close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY4461

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
(19)
BY (11) 4461
(13)
C1
(51)
(12)
7
G 01N 33/48
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ДОБРОКАЧЕСТВЕННОЙ
ГИПЕРБИЛИРУБИНЕМИИ
(21) Номер заявки: a 19980145
(22) 1998.02.13
(46) 2002.06.30
(71) Заявитель: Научно-исследовательский
клинический институт радиационной медицины
и эндокринологии (BY)
(72) Авторы: Кравченко Ю.С., Стожаров А.Н. (BY)
(73) Патентообладатель: Научно-исследовательский
клинический институт радиационной медицины и
эндокринологии (BY)
(57)
Способ диагностики доброкачественной гипербилирубинемии путем спектрофотометрического определения содержания фракций билирубина в сыворотке крови и желчи, отличающийся тем, что в сыворотке
крови определяют содержание неконъюгированной (НБк) и конъюгированной (КБк) фракций билирубина, в
порции "С" желчи - содержание диглюкуронидов (ДГБж) и моноглюкуронидов (МГБж) билирубина, после
чего рассчитывают показатель К, характеризующий эффективность процесса конъюгации билирубина в печени, по формуле:
(НБк) : (КБк )
К=
,
(ДГБж ) : (МГБж )
где К - показатель, характеризующий эффективность процесса конъюгации билирубина в печени, и, в частности, активность микросомального фермента уридин-дифосфат-глюкуронил-трансферазы (УДФ-ГТ);
НБк - содержание неконъюгированной фракции билирубина в сыворотке крови, мкмоль/л;
КБк - содержание конъюгированной фракции билирубина в сыворотке крови, мкмоль/л;
ДГБж - содержание диглюкуронида билирубина в порции "С" желчи, мкмоль/л;
МГБж - содержание моноглюкуронида билирубина в порции "С" желчи, мкмоль/л,
и при значении К меньшем или равном 2,5 диагностируют нормальную глюкуронилтрансферазную активность печени, а при значении К большем 2,5 диагностируют нарушение, обусловленное дефектом УДФ-ГТазы, характерное для доброкачественной гипербилирубинемии.
(56)
Чеховская Л.Г., Циркина А.С. // Лабораторное дело, 1980. - № 3. - С. 140-142.
US 4412005 A, 1983.
Внутренние болезни. Кн.1./Под ред. Е. Браунвальда с соавт. - М.: Медицина. - 1993 - С. 450-453.
WO 95/00843 A1.
Изобретение относится к медицине, к разделу лабораторной диагностики.
Известен способ определения содержания неконъюгированной и конъюгированной (в виде моно- и диглюкуронида) фракций билирубина в сыворотке крови методом спектрофотометрического анализа по Эберляйну [1], который дает возможность количественно оценивать содержание трех фракций билирубина в сыворотке крови. Однако указанный способ обладает существенным недостатком: после прибавления к
сыворотке крови реактивов (фосфатного буфера и бутанола) и центрифугирования в нижнем слое второй
пробирки, содержащем диглюкуронид билирубина, появляется муть, которая завышает результаты измере-
BY 4461 C1
ний, вследствие чего понижается достоверность определения содержания общего билирубина в сыворотке
крови. Указанный способ является аналогом по отношению к заявляемому.
Известен модифицированный метод Эберляйна [2], при котором возможность завышения уровня диглюкуронидов сыворотки крови устраняют путем измерения содержания общего билирубина сыворотки до добавления бутанола, с последующим определением уровня диглюкуронида по формуле: ДГБ = ОБ (НБ + МГБ), где ДГБ - содержание диглюкуронида билирубина, ОБ - содержание общего билирубина, НБ - содержание неконъюгированного билирубина и МГБ - содержание моноглюкуронида билирубина в сыворотке
крови. Однако в указанном способе не учитывается содержание ди- и моноглюкуронидов билирубина в желчи, что не позволяет наиболее полно оценивать глюкуронилтрансферазную активность печени и, как следствие, диагностировать доброкачественную гипербилирубинемию (болезнь Жильбера). Указанный способ является прототипом по отношению к заявляемому.
Задачей заявляемого изобретения является повышение точности диагностики доброкачественной гипербилирубинемии. Поставленная задача достигается следующим образом.
Предложен способ диагностики доброкачественной гипербилирубинемии путем спектрофотометрического анализа содержания фракций билирубина в сыворотке крови и желчи, отличающийся тем, что в сыворотке крови определяют содержание неконъюгированной (НБк) и конъюгированной (КБк) фракций билирубина,
в порции "С" желчи - содержание ди- (ДГБж) и моноглюкуронидов (МГБж) билирубина, после чего рассчитывают показатель К, характеризующий эффективность процесса конъюгации билирубина в печени, по формуле:
(НБк ) : (КБк )
К=
,
(ДГБж ) : (МГБж )
где К - показатель, характеризующий эффективность процесса конъюгации билирубина в печени, и, в частности,
активность микросомального фермента уридиндифосфат-глюкуронилтрансферазы (УДФ-ГТ),
НБк - содержание неконъюгированной фракции билирубина в сыворотке крови, в мкмоль/л,
КБк - содержание конъюгированной фракции билирубина в сыворотке крови, в мкмоль/л,
ДГБж - содержание диглюкуронида билирубина в порции "С" желчи, в мкмоль/л,
МГБж - содержание моноглюкуронида билирубина в порции "С" желчи, в мкмоль/л,
и при получении значения К меньшем или равном 2,5 диагностируют нормальную глюкуронилтрансферазную активность печени, а при значении К большем 2,5 диагностируют нарушение, обусловленное дефектом УДФ-ГТ, характерное для доброкачественной гипербилирубинемии.
Пример выполнения 1.
Пациент В., 28 лет, поступил в терапевтическое отделение клиники НИКИ РМиЭ с жалобами на желтушное
окрашивание кожи и склер, появившееся около 1 месяца назад. В биохимическом анализе крови было выявлено
повышение уровня общего билирубина до 40,9 мкмоль/л (неконъюгированная фракция - 33,3 мкмоль/л), остальные
показателя находились в пределах нормы. Пациенту был выставлен предварительный диагноз "доброкачественная
гипербилирубинемия (болезнь Жильбера)". С целью уточнения диагноза было проведено дуоденальное зондирование одноканальным зондом с получением порции "С" желчи (печеночная желчь). Полученную желчь разводят
дистиллированной водой (в зависимости от концентрированности желчи) до интенсивности желтой окраски, характерной для сыворотки крови, после чего желчь исследуют на спектрофотометре КФК-3 по модифицированной
методике Эберляйна, описанной для сыворотки крови [2]. В желчи определено отношение
ДГБж : МГБж = 16,21 : 17,55 ≈ 0,92. Непосредственно после получения порции "С" желчи у пациента берут кровь
из локтевой вены, центрифугируют в течение 10 мин при 2500 оборотах/мин, затем полученную сыворотку исследуют на спектрофотометре по модифицированной методике Эберляйна [2]. Получены следующие значения по
фракциям: общий билирубин - 57,14 мкмоль/л, неконъюгированный билирубин - 49,23 мкмоль/л, конъюгированный билирубин - 7,91 мкмоль/л. Затем определяют отношение НБк : КБк = 49,23 : 7,91 ≈ 6,22. Показатель К вычисляют по формуле: К = (НБк : КБк) / (ДГБж : МГБж) = 6,22 : 0,92 ≈ 6,76 (т.е. К больше 2,5).
Заключение: значение показателя К, равное 6,76, говорит о наличии у пациента нарушения глюкуронилтрансферазной активности печени, характерной для доброкачественной гипербилирубинемии.
Пример выполнения 2.
Пациент P., 60 лет, поступил в терапевтическое отделение клиники НИКИ РМиЭ. При объективном осмотре склеры субъиктеричны, печень +1 см по правой срединно-ключичной
линии. С целью уточнения характера патологии печени больному было проведено дуоденальное зондирование одноканальным зондом с получением порции "С" желчи. Полученную желчь разводят дистиллированной водой до интенсивности желтой окраски, характерной для сыворотки крови, и проводят спектрофотометрический анализ на спектрофотометре КФК-3, как указано в примере 1. В желчи определяют отношение
ДГБж : МГБж = 46,15 : 18,03 ≈ 2,56. Непосредственно после получения порции "С" желчи у пациента берут
кровь из локтевой вены, сыворотку которой исследуют на спектрофотометре, как в примере 1. Получены
следующие результаты по фракциям: общий билирубин - 13,17 мкмоль/л, неконъюгированный билирубин - 9,46
мкмоль/л, конъюгированный билирубин - 3,71 мкмоль/л, откуда по формуле получаем:
BY 4461 C1
НБк : КБк = 9,46 : 3,71 ≈ 2,55. Тогда показатель К = (НБк : КБк) / (ДГБж : МГБж) = 2,55 : 2,56 ≈ 0,99 (т.е. К меньше
2,5).
Заключение: значение показателя К, равное 0,99, говорит о нормальной глюкуронилтрансферазной активности печени.
Таким образом, по сравнению с прототипом заявленный способ позволяет точнее диагностировать доброкачественную гипербилирубинемию (болезнь Жильбера) на фоне манифестации заболевания, проявляющейся неконъюгированной гипербилирубинемией. Преимущества предложенного способа:
способ позволяет определять соотношение моно- и диглюкуронидов в желчи, что позволяет более полно,
чем по изолированному анализу крови, характеризовать эффективность процессов конъюгации билирубина в
печени;
методика не требует дорогостоящих реактивов и оборудования;
при дуоденальном зондировании используется простой одноканальный зонд, при этом возможная примесь желудочного сока не влияет на результаты измерения, так как в вычислениях используются не абсолютные значение, а соотношение двух величин, и коэффициенты разведения взаимно сокращаются;
предложенная методика особенно удобна в тех случаях, когда диагностика доброкачественной гипербилирубинемии затруднена из-за нецелесообразности проведения проб с нагрузкой никотиновой кислотой при
высоком уровне гипербилирубинемии (60-95 мкмоль/л и более).
Источники информации:
1. Walter R. Eberlein A simple solvent-partition method for measurement of free and conjugated bilirubin in serum // Pediatrics, 1060. - Vol. 25. - p. 878-885 (аналог).
2. Чеховская Л.Г., Циркина А.С. Колориметрическое определение фракций билирубина в сыворотке крови // "Лабораторное дело", 1980. - № 3. - С. 140-142 (прототип).
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220072, г. Минск, проспект Ф. Скорины, 66.
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
134 Кб
Теги
by4461, патент
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа