close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY3092

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
(19)
BY (11) 3092
(13)
C1
(51)
(12)
6
C 12N 1/20
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ПАТЕНТНЫЙ
КОМИТЕТ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ
(54)
ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ
ЛЕПТОСПИРОЗНЫХ БАКТЕРИЙ И СПОСОБ ЕЕ ПОЛУЧЕНИЯ
(21) Номер заявки: 951024
(22) 1995.12.30
(46) 1999.12.30
(71) Заявитель: Витебская биофабрика (BY)
(72) Авторы: Зайцев В.В., Кондратенко М.Ю.,
Косилкина Л.С. (BY)
(73) Патентообладатель: Витебская биофабрика (BY)
(57)
1. Питательная среда для культивирования лептоспирозных бактерий, содержащая белковую питательную основу, фосфатно-буферный раствор и воду, отличающаяся тем, что в качестве белковой основы она
содержит 3 %-ый щелочной гидролизат казеина и дополнительно - 0,5 % аммиачно-перекисный гидролизат торфа в качестве стимулятора роста при следующем соотношении компонентов, об. %:
щелочной гидролизат казеина, 3 %-ый
10
аммиачно-перекисный гидролизат торфа, 0,5 %-ый
5-10
фосфатно-буферный раствор
10
вода дистиллированная
остальное.
2. Способ получения питательной среды для культивирования лептоспирозных бактерий, включающий
смешивание компонентов, отличающийся тем, что предварительно инкубируют сухой казеин в водном растворе едкого натра в течение 40-60 минут при температуре 100-120 °С и соотношении ингредиентов (вес. %)
1:0,12-0,15 и обрабатывают торф с влажностью 50 % аммиачно-перекисным раствором, содержащим 1,2-1,4
% аммиака и 0,5-0,8 % перекиси водорода при соотношении ингредиентов 1:4, после чего смешивают полученные щелочной гидролизат казеина и аммиачно-перекисный гидролизат торфа, добавляют фосфатнобуферный раствор и дистиллированную воду.
3. Способ по п.2, отличающийся тем, что щелочной гидролизат казеина и аммиачно-перекисный гидролизат торфа смешивают в соотношении 1:1.
4. Способ по п.2, отличающийся тем, что щелочной гидролизат казеина и аммиачно-перекисный гидролизат торфа смешивают в соотношении 1:2.
BY 3092 C1
(56)
1. Инструкция по изготовлению и контролю групповых агглютинирующих лептоспирозных сывороток. –
М., 1985. – С. 10.
2. Инструкция по изготовлению и контролю вакцины поливалентной ВГНКИ против лептоспироза животных. – М., 1992. – С. 16.
3. Справочник ветеринарного лаборанта / Под ред. В.Я.Антонова. - М.: Колос, 1981. - С. 37.
Изобретение относится к области микробиологической промышленности, в частности к производству
биологических препаратов против лептоспироза.
Известны и широко применяются питательные среды для культивирования лептоспир [1,2,3]. Это среды:
Терских, Уленгута, Любашенко, водно-сывороточная, Ферворта-Вольффа, а также полужидкая среда Флетчера.
Наиболее близким техническим решением к предлагаемому изобретению является среда Любашенко [3].
Среда содержит в качестве белковой основы инактивированную сыворотку кролика или овец, калий фосфорнокислый однозамещенный и натрий фосфорнокислый двузамещенный в роли фосфатного буфера.
BY 3092 C1
Эта питательная среда не обеспечивает достаточно высокого выхода биомассы, имеет недостаточную
стандартность свойств из-за различных индивидуальных свойств сыворотки крови животных-доноров, используемых при ее приготовлении, вакцина изготовленная на сывороточной среде обладает побочным действием. Трудоемок также процесс приготовления среды в промышленном масштабе в стеклянных бутылях.
Кроме того, стерилизация среды возможна только путем фильтрации через фильтрпластины "Ф" и "СФ" дорогостоящий и трудоемкий процесс, не всегда гарантирующий стерильность среды.
Задача изобретения - повышение биологической активности питательной среды, упрощение и удешевление способа.
Это достигается тем, что питательная среда для культивирования лептоспирозных бактерий содержит в
качестве основы щелочной гидролизат казеина и стимулятор роста из торфа.
Сущность предлагаемого изобретения заключается в том, что питательная среда для культивирования
лептоспирозных бактерий в качестве белковой основы содержит 3 %-ый щелочной гидролизат казеина и дополнительно - 0,5 %-ый аммиачно-перекисный гидролизат торфа в качестве стимулятора роста при следующих соотношениях компонентов, об. %:
щелочной гидролизат казеина, 3 %-ый
10
аммиачно-перекисный гидролизат торфа, 5 %-ый
5-10
фосфатно-буферный раствор
10
вода дистиллированная
остальное.
Способ получения питательной среды для культивирования лептоспирозных бактерий, включающий
смешивание компонентов, предусматривающий инкубацию сухого казеина в водном растворе едкого натра в
течение 40-60 минут при температуре 100-120 ºС и соотношении ингредиентов (вес. %) 1:0,12 - 0,15 и обработку торфа с влажностью 50 % аммиачно-перекисным раствором, содержащим 1,2-1,4 % аммиака и 0,5-0,8
% перекиси водорода при соотношении ингредиентов 1:4, смешивание полученных щелочного гидролизата
казеина и аммиачно-перекисного гидролизата торфа, добавление фосфатно-буферного раствора и дистиллированной воды.
Щелочной гидролизат казеина и аммиачно-перекисный гидролизат торфа смешивают в соотношении 1:1
или 1:2.
Пример 1. Приготовление щелочного гидролизата казеина (ЩГК).
10 г сухого казеина ресуспендируют в 100 см3 дистиллированной воды, добавляют едкий натр до концентрации 1,2-1,5 %. Смесь инкубируют при температуре 100-120 ºС в течение 40-60 минут. Оптимальные соотношения сухого казеина и едкого натра при гидролизе 1:0,12-0,15. Гидролизат охлаждают до температуры 1520 ºС, закисляют до рН 4,6-5,2 50 %-ой уксусной кислотой, центрифугируют или отстаивают. Надосадок
раскисляют 10 %-ым раствором едкого натра до рН 6,8-7,2.
Пример 2. Приготовление биогенного стимулятора из торфа (БСТ).
20 г торфа влажностью 50 % степенью разложения не менее 20 % прогревают при 100-120 ºС в 80 см3 аммиачно-перекисного раствора, содержащего 1,2-1,4 % аммиака и 0,5-0,8 % перекиси водорода, в течение 2
часов. Гидролизат торфа закисляют соляной кислотой до рН 2,0-2,5, прогревают при температуре 90-100 ºС
в течение 20-30 минут и центрифугируют. Надосадок сливают и раскисляют 20 %-ым раствором едкого натра до рН 7,0-7,4.
Пример 3. Приготовление питательной среды.
ЩГК разводят дистиллированной водой до содержания сухих веществ 0,33 %, добавляют БСТ до 0,05 %.
К 9 дм3 этой смеси добавляют 1 дм3 фосфатно-буферного раствора.
Для приготовления ФБР к 1 дм3 дистиллированной воды добавляют 20,4 г натрия фосфорнокислого двузамещенного, 2,45 г калия фосфорнокислого однозамещенного и 5 г NaCl.
Пример 4. Питательную среду для выращивания лептоспир готовят путем смешивания ингредиентов при
следующем соотношении, об. %:
щелочной гидролизат казеина, 3 %-ый
10
гидролизат торфа, 0,5 %-ый
2
фосфатно-буферный раствор
10
вода дистиллированная
остальное.
Накопление лептоспир составило 40 млн. микробных тел в 1 см3.
Пример 5. Питательную среду готовят аналогично примеру 4, но гидролизат торфа добавляют до содержания (об. %) 5.
Накопление лептоспир установлено 100 млн. микробных тел в 1 см3.
Пример 6. Питательную среду готовят аналогично примеру 4, но гидролизат торфа добавляют до содержания (об. %) 10.
Концентрация микробных тел лептоспир на данной среде составила 120 млн./см3.
Пример 7. Питательную среду готовили аналогично примеру 4, но гидролизат торфа добавляли до содержания (об. %) 20.
Концентрация микробных тел лептоспир на данной среде составила 50 млн./см3.
2
BY 3092 C1
Пример 8. Питательную среду готовят путем смешивания ингредиентов при следующем соотношении,
об. %:
щелочной гидролизат казеина, 3 %-ый
5
гидролизат торфа, 0,5 %-ый
10
фосфатно-буферный раствор
10
вода дистиллированная
остальное.
Накопление лептоспир - 52 млн. микробных тел в 1 см3.
Пример 9. Питательную среду готовят аналогично примеру 8, но щелочной гидролизат торфа добавляют
до содержания (об. %) 15.
Накопление лептоспир составило 118 млн./см3.
Пример 10. Питательную среду готовят путем смешивания ингредиентов при следующем соотношении,
об. %:
щелочной гидролизат казеина, 3 %-ый
10
гидролизат торфа, 0,5 %-ый
10
фосфатно-буферный раствор
5
вода дистиллированная
остальное.
Концентрация микробных тел на данной среде составила 28 млн./см3.
Пример 11. Питательную среду готовят аналогично примеру 10, но добавляют фосфатно-буферный раствор до содержания (об. %) 15.
Концентрация микробных клеток на данной среде составила 12 млн./см3.
На жидкой казеиновой среде накопление лептоспир составляло 100-120 млн. микробных тел, в то время
как на известной - 60 млн. микробных тел. Таким образом, накопление биомассы лептоспир на предложенной среде в 1,66-2,0 раза выше, чем на известной.
Себестоимость предлагаемой среды в 16 раз ниже, чем известной, применяемой в настоящее время для
производства противолептоспирозных препаратов.
Государственный патентный комитет Республики Беларусь.
220072, г. Минск, проспект Ф. Скорины, 66.
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
105 Кб
Теги
by3092, патент
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа