close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY4245

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
(19)
BY (11) 4245
(13)
C1
(51)7
(12)
C 07H 15/252,
A 61K 31/704,
A 61P 35/00
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ПАТЕНТНЫЙ
КОМИТЕТ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ
(54)
ПРОИЗВОДНЫЕ 3'-АЗИРИДИНОАНТРАЦИКЛИНА, СПОСОБЫ
ПОЛУЧЕНИЯ, ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ
(71) Заявитель: Фармация С. п. А. (IT)
(72) Авторы: БАРДЖОТТИ Альберто, КАРУЗО
Микеле, ГРАНДИ Мария, РИПАМОНТИ
Марина, СУАРАТО Антонино (IT)
(73) Патентообладатель: Фармация С. п. А. (IT)
(21) Номер заявки: 950553
(22) 1995.08.08
(86) РСТ/ЕР 94/03840, 1994.11.21
(31) 9325417.5
(32) 1993.12.13
(33) GB
(46) 2001.12.30
(57)
1. Производные 3′-азиридиноантрациклина, которые представляют собой антрациклиновые гликозиды
формулы 2:
O
OH
O
R2
OH
R1
O
OH
O
,
(2)
O
R4
R3 N
где R1 - водород или метоксигруппа;
R2 - водород, гидроксигруппа или ацилоксиостаток формулы 3:
-О-СOR5,
(3)
где R - пиридил;
R3 и R4 оба представляют водород или один из R3 и R4 представляет водород, а другой представляет гидроксигруппу, йод или группу формулы -OSO2CH3,
или их фармацевтически приемлемые соли.
2. Соединение по п. 1, выбранное из группы, включающей
3'-деамино-3'-(1-азиридинил)-4'-0-метансульфонилдаунорубицин;
4-деметокси-3'-деамино-3'-(1-азиридинил)-4'-0-метансульфонилдаунорубицин;
3'-деамино-3'-(1-азиридинил)-даунорубицин;
4-деметокси-3'-деамино-3'-(1-азиридинил)-даунорубицин;
3'-деамино-3'-(1-азиридинил)-4'-0-метансульфонил-14-никотинатдоксорубицин;
3'-деамино-3'-(1-азиридинил)-14-никотинатдоксорубицин;
3'-деамино-3'-(1-азиридинил)-4'-0-метансульфонилдоксорубицин;
4-деметокси-3'-деамино-3'-(1-азиридинил)-4'-0-метансульфонилдоксорубицин;
3'-деамино-3'-(1-азиридинил)-доксорубицин;
4-деметокси-3'-деамино-3'-(1-азиридинил)-доксорубицин;
3'-деамино-3'-(1-азиридинил)-4'-йододоксорубицин;
3'-деамино-3'-(1-азиридинил)-4'-деоксидоксорубицин.
5
BY 4245 C1
3.Соединение
по
п. 1,
которое
представляет
собой
3'-деамино-3'-(1-азиридинил)-4'-0метансульфонилдаунорубицин, 4-деметокси-3'-деамино-3'-(1-азиридинил)-4'-0-метансульфонилдаунорубицин
или 3'-деамино-3'-(1-азиридинил)-4'-0-метансульфонил-14-никотинатдоксорубицин.
4. Антрациклиновый гликозид формулы 2 или его фармацевтически приемлемая соль по п. 1, обладающие противоопухолевой активностью.
5. Способ получения антрациклинового гликозида формулы 2 или его фармацевтически приемлемой соли
по п. 1, включающий обработку антрациклинового гликозида общей формулы 6:
O
OH
O
R2
OH
R1
O
O
OH
,
R
(6)
O
4
R 3 NH
R9
где R1, R2, R3, R4 имеют значения, указанные в п. 1, и R9 - гидроксигруппа или атом галогена, растворенного
в безводном полярном органическом растворителе, который представляет собой сухой метиленхлорид, метанол или их смесь в объемном соотношении 1:1 - 1:3, при перемешивании при температуре 0-30 °С от 15
минут до 2 часов силикагелем, и, при желании, превращение полученного таким образом антрациклинового
гликозида формулы 2 в его фармацевтически приемлемую соль.
6. Способ по п. 5, отличающийся тем, что размеры частиц силикагеля находятся в интервале от 230 до
400 меш.
7. Способ получения антрациклинового гликозида формулы 2 или его фармацевтически приемлемой соли
по п. 1, включающий взаимодействие производного формулы 5:
O
OH
O
Br
OH
R1
O
OH
,
O
(5)
O
R4
R
3
N
где R1, R3, R4 имеют значения, указанные в п. 1,
с производным соли формулы 3'
Х+ -OCOR5 ,
(3′)
где R5 имеет значение, указанное в п. 1.
8. Фармацевтическая композиция, обладающая противоопухолевой активностью, содержащая активный
агент и фармацевтически приемлемый разбавитель или носитель, отличающаяся тем, что в качестве активного агента она содержит антрациклиновый гликозид формулы 2 или его фармацевтически приемлемую
соль по п. 1 в эффективном количестве.
(56)
WO 93/01201 A1.
SU 1450749 A3, 1989.
US 4789665 A, 1988.
Настоящее изобретение относится к новым антрациклиновым гликозидам, которые обладают противоопухолевой активностью, к способам их получения и к содержащим их фармацевтическим композициям.
2
BY 4245 C1
В настоящем изобретении предложены антрациклиновые гликозиды, родственные даунорубицину и доксорубицину, в которых 3'-аминогруппа сахарного остатка замкнута в азиридиновое кольцо, и необязательно
гидроксигруппа у C-4' сахара может быть защищена в форме сульфоната. В настоящем изобретении предложены также их растворимые в воде производные и фармацевтически приемлемые соли присоединения кислот.
В настоящем изобретении предложено соединение, которое является антрациклиновым гликозидом формулы 1 или 2:
O
OH
O
OH
R1
O
OH
,
O
(1)
O
R4
R3 N
O
OH
O
R2
OH
R1
O
OH
,
O
(2)
O
R4
R3 N
где R1 представляет водород или метоксигруппу; R2 представляет водород, гидроксигруппу или представляет
ацилоксиостаток формулы 3:
-O-COR5,
5
(3)
где R представляет линейный или разветвленный C-C алкил, моно- или бициклический арил, предпочтительно фенил, или гетеро-, моно- или бициклическое кольцо, предпочтительно пиридил, причем каждая из
групп может быть необязательно замещена (a) аминогруппой -NR6R7, где R6 и R7 независимо представляют
водород или C1-C4 алкил, или (b) карбоксигруппой; R3 и R4 оба представляют водород или один из R3 и R4
представляет водород, а другой представляет гидроксигруппу или группу формулы -OSO2R8, где R8 может
быть линейной или разветвленной алкильной группой, содержащей от 1 до 6 атомов углерода, например, от
1 до 4 атомов углерода; R8 может представлять, в частности, метил, этил, н-пропил или изопропил.
В другом варианте R8 может представлять арильную группу, такую как фенил, незамещенный или замещенный 1-3 заместителями, каждый из которых может быть независимо линейной или разветвленной алкильной или алкоксигруппой, содержащей от 1 до 6 атомов углерода, например 1-3 атома углерода, атомом
галоида или нитрогруппой. Примеры атомов галоида включают фтор, хлор, бром и йод, предпочтительно
фтор или хлор, более предпочтительно хлор.
В настоящем изобретении арильная группа представляет моноциклический или бициклический ароматический углеводород, содержащий от 6 до 10 атомов углерода, например фенил или нафтил. Гетероциклическое кольцо представляет 5- или 6-членное насыщенное или ненасыщенное гетероциклическое кольцо, содержащее, по крайней мере, один гетероатом, выбранный из O, S и N, которое необязательно
конденсировано со второй 5- или 6-членной насыщенной и ненасыщенной гетероциклической группой.
Примеры насыщенных и ненасыщенных гетероциклических колец включают пиразолильное, имидазолильное, пиридильное, пиразильное, пиримидильное, пиридазинильное, морфолино, тилморфолино, фурильное и тиенильное кольца.
Предпочтительно, чтобы R2 представлял гидрокси- или O-никотинил, R3 представлял гидрокси- или OSO2R8, где R8 представлял бы C1-C4 алкил, а R4 представлял бы водород.
Примеры соединений настоящего изобретения включают:
(1a) 3'-диамино-3'-[1-азиридинил]-4-O-метансульфонил-даунорубицин (R1 = OCH, R4 = H, R3 = OSO2CH3);
(1b) 4-деметокси-3'-деамино-3'-[1-азиридинил]-4'-O-метансульфонил-даунорубицин (R1 = R4 = H, R3 = OSO2CH3);
3
BY 4245 C1
(1c) 3'-деамино-3'-[1-азиридинил]-даунорубицин (R1 = OCH3, R4 = H, R3 = OH);
(1d) 4-деметокси-3'-деамино-3'-[1-азиридинил]-даунорубицин (R1 = R4 = H, R = OH);
(2a) 3'-деамино-3'-[1-азиридинил]-4'-O-метансульфонил-14-никотинат-даунорубицин (R1 = OCH3,
R2 = O4
3
никотинил, R = H, R = OSO2CH3);
(2b) 3'-деамино-3'-[1-азиридинил]-14-никотинат-доксорубицин (R1 = OCH3, R2 = O-никотиноил, R4 = H,
3
R = OH);
(2c) 3'-деамино-3'-[1-азиридинил]-4'-O-метансульфонил-доксорубицин (R1 = OCH3, R2 = OH, R4 = H,
3
R = OSO2CH3);
(2d) 4-деметокси-3'-деамино-3'-[1-азиридинил]-4'-O-метансульфонил-доксорубицин (R1 = R4 = H, R2 = OH,
3
R = OSO2CH3)3;
(2e) 3'-деамино-3'-[1-азиридинил]-доксорубицин (R1 = OCH3, R4 = H, R2 = R3 = OH);
(2f) 4-деметокси-3'-деамино-3'-[1-азиридинил]-доксорубицин (R1 = R4 = H, R2 = R3 = OH);
(2g) 3'-деамино-3'-[1-азиридинил]-4'-йододоксорубицин (R1 = OCH3, R2 = OH, R4 = H, R3 = 1);
(2h) 3'-деамино-3'-[1-азиридинил]-4'-деоксидоксорубицин (R1 = OCH3, R2 = OH, R3 = R4 = H)
и такие их фармацевтически приемлемые соли, как соли хлористоводородной кислоты (соляной кислоты).
Далее, в настоящем изобретении предложен способ получения азиридиноантрациклинового гликозида
формулы 1 или 2, как указано ранее, или его фармацевтически приемлемой соли, который включает:
(a) превращение антрациклина общей формулы 4:
O
OH
O
OH
R1
O
(4)
,
O
OH
O
R4
R 3 NH
R9
где R1, R3 и R4 имеют указанные ранее значения, а R9 представляет сульфонатную группу или атом галоида,
предпочтительно атом хлора, в антрациклин формулы 1, причем соединение формулы 4, предпочтительно
растворяют в безводном органическом растворителе в присутствии безводной соли щелочного металла и
мягкого основания; и, при желании,
(b) гидролиз производного формулы 5:
O
OH
O
Br
OH
R1
O
OH
,
O
(5)
O
R4
R3 N
где R1, R3, R4 имеют указанные ранее значения (которое можно получить из соединения формулы 1 по способу, описанному в патенте США № 3803124) до получения азиридино-антрациклинового производного
формулы 2, где R2 представляет гидроксильную группу; и, при желании,
(c) осуществление взаимодействия соединения формулы 5, как определено ранее, с солью производного
формулы 3'
X+ -OCOR5 ,
(3')
где R5 имеет указанные ранее значения, при условии, что R5 не представляет остатка, содержащего первичную аминогруппу, a X+ представляет ион, предпочтительно ион натрия или калия, и, при желании, превращение полученного таким образом соединения формулы 2 в его фармацевтически приемлемую соль; или
(d) осуществление взаимодействия соединения формулы 5, как определено ранее, с солью производного
формулы 3', где R5 представляет первичную аминогруппу, защищенную чувствительной к кислоте защитной
4
BY 4245 C1
группой, с последующим удалением защитной группы, и, при желании, превращение полученного таким образом соединения формулы 2 в его фармацевтически приемлемую соль.
В настоящем изобретении предложен другой способ получения азиридиноантрациклинового гликозида
формулы 2, как определено ранее, или его фармацевтически приемлемой соли, который включает:
(a) обработку атрациклина общей формулы 6:
O
OH
O
R2
OH
R1
O
O
OH
,
(6)
O
R4
R 3 NH
R9
где R1, R2, R3, R4 и R9 имеют указанные ранее значения (такие соединения были раскрыты также в WO
93/01201), силикагелем, и, при желании, превращение полученного таким образом соединения формулы 2, в
его фармацевтически приемлемую соль.
Следует отметить, что антрациклины формулы 4 или 6 также могут образовывать азиридиновое кольцо,
если их обработать силикагелем. Для такой обработки можно использовать мягкие условия, что позволяет
получать соединения формулы 2, исходя из чувствительных к основаниям сложноэфирных производных, таких как те, которые имеют формулу 6.
В соответствии со способом настоящего изобретения предпочтительные условия реакции получения азиридиноантрациклинов формулы 1 включают растворение соединения формулы 4, как было определено ранее, в безводном органическом растворителе, таком как безводный метиленхлорид, в присутствии безводной
щелочной соли металла, например безводного карбоната или бикарбоната натрия или калия, при перемешивании при температуре от 0 до 30 °С, предпочтительно при комнатной температуре, и в течение от 15 минут
до 2 часов, предпочтительно около 30 минут.
В другом способе соединения формулы 4 растворяют в смеси таких органических растворителей, как сухой метиленхлорид и метанол, в соотношении от 1:1 до 1:3 по объему, затем этот раствор обрабатывают силикагелем, предпочтительно 230-400 мешей, при перемешивании при температуре от 0 до 30 °С, предпочтительно при комнатной температуре, в течение промежутка времени от 15 минут до 2 часов, предпочтительно
около 30 минут.
В аналогичном процессе условия реакции для превращения соединений формулы 6, как определено ранее, в азиридиноатрациклины формулы 2, предпочтительно включают растворение соединений формулы 6 в
безводном органическом растворителе, например в сухом метиленхлориде и метаноле, и обработку полученного раствора силикагелем, предпочтительно, 230-400 мешей, при перемешивании при температуре от
0 до 30 °С, предпочтительно при комнатной температуре, в течение промежутка времени от 15 минут до 2
часов, предпочтительно в течение около 30 минут.
Такой полярный растворитель, как метанол, в способе обработки силикагелем используют для удаления
антрациклина из силикагеля.
В другом способе получения азиридиноантрациклинового гликозида формулы 2 или его фармацевтически приемлемой соли, где R2 представляет группу формулы 3, в которой R5 не представляет остатка, содержащего первичную аминогруппу, предпочтительные условия реакции включают осуществление взаимодействия соединения формулы 5 с производным соли кислоты формулы 3', как было определено ранее, в
безводном полярном растворителе, предпочтительно ацетоне или диметилформамиде, при температуре от 20
до 60 °С, предпочтительно при комнатной температуре, в течение от 4 до 15 часов, предпочтительно от 5 до
12 часов.
Условия реакции для получения азиридиноантрациклинового гликозида общей формулы 2, где R2 представляет группу формулы 3, в которой R5 представляет первичную аминогруппу, включают осуществление
взаимодействия соединений формулы 5, как было определено ранее, с производным соли кислоты формулы
3', в которой аминогруппа защищена группой, чувствительной к кислоте, например аминогруппа, защищена
Шиффовым основанием, в полярном растворителе, таком как ацетон или диметилформамид, при температуре от 20 до 60 °C, предпочтительно при комнатной температуре, в течение от 4 до 15 часов, предпочтительно
от 5 до 12 часов, затем полученное N-защищенное-сложноэфирное производное деблокируют, растворяя его,
например, в метиленхлориде, и добавляя дистиллированную воду и водную соляную кислоту, предпочтительно примерно такой же объем воды, что и метиленхлорида, а соляную кислоту в количестве, соответст5
BY 4245 C1
вующем примерно трем эквивалентам 0,1 н HCl. Полученную смесь интенсивно перемешивают при температуре от 0 до 20 °C, предпочтительно около 15 °C, в течение промежутка времени от 30 минут до 2 часов,
предпочтительно от 45 до 90 минут, выделяют и водную фазу сушат вымораживанием до получения растворимой соли соляной кислоты C-15 сложноэфирного производного формулы 2. Предпочтительно защищать
первичную аминогруппу группой метилендифенила.
В следующем аспекте в настоящем изобретении предложены фармацевтические композиции, содержащие антрациклиновый гликозид формулы 1 или 2, или его фармацевтически приемлемую соль в сочетании с
фармацевтически приемлемым разбавителем или носителем.
Можно использовать обычные носители разбавители. Композиции можно выполнять и вводить обычными способами.
Подходящие способы введения включают парэнтеральное введение. Для парэнтерального введения жидкую композицию можно приготовить, используя активное соединение и стерильный разбавитель или носитель, в котором активное соединение либо может раствориться, либо в нем получают его суспензию. Парэнтеральную композицию можно приготовить в форме стерильного твердого вещества, которое необходимо
снова растворить перед употреблением в таком подходящем носителе, как физиологический раствор, стерильная вода или другие стерильные носители.
Соединения настоящего изобретения пригодны для терапевтического лечения организмов человека и животных. Они полезны как противоопухолевые агенты, особенно для лечения лейкемии или аденокарциномы
толстой кишки. Терапевтически эффективное количество соединения вводят пациенту, у которого имеется
опухоль, для улучшения состояния пациента. Можно вводить такое количество соединения, которого достаточно для ингибирования роста опухоли.
Вводимые дозы можно оценить, зная интервалы доз для доксорубицина и даунорубицина, модифицированные относительно активности, демонстрируемой соединениями настоящего изобретения в тестах против
опухолей ин витро и ин виво. Обычно подходящие дозы попадают в интервал от 1 до 200 мг/м2 площади поверхности тела, предпочтительно от 1 до 100 мг/м2, в зависимости от характера и степени серьезности заболевания, которое нужно лечить, и от общего состояния пациента.
Нижеследующие примеры иллюстрируют изобретение.
Пример 1.
Получение 3'-деамино-3'-[1-азиридинил]-4'-O-метансульфонилдаунорубицина.
(R1 = OCH3, R4 = H, R3 = OSO2CH3).
3'-N-(2-хлорэтил)-4'-O-метансульфонилдаунорубицин (4a, R1 = OCH3, R4 = H, R3 = OSO2CH3, R9 = Cl) (0,33 г,
0,05 ммоля), полученный по способу WO/93/012001, растворяют в смеси 10 мл безводного метиленхлорида
и 20 мл метанола и перемешивают с силикагелем (Мегск, 200-400 мешей, 2 г) при комнатной температуре
в течение 30 минут. Полученный раствор фильтруют, концентрируют досуха и сырой материал обрабатывают с помощью флешхроматографии на колонке с силикагелем, используя в качестве элюента смесь метиленхлорида и метанола (95:5 по объему), до получения указанного в заглавии соединения 1а (выход 0,22 г).
ТСХ на пластинах Kieselgel F254 (Мегск) с использованием в качестве элюента системы метиленхлорид:метанол (98:2 по объему) дает Rf = 0,65. Масс-спектр с полевой десорбцией: м/z [M+] 631.
2H-ЯМР (400 МгГц, CDCl) δ: 1,16, 1,25 (м, 2H, водороды азиридина); 1,36 (д, J = 6,5 Гц, 3H, CH3-5');
1,52 (м, 1H, H-3'); 1,73 (v, 2H, водороды азиридина); 1,80 (м, 1H, H-2'экв); 2,09 (м, 1H, H-2'акс.); 2,12
(м, 1H, H-8 акс); 2,31 (м, 1H, H-8экв); 2,39 (с, 3H, COCH 3 ); 2,98 (д, J = 19,2 Гц, 1H, H-10 акс.); 3,21 (дд,
J = 1,7, 19,2 Гц, 1H, H-10 экв); 3,22 (с, 3H, CH3SO2); 4,09 (кв, J = 6,4 Гц, 1H, H-5'); 4,10 (с, 3H, ОCH3); 4,44 (с, 1H,
ОH-9); 4,75 (с, 1H, H-4'); 5,28 (м, 1H, H-7); 5,55 (д, J = 3,4 Гц, 1H, H-1'); 7,41 (д, J = 8,1 Гц, 1H, H-3); 7,80 (дд,
J = 7,7, 8,1 Гц, 1H-H-2); 8,05 (д, J = 7,7 Гц, 1H, H-1); 13,30 (с, 1H, OH-11); 14,00 (с, 1H, OH-6).
Пример 2.
Получение 4-деметокси-3'-деамино-3'-[1-азиридинил]-4'-O-метансульфонилдаунорубицина.
(1b: R1 = R4 = H, R3 = OSO2CH3).
4-деметокси-N-(2-гидроксиэтил)даунорубицин (4b: R1-R4 = H, R3 = OSO2CH3, R9 = OH, 0,3 г, 0,5 ммоля)
растворяют в смеси метиленхлорида (10 мл) и метанола (5 мл) и встряхивают при комнатной температуре с
3 г силикагеля в течение 30 минут. Затем органический раствор отфильтровывают, а растворитель удаляют
при пониженном давлении. Остаток обрабатывают с помощью флеш-хроматографии на колонке с силикагелем, используя в качестве системы элюента смесь метиленхлорида и метанола (95:5 по объему), до получения указанного в заглавии соединения 1b (0,18 г). ТСХ на пластинах Kieselgel F254 (Мегск) с использованием в качестве элюирующей системы метиленхлорида и метанола (20:1 по объему) дает Rf = 0,42.
Масс-спектр с полевой десорбцией: m/z (M+) 601.
Пример 3.
Получение 3'-деамино-3'-[1-азиридинил]-4'-O-метансульфонил-14-никотинатдоксорубицина.
(2a: R1 = OCH3, R2 = O-никотиноил, R4 = H, R3 = OSO2CH3).
3'-деамино-3'-[1-азиридинил]-4-O-метансульфонилдаунорубицин(1a, 0,63 г, 1 ммоль), полученный по
способу примера 1, растворяют в смеси 6 мл безводного метанола и 13 мл диоксана, добавляют 0,5 мл эти6
BY 4245 C1
лортоформата и затем полученную смесь обрабатывают раствором брома (1 г) в 5 мл безводного метиленхлорида при 10 °C в течение 1,5 часов. Затем реакционную смесь осаждают смесью этилового эфира (100
мл) и петролейного эфира (50 мл). Осадок собирают и снова растворяют в смеси ацетона (15 мл) и 0,25 н.
водного бромистого водорода (15 мл). Полученную смесь выдерживают при 30 °C в течение 20 часов, затем
экстрагируют H-бутанолом (50 мл). Органический растворитель удаляют при пониженном давлении, а остаток, растворенный в сухом ацетоне (200 мл), обрабатывают никотинатом калия (2 г) при кипении с обратным
холодильником в течение часа. Растворитель удаляют при пониженном давлении, а сырой материал обрабатывают хроматографически на колонке с силикагелем, используя в качестве элюирующей системы смесь метиленхлорида и метанола (95:5 по объему) до получения указанного в заглавии соединения 2a (0,35 г). Т.
плавления 148-149 °C (с разложением).
ТСХ на пластинах Kieselgel F254 (Мегск) с использованием в качестве элюирующей системы метиленхлорида и метанола (10:1 по объему) дает Rf = 0,37.
Масс-спектр с полевой десорбцией: m/z (M+) 752.
Пример 4.
Получение 3'-деамино-3'-[1-азиридинил]-4'-O-метансульфонилдоксорубицина.
(2c: R1 = OCH3, R2 = OH, R4 = H, R3 = OSO2CH3).
3'-N-(2-хлорэтил)-4'-метансульфонилдоксорубицин (6a: R 1 -OCH 3 , R 2 = OH, R 9 = Cl, R3 = OSO2CH3,
4
R = H), полученный по способу патента Великобритании 9114549, превращают в указанное в заглавии соединение 2c по способу примера 1. ТСХ на пластинах Kieselgel F254 (Мегск) с использованием в качестве
элюирующей системы метиленхлорида и ацетона (8:2 по объему) дает Rf = 0,35.
Масс-спектр с полевой десорбцией: m/z (M+) 647.
Пример 5.
Получение 3'-деамино-3'-[1-азиридинил]-4'-йододоксорубицина.
(2g: R1 = OCH3, R2 = OH, R4 = H, R3 = 1).
3'-N-(2-хлорэтил)-4'-йододоксорубицин (6b: R1 = OCH3, R2 = OH, R9 = Cl, R3 = 1, R4 = H), полученный по
способу патента Великобритании 9114549, превращают в указанное в заглавии соединение 2g по способу
примера 1. ТСХ на пластинах Kieselgel F254 (Мегск) с использованием в качестве элюирующей системы метиленхлорида и ацетона (9:1 по объему) дает Rf = 0,45.
Масс-спектр с полевой десорбцией: m/z (M+) 679.
Пример 6.
Получение 3'-деамино-3'-[1-азиридинил]-4'-деоксидоксорубицина.
(2h: R1 = OCH3, R2 = OH, R3 = R4 = H).
3'-N-(2-хлорэтил)-4'-деоксидоксорубицин (6c: R1 = OCH3, R2 = OH, R9 = Cl, R3 = R4 = H), полученный по
способу патента Великобритании 9114549, превращают в указанное в заглавии соединение 2h по способу
примера 1. ТСХ на пластинах Kieselgel F245 (Мегск) с использованием в качестве элюирующей системы метиленхлорида и ацетона (20:1 по объему) дает Rf = 0,33.
Масс-спектр с полевой десорбцией: m/z (M+) 553.
Биологическая активность
3'-деамино-3'-[1-азиридинил]-4'-O-метансульфонилдаунорубицин (1a),
4-деметокси-3'-деамино-3'-[1-азиридинил]-4'-O-метансульфонилдаунорубицин (1b),
3'-деамино-3'-[1-азиридинил]-4'-O-метансульфонил-14-никотинатдоксорубицин (2a) и
3'-деамино-3'-[1-азиридинил]-4'-O-метансульфонилдоксорубицин (2c), были тестированы ин витро на
двух человеческих клеточных линиях, LoVo (аденокарцинома ободочной кишки человека) и LoVo/DX (аденокарцинома, устойчивая к доксорубицину), в сравнении с доксорубицином.
Цитотоксическая активность приводится в виде ИК50, т.е. концентрация, ингибирующая 50 % образования колоний, рассчитываемая на основании кривых концентрация-реакция. Показателем устойчивости R.J.
является отношение ИК50 для устойчивых клеток к ИК50 для чувствительных клеток. Соединения 1a, 1b, 2a и
2c демонстрируют высокую активность против обеих клеточных линий и низкий показатель устойчивости
(табл. 1).
Соединения 1a, 1b, 2a и 2c оценивали также ин виво против P388 мышиной лейкимии, устойчивой к доксорубицину (105 клеток/мышь трансплантируют внутривенно мышам BD2F1) в сравнении с доксорубицином.
Соединения 1a, 1b, 2a и 2c демонстрируют также поразительно более высокую активность, чем доксорубицин (табл. 2).
Животные.
Для оценки противоопухолевой активности использовались инбредные DBA/2 и C57BI/6, гибридные
C57BL/6×DBA/2 (B6D2F1) и BALB/c×DBA/2 (CD2F1) взрослые самки мыши. Животным было по 2-3 месяца, их вес составлял 20-22 г, содержались в обычных лабораторных условиях. В экспериментах с ксенотрансплантатом опухоли человека использовали швейцарских мышей Nu/Nu в возрасте 4-6 недель, весом
7
BY 4245 C1
20-25 г, которых содержали в клетках с подстилкой из фильтровальной бумаги; корм и подстилку стерилизовали, а воду подкисляли. Колонию мышей подвергали обычному тестированию на отсутствие антител к ряду
патогенов, включая гепатит мышей, вирус Сендай и Mycoplasma pulmonis. Всех животных поставляли Charles River (Calco, Como, Italy) и Harlan Nossan (Correzzana, Milano, Italy).
Лейкозы.
Сублинию P388/DX Johnson поддерживали посредством еженедельных и/п пассажей на мышах BD2F1 в
дозе 106 клеток на мышь. В эксперименте мышам той же линии инъецировали по 105 клеток в/в.
Лейкоз мышей L1210 (первоначально полученный из NCl) и сублинии, резистентные к L-PAM (L1210/LPAM, первоначально полученный из NCl), к cDDP (L1210/cDDF, первоначально полученный из NCl) и к DX
(L1210/DX) поддерживали посредством еженедельных и/п пассажей на мышах DBA/2N в дозе 106 клеток на
мышь.
Животных с резистентными опухолями лечили следующим образом:
мышам L1210/L-PAM вводили и/п 7,5 мг/кг L-PAM через 48 часов после трансплантации опухоли,
мышам L1210/cDDP вводили и/п 5 мг/кг цисплатина через 96 часов после трансплантации опухоли,
мышам L1210/DX вводили и/п 6 мг/кг DX через 48 часов после трансплантации опухоли.
В эксперименте мышам CD1F1 в/в инъецировали по 105 клеток.
Солидные опухоли человека.
Карциному молочной железы MX1 (первоначально полученную из Национального института рака [NCI],
NHI, Bethesda, MD), карциномы яичника A2780 (любезно представленные д-ром Ozols, Национальный институт рака, NHI, Bethesda, MD) и H207 (первоначально полученную из каталога ATCC) и мелкоклеточную
карциному легких N592 трансплантировали п/к бестимусным мышам, используя 15-20 мг опухолевой взвеси.
Для экспериментов опухоли вырезали и их фрагменты имплантировали п/к в область левого бока.
Введение лекарственных препаратов.
Все лекарственные растворы приготавливали непосредственно перед употреблением. Растворы вводили в/в в
объеме 10 мг/кг веса тела. Схемы лечения представлены в каждой таблице (3, 4).
Оценка противоопухолевой активности и токсичности.
В экспериментах с моделями лейкозов активность лекарственных препаратов определяли путем сравнения медианы срока выживания (MCB) в экспериментальной группе с тем же показателем в контрольной
группе, и результаты, выраженные как УПЖ %, были следующими:
 ÌÑÂ â ýêñïåðèìåíòàëüíîéãðóïïå
 × 100 − 100.
ÓÏÆ % = 
ÌÑÂ â êîíòðîëüíîé ãðóïïå


Количество выживших в течение длительного времени (ВДВ) относится к мышам, которые выжили в течение периода времени более 60 дней со дня имплантации опухоли.
В экспериментах с солидными опухолями активность оценивалась как ингибирование роста опухоли через неделю после последнего введения лекарственного препарата. Рост опухоли оценивали с помощью
кронциркуля: фиксировали два диаметра и рассчитывали вес опухоли по следующей формуле: d2×D/2 (где
d = меньшему диаме тру, D = большему диаметру). Ингибирование роста опухоли (ИРО %) рассчитывали
согласно уравнению:
ñðåäíèéâåñîïóõîëè
ÈÐÎ % =
â ýêñïåðèìåíòàëüíîéãðóïïå
× 100.
ñðåäíèéâåñîïóõîëè
â êîíòðîëüíîé ãðóïïå
В экспериментах с солидными опухолями человека излеченными считались мыши, не имевшие опухоли
спустя 30 дней после ее имплантации.
Токсичность оценивалась на основании макроскопических находок при вскрытии и потери веса.
Фармацевтически приемлемая композиция.
Для приготовления соединений для инъекций применяли следующую процедуру.
Соединение 1b (2 мг) растворяли в 1 мл смеси кремофора и этанола 65:5 (по объему) при встряхивании,
затем добавляли физиологический раствор (4 мл) и раствор встряхивали в течение 2 минут.
8
BY 4245 C1
Таблица 1
Цитотоксическая активность in vitro (IC50) соединений 1à, 1в, 2а, 2ñ на LoVo и LoVo/DX
клетках по сравнению с активностью доксорубицина
ИК50 (нг/мл)(1)
Соединение
LoVo
13
27
14
2,7
82,5
1а
1в
2a
2с
доксорубицин
R.J.(2)
1,7
0,9
2,9
9,2
60,3
LoVo/DX
22
26
40
24
4975
Анализ колоний: 4 часа обработки.
(1) IC50 = концентрация, ингибирующая 50 % образования колоний.
(2) R.J. = показатель устойчивости = (IC50 LoVo/DX)/(ИК50 LoVo).
Таблица 2
Противоопухолевая активность соединений 1à, 1в, 2а, 2ñ против лейкемии
P388/DX по сравнению с доксорубицином
Соединение
ОД(1) (мг/кг)
Т/С(2) %
1а
1в
2a
2с
доксорубицин
2,2
3,8
2,5
1,8
16,9
190
240
200
195
106
Соединения суспендируют в Твин 80 (10 %) и вводят внутривенно через день после трансплантации опухоли.
(1) ОД = оптимальная доза.
(2) Среднее время выживания обработанных мышей/cpeднee время выживания контрольных ×100.
Таблица 3
Противоопухолевая активность 4-деметокси-3'-дезамино-3'[1-азиридинил]-4'-О-метансульфонил даунорубицина (1b) и 3'-дезамино-3'[1-азиридинил]-4'-О-метансульфонил доксорубицина (2с)
в отношении чувствительных и резистентных мышиных лейкозов
Опухоль1
P388/DX
L1210
L1210/L-PAM
L1210/cDDP
L1210/DX
2c
1b
2
3
ОД (мг/кг/день)
3,8
3,8
3,8
3,8
3,8
УПЖ %
1044
101
71
48
66
2
ОД (мг/кг/день)
1,8
1,4
1,4
1,8
1,8
УПЖ %3
95
43
57
34
22
1 - Опухолевые клетки инокулировали в/в на день 0.
2 - Оптимальная доза. Соединения суспендировали в Твине 80 в концентрации 10 % и инъецировали в/в
через один день после трансплантации опухоли.
3 - Увеличение продолжительности жизни.
4 - 1/40 выживших в течение длительного времени.
9
BY 4245 C1
Таблица 4
Противоопухолевая активность в отношении ксенотрансплантатов опухолей человека
по сравнению с 4-деметокси-3'-дезамино-3'[1-азиридинил]-4'-О-метансульфонил
доксорубицином (1b)
Опухоль1
А2780
Н207
МХ1
N592
Схема
лечения
в/в q4dx3
в/в q4dx3
в/в q7dx3
в/в q7dx3
Доза/общая
доза (мг/кг)
2,5/7,5
2,5/7,5
2,66/8
2,25/9
ИРО %2
Токсичность3
99
99
99
100
0/7
0/8
1/8
0/6
Излеченные
мыши4
0/7
2/8
1/8
1/6
∆ЗРО5 дни
20
45
60
47
1 - Опухолевую взвесь инокулировали п/к.
2 - Ингибирование роста опухоли спустя одну неделю после последнего введения лекарственного препарата.
3 - Количество мышей, умерших вследствие токсичности/общее количество мышей.
4 - Мыши, не имевшие опухоли на 90 день, через 90 дней после имплантации опухоли.
5 - Задержка роста опухоли у экспериментальных мышей - задержка роста опухоли у контрольных мышей.
Государственный патентный комитет Республики Беларусь.
220072, г. Минск, проспект Ф. Скорины, 66.
10
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
220 Кб
Теги
by4245, патент
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа