close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY3696

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
(19)
BY (11) 3696
(13)
C1
6
(51) C 12C 1/02,
(12)
C 12C 1/00,
C 12C 1/047,
A 23L 1/172
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ПАТЕНТНЫЙ
КОМИТЕТ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ
(54)
СПОСОБ ОБРАБОТКИ ПРЕДНАЗНАЧЕННОГО ДЛЯ ПРОРАЩИВАНИЯ
СЕМЕННОГО МАТЕРИАЛА
(21) Номер заявки: 950558
(22) 1995.08.11
(86) PCT/FI93/00388, 1993.09.27
(31) 930182
(32) 1993.01.15
(33) FI
(46) 2000.12.30
(71) Заявитель: КВЕСТ
ИНТЕРНЕЙШНЛ
НЕДЕРЛАНД БВ (NL)
(72) Авторы: Хайкара
Аули,
Маттила-Сандхолм
Тиина (FI)
(73) Патентообладатель: КВЕСТ
ИНТЕРНЕЙШНЛ НЕДЕРЛАНД БВ (NL)
BY 3696 C1
(57)
1. Способ обработки предназначенного для проращивания семенного материала, включающий добавление к семенному материалу противомикробных добавок, отличающийся тем, что в качестве добавок к зернам ячменя, используемым в процессе осоложения, или к семенному материалу, который будет превращен в
проростки, предназначенные для использования в качестве пищи, применяют препарат молочнокислых бактерий либо препарат, продуцируемый молочнокислыми бактериями, который оказывает эффект подавления
роста микробов.
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что указанные молочнокислые бактерии выбирают из рода Lactococcus, Leuconostoc, Pediococcus или Lactobacillus.
3. Способ по п. 1 или 2, отличающийся тем, что указанный препарат молочнокислых бактерий либо
препарат, продуцируемый молочнокислыми бактериями, получают из видов Lactococcus lactis, Leuconostoc
mesenteroides, Pediococcus damnosus, Pediococcus parvulus, Pediococcus pentosaceus, Lactobacillus curvatus или
Lactobacillus plantarum либо из их смеси, в предпочтительном случае - из видов Lactobacillus plantarum и Pediococcus pentosaceus или из их смеси.
4. Способ по любому из пп. 1-3, отличающийся тем, что к зернам ячменя добавляют препарат молочнокислых бактерий либо препарат, продуцируемый молочнокислыми бактериями, который оказывает эффект
подавления роста плесневых грибов Fusarium.
5. Способ по п. 4, отличающийся тем, что указанный препарат молочнокислых бактерий либо препарат,
продуцируемый молочнокислыми бактериями, добавляют на стадии замачивания или проращивания семенного материала.
Фиг. 1
BY 3696 C1
(56)
1. SU 825616 A, 1981.
2. SU 147972 A, 1962.
3. SU 355218 A, 1972.
Настоящее изобретение касается способа обработки семенного материала, предназначенного для проращивания.
В контексте настоящего описания под процессом проращивания обычно понимают стадию процесса, необходимую для получения продукта проращивания из семян, сохраняемых в сухом состоянии. В частности, в
пивоварной и спиртоводочной промышленности процесс проращивания, представляющий собой процесс
осоложения, используют при получении важного сырья для приготовления пива или других алкогольных напитков, включая зерновой солод, такой как ячменный солод, ржаной солод или какой бы то ни было солод.
Кроме того, указанный процесс проращивания используют при получении различных коммерческих продуктов, представляющих собой проростки, например проростки фасоли или любые проростки, предназначенные
для использования в питании человека.
Обычно процессы проращивания осуществляют в неасептических условиях. На семенах, обрабатываемых
в этих условиях, встречаются микробы, присутствие которых обусловлено условиями внешней среды в ходе
роста растений или хранения семян. Условия, соблюдаемые в течение процесса проращивания, наиболее
благоприятны для имеющихся на семенах микробов, обычно эти микробы обильно размножаются в течение
рассматриваемого процесса. Указанные микробы могут оказывать нежелательный эффект на продукт проращивания, либо на производимый из него конечный продукт, при этом они в равной степени могут оказывать полезное воздействие на проращиваемый продукт.
Основными стадиями процесса пивоварения являются: осолаживание, получение сусла, вторичное
ферментирование, а также последующая обработка. Назначением осоложения является появление в зерне
ферментов, которые на стадии затирания переводят вещества эндосперма зерна в форму, растворимую в получаемом сусле. В частности, хорошо известно [2, 3], что процесс осоложения семян включает в себя три
стадии: замачивание, проращивание и запаривание. Очищенные и перебранные зерна ячменя замачивают в
воде до тех пор, пока не получают желаемую степень влажности, например в пределах от 43 до 44 %. Частично замачивание можно осуществлять способом так называемого воздушного покоя. Ячменю позволяют
прорасти в контролируемых условиях, а полученный пророщенный ячмень запаривают в потоке горячего
воздуха до тех пор, пока прорастание не будет закончено. По окончании запирания из солода удаляют первичные корешки. Регулирование стадий осоложения основано на контроле температуры, воздушного потока
и влажности продукта или воздуха.
С точки зрения способа и условий осоложения, качество солода зависит также от микробной флоры семян, используемых для получения солода, указанная флора существенно варьирует в зависимости от разновидности семян, погодных условий, места выращивания, продолжительности сезона выращивания, а также
условий хранения.
Ячмень представляет собой культуру, наиболее часто используемую для осоложения. Природная, естественная микробная флора может быть подразделена на полевые грибки, грибки хранения, бактерии и дрожжи. Наиболее обычными полевыми грибками ячменя являются: Fusarium, Alternaria, Cladosporium,
Cephalosporium, Epiccocum и Helminthosporium. Встречаемость плесневых грибков в разных странах в разные годы различна. Влажные погодные условия в ходе периода роста растений, особенно в течение их уборки способствуют росту плесневого грибка Fusarium. Вызванное Fusarium заражение может быть поистине
тяжелым в дождливые сезоны роста растений. Одним из наиболее обычных видов бактерий, встречающихся
из зерновых, является Enterobaster agglomerans. Среди прочих бактерий следует отметить Escherichia coli и
бактерии родов Pseudomonas, Micrococcus и Bacillus, а также молочно-кислые бактерии. Бактериальный титр
в случае ячменя равен приблизительно 105-108 КОЕ/г (колониеобразующих единиц на г).
Количество плесневых грибков и бактерий в ячмене увеличивается в течение осоложения, достигая наивысших концентраций на стадии проращивания. Наиболее сильное размножение претерпевают в особенности Fusarium, а также молочно-кислые бактерии. В ходе осоложения увеличивается также количество дрожжей. На стадии запаривания концентрации плесневых грибков, дрожжей и бактерии, как правило, вновь
снижаются. Часть микробов, встречающихся на ячмене, оказывает полезный эффект в плане осоложения, а
также в плане продукта, например пива, производимого из полученного солода. Судя по проведенным оценкам, вплоть до 40-50 % некоторых ферментов солода имеют бактериальное происхождение. С другой стороны, часть микробов оказывает нежелательное действие на ячмень и/или получаемые солоды.
Среди нежелательных микробов следует отметить плесневой грибок Fusarium, который, как было обнаружено, более часто по сравнению с другими плесневыми грибками вызывает особо нежелательное вспенивание пива, в ходе которого продуцируемые плесневыми грибками пептиды образуют ядра пузырьков газа,
выделяющихся из бутылки пива в виде интенсивной пены. В том случае, если более 50 % сбраживаемых зерен заражено плесневыми грибками Fusarium, опасность пенообразования существенно возрастает.
2
BY 3696 C1
Кроме того, показано, что встречающиеся на ячмене грамотрицательные бактерии, такие как виды, входящие в роды Pseudomonas и Flavobacterium, а также грам-положительные бактерии из рода Leuconostoc, затрудняют фильтрацию полученной массы в плане получения сусла. Различные встречающиеся на ячмене
микробы могут приводить также к другим нежелательным эффектам, в том числе, подавлять проращивание,
вызывать посторонние запахи или нежелательные изменения качественных показателей получаемого сусла и
пива.
Требования качества, предъявляемые к сбраживаемому ячменю, могут быть оговорены с помощью ежегодно заключаемого контракта о культивировании и поставках. Плесневые грибки представляют собой
группу микробов, часто упоминаемую в описаниях качества. Более того, для многих используемых для осоложения растений, определен верхний допустимый предел для конкретных плесневых грибков. В том случае, если доля зараженных Fusarium зерен превышает 65 %, либо соответствующий показатель для плесневых грибков Aspergillus Penicillum превышает 50 %, такого рода ячмень может рассматриваться как
низкокачественный или даже непригодный для использования в осоложении.
Для предотвращения вызываемого плесневыми грибками пенообразования разработаны подходы, основанные на использовании высококачественного ячменя, либо на смешивании партий ячменя, солода или пива. В дождливые годы почти весь урожай ячменя может быть низкого качества, в этом случае получение хорошего пива может оказаться невозможным. Для снижения количества плесневых грибков можно
использовать также противомикробные добавки. Например, согласно [1], перманганат калия добавляют в
замочную воду однако такой обработки недостаточно, а найти другие безопасные и общепризнанные химические агенты было невозможно.
Процесс проращивания, применяемый для получения проростков, предназначенных для использования
в целях питания, предполагает некоторые условия, благоприятные для размножения, например, плесневых
грибков и бактерий. Такого рода продукты проращивания будут быстропортящимися. Кроме того, в связи с
проращиванием может наблюдаться увеличение количества пищевых патогенов, вызывающих пищевое отравление, таких как бактерии Salmonella, Yersinia и/или Listeria.
Предметом настоящего изобретения является предотвращение вышеупомянутых недостатков.
Конкретнее, предметом настоящего изобретения является разработка способа, с помощью которого в течение процесса проращивания можно тонко регулировать количество и качество микробной флоры, однако,
не оказывая при этом неблагоприятного воздействия на качество продукта проращивания или потенциально
производимого из него конечного продукта.
В соответствии с описанными в настоящем изобретении особенностями, используются ссылки на формулу изобретения.
Настоящее изобретение базируется на исследованиях, в результате которых было сделано неожиданное
наблюдение, свидетельствующее о том, что молочнокислые бактерии можно использовать с целью улучшения качества продукта, предназначенного для проращивания. Вещества, содержащиеся в препарате по изобретению и/или полученные из препарата по изобретению, а том числе, микробицидные агенты, подавляют
рост нежелательных микроорганизмов, встречающихся в течение процесса проращивания.
Использование молочнокислых бактерий в пищевой и кормовой промышленности - хорошо известно. В
ферментативных условиях эти бактерии вырабатывают такие соединения, которые влияют на состав и запах
получаемых продуктов, но вместе с тем подавляют рост патогенных микробов, способных испортить указанные продукты. Молочнокислые бактерии обычно использовали в молочных продуктах, мясных продуктах, продуктах ферментации овощей и выпечных продуктах, а также в хранении фуража.
Добавка молочнокислых бактерий или молочной кислоты была введена в практику при производстве определенного типа солода, так называемого Sauermalz. Указанную добавку вводят в солод на стадии запаривания перед затиранием или в процессе затирания. Назначение указанной добавки заключается исключительно в снижении рН получаемого сусла таким образом, чтобы оказать влияние на протекание процесса
затирания, а также на качество получаемого в итоге пива. Однако до сих пор не использовали молочнокислые бактерии так, как это предусмотрено настоящим изобретением: с целью подавления роста нежелательных микробов в ходе процесса проращивания.
Предусмотренный настоящим изобретением препарат можно добавлять к предназначенному для проращивания продукту на любой стадии процесса проращивания.
В случае особо предпочтительного варианта воплощения, препарат молочнокислых бактерий, либо
препарат, полученный с помощью молочнокислых бактерий, добавляют к веществу семян, такому как зерна
ячменя, в течение процесса осоложения. Указанный добавляемый препарат подавляет рост плесневых
грибков, в особенности вредных плесневых грибков Fusarium, а также бактерий, в результате чего, в частности, понижается риск вспенивания пива из-за плесневого грибка Fusarium. Вместе с тем, судя по качеству
получаемого солода или производимого из него пива, указанный препарат не оказывает существенного эффекта на активность полезной микробной флоры. Кроме того, не обнаружено никаких вредных воздействий
указанного добавляемого препарата на качество солода, также как и не выявлено каких бы то ни было содержащихся в препарате или получающихся из него веществ, вредных для производимого солода или пива.
3
BY 3696 C1
В ходе процесса осоложения указанный препарат молочнокислых бактерий или препарат, получаемый с
помощью молочнокислых бактерий, можно добавлять к зернам ячменя до замачивания, на стадии замачивания или в течение стадии проращивания. В предпочтительном случае указанную добавку осуществляют на
стадии замачивания или проращивания. Другие элементы процесса сбраживания можно осуществлять любым способом, известным в этой области. При желании, например, к предназначенному для сбраживания
ячменю могут быть добавлены питательные вещества, либо можно осуществлять регуляцию условий, в том
числе с помощью добавления молочной кислоты, с целью оптимизации условий, необходимых для роста молочнокислых бактерий.
В настоящем изобретении можно использовать любую широкодоступную молочнокислую бактерию, оказывающую воздействие в плане подавления роста микробов. Можно упомянуть следующие пригодные для
использования роды молочнокислых бактерий: Lactococcus, Leuconostoc, Pediococcus и Lactobacillus. В качестве предпочтительных видов можно перечислить следующие: Lactococcus lactis, Leuconostoc mesenteroides,
Pediococcus damnosus, Pediococcus parvulus, Pediococcus pentosaceus, Lactobacillus curvatus и Lactobacillus
plantarum, либо их смеси, в которых наиболее предпочтительными являются Lactobacillus plantarum и Lactobacillus pentosaceus или их смеси. Также возможно использование генетически измененных молочнокислых
бактерий.
Препарат молочнокислых бактерий может состоять из культуральной жидкости, содержащей или не
содержащей клетки, либо из концентрированной культуральной жидкости (содержащей клетки). Препарат,
получаемый с помощью молочнокислых бактерий может включать в себя бесклеточный фильтрат культуры,
концентрированный фильтрат культуры или фракционированный фильтрат культуры, либо чистый или частично очищенный микробицидный продукт.
В соответствии с особо предпочтительным вариантом воплощения, указанную обработку осуществляют с
использованием концентрированной или фракционированной культуральной жидкости, которая может быть
бесклеточной или может содержать клетки. Концентрирование может быть достигнуто, например, с помощью лиофилизации или выпаривания. Указанную культуральную жидкость концентрируют, например, по
фактору 2-20-40.
Фракционирование, в том числе очистку микробицидных продуктов, можно осуществлять с использованием хорошо известных способов, например с помощью методов хроматографии или ультрафильтрации.
В соответствии со способом, предусмотренным настоящим изобретением, предназначенная для добавления к семенам активность, подавляющая рост микробов и входящая в состав препарата, содержащего молочнокислые бактерии или полученного с помощью молочнокислых бактерий, соответствует, например, указанной культуральной жидкости в количестве приблизительно от 10 до 10000 мл/кг обрабатываемых семян, в
приемлемом случае - от 30 до 7000 мл/кг обрабатываемых семян, в том числе от 40 до 5000 мл/кг обрабатываемых семян. Получение указанной культуральной жидкости описано в разделе примеры. Следует отметить, что непосредственные параметры использования активности указанного препарата определяют в зависимости от цели применения вышеупомянутой культуральной жидкости. Для специалиста очевидно, что
предусмотренные настоящим изобретением препараты, обладающие эквивалентной активностью в плане
подавления роста микробов, могут быть в равной мере получены с использованием иных культуральных
жидкостей и/или способов.
В соответствии с настоящим изобретением, указанный препарат включает в себя микробицидные соединения и/или производит микробицидные соединения а течение процесса проращивания. В том случае, если
используют препарат клеток, клеточный рост может быть при необходимости индуцирован, например, с
помощью регуляции условий в течение процесса проращивания, либо с использованием питательных добавок. Указанный препарат также может усиливать рост других молочнокислых бактерий, встречающихся на
предназначенных для проращивания семенах.
Так как использование молочнокислых бактерий в пищевой промышленности разрешено и широко распространено, указанный препарат, полученный из растущих молочнокислых бактерий, также безопасен в
своем использовании. Молочнокислые бактерии обычно принадлежат к естественной микробной флоре проращиваемых семян, таких как зерна ячменя. Таким образом, предусмотренный настоящим изобретением
способ является максимально естественным. Кроме того, в качестве штамма молочнокислых бактерий можно использовать штамм, естественным образом встречающийся на соответствующих семенах.
Благодаря настоящему изобретению, в ходе сбраживания становится возможным уменьшать нежелательные эффекты, возникающие вследствие заражения Fusarium, такие, как вспенивание пива.
Кроме того, неожиданно было обнаружено, что предлагаемый способ улучшает показатели фильтруемости в процессе производства пива. Как было установлено, указанный эффект обусловлен тем, что предусмотренный настоящим изобретением препарат также ограничивает число вредных видов, встречающихся в
ходе сбраживания и препятствующих фильтрации получаемой массы, в том числе относящихся к родам Leuconоstoc, Pseudomonas и Flavobacterium.
4
BY 3696 C1
В соответствии с еще одним предпочтительным вариантом воплощения, препарат молочнокислых бактерий или препарат, полученный из молочнокислых бактерий, добавляют к семенам в том случае, если образующиеся проростки используют в пищу.
Благодаря настоящему изобретению, можно ограничивать рост вредных микробов в течение процесса
проращивания. Это первый случай, когда изобретение предусматривает использование биологических
средств для предотвращения роста нежелательных бактерий, встречающихся на предназначенных для проращивания семенах, в течение промышленного процесса проращивания.
Предусмотренный настоящим изобретением способ улучшает общий гигиенический стандарт указанного
процесса проращивания в целом.
В дальнейшем настоящее изобретение будет проиллюстрировано примерами воплощения, единственной
целью которых является иллюстрирование настоящего изобретения, не сводя его к приведенным примерам.
Предусмотренная настоящим изобретением обработка также применима по отношению к другим процессам
проращивания.
Фиг. 1 представляет собой график, показывающий микробицидную активность, содержащуюся в фильтрате культуры молочнокислой бактерии и определенную с помощью турбидометрического метода. Нормальная кривая роста тестерного организма Е. agglomerans Е-396, а также ингибирующий эффект, оказываемый на рост вышеупомянутого тестерного организма фильтратами культуры продуцирующих штаммов L.
plantarum Е-76 и P. pentosaceus Е-390.
На фиг. 2 представлено влияние культуральной жидкости Р. pentosaceus Е-390, добавленной на разных
стадиях осоложения, на полный титр бактерий в ходе осоложения.
На фиг. 3 представлено влияние клеток P. pentosaceus Е-390, добавленных на разных стадиях осоложения,
на полный титр бактерий в ходе осоложения.
На фиг. 4 представлен полный титр бактерий в течение различных стадий лабораторного осоложения при
добавлении к воде, используемой для замачивания ячменя, культуральных жидкостей Р. pentosaceus Е-390 и
L. plantarum Е-76, либо концентрированных культуральных жидкостей.
На фиг. 5 представлен полный титр бактерий в течение различных стадий лабораторного осоложения при
добавлении к воде, используемой для замачивания ячменя, культуральных жидкостей Р. pentosaceus Е-390 и
L. plantarum Е-76, либо концентрированных и фракционированных культуральных жидкостей.
Фиг. 6 демонстрирует влияние культур молочнокислых бактерий, добавленных на стадии осоложения, на
фильтрацию получаемой массы (Tepral-фильтрацию).
Пример 1.
Микробицидное действие, оказываемое различными штаммами молочнокислых бактерий на микробы,
встречающиеся в ходе осоложения.
В эксперименте исследовали микробицидный эффект, оказываемый препаратами, продуцированными
разными штаммами молочнокислых бактерий, на микробы, встречающиеся в ходе осоложения. В качестве
указанного препарата использовали культуральную жидкость, полученную методом стерильной фильтрации.
1. Продуцирующие штаммы:
В качестве продуцирующих штаммов использовали следующие штаммы молочнокислых бактерий:
Lactobacillus lactis
ssp. lactis
VTT-E-90414 (E-414)
ssp. diacitilactis
VTT-E-90423 (E-423)
Leuconostoc mesenteroides
ssp. mesenteroides
VTT-E-90389 (E-389)
ssp. mesenteroides
VTT-E-90415 (E-415)
ssp. mesenteroides
VTT-E-90466 (E-466)
Pediococcus damnosus
VTT-E-76065 (E-65)
Pediococcus parvulus
VTT-E-88315 (E-315)
Pediococcus pentesaceus
VTT-E-76067 (E-67)
Pediococcus pentosaceus
VTT-E-76068 (E-68)
Pediococcus pentosacues
VTT-E-88317 (E-317)
Pediococcus pentosaceus
VTT-E-90390 (E-390)
(DSM 7389)
Lactobacillus curvatus
VTT-E-90391 (E-391)
Lactobacillus plantarum
VTT-E-78076 (E-76)
(DSM 7388)
Lactobacillus plantarum
VTT-E-79098 (E-98).
Вышеперечисленные штаммы были получены из VTT, Collection of Industrial Microorganisms (Biotechnical Laboratory, Finland). Штамм Lactobacillus plantarum (E-76) был депонтрован в DSM (Deutsche Sammlung
von Mikroorganismen und Zellkulturen) под номером 7388. Штамм E-76 (DSM 7388) был выделен из пива с
использованием техники, известной для жидких продуктов, и проанализирован/идентифицирован с помо5
BY 3696 C1
щью хорошо известных методов анализа. Штамм Pediococcus pentosaceus (E-390) был депонирован в DSM
(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen) под номером 7389. Штамм E-390 (DSM 7389) был
выделен из гомогенизированных образцов растрескавшихся зерен ячменя и проанализирован/идентифицирован с помощью хорошо известных методов [1]. Депозитарии соответствуют условиям Будапештского
договора.
2. Тестерные штаммы:
В качестве тестерных штаммов среди прочих были использованы различные виды вредных микробов,
встречающиеся в течение осоложения, а также штаммы молочнокислых бактерий, служившие продуцирующими штаммами.
Вредные плесневые грибки были представлены в тестах плесневыми грибками Fusarium [Gibberella avenacea (бывший Fusarium avenaceum) VTT-D-80141 (D-141) и VTT-D-80147 (D-147), а также Fusarium culmorum VTT-D-80148 (D-148) и VTT-D-80149 (D-149), Collection of Industrial Microorganisms, Biotechnical Laboratory of VTT] и одним видом Aspergillus.
Вредные грам-отрицательные бактерии были представлены двумя штаммами из рода Enterobacter, а также одним видом из рода Flavobacterium и одним - из рода Pseudomonas. Штаммы молочнокислых бактерий
включали в себя штаммы, использованные в качестве продуцирующих штаммов, а также штамм Lactococcus
sp. Е-416.
3. Культивирование продуцирующих штаммов и получение стерильно профильтрованной культуральной
жидкости:
Молочнокислые бактерии культивировали в среде MRS (MRS BROTH, Oxoid). Штаммы Pediococcus E65, E-67 и E-68 культивировали в аэробных условиях при температуре 25 °С, все остальные продуцирующие
штаммы - в анаэробных условиях при температуре 30 °С, период культивирования составлял от 2 до 5 дней.
В дальнейшем клетки осаждали с помощью центрифугирования, а полученный супернатант стерильно
фильтровали.
4. Культивирование тестерных штаммов:
Суспензию спор плесневого грибка Fusarium получали, культивируя штамм указанного грибка в растворе КМЦ (карбоксиметил-целлюлозы) при температуре 25 °С в течение 5-6 дней в виде интенсивно перемешиваемой культуры, суспензируя образующиеся споровые частицы в растворе TWEEN, фильтруя полученную суспензию и отбирая фильтрат.
Суспензию спор плесневого грибка Aspergillus получали непосредственно на PD-arape (Potato Dextrose,
Difco) при температуре 25 °С в течение 3 дней.
Грам-отрицательные бактерии культивировали в аэробных условиях в среде NB (Nutrient broth, Difco) в
течение 1 дня, штамм Enterobacter - при температуре 30 °С, а штаммы Flavobacterium и Pseudomonas - при
25 °С.
Молочнокислые бактерии культивировали в соответствии с пунктом 3 (см. выше).
5. Определение микробицидного эффекта молочнокислых бактерий:
Микробицидную активность полученной культуральной жидкости оценивали с помощью метода дисков,
либо турбидометрически.
5.1. Метод дисков для определения микробицидной активности:
Стерильно профильтрованную культуральную жидкость или ее разведение раскапывали по 100 мкл на
диски фильтровальной бумаги (диаметр 12,7 мм). Указанные диски помещали на чашки с агаром для подсчета бляшек, засеянные жидкой культурой тестерного организма (0,3 мл разведения 10-2). Полученные
образцы культивировали в течение 24 ч при температуре 30 °С, после чего измеряли диаметр (в мм) образовавшейся зоны подавления.
5.2. Турбидометрический метод для определения микробиологической активности:
В указанном методе использовали автоматический турбидометр (Bioscreen, Labsystems).
Исследуемая проба состояла из 10 % по объему культуры тестерного организма, 10 % по объему стерильно профильтрованной культуральной жидкости (расчитаны по отношению к объему пробы) и ростовой
среды. В случае контролей, стерильно профильтрованный препарат заменяли дистиллированной водой, рН
которой доводили молочной кислотой до величины, соответствующей стерильно профильтрованному препарату.
В случае каждого тестерного штамма ростовая среда представляла собой среду, используемую для культивирования соответствующего тестерного штамма.
Культивирование плесневых грибков Fusarium и Aspergillus осуществляли в течение 5 дней, при температуре 25 °С и интенсивном перемешивании. Соответствующие условия для грам-отрицательных бактерий были: в случае штамма Enterobacter - 30 °С, в остальных случаях - 25 °С, при перемешивании в течение 2 дней.
Выращивание молочнокислых бактерий проводили в течение 3 дней при температуре 30 °С и перемешивании.
6
BY 3696 C1
С помощью вышеупомянутого прибора определяли способность исследуемых проб поглощать видимый
свет с длиной волны 420-580 нм. После культивирования выстраивали кривую роста для каждой пробы и
расчитывали площадь под полученной кривой.
Микробицидный эффект продуцирующего штамма, сказывающийся на росте тестерного штамма, выражали в виде процента подавления, определяемого путем сравнения величин площадей под кривыми роста в
контроле и при использовании стерильно профильтрованного препарата продуцирующего штамма соответственно.
6. Определение фунгицидного эффекта конкретных молочнокислых бактерий:
Изучали фунгицидный эффект, производимый шестью штаммами молочнокислых бактерий: Е-76, Е-98,
Е-315, E-317, Е-414 и Е-415 по отдельности на все плесневые грибки Fusarium, используемые в качестве тестерных штаммов. В указанном эксперименте проводили визуальную оценку помутнения культур плесневых
грибков, к которым были добавлены разные разведения стерильно профильтрованного препарата, полученного при культивировании каждого из штаммов молочнокислых бактерий (табл. 3).
В контрольных исследованиях вместо культуральной жидкости использовали воду Milli-Q, либо воду
Milli-Q, доведенную молочной кислотой до рН 3,6.
Культивирование проводили в тестерных пробирках со средой КМЦ при температуре 25 °С в течение 5
дней. Результаты учитывали визуально.
7. Результаты:
В табл. 1 и 2, а также на фиг. 1 представлены микробицидные активности, выявленные для разных штаммов молочнокислых бактерий методом дисков или с помощью турбидометрического способа соответственно.
В табл. 3 представлены визуально определяемые фунгицидные активности.
Таблица 1
Микробицидные активности, присутствующие в культуральных жидкостях
молочнокислых бактерий, выявленные методом дисков
Диаметр зоны подавления
(мм)
8
Е-76
3,2 х 10
3,70
19
Е-98
1,2 х 108
3,72
17
Е-315
1,6 х 108
3,90
16
Е-317
1,0 х 108
3,86
16
Е-390
1,9 х 108
3,92
15
5
Клеточный титр тестерного организма Е-396 - 4,0 х 107 КОЕ/мл; на чашке - 1,2 х 10 КОЕ/мл.
Молочнокислая бактерия
Клет. титр КОЕ/мл
рН культ. жидкости
7
BY 3696 C1
Таблица 2
Микробицидный эффект, оказываемый молочнокислыми бактериями на рост различных микробов
Тестерный штамм
Плесневые грибки
Aspergillus niger D-5
Fusarium avenaceum D-1411)
//
//
D-1471)
// culmorum D-1481)
//
//
D-1491)
Грам-отрицательные бактерии
Enterobacter agglonerans E-396
Flavobacterium sp. E-3992)
Pseudomonas fluorescens E-3972)
Молочнокислые бактерии
Lactococcus lactis ssp. lactis E-414
Lactococcus lactis ssp.diacitilactis E-423
Lactococcus sp. E-416
Leuconostoc mesenteroides
ssp. mesenteroides E-3892)
Podicoccus parvulus E-315
Podicoccus pentosaceus E-68
Podicoccus pentosaceus E-390
Lactobacillus plantarum E-76
Lactobacillus plantarum E-98
Lactocxoccus
E-414 E-423
Leuconostoc
E-389 E-466
Продуцирующий штамм
Pedicoccus
E-315
E-67
E-68
E-317
E-65
E-390
E-391
Lactobacillus
E-76
E-98
Конц. клеток КОЕ/мл
-28
-36
-12
-5
3
-36
-36
-20
-17
-6
-39
-49
-36
-29
-20
-38
-55
-66
-26
-30
-16
-33
-8
-9
-10
-33
-59
-63
-25
-26
-21
-42
-27
-10
-18
-20
-44
-43
-16
-9
-24
-52
-50
-20
-20
-28
-47
-53
-24
-23
-44
-42
-37
-21
-9
-39
-79
-70
-35
-39
-41
-74
-67
-30
-32
2,0х104
6,0х103
2,0х104
2,5х103
6,0х102
-89
-98
-98
-92
-99
-98
-94
-99
-97
НО
-98
-98
-96
-99
-97
-92
-97
-97
-93
-98
-98
-96
-98
-98
-91
-98
-97
-93
-98
-97
-93
-99
-97
-93
-96
-98
-93
-97
-97
6,0х104
2,6х106
1,0х104
-37
-15
-15
-19
-33
-29
-23
-30
-24
-35
-16
-26
-47
-28
-61
-50
-46
-43
-37
-39
-57
-52
-41
-45
-39
-39
-31
-11
-48
-87
-35
-38
-53
-37
-36
-47
-44
-33
-41
-41
-41
-34
-31
-38
-56
-43
-57
-57
-56
-42
-58
-58
5,0х104
4,0х104
2,0х104
4,0х104
6
10
0
-2
-6
19
-3
-6
-7
21
-1
-5
-7
15
-7
-12
-7
4
-6
-9
-8
20
-5
-14
-6
10
-3
-12
-23
8
-6
-10
-8
9
-5
-16
-7
3
-8
-14
-7
17
-5
-10
-12
18
-7
-22
-12
5
-9
-22
1,0х105
6,0х104
2,0х105
2,0х105
-1
-3
-3
-8
-9
-6
-10
-6
-4
-6
-4
-8
-11
1,0х105
НО - не определено; отрицательное значение - подавление роста; положительное значение - стимуляция роста. >55 % - сильное подавление; 35-55 % - относительно сильное подавление; 15-34 % - относительно слабое подавление; 15 % - слабое подавление или его отсутствие.
1)
вызывает вспенивание пива; 2) затрудняет фильтрацию массы.
8
BY 3696 C1
Таблица 3
Влияние культуральной жидкости молочнокислых бактерий на плесневые грибки Fusarium,
вызывающие вспенивание пива
D-141
Штамм молочнокислых бактерий
Е-76
Е-98
Е-315
Е-317
Е-414
Е-415
Контроль
Контроль рН
D-147
Штамм молочнокислых бактерий
Е-76
Е-98
Е-315
S-317
Е-414
Е-415
Контроль
Контроль рН
D-148
1:6
+
+
+
+
+
+
Штамм молочнокислых бактерий
Е-76
Е-98
Е-315
Е-317
Е-414
Е-415
Контроль
Контроль рН
D-149
1:6
+
+
+
+
+
+
1:6
+
+
+
+
+
+
Штамм молочнокислых бактерий
Е-76
Е-98
Е-315
Е-317
Е-414
Е-415
Контроль
Контроль рН
1:6
+
+
+
+
+
+
Разведение культуральной жидкости
2:6
3:6
4:6
5:6
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
Разведение культуральной жидкости
2:E
3:6
4:6
5:6
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
Разведение культуральной жидкости
2:6
3:6
4:6
5:6
+
+
+
+
+
+
+
+
Разведение культуральной жидкости
2:6
3:6
4:6
5:6
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
6:6
-
6:6
-
6:6
-
6:6
-
+ четкий рост; - отсутствие роста
Полученные результаты свидетельствуют о том, что вышеупомянутые штаммы молочнокислых бактерий
подавляют рост вредных плесневых грибков Fusaruim и других нежелательных микробов, встречающихся в ходе процесса сбраживания, не оказывая при этом практически никакого влияния на полезные микробы. Полученные результаты показывают возможность использования молочнокислых бактерий в способе, предусмотренном
настоящим изобретением.
Пример 2.
Микробицидное действие, оказываемое определенными штаммами молочнокислых бактерий на пищевые
патогены, а также на микробы, нежелательные для пищевых продуктов.
В настоящем эксперименте исследовали микробицидный эффект, проявляемый препаратами, полученными с
помощью штаммов Pediococcus pentosaceum VTT-E-90390 (Е-390) и Lactobacillus plantarum VTT-E-78076 (E-76),
9
BY 3696 C1
по отношению к пищевым патогенам, а также к микробам, нежелательным для пищевых продуктов. В качестве
тестерных организмов использовали штаммы, относящиеся к родам Bacillus, Yersinia, Listeria, Pseudomonas,
Salmonella и Staphylococcus.
В качестве препарата использовали стерильную культуральную жидкость молочнокислых бактерий, полученную в соответствии с примером 1. Все остальные тестерные штаммы культивировали в течение 16-18 ч в
среде Iso-Sensitest (Oxoid), за исключением штамма Listeria, который выращивали в триптозо-фосфатной среде.
Температура культивирования была равна 30 °С, за исключением штаммов Salmonella, Listeria и Staphylococcus,
в случае которых она равнялась 37 °С.
Микробицидную активность определяли с помощью турбидометрического способа, описанного в примере 1.
Условия проведения эксперимента в плане ростового субстрата и температуры соответствуют вышеописанным.
Длительность инкубирования была равна 24 ч, за исключением штаммов Bacillus и Yersinia, для которых она
составляла 48 ч.
Полученные результаты, представленные в табл. 4, свидетельствуют о том, что добавление предусмотренного настоящим изобретением препарата молочнокислых бактерий вызывает подавление роста пищевых патогенов, а также микробов, нежелательных для пищевых продуктов.
Таблица 4
Подавление роста, вызванное штаммами Р. pensaceus Е-390 и L. plantarum Е-76
Продуцирующие штаммы
Тестерный организм
Bacillus cereus
АТСС91339*
Yersinia enterolitica
ELI351*
Listeria monocytogenes
KTL4126*
Pseudomonas fluorescens
ELI97
Pseudomonas fragi
ATCC4973
Salmonella infantis
EL15*
Staphylococcus aureus
ELI200*
E-390
Е-76
Подавление зоны роста, %
93
80
85
54
41
49
59
97
84
93
90
98
73
86
* Патогены, встречающиеся в пищевых продуктах.
АТСС: American Type Culture Collection.
ELI: VTT, Food Research Laboratory.
KTL: National Public Health Institute.
Пример 3.
Влияние препаратов молочнокислых бактерий, а также препаратов, полученных с помощью молочнокислых
бактерий, на микрофлору осоложения и качество солода.
1. Используемые штаммы:
В эксперименте использовали штамм молочнокислой бактерии Pediococcus pentosaceus VTT-E-90390 (Е390).
Ростовой средой для инокулята служила среда MRS. Указанные бактерии культивировали в течение 2 дней в
10 мл среды MRS при температуре 30 °С. Объем инокулята был равен 1 % от объема ростового раствора.
2. Ячмень:
Использовали ячмень сорта Kymppi урожая 1990 г, в котором доля зерен, зараженных плесневым грибком
Fusaruim, составляла 55 %.
3. Процесс соложения:
Порции ячменя весом 1000 г ополаскивали в водяной бане при температуре 12 °С в течение 1 ч. Используемую
для ополаскивания воду заменяли на первую воду для замачивания, которую через 5 ч заменяли на вторую воду
для замачивания. Через 16 ч после этого проводили стадию воздушного покоя. Назначением стадии воздушного
покоя являлось удаление воды с поверхности зерен. Продолжительность этой стадии была равна 8 ч. В ходе замачивания влажность ячменя достигала 44 %. В течение стадии замачивания ячмень подвергали аэрации.
Вслед за замачиванием осуществляли проращивание. Ячмень проращивали в ящиках для проращивания в
течение 6 дней при температуре 14 °С. Для того чтобы поддерживать влажность на уровне 44 %, указанные
порции ячменя ежедневно увлажняли и ворошили. Полученный таким образом зеленый солод подсушивали по
21-часовой температурной программе. В течение 4,5 ч температура равнялась 50 °С. В течение следующих 4,5 ч
ее повышали до 60 °С, после чего поддерживали на этом уровне в течение 4 ч. На протяжении последующих 5 ч
10
BY 3696 C1
температуру равномерно повышали до 85 °С и выдерживали на этом уровне в течение оставшихся 3 ч. Конечное содержание влаги в солоде становилось равным 4 %. По окончании указанного процесса механически отделяли первичные корешки.
Осоложение, осуществленное в отсутствие каких бы то ни было добавок, рассматривали в качестве контроля.
4. Препарат молочнокислых бактерий и препарат, полученный с помощью молочнокислых бактерий:
Для получения указанных препаратов использовали клетки молочнокислых бактерий, выделенные из соответствующих культуральных жидкостей, а также культуральные жидкости, содержащие токсичные для микробов вещества, как в комбинации друг с другом, так и по отдельности. Содержащую клетки культуральную жидкость добавляли в количестве 120 мл на кг ячменя, либо проводили добавление клеток, выделенных из 120 мл
культуральной жидкости. Указанное выделение осуществляли с помощью центрифугирования соответствующей культуральной жидкости, после чего выделенные клетки суспендировали в воде. В тех случаях, если проводили добавление культуральной жидкости, указанную культуральную жидкость использовали как таковую.
Клеточные титры добавляемых препаратов находились в пределах приблизительно от 108 до 109 КОЕ/мл.
5. Добавки препаратов молочнокислых бактерий:
Препараты молочнокислых бактерий добавляли либо к ячменю, либо в начале I стадии замачивания, либо в
начале I и II стадий замачивания, либо в начале проращивания.
6. Проводимые анализы:
Пробы отбирали на каждой стадии осоложения.
6.1. Учет плесневых грибков осуществляли следующим образом.
Процент зерен, зараженных плесневым грибком Fusarium, определяли с помощью агара CZAPEK
IPRODION DICLORAL (агара CZIP), который является селективным для плесневых грибков Fusarium, а также
влажной фильтровальной бумаги [2]. Идентификацию плесневых грибков Fusarium проводили на основании типичной морфологии их колоний и спор, а также на основании красной окраски.
Учет плесневых грибков Aspergillus и Penicillum осуществляли с использованием селективного солодового
солевого агара [2]. Учет других наиболее обычных плесневых грибков проводили на влажной фильтровальной
бумаге.
6.2. Учет молочнокислых бактерий осуществляли на агаре MRS как в случае добавляемых культур, так и при
анализе проб осоложения.
6.3. Учет полных бактериальных титров проводили на aãape для подсчета бляшек (Difco).
6.4. Химические показатели солода определяли с использованием методов, известных применительно к осоложению [3].
7. Результаты:
В табл. 5 приведены титры плесневых грибков Fusarium и молочнокислых бактерий на различных стадиях
осоложения при добавлении культуральной жидкости Е-390.
На фиг. 2 и 3 представлены полные бактериальные титры на различных, стадиях осоложения в случае добавления культуральной жидкости штамма Е-390 и клеток Е-390.
В табл. 6 приведены результаты анализа солода при добавлении культуральной жидкости штамма Е-390
или клеток Е-390.
Таблица 5
Влияние культуральной жидкости P. pentosaceus, добавленной на различных стадиях осоложения,
на титры Fusarium и молочнокислых бактерий в процессе осоложения
Плесневые грибки Fusarium (% зараженных зерен)
Стадия добавления
Ячмень
Замач.
Проращ.
Солод
Контроль
55
72
96
25
120 мл КЖ*, ячмень
3
6
77
3
120 мл КЖ*, вода для замач. I
55
62
98
14
120 мл КЖ*, вода для замач. I+II
55
42
90
9
120 МЛ КЖ*, проращивание
55
78
91
3
Молочнокислые бактерии (концентрация клеток, КОЕ/г)
Контроль
6,0х101
3,4х102
2,2х104
3,0х103
8
8
8
120 мл КЖ*, ячмень
1,2х10
1,1х10
2,2х10
1,8х108
1
7
7
120 мл КЖ*, вода для замач. I
6,0х10
3,1х10
2,8х10
1,4х107
1
7
7
120 мл КЖ*, вода для замач. I+II
6,0х10
7,4х10
8,3х10
5,3х107
1
8
8
120 мл КЖ*, проращивание
6,0х10
1,5х10
2,7х10
2,6х108
* КЖ - культуральная жидкость.
11
BY 3696 C1
Таблица 6
Влияние культуральной жидкости или клеток P. pentosacues Е-390, добавленных на разных стадиях осоложения, на качество солода
Анализ
Образец
Контроль
120 мл КЖ*, ячмень
120 мл КЖ*, вода для
замачивания 1
120 мл КЖ*, вода для
замач. 1+2
120 мл КЖ*, проращивание
Клетки 108 КОЕ/г, ячмень
Клетки 108 КОЕ/г, вода
для замач.1
Клетки 108 КОЕ/г, вода/замач. 1+2
Клетки 108 КОЕ/г, проращивание
604
496
482
4,1
4,3
4,2
80,1
80,3
80,5
77,8
77,3
77,5
Диффер.
экстракт
% с.м.
2,3
3,0
2,9
<10
<10
<10
1,59
1,51
1,50
163
164
171
82
80
76
69
57
51
202
207
194
Прозр.
300
305
310/56
мин
305
Активность
β глюканазы
Ед/кг
365
355
316
482
4,3
80,0
76,9
3,1
<10
1,49
168
80
64
186
360
31
955
4,2
79,0
74,9
4,1
Опал.
310
<10
1,68
129
69
59
159
386
21
606
4,3
80,3
77,4
2,9
Прозр.
<10
1,54
167
79
59
223
359
38
-
-
-
-
315/61
мин
-
-
-
-
79
59
187
376
36
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
81
67
178
353
35
804
4,3
79,5
76,6
2,9
Опал.
290
<10
1,63
148
81
69
179
392
37
β-глю- Влажность
каны
%
мг/л
Экстракт
% с.м.
Грубый
помол
% с.м.
Прозрачность
Прозр.
Прозр.
Прозр.
ФильтраВремя
ция тонк.
ocaхапомола
ривания
мл/ч
мин
- не исследовали.
*) КЖ - культуральная жидкость.
12
Вязкость
сП
-
FAN
мг/л
АктивМоди- Гомоген- ность
фикация ность
α амила%
%
зы Ед/г
Перв.
корешки
г/кг
35
37
30
BY 3696 C1
Данные результаты показывают, что обработка, согласно изобретению, уменьшает в частности количество
плесневого грибка Fusarium и общий бактериальный титр на различных этапах осоложения.
Добавка препарата не оказывает нежелательного эффекта на качество солода. Обратное же верно: обработка
по изобретению улучшает фильтрацию затира, полученного из сусла, и снижает содержание β-глюкана в солоде.
Пример 4.
Получение препаратов, производимых с помощью молочнокислых бактерий.
1. Получение концентрированной культуральной жидкости.
Продуцирующие штаммы Pediococcus pentosaceus VTT-E-90390 (Е-390) и Lactobacillus plantarum VTT-E78076 (Е-76) культивировали в ферментере в объеме 15 л. Объем инокулята составлял от 6 до 7 %, культивирование осуществляли в среде MRS при температуре 30 °С в течение 2 дней при микроаэрофильных условиях.
Полученные культуральные жидкости концентрировали в десять раз и в двадцать раз с помощью лиофилизации
и выпаривания. Микробицидную активность полученных концентратов оценивали с использованием метода
дисков.
2. Получение очищенного раствора, содержащего микробицидные соединения.
Культуральную жидкость молочнокислых бактерий подвергали очистке с помощью гельхроматографического фракционирования в соответствии с размером молекул. Фракции, обнаружившие активность в исследовании методом дисков или с помощью турбидометрического способа, объединяли и еще раз
прогоняли через гелевую колонку.
Пример 5.
Влияние препаратов молочнокислых бактерий и препаратов, полученных с помощью молочнокислых бактерий, на микрофлору осоложения и на качество солода.
1. Используемые штаммы и препараты, получаемые с помощью этих штаммов.
Использовали следующие штаммы бактерий: Lactobacillus plantarum VTT-E-78076 (Е-76) и Pediococcus pentosaceus VTT-E-90390 (E-390).
Указанные штаммы были получены из VTT, Collection of Industrial Microorganisms (Biotechnical Laboratory,
Finland).
Получение препаратов осуществляли так, как это описано в примере 1, пункт 3; примере 3, пункт 1; и примере 4, пункты 1, 2.
2. Ячмень.
Использовали ячмень сорта Kymppi урожая 1991 года.
3. Процесс осоложения.
Осоложение проводили так, как это описано в примере 3, за исключением того, что продолжительность стадии проращивания была равна 8 дням. Конечное содержание влаги в получаемом солоде становилось меньше
5 %.
4. Осоложение.
Осоложение осуществляли в лабораторных условиях. Осоложение, проведенное в отсутствие каких бы то ни
было добавок, рассматривали в качестве контроля.
4.1. Первый вариант осоложения.
Препаратами, используемыми в лабораторном осоложении, служили бесклеточные культуральные жидкости,
концентрированные в десять раз, а также необработанные культуральные жидкости, содержащие клетки. Указанные препараты добавляли в начале стадии замачивания I, либо в начале стадий замачивания I и II. Исследования осоложения 1-8 проводили следующим образом.
Тест ¹ 1. Контроль, ячмень Kymppi 1991;
Тест ¹°2. В начале стадий замачивания I и II добавляют 120 мл содержащей клетки культуральной жидкости
штамма Е-76;
Тест № 3. В начале стадии замачивания I добавляют 120 мл концентрированного в 10 раз фильтрата культуральной жидкости штамма Е-76;
Тест ¹ 4. В начале стадий замачивания I и II добавляют 120 мл концентрированного в 10 раз фильтрата культуральной жидкости штамма Е-76;
Тест ¹°5. В начале стадий замачивания I и II добавляют 120 мл культуральной жидкости штамма Е-390;
Тест ¹ 6. В начале стадии замачивания I добавляют 120 мл концентрированного в 10 раз фильтрата культуральной жидкости штамма Е-390;
Тест № 7. В начале стадий замачивания I и II добавляют 120 мл концентрированного в 10 раз фильтрата
культуральной жидкости штамма Е-390;
Тест ¹ 8. В начале стадий замачивания I и II добавляют 60 мл содержащей клетки культуральной жидкости
штамма Е-76 и 60 мл содержащей клетки культуральной жидкости штамма Е-390.
4.2. Второй вариант осоложения.
Препаратами, используемыми в лабораторном осоложении, служили бесклеточные, концентрированные в 20
раз фильтраты культур, их бесклеточные очищенные фракции, содержащие микробицидную активность, а так13
BY 3696 C1
же необработанные, содержащие клетки культуральные жидкости. Осуществляли контроль рН воды для замачивания. Препараты добавляли в начале стадий замачивания I и II. Исследования осоложения 9-16 проводили
следующим образом.
Тест ¹°9. Контроль, ячмень Kymppi 1991;
Тест № 10. В начале стадий замачивания I и II добавляют 120 мл воды, рН 3,8;
Тест ¹ 11. В начале стадий замачивания I и II добавляют 120 мл содержащей клетки культуральной жидкости
штамма Е-76;
Тест № 12. В начале стадий замачивания I и II добавляют 120 мл фракционированного концентрата штамма
Е-76, рН 3,8;
Тест ¹ 13. В начале стадий замачивания I и II добавляют 120 мл концентрированного в 20 раз фильтрата
культуральной жидкости штамма Е-76;
Тест ¹°14. В начале стадий замачивания I и II добавляют 120 мл содержащей клетки культуральной жидкости
штамма Е-390;
Тест № 15. В начале стадий замачивания I и II добавляют 120 мл фракционированного концентрата штамма
Е-390, рН 3,8;
Тест № 16. В начале стадий замачивания I и II добавляют 120 мл концентрированного в 20 раз фильтрата
культуральной жидкости штамма Е-390.
5. Проводимые анализы.
Отбор проб осуществляли на каждой стадии осоложения.
Титры плесневых грибков и молочнокислых бактерий, полные бактериальные титры, а также физические и
химические показатели качества получаемого солода определяли так, как это описано в примере 3.
6. Результаты.
На фигурах 4 и 5 представлены полные бактериальные титры на разных стадиях процесса осоложения при
использовании в воде для замачивания культуральных жидкостей молочнокислых бактерий с клетками, либо
концентрированных или фракционированных фильтратов культуральных жидкостей.
В таблицах 7, 8, 9 и 10 приведены концентрации плесневых грибков Fusarium и других плесневых грибков, а
также молочнокислых бактерий на разных стадиях осоложения для обоих вариантов осоложения.
В таблицах 11 и 12 представлены результаты исследования солода для обоих вариантов осоложения.
14
BY 3696 C1
Таблица 7
Грибковая флора в процессе осоложения при добавлении препаратов Р. pentosaceus Е-390 и L. plantarum Е-76 в воде для замачивания ячменя
(результаты представлены в виде % зараженных зерен). Нумерация образцов - см. пример 5
Образец
Род грибка
Fusarium ФБ*
CZID
Alternaria
Cephalosporium
Cladosporium
Rhitzopus
Mucor
Stemphylium
Epicoccum
Helminthosporium
Acremoniella
Trichothecium
Asperqillus
Penicillium
Другие грибки
Ячмень
35
36
26
37
17
0
0
0
2
10
0
0
0
3
1
1
80
74
6
22
4
0
2
0
0
26
0
0
0
0
8
2
64
72
18
38
20
0
4
0
0
46
0
0
0
2
0
3
60
46
22
34
6
2
0
0
0
10
0
0
0
2
0
Замачивание
4
5
22 76
38 84
20 18
36 42
56 34
0
0
2
8
0
0
0
0
10 36
0
0
0
0
0
0
2
0
0
0
6
76
54
22
12
10
0
14
0
0
16
0
0
0
0
0
7
48
32
12
28
44
0
0
0
0
14
0
0
0
2
0
8
1
68 72
78 84
24 18
24 72
20 6
0
0
4
0
0
0
0
0
30 48
0 100
0
0
0
0
2
4
0
0
2
88
82
10
20
6
0
10
0
0
64
0
0
0
2
0
Проращивание
3
4
5
6
88 94 96 80
80 82 84 78
8
2
10
2
42 80 42 32
30 52 14 10
0
0
0
0
28 64 24 44
0
2
0
0
0
2
0
0
60 42 50 54
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
2
0
2
2
0
0
0
0
7
90
80
2
36
36
0
34
0
0
38
0
0
0
2
2
8
94
96
10
24
4
0
14
0
2
58
0
0
0
0
0
1
26
36
18
2
2
0
65
0
1
28
0
0
0
1
0
2
22
22
8
3
0
16
79
0
1
26
0
0
0
0
0
3
2
10
17
5
4
0
78
0
0
14
0
0
0
0
0
Солод
4
5
3 25
2
24
5
18
4
7
1
1
48 13
88 68
0
0
0
3
3 11
0
0
0
0
1
0
0
0
0
0
* ФБ - фильтровальная бумага.
Таблица 8
Титры молочнокислых бактерий (КОЕ/мл) в ходе осоложения при добавлении к воде для замачивания ячменя препаратов
P. pentosaceus Е-390 и L. plantarum Е-76. Номера проб - см. пример 5
Пример
1
2
3
4
5
6
7
8
Замачивание
5,5х103
7,3х106
1,4х103
3,2х102
1,3х107
4,8х103
7,3x102
1,2х107
Проращивание
3,3х106
1,2х107
4,4х103
1,4х104
7,5х106
5,0х105
2,4х104
1,4х107
Содержание молочнокислых бактерий в ячмене 7,5х102 КОЕ/г.
15
Солод
2,5х102
5,5х105
1,1х103
9,5х102
2,6х106
4,0х104
2,6х103
2,3х106
6
17
20
5
2
1
0
83
6
0
23
0
0
0
0
0
7
7
8
11
6
1
11
96
0
1
8
0
0
0
1
0
8
24
24
16
2
0
0
73
1
3
20
0
0
0
0
0
BY 3696 C1
Таблица 9
Грибковая флора в процессе осоложения при добавлении препаратов Р. pentosaceus Е-390 и L. plantarum Е-76 в воде для замачивания ячменя
(результаты представлены в виде % зараженных зерен). Нумерация образцов - см. пример 5
Образец
Род грибка
Fusarium ФБ*
CZID
Alternaria
Cephalosporium
Cladosporium
Rhitzopus
Mucor
Stemphylium
Epicoccum
Helminthosporium
Acremoniella
Trichothecium
Asperqillus
Penicillium
Другие грибки
Ячмень
35
36
26
37
17
0
0
0
2
10
0
0
0
3
1
9
78
78
6
18
6
0
0
0
0
32
0
0
0
2
0
10
84
78
2
18
8
0
2
0
0
28
0
0
0
2
0
11
32
30
34
34
14
0
2
0
2
44
0
0
0
0
0
Замачивание
12 13 14
30
0
44
14
0
26
10 10 24
24
0
36
16 70 18
0
0
0
2
4
2
0
2
0
0
0
0
18 10 26
0
0
0
0
0
0
0
0
0
2
0
0
0
0
0
15
36
28
20
44
24
0
0
0
0
28
0
0
0
2
0
16
28
22
14
44
42
0
2
0
0
26
0
0
0
0
0
9
98
98
8
52
14
0
36
0
0
66
44
0
0
0
0
10
86
98
2
18
6
0
14
0
0
50
0
0
0
0
4
Проращивание
11 12 13 14
94 98 59 96
92 66 12 92
14 24
0
0
56 52
4
36
2 16 54
2
0
0
0
0
52 40 76 22
0
2
2
0
0
0
0
0
66 82
6
78
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
10 16 30
4
0
0
0
0
15
94
92
14
36
6
0
56
2
2
66
0
4
0
4
0
16
72
54
6
58
20
0
66
0
0
58
0
0
0
10
0
9
23
38
17
5
1
13
80
0
0
46
0
0
0
0
0
10
28
31
16
3
0
20
78
4
1
58
0
0
0
1
1
11
37
36
25
6
0
0
78
4
0
46
0
0
0
0
0
Солод
12 13
14 1
7
1
13 2
11 1
1
7
0
0
91 98
1
0
0
0
52 7
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
* ФБ - фильтровальная бумага.
Таблица 10
Титры молочнокислых бактерий (КОЕ/мл) в ходе осоложения при добавлении к воде для замачивания ячменя препаратов
P. pentosaceus Е-390 и L. plantarum Е-76. Номера проб - см. пример 5
Пример
9
10
11
12
13
14
15
16
Замачивание
8,0х102
8,0х102
2,7х107
2,2х103
1,2х103
4,1х107
4,8х103
3,5х102
Проращивание
4,2х106
5,0xl06
2,1х107
3,4х105
1,4х107
3,5х107
4,8х106
2,1х105
Содержание молочнокислых бактерий в ячмене 7,5х102 КОЕ/г.
16
Солод
8,0х103
5,6х104
8,5х105
2,5х103
2,3х103
1,1х104
3,9х105
1,7х104
14
16
24
19
14
1
0
93
3
0
76
0
0
0
0
0
15
65
44
27
13
0
11
84
2
0
55
0
0
0
0
0
16
13
11
3
20
1
0
90
0
0
17
0
0
0
0
0
BY 3696 C1
Таблица 12
Влияние препаратов P. pentosacues Е-390 и L. plantarum E-76, добавленных к воде
для замачивания ячменя, на качество солода. Нумерация образцов - см. пример 5
Анализ
Образец
1
2
3
4
5
6
7
8
Влажность, %
3,6
3,6
3,5
3,7
3,7
3,6
3,9
3,9
Содерж. экстракта, тонк. % сух.м.
81
80,8
80,6
80
81,2
81
80,7
81,2
Содерж. экстракта, груб. % сух.м.
76,8
77
76,1
75,2
77
76,4
74,8
77,1
Различие экстракта, %
4,2
3,8
4,5
4,9
4,3
4,7
5,9
4,1
Осахаривание, мин
<10
<10
<10
<10
<10
<10
<10
<10
Прозрачность сусла
прозр.
прозр.
прозр.
прозр.
прозр.
прозр.
прозр.
прозр.
Фильтрация, тонкий помол мл/мин
320/45
320/44
315/48
315/40
320/47
315/66
320/49
315/52
Фильтрация, грубый помол мл/мин
260/86
265/64
270/59
255/73
260/68
260/76
255/90
275/120
Сусло, рН
5,93
5,88
5,86
5,86
5,86
5,86
5,97
5,99
Вязкость, сП
1,69
1,57
1,59
1,57
1,55
1,58
1,59
1,58
β-глюканы, мг/л
784
659
705
736
610
696
822
657
Свободный аминный азот, мг/л
154
156
155
139
158
150
130
154
Модификация, %
74
72
73
73
72
75
77
76
Гомогенность, %
61
65
63
58
67
66
62
68
α-амилаза, Ед/г
178
182
148
128
179
156
144
174
β-глюканаза, Ед/кг
434
420
360
360
442
412
361
425
Таблица 12
Влияние препаратов P. pentosacues Е-390 и L. plantarum E-76, добавленных к воде для замачивания ячменя, на качество солода. Нумерация образцов - см. пример 5
Образец
Анализ
9
10
11
12
13
14
15
16
Влажность, %
3,5
3,6
3,6
3,5
3,8
3,5
3,5
3,6
Содерж. экстракта, тонк. % сух.м.
80,5
80,5
81,2
80,5
80,3
81
81,1
80,4
Содерж. экстракта, груб. % сух.м.
78,4
77,9
77,4
73,3
73,5
77,6
76,6
75,1
Различие экстракта, %
2,1
2,6
3,7
7,2
6,8
3,4
4,5
5,4
Осахаривание, мин
<10
<10
<10
<10
<10
<10
<10
<10
Прозрачность сусла
прозр.
прозр.
прозр.
прозр.
прозр.
прозр.
прозр.
прозр.
Фильтрация, тонкий помол мл/мин
320/40
315/47
320/44
315/42
320/55
315/49
330/40
320/40
Фильтрация, грубый помол мл/мин
290/120
270/76
260/51
265/120
245/120
285/68
305/120
265/12
Сусло, рН
6,04
6,05
5,99
5,97
5,94
5,95
5,98
5,99
Вязкость, сП
1,54
1,65
1,51
1,53
1,5
1,49
1,49
1,52
β-глюканы, мг/л
442
522
397
553
612
381
463
576
Свободный аминный азот, мг/л
149
145
149
128
117
149
139
120
Модификация, %
85
85
86
82
74
81
75
71
Гомогенность, %
63
66
76
57
57
68
51
47
α-амилаза, Ед/г
161
172
161
123
72
148
125
101
β-глюканаза, Ед/кг
365
375
365
282
282
371
342
308
17
BY 3696 C1
Полученные нами результаты свидетельствуют о том, что предусмотренные настоящим изобретением
обработки снижают, в частности, содержание бактериальных грибков Fusarium, а также полный бактериальный титр на различных стадиях осоложения. Кроме того, отмечено, что не только культуральные жидкости,
но, в частности, и концентрированные и фракционированные культуральные фильтраты оказывают благоприятный эффект по отношению к плесневым грибкам Fusarium.
На основании проведенных анализов солода можно сделать вывод о том, что добавки культуральной
жидкости штаммов Е-76 и Е-390 способствуют улучшению фильтруемости сусла, получаемого из соответствующего солода; также содержание β-глюкана в указанном солоде ниже, чем в контрольном.
Пример 6.
Влияние препаратов, полученных с помощью молочнокислых бактерий и используемых в качестве добавок в процессе осоложения, на фильтрацию получаемой массы.
Представленная на фиг. 6 диаграмма показывает влияние предусмотренной настоящим изобретением обработки препаратами, полученными с помощью штаммов молочнокислых бактерий (120 мл культуральной
жидкости на кг ячменя), на фильтрацию массы, производимой из соответствующим образом обработанного
солода.
В этом эксперименте используют штаммы, перечисленные в примере 1: Е-390, Е-416, Е-98, Е-317, Е-390,
Е-76 и Е-315. Анализ проводили, используя метод Terpal фильтрации [4].
Из полученных результатов видно, что предусмотренная настоящим изобретением обработка улучшает
фильтрацию производимой массы.
В следующих примерах показано действие молочнокислой бактерии на концентрацию микотоксинов, дезоксиниваленола и зеараленона, продуцируемых плесенями Fusarium при осоложении ячменя.
Пример 7.
Действие молочнокислой бактерии на концентрацию дезоксиниваленола (DON) при осоложении ячменя,
зараженного плесенью F. culmorum D148.
1. Использованные штаммы.
В данном тесте были использованы штаммы молочнокислых бактерий Lactobacillus plantarum (Е-76) и
Pediococcus pentsaceus (Е-390).
Эти бактерии культивировали в анэробных условиях в MRS питательном растворе при 30 °С в течение 34 дней. Между тестами бактериальные штаммы хранили в их питательном растворе в анэробных условиях
при 4 °С.
2. Ячмень.
Использовали сорт ячменя Kymppi урожая 1994 года, к которому было добавлено 2 мл культурального
раствора Fusarium на 100 г ячменя. Штамм Fusarium был выращен на качалке в растворе CMC в течение около 7 дней до образования спор. Плотность спор культурального раствора F. culmorum VTT D-80148 (D-148)
составляла около 106 спор/мл раствора. Зараженный ячмень инкубировали при 25 °С в течение 3 дней. Ячмень ежедневно перемешивали и в течение ночи высушили при 30 °С до его первоначальной влажности.
3. Процесс осоложения.
Программа замачивания для 1000 г порции ячменя была следующей:
промывание 1 ч,
первое замачивание 7 ч,
первый перерыв для проветривания 16 ч,
второе замачивание 8 ч,
второй перерыв для проветривания 15 ч,
погружение.
Температура замачивания была 12 °С, а желаемая влажность ячменя составляла 46 % к концу замачивания. Для того чтобы убедиться в дыхании и метаболизме ячменя, между стадиями замачивания делали перерывы для проветривания и образцы ячменя во время перерывов переносили в аэрируемую область. Обеспечивалось также проветривание сосудов для замачивания. После второго перерыва для проветривания
образцы ячменя взвешивали для определения содержания влаги. Если влажность была ниже 46 %, образцы
ячменя погружали в воду на короткий промежуток времени. Соотношение ячменя и воды при замачивании
составляло 1:1,5. После чего пробы ячменя помещали в боксы для проращивания.
Образцы ячменя проращивали в аэрируемых боксах для проращивания в течение 6 дней при 14 °С. Для
доведения влажности до желаемого уровня 46 %, образцы ячменя ежедневно увлажняли и ворошили. Полученный таким образом зеленый солод высушивали, используя 21-часовую температурную программу, как на
стадии 3 примера 3. И наконец, механически удаляли из солода проростки.
Осолаживание, осуществляемое без добавления молочнокислой бактерии, использовали как контрольный
тест.
4. Препарат молочнокислой бактерии.
В табл. 13 представлены рН, клеточный титр и микробицидная активность (дисковый метод, пример 1,
пункт 5) культуры молочнокислой бактерии, добавляемой при осолаживании.
18
BY 3696 C1
Штамм молочнокислой
бактерии
Е-76
Е-390
рН культурального
раствора
3,72
3,77
Титр клеток (PMY/МЛ)
5,1Е+08
1,7Е+09
Таблица 13
Зона ингибирования
(мм)
17
15
5. Добавление препарата молочнокислой бактерии.
Препарат молочнокислой бактерии добавляли в начале стадии первого и второго замачивания. Соотношение культуры молочнокислой бактерии к воде при осолаживании поддерживали на уровне 8 %.
6. Осуществленные анализы.
Концентрацию дезоксиниваленола в каждом образце ячменя определяли с помощью газовой хроматографии. Для узнавания и количественного определения дезоксиниваленола использовали масс-спектрометр.
7. Результаты.
На фиг. 7 показано влияние добавления молочнокислой бактерии на содержание дезоксиниваленола при
осоложении ячменя, зараженного штаммом F. culmorum D 148.
Из полученных результатов видно, что под действием штамма L. plantarum Е-76 в солоде оказывается на
50 % меньше дезоксиниваленола по сравнению с необработанным солодом, а под действием штамма P. pentosaceus Е-390 в солоде оказывается на 25 % меньше дезоксиниваленола по сравнению с необработанным
солодом.
Пример 8.
Влияние молочнокислой бактерии на образование дезоксиниваленола (DON) при осоложении ячменя, естественным образом загрязненного дезоксиниваленолом и плесенями Fusarium.
1. Использованные штаммы.
В данном тесте были использованы штаммы молочнокислых бактерий Lactobacillus plantarum (Е-76) и
Lactobacillus acidophilus VTT E-87276 (E-276).
Штамм Lactobacillus plantarum культивировали, как в примере 7. Температура культивирования для
штамма Lactobacillus acidophilus была 37 °С.
2. Ячмень.
Использовали сорта ячменя низкого качества Kustaa, Loviisa и Jo 1599 урожая 1993 года.
3. Процесс осоложения.
Осолаживание осуществляли так же, как в ïримере 7, за исключением порций ячменя (100 г) и соотношения
ячмень:вода при замачивании (1:4,0).
Осолаживание, осуществляемое без добавления молочнокислой бактерии, использовали как контрольный
тест.
4. Препарат молочнокислой бактерии.
В табл. 14 представлены рН, клеточный титр и микробицидная активность (дисковый метод, пример 1,
пункт 5.1) культуры молочнокислой бактерии, добавляемой при осолаживании.
Таблица 14
Сорт осолож-го Штамм молочнокис- рН культурального рас- Титр клеток
Зона ингибирования
ячменя
лой бактерии
твора
(PMY/мл)
(мм)
Kustaa
Е-76
3,68
2,6E+09
23
Е-276
3,96
1,6E+08
21
Loviisa
Е-76
3,68
2,6E+09
23
Е-276
3,96
1,6E+08
21
Jo 1599
Е-76
3,68
2,6E+09
23
Е-276
3,96
1,6E+08
21
Б. Иностранный ячмень
1. Использованные штаммы.
Соответствует пункту A.1.
2. Ячмень.
Использованный ячмень состоял из сортов 1-3 иностранного ячменя низкого качества.
Осолаживание осуществляли так же, как в примере 7, за исключением порций ячменя (20 г) и соотношения ячмень:вода при замачивании (1:17,0).
Ячмень проращивали 6 дней в пластиковых пакетах, помещенных в пластиковый бокс на металлической
рамке до желаемой влажности 46 %. Пакеты ежедневно поворачивали. Для сохранения влажности некоторое
количество воды выливали на дно бокса для проращивания. Зеленый солод высушивали в инкубаторе при
50 °С в течение 17 ч, после чего температуру поднимали до 85 °С и ячмень сушили еще в течение 4 ч. Проростки удаляли механически.
4. Препарат молочнокислой бактерии.
19
BY 3696 C1
В табл. 15 представлены рН, клеточный титр и микробицидная активность (дисковый метод, пример 1,
пункт 5.1) культуры молочнокислой бактерии, добавляемой при осолаживании.
Таблица 15
Сорт осолож-го Штамм молочнокисрН культурального
Титр клеток
Зона ингибирования
ячменя
лой бактерии
раствора
(PMY/МЛ)
(мм)
Иностранный
Е-76
3,82
9,5E+08
23
№1
Е-276
4,00
3,5E+08
20
Иностранный
Е-76
3,82
9,5E+08
23
№2
Е-276
4,00
3,5E+08
20
Иностранный
Е-76
3,70
7,5E+09
23
№3
Е-276
4,01
4,4E+08
20
5. Добавление препарата молочнокислой бактерии.
Препарат молочнокислой бактерии добавляли в начале стадии первого и второго замачивания. Соотношение культуры молочнокислой бактерии к воде при осолаживании поддерживали на уровне 8 %.
6. Осуществленные анализы.
Концентрацию дезоксиниваленола в каждом образце ячменя определяли с помощью теста Elisa (Ridascreen).
7. Результаты.
В табл. 16 и на фиг. 8 и 9 показаны концентрация дезоксиниваленола при осоложении порций финского и
иностранного ячменя, а также влияние молочнокислой бактерии на образование дезоксиниваленола (DON)
при осоложении ячменя, естественным образом загрязненного дезоксиниваленолом и плесенью Fusarium.
На фиг. 10 показаны средние значения концентрация дезоксиниваленола трех домашних и трех иностранных образцов ячменя, то есть влияние культур молочнокислой бактерии, добавленных к воде для первого и второго замачивания на концентрацию дезоксиниваленола (DON) при осоложении финского и иностранного ячменя, определенного с помощью теста Elisa (Ridascreen). Результаты даны в виде средних
величин.
Таблица 16
Образец
DON (мкг/кг)
ячмень
Kustaa -93
34
Loviisa -93
115
Jo 1599 -93
72
Kymppi -94
56
Foreign № 1
296
Foreign № 2
212
Foreign № 3
673
солод
Kustaa -93 необраб.
29
Kustaa -93+E-76
55
Kustaa -93+E-276
23
Loviisa -93 необраб.
66
Loviisa -93+E-76
53
Loviisa -93+E-276
109
Kymppi -94
Foreign № 1 необраб.
262
Foreign ¹ 1+Е-76
73
Foreign ¹ l+E-276
56
Foreign ¹ 2 необраб.
92
Foreign ¹ 2+E-76
87
Foreign ¹ 2+E-276
59
Foreign № 3 необраб.
263
Foreign № 3+E-76
40
Foreign № 3+E-276
38
E-76 = Lactobacillus plantarum
E-276 = Lactobacillus acidophilus.
Из полученных результатов видно, когда добавлен культуральный раствор L. plantarum E-76, особенно
при осолаживании образцов иностранного ячменя, концентрация дезоксиниваленола выше в необработанном солоде, чем в присутствии молочнокислой бактерии. Под действием штамма L. plantarum концентрация
дезоксиниваленола (средняя для трех образцов) оказывается на 68 % ниже, чем в необработанном солоде, а
под действием штамма Lactobacillus acidophilus (E-276) концентрация дезоксиниваленола оказывается на
20
BY 3696 C1
75 % ниже, чем в необработанном солоде. Порции финского ячменя имеют низкие концентрации дезоксиниваленола, которые могут быть далее при осолаживании еще снижены.
Пример 9.
Влияние молочнокислой бактерии на содержание зеараленона (ZEN) в солоде при осолаживании ячменя,
зараженного штаммами Fusarium culmorum D-148 и F. graminearum D-470.
А:1. Был использован штамм молочнокислых бактерий Lactobacillus plantarum (Е-76).
Этот штамм, ячмень (время заражения 7 дней), процесс осолаживания, препарат молочнокислых бактерий и добавки препарата молочнокислых бактерий, использованные в этом примере были такими же, как в п.
1-5 примера 7.
6. Осуществленные анализы.
Содержание зеараленона в каждом образце ячменя определяли с помощью жидкостной хроматографии.
7. Результаты.
На фиг. 11 показано влияние добавления молочнокислой бактерии на содержание зеараленона при осоложении ячменя, зараженного штаммом F. culmorum D 148.
Из полученных результатов видно, что под действием штамма L. plantarum Е-76 в солоде оказывается на
46 % меньше зеараленона по сравнению с необработанным солодом.
Б:1. Использованные штаммы.
В данном тесте были использованы штаммы молочнокислых бактерий Lactobacillus plantarum (Е-76),
Lactobacillus acidophilus VTT E-87276 (E-276) и Pediococcus pentsaceus (E-390).
Культивирование осуществляли, как описано в примере 7.
2. Ячмень.
Использовали сорт ячменя Kymppi урожая 1994 года, который был заражен культуральным раствором F.
graminearum VTT D95470 (D-470), как описано в п. 2 примера 7.
Процесс осолаживания, препарат молочнокислых бактерий и добавки препарата молочнокислых бактерий, использованные в этом примере были такими же как в пп. 3-5 примера 7.
Дополнительно культура молочнокислой бактерии L. acidophilus E-276, добавленная при осолаживании,
имела рН 4,05, титр клеток 5,8Е+08 PMY/мл и зону ингибирования 14 м (дисковый метод, пример 1, п. 5.1).
6. Осуществленные анализы.
Содержание зеараленона в каждом образце ячменя определяли с помощью теста Elisa (Ridascreen).
7. Результаты.
На фиг. 12 показано влияние добавления молочнокислой бактерии на содержание зеараленона при осоложении ячменя, зараженного штаммом F. graminearium VTT D-95470 (D-148).
Из полученных результатов видно, что под действием молочнокислой бактерии в солоде оказывается на
37-55 % меньше зеараленона по сравнению с необработанным солодом.
21
BY 3696 C1
Фиг. 2
Фиг. 3
Фиг. 4
Фиг. 5
22
BY 3696 C1
Фиг. 7
Фиг. 8
Фиг. 6
Фиг. 9
Фиг. 11
Фиг. 10
Фиг. 12
Государственный патентный комитет Республики Беларусь.
220072, г. Минск, проспект Ф. Скорины, 66.
23
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
371 Кб
Теги
by3696, патент
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа