close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY4747

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
BY (11) 4747
(13)
C1
7
(51) A 61K 35/74,
(12)
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
(19)
C 12N 1/20 //
(C 12N 1/20,
C 12R 1:10, 1:125)
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ВЕТЕРИНАРНОГО ПРЕПАРАТА "СУБЛИЦИН"
ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ ЖЕЛУДОЧНО-КИШЕЧНЫХ
ЗАБОЛЕВАНИЙ
(21) Номер заявки: a 19980259
(22) 1998.03.17
(46) 2002.12.30
(71) Заявители: Романова Л.В.,
Селецкая Т.Г. (BY)
Игнатович
Л.Ф.,
(72) Авторы: Романова Л.В., Игнатович Л.Ф.,
Селецкая Т.Г. (BY)
(73) Патентообладатели: Романова
Людмила
Владимировна, Игнатович Людмила Федоровна, Селецкая Татьяна Георгиевна (BY)
(57)
Способ получения ветеринарного препарата для профилактики и лечения желудочно-кишечных заболеваний, включающий выращивание по отдельности культур штаммов бактерий рода Bacillus, в том числе
штамма Bacillus subtilis, на жидкой питательной среде и смешивание полученных культуральных жидкостей,
отличающийся тем, что используют штаммы Bacillus subtilis 124 и Bacillus licheniformis 21, осуществляют
глубинное выращивание в течение 18-24 ч при постоянной аэрации и перемешивании, смешивают полученные культуральные жидкости штаммов Bacillus subtilis 124 и Bacillus licheniformis 21 в соотношении 5:2, при
этом в качестве питательной среды используют среду, содержащую мелассу, аммоний сернокислый, калий
фосфорнокислый однозамещенный, калий фосфорнокислый двузамещенный и воду при следующем соотношении компонентов, мас. %:
BY 4747 C1
меласса
аммоний сернокислый
калий фосфорнокислый однозамещенный
калий фосфорнокислый двузамещенный
вода
(56)
RU 94026123 A1, 1996.
SU 1563699 A1, 1990.
SU 1708832 A1, 1992.
SU 1520094 A1, 1989.
SU 1824194 A1, 1993.
SU 1723116 A1, 1992.
UA 14569 A, 1997.
US 5372810 A, 1994.
US 3713836 A, 1973.
3,8-4,2
0,9-1,1
0,45-0,55
0,045-0,055
остальное.
BY 4747 C1
Изобретение относится к биотехнологии, в частности к промышленной микробиологии, и может найти
применение при производстве бактериальных ветеринарных препаратов для профилактики и лечения дисбактериозов и других желудочно-кишечных заболеваний животных, например молодняка сельскохозяйственных животных.
Известен способ получения ветеринарного препарата для профилактики и лечения желудочно-кишечных
заболеваний, включающий поверхностное выращивание штамма Вас. subtilis 44 на плотной питательной
среде, снятие биомассы с питательной среды и ее разбавление стерильным физраствором или растворителем
вакцин ЛТФ-130 [1].
Однако данный способ обладает низкой производительностью, а препарат - узкой антибиотической активностью.
Известен также способ получения ветеринарного препарата БЦЛ для лечения желудочно-кишечных заболеваний, включающий выращивание по отдельности штаммов Вас. subtilis, Rumenacoccus albus, Lactobacillus
sp. на жидкой питательной среде, содержащей соевый гидролизат, печеночный бульон, глюкозу и хлорид натрия, в термостате при 36-38 °С в течение 72 ч, и смешивании культуральных жидкостей в соотношении
1:1:1 [2].
Однако известный способ является достаточно длительным (72 часа) и дорогостоящим из-за применения
печени крупного рогатого скота для приготовления питательной среды и трех штаммов микроорганизмов.
Данные недостатки связаны с биологическими свойствами микроорганизмов.
Задача изобретения состоит в обеспечении сокращения количества штаммов микроорганизмов и сроков
получения препарата и применения дешевой питательной среды.
Сущность изобретения заключается в том, что для решения поставленной задачи в заявляемом способе
получения ветеринарного препарата для профилактики и лечения желудочно-кишечных заболеваний, включающем выращивание по отдельности культур штаммов бактерий рода Bacillus, в том числе штамма Bacillus
subtilis, на жидкой питательной среде и смешивание полученных культуральных жидкостей, отличающийся
тем, что используют штаммы Bacillus subtilis 124 и Bacillus licheniformis 21, осуществляют глубинное выращивание в течение 18-24 ч при постоянной аэрации и перемешивании, смешивают полученные культуральные жидкости штаммов Bacillus subtilis 124 и Bacillus licheniformis 21 в соотношении 5:2, при этом в качестве питательной среды используют среду, содержащую мелассу, аммоний сернокислый, калий
фосфорнокислый однозамещенный, калий фосфорнокислый двузамещенный и воду при следующем соотношении компонентов, мас. %:
меласса
аммоний сернокислый
калий фосфорнокислый однозамещенный
калий фосфорнокислый двузамещенный
вода
3,8-4,2
0,9-1,1
0,45-0,55
0,045-0,055
остальное.
Штамм Вас. subtilis 124 является представителем нормальной кишечной микрофлоры здоровых животных (телят). Выделен методом накопительных культур с последующим отбором наиболее активных вариантов.
Морфологические признаки.
Вас. subtilis 124 - грамположительные клетки, палочковидные, размером 2,7⋅0,85 мкм, подвижные, расположены одиночно или в виде цепочек. Эндоспоры овальные, расположены без строгой локализации. При
спорообразовании клетки не раздуваются.
Культуральные признаки.
На МПА колонии имеют неправильную форму с морщинистой, матовой поверхностью белого цвета с изрезанным фестончатым краем. Колонии легко снимаются петлей с агара. Оптимальная температура роста
37 °С. Максимальная продуктивность достигается в интервале 28-37 °С.
Культура не растет в анаэробных условиях, не гидролизует мочевину. Для хорошего роста необходима
интенсивная аэрация. Ферментирует глюкозу, сахарозу, мальтозу с образованием кислоты. Обладает способностью образовывать каталазу и ацетилметилкарбинол (реакция Фогес-Проскауэра положительная). Разжижает желатину, гидролизует крахмал.
Не обладает патогенностью, токсичностью в отношении животных. Обладает антагонизмом в отношении
патогенных и условно-патогенных кишечных микроорганизмов.
Устойчив к линкомицину, цефазолину, цефатоксину, полимиксину и сульфаниламидным препаратам.
Чувствителен к гентамицину, тетрациклину, эритромицину, канамицину.
Условия и состав сред для хранения штамма.
2
BY 4747 C1
В лиофильно высушенном виде или на МПА (1,5 %, 0,75 %) при температуре 5 ± 2 °С.
Способ определения активности штамма.
Чашечный метод. Метод основан на приготовлении ряда последовательных разведений культуральной
жидкости в стерильной водопроводной воде с высевом на агаризованные среды в чашки Петри, с подсчетом
выросших колоний. Типичность выросших колоний штамма определяют по культурально-морфологическим
признакам.
Штамм Вас. licheniformis 21 выделен из кишечника телят методом накопительных культур с последующим отбором наиболее активных вариантов.
Морфологические признаки.
Вас. licheniformis 21 - грамположительные спорообразующие палочки, размером 2,0⋅0,6 мкм. Клетки подвижные, перитрихи, располагаются одиночно или в виде цепочек. Эндоспоры овальной формы располагаются в клетке центрально. Клетки при спорообразовании не раздуваются. Капсул не образует.
Культуральные признаки.
На МПБ и на жидкой мелассной среде культура образует осадок. На МПА - колонии серовато-белого
цвета, непрозрачные, край ровный. Форма колоний круглая, выпуклая, поверхность гладкая. На агаризованной среде с мелассой колонии матовые серого цвета, центр чуть приподнят и уплотнен. Форма колоний
круглая, край слегка волнистый. Колонии легко снимаются петлей с агаризованных сред. Оптимальная температура роста 37 °С. Максимальная продуктивность достигается в интервале 28-37 °С.
Физиолого-биохимические признаки.
Культура образует каталазу и ацетилметилкарбинол (реакция Фогес-Проскауэра положительна). Разжижает
желатину, гидролизует крахмал. Ферментирует глюкозу, сахарозу, мальтозу, маннит с образованием кислоты.
Редуцирует нитраты и способна расти за счет анаэробного нитратного дыхания. Не обладает патогенностью и
токсичностью в отношении животных. Штамм устойчив к полипептидам и β-лактамным антибиотикам, сульфаниламидным препаратам.
Обладает антибиотической активностью в отношении Escherichia coli, Staphylococcus aureus, сальмонелл,
протея.
Условия и состав сред для хранения штамма.
В лиофильно высушенном виде или на МПА (1,5 %, 0,75 %) при температуре 5 ± 2 °С.
Способ определения активности.
Активность штамма определяют тем же методом, что и у Вас. subtilis 124. Типичность выросших колоний штамма определяют по культурально-морфологическим признакам.
Способ осуществляют следующим образом.
Музейную культуру штаммов бактерий Вас. subtilis 124 и Вас. licheniformis 21 высевают на скошенный
мясо-пептонный агар в пробирках. Пробирки помещают в термостат и выдерживают при 37 °С в течение 1618 ч.
Полученный посевной материал обоих штаммов помещают в разные емкости с питательной средой, где и
осуществляют глубинное выращивание штаммов, при этом культуральную жидкость постоянно аэрируют и
перемешивают, а питательную среду используют следующего состава, мас. %:
меласса
3,8-4,2
0,9-1,1
аммоний сернокислый (NH4)2SO4
0,45-0,55
калий фосфорнокислый однозамещенный (КН2РО4)
0,045-0,055
калий фосфорнокислый двузамещенный (К2НРО4)
вода
остальное.
Выращивание осуществляют при 26-37 °С, pH 6,8-7,2 и аэрации 0,5 м3 воздуха на 1 м3 в течение 18-24 ч.
После выращивания для получения конечного продукта суспензии обоих штаммов смешивают в соотношении 5:2. Данное соотношение обеспечивает титр живых микробных клеток не менее 3⋅109 в 1 мл и является оптимальным для проявления антибиотической активности конечного продукта.
Изобретение поясняется конкретными примерами.
Пример 1.
Музейные культуры штаммов Вас. subtilis 124 и Вас. licheniformis 21 помещали в разные емкости с питательной средой, мас. %:
меласса
3,8
0,9
аммоний сернокислый (NH4)2SO4
0,45
калий фосфорнокислый однозамещенный (КН2РО4)
0,045
калий фосфорнокислый двузамещенный (К2НРО4)
вода
остальное.
3
BY 4747 C1
Выращивание осуществляли при 28 °С, pH среды 6,8; аэрации 0,5 м3 воздуха на 1 м3 в течение 24 ч.
После окончания выращивания для получения конечного продукта суспензии обоих штаммов Вас. subtilis
124 и Вас. licheniformis 21 смешивали в соотношении 5:2, соответственно.
Титр жизнеспособных клеток в 1 мл препарата составил 3,5⋅109.
Пример 2.
Способ осуществляли, как в примере 1 за исключением:
питательную среду использовали следующего состава, мас. %:
меласса
4,0
1,1
аммоний сернокислый (NH4)2SO4
0,55
калий фосфорнокислый однозамещенный (КН2РО4)
0,055
калий фосфорнокислый двузамещенный (К2НРО4)
вода
остальное.
Выращивание осуществляли при 37 °С, pH среды 7,2; аэрации 0,5 м3 воздуха на 1 м3 в течение 18 ч.
Титр жизнеспособных клеток в 1 мл препарата составил 4,4⋅109.
Таким образом, изобретение позволяет сократить количество штаммов микроорганизмов с 3 до 2, сократить время получения препарата со 120 ч до 42 ч и удешевить получение препарата за счет применения дешевой питательной среды.
Источники информации:
1. А.с. СССР 1563699, МПК А 61К 35/74, 1990.
2. Заявка 94026123 на выдачу патента РФ на изобретение, МПК А 61К 35/66, 1996.
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220072, г. Минск, проспект Ф. Скорины, 66.
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
145 Кб
Теги
патент, by4747
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа