close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY3369

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
(19)
BY (11) 3369
(13)
C1
(51)
(12)
6
C 07H 15/252,
C 07C 43/174
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ПАТЕНТНЫЙ
КОМИТЕТ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ
(54)
АНТРАЦИКЛИНОВЫЕ ГЛИКОЗИДЫ, СПОСОБ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ,
ПРОМЕЖУТОЧНОЕ ДИИОД-СОЕДИНЕНИЕ И СПОСОБ ЕГО
ПОЛУЧЕНИЯ
(21) Номер заявки: 1417
(22) 1993.12.07
(60) SU 5001540, 1990.12.18
(86) РСТ/ЕР90//02229, 1990.12.18
(31) 8928654.6, 9007513.6
(32) 1989.12.19, 1990.04.03
(33) GB
(46) 2000.06.30
(71) Заявитель: ФАРМАЦИЯ энд АПДЖОН С.п.А.
(IT)
(72) Авторы: Альберто Барджотти, Мариа Гранди,
Антонио Суарато, Даниэла Фаиарди (IT)
(73) Патентообладатель: ФАРМАЦИЯ
энд
АПДЖОН С.п.А. (IT)
(57)
1. Антрациклиновые гликозиды общей формулы А:
BY 3369 C1
,A
в которой Х представляет прямую или разветвленную С1-C6 алкильную группу или бензильную группу и
которые имеют (S) или (R) конфигурацию при 2’’-углеродном атоме, и их фармацевтически приемлемые кислотно-аддитивные соли.
2. Соединение по п. 1, в котором Х представляет метил.
3. Соединение по п. 1, в котором Х представляет С2-C6 алкил.
4. Соединение по п. 1, которое выбрано из группы, включающей:
3’-дезамино-3’-[2’’(S)-бензилокси-4’’-морфолинил]-доксорубицин и его хлоргидрат,
3’-дезамино-3’-[2’’(S)-этокси-4’’-морфолинил]-доксорубицин и его хлоргидрат,
3’-дезамино-3’-[2’’(S)-метокси-4’’-морфолинил]-доксорубицин и его хлоргидрат,
3’-дезамино-3’-[2’’(R)-изопропилокси-4’’-морфолинил]-доксорубицин и его хлоргидрат и
3’-дезамино-3’-[2’’(R)-метокси-4’’-морфолинил]-доксорубицин и его хлоргидрат.
5. Способ получения антрациклингликозида формулы А, определенной в п. 1, или его фармацевтически
приемлемой соли, отличающийся тем, что осуществляют:
(I) реакцию доксорубицина или его кислотно-аддитивной соли с дииод-соединением общей формулы С:
BY 3369 C1
I
I
O
,C
O X
где Х имеет значения, определенные в п. 1, и
(II) если необходимо, превращение антрациклингликозида формулы А, полученного таким образом, в его
фармацевтически приемлемую кислотно-аддитивную соль.
6. Способ по п. 5, отличающийся тем, что доксорубицин или его хлоргидрат, растворенный в полярном
апротонном растворителе, подвергают взаимодействию при комнатной температуре и в присутствии сухого
органического основания с дииод-соединением общей формулы С с получением соответствующего морфолинил-доксорубицинового производного формулы А, которое после очистки на силикагельной колонке с использованием в качестве элюирующей системы смеси метиленхлорид-метанол (97:5 объем/объем) выделяют
с помощью обработки метанольным безводным хлористым водородом в виде его хлоргидрата.
7. Дииод-соединение формулы С
I
I
O
,C
O X
где Х представляет прямую или разветвленную С1-C6 алкильную группу или бензильную группу.
8. Способ получения дииод-соединения формулы С, определенной в п. 7, отличающийся тем, что осуществляют:
(а) периодатное окисление соединения формулы S1:
OH
O
OH
OX
, S1
OH
в которой Х имеет значения, определенные в п. 1,
(в) восстановление полученного таким образом диальдегидного производного формулы D1:
O
O
OX
HH
, D1
O
где Х имеет значения, определенные выше,
(с) сульфонирование полученного таким образом дигидроксипроизводного формулы Е1:
O
1
OX , Е
HO
HO
где Х имеет значения, определенные выше, и
(d) иодирование сульфонированного производного, полученного таким образом.
9. Способ по п. 8, отличающийся тем, что D- или L-арабинозу подвергают реакции со спиртом Х-ОН,
где Х имеет значения, определенные в п. 1, с получением таким образом соединения формулы S1.
10. Способ по п. 9, отличающийся тем, что дигидроксипроизводное формулы Е1 на стадии (с) подвергают реакции с п-толуолсульфонилхлоридом.
Приоритет по пунктам формулы изобретения:
от 1989.12.19:
пп. 1, 2 формулы, где Х - метил,
п. 4 формулы - соединения
3’-дезамино-3’-[2’’(S)-метокси-4’’-морфолинил]-доксорубицин и его хлоргидрат,
3’-дезамино-3’-[2’’(R)-метокси-4’’-морфолинил]-доксорубицин и его хлоргидрат.
пп. 5-9 формулы с учетом значения Х - метил;
от 1990.04.03:
пп. 1, 3 формулы, где Х - прямой или разветвленный С2-C6-алкил или бензил,
п. 4 формулы - соединения:
3’-дезамино-3’-[2’’(S)-бензилокси-4’’-морфолинил]-доксорубицин и его хлоргидрат,
3’-дезамино-3’-[2’’(S)-этокси-4’’-морфолинил]-доксорубицин и его хлоргидрат,
2
BY 3369 C1
3’-дезамино-3’-[2’’(R)-изопропилокси-4’’-морфолинил]-доксорубицин и его хлоргидрат,
пп. 5-9 формулы с учетом значения Х - прямой или разветвленный С2-C6-алкил или бензил.
(56)
1. GB 2172594, МПК C07D 413/04, 1986.
2. GB 2124224, МПК C07D 413/04, 1984.
3. US 4672057, МПК A61K 31/70, 1986.
Изобретение относится к антрациклиновым гликозидам, способам их получения и фармацевтическим
композициям, содержащим эти соединения.
Изобретение обеспечивает новые антрациклиновые гликозиды общей формулы А:
,A
в которой 3’-атом азота включен в 2-алкокси-4-морфолиниловое кольцо;
Х - линейная или разветвленная C1-С6-алкильную группа или бензильный радикал -СН2С6Н5;
2’’- углеродный атом, имеющий (S)- или (R)-конфигурацию, а также фармацевтически приемлемые кислые соли присоединения на их основе. Предпочтительной солью является соль хлористоводородной кислоты
- гидрохлорид.
Морфолино-антрациклины являются хорошо известными соединениями, проявившими на экспериментальных опухолях мышей обнадеживающую противоопухолевую активность (Acton E.W. Bioactive Molecules. I.W. Lown Elveiser. 1988, т. 6. - С. 55-101). Среди них - 2’’-метокси-4-морфолинилантрациклины
(Х=ОСН3) уже были заявлены (Патент США А-4, 672057, МПК А 61 K 31/70). Эти соединения были получены согласно способу восстановительного алкилирования с использованием хирального диальдегида. Согласно способу настоящего изобретения, замещенные морфолиниловые кольца получают путем бисалкилирования 3-аминогруппы антрациклинов новыми хиральными 1,5-дииодо-2-алкокси- или бензилоксипроизводными, включенными в рамки изобретения.
Предпочтительные антрациклиновые гликозиды общей формулы А включают: А 1:-3’-деамино-3-(2’’)(S)
(бензилокси-4’’-морфолинил)-доксорубицин
(Х=СН2С6Н5);
А
2:-3’-деамино-3’=(2’’)(S)-(этокси-4’’морфолинил)-доксорубицин (Х=С2Н5); А 3:-3’-деамино-3’-(2’’)(R)-(изопропилокси-4’’-морфолинил) доксорубицин (Х=СН(СН3)2); А 4:-3’-деамино-3’-(2’’)(S)-(метокси-4’’-морфолинил)доксорубицин (Х=СН3); А5:3’-деамино-3’-(2’’)(R- метокси-4’’-морфолинил)-доксорубицин (Х=СН3) и хлористоводородные соли на их
основе. Соединения могут иметь (S) или (R) конфигурацию у атома углерода С-2’’ морфолинового кольца.
Новые антибиотики на основе антрациклиновых гликозидов настоящего изобретения, т.е. те, которые
представлены общей формулой А, получают путем создания замещенного морфолинилового кольца на сахарной группировке антрациклинового гликозида доксорубицина общей формулы (В):
В
3
BY 3369 C1
Таким образом, настоящее изобретение обеспечивает способ получения антрациклинового гликозида
формулы (А) или фармацевтически приемлемой кислой соли присоединения на его основе, который включает следующие стадии: (i) взаимодействие доксорубицина или кислой соли присоединения на его основе, например гидрохлорида с дииодосодержащим соединением общей формулы (С):
,
в которой Х определен выше; и (ii), если в этом есть необходимость, превращение антрациклинового
гликозида формулы (А) в фармацевтически приемлемую кислую соль присоединения на его основе.
Алкилирование С-3’-аминогруппы доксорубицина или соли доксорубицина обычно проводят в стадии (i)
в полярном апротонном растворителе и в присутствии сухого органического основания, такого, как триэтиламин. Реакцию обычно проводят при комнатной температуре в течение 8-24 ч. Атом углерода С-2, несущий
ОХ-группу, в дииодосодержащем соединении может иметь (S)- или (R)-конфигурацию. В предпочтительном
варианте доксорубицин или гидрохлорид доксорубицина, растворенный в полярном апротонном растворителе, взаимодействует при комнатной температуре и в присутствии сухого органического основания с дииодосодержащим соединением общей формулы (С), образуя соответствующее морфолинилдоксорубициновое
производное формулы (А). После очистки на колонке из силикагеля с использованием в качестве элюирующего растворителя смеси метиленхлорид-метанол, взятой в объемном соотношении 97:5, его выделяют в виде гидрохлорида, обработав метанольным раствором сухого хлористого водорода. Чистый 2’’/R/-[(C1С6)алкокси или бензилокси]-антрациклиновый гликозид формулы (А) либо его соль, или чистый 2’’/S/-[(С1С6)алкокси или бензилокси]-антрациклиновый гликозид формулы (А) либо его соль могут быть обеспечены
таким образом согласно способу настоящего изобретения.
Изобретение также обеспечивает способ получения оптически чистого дииодосодержащего соединения
формулы (С), исходя из предшественника сахара общей формулы (S), полученного из L-арабинозы:
,
в которой Х имеет значения, определенные выше.
Этот способ включает: (а) периодатное окисление соединения формулы (S’):
в которой Х определен выше; (b) восстановление полученного таким образом соединения формулы (D’):
в которой Х определен выше; (с) сульфирование полученного таким образом дигидроксипроизводного
формулы (Е):
в которой Х определен выше, и (d) иодирование сульфированного производного, полученного таким образом.
Для получения дииодосодержащих соединений формулы (С) 1-замещенные сахара S’, полученные в соответствии со стандартными методиками (Methods Carbohydrate Chemistry. Acad. Press. Т. 1. 1962), сначала
преобразуются в диальдегидные производные D’. Обычно в качестве исходного материала используют Lарабинозу. Она подвергается взаимодействию со спиртом Х-ОН, образуя при этом соединение формулы (S’):
диальдегид-производные могут быть получены путем периодатного окисления водных растворов с последующим восстановлением в 1,5-дигидрокси-2-алкокси-или бензилокси-3-оксапентан Е1, используя в качестве
восстановителя такие вещества, как борогидрид натрия или цианоборогидрид натрия, при рН 6,5 и проводя
восстановление в смеси воды и метанола.
Полученные в результате дигидросоединения Е1 сульфируют в положении 1- и 5-гидроксильных групп,
используя для этих целей обычно применяемый раствор пара-толуолсульфохлорида в пиридине, сульфирование проводят при 4 °С, при этом образуются сульфониловые эфиры формулы F, из которых получают
дииодопроизводные С после обработки йодидом калия или натрия в апротонном растворителе, таком, как
4
BY 3369 C1
метилэтилкетон, при 85 °С в течение 1-2 дней. Последовательность этих реакций не влияет на хиральность в
положении С-2 дииодопроизводных С, которая совпадает с хиральностью исходных сахаров - S.
Предпочтительный вариант способа, осуществленного согласно настоящему изобретению, проиллюстрирован реакционной схемой (см. в конце текста).
Из соединений, согласно изобретению, могут приготавливаться фармацевтические композиции, включающие фармацевтически приемлемые носители или разбавители и в качестве активного ингредиента - антрациклиновый гликозид формулы (А) либо его фармацевтически приемлемую кислотно-аддитивную соль.
Могут быть использованы стандартные носители или разбавители. Композиция может готовиться и вводиться, например внутривенно, согласно традиционным методам.
Антрациклиновые гликозиды формулы (А) и фармацевтически приемлемые кислотно-аддитивные соли
являются противоопухолевыми средствами. Они могут быть использованы для лечения больных с опухолями путем введения их терапевтически активного количества. Соединения могут быть использованы для ингибирования роста опухолей, и в терапевтических дозах эти соединения нетоксичны.
Пример 1.
Получение 1,5-ди(пара-толуолсульфонил) окси-2 (S)-бензилокси-3-окса-пентана (F1). L-Арабинозу (3 г,
0,22 моль) и бензиловый спирт (15 мл) нагревали при перемешивании в присутствии кислой формы Dowex
50W х 2 (2 г). Через 4 ч смесь охладили и отфильтровали. Растворитель отгоняли при пониженном давлении,
и из ацетона выделили 3,5 г 1-бензил-β-L-арабино-пиранозида S’.
Провели тонкослойную хроматографию на пластинке из Кизельгура F254 (Merck), в качестве элюирующего растворителя использовали смесь метилен-хлорид (метанол) вода 120/20/2, Rf = 0,4 [α]D = + 215° (c=l %
воды).
1-Бензил-β-L-арабинопиранозид S1 (3,48 г, 0,0145 моль) растворили в воде (100 мл) и обработали периодатом натрия (5,6 г, 0,026 моль), реакцию проводили при 0 °С в течение 2 ч. Затем добавили хлорид бария и
добавлением карбоната бария довели рН смеси до 7, отфильтровали и промыли смесь водой. Водную фракцию сконцентрировали при пониженном давлении до сиропообразного состояния и проэкстрагировали ацетонитрилом (50 мл). Органическую фазу разбавили смесью метанола (20 мл) и воды (10 мл), обработали натрий цианоборогидридом (0,3 г), растворенным в воде (5 мл). Через 15 мин рН смеси довели до 7, добавляя
Dowex 50 W х 2, и отфильтровали. Растворители удалили при пониженном давлении и получили 1,5дигидрокси-2-(S)-бензилокси-3-оксапентан Е1 (2,6 г, выход 85 %).
Провели тонкослойную хроматографию на пластине из Кизельгура F254 (Merck), в качестве элюирующего растворителя использовали смесь метилен-хлорид/метанол 10/1. Rf=0,28. Соединение Е1 (2,6 г) растворили в сухом пиридине и добавили пара-толуолсульфохлорид (6,67 г). Смесь оставили на ночь при 0 °С, затем вылили в ледяную воду и
проэкстрагировали метиленхлоридом. Органическую фазу промыли водой, отделили, высушили над безводным
сульфатом натрия и отфильтровали. Растворитель отогнали при пониженном давлении и получили в результате 1,5-ди
(пара-толуолсульфонил) окси-2(S)бензилокси-3-окса-пентан F1 (4,3 г, выход 68 %).
Провели тонкослойную хроматографию на пластине из Кизельгура F254 (Merck), в качестве элюирующего
растворителя использовали смесь метиленхлорид/ацетон 98/2, Rf=0,55.
Параметры ЯМР-спектра (СDС13, 400 мГц) δ: 2,42 (s, 6Н, два СН Тс); 3,69, 3,65 (два dt, J=4,7, 11,7 Гц,
2Н, Тс-ОНС2СН2O); 3,94 (два, dd, J=5,3, 10 Гц, 2Н, ОСН-СH2-ОТс); 4,08 (t, J=4,7 Гц, 2Н, Tc-O-CH2CH2-O);
4,46, 4,56 (два d, J=11,7 Гц, 2Н, ОСН2-Фен); 4,72 (t, J=5,3 Гц, 1H, O-CH-CH2-OTc); 7,2-7,8 (m, 13H, ароматика).
Пример 2.
Получение 1,5-дийодо-2(S)-бензилокси-3-окса-пентана (С1). Соединение F1 (4,3 г, 8,3 ммоль), полученного в
примере 1, было растворено в метилэтилкетоне (50 мл) с добавлением йодил натрия (7,4 г, 49 ммоль). Смесь выдержали при 95 °С в течение 24 ч. После этого растворитель удалили при пониженном давлении, а остаток проэкстрагировали н-гексаном. Органический слой сконцентрировали до сиропообразного состояния и получили соединение С1 (3,5 г, выход 90 %).
Провели тонкослойную хроматографию на пластине из Кизельгура F254 (Merck), в качестве элюирующего
растворителя использовали смесь н-гексан/этилацетат 10/0,5, Rf=0,34.
Параметры ЯМР-спектра (CDCl3, 400 Мгц) δ: 3,27 (t, J=6,8 Гц, 2Н, J=CH2-CH2-O); 3,30 (d, J=5,5 Гц, 2Н,
O-CH-CH2-J); 3,84 (m, 2Н, J-CH2CH2O); 4,64, 4,74 (два d, J=11,7 Гц, 2Н, O-СН2-фен); 4,81 (t, J=5,5 Гц, 1H, OCH-CH2-J); 7,3-7,5 (m, 5H, ароматика).
Пример 3.
Получение 3’-деамино-3’[2-(S)-бензилокси-4-морфолинил]доксорубицина (А1). К раствору гидрохлорида
доксорубицина (0,5 г, 0,86 ммоль) в сухом диметилформамиде (20 мл) добавили 1,5-дийодо-2(S)-бензилокси3-окса-пентан (С1) (3,5 г, 7,54 ммоль) и сухой триэтиламин (3,6 мл, 2,6 ммоль). Смесь выдержали при комнатной
температуре в течение 36 ч, а затем вылили в воду и проэкстрагировали метиленхлоридом. После стандартной обработки сырой продукт очистили на колонке из кремневой кислоты, использовав в качестве элюирующего растворителя смесь метиленхлорид/метанол 97/5, получили после обработки безводным хлористым
водородом в метаноле 0,3 г (выход 46 %) соединения А1 в виде хлористоводородной соли.
5
BY 3369 C1
Прохроматографировали на пластине из Кизельгура F254 (Merck), используя в качестве элюирующей системы смесь метиленхлорид/метанол 10/1, Rf=0,6; ПА-МС: м/е 756 (М+).
Параметры ЯМР-спектра свободного основания (CDCl3, 200 МГц) δ: 1,37 (d, J=6,6 Гц, 3Н, 5’=СН3); 1,76
(m, 2Н, 2’-СН2); 2,14 (dd, J=3,9, 14,8 Гц, 1H, 8ах-Н); 2,2-2,7 (m, 6Н, CH2-N-CH2, q-H, 3’-Н); 3,00 (d, J=18,8 Гц,
1H, 10ax-H); 3,55, 4,00 (два m, 2Н, O-CH2-CH2N); 3,68 (s, 1H, 4’-H); 3,94 (q, J=6,6 Гц, 1H, 5’-Н); 4,08 (s, 3Н,
ОСН3); 4,51, 4,77 (два d, J=12,l Гц, 2Н, ОСН2-Фен); 4,65 (dd, J=2,6, 4,0 Гц, 1H, ОСН, ОСН2Фен (CH2N); 4,71
(s, 1H, COCH2OH); 5,28 (dd, J=2,4, 3,8 Гц, 1H, 7-H); 5,54 (m, 1H, 1’-Н); 7,2-8,1 (m, 8Н, ароматические Н);
13,22 (s, 1H, 11-OH); 13,95 (s, 1H, 6-OH).
Пример 4.
Получение 1,5-дийодо-2(S)-этокси-3-окса-пента(С2). Соединение С2 получили, использовав в качестве
исходного материала 2 г L-арабинозы, которую подвергли ряду последовательных операций, описанных в
примерах 1 и 2.
1-Этил-α-L-арабинопиранозид (S2): [α]D=+233,5° (с=1 % воды); 1,5-дигидрокси-2(S)-этокси-3оксапентан(Е2).
Тонкослойная хроматография на пластине из Кизельгура F254 (Merck), элюирующий растворитель - метиленхлорид/метанол 10/1, Rf=0,33.
1,5-Ди-(пара-толуолсульфонил)окси-2(S)-этокси-3-оксапентан(F2): ТСХ на пластине из Кизельгура F254
(Merck), элюирующий растворитель - метиленхлорид/ацетон 98/2, Rf=0,56.
Данные ЯМР-спектра (CDCl3, 200 Мгц) δ: 1,11 (t, J=0,7 Гц, 3Н, ОСН2СН3); 2,43 (s, 6Н, два СН3-Тс); 3,44,
3,58 (два dg, J=7,0, 9,4 Гц, 2Н, ОСН2СН3); 3,68 (m, 2Н, O-СН2-СН2-ОТс); 3,89 (d, J=5,4, 2Н, O-CH-CH2 Тс);
4,10 (t, J=4,8 Гц, 2Н, OCH-CH2OTc); 4,61 (t, J=5,4 Гц, 1H, O-CH-CH2OTc); 7,3-7,8 (m, 8Н, ароматические Н).
1,5-Дийодо-2(S)-этокси-3-окса-пента (С2).
ТСХ на пластине из Кизельгура F254 (Merck), элюирующий растворитель н-гексан/этилацетат 10/0,5,
Rf=0,37.
Параметры ЯМР-спектра (CDCl3, 200 МГц) δ: 1,24 (t, 7,0 Гц, 3Н, ОСН2СН3); 3,23 (d, J=5,6 Гц, 2Н, J-CH2CH-O);
3,27 (t, J=6,8 Гц, 2Н, J-CH2CH2-O); 3,58, 3,77 (два dq, J=7,0, 9,3 Гц, 2Н, ОСН2СН3); 3,78, 3,87 (два dt, J=6,8, 10,6 Гц, 2Н,
J-CH2-CH2-O); 4,70 (t, J=5,6 Гц, 1H, O-CH-CH2-J).
Пример 5.
Получение 3’-деамино-3’[2(S)-этокси-4-морфолинил]доксорубицина-(А2). 0,5 г гидрохлорида доксорубицина запустили в реакцию с соединением С2 (3 г) согласно той же реакционной схеме, которая была представлена в примере 3. В результате получили 0,28 г соединения А2 в виде хлористоводородной соли.
ТСХ на Кизельгуре F254 (Merck), элюирующий растворитель - метиленхлорид/метанол 10/1, Rf=0,58, ПАМС: м/е 694 (М+).
Параметры ЯМР-спектра свободного основания (CDC13, 200 МГц) δ: 1,16 (t, J=7,0 Гц, 3Н, ОCН2СН3);
1,36 (d, J=6,4 Гц, 3Н, 5’-СН3); 1,7-1,8 (m, 2Н, 2’-СН2); 2,16 (dd, J=4,l, 14,7 Гц, 1H, 8ax-H); 2,3-2,6 (m, 6Н, CH2N-CH2); 8eq-H, 3’-Н); 3,02 (d, J=18,8 Гц, 1H, 10ax-H); 3,26 (dd, 1,9, 18,8 Гц, 1H, 10eq-H); 3,46, 3,78 (два dq,
J=7,0, 9,8 Гц, 2Н, ОСН2СН3); 3,53, 3,93 (два m, 2Н, ОСН2СН2); 3,68 (s, 1H, 4’-H); 3,93 (q, J=6,4 Гц, 1H, 5’-H);
4,08 (s, 3Н, ОСН3); 4,56 (dd, J=2,3, 4,7 Гц, 1H, ОСН/ОСН2СН3)СН2N); 4,72 (s, 1H, 9-OH); 4,74 (s, 2H,
COCH2OH); 5,30 (m, 1H, 7-H); 5,55 (m, 1H, 1’-H); 7,3-8,1 (m, 3H, ароматические H); 13,25 (s, 1H, 11-OH);
13,97 (s, 1H, 6-OH).
Пример 6.
Получение 1,6-дийодо-2(R)изопропилокси-3-окса-пента(С3). Озаглавленное соединение G3 получили, используя в качестве исходного материала 3 г L-арабинозы в той же последовательности реакций, которые
описаны в примерах 1 и 2.
1-Изопропил-β-L-арабинопиранозид (S3): [α]D=+225° (вода); 1,5-дигидрокси-2(R)-изопропилокси-3оксапентан (Е3).
ТСХ на Кизельгуре F254 (Merck), элюирующий растворитель - метиленхлорид/метанол 10/1, Rf=0,36.
1,5-Ди-(пара-толуолсульфонил) окси-2(R)-изопропилокси-3-окса-пентан (F3).
ТСХ на Кизельгуре F254 (Merck), элюирующий растворитель - метиленхлорид/ацетон 98/2, Rf=0,55.
Параметры ЯМР-спектра (СDСl3, 200 МГц) δ: 1,05, 1,10 (два d, J=6,2 Гц, 6Е, СН(СН3)2); 2,42 (два s, 6Н, СН3Тс); 3,64 (два m, 2Н, Тс-O-СН2СН2-O); 3,76 (m, 1H, СН(СН3)2); 3,84 (m, 2Н, O-СН-СН2-ОТс); 4,08 (t, J=5,6 Гц, 2Н,
Тс-O-СН2-СН2-O); 7,3-7,8 (m, 8Н, ароматические Н).
1,5-Дийодо-2 (R)-изопропилокси-3-окса-пентан (С3).
ТСХ на Кизельгуре F254 (Merck), элюирующий растворитель - н-гексан/этилацетат 10/0,5, Rf=0,40.
Параметры ЯМР-спектра (CDCl3, 200 МГц) δ: 1,20, 1,22 (два d, J=6,4 Гц, 6Н, СН(СН3)2); 3,24 (d, J=5,6 Гц,
2Н, О-СН-CH2-J); 3,28 (t, J=6,7 Гц, 2Н, J-CH2CH2-O); 3,6-3,8 (m, 2Н, J-CH2-CH2-O); 3,94 (m, 1H, СН(СН3)2);
4,76 (t, J=5,6 Гц, 1H, O-CH-CH2-J).
6
BY 3369 C1
Пример 7.
Получение 3’-деамино-3’-[2(R)-изопропилокси-4-морфолинил]доксорубицина А3. 0,5 г доксорубицина запустили в реакцию с соединением С3 согласно процедуре, изложенной в примере 3, в результате получили 0,21 г озаглавленного соединения А3 в виде хлористоводородной соли.
ТСХ на Кизельгуре F254 (Merck), элюирующий растворитель - метиленхлорид/метанол 10/1, Rf=0,55; ПАМС: м/е 708 (М+).
Параметры ЯМР-спектра свободного основания (CDCl3, 200 МГц) δ: 1,09, 1,016 (два d, J=6,0 Гц, 6Н,
СН(СН3)2); 1,36 (d, J=6,6 Гц, 3Н, 5-СН3); 1,86 (m, 2Н, 2’-СН2); 2,15 (dd, J=4,0, 14,9 Гц, 1H, 8ax-H); 2,3-2,8 (m,
6Н, CH2NCH2, 8eq-H3’-H); 2,97 (d, J=28,8 Гц, 1H, 10ax-H); 3,26 (d, J=18,8 Гц, 1H, 10eq-H); 3,54 (m, 1H, OCH/H/CH2N); 3,74 (s, 1H, 4-H); 3,81-4,1 (m, 3H, OCH(H)CH2N 5’-H, ОСН(СН3)2); 4,08 (s, 3Н, ОСН3); 4,66 (с,
1H, 9-OH); 4,68 (dd, J=2 Гц, 4,9 Гц, 1H, ОСН[ОСН(СН3)2]СН2N); 4,75 (s, 2Н, COCH2OH); 5,28 (m, 1H, 7-H);
5,55 (m, 1H, 1’-Н); 7,3-7,8 (m, 3Н, ароматические H); 13,24 (s, 1H, 11-OH); 13,97 (s, 1H, 6-OH).
Пример 8.
1,5-Дигидрокси-2(S)-метокси-3-окса-пентан (Е4). 1,5-Диоксо-2(S)-метокси-3-окса-пентан(D4) (1,5 г, 11 ммоль),
полученный согласно методике (Methods Carbohydrate Chemistry. -Acad.Press., 1962, т.1, с. 445), растворили в
смеси воды (10 мл) и метанола (10 мл), обработали натрийборогидридом (0,1 г), растворенным в 2 мл воды.
Через 20 мин рН раствора довели до рН 7, добавив кислую форму смолы Dowex 50 Wx2, отфильтровали и
растворитель удалили при пониженном давлении, в результате получили 1,4 г (выход 93 %) озаглавленного
соединения.
ТСХ на Кизельгуре F254 (Merck), элюирующий растворитель - метиленхлорид/метанол 10:1, коричневое
пятно при Rf=0,24 после нагревания пластины с хроматограммой, предварительно обработанной (опрысканной) серной кислотой.
Параметры ЯМР-спектра (200 МГц, ДМСО-d5) δ: 3,26 (s, 3Н, ОСН3); 3,4-3,6 (m, 6Н,
-СН2-СН2-O-СН-СН2-); 4,37 (t, J=5,4 Гц, 1H, О-СН-О); 4,40 (bm, 2H, HO-CH2-CH2-CH-CH2-OH).
Пример 9.
1,5-Ди(пара-толуолсульфонил)окси-2(S)-метокси-3-окса-пентан (F4). 1,5-Дигидрокси-2(S)-метокси-3окса-пентан (Е4) (1,4 г, 10,3 ммоль), полученного в соответствии с описанием примера 8, растворили в сухом
пиридине (10 мл) и обработали при 0 °С паратолуолсульфонилхлоридом (6,4 г, 0,034 ммоль). Смесь выдержали при 4 °С в течение ночи, затем вылили ее в смесь воды и льда и, наконец, проэкстрагировали метиленхлоридом. Органический слой промыли водой, отделили, высушили над безводным сульфатом натрия, отфильтровали. Растворитель удалили при пониженном давлении. Сырой продукт прохроматографировали на
колонке, заполненной кремниевой кислотой, используя метиленхлорид в качестве элюирующего средства,
получив 2,8 г (выход 62 %) чистого производного, название которого дано в заголовке.
ТСХ на Кизельгуре F254 (Merck), элюирующий растворитель - метиленхлорид/ацетон 95:5, коричневое
пятно при Rf=0,55 после нагревания пластины тонкослойной хроматограммы, предварительно опрысканной
серной кислотой.
Параметры ЯМР-спектра (200 МГц, CDC13) δ: 2,44 (s, 6Н, СН3-Фен); 3,27 (s, 3Н, ОСН3); 3,69 (m, 2Н,
SO2OCH2CH2O); 3,90 (m, 2Н, SO2OCH2-CH-O); 4,11 (m, 2Н, SO2OCH2CH2-O); 4,56 (t, J=5,3 Гц, 1H, -O-CHCH2); 7,3-7,8 (m, 8H, ароматические H).
Пример 10.
Получение 1,5-дийодо-2(S)-метокси-3-окса-пентана С4 (1,6 г, 3,6 ммоль). 1,5-Ди (пара-толуолсульфонил)окси-2(S)-метокси-3-окса-пентана F4, полученного в описанном примере 9, растворили в метилэтилкетоне (30 мл) и обработали йодидом натрия (3,04 г, 20,2 ммоль) при 85 °С в течение двух дней. После этого растворитель отогнали в вакууме, остаток разбавили н-гексаном (50 мл) и водой. Органический слой отделили,
высушили над безводным сульфатом натрия, отфильтровали. Растворитель отогнали при пониженном давлении, в результате получили 1,5-дийодо-2(S)-метокси-3-окса-пентан С4 (1,2 г, выход 86 %).
ТСХ на Кизельгуре F254 (Merck), элюирующий растворитель - метиленхлорид, коричневое при Rf=0,54,
после нагревания пластины тонкослойной хроматограммы, предварительно обработанной серной кислотой.
Данные ЯМР-спектра (200 МГц, CDC13) δ: 3,15 (m, 4Н, J-CH2-CH2-OCH-CH2-J); 3,40 (s, 3Н, ОСН3); 3,80
(m, 2Н, J-CH2CH2-O), 4,62 (t, J=5,6 Гц, 1H, O-CH-CH2).
Пример 11.
Получение 3’-деамино-[2’’(S)-метокси-4’’-морфолинил]-доксорубицина А4. К раствору гидрохлорида
доксорубицина (80 мг, 0,138 ммоль) в сухом диметилформамиде (4 мл) добавили 1,5-дийодо-2(S)-метокси-3оксапентан (С4, 0,8 г, 2,0 ммоль) и триэтиламин (0,056 мл, 0,388 ммоль). Реакционную смесь выдержали при комнатной температуре при перемешивании в течение 36 ч, затем смесь вылили в воду и проэкстрагировали метиленхлоридом. После стандартной обработки сырой продукт очистили на колонке из кремниевой кислоты,
используя в качестве элюирующего растворителя смесь метиленхлорид/метанол 97,5/2,5, в результате получили после обработки метанольным раствором безводного хлористого водорода 40 мг (выход 45 %) озаглавленного соединения в виде хлористо-водородной соли.
7
BY 3369 C1
ТСХ на Кизельгуре F254 (Merck), использовав в качестве элюирующей системы метиленхлорид/метанол
19/1, Rf=0,15.
Параметры ЯМР-спектра (400 МГц, СDС13) свободного основания δ: 13,98 (s, 1H, 6-OH); 13,27 (s, 1H, 11OH); 8,03 (dd, J=l,l, 7,7 Гц, 1H, 1-H); 7,78 (dd, J=7,7, 8,6 Гц, 1H, 2-H); 7,39 (dd, J=l,l, 8,6 Гц, 1H, 3-H); 5,55 (m,
1H, 1’-H); 5,30 (dd, J=2,l, 4,1 Гц, 1H, 7-H); 4,74 (d, J=4,5, 14-CH2-OH); 4,74 (s, 1H, 9-OH); 4,49 [dd, J=2,6, 4,1
Гц, 1H, NCH2-CH/OCH3/O]; 4,08 (s, 3Н, 4-ОСН3); 3,94 (q, J=6,6 Гц, 1H, 5’-H); 3,93 [m, 1H, NCH2CH/H/O]; 3,67
(m, 1H, 4’-H); 3,54 (m, 1H, NCH2CH/H/O); 3,38 (s, 3H, NCH2CH-OCH3); 3,27 (dd, J=19,18,8 Гц, 1H, 10-H-eq);
3,04 (d, J=18,8 Гц, 1H, 10-Hax); 3,00 (t, J=4,5 Гц, 1H, CH2OH); 2,60 (dd, J=4,l, 11,4 Гц, 1H, NCH/Н/СНОСН3);
2,6-2,5 (m, 3Н, NCH/Н/СНОСН3, NCH2CH2O); 2,4-2,3 (m, 2H, 8-Heq, 3’-H); 2,15 (dd, J=4,l, 14,7 Гц, 8-Нах);
1,76 (m, 2Н, 2’-СН2); 1,26 (d, J=6,6 Гц, 3Н, 5’-СН3).
Пример 12.
Получение 1,5-дигидрокси-2(R)-метокси-3-окса-пентата Е5. Озаглавленное соединение было получено в соответствии с процедурой, описанной в примере 8, с использованием в качестве исходного материала 1,5-диоксо-2(R)метокси-3-окса-пентана D5, который в свою очередь может быть получен в соответствии с методиками (Methods Carbohydrate Chemistry. - Acad.Press., 1962, т. 1, с. 44).
ТСХ на Кизельгуре F254 (Merck), элюирующий растворитель - метиленхлорид/метанол, коричневое пятно
при Rf=0,24 после нагревания пластины тонкослойной хроматограммы, предварительно опрысканной серной
кислотой.
Пример 13.
Получение 1,5-ди-(пара-толуолсульфонил)окси-2(R)-метокси-3-окса-пентана F5. 1,5-Дигидрокси-2(R)-метокси-3окса-пентан Е5, полученный в соответствии с процедурой, описанной в примере 12, был переведен в озаглавленное
соединение F5, согласно процедуре, описанной в примере 9.
ТСХ на Кизельгуре F254 (Merck), элюирующий растворитель - метиленхлорид/ацетон 95/5, коричневое
пятно при Rf==0,55 после нагревания пластины тонкослойной хроматограммы, предварительно обработанной (опрысканной) серной кислотой.
Пример 14.
Получение 1,5-дийодо-2(R)-метокси-3-окса-пентана С5. 1,5-Ди(пара-толуолсульфонил)окси-2(R)-метокси-3-оксапентан F5, полученный в соответствии с примером 13, был превращен в дийодопроизводное С5 в соответствии с
процедурой, описанной в примере 10.
ТСХ на Кизельгуре F254 (Merck), элюирующий растворитель - метиленхлорид, коричневое пятно при
Rf=0,54 после нагревания пластины тонкослойной хроматограммы, предварительно опрысканной серной кислотой.
Пример 15.
Получение 3’-деамино-[2’’(R)-метокси-4’’-морфолинил]-доксорубицина А5. Озаглавленное соединение
было получено путем конденсации гидрохлорида доксорубицина с 1,5-дийодо-2(R)-метокси-3-окса-пентаном
С5, полученным как описано выше в соответствии с процедурой примера 11.
ТСХ на Кизельгуре F254 (Merck), элюирующий растворитель - метиленхлорид/метанол 19/1, Rf=0,13.
Параметры ЯМР-спектра свободного основания (400 МГц CDCl3) δ: 13,97 (s, 1H, 6-ОН); 13,25 (s, 1H, 11OH); 8, 03 (dd, J=l,l, 7,7 Гц, 1H, 1-H); 7,78 (dd, J=7,6, 7,7 Гц, 1H, 2-H); 7,39 (dd, J=l,l, 7,6 Гц, 1H, 3-H); 5,53 (d,
J=3,4 Гц, 1H, 1’-H); 5,29 (dd, J=2,5, 4,1 Гц, 1H, 7-H); 4,75 (s, 2Н, 14-CH2OH); 4,71 (s, 1H, 9-OH); 4,46 (dd,
J=2,6, 4,7 Гц, 1H, NCH2-CH(OCH3(O); 4,08 (s, 3Н, 4-ОСН3); 3,93 (q, J=6,6 Гц, 1H, 5’-H); 3,92 (m, 1H,
NCH2CH/H/O); 3,70 (m, 1H, 4’-H); 3,56 (m, 1H, NCH2CH/H/O); 3,40 (s, 3Н, NCH2CH-OCH3); 3,26 (dd, J=19,
19,9 Гц, 1H, 10-Heq); 3,03 (d, J=19,9 Гц, 1H, 10-Hax); 2,66 (dd, J=2,6, 11,4 Гц, 1H, NCH/Н/СНОСН3); 2,53 (m,
1H, NCH/H/CH2O); 2,5-2,3 (m, 4H, NCH/H/CH2O, NCH/Н/СНОСН3, 8-H-eq, 3’-H); 2,15 (dd, J=4,l, 14,7 Гц, 8Нах); 1,8-1,7 (m, 2Н, 2’-СН2); 1,36 (d, J=6,6 Гц, 3Н, 5’-СН3).
Биологическая активность 3’-деамино-[2’’-(S)-метокси-4’’-морфолинил доксорубицина А4 и 3’-деамино[2’’(R)-метокси-4’’-морфолинил] доксорубицина А5.
Эти соединения были исследованы в отдельно взятой экспериментальной системе с целью определения
их цитотоксичности и противоопухолевой активности на экспериментальных животных в сравнении с родственным препаратом Доксорубицином. Новые антрациклины оказались более цитотоксичными, чем родственный лекарственный препарат в отношении LoVo и LoVo доксорубицин-устойчивых клеточных линий
(LoVo/Dx) (табл.1) и активны in vivo в отношении доксорубицин-устойчивых линий клеток.
Первоначальный скрининг in vivo был проведен на мышах BDF1, пораженных Р388 Доксорубицинустойчивой лейкемией Johnsen’s (P388/Dx 105 клеток/мышь). Лекарство вводили внутривенно в первый день
после инокуляции опухоли. Результаты приведены в табл. 2. Оба соединения были активны и более действенны чем Доксорубицин.
Соединение А4 было также проверено на доксорубицин-устойчивых клетках Р388 Schabel in vitro (табл.
3.) и in vivo на мышах (BDF1/105 клеток на мышь). Лечение проводили путем внутривенного введения препарата в первый день после инокуляции опухоли (табл. 4). Наконец, соединение 1-а было изучено на одно-
8
BY 3369 C1
родной опухоли, такой, как опухоль молочной железы мышей/крыс и карциноме (Мх1) человека, при пероральном и внутривенном введении препарата (табл. 5 и 6).
Таблица 1
Исследование действия “in vitro” в отношении LoVo и LoVo/Dx устойчивых клеток (4 час. обработки)
Соединение
ИК50=нг/мл
ИК50=нг/мл
Доксорубицин
48,8
2553
А4
8,7
31,7
А5
6,5
40,1
а)
IС50=концентрация, ингибирующая рост колонии клеток на 50 %.
b)
И.С.=Индекс сопротивляемости=ИК50LoVo/Dx/ИK50LoVo.
И.С.
52,6
3,6
6,1
Таблица 2
Действие А4 и А5 на Доксорубицин устойчивую Р388 лейкемию Johnson’s “in vivo”
Соединение
(мг/кг)
Доксорубицин
13
А4
0,09
А5
0,13
c)
О.Д.=Оптимальная доза: максимально толерантная доза.
d)
Л/К %=Среднее время жизни мышей, получавших препарат:
среднее время жизни мышей в контрольной группе.
л/к %
86
250
244
Таблица 3
Действие А4 на Доксорубицин чувствительные и доксорубицин устойчивые клетки Р388 лейкемии
(обработка 1 час)
Соединение
P388 ИК50нг/мл
Доксорубицин
52,7
А4
7,6
c)
ИК50=концентрация, ингибирующая выживаемость клеток на 50 %.
P388 ИК50нг/мл
4000
24,3
Таблица 4
Действие А4 на Доксорубицин устойчивые клетки Р388 Schabel's лейкемии "in vivo"
Соединение
Доксорубицин
А4
O.D.g (мг/кг)
13
0,09
Т/СdЛ/К %
100
153
Действие А4 на карциному молочной железы мышей/крыс
Правила и способ введения
O.D.gмг/кг
f
iv g 4d х 4
5,85
iv g 4d х 4
0,065
ро g 4d х 4g
0,1
f) в/в g 4d х 4=в/в введение каждые 4 дня по 4 раза,
g) п/о g 4d х 4=перорально=п/о прием каждые 4 дня по 4 раза.
Соединение
Доксорубицин
А4
% ингибирования опухоли
99
94
97
Действие А4 карциному молочной железы человека (Мх1)
Соединение
Доксорубицин
А4
Правила и способ введения
iv g 7d х 3h
iv g 7d х 3
ро g 7d х 4i
h) в/в g 7d х 3=введение в/в каждые 7 дней по три раза
i) п/о g 7d х 3=прием каждые 7 дней по три раза.
O.D.gмг/кг
6
0,05
0,13
Государственный патентный комитет Республики Беларусь.
220072, г. Минск, проспект Ф. Скорины, 66.
9
Таблица 5
Таблица 6
% ингибирования опухоли
72
98
99
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
251 Кб
Теги
by3369, патент
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа