close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY4819

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
(19)
BY (11) 4819
(13)
C1
(51)
(12)
7
G 09B 23/28
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ СЕНСИБИЛИЗАЦИИ У ЛАБОРАТОРНЫХ
ЖИВОТНЫХ К КСЕНОБИОТИКАМ
(21) Номер заявки: a 19981005
(22) 1998.11.03
(46) 2002.12.30
(71) Заявитель: Государственное
"Научно-исследовательский
санитарии и гигиены" (BY)
учреждение
институт
(72) Авторы: Шевляков В.В., Эрм Г.И., Буйницкая
А.В., Ушков А.А. (BY)
(73) Патентообладатель: Государственное учреждение
"Научно-исследовательский институт санитарии и
гигиены" (BY)
(57)
Способ выявления сенсибилизации у лабораторных животных к ксенобиотикам путем воздействия на ухо
сенсибилизированным животным провокационной разрешающей дозой изучаемого вещества и определения
степени опухания уха, отличающийся тем, что провокационную дозу вводят в ухо внутрикожно и по разнице в толщине уха после и до тестирования судят о сенсибилизирующих свойствах ксенобиотиков.
BY 4819 C1
(56)
RU 2094800 C1, 1997.
RU 2094801 C1, 1997.
RU 2094855 C1, 1997.
RU 2094856 C1, 1997.
Изобретение относится к медицине, а именно к области экспериментальной аллергологии и токсикологии.
Известен способ выявления сенсибилизации в экспериментах на лабораторных мышах к химическим веществам [1] (аналог), который заключается во введении провокационной разрешающей дозы изучаемого вещества в
подушечку (под апоневроз) задней лапы предварительно сенсибилизированным этим веществом животным с
оценкой развития гиперчувствительности замедленного типа по степени отека лапы, определяемой по разнице
толщины опытной (вещество) и контрольной (растворитель) лап. Недостатками данного способа являются невысокая чувствительность вследствие неполноценных условий в тканях апоневроза лап для реализации гиперергического воспаления (малоразветвленная сеть лимфо- и кровоснабжения, отдаленность периферических лимфоузлов),
значительная вероятность ошибок в измерениях толщины лап в результате "мягкости" и подвижности тканей подушечки и морфо-анатомических различий лап у одного и того же животного, т.е. не обеспечивается объективность результатов.
Известен способ выявления в экспериментах на мышах сенсибилизации по гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) к химическим веществам [2] (прототип). Способ заключается в оценке выраженности
индукции ГЗТ по степени опухания уха мышей (тест опухания уха - ТОУ), регистрируемой измерением толщины уха после постановки провокационной кожной пробы - нанесение на кожу уха разрешающей дозы вещества, которым предварительно сенсибилизированы животные. К недостаткам известного способа относится его недостаточная чувствительность и точность. Это обусловлено тем, что многие испытуемые
вещества обладают слабой трансдермальной проникающей способностью, а при нанесении кожных проб с
растворами веществ значительная их часть теряется вследствие стекания с поверхности уха, остаточных количеств в дозаторах и на пипетках. В результате этого количество проникающего через кожу веществасенсибилизатора недостаточно для индукции аллергической воспалительной реакции, что может приводить
к неверным выводам - об отсутствии у этих веществ сенсибилизирующей способности. К тому же проводится измерение и сравнение толщины колатеральных ушей животных с опытной (вещество) и контрольной
BY 4819 C1
(растворитель) кожными пробами, что вследствие морфо-анатомических различий ушей у того же животного может приводить к некорректным результатам.
Задачей настоящего изобретения является повышение чувствительности, точности и упрощение способа.
Поставленная задача достигается следующим образом. Предложен способ выявления сенсибилизации у
лабораторных животных к ксенобиотикам путем воздействия на ухо сенсибилизированным животным провокационной разрешающей дозой изучаемого вещества и определения степени опухания уха, когда провокационную дозу вводят в ухо внутрикожно и по разнице в толщине уха после и до тестирования судят о сенсибилизирующих свойствах ксенобиотиков. Статистически достоверное по критерию t Стьюдента (при Р<0,05)
возрастание средней величины показателя ТОУ в опытной группе животных по сравнению с контрольной
свидетельствует об индукции ГЗТ и позволяет оценить изучаемый ксенобиотик как потенциальный аллерген.
Статистическая недостоверность сравниваемых среднегрупповых показателей ТОУ указывает на отсутствие
сенсибилизирующей активности у вещества.
С использованием предлагаемого способа и описанного в прототипе оценены сенсибилизирующие свойства ряда химических веществ. В табл. 1 и 2 приведены результаты оценки чувствительности способов на
примере вытяжки из ПАН-волокна Нитрон С и терпено-малеинового аддукта (ТМА) соответственно на белых мышах и морских свинках. У сенсибилизированных вытяжкой из ПАН-волокна мышей среднегрупповые показатели ТОУ в опыте и контроле при эпикутанном провокационном тестировании (прототип) были
статистически недостоверны (t = 0,9), тогда как при внутрикожном тестировании разница была существенна
(t = 2,52, Р<0,05). Наличие сенсибилизации подтверждалось и достоверными уровнями клеточноопосредованной гипериммунной реакцией in vitro - реакцией специфического лейколизиса (РСЛЛ): в контрольной
группе - 2,51 + 1,15 % и в опытной - 7,41 + 1,56 % (t = 2,7, Р<0,02). Аналогично заявляемым способом выявлена сенсибилизирующая активность продукта ТМА на морских свинках (табл. 2), что подтверждалось и высокими уровнями положительных аллергодиагностических реакций in vitro, тогда как по способу прототипа
результаты были недостоверные.
В то же время при установлении на животных сенсибилизирующей способности у изучаемых ксенобиотиков способом прототипа среднегрупповые показатели ТОУ и значения критерия t по сравнению с соответствующими контрольными группами заявляемым способом были более высокими и значимыми (табл. 3).
Таблица 1
Выявление сенсибилизации у белых мышей на вытяжку из ПАН-волокна Нитрон С по заявленному способу (А) и согласно прототипу (Б)
Группы сравнения
№ № п/п
Контр. группа (растворитель)
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
М ± mР∆
σ
Опытн. Группа (вытяжка из ПАН-волокна)
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
А-способ
Толщина уха в 10-2 мм
Исх.
24 ч
24
26
25
27
26
26
26
29
28
29
28
30
24
24
20
23
27
27
24
26
1,50 ± 0,37
1,18
28
35
27
27
27
30
28
32
28
31
25
32
28
30
30
37
28
30
26
28
2
Прирост
Р∆
2
2
0
3
1
2
0
3
0
2
7
0
3
4
3
7
2
7
2
2
Б-способ
Толщина уха в 10-2 мм
Исх.
24 ч
21
21
24
24
25
27
25
26
25
27
29
32
24
26
20
22
26
26
24
24
1,20 ± 0,36
1,13
25
26
26
26
27
28
27
27
25
27
26
30
26
28
28
31
27
30
26
27
Прирост
Р∆
0
0
2
1
2
3
2
2
0
0
1
0
1
0
2
4
2
3
3
1
BY 4819 C1
Продолжение таблицы 1
М ± mР∆
σ
tK
Р
1,7 ± 0,42
1,34
0,90
>0,05
3,7 ± 0,79
2,50
2,52
<0,05
Таблица 2
Выявление сенсибилизации у морских свинок на продукт ТМА по заявленному способу (А) и согласно прототипу (Б)
Группы сравнения
№ № п/п
Контр. группа (растворитель)
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
М±mР∆
σ
Опытн. группа (вытяжка из ПАНволокна)
1
2
3
4
5
6
7
8
А-способ
Толщина уха в 10-2 мм
Исх.
24 ч
88
90
68
75
85
85
86
87
78
80
94
94
90
94
90
94
83
83
95
95
76
77
87
90
2,0 ± 0,63
2,17
75
83
80
93
90
95
82
94
85
88
90
97
75
92
82
92
М ± mР∆
σ
tK
P
Прирост
P∆
2
7
0
1
2
0
4
4
0
0
1
3
8
13
5
12
3
7
17
10
Б-способ
Толщина уха в 10-2 мм
Исх.
24 ч
85
85
63
63
85
86
86
86
79
79
95
96
96
100
90
92
81
81
85
87
77
81
87
87
1,17 ± 0,44
1,53
74
74
81
82
92
97
83
83
85
85
95
96
77
84
83
87
Прирост
Р∆
0
0
1
0
0
1
4
0
0
2
4
0
0
1
5
0
0
1
7
4
2,25 ±0,96
2,71
1,15
>0,05
9,37 ± 1,61
4,56
4,87
<0,001
Таблица 3
Результаты специфического тестирования по заявляемому (А) и прототипу (Б) способам при изучении сенсибилизации к разным ксенобиотикам
Ксенобиотик
Лак битумный
Фенантралин
Изоборнил-формиат
Тиабендазол
Эпоксисмола ТЭГ
Лак ПЭ
Продукт КС
Лак ПЭ 2311
Лабор. животное
б.мыши
м.св.
м.св.
м.св.
б.мыши
б.мыши
б.мыши
б.мыши
Способ А
М±m
2,8 ± 0,84
4,0 ± 1,2
3,75 ± 0,92
3,88 ± 1,08
3,88 ± 0,77
5,27 ± 1,59
3,4 ± 0,8
3,6 ± 1,03
3
Способ Б
tK
2,21
2,25
3,35
3,12
4,21
2,68
3,65
2,94
М±m
2,5 ± 0,77
3,38 ± 1,21
2,88 ± 0,97
2,75 ± 0,66
3,88 ± 0,98
2,36 ± 0,93
2,3 ± 0,47
2,2 ± 0,41
tK
2,12
2,25
2,47
2,82
3,68
2,26
3,74
3,15
BY 4819 C1
Сущность изобретения заключается в следующем. По предлагаемому способу разрешающая доза химического вещества, которым сенсибилизированы лабораторные животные (мыши, крысы, морские свинки),
вводится внутрикожно в строго необходимом количестве в чувствительную зону уха, чем достигается точная
дозировка и оптимальные условия для реализации вторичного клеточного иммунного ответа в форме гиперергического аллергического воспаления по замедленному типу с развитием отека тканей. По величине разницы в толщине того же уха после и до внутрикожного тестирования животных судят о степени отека и соответственно о выраженности индуцированной ГЗТ. В прототипе же разрешающая провокационная доза
вещества наносится на поверхность уха мышей с измерением толщины колатеральных ушей с опытной и
контрольной кожными пробами и оценкой величины их разницы.
Заявляемый способ осуществляется следующим образом. Опытным (сенсибилизированным известными
способами испытуемым химическим веществом) и контрольным (растворитель) лабораторным животным в
срединный сегмент наружной поверхности уха внутрикожно вводится микро-или туберкулиновым шприцом
в объеме по 40-60 мкл раствора (вытяжки) испытуемого вещества в расчетной концентрации, соответствующей сенсибилизирующей дозе. До введения и через 24 часа после него инженерным микрометром измеряют
толщину уха с точностью до 0,01 мм. По разнице (приросту) величин толщины уха в 10-2 мм после и до тестирования определяют степень опухания уха у животного - показатель ТОУ. О выраженности ГЗТ и наличии
сенсибилизирующих свойств у испытуемого ксенобиотика судят по статистическому различию по критерию
t Стьюдента среднегрупповых показателей ТОУ в опыте и контроле. При статистически достоверных различиях при Р<0,05 ксенобиотик является потенциальным аллергеном, при отсутствии - не обладает сенсибилизирующей активностью.
Технический результат заявляемого способа:
повышение чувствительности выявления сенсибилизации к ксенобиотикам за счет элиминации влияния
физико-химических свойств вещества и его трансдермальной проникающей способности, оптимальных условий при внутрикожном введении вещества для быстрой реализации клеточного гиперергического иммунного ответа с развитием воспаления;
повышение точности исследования вследствие строго определенного количества вводимой разрешающей
дозы вещества, измерения степени отека одного и того же уха животного;
упрощение исследования, так как исключается необходимость постановки теста с растворителем испытуемого вещества на колатеральное ухо животных.
Способ промышленно применим в медицине, в частности в аллергологии и токсикологии.
Источники информации:
1. Черноусов А.Д. Метод определения аллергенной активности низкомолекулярных химических веществ
на мышах//Гигигена труда. -1987. - № 6. - С. 45-47.
2. Gad S.C., Dunn B.J., Dobbs D.W., Reilly C. Development and validation of on alternative dermal sensitization
test: the mouse ear swelling test (MEST)//Toxicol. And Appl. Pharmacol. -1986. - Vol. 84. - № 1. - P. 93-114 (прототип).
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220072, г. Минск, проспект Ф. Скорины, 66.
4
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
154 Кб
Теги
by4819, патент
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа