся
осадок фильтруют и промывают, после чего высушивают при пониженном давлении и температуре до 40 °С
до достижения постоянного веса, и превращают в гидрохлорид или дигидрат окситетрациклина.
Осадок ацетата гидрохлорида окситетрациклина получают из гидрохлорида окситетрациклина путем суспендирования в ледяной уксусной кислоте, перемешивания полученной смеси в течение пяти часов , фильтрации образующегося осадка и его промывки ледяной уксусной кислотой и ацетоном.
В другом предпочтительном варианте способа осадок ацетата гидрохлорида окситетрациклина получают
из дигидрата окситетрациклина путем суспендирования в ледяной уксусной кислоте вместе с равномолярным количеством хлористого водорода в форме концентрированной соляной кислоты, перемешивания полученной смеси в течение пяти часов, фильтрации полученного осадка и его промывки ацетоном.
Кроме того предметом изобретения является ацетат гидрохлорида окситетрациклина формулы:
2
BY 2693 C1
Впервые неожиданно было обнаружено, что гидрохлорид окситетрациклина, растворенный в ледяной уксусной кислоте, образует соль в виде молекулярного комплекса, а именно ацетата гидрохлорида окситетрациклина. Значительное различие растворимости соли в виде молекулярных комплексов окситетрациклина и
ацетилдекарбоксамидоокситетрациклина в ледяной уксусной кислоте обеспечивает эффективное отделение
одного продукта от другого. В частности, если гидрохлорид окситетрациклина, содержащий гидрохлорид
ацетилдекарбоксамидоокситетрациклина в качестве примеси (примерно 3 %) суспендируется в ледяной уксусной кислоте, то эта соль сначала полностью растворяется, после чего окситетрациклин осаждается в виде
соли, в виде молекулярного комплекса. Эта соль в виде молекулярного комплекса ацетилдекарбоксамидоокситетрациклина при данных условиях является высокорастворимой и остается практически в растворе. После фильтрации осажденного ацетата гидрохлорида окситетрациклина, получается чрезвычайно высокий
выход окситетрациклина, в котором содержание ацетилдекарбоксамидоокситетрациклина, как обнаруживает
анализ ЖХВД, снижается до 0,3 - 0,5 %. Фильтрат содержит практически весь ацетилдекарбоксамидоокситетрациклин и примерно 1 - 2 % окситетрациклина от исходного количества, который может быть регенерирован путем выпаривания фильтрата.
Окситетрациклин может быть подвергнут такой очистке также в форме основания (дигидрата, далее в
тексте - дигидрат окситетрациклина). В данном случае добавляется также равномолярное количество хлористого водорода в виде концентрированной соляной кислоты в раствор дигидрата окситетрациклина в ледяной уксусной кислоте, что обеспечивает возможность образования соли в виде молекулярного комплекса
ацетата гидрохлорида окситетрациклина. После начала осаждения этого комплекса может добавляться толуол в количестве до 80 об. % от присутствующей ледяной уксусной кислоты, что имеет целью снижение растворимости продукта. Если в качестве исходного материала выбран сырой дигидрат окситетрациклина, то
желательно, чтобы он был предварительно превращен - с использованием хорошо известных стандартных
способов - в гидрохлорид окситетрациклина, который может далее без сушки превращаться в ацетат гидрохлорида окситетрациклина. Отношение ледяной уксусной киcлоты к окситетрациклину может находиться в
пределах 1.5 - 5 мл/ммоль окситетрациклина, в то время как наилучший результат достигается при указанном отношении 2,5 мл/ммоль окситетрацихлина.
Способ настоящего изобретения осуществляется следующим образом - в ледяной уксусной кислоте суспендируется при перемешивании гидрохлорид окситетрациклина или, как другой возможный вариант, дигидрат окситетрациклина при добавлении равномолярного количества хлористого водорода в виде концентрированной соляной кислоты. Перемешивание продолжается в течение еще пяти часов. В течение первого
часа перемешивания окситетрациклин полностью растворяется, после чего осаждается соль в виде молекулярного комплекса. По прошествии пяти часов перемешивания осадок фильтруется, промывается ледяной
уксусной кислотой и ацетоном, после чего он высушивается при пониженном давлении при температуре до
40 °С до постоянного веса. Выход выделенного ацетата гидрохлорида окситетрациклина различается в зависимости от чистоты исходного продукта. Чем чище исходный продукт, тем выше выход. Ацетат гидрохлорида окситетрациклина является высококристаллической и стойкой солью желтого цвета, которая без значительных потерь превращается в гидрохлорид окситетрациклина или дигидрат окситетрациклина. Это
превращение в гидрохлорид окситетрациклина осуществляется путем растворения ацетата гидрохлорида окситетрациклина в минимальном количестве воды и добавления смеси метанола с концентрированной соляной кислотой. Повторяя полностью весь этот процесс, из такого очищенного гидрохлорида окситетрациклина получается совершенно чистый ацетат гидрохлорида окситетрациклина без содержания
ацетилдекарбоксамидоокситетрациклина. Превращение ацетата гидрохлорида окситетрациклина в дигидрат
окситетрациклина осуществляется путем растворения ацетата гидрохлорида окситетрациклина в таком количестве воды, что концентрация окситетрациклина в растворе составляет примерно 50000 межд.ед./мл, и
при доведении величины рН раствора до 5, в результате чего происходит осаждение дигидрата окситетрациклина. который в конечном итоге извлекается путем фильтрации.
Алетат гидрохлорида окситетрациклина, который выделяется из раствора окситетрациклина в ледяной
уксусной кислоте, является солью в виде молекулярного комплекса, который ранее не был описан. Его молекулярный состав определяется путем титрования гидратом окиси натрия и нитратом серебра и по определению содержания уксусной кислоты методом газовой хроматографии. Этот солевой комплекс, как обнаружено, состоит из окситетрациклина, хлористого водорода и уксусной кислоты в равномолярных количествах, и
этот комплекс отвечает следующей формуле (III):
3
BY 2693 C1
III
Молекула данной композиции содержит теоретически 6,55 % хлористого водорода и 10,78 % уксусной кислоты, в то время как биологическая активность, рассчитанная по сухой массе, составляет 826,7 межд.ед./мг.
Данные значения, получаемые путем анализа приготовленных образцов ацетата гидрохлорида окситетрациклина, отличаются от теоретических значений в пределах нескольких процентов. Таким образом, при измерениях на различных образцах содержание хлористого водорода составляло от 6,2 до 6,7 %, содержание
уксусной кислоты составляло от 10,2 до 11,5 % и биологическая активность составляла от 800 до 836
межд.ед./мг. Как и все тетрациклиновые соединения, ацетат гидрохлорида окситетрациклина не имеет четко
выраженной точки плавления. После нагревания вещество изменяет свой цвет при температуре, превышающей 170 °С, в то время как оно полностью разлагается при температуре, превышающей 200 °С.
Присутствие уксусной кислоты в молекуле обнаруживается по спектральным характеристикам нового соединения. Так, например, ультрафиолетовый спектр соответствует максимальному распределению, идентичному спектру гидрохлорида окситетрациклина с той разницей, что светопоглощение снижается за счет увеличения молекулярной массы. По этой же самой причине величина удельного оптического вращения также
ниже. В спектре 1Н-ЯМР и в спектре 13С-ЯМР ацетат гидрохлорида окситетрациклина показывает все сигналы окситетрациклина в их обычных сайтах в дополнение к сигналам уксусной кислоты. При массспектрографическом анализе ацетата гидрохлорида окситетрациклина, наряду с фрагментами, характерными
для окситетрациклина, обнаружены масс-фрагменты 43 и 60, производные от уксусной кислоты.
Ввиду чрезвычайно низкой биологической активности ацетилдекарбокс-амидоокситетрациклина, его
присутствие в окситетрациклине является неактивным балластом. При удалении этого балласта его ненужное отложение в костях человеческого организма устраняется, в то время как окситетрациклин повышает
свою микробиологическую активность. Это означает, что при введении лекарства тот же эффект достигается
при меньшей дозе препарата.
Данное изобретение иллюстрируется нижеследующими примерами, которые не ограничивают его объем.
Пример 1.
Получение ацетата гидрохлорида окситетрациклина из гидрохлорида окситетрациклина.
Гидрохлорид окситетрациклина (100 г; 890 межд.ед./мг; определяемое методом ЖХВД содержание окситетрациклина 91.9 %, ацетилдекарбоксамидоокситетрациклина 2,6 %, выражено как содержание гидрохлоридов) суспендировали в 500 мл ледяной уксусной кислоты, и суспензию перемешивали в течение 5 часов
при комнатной температуре. Спустя примерно один час получали прозрачный раствор, после чего начинал
выпадать белый осадок. После пятичасового перемешивания осадок фильтровали, промывали в 50-ти мл охлажденной ледяной уксусной кислоты и 50-ти мл ацетона, и высушивали при пониженном давлении до достижения постоянного веса.
Выход продукта 110 г (98 %).
Анализ методом ЖХВД показал, что продукт содержит окситетрациклин и ацетилдекарбоксамидоокситетрациклин в соотношении 99,6:0,4.
Данные биоанализа: 829 межд.ед./мг.
Содержание уксусной кислоты: 10,23 %.
Вода (определяемая методом К.Фишера): 1,0 %.
НС1 (титрование с AgNO3) 6,6 %.
Температура плавления 203 - 208 °С (разложение).
[α]20d: - 172,1.
УФ λмакс: 218 нм (А1 % 248,41), 268 нм (А1 % 336,63) и 360 нм (А1 % 251,87) (0,01 N HCI/EtOH) (Et - этил).
Пример 2.
Получение ацетата гидрохлорида окситетрациклина из сырого дигидрата окситетрациклина с промежуточным продуктом гидрохлоридом окситетрациклина.
Сырой дигидрат окситетрациклина (определяемое методом ЖХВД содержание дигидрата окситетрациклина 95,6 % и дигидрата ацетилдекарбоксамидоокситетрациклина 3,0 %) стандартным способом превращали
в гидрохлорид окситетрациклина: сырой дигидрат (100 г) при перемешивании и нагревании на водяной бане
до 30 °С растворяли в смеси 75 мл метанола и 12 мл концентрированной соляной кислоты. После обработки
0,5 г двухнатриевой соли этилендиаминотетрауксусной кислоты и 1,5 г активного угля суспензию фильтро4
BY 2693 C1
вали с добавлением 1,5 г земли для фильтрования и остаток на фильтре промывали 100 миллилитрами метанола. Гидрохлорид окситетрациклина осаждался в фильтре при добавлении с перемешиванием и охлаждением 55 мл концентрированной соляной кислоты. После фильтрации и сушки в печи с воздушной циркуляцией
при 50 °С получалось 97,06 г гидрохлорида окситетрациклина. Весь продукт растворяли при перемешивании
в 500 мл ледяной уксусной кислоты. По прошествии 10 минут полученный прозрачный раствор затравливали
0,1 г ацетата гидрохлорида окситетрациклина и перемешивали в течение пяти часов при комнатной температуре. После осуществления такой же процедуры, как и в примере 1, получалось 98,5 г ацетата гидрохлорида
окситетрациклина. Содержание в этом продукте ацетата гидрохлорида окситетрациклина, определяемое методом ЖХВД, составляло 99,07 %, содержание ацетата гидрохлорида ацетилдекарбоксамидоокситетрациклина составляло 0,56 %.
Выход регенерированного окситетрациклина составил 90,98 %.
Пример 3.
Получение ацетата гидрохлорида окситетрациклина непосредственно из сырого дигидрата окситетрациклина.
Сырой дигидрат окситетрациклина (200 г; 913 межд.ед./мг; вода 6,9 %, определяемое методом ЖХВД содержание дигидрата окситетрациклина 98,5 % и дигидрата ацетилдекарбоксамидоокситетрациклина 2,1 %)
суспендировали в 600 мл ледяной уксусной кислоты, и в эту суспензию вводили по каплям при перемешивании 32 мл концентрированной соляной кислоты. После перемешивания получали раствор, который затравливании 0,1 г ацетата гидрохлорида окситетрациклина. После перемешивания в течение 1,5 часов добавляли
400 мл толуола, и перемешивание продолжали. После перемешивания в течение в общей сложности пяти часов полученный осадок фильтровали и образующийся на фильтре осадок перемешивали с 400 мл ацетона,
еще раз промывали и фильтровали с добавлением 400 мл ацетона. Продукт высушивали при комнатной температуре и при пониженном давлении. Получали 188,06 г ацетата гидрохлорида окситетрациклина, содержащего (определено методом ЖХВД) 98.5 % ацетата гидрохлорида окситетрациклина и 0,45 % ацетата гидрохлорида декарбоксамидоокситетрациклина.
Выход регенерированного окситетрациклина составил 83,8 %.
Пример 4.
Получение дигидрата окситетрациклина из ацетата гидрохлорида окситетрациклина.
Ацетат гидрохлорида окситетрациклина (9,85 r), полученный как описано в примере 2, растворяли в 155
мл дистиллированной воды. Концентрированный аммиак добавляли по каплям в кислотный раствор (рН =
2,3) с одновременным перемешиванием и дигидрат окситетрациклина выпадал в осадок. После того, как величина рН смеси достигала 5, перемешивание продолжалось в течение 1 часа, осадок фильтровали, промывали 50 мл воды и высушивали при пониженном давлении при температуре 40 - 50 °С. Получали 8,6 г дигидрата окситетрациклина биологической активности 921 межд.ед./мг (вода: 7,1 %; 991 межд.ед./мг,
рассчитано по сухой массе). Продукт содержал (определено методом ЖХВД) 98,9 % дигидрата окситетрациклина и 0,4 % дигидрата ацетилдекарбоксамидоокситетрациклина.
Выход регенерированного окситетрациклина составил 87,16 %.
Пример 5.
Получение гидрохлорида окситетрациклина из ацетата гидрохлорида окситетрациклина.
Ацетат гидрохлорида окситетрациклина (95,7 г), полученный, как описано в примере 2, растворяли при
перемешивании в 100 мл дистиллированной воды. В раствор добавляли по каплям при перемешивании смесь
600 мл метанола и 110 мл концентрированной соляной кислоты.
Ввод осуществляли при комнатной температуре до тех пор, пока не начиналась кристаллизация гидрохлорида окситетрациклина (примерно 1/3 смеси), в то время как остаточная смесь вводилась по каплям при охлаждении до примерно + 2 °С. После ввода смеси осажденные кристаллы выдерживались при охлаждении без
перемешивания в течение одного часа, фильтровались, промывались 100 мл охлажденного метанола и высушивались при пониженном давлении при 40 °С. Получали 80,64 г гидрохлорида окситетрациклина с биологической активностью 918 межд.ед./мг (вода: 0,6 %; 924 межд.ед./мг в расчете на сухую массу). Продукт
содержал (определено методом ЖХВД) 93,9 % гидрохлорида окситетрациклина и 0,5 % гидрохлорида ацетилдекарбоксамидоокситетрациклина.
Выход регенерированного окситетрациклина составил 89,6 %.
Гидрохлорид окситетрациклина обрабатывали так же, как описано в примере 3. Продукт примера 3
(188,06 г) растворяли в 185 мл воды. Минимальное количество нерастворенных примесей фильтровали через
слой земли для фильтрования и осадок на фильтре промывали смесью 10 мл метанола и 1 мл воды. После
добавления по каплям смеси 1050 мл метанола и 192 мл концентрированной соляной кислоты при условиях,
описанных для обработки продукта в примере 2, из фильтрата осаждался гидрохлорид окситетрациклина.
После фильтрации и сушки получали 134,3 г гидрохлорида окситетрациклина с биологической активностью
933 межд.ед./мг с содержанием (определено методом ЖХВД) 97,2 % гидрохлорида окситетрациклина и 0,4
% гидрохлорида ацетилдекарбоксамидоокситетрациклина.
5
BY 2693 C1
Выход регенерированного окситетрациклина составил 79.07 %.
Пример 6.
Получение чистого гидрохлорида окситетрациклина.
Гидрохлорид окситетрациклина (50 г), полученный как описано в примере 5, согласно способу, описанному в примере 1, превращали в ацетат гидрохлорида окситетрациклина. Полученный ацетат гидрохлорида
окситетрациклина (49 г) затем превращали в гидрохлорид окситетрациклина согласно способу, описанному в
примере 5. Получали 39,36 г гидрохлорида окситетрациклина с биологической активностью 924 межд.ед./мг
(вода 0,6 %), и с содержанием (определено методом ЖХВД) 97,7 % гидрохлорида окситетрациклина и 0 %
гидрохлорида ацетилдекарбоксамидоокситетрациклина.
Государственный патентный комитет Республики Беларусь.
220072, г. Минск, проспект Ф. Скорины, 66.
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
156 Кб
Теги
патент, by2693
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа