close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY3058

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
(19)
BY (11) 3058
(13)
C1
(51)
(12)
6
C 12N 1/20
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ПАТЕНТНЫЙ
КОМИТЕТ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ
(54)
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПИТАТЕЛЬНОЙ СРЕДЫ
ДЛЯ ВЫРАЩИВАНИЯ АЭРОБНЫХ БАКТЕРИЙ
(21) Номер заявки: 951023
(22) 1995.12.30
(46) 1999.12.30
(71) Заявители: Витебская биофабрика, Витебская
государственная
академия
ветеринарной
медицины (BY)
(72) Авторы: Зайцев В.В., Зелютков Ю.Г. (BY)
(73) Патентообладатель: Витебская биофабрика (BY)
(57)
Способ получения питательной среды для выращивания аэробных бактерий, включающий ферментативный гидролиз форменных элементов и сыворотки крови животных и смешивание полученных гидролизатов,
отличающийся тем, что для смешивания используют гидролизаты форменных элементов и сыворотки крови животных, содержащие 200-250 мг % и 170-220 мг % аминного азота соответственно, в соотношении
75,0:25,0 для культивирования сальмонелл, эшерихий, стафилококков, стрептококков и диплококков; 50,060,0:40,0-50,0 - для листерий, рожистой палочки, гемофилов, пастерелл, кампилобактерий и 80,0:20,0 - для
бруцелл и гемолитической палочки.
(56)
1. Временная инструкция по изготовлению и контролю вакцины против паратифа, пастереллеза и диплококкоза свиней. – М., 1968. – С. 4-5.
2. Временная инструкция по изготовлению и контролю гидроокисьалюминиевой формол-тиомерсалловой
вакцины против колибактериоза (эшерихиоза) поросят, телят, ягнят. – М., 1987. – С. 6-7.
3. SU 1630314, МПК C12N 1/20, 1995.
Предлагаемое изобретение относится к микробиологической промышленности, в частности к питательным средам для выращивания микроорганизмов.
Известны способы приготовления питательных сред для культивирования аэробных бактерий на мясной
основе: мясопептонный бульон (простой), мясопептонный агар, содержащие, мас. %: углерод - 18-21, азот
17-21, фосфор 10-12, минеральные вещества 30-35 и другие компоненты 11-25 [I].
Известны питательные среды на минеральной основе: среда Матусевича, А-27, А-54 и другие, содержащие мел, сахарозу, аппатит, стеклянную пудру, агар и другие компоненты [2].
Включение в состав вышеназванных питательных сред большого количества дорогостоящих компонентов, длительность культивирования, незначительный выход биомассы, большое количество отходов отработанной среды делает невыгодным их промышленное применение.
Наиболее близким техническим решением к предлагаемому способу является питательная среда для выращивания белок А продуцирующих бактерий [3] и способ её получения, включающий приготовление ферментативно-кислотного гидролизата форменных элементов крови крупного рогатого скота, приготовление
ферментативно-кислотного гидролизата сыворотки крови крупного рогатого скота, их осветление, разведение водой до определенного содержания аминного азота, смешивание в соответствующих соотношениях,
стерилизацию, добавление этанола и глюкозы. Такой способ обеспечивает получение достаточно эффективной питательной среды, позволяющей значительно повысить накопление бактериальной массы.
BY 3058 C1
Однако и этот способ не лишен недостатков: высокое содержание в получаемой питательной среде гемпигментов-ингибиторов роста микроорганизмов, высокое содержание в ней ионов хлора, аммиака и гуминовых веществ (40-45 мг %) - ингибиторов метаболизма, недостаточно высокий выход целевого продукта.
Задача изобретения - упрощение и удешевление способа, повышение биологической активности и выхода
целевого продукта.
Поставленная цель достигается тем, что приготовленные ферментативные гидролизаты форменных элементов и сыворотки смешивают в необходимых соотношениях и стерилизуют.
Сущность предлагаемого способа получения питательной среды для выращивания аэробных бактерий заключается в том, что смешивают ферментативные гидролизаты форменных элементов и сыворотки крови
животных, содержащие 200-250 мг % и 170-220 мг % аминного азота соответственно, в соотношении
75,0:25,0 для культивирования сальмонелл, эшерихий, стафилококков, стрептококков и диплококков; 50,060,0:40,0-50,0 - для листерий, рожистой палочки, гемофилов, пастерелл, кампилобактерий и 80,0:20,0 - для
бруцелл и гемолитической палочки.
Для приготовления ферментативного гидролизата форменных элементов крови (компонент “А”) сначала
готовят ферментационную смесь, используя воду и форменные элементы крови животных в соотношении по
объёму 4:1, вводят добавки гидрокарбоната натрия 8-10 г/л, панкреатина 30 г/л, хлороформа 12 см3/дм3, перемешивают в течение 1 часа и осуществляют ферментацию 24-48 часов. Надосадочную часть жидкости декантируют, прогревают 20-30 минут при 115-120 °С, охлаждают, центрифугируют.
Для приготовления ферментативного гидролизата сыворотки крови (компонент “Б”), воду и сыворотку
закачивают в ферментер в соотношении 1:1, проводят ферментолиз в течение 48-72 часов при температуре
40-45 °С и периодическом перемешивании. Затем закисляют, добавляя уксусную или соляную кислоту, до
рН 7,2-7,5.
Для приготовления питательной среды смешивают гидролизат форменных элементов крови животных с
содержанием аминного азота 200-250 мг % и гидролизат сыворотки крови животных с содержанием аминного азота 170-220 мг % в количественном соотношении (об. %) для культивирования сальмонелл, эшерихий,
стафилококков, стрептококков - 75,0:25,0; листерий, рожистой палочки, пастерелл, кампилобактерий - 50,060,0 : 40,0-50,0, гемолитической палочки и бруцелл - 80,0:20,0.
Пример 1. Приготовление компонента “А”.
Готовят ферментационную смесь, для чего закачивают в ферментер определенный объем водопроводной
воды и добавляют форменные элементы крови животных в соотношении 4:1. Добавляют 8-10 г/л гидрокарбоната натрия, 30 г/дм3 панкреатина, хлороформ - 12 см3/дм3 и перемешивают в течение 1 часа. Ферментацию ведут 24-48 часов при 38-45 °С, периодически перемешивая. Надосадочную часть жидкости декантируют, прогревают при 115-120 °С 20-30 минут, охлаждают и центрифугируют.
Пример 2. Приготовление компонента “Б”.
В ферментер закачивают водопроводную воду, добавляют хлороформ - 24-30 см3/дм3, панкреатин - 80
г/дм3 , гидрокарбонат натрия - 14-15 г/дм3, перемешивают в течение 20-30 минут. Затем закачивают в ферментер сыворотку в соотношении 1:1 к объему ферментационной смеси и нагревают до 40-45 °С. Ферментолиз ведут при этой температуре в течение 48-72 часов до определенного содержания аминного азота в переваре. Смесь закисляют добавлением уксусной или соляной кислоты до рН 7,2-7,5.
Пример 3. Приготовление жидкой питательной среды.
Компоненты “А” и “Б”, каждый в отдельности, разводят водопроводной водой до определенного содержания
аминного и общего азота, смешивают в соответствующем соотношении, стерилизуют при 115-120 °С в течение 4045 минут и используют для культивирования микроорганизмов.
Пример 4. Приготовление обезвоженных компонентов “А” и “Б”.
Компоненты “А” и “Б”, каждый в отдельности, упаривают при пониженном атмосферном давлении (0,080,09 МПа) при температуре 75-80 °С до содержания сухих веществ в концентрате 15-20 %. Концентраты, осветленные путем фильтрации через картон фильтровальный для пищевых жидкостей ГОСТ 12290-80, нагревают до температуры 75-80 °С и подают с помощью сжатого воздуха на распылительное устройство сушилки. Продукт сушат при температуре входящего воздуха 115-160 °С и выходящего воздуха 80-85 °С. Сухой
продукт фасуют в двойные полиэтиленовые мешки или стеклянные банки.
Для приготовления из сухих компонентов “А” и “Б” жидкой формы готовят 2 % растворы, смешивая их в
определенных соотношениях.
Проведенные эксперименты показывают (табл. 1), что предлагаемая питательная среда при определенных соотношениях компонентов “А” и “Б” пригодна для культивирования разнообразных бактериальных
культур.
BY 3058 C1
Таблица 1
Оптимальное
соотношение
компонентов
“А” и “Б”
(об. %)
66:34
75:25
80:20
Контрольная
среда (прототип)
стафилококки
сальмонеллы
2,8±0,2
2,8±0,2
2,0±0,2
2,6±0,2
2,5±0,2
2,2±0,2
Накопление биомассы бактерий (млрд/см3) п=18
гемолит.
стрепкампипасте- рожист.
кишечлистетококлобакреллы палочка
ная парии
ки
терии
лочка
0,8±0,1
1,8±0,1 4,9±0,2
2,9±0,2
0,8±0,1 0,9±0,1
0,6±0,1
1,2±0,1 4,9±0,2
2,8±0,2
0,4±0,1 0,6±0,1
0,5±0,1
0,8±0,1 4,2±0,2
2,8±0,2
0,3±0,1
2,0±0,2
1,8±0,2
0,6±0,1
1,2±0,1
4,2±0,2
2,2±0,2
0,5±0,1
бруцеллы
0,6±0,1
1,0±0,1
1,0±0,1
1,0±0,1
0,6±0,1
Из данных таблицы 2 видно, что культурально-морфологические, биохимические свойства культур микроорганизмов, выращенных на предлагаемой питательной среде, были сходны с таковыми культур микроорганизмов, выращенных на контрольных средах после 5-кратного пассирования. Культуры, выращенные на
испытуемых средах, в течение 5 пассажей не диссоциировали. На основании полученных данных были подобраны оптимальные комбинации компонентов “А” и “Б” для различных видов микроорганизмов.
Таблица 2
№
п/п
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
Свойства
Микроорганизмы
Стафилококки
Сальмонеллы
Кампилобактерии
Листерии
Стрептококки
Гемолитическая
кишечная палочка
Пастелеллы
Рожистая палочка
Бруцеллы
морфологические
-
биохимические
биологические
диссоциация
-
-
-
-
-
-
Примечание: (+) - наличие, (-) - отсутствие изменений основных свойств культур микроорганизмов.
Государственный патентный комитет Республики Беларусь.
220072, г. Минск, проспект Ф. Скорины, 66.
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
120 Кб
Теги
by3058, патент
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа