close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY2971

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
(19)
BY (11) 2971
(13)
C1
(51)
(12)
6
C 12N 1/20,
A 01K 61/00
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ПАТЕНТНЫЙ
КОМИТЕТ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ
(54)
ШТАММ AZOMONAS AGILIS-28 - АНТАГОНИСТ БАКТЕРИЙВОЗБУДИТЕЛЕЙ АЭРОМОНОЗА РЫБ
(21) Номер заявки: 960448
(22) 1996.08.30
(46) 1999.09.30
(71) Заявитель: Государственное
предприятие
"БелНИИрыбпроект" (BY)
(72) Авторы: Скурат Э.К., Сиволоцкая В.А., Говор
Т.А. (BY)
(73) Патентообладатель: Государственное предприятие
"БелНИИрыбпроект" (BY)
(57)
Штамм Azomonas agilis-28 (коллекция музея микроорганизмов Белорусского научно-исследовательского
института экспериментальной ветеринарии им. Вышелесского Академии аграрных наук Республики Беларусь, коллекционный номер КМИЭВ № 6 - 28Д) − антагонист бактерий-возбудителей аэромоноза рыб.
BY 2971 C1
(56)
1. Краткий определитель бактерий Берги / Под редакцией Дж.Хоулта. – М.: Изд. Мир, 1980. – С.122-123.
2. Колешко О.И. Азотофиксирующие бактерии. Физиология развития. – Мн.: Изд. БГУ, 1981. – С.7.
3. Родина А.Г. Микроорганизмы и повышение рыбопродуктивности прудов. Изд. АН СССР. 1958.
4. А.с. СССР 1161554, МПК С 12N 15/00, A 01K 61/00, C 12R 1:01, 1985.
Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается штамма свободно живущих
азотофиксирующих бактерий Azomonas agilis-28, обладающего антагонистической активностью к возбудителю аэромоноза рыб и эффективного для профилактики данного заболевания.
Известно, что традиционные штаммы бактерий рода Azomonas встречаются в почве и воде [1].
Известны штаммы бактерий рода Azotobacter, участвующие в биологической фиксации азота в почвах
Республики Беларусь, что положительно сказывается на ведении земледелия [2].
Известно использование штаммов азотофиксирующих бактерий в рыбоводстве с целью увеличения рыбопродуктивности прудов [3].
Известно использование штамма бактерий Azomonas agilis, продуцирующего витамины группы "В" и молочную кислоту, для стимуляции роста рыб и профилактики аэромоноза в республике Казахстан [4].
Однако эти известные штаммы не обладают антагонистической активностью к бактериям Aeromonas hidrophila, выделенных при остром течении аэромоноза в Республике Беларусь. Это касается и препарата, созданного на основе штамма бактерий, выделенных из почвы г. Алма-Аты в связи с неадоптированностью его к условиям обитания рыб в прудовых хозяйствах Беларуси.
Задачей, на решение которой направлено заявляемое изобретение, является получение штамма свободноживущих бактерий, обладающего антагонистической активностью к аэромонадам и не вызывающего токсического действия на организм рыб.
Штамм Azomonas agilis-28 выделен из рыбоводного пруда рыбхоза «Новоселки» Брестской области в
1994 г. путем посева проб грунта на среду Эшби с последующим выделением чистых культур азотофиксирующих бактерий, сбора коллекции штаммов и отбора из них штамма, оказывающего ингибирующее действие на бактерии рода Aeromonas, из которого путем селекции выделен штамм Azomonas agilis-28.
Штамм Azomonas agilis-28 обладает устойчивым ингибирующим действием по отношению к возбудителям аэромоноза, непатогенен и нетоксичен для рыбы и лабораторных теплокровных животных.
Штамм Azomonas agilis-28 депонирован в Белорусском научно-исследовательском институте экспериментальной ветеринарии им. Вышелесского Академии аграрных наук Республики Беларусь (БелНИИЭВ)
под номером КМИЭВ N 6 - 28Д.
Штамм Azomonas agilis-28 имеет следующую характеристику. Морфолого-физиологические признаки.
BY 2971 C1
Морфология. Клетки размерами 2,5-5,0 * 1,5-3 мкм овальные или мелкие, кокковидные. Расположены
одиночно, парами или группами. Полиморфны. Колонии непигментированы. Эндоспор и цист не образуют.
Подвижны, выделяют капсульную слизь. Грамвариабельны.
Физиология. Растет на среде Эшби при 20-30 °С и при рН 5-9,0. Аэроб. Желатину не разжижает, вызывает помутнение МПБ. Редуцирует метиленовую синь и нитраты.
Отношение к углеводам. Разлагает сахарозу, лактозу, глюкозу, мальтозу с образованием кислоты и газа.
Отношение к спиртам. Разлагает маннит. Дульцит не разлагает. Не обладает аминолитической активностью, не гемолизует эритроциты барана. Каталазоположителен.
На стерильном обезжиренном молоке и в молочной сыворотке образует молочную кислоту и витамины
группы "В".
Непатогенен и нетоксикогенен для теплокровных лабораторных животных (контрольные исследования
БелНИИЭВ).
Токсикогенность. Смывы суточных агаровых культур в концентрации 1,5 млрд., 1,0 млр., 50 млн. микробных тел,
инактивированные нагреванием не вызывали гибели белых мышей при внутрибрюшинном введении.
Вирулентность. Введение смывов 18 часовой агаровой культуры в разведении 1,5 млрд., 1,0 млр. и 50 млн. белым
мышам не сопровождалось гибелью.
Обладает устойчивым ингибирующим действием к бактериям рода Aeromonas - возбудителям аэромоноза
карпов.
Отношение к антибиотикам. Устойчив к рифампицину и левомицитину, чувствителен к ампицилину,
стрептомицину, эритромицину.
Хранится на среде Эшби в холодильнике при 4-6 °С и в мофилизированной культуре при 4 °С.
Пример 1.
Штамм Azomonas agilis-28 выращивали на среде Эшби следующего состава:
дистиллированная вода
1000,0
маннит
20,0
фосфорнодвукалиевая соль
0,2
сернокислый магний
0,2
хлористый натрий
0,2
сернокислый калий
0,2
мел
5,0.
Оптимальная температура инкубирования штамма 20-30 °С.
Пример 2.
Производили высевание точечных посевов коллекционных штаммов азотофиксирующих бактерий на мясопиптонном агаре (МПА) в чашках Петри в течение 48 часов при температуре 26-28 °С. Выращенные отдельные колонии обрабатывали парами хлороформа в течение 20 минут в эксикаторах. Затем на поверхность
среды с колониями накладывали стерильные фильтровальные диски, пропитанные суточной бульонной культурой (лабораторные патогенные штаммы) возбудителей аэромоноза и инкубировали в термостате. Через сутки
учитывали результаты эксперимента. Всего было исследовано 32 штамма азотофиксирующих бактерий. Контролем служили бактерии аэромонад, инкубированные тем же способом на чистых средах МПА.
При учете результатов было комиссионно установлено ингибирование роста аэромонад вокруг колоний
азотофиксирующих бактерий в 2-х чашках, в которых испытывались на антагонистическую активность
штаммы № 26 и № 28. Штамм-28 давал зону задержки роста аэромонад. В остальных чашках, в том числе
контрольных, наблюдался сплошной рост аэромонад. Таким образом, из собранной в прудах коллекции азотофиксирующих бактерий отобранный штамм-28 обладал антагонистической активностью к аэромонадам.
После изучения культурально-морфологических свойств штамм-28 отнесен к Azomonas, вид agilis.
Пример 3.
В центре чашек с МПА производили посев Azomonas agilis-28 и методом "перпендикулярных штрихов"
высевали аэромонады для определения антагонистического действия Azomonas agilis-28 к 15 патогенным
штаммам Aeromonas.
При учете результатов через сутки было зарегистрировано ингибирование роста 12 штаммов (80 %) аэромонад, проявляющееся в отсутствии роста возбудителей аэромоноза. В контрольных чашках (без посева
Azomonas agilis-28) отмечался хороший рост аэромонад.
Таким образом, штамм Azomonas agilis проявлял высокую антагонистическую активность к аэромонадам.
Пример 4.
Антагонистические свойства Azomonas agilis к аэромонадам были подтверждены методом "блоков". Для
чего Azomonas agilis засевали сплошным газоном, через 24 часа инкубирования в термостате стерильным
металлическим сверлом готовили блоки. На чашку с посевом аэромонад наносили блоки, инкубировали в
термостате и через 24 часа учитывали результат.
При учете результатов исследования было установлено, что рост аэромонад полностью угнетался. Таким
образом, было установлено, что при селекции штамма Azomonas agilis его антагонистическая активность к
2
BY 2971 C1
аэромонадам стабильна и даже несколько возрастает в процессе селекции штамма.
Пример 5.
Производили инкубирование штамма Azomonas agilis на среде Эшби 24 часа, после чего смыв культуры,
содержащей 1,5 млн. микробных клеток, 1 млрд. и 50 млн. микробных клеток, вводили годовикам карпа
внутрибрюшинно. Волнений, отходов рыбы не наблюдалось.
При испытании токсичности Azomonas agilis для рыб перроральным способом было установлено, что дозы 5, 10, 15 млрд. мик. тел не вызывали токсического действия. Кроме того, после окончания эксперимента
отмечалось увеличение массы испытуемых рыб. По сравнению с контрольной группой вес годовиков карпа
был выше на 5,2 г, непатогенность и нетоксичность штамма была подтверждена контрольными исследованиями на белых мышах, проведенными в БелНИИЭВ ААНРБ.
Штамм Azomonas agilis-28, обладающий антагонистической активностью, нетоксичен для животных.
Может быть использован в дальнейшем в производстве бактериального препарата - пробиотика для профилактики аэромоноза рыб. Кроме того, являясь продуктом молочной кислоты и витаминов группы В1, он стимулирует рост животных, в том числе рыб.
Государственный патентный комитет Республики Беларусь.
220072, г. Минск, проспект Ф. Скорины, 66.
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
133 Кб
Теги
by2971, патент
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа