close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY5257

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
BY (11) 5257
(13) C1
(19)
7
(51) G 01N 33/49, 33/50
(12)
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОБЩЕЙ АНТИОКСИДАНТНОЙ
АКТИВНОСТИ СЫВОРОТКИ КРОВИ
(21) Номер заявки: a 20001125
(22) 2000.12.19
(46) 2003.06.30
(71) Заявитель: Белорусская медицинская
академия последипломного образования (BY)
(72) Авторы: Свиридов Денис Олегович;
Камышников Владимир Семенович;
Пышко Елена Станиславовна (BY)
(73) Патентообладатель: Белорусская медицинская академия последипломного
образования (BY)
(57)
Способ определения общей антиоксидантной активности сыворотки крови с учетом
степени ингибирующего влияния содержащихся в ней компонентов белковой и небелковой природы на генерацию свободных радикалов в гемсодержащей гидропероксидной
системе, отличающийся тем, что реакционную смесь, содержащую исследуемую сыворотку и гемсодержащую гидропероксидную систему, инкубируют в лунках стандартного
микропланшета для иммуноферментного анализа при температуре 18-25ºС в течение 3545 мин, затем спектрофотометрически определяют оптическую плотность образцов в лунках при длине волны 600-650 нм и вычисляют показатель общей антиоксидантной активности сыворотки как тролоксовый эквивалент Т, выраженный в ммоль/л тролокса, по
формуле
Τ=
( Α1 − Α) × (Τ2 − Τ1 )
+ Τ1 ,
( Α1 − Α 2 )
где
BY 5257 C1
А - оптическая плотность исследуемой сыворотки,
А1 - оптическая плотность калибровочной сыворотки № 1,
А2 - оптическая плотность калибровочной сыворотки № 2,
Т1 - тролоксовый эквивалент калибровочной сыворотки № 1,
Т2 - тролоксовый эквивалент калибровочной сыворотки № 2,
при этом в качестве калибровочных сывороток используют сыворотки с известными
показателями общей антиоксидантной активности, измеренными в стандартных условиях
с помощью внешнего стандарта.
(56)
GB 2250819 A, 1992.
RU 2116649 C1, 1998.
RU 2102757 C1, 1998.
BY 5257 C1
Изобретение относится к медицине, к разделу клинической лабораторной диагностики.
Известен способ определения общей антиоксидантной активности сыворотки крови
путем учета степени ингибирующего влияния содержащихся в ней компонентов белковой
и небелковой природы на генерацию свободных радикалов в гемсодержащей гидропероксидной системе, являющийся прототипом по отношению к заявляемому способу [1].
Общим признаком для заявляемого способа и прототипа является учет степени ингибирующего влияния содержащихся в ней компонентов белковой и небелковой природы на
генерацию свободных радикалов в гемсодержащей гидропероксидной системе.
Однако указанный способ обладает следующими недостатками:
необходимо строго соблюдать время реакции и температурный режим, иначе происходит искажение результатов;
неудачно подобран калибратор (водорастворимый аналог витамина Е), что также снижает точность определения.
Задачей заявляемого способа является повышение точности определения.
Поставленная задача достигается следующим образом.
Предложен способ определения общей антиоксидантной активности сыворотки крови с
учетом степени ингибирующего влияния содержащихся в ней компонентов белковой и небелковой природы на генерацию свободных радикалов в гемсодержащей гидропероксидной
системе, при котором реакционную смесь, содержащую исследуемую сыворотку крови и
гемсодержащую гидропероксидную систему, инкубируют в лунках стандартного микропланшета для иммуноферментного анализа при температуре 18-25 °С в течение 35-45 мин,
затем спектрофотометрически определяют оптическую плотность образцов в лунках при
длине волны 600-650 нм и вычисляют показатель общей антиоксидантной активности сыворотки как тролоксовый эквивалент Т, выраженный в ммоль/л тролокса, по формуле:
T=
(A1 − A ) × (T2 − T1 )
+ T1 , где
( A1 − A 2 )
Т - тролоксовый эквивалент исследуемой сыворотки;
Т1 - тролоксовый эквивалент калибровочной пробы № 1;
Т2 - тролоксовый эквивалент калибровочной пробы № 2;
A1 - оптическая плотность калибровочной сыворотки № 1;
А - оптическая плотность исследуемой сыворотки;
А2 - оптическая плотность калибровочной пробы № 2,
при этом в качестве калибровочных сывороток используют сыворотки с известными
показателями общей антиоксидантной активности, измеренными в стандартных условиях
с помощью внешнего стандарта.
В табл. 1 представлена схема анализа сыворотки крови по заявляемому способу.
Пример 1.
Необходимо определить общую антиоксидантную активность сывороток крови пяти
доноров Б., В., П., Д., И.
Для этого в лунки № 1-№ 14 микропланшета для иммуноферментного анализа последовательно вносят 0,05 мл раствора метмиоглобина в 0,05 молярном фосфатном буфере
рН = 7,4, 0,05 мл водного раствора ABTS. Затем в лунки № 1 и № 2 добавляют по 0,02 мл
калибровочной сыворотки № 1, в лунки № 3 и № 4 по 0,02 мл калибровочной сыворотки
№ 2, а в лунки № 5-№ 14 по 0,02 мл исследуемых сывороток в дубликатах. Реакцию инициируют добавлением во все лунки по 0,05 мл раствора перекиси водорода. После этого
аккуратно встряхивают микропланшет на специальном шейкере, и реакционные смеси
инкубируют в течение 40 мин при комнатной температуре (18-25 °С). Затем измеряют оптические плотности растворов в лунках при 600 нм на спектрофотометре АФ-8К. Получают значения оптических плотностей, выраженных в оптических единицах. Затем вычисляют общую антиоксидантную активность сывороток крови Б., В., П., Д., И. по формуле:
Т = {[(А1-А)⋅(Т2-Т1)]/(А1-А2)} + Т1, где:
Т - тролоксовый эквивалент исследуемой сыворотки,
Т1 - тролоксовый эквивалент калибровочной пробы № 1,
2
BY 5257 C1
Т2 - тролоксовый эквивалент калибровочной пробы № 2,
А - оптическая плотность исследуемой сыворотки,
А1 - оптическая плотность калибровочной сыворотки № 1,
А2 - оптическая плотность калибровочной пробы № 2.
Тролоксовые эквиваленты калибровочных сывороток, измеренные с помощью внешнего стандарта, составляли для калибровочной сыворотки № 1-0,185 мМ тролокса, для калибровочной сыворотки № 2-0,345 мМ тролокса. Результаты измерения и расчетов представлены в табл. 2.
В табл. 2 видно, антиоксидантная активность донора Б. составила 0,243 мМ тролокса,
донора В. - 0,272 мМ тролокса, донора П. - 0,224 мМ тролокса, донора Д. - 0,185 мМ тролокса, донора И. - 0,199 мМ тролокса.
Таким образом по сравнению с прототипом заявляемый способ позволяет получить
следующие преимущества:
отсутствует строгость температурного и временного режимов, что упрощает анализ и
повышает точность определений и дает возможность одновременно определять большое
количество проб.
в качестве калибратора используют сыворотки крови с известным показателем общей
антиоксидантной активности, что также повышает точность измерений.
способ адаптирован для проведения реакций в лунках микропланшета для иммуноферментного анализа, что позволяет одновременно определять до 94 проб.
Таблица 1
Способ определения общей антиоксидантной активности сыворотки крови
Лунки
№ 1-2
№ 3-4
№ 5-96
Реагенты, мл
1. Гемопротеид
0,05
0,05
0,05
2. Хромоген
0,05
0,05
0,05
3. Калибровочная сыворотка № 1
0,02
4. Калибровочная сыворотка № 2
0,02
5. Проба сыворотки
0,02
6. Субстрат
0,05
0,05
0,05
Перемешать и инкубировать в течение 35-45 мин.
Измерить оптическую плотность при 600 нм с помощью микропланшетного спектрофотометра
Таблица 2
Способ определения общей антиоксидантной активности сыворотки крови
№ лунки микроОптическая плотность, Антиоксидантная активность (тролоксовый
планшета
о.е.
эквивалент), мМ тролокса
1-2 (калибр. № 1)
1,86
0,185
3-4 (калибр. № 2)
1,20
0,345
5-6 (донор Б.)
1,62
0,243
7-8 (донор В.)
1,50
0,272
9-10 (донор П.)
1,70
0,224
11-12 (донор Д.)
1,86
0,185
13-14 (донор И.)
1,80
0,199
Источники информации:
1. Патент Великобритании 2250819А, 1992 (прототип).
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
106 Кб
Теги
патент, by5257
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа