close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY4713

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
(19)
BY (11) 4713
(13)
C1
7
(51) B 01J 13/02,
(12)
B 01J 13/10,
A 61K 9/50
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МИКРОКАПСУЛ, СОДЕРЖАЩИХ КЛЕТОЧНЫЙ
МАТЕРИАЛ
(21) Номер заявки: a 19980562
(22) 1998.06.11
(46) 2002.09.30
(71) Заявители: Государственное
учреждение
"Научно-исследовательский
клинический
институт
радиационной
медицины
и
эндокринологии", Государственное высшее
учебное
учреждение
"Белорусская
медицинская академия последипломного
образования", Витебский ордена Дружбы
народов медицинский институт (BY)
(72) Авторы: Панько С.В., Гришин И.Н., Кудрявцев
С.А., Ореховский П.В., Алексеев Н.А.,
Панько С.С., Карпицкий А.С., Сачек М.М.,
Жаворонок С.В., Воробей А.В., Лызиков А.А.,
Стебунов С.С., Доценко Э.А., Никитин И.Г.,
Фадеев В.И. (BY)
(73) Патентообладатели: Государственное
учреждение
"Научно-исследовательский
клинический институт радиационной медицины и
эндокринологии", Государственное высшее
учебное учреждение "Белорусская медицинская
академия
последипломного
образования",
Витебский ордена Дружбы народов медицинский институт (BY)
BY 4713 C1
(57)
Способ получения микрокапсул, содержащих клеточный материал, включающий суспендирование клеточного материала в растворе производного полисахарида, образование микрокапсул на разделе фаз «жидкость-газ» путем осаждения ионами металлов анионной формы производного полисахарида с последующей фиксацией полученной оболочки и выделение микрокапсул, отличающийся тем, что
суспендирование осуществляют в растворе производного полисахарида с добавлением неионогенного поверхностно-активного вещества, и полученную суспензию барботируют через мелкопористый фильтр до получения гомогенной пены.
BY 4713 C1
(56)
HALLE J. et al. Transplantation, 1993. V. 55. - Р. 350-354.
DE 1917738 B2, 1980.
US 4352883 A, 1982.
US 5308701 A, 1994.
Изобретение относится к биотехнологии, в частности к технологии получения клеточных культур, покрытых оболочкой. Известны способы получения микрокапсул из альгиновой кислоты, например получения
микрокапсул с клетками поджелудочной железы, заключающийся в осаждении альгината при помощи ионов
кальция, с последующей перешивкой образовавшейся пленки поли(1-лизином) [1].
Прототипом заявляемого предложения является технология изготовления микрокапсул с клеточным материалом [1], основанная на образовании оболочек альгината с внутренней полостью, содержащей β-клетки
поджелудочной кислоты, при осаждении альгината натрия ионами кальция, с последующей фиксацией оболочки при помощи катионного полимера (поли(1-лизин)) и отмывкой полученных микрокапсул.
Однако приведенный способ требует применения дорогостоящих реактивов (поли(1-лизин)), а также
применения специальных инжекторных устройств для впрыскивания клеточного материала.
Общим признаком для заявляемого способа и прототипа является процесс осаждения анионной формы
производных полисахаридов при помощи ионо металлов и фиксация оболочки.
Задачей заявляемого способа является упрощение процесса инкапсулирования клеточного материала.
Поставленная задача достигается следующим образом.
Предложен способ получения микрокапсул, содержащих клеточный материал, включающий суспендирование клеточного материала в растворе производного полисахарида, образование микрокапсул на разделе
фаз "жидкость-газ" путем осаждения ионами металлов анионной формы производного полисахарида с последующей фиксацией полученной оболочки и выделения микрокапсул, при этом суспендирование осуществляют в растворе производного полисахарида с добавлением неионогенного поверхностно-активного вещества и полученную суспензию барботируют через мелкопористый фильтр до получения гомогенной пены.
На фиг. 1 изображена схема этапов получения микрокапсул с инкапсулированным клеточным материалом.
Пример 1.
0,1 мл 1 % раствора твина-80 на изотоническом растворе натрия хлорида (0,9 %) и 0,05 мл взвеси инкапсулируемого материала (эритроциты) в изотоническом растворе помещают в сосуд с мелкопористой пластиной (стеклянный фильтр № 4), в котором находится 1 мл 2 % раствора натриевой соли карбоксиметилцеллюлозы (КМЦ-Na) в изотоническом растворе. С помощью поддува воздуха или СО2 (расход 20-40 см3/мин)
получают пену, которую затем переносят в делительную воронку емкостью 30 мл, в которой находится 15
мл 0,5 % раствора алюминия хлорида в изотоническом растворе и 0,5 % раствор протамина. Смесь энергично встряхивают в течение 3 мин. Всплывшие частицы отделяют и помещают в стакан емкостью 50 мл, добавляют 5 мл 0,1 % раствора КМЦ-Na на изотоническом растворе и 5 мл 0,1 % алюминия хлорида на изотоническом растворе. Микрокапсулы выдерживают в течение суток на холоду (при 0-4 °С).
При микроскопическом фазовоконтрастном исследовании видны округлые частицы размером от 5 до 100
мкм. Проведенные эксперименты показывают, что в микрокапсулы включается 55-67 % инкапсулируемого
клеточного материала.
Пример 2.
0,1 мл 1 % раствора твина-80 на изотоническом растворе натрия хлорида (0,9 %) и 0,05 л взвеси инкапсулируемого материала (эритроциты) в изотоническом растворе помещают сосуд с мелкопористой пластиной
(стеклянный фильтр N 4), в котором находится 1 мл 2 % раствора натриевой соли карбоксиметилцеллюлозы
(КМЦ-Na) в изотоническом растворе. С помощью поддува воздуха или CO2 (расход 20 - 40 см3/мин) получают пену, которую затем переносят в делительную воронку емкостью 30 мл, в которой находится 15 мл
0,5 % раствора железа (III) хлорида в изотоническом растворе и 0,1 % раствор танина. Смесь энергично
встряхивают в течение 3 мин. Всплывшие частицы отделяют и помещают в стакан емкостью 50 мл, добавляют 5 мл 0,1 % раствора КМЦ-Na на изотоническом растворе и 5 мл 0,1 % алюминия хлорида на изотоническом растворе. Микрокапсулы выдерживают в течение суток на холоду (при 0-4 °С).
При микроскопическом фазовоконтрастном исследовании видны округлые частицы размером от 5 до 100
мкм. Проведенные эксперименты показывают, что в микрокапсулы включается 55-67 % инкапсулируемого
клеточного материала.
Пример 3.
0,1 мл 1 % раствора твина-80 на изотоническом растворе натрия хлорида (0,9 %) и 0,05 мл взвеси инкапсулируемого материала в культуральной среде (культура β-клеток поджелудочной железы) помещают в сосуд с мелкопористой пластиной (стеклянный фильтр N 4), в котором находится 1 мл 2 % раствора альгината
2
BY 4713 C1
натрия в изотоническом растворе. С помощью поддува воздуха или СО2 (расход 20 - 40 см3/мин) получают
пену, которую затем переносят в делительную воронку емкостью 30 мл, в которой находится 15 мл 0,5 %
раствора алюминия хлорида в изотоническом растворе и 0,1 % раствор протамина. Смесь энергично встряхивают в течение 3 мин. Всплывшие частицы отделяют и помещают в стакан емкостью 50 мл, добавляют 5 мл 0,1 % раствора альгината натрия на изотоническом растворе и 5 мл 0,1 % алюминия хлорида на изотоническом растворе. Микрокапсулы выдерживают в течение суток на холоду (при 0-4 °С).
При микроскопическом фазовоконтрастном исследовании видны округлые частицы размером от 5 до 100
мкм. Проведенные эксперименты показывают, что в микрокапсулы включается 41-52 % инкапсулируемого
клеточного материала.
Пример 4.
0,1 мл 1 % раствора твина-80 на изотоническом растворе натрия хлорида (0,9 %) и 0,05 мл взвеси инкапсулируемого материала в изотоническом растворе помещают в сосуд с мелкопористой пластиной (стеклянный фильтр N 4), в котором находится 1 мл 2 % раствора альгината натрия в изотоническом растворе.
С помощью поддува воздуха или СО2 (расход 20 - 40 см3/мин) получают пену, которую затем переносят в
делительную воронку емкостью 30 мл, в которой находится 15 мл 0,5 % раствора алюминия хлорида в изотоническом растворе и 0,1 % раствор танина. Смесь энергично встряхивают в течение 3 мин.
Всплывшие частицы отделяют и помещают в стакан емкостью 50 мл, добавляют 5 мл 0,1 % раствора альгината натрия на изотоническом растворе и 5 мл 0,1 % железа (III) хлорида на изотоническом растворе.
Микрокапсулы выдерживают в течение суток на холоду (при 0-4 °С).
При микроскопическом фазовоконтрастном исследовании видны округлые частицы размером от 5 до 100
мкм. Проведенные эксперименты показывают, что в микрокапсулы включается 38-56 % инкапсулируемого
клеточного материала.
Источники информации:
1. Halle J.P., Bourassa S., Leblona F.A., Chevalier S. Protection of islets of Langerhans from antibodies by microencapsulation with alginate-poly-L- lysine membranes // Transplantation. - Vol.55. - ¹ 2. - P. 350-354.
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220072, г. Минск, проспект Ф. Скорины, 66.
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
170 Кб
Теги
патент, by4713
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа