close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY3957

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
(19)
BY (11) 3957
(13)
C1
7
(51) C 12N 15/12,
(12)
C 07K 14/47,
C 12P 21/02
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ПАТЕНТНЫЙ
КОМИТЕТ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ
(54)
ГОМОГЕННЫЙ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫЙ ЧЕЛОВЕЧЕСКИЙ
БЕЛОК ИЛИ ЕГО ФРАГМЕНТ
BY 3957 C1
(21) Номер заявки: 960690
(22) 1996.07.01
(31) 435,777; 484,629
(32) 1995.05.05, 1995.06.07
(33) US, US
(46) 2001.06.30
(71) Заявитель: Ф. ХОФМАН-ЛЯ РОШЕ АГ (CH)
(72) Авторы: Артур КЭМПФИЛД (US); Рене ДЕВО
(BE); Ив ГЮИЗЕ (BE)
(73) Патентообладатель: Ф. ХОФМАН-ЛЯ РОШЕ АГ
(CH)
(57)
1. Гомогенный биологически активный человеческий белок или его фрагмент, в котором упомянутый белок или фрагмент характеризуется рекомбинантным биологически активным человеческим или мышиным
противодействующим ожирению белком, свободным от белков или фрагмента белка других млекопитающих, причем фрагмент имеет биологическую активность упомянутого белка.
2. Белок по п. 1, в котором человеческий белок содержит SEQ ID NO: 6.
3. Белок по п. 1, в котором мышиный белок содержит SEQ ID NO: 3.
4. Последовательность оснований ДНК, содержащая первую и вторую часть, в которой а) первая
часть является последовательностью гена sOmpA SEQ ID NO: 7, кодирующей пептид sOmpA; и b) вторая
часть является нуклеотидной последовательностью, кодирующей мышиный оb-белок, или нуклеотидной последовательностью, кодирующей человеческий оb-белок.
5. Последовательность оснований ДНК по п. 4, в которой мышиный оb-белок содержит SEQ ID NO: 3.
6. Последовательность оснований ДНК по п. 4, в которой человеческий оb-белок содержит SEQ ID NO: 6.
7. Экспрессионный вектор, содержащий: а) промоторную последовательность и b) последовательность
оснований ДНК, кодирующую соединенный белок, причем соединенный белок содержит мышиный оb-белок
SEQ ID NO: 3 или человеческий оb-белок SEQ ID NO: 6 и маркерный пептид для белка А наружной мембраны E. coli, упомянутый экспрессионный вектор способный экспрессировать соединенный белок в клетках
хозяина Esherichia coli.
8. Экспрессионный вектор по п. 7, в котором промоторная последовательность состоит из las-промотораоператора и липопротеинового промотора.
9. Способ получения биологически активного рекомбинантного человеческого или мышиного противодействующего ожирению белка, свободного от белков других млекопитающих, содержащий этапы: а) конструирование экспрессионного вектора, имеющего промоторную последовательность и последовательность
оснований ДНК, кодирующую соединенный белок, причем этот соединенный белок содержит SEQ ID NO: 3
или SEQ ID NO: 6 и маркерный пептид для белка А наружной мембраны Е. coli; b) введение экспрессионного вектора в клетку хозяина Е. coli, для трансформирования клетки хозяина Е. coli; с) экспрессирование соединенного белка в клетке хозяина Е. coli; d) обработку клетки хозяина Е. coli буфером холодового осмотического шока, для выделения в свободном состоянии мышиного или человеческого оb-белка, свободного от
белков других млекопитающих и свободного от маркерного пептида.
10. Способ по п. 9, включающий в себя обработку осмотической жидкости, содержащей человеческий
или мышиный противодействующий ожирению белок, сочетанием анионообменной колоночной хроматографии, колоночной хроматографии с гидрофобным взаимодействием и гель-фильтрации.
BY 3957 C1
11. Соединенный белок, содержащий мышиный противодействующий ожирению белок или человеческий
противодействующий ожирению белок, и маркерный пептид для белка А наружной мембраны Esherichia coli.
12. Соединенный белок по п. 11, в котором мышиный противодействующий ожирению белок содержит
SEQ ID NO: 3 и в котором человеческий противодействующий ожирению белок содержит SEQ ID NO: 6.
13. Композиция, содержащая одно или несколько соединений полиэтиленгликоля и/или полипропиленгликоля с человеческим или мышиным оb-белком по пп. 1-3, причем средняя молекулярная масса полиэтилен- или полипропиленгликолевых звеньев в упомянутых соединениях в пределах этой композиции находится между 15 кДа и 60 кДа.
14. Композиция по п. 13, содержащая одно или несколько соединений с формулой:
, IA
в которой P означает человеческий или мышиный оb-белок по пп. 1-6, n и n' являются целыми числами, сумма которых составляет от 300 до 1500, средняя молекулярная масса полиэтиленгликолевых звеньев в упомянутых соединениях в пределах упомянутой композиции составляет от 15 кДа до 60 кДа, a R и R' являются
низшими алкилами.
15. Композиция по п. 14, в которой сумма n и n' составляет от 800 до 1200, а средняя молекулярная масса
полиэтиленгликолевых звеньев в упомянутом соединении в пределах упомянутой композиции составляет от
35 до 45 кДа.
16. Композиция по п. 13, содержащая одно или несколько соединений с формулой:
, IB
в которой P означает человеческий или мышиный оb-белок по пп. 1-6, n является целым числом, имеющим
сумму от 300 до 1500, средняя молекулярная масса полиэтиленгликолевых звеньев в упомянутых соединениях в пределах упомянутой композиции составляет от 15 кДа до 60 кДа, а R является низшим алкилом.
17. Композиция по п. 16, в которой n имеет величину от 850 до 1000, а средняя молекулярная масса полиэтиленгликолевых звеньев в упомянутых соединениях в пределах упомянутой композиции составляет от 35
до 45 кДа.
(56)
Новое в клонировании ДНК. Методы. - М.: Мир, 1989. - С. 96.
2
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
3 418 Кб
Теги
by3957, патент
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа