close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY4404

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
(19)
BY (11) 4404
(13)
C1
(51)
(12)
7
C 07D 305/14,
A 61K 31/335
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
СПОСОБЫ ОЧИСТКИ 10-ДЕЗАЦЕТИЛБАККАТИНА III
И ТАКСОТЕРА
(21) Номер заявки: 950606
(22) 1995.09.21
(86) PCT/FR 94/00300, 1994.03.18
(31) 03251
(32) 1993.03.22
(33) FR
(46) 2002.03.30
(71) Заявитель: РОН-ПУЛЕНК РОРЕ С.А. (FR)
(72) Авторы: Андре ДУРАН; Ален ГЕРБО;
Рудольф МАРГРАФ (FR)
(73) Патентообладатель: РОН-ПУЛЕНК РОРЕ С.А.
(FR)
(56)
US 5175315 A, 1992, US 4924012 A, 1990, US 4924011 A, 1990, S. HARVEY et al. Journal of chromatography, 1991. - V. 587. - P. 300-305.
(57)
Изобретение относится к способам очистки 10-дсзацетилбаккатина III и таксотера разделительной центробежной хроматографией между двумя частично смешивающимися фазами, состоящими из воды и нехлорированных и нетоксичных растворителей, выбранных из спиртов, сложных эфиров и алифатических
углеводородов, причем коэффициент разделения между фазами находится в пределах от 0,1 до 10.
Настоящее изобретение касается способа очистки таксоидов разделительной центробежной хроматографией и, в частности, способа очистки таксотера и 10-дезацетилбаккатина III.
Получаемый из листьев тиса 10-дезацетилбаккатин III используется для изготовления таксотера в соответствии со способами, описанными в ЕПВ 0253738 и ЕПВ 0336841.
10-дезацетилбаккатин III, получаемый из листьев тиса методом экстрагирования, содержит примеси преимущественно из ряда таксоидов, в частности бензоилокси-2а ацетокси-4 эпокси-5b, 20 пентагидрокси-1b,
7b, 10b, 13а, 19 оксо-9 таксен-11, бензоилокси-2а ацетокси-4 эпокси-5b, 20 тетрагидрокси-lb, 7а, 10b, 13a
таксен-11, или токсинов.
Таксотер, получаемый из 10-дезацетилбаккатина III с помощью полусинтеза, содержит в качестве основных примесей продукты этерификации примесей, содержащихся в 10-дезацетилбаккатине III, а также другие
примеси, образующиеся в результате эпимеризации углерода на 2’ боковой цепи.
10-дезацетилбаккатин III, а также таксотер, могут очищаться преимущественно способами жидкой хроматографии на колонке, в частности, способом высококачественной жидкой хроматографии на колонке
кремния. Если эти способы и могут быть успешно использованы для очистки продукта в количестве нескольких десятков граммов, то их промышленное применение связано с целым рядом трудностей, в частности,
большим расходом растворителей, извлечением и уничтожением загрязненного токсичными отходами кремния.
Было установлено, что очистка таксоидов, в частности таксотера и 10-дезацетилбаккатина III, может
осуществляться способом разделительной центробежной хроматографии или высокоскоростной хроматографии с противотоком, описанной в статье А. Фуко и Р. Россэ, Analusis, 16(3), 157-167 (1988).
Так как таксоиды являются, как правило, высокотоксичными продуктами с повышенной хрупкостью, то
задачей изобретения является создание таких способов и очистки, которые позволяют получить высокий выход чистого продукта без использования дорогостоящей твердой основы для очистки (покупка, эксплуатация, уничтожение) при небольшом расходе растворителей и относительно несложной автоматизации для
обеспечения непрерывного производства.
Поставленная задача решается тем, что в способе очистки 10-дезацетилбаккатина III и таксотера разделительной центробежной хроматографией между двумя частично смешивающимися фазами, состоящими из
BY 4404 C1
воды и нехлорированных и нетоксичных растворителей, выбранных из спиртов, сложных эфиров и алифатических углеводородов, согласно изобретению используют смесь алифатического углеводорода, сложного
эфира, спирта и воды, коэффициент разделения между фазами которой находится в пределах от 0,1 до 10,
преимущественно от 0,5 до 5, но главным образом около 1.
Продукт с коэффициентом разделения К = 10 растворяется в верхней фазе в 10 раз лучше, чем в нижней
фазе. Следовательно, если подвижной является верхняя фаза, произойдет очень быстрое элюирование продукта, а если подвижной является нижняя фаза, то этот процесс будет слишком длительным, а растворение
недостаточно эффективным. Когда же К имеет значение, близкое к 1, растворяемость в обеих фазах будет
практически одинакова, и можно использовать оба способа элюирования, при необходимости сочетая один с
другим, что обеспечит максимальное растворение.
Для 10-дезацетилбаккатина III особенно успешно можно использовать смеси алифатического углеводорода,
сложного эфира, спирта и воды, в частности, комбинацию гептан:этилацетат: метанол:вода в отношении 1-21-2 по объему.
Кроме того, необходимо, чтобы удерживание неподвижной фазы, соответствующей части полного объема установки, заполненной неподвижной фазой в состоянии равновесия при постоянном расходе подвижной
фазы, оставалось наиболее полным и равным, по меньшей мере, 50 %. Для повышения производительности
следует работать на максимальном расходе, который, тем не менее, ограничен максимальным давлением ротора.
Для очистки таксотера особенно высокий результат получают при использовании смеси алифатического
углеводорода, сложного эфира, спирта и воды, например, гептана:этилацетата:метанола:воды в соотношении
2-4-3-2 по объему, имеющей 80 % удерживания, коэффициент разделения порядка 0,5 и обеспечивающей
быстрое элюирование, что обеспечивает существенное повышение производительности.
Задача решается также и тем, что в способе очистки 10- дезацетилбаккатина III разделительной центробежной хроматографией между двумя частично смешивающимися фазами, состоящими из воды и нехлорированных и нетоксичных растворителей, выбранных из кетонов, согласно изобретению используют смесь
алифатических кетонов и воды, коэффициент разделения между фазами которой находится в пределах от 0,1
до 10.
Высокий результат очистки получают при использовании смеси метилизобутилкетона: ацетона: воды в соотношении 2:3:2 по объему.
Разделительная центробежная хроматография может вестись с использованием установок, выпускаемых
промышленностью, в частности, фирмой Yoichiro Ito [CRC Crit. Rev. Anal. Chem., 17, 65 (1986)] или фирмой
SANKI Engineering Limited, Киото, Япония.
Разделительная центробежная хроматография позволяет осуществить разделение составляющих разделяемой смеси на две жидкие несмешивающиеся фазы путем последовательного приведения в состояние равновесия.
Способ отличается стойким механизмом разделения, высокой степенью удерживания неподвижной фазы
и высокой скоростью подвижной фазы, что позволяет всего за несколько часов получить высокий результат.
Ниже приведены примеры практического осуществления изобретения.
Пример 1.
Очищение таксотера.
Таксотер (t.бутоксикарбониламино-3 фенил-3 гидрокси-2 пропионат-(2R, 3S) ацетокси-4 бензоилокси-2а
эпокси-5b, 20 тригидрокси-la, 7b, 10b оксо-9 таксен-11 ила-13а) получают в результате обработки цинком в
присутствии уксусной кислоты t.бутоксикарбониламино-3 фенил-3 гидрокси-2 пропионат-(2R,3S) ацетокси-4
бензоилокси-2а эпокси-5b, 20 гидрокси-lb бис-(трихлор-2,2,2 этоксикарбонилокси)-7b, 10b оксо-9 таксен-11
ила-13b по способу, описанному в ЕПВ 0336841.
10 г t.бутоксикарбониламино-3 фенил-3 гидрокси-2 пропионат-(2R,3S) ацетокси-4 бензоилокси-2а эпокси-5b, 20 гидрокси-1b бис -(трихлор-2,2,2 этоксикарбонилокси)-7b, 10b оксо-9 таксен-11 ила-13а растворяют
в 150 см3 метил t.бутилэфира, затем добавляют 10 г цинка. После выпаривания получают порошок серого
цвета, который помещают в реактор. Перемешивают и добавляют в течение 5 мин 6 см3 уксусной кислоты в
смеси с 50 см3 ацетонитрила. Затем осуществляют наружный нагрев с помощью водяной бани при 45 °С в течение 1 ч. После охлаждения в ледяной бане добавляют 850 см3 метил t.бутилэфира при сильном перемешивании, а соли цинка и цинк в избытке фильтруют на пористом стекле с размером пор, равным 4.
Фильтрат подвергают сухому обогащению. В результате получают массу весом 12 г, которую тут же обрабатывают смесью, состоящей из 20 см3 этилацетата, 15 см3 метанола, 10 см3 гептана и 10 см3 воды.
Разделительную центробежную хроматографию ведут на установке SANKI LLI-07. К центрифуге подключены два поршневых насоса с клапанами, ограничивающими давление до 55 бар. Один насос обеспечивает перекачивание одной или другой фазы через направляющий клапан, другой обеспечивает ввод.
После заполнения установки неподвижной фазой при низком числе оборотов (200 об/мин) и сильной подаче
(110 см3/мин) немедленно начинают ввод. Вводят две фазы, начиная с водной фазы, элюированной при расходе
60 см3/мин водной фазой смеси гексан:этилацетат:метанол: вода в отношении 2:4:3:2 по объему. Отбирают
2
BY 4404 C1
1,9 л неподвижной фазы, т.е. удержание составляет 71 %, затем собирают фракции объемом 15 см3. Фракции 72-110 собирают вместе и концентрируют до получения объема 140 см3. Выпавший осадок отделяют
фильтрованием. В результате получают 80,5 %, выход тригидратированного таксотера весом 5,2 г, чистота
которого по отраслевому стандарту составляет 99,7 %.
Пример 2.
Очищение таксотера
Берут компоненты примера 1, но в других количествах, в частности, из 82 г t.бутоксикарбониламино-3
фенил-3 гидрокси-2 пропионат-(2R,3S) ацетокси-4 бензоилокси-2а эпокси-5b, 20 гидрокси-lb бис-(трихлор2,2,2 этоксикарбонилокси)-7b, 10b оксо-9 таксен-11 ила 13а, 82 г цинка и 150 см3 смеси на основе 49,2 см3
уксусной кислоты и 328 см3 ацетонитрила получают 115 г неочищенного продукта, теоретически содержащего 49,69 г таксотера или 53 г тригидратированного таксотера.
Неочищенный продукт обрабатывают 450 см3 метил t.бутилэфира, затем трижды промывают водой объемом 450 см3, содержащей 15 г хлористого натрия. Собранные водные фазы дважды экстрагируют 200 см3
метил t.бутилэфира. Три эфирных экстракта отбирают и подвергают сухому обогащению. В результате получают массу весом 72 г, которую обрабатывают метанолом в количестве 120 см3.
К полученному раствору бледно-желтого цвета добавляют по порядку 160 см3 этилацетата, 80 см3 воды
и 80 см3 гептана. В результате получают две прозрачных жидких фазы общим объемом 460 см3, верхний
слой которых составляет около 1/4 общего объема вместо 35 % при отсутствии таксотера.
Установку разделительной центробежной хроматографии заполняют органической фазой с подачей 110
см3/мин и при скорости вращения 200 об/мин. После заполнения установки скорость вращения повышают до
800 об/мин. Вводят водную фазу, а после ввода органической фазы промывают 200 см3 органической фазы,
которая при подаче 60 см3/мин элюируется водной фазой.
Получают 2,5 л неподвижной фазы в избытке, что соответствует удерживанию в 67,7 %.
После пропускания 200 см3 неподвижной водной фазы получают 360 фракций объемом 12-13 см3. Фракции 25-110 концентрируют до объема 200 см3 и получают 87,7 % выход осадка тригидратированного таксотера весом 46,5 г, чистота которого составляет 99,1 %.
Пример 3.
Очищение 10-дезацетилбаккатина III.
Для разделительной центробежной хроматографии используют хроматограф SANKI НРСРС серии 1000
общим объемом 245 см3.
Ротор, вращающийся со скоростью 100 об/мин, заполняют с верхней попеременной подачей органической фазой и водной фазой смеси метилизобутилкетон:ацетон:вода в отношении 2:3:2 по объему, органическую фазу подают со скоростью 6 см3/мин, а водную - 3 см3/мин. Затем скорость вращения доводят до 1200
об/мин и вводят 1,5 г неочищенного кристаллизованного 10-дезацетилбаккатина III, содержащего 83,3 % 10дезацетилбаккатина III и 3,4 % 10-дезацетил-гидрокси-19 баккатина III.
Элюируют сверху вниз водной фазой при подаче 3 см3/мин и каждые две минуты отбирают фракции объемом 6 см3.
10-дезацетил-гидрокси-19 баккатин III содержится во фракциях 39-52.
При поступлении 61-й фракции направление элюирования меняют на противоположное и начинают использовать органическую фазу в качестве подвижной, направленной снизу вверх при подаче 5 см3/мин с отбором каждые две минуты фракций объемом 10 см3.
Фракции 70-84, содержащие 10-дезацетилобаккатин III, концентрируют при пониженном давлении. После рекристаллизации в 15 см3 ацетонитрила получают 1,25 г белого кристаллического 10дезацетилбаккатина III, сольватированного ацетонитрилом (1 моль/моль), чистота которого, определенная
методом высокоточной жидкой хроматографии, составляет 98 % по отраслевому стандарту.
Выход с коррекцией составляет 91,2 %.
1. Способ очистки 10-дезацетилбаккатина III и таксотера разделительной центробежной хроматографией
между двумя частично смешивающимися фазами, состоящими из воды и нехлорированных и нетоксичных
растворителей, выбранных из спиртов, сложных эфиров и алифатических углеводородов, отличающийся тем,
что используют смесь алифатического углеводорода, сложного эфира, спирта и воды, коэффициент разделения между фазами которой находится в пределах от 0,1 до 10.
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что коэффициент разделения между фазами находится в пределах
от 0,5 до 5.
3. Способ по п. l, отличающийся тем, что коэффициент разделения между фазами близок к 1.
4. Способ по любому из пп. 1-3, отличающийся тем, что используют смесь гептана, этилацетата, метанола и воды.
5. Способ по п. 4, отличающийся тем, что для очистки 10-дезацетилбаккатина III используют смесь гептан:этилацетат:метанол:вода в соотношении 1:2:1:2 по объему.
6. Способ по п. 4, отличающийся тем, что для очистки таксотера используют смесь гептан:этилацетат:метанол:вода в соотношении 2:4:3:2 по объему.
3
BY 4404 C1
7. Способ очистки 10-дезацетилбаккатина III разделительной центробежной хроматографией между двумя частично смешивающимися фазами, состоящими из воды и нехлорированных и нетоксичных растворителей, выбранных из кетонов, отличающийся тем, что используют смесь алифатических кетонов и воды,
коэффициент разделения между фазами которой находится в пределах от 0,1 до 10.
8. Способ по п. 7, отличающийся тем, что используют смесь метилизобутилкетона, ацетона и воды.
9. Способ по п. 8, отличающийся тем, что используют смесь метилизобутилкетон:ацетон:вода в соотношении 2:3:2 по объему.
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220072, г. Минск, проспект Ф. Скорины, 66.
4
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
145 Кб
Теги
by4404, патент
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа