close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY3896

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
(19)
BY (11) 3896
(13)
C1
7
(51) C 12N 1/20,
(12)
A 23C 9/12
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ПАТЕНТНЫЙ
КОМИТЕТ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ
(54)
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СУХОГО КОНЦЕНТРАТА БИФИДОБАКТЕРИЙ
(21) Номер заявки: a 19990510
(22) 1999.05.19
(46) 2001.06.30
(71) Заявитель: Государственное
предприятие
институт "БелНИКТИММП" (BY)
(72) Авторы: Сафроненко Л.В., Ласковнева О.В.,
Жабанос Н.К. (BY)
(73) Патентообладатель: Государственное
предприятие институт "БелНИКТИММП" (BY)
(57)
Способ получения сухого концентрата бифидобактерий, предусматривающий глубинное периодическое
выращивание культуры бифидобактерий на питательной среде, отделение биомассы от культуральной жидкости, смешивание с защитной средой, замораживание и сушку сублимацией, отличающийся тем, что используют гидролизатно-молочную питательную среду, содержащую в качестве источника углерода лактозу,
в начале стационарной фазы роста бифидобактерий в среду культивирования дополнительно вносят лактозу до концентрации 0,5-1,0 об. %, при этом перемешивание осуществляют периодически при коррекции
активной кислотности в культуральной среде.
BY 3896 C1
(56)
RU 2005119 C1, 1993.
SU 1686718 A1, 1996.
RU 2104706 C1, 1998.
RU 2083666 C1, 1997.
Изобретение относится к молочной, пищевой, микробиологической промышленности и может быть
использовано при производстве бифидосодержащих продуктов лечебно-профилактического действия.
Известен способ получения биомассы бифидобактерий для производства бифидосодержащих препаратов
лечебно-профилактического действия, предусматривающий глубинное периодическое выращивание микроорганизмов в две стадии, где на первой стадии осуществляют поддержание источника углерода на постоянном уровне, а на второй стадии проводят снижение концентрации накопленных в процессе культивирования
метаболитов [1].
Задачей данного изобретения является увеличение содержания жизнеспособных клеток бифидобактерий
в сухом концентрате путем дополнительного внесения лактозы как источника углерода.
Поставленная задача достигается тем, что способ получения сухого концентрата бифидобактерий предусматривает приготовление гидролизатно-молочной среды, инокулирование чистыми культурами бифидобактерий, наращивание биомассы путем глубинного периодического культивирования при коррекции активной
кислотности в культуральной среде с внесением в начале стационарной фазы роста дополнительного источника углерода - лактозы в концентрации 0,5-1 % от объема культуральной среды, отделение биомассы от
культуральной жидкости, смешивание с защитной средой, замораживание и сушку сублимацией.
Так как в периодической культуре переход от экспоненциальной фазы роста к стационарной может вызываться нехваткой питательного компонента, поэтому при добавлении дополнительного источника углерода - лактозы (0,5-1) % рост культуры будет продолжаться. Поскольку бифидобактерии являются анаэробными культурами, перемешивание среды нежелательно вследствие растворения кислорода, поэтому
перемешивание осуществляется периодически при нейтрализации культуральной среды, кроме того вносятся
компоненты, снижающие редокс-потенциал и уменьшающие растворимость кислорода.
Способ осуществляется следующим образом.
BY 3896 C1
Выращивание клеток бифидобактерий проводят в ферментере на гидролизатно-молочной среде, содержащей гидролизованное панкреатином обезжиренное молоко - 50 %, пептон или дрожжевой автолизат 0,2-0,4 %, лактозу - 1,5 -2 %, NaCl - 0,15-0,2 %, цистеин - 0,01- 0,02 %, агар-агар 0,075 - 0,1 %, дистиллированная вода - 50 % в две стадии. На первой стадии в среду добавляют источник углерода, которым является
лактоза в концентрации (1 ± 0,2) %, и культивируют 18-20 ч. Нейтрализацию культуральной среды проводят, когда значение рН составляет (6,0 ± 0,2) до величины (6,7 ± 0,1) 40 % раствором NaOH при включенной мешалке 35 об/мин. После титрования перемешивание прекращают.
На второй стадии, когда скорость роста заметно снижается из-за исчерпания источника углерода, а этот
момент контролируется установлением постоянного значения рН в культуральной среде, вносят раствор лактозы до конечной концентрации в среде 0,5 - 1 %. Далее процесс наращивания биомассы ведут до полного
исчерпания лактозы (17 ± 2) ч, в конце культивирования доводят значение рН до (7,2 ± 0,2) и охлаждают до
температуры (10 ± 2)°C.
Отделение биомассы от культуральной жидкости производят на суперцентрифуге с числом оборотов в
минуту (17500 ± 1500). Полученную биомассу смешивают с защитной средой в соотношении 1:1, состоящую
из раствора 11 % сахарозы и 5 % раствора цитрата натрия.
Замораживание суспензии клеток бифидобактерий, разлитую тонким слоем (не более 0,5 см) в кюветы,
проводят до температуры минус (48 ± 2) °С в течение (4 ± 0,5) ч. После этого высушивают под вакуумом в
сублимационной сушилке (38 ± 2) ч до температуры (32 ± 2) °C. В 1 г сухого концентрата должно содержаться 1011-1012 жизнеспособных клеток бифидобактерий.
Пример 1.
В 35 л дистиллированной воды вносят 35 л гидролизованного панкреатином обезжиренного молока, 140 г
пептона, 140 г NaCl, 7 г цистеина, 70 г агар-агара, доводят рН до 6,9 40 % NaOH. Стерилизуют при 121 °С 90
мин, затем охлаждают до 37 °С, вносят предварительно простерилизованную при 115 °С 20 мин 40 % раствор лактозы до конечной ее концентрации в среде 1 %. Готовую среду инокулируют 10 % культуры Bifidobacterium adolescentis С 14. Первая нейтрализация культуральной среды происходит через 3,5 ч при значении
рН 6,0 до 6,7 при включенной мешалке (35 об/мин) 40 % NaOH. После нейтрализации мешалку отключают.
Коррекция активной кислотности происходит с периодичностью 40 мин и продолжается 19 ч.
На второй стадии, когда рН стабилизируется, вливают расчетное количество 40 % раствора лактозы до
концентрации в культуральной среде 1 % и выращивают клетки бифидобактерий до исчерпания источника
углерода. Охлаждают до 12 °C и центрифугируют при 17500 об/мин. Полученную биомассу смешивают с
защитной средой, состоящей из раствора - 11 % сахарозы и 5 % цитрата натрия, разливают тонким слоем в
стерильные кюветы и замораживают до минус 48 °C в течение 4 ч. Высушивают под вакуумом в сублимационной сушильной установке в течение 38 ч. В 1 г сухого концентрата содержится 1012 жизнеспособных клеток
бифидобактерий.
Пример 2.
В 35 л дистиллированной воды вносят 35 л гидролизованного панкреатином обезжиренного молока, 140 г
пептона, 140 г NaCl, 7 г цистеина,70 г агар-агара, доводят рН до 6,9 40 % NaOH. Стерилизуют при 121 °C 5
ч, затем охлаждают до 37,5 °С, вносят предварительно простерилизованную при 115 °С 20 мин 20 % лактозу
до конечной ее концентрации в среде 1 %. Готовую среду инокулируют 10 % культуры Bifidobacterium breve
Б10. Первая нейтрализация культуральной среды происходит через 4,5 ч при значении рН 6,2 до 6,7 при
включенной мешалке (35 об/мин) 40 % NaCl. После нейтрализации мешалку отключают. Коррекция активной кислотности происходит с периодичностью 45 мин и продолжается 20 ч.
На второй стадии, когда рН стабилизируется, вливают расчетное количество 40 % раствора лактозы до
концентрации в культуральной среде 1 % и выращивают клетки бифидобактерий до исчерпания источника углерода. Охлаждают до 12 °C и центрифугируют при 17500 об/мин. Полученную биомассу смешивают с защитной средой, состоящей из 11 % сахарозы и 5 % цитрата натрия, разливают тонким слоем в стерильные
кюветы и замораживают до (48 ± 2) °С в течение 4 ч. Высушивают под вакуумом в сублимационной сушильной установке в течение 40 ч. В 1 г сухого концентрата содержится 1011 жизнеспособных клеток бифидобактерий.
Пример 3.
Получение концентрата бифидобактерий осуществляется как в примере 1, только для инокулирования
используют культуру Bifidobacterium adolescentis Б37.
В 1 г сухого концентрата содержится 1011 жизнеспособных клеток бифидобактерий.
Государственный патентный комитет Республики Беларусь.
220072, г. Минск, проспект Ф. Скорины, 66.
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
112 Кб
Теги
патент, by3896
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа