close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY5307

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
BY (11) 5307
(13) C1
(19)
7
(51) C 07K 9/00,
(12)
C 07D 487/04, 401/04,
C 07H 15/203,
A 61K 38/14,
A 61P 35/00
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
МОДИФИЦИРОВАННЫЕ УГЛЕВОДАМИ
ЦИТОСТАТИЧЕСКИЕ СРЕДСТВА
(21) Номер заявки: 971368
(22) 1997.11.04
(86) PCT/EP96/01279, 1996.03.22
(31) 195 12 484.7 (32) 1995.04.04 (33) DE
(46) 2003.06.30
(71) Заявитель: Байер Акциенгезельшафт
(DE)
(72) Авторы: Ханс-Георг ЛЕРХЕН; Карстен
ФОН ДЕМ БРУХ; Уве ПЕТЕРЗЕН;
Ерг БАУМГАРТЕН; Норберт ПИЛЬ;
Хорст-Петер АНТОНИЦЕК; Вальтер
ВАЙХЕЛЬ; Михаэль ШПЕРЦЕЛЬ; Клаус
Дитер Бремм (DE)
(73) Патентообладатель: Байер Акциенгезельшафт (DE)
(57)
1. Модифицированные углеводами соединения общей формулы I:
K O
, (I)
NH L
AA1 AA2
C
где К - незамещенный или региоселективно модифицированный углеводный остаток,
R1
S
L – группа
N
N
HN
или
HN
,
N
где R1 - хлор или гидрокси-С1-С6-алкиламино,
АА1 - остаток аминокислоты в D- или L-конфигурации, который может иметь защитные группы или группу
K O
NH L ,
в которой K и L независимо от K и L, содержащихся в формуле I в группе
BY 5307 C1
K O
NH L ,
могут иметь вышеуказанные значения, или прямая связь,
АА2 – остаток аминокислоты в D- или L-конфигурации, который может иметь защитные группы, или прямая связь,
С – цитостатический остаток, выбранный из остатка цитостатического средства и остатка производного цитостатического средства,
его изомеры или соли.
2. Модифицированное углеводами соединение по п. 1, отличающееся тем, что L,
AA1, AA2 и C имеют указанные в п. 1 значения, К – углеводный остаток общей формулы II:
BY 5307 C1
A
O
O
,
(II)
2
4
R
R
R
3
где А - метил, гидроксиметил, С1-С6-алкоксиметил или карбокси-С1-С6-алкилоксиметил,
R2, R3 и R4 отдельно или вместе означают водород, гидрокси, С1-С6-алкилокси, гидрокси-С1-С6-алкилокси, карбокси-С1-С6-алкилкарбонилокси, сульфат или галоген, или два из
R2, R3 и R4 вместе означают эпоксигруппу,
его изомеры или соли.
3. Модифицированное углеводами соединение по п. 1, отличающееся тем, что К, L,
AA1 и AA2 имеют указанные в п. 1 значения, C - производное хинолонкарбоновой кислоты
(а, б, в или г), батрацилин, камптотецин, доксорубицин или мелфалан, его изомеры или
соли.
4. Модифицированное углеводами соединение по п. 1, отличающееся тем, что К, L,
AA2 и C имеют указанные в п. 1 значения, AA1 – остаток аминокислоты, выбранный из
глицина, аланина, валина, лизина, аспарагиновой кислоты, глутаминовой кислоты, орнитина, тирозина и серина, в D- или L-конфигурации, который может быть замещен группой
K O
,
NH L
где К и L имеют указанные в п. 1 значения, или прямая связь, его изомеры или соли.
5. Модифицированное углеводами соединение по п. 1, отличающееся тем, что К, L,
AA1 и C имеют указанные в п. 1 значения, AA2 - остаток аминокислоты, выбранной из
глицина, аланина, лизина, орнитина, диаминопропионовой кислоты и серина, в D- или Lконфигурации, или прямая связь, его изомеры или соли.
6. Модифицированное углеводами соединение по п. 1, отличающееся тем, что К, L,
AA1 и AA2 имеют указанные в п. 1 значения, C – остаток общей формулы III:
NH
Q,
N
(III)
R6
где Q - остаток общей формулы
X2
X
O
1
COOH
Y
N
где Y - C-R5, где R5 – водород, галоген или метокси,
X1 - водород или галоген,
X2 - водород, амино или остаток общей формулы
,
O
X3
COOH
N
3
H3C
где X - галоген,
R6 - водород или С1-С3-алкил,
2
,
S
BY 5307 C1
пунктирная линия означает двойную связь в положении 4-5 или 5-6,
его изомеры или соли.
7. Цитостатическое средство, содержащее активное вещество и целевые добавки, отличающееся тем, что в качестве активного вещества содержит соединение по любому из
пп. 1-6 в эффективном количестве.
(56)
EP 0365956 A2, 1990.
EP 0501250 A1, 1992.
WO 91/12006 A2.
US 4757072 A, 1988.
Изобретение относится к новым цитостатическим средствам, специфичным к опухолям, в
частности к модифицированным углеводами соединениям цитостатической активности.
Химиотерапия при опухолевых заболеваниях сопровождается в большинстве случаев
серьезными побочными действиями, обусловленными токсичностью химиотерапевтических средств в отношении пролиферирующих клеток других тканей. Уже много лет ученые занимаются проблемой улучшения селективности применяемых активных начал.
Интенсивно разрабатывается синтез пролекарств, которые более или менее селективно
высвобождаются в целевой ткани, например, в результате изменения значения рН (см.
Tietze и др., например, патент DE № 4 229 903), с помощью ферментов (например, глюкуронидаз; см. Jacquesy и др., заявку ЕР № 511 917, Bosslet и др., заявку ЕР № 595 133) или
антитело-ферментных конъюгатов (см. Bagshawe и др., заявку WO № 88/07378, Senter и
др., патент США № 4 975 278, Bosslet и др., заявку ЕР № 595 133). Проблематичными при
этом оказываются, среди прочего, недостаточная стабильность конъюгатов в других тканях и органах и, в частности, повсеместное распределение активного начала, происходящее после внеклеточного высвобождения активного начала в опухолевой ткани.
Выраженная структура лектинов на поверхности опухолевых клеток (см. Gabius в источнике Onkologie 12, 1989 г., стр. 175) предоставляет принципиальную возможность путем связывания соответствующих компонентов углеводов с цитостатическими средствами
целенаправленно воздействовать на опухолевые клетки. Эта перспектива ограничивается
тем, что и в других тканях, в частности в печени, имеются лектины сходной специфичности
в отношении углеводов (например галактозы, лактозы, маннозы, N-ацетил-глюкозамина,
фукозы и т.д.) (см. Ashwell и др. в источнике Annu. Rev. Biochem. 46, 1982 г., стр. 531;
Stahl и др. в источнике Proc. Natl. Acad. Sci. USA 74, 1977 г., стр. 1521; Hill и др. в источнике J. Biol. Chem. 262, 1986 г., стр.7433; Jansen и др. в источнике J. Biol. Chem. 266, 1991 г.,
стр. 3343). Поэтому следует ожидать значительного накопления содержащих активное начало гликоконъюгатов в печени и в других богатых лектинами органах, если применяют
такие немодифицированные сахара.
Гетероциклический амин батрацилин формулы 1 проявляет хорошее противоопухолевое действие в различных моделях рака кишки (см. патент США № 4 757 072).
3
BY 5307 C1
Пептидные конъюгаты формулы 1 с хорошим действием ин витро и благоприятными
свойствами растворимости (см. патент США № 4 180 343) при опыте на животных переносятся хуже, чем батрацилин. Описанные в заявке ЕР № 501 250 конъюгаты фукозы
сильно накапливаются в печени.
Хинолон-а формулы 2, 7-[(3aRS,4RS,7aSP)-4-aмино-1,3,3a,4,7,7a-гексагидро-изо-индол-2ил]-8-хлор-1-циклопропил-6-фтор-1,4-дигидро-4-оксо-3-хинолинкарбоновая кислота, наряду
с отличной антибактериальной активностью также обладает очень хорошим действием в
отношении различных клеточных линий опухолей (см. заявку ЕР № 520 240, заявку JP
№ 4 253 973). Этому противостоят, однако, значительные токсикологические проблемы,
такие как, например, генотоксичность, токсичность в отношении костного мозга, высокая
острая токсичность ин виво и т.д.
(хинолон-а)
Задачей изобретения является получение новых модифицированных углеводами соединений, обладающих сывороточной стабильностью, улучшенной клеточной и тканевой
селективностью, в частности в случае опухоли печени, и улучшенной растворимостью и
переносимостью.
Поставленная задача решается предлагаемыми модифицированными углеводами соединениями общей формулы I:
(I)
,
где К - незамещенный или региоселективно модифицированный углеводный остаток,
,
где R1 означает хлор или гидроксиалкиламино,
АА1 - остаток аминокислоты в D- или L-конфигурации, который может иметь защитные группы или группу
,
,
могут иметь вышеуказанные значения, или прямая связь,
АА2 - остаток аминокислоты в D- или L-конфигурации, который может иметь защитные группы, или прямая связь,
С - цитостатический остаток, остаток цитостатического средства или производного
цитостатического средства, и их изомеры и соли.
4
BY 5307 C1
Структурный элемент
в целом представляет собой спейсер, связывающий К и С.
Соединения формулы I могут иметься в стереоизомерных формах, например в виде
энантиомеров или диастереомеров, или в виде их смесей, например в виде рацемата. Изобретение относится к чистым стереоизомерам, а также их смесям.
В случае необходимости смеси стереоизомеров можно разделять известным образом
на единые стереоизомерные компоненты, например путем хроматографии или способов
кристаллизации.
Соединения формулы I могут также иметься в виде их солей. В общем, здесь можно
назвать соли с органическими или неорганическими основаниями или кислотами, а также
внутренние соли.
В число добавляемых кислот входят предпочтительно галогенированные водородные
кислоты, например хлористоводородная кислота и бромистоводородная кислота, в частности хлористоводородная кислота, далее фосфорная кислота, азотная кислота, серная кислота, моно- и бифункциональные карбоновые кислоты и гидроксикарбоновые кислоты,
такие как, например, уксусная кислота, малеиновая кислота, малоновая кислота, оксалевая
кислота, глюконовая кислота, янтарная кислота, фумаровая кислота, винная кислота, лимонная кислота, салициловая кислота, сорбиновая кислота и молочная кислота, а также
сульфокислоты, такие как, например, п-толуолсульфокислота, 1,5-нафталиндисульфокислота
или камфарная сульфокислота.
Физиологически невредные соли могут представлять собой металлические или аммониевые соли предлагаемых соединений, имеющие свободную карбоксильную группу.
Особенно предпочтительными являются, например, соли натрия, калия, магния или кальция,
а также аммониевые соли, которые производятся от аммиака или органических аминов,
таких как, например, этиламин, ди- или триэтиламин, ди- или триэтиноламин, дициклогексиламин, диметиламиноэтанол, аргинин, лизин, этилендиамин или фенэтиламин.
В первую группу предпочтительных модифицированных углеводами соединений общей формулы I входят соединения, у которых К - углеводный остаток формулы II:
A
O
O
R4
R2
,
(II)
R3
где А - метил, гидроксиметил, алкоксиметил, карбоксиалкилоксиметил,
R2, R3, R4 отдельно или вместе означают водород, гидроксил, алкилокси, гидроксиалкилокси, карбоксиалкилкарбонилокси, сульфат, или два из остатков R2, R3, R4 вместе означают эпоксигруппу,
L, AA1, АА2 и С имеют вышеуказанные значения, и их изомеры и соли.
Во вторую группу предпочтительных модифицированных углеводами соединений
общей формулы I входят соединения, у которых С - хинолонкарбоновая кислота (а, б, в и г),
батрацилин, камптотецин, доксорубицин, мелфалан,
К, L, AA1 и АА2 имеют вышеуказанные значения, и их изомеры и соли.
В третью группу предпочтительных модифицированных углеводами соединений общей формулы I входят соединения, у которых АА1 - остаток аминокислоты, производимый от глицина, аланина, валина, лизина, аспарагиновой кислоты, глутаминовой кислоты,
орнитина, тирозина, или серина в D- или L-конфигурации, который может быть связан с
дополнительной группой
5
BY 5307 C1
,
где К и L имеют вышеуказанные значения, или прямая связь,
К, L, AA2 и С имеют вышеуказанные значения, и их изомеры и соли.
В четвертую группу предпочтительных модифицированных углеводами соединений
общей формулы I входят соединения, у которых
АА2 - остаток аминокислоты, производимый от глицина, аланина, лизина, орнитина,
диаминопропионовой кислоты или серина в D- или L-конфигурации, или прямая связь,
К, L, AA1 и С имеют вышеуказанные значения, и их изомеры и соли.
В пятую группу предпочтительных модифицированных углеводами соединений общей формулы I входят соединения, у которых С означает остаток формулы III:
,
где Q - остаток формулы
X2
1
O
X
Y
COOH
,
N
где Y - С—R5, где R5 означает водород, галоген или метокси,
X1 - водород, галоген,
Х2 - водород, аминогруппа,
или остаток формулы
O
3
COOH
X
N
S
,
H3C
3
где Х означает галоген,
R6 означает водород, С1-С3-алкил,
К, L, AA1 и АА2 имеют вышеуказанные значения,
а штрихованная линия означает двойную связь в положении 4-5 или 5-6, и их изомеры и
соли.
Благодаря вышеупомянутой активности соединения формулы I могут представлять
собой активное вещество цитотоксического средства, являющегося дополнительным объектом изобретения. Данное цитотоксическое средство содержит еще обычные целевые
добавки, при этом оно содержит активное вещество в эффективном количестве.
Изобретение иллюстрируется следующими примерами.
6
BY 5307 C1
Примеры серии А Биологические опыты
Пример А.1
Тест торможения роста для определения цитотоксических свойств гликоконъюгатов батрацилина и хинолона-а
Клеточные линии SW 480 и НТ 29 (АТСС № CCL 228 и НВТ-38) толстого кишечника
человека и клеточную линию В 16 F 10 меланомы мыши выращивают в чашках Ру в буфере RPMI 1640, содержащем 10 % эмбриональной телячьей сыворотки. Затем обрабатывают трипсином и подают в буфер RPMI, содержащем 10 % эмбриональной телячьей
сыворотки, и далее культивируют до достижения 50000 клеток/мл. В каждую чашку микротитратора с 96 чашками подают 100 мкл клеточной суспензии и инкубируют в термостате в атмосфере двуокиси углерода при температуре 37 °С в течение суток. Потом
добавляют еще 100 мкл буфера RPMI и 1 мкл ДМСО с испытуемыми соединениями. Рост
проверяют после третьего и шестого дней. Для этого в каждую чашку наносят 40 мкл раствора МТТ (3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенилтетразолинбромида) с исходной концентрацией 5 мг/мл воды. Инкубируют в термостате в атмосфере двуокиси углерода при
температуре 37 °С в течение 5 часов, после чего буфер отсасывают и к каждой чашке добавляют 100 мкл изопропанола. После 30-минутного встряхивания 100 мкл воды экстинкцию измеряют при 540 нм с помощью прибора Titertek Multiskan MCC/340.
Цитотоксическое действие описанных гликоконъюгатов батрацилина в таблице 1а
приведено в качестве значения КТ50 (концентрация 50 %-ного торможения) для клеточных
линий SW 480 и НТ 29.
В таблице 1б сведены значения КТ50 гликоконъюгатов хинолона-а в отношении клеточных линий SW 480, НТ 29 и В 16 F 10.
Приведенные в таблицах 1а и 1б условные сокращения "n.g." и "n.d." означают, что
соответствующие концентрации не были определены
Таблица 1а
КТ50 [мкмол.]
KT50 [мкмол.]
Соединение
SW 480
НТ 29
Батрацилин
25
20
3.2
100
75
3.4
100
65
3.7
55
n.g.
3.9
40
55
3.10
100
125
3.11
85
n.g.
3.14
40
n.g.
3.18
15
n.g.
3.19
75
n.g.
3.20
100
n.g.
3.21
90
n.g.
3.23
50
n.g.
3.24
95
n.g.
3.26
50
n.g.
3.27
110
n.g.
3.28
60
n.g.
3.29
110
n.g.
3.30
>250
n.g.
3.33
90
70
4.1
25
30
7
BY 5307 C1
Соединение
4.3
4.4
4.5
4.6
4.7
4.8
4.9
4.10
4.11
4.12
5.1
5.2
5.6
5.8
5.9
5.12
5.13
5.14
5.15
5.19
5.20
5.21
5.22
5.23
6.2
6.3
6.7
6.10
6.12
6.15
6.20
6.21
6.23
6.25
6.28
6.29
6.30
6.32
6.34
6.35
6.36
6.40
6.43
6.46
6.59
6.60
6.80
КТ50 [мкмол.]
SW 480
20
30
15
10
15
50
20
30
15
15
55
20
>250
100
70
20
20
20
>250
35
50
60
30
25
40
70
60
50
35
>250
80
150
107
50
40
95
60
60
50
20
70
170
90
120
50
50
40
8
Продолжение табл. 1а
KT50 [мкмол.]
НТ 29
20
25
15
10
15
40
30
30
15
9
45
55
n.g.
>250
70
20
40
30
70
25
30
80
40
35
50
105
>250
50
50
>250
n.g.
n.g
45
40
25
130
70
60
n.g.
n.g.
70
60
80
100
50
40
25
BY 5307 C1
Таблица 1б
КT50 [мкмол.]
KT50 [мкмол.]
КТ50 [мкмол.]
Соединение
SW 480
НТ 29
В 16 F 10
10.1
50
>250
15
10.2
4
3
5
10.3
5
4
0,7
11.2
30
n.g.
9
11.6
8
9
5
11.7
12
13
15
11.8
12
16
15
11.9
12
12
9
11.10
8
20
2
11.16
10
10
1,5
11.17
75
75
8
11.18
4,5
3,5
0,5
12.1
1
1,5
0,1
12.2
4
n.d.
0,8
12.3
2
n.d.
0,3
12.5
1
4
0,2
12.6
4
7
0,3
12.7
60
>250
20
12.8
8
7
1
12.9
4
8
2
12.10
15
15
4
12.11
2
2
0,5
12.12
8
13
0,5
12.13
35
100
1
12.14
1
2
0,3
12.15
0,3
1
0,1
14.1
0,8
1
1,5
14.2
1
6
1,5
14.3
8
4
4
14.4
1,5
1
0,4
15.1
20
20
2
15.2
50
70
15
16.1
50
100
200
16.2
50
60
80
17.1
10
5
5
17.2
4
4
4
18.1
0,03
0,01
0,2
18.2
0,02
0,02
0,2
18.4
0,02
0,02
0,3
18.5
0,2
0,2
1
18.9
0,08
0,06
0,7
18.14
0,015
0,01
0,08
Зависимость биологического действия от углеводов дополнительно доказана неактивностью сравнительных соединений серий примеров 5, 6 и 11 N-[Nα,Nε-бис-(4-гидроксифениламино-тиокарбонил)-лизил]-батрацилин и N-[Nα,Nε-бис-(4-гидроксифениламинотиокарбонил)-лизил-D-аланил]-батрацилин или N-[Nα,Nε-бис-(4-гидроксифениламинотиокарбонил)-D-лизил-хинолон-а (значения КТ50 > 250).
9
BY 5307 C1
Пример А.2
Испытание ин витро на расщепляемость гликоконъюгатов
Кинетика расщепления с применением крови человека
1,225 мл крови человека вместе с 1,25 мл фосфатно-солевого буферного раствора и
25 мкл маточного раствора субстрата (1 мг/мл в 3 % ДМСО в фосфатно-солевом буферном растворе) инкубируют при температуре 37 °С. Через 1 час и через 24 часа отбирают
пробы в количестве по 1 мл, смешивают с 1 мл этанола, после чего оставляют стоять при
4 °С в течение 20 минут. Центрифугируют 5 минут при 3500 об/мин, после чего отбирают
100 мкл надосадочной жидкости для анализа с помощью высокоскоростной колоночной
жидкостной хроматографии.
Кинетика расщепления с применением клеток
2,25 мл фосфатно-солевого буферного раствора вместе с 225 мкл клеточной суспензии
(30 мг/мл) и 25 мкл маточного раствора субстрата (1 мг/мл в 3 % ДМСО в фосфатносолевом буферном растворе) инкубируют при температуре 37 °С. Через 1 час и через 24
часа отбирают пробы в количестве по 1 мл, смешивают с 1 мл этанола, после чего оставляют стоять при 4 °С в течение 20 минут. Центрифугируют 5 минут при 3500 об/мин, после
чего отбирают 100 мкл надосадочной жидкости для анализа с помощью высокоскоростной колоночной жидкостной хроматографии.
Условия высокоскоростной колоночной жидкостной хроматографии:
Хроматограф:
прибор фирмы Waters
Колонна:
марки Bischoff Hypersil OCS RP 18 5 мкм 250×4 мм
Элюент:
А: 10 ммол. буфера фосфата калия, рН = 4,5
Б: смесь 80 % ацетонитрила и 20 % воды
Скорость подачи:
1 мл/мин
Длина волны:
372 нм
Градиент:
0 мин
10 % Б
10 мин
60 % Б
15 мин
60 % Б
18 мин
10 % Б
20 мин
60 % Б
Элюент конъюгатов хинолона-а:
А:
100 % метанола
Б:
10 ммол. буфера фосфата калия, рН = 2,2
10 ммол. гептансульфокислоты
Таблица 2а
Пример
3.4
3.9
4.4
5.9
6.2
6.12
7.3
Расщепление
в крови человека [ %]
1ч
24 ч
не опред.
не опред.
0
54*
0
0
0
0
не опред.
не опред.
не опред.
не опред.
0
0
Расщепление
в SW-480 [ %]
1ч
24 ч
74*
не опред.
28*
100*
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
* Продуктом расщепления является N-[D-аланил]-батрацилин.
10
Расщепление
в гепатоме [ %]
1ч
24 ч
98*
не опред.
32*
100*
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
BY 5307 C1
Таблица 2б
Пример
11.2
11.6
11.7
12.1
12.3
12.8
Расщепление в крови че- Расщепление в SW-480
ловека [ %]
[ %]
1ч
24 ч
1ч
24 ч
0
0
0
0
0
11
0
8
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
Расщепление в гепатоме
[ %]
1ч
24 ч
0
0
0
12
0
0
0
0
0
0
0
0
Пример А.3
Испытание по распределению в органах
Во всех экспериментах были использованы атимические голые мыши штамма NMRI
nu/nu, которых разводят в лаборатории "Drug Development Laboratory, Oncotest GmbH"
проф. X.X. Фибига в г. Фрайбурге. Животных держали в поликарбонатных клетках (торговой марки Макролон) в условиях ламинарного потока. В качестве опухолевого материала употребляли ткань клеточной линии SW 480, которая предварительно несколькими
операциями переноса была введена в мыши.
Голым мышам в возрасте 6-8 недель подкожно имплантировали в бока по двум опухолям на животное. До рандомизации животных держали в течение 26-27 суток. Тогда
средний размер опухолей составлял 500 мг и радиус опухолей - около 10 мм.
Сама фармакокинетика произошла следующим образом: голым мышам инъецировали
испытуемое соединение, после чего мышей хранили еще в клетках до отбора пробы через
полчаса или 4 часа. Отбор пробы начался с взятия крови. Для этого мышь наркотизировали эфиром в течение 30-60 сек. Через 0,5 ч или же 4 ч после введения соединения открыли
брюшную полость, мышь в наркозе обескровливали через вену Vena cava caudalis в течение 1-2 минут и затем умерщвляли путем перелома шейного отдела позвоночника. В результате этого происходила остановка системы кровообращения и прекращение перфузии
органов. В дальнейшем отдельные органы освобождали и вынимали, что длилось около 5
минут. Непосредственно после этого взвесили пробы органов и затем остальное тело и
замораживали в жидком азоте.
Соединение "конъюгат 1" внутрибрюшинно вводили в количестве 300 мг/кг веса тела,
а соединение "конъюгат 2" вводили в количестве 100 мг/кг в хвостовую вену. При проведении опыта для каждого соединения и каждой дозы были использованы по 5 животным.
Результаты распределения конъюгата 1 приведены в таблице 3, а конъюгата 2 - в таблице 4.
А. Калибровка
5, 10, 50, 100 и 200 мкг соединения, растворенного в смеси этанола и воды в объемном
соотношении 1:1, добавляли к 1 г печени коровы. Затем измельчали с помощью 1 г песка
и 2,5 мл охлажденной смеси этанола и воды в объемном соотношении 1:1 и пробы центрифугировали в течение 2 минут при 3500 об/мин. Надосадочную жидкость удаляли, остаток еще раз перемешивали с 2,5 мл смеси этанола и воды, центрифугировали и
супернатанты объединяли. Отбирали по 100 мкл и подвергали анализу с помощью высокоскоростной колоночной жидкостной хроматографии.
Условия высокоскоростной колоночной жидкостной хроматографии:
Хроматограф:
прибор фирмы Waters
Колонна:
марки Bischoff Hypersil ODS RP 18 5 мкм 250×4 мм
11
BY 5307 C1
Элюент:
Градиент:
Скорость подачи:
Длина волны:
А: смесь 80 % ацетонитрила и 20 % воды
Б: 10 ммол. буфера фосфата калия, рН = 4,5
0 мин
90 % Б
10 мин 40 % Б
15 мин 40 % Б
18 мин 90 % Б
20 мин 90 % Б
1 мл/мин
372 нм
Б. Обработка органов
Обработку осуществляли аналогично А, причем все органы обрабатывали 2,5 мл смеси этанола и воды и экстрагировали.
В. Обработка крови
Отобранное количество крови перемешивали с 2 мл смеси этанола и воды в объемном
соотношении 1:1, центрифугировали в течение 2 минут при 3500 об/мин и надосадочную
жидкость декантировали. К остатку еще раз добавляли 2 мл смеси этанола и воды в объемном соотношении 1:1, центрифугировали и супернатанты объединяли. Отбирали по 100
мкл объединенных супернатантов и подвергали анализу с помощью высокоскоростной
колоночной жидкостной хроматографии в условиях, приведенных под п. А.
Конъюгат 1 (заявка ЕР № 501 250)
Конъюгат 2 (пример 3.9)
12
BY 5307 C1
Таблица 3
Орган
Кровь
Опухоль
Печень
Почка
Мозг
Соединение
Конъюгат 1
Батрацилин
Конъюгат 1
Батрацилин
Конъюгат 1
Батрацилин
Конъюгат 1
Батрацилин
Конъюгат 1
Батрацилин
Анализ проб органов
Средняя величина после
1 ч (мкг/г органа)
31,2
56,6
770
34,1
81
26,1
-
Средняя величина после
4 ч (мкг/г органа)
24,4
126
22,4
78,4
27,5
-
Таблица 4
Орган
Кровь
Опухоль
Печень
Почка
Мозг
Анализ проб органов
Соединение Средняя величина после
0,5 ч (мкг/г органа)
Конъюгат 2
6,5
Батрацилин
Конъюгат 2
2,0
Батрацилин
2,5
Конъюгат 2
0,9
Батрацилин
Конъюгат 2
17,5
Батрацилин
10,7
Конъюгат 2
Батрацилин
-
Средняя величина после
4 ч (мкг/г органа)
3,12
1,2
0,5
0,8
-
Пример А.4
Определение острой токсичности гликоконъюгатов батрацилина (разовое введение)
Острую токсичность производных батрацилина определяли на голых мышах штамма
nu/nu.
Внутривенно введенные соединения один раз инъецировали мышам в виде водных
растворов, а внутрибрюшинно введенные соединения - в виде растворов ДМСО в концентрациях до 400 мг соединения на кг мыши.
Переносимую разовую дозу вычисляли на основе потери веса животных до 21-го дня
после введения соединения и на основе числа выживших животных.
Переносимые разовые дозы соединений приведены в таблице 5.
В случае соединений примеров 3.16, 3.33, 3.9, 6.12, 6.14, 6.2, 6.81, 8.2 доза составляла
свыше 200 мг соединения на кг мыши. В случае соединений примеров 3.33, 6.12, 6.14, 6.2,
6.81 даже при дозе 400 мг/кг острой токсичности не было найдено.
В отличие от этого не содержащий сахара лизил-D-аланил-батрацилин примера 2.13
проявлял заметную токсичность уже при разовых дозах, составлявших от 25 до 50 мг на
кг мыши.
13
BY 5307 C1
Таблица 5
Максимально переносимая разовая доза производных батрацилина
и производных хинолона-а
Пример
Переносимая разовая доза в мг/кг мыши
Внутрибрюшинное введение Внутривенное введение
2.13
50
25
3.4
200
< 100 (2 животных погибли)
3.9
200
200
3.16
> 200
не опред.
3.33
не опред.
> 400
6.2
> 400
не опред.
6.12
не опред.
> 400
6.14
> 400
не опред.
6.81
не опред.
> 400
8.2
> 200
не опред.
Хинолон-а
не опред.
< 25
12.3
не опред.
> 200
Пример А.5
Определение острой токсичности после многократного введения
Часть соединений ввели внутривенно, другую часть - внутрибрюшинно, либо ежедневно в дни с 1-4 и с 7-10, либо в дни 1, 5 и 9. Дозировки составляли 400, 200 и 100 мг/кг
в день. Анализ осуществляли на основе потери веса животных до 21-го дня и на основе
числа выживших животных. Для проведения опыта для каждого соединения и каждой дозы были использованы по 5 животным. Результаты приведены в таблице 6.
Таблица 6
Максимально переносимая разовая доза при многократном введении
Пример
Введение
3.9
внутривенное
3.33
6.2
внутривенное
внутрибрюшинное
6.12
внутривенное
6.14
6.81
внутрибрюшинное
внутривенное
Батрацилин внутрибрюшинное
Дозировка в дни
1-4, 7-10
1-4
1, 5, 9
1-4, 7-10
1, 5, 9
1-4,7-10
1, 5, 9
1, 5, 9
1-4, 7-10
1, 5, 9
1, 5, 9
Макс. перенос. доза
мг/кг в день
~ 50
~ 100
> 400
~ 400
> 400
> 400
> 400
> 400
~ 200
> 400
~ 100
Пример А.6
Кроветворная активность гликоконъюгатов хинолона-а по сравнению с соответствующим активным началом
Материал и методы
Испытание ин витро:
Клетки костного мозга вымывали из бедра мыши. 105 клеток в среде марки McCoy 5A
(0,3 % агара) вместе с рекомбинантным мышиным колоние-стимулирующим фактором
(GM-CSF) (торговый продукт Гензиме; образование колоний основных клеток) и соеди14
BY 5307 C1
нениями (10-4-100 мкг/мл) инкубировали при температуре 37 °С в атмосфере, содержащей
7 % двуокиси углерода. Спустя 7 дней определили число колоний (< 50 клеток) и кластеров (17-50 клеток).
Испытание ин виво:
Мышам подкожно ввели 1, 3, 10, 30 мг/кг соединений. В различные промежутки времени (через 3, 24, 48, 72 ч. после инъецирования) удаляли бедра и выделяли клетки костного
мозга. 2×105 клеток вышеописанным образом инкубировали вместе с рекомбинантным
мышиным колоние-стимулирующим фактором (GM-CSF) и спустя 7 дней определили
число колоний и кластеров.
Результаты:
По данным таблицы 7 испытанные гликоконъюгаты по сравнению с хинолоном-а проявляли уменьшенное на фактор 105-103 торможение пролиферации основных клеток костного мозга.
И при испытании ин виво по сравнению с хинолоном-а торможения пролиферации
основных клеток соединением примера 12.3 в дозировке до 30 мг/кг не наблюдалось. Уже
при введении 3 мг/кг хинолона-а было индицировано массивное подавление пролиферации основных клеток (см. рис. 1).
Таблица 7
Индуцированная колоние-стимулирующим фактором пролиферация
основных клеток костного мозга мыши
Примеры Хинолон-а
11.2
11.7
12.1
12.3
12.6
12.8
14.1
14.2
14.4
KT50 [мкг/мл] 0,0002
22,5
2,9
0,21
0,27
0,3
0,3
2,9
3,6
3,6
Пример А.7
Противоопухолевая активность конъюгатов хинолона-а
Активность ин витро гликоконъюгатов хинолона-а определяли на опухолевых ксенотрансплантатах человека в системе двухслойного культивирования на мягком агаре по
Гамбургеру и Салмону (см. источник Science 197, стр. 461-463).
Твердые опухоли сначала выращивали в атимической голой мыши штамма NMRI
nu/nu, выделяли операцией и раздробляли механическим способом. Отдельные клетки получали потом в результате инкубации при 37 °С в течение 30 минут в смеси ферментов, а
именно 0,05 % коллагеназы, 0,07 % ДНКазы и 0,1 % гиалуронидазы в буфере RPMI. Клетки
два раза промывали, после чего их просеивали через сито с размером отверстий 200 мкм и
20 мкм.
Применяли следующий способ культивирования:
Нижний слой содержал 0,2 мл модифицированной по способу Дульбекко среды Искова с 20 % эмбриональной телячьей сыворотки и 0,7 % агара. На этот слой наносили 40000200000 клеток в 0,2 мл той же самой среды и 0,4 % агара в чашки микротитратора с 24
чашками. Цитостатические соединения добавляли в 0,2 мл среды.
Культуры инкубировали в атмосфере, содержащей 7 % двуокиси углерода, при температуре 37 °С в течение 6-15 дней. Потом выросшие колонии подвергали количественному
15
BY 5307 C1
анализу в инвертированном микроскопе, при этом за 24 часа до анализа живущих колоний
подкрашивали красителем на основе хлористого тетразола.
Активность активного начала выражается в % выживших колоний по сравнению с
числом колоний необработанных чашек (Т/С = число колоний обработанных чашек×100/число колоний необработанных чашек).
Соединение является активным, если значение Т/С ≤ 30 %.
В таблице 8 это значение приведено в качестве значения КТ70 в мкг/мл.
Таблица 8
Пример
CXF 280
НТ 29
SW 480
LXFL 529
LXFS 538
MEXF 989
OVXF 899
OVXF 1023
11.7
> 100
56
18
4
18
3
234
136
12.1
70
6
8
0,9
0,4
< 0,3
45
12
КТ70 [мкг/мл]
12.3
5
5
11
2
0,5
< 0,3
162
10
12.5
< 0,3
11
10
2
< 0,3
0,5
55
9
Хинолон-а
6
20
3
3
< 0,3
< 0,3
2
0,5
Пример А.8
Испытания ин виво
Метод:
В день 0 мышам инокулируют 5×106 опухолевых клеток типа B16F10. У животных
развиваются твердые брюшинные опухоли, после чего им ежедневно вводят испытуемые
соединения или же только носитель для них. В контрольной группе обычно погибает 50 %
животных в период с 14 по 20 день. Испытуемые соединения вводят в буфере или в системе органических растворителей, состоящей из 20 % метанола и 20 % диметилсульфоксида в 0,7 %-ном растворе поваренной соли.
Дача носителя не влияет на срок выживания животных. Терапевтический успех вытекает из продления времени выживания обработанных животных. Переносимость соединений анализируют параллельно на животных, не имеющих опухолей. По результатам
переносимости и продления срока выживания можно ориентировочно определить терапевтический индекс.
Таблица 9
% выживших животных
Контроль
11.12
1 мг/кг
11.12
100 мг/кг
Хинолон-а
0,1 мг/кг
Этопозид
5 мг/кг
День 0
100
100
День 20
70
90
День 25
30
60
День 30
10
30
День 35
10
30
100
100
100
90
90
100
100
100
60
40
100
90
80
80
70
Таблица 9 показывает терапевтическую активность соединения примера 11.12 на мышах, которым трансплантировали опухоль типа B16F10.
16
BY 5307 C1
Пример А.9
Торможение ин виво роста опухоля при применении модели голой мыши
Материал:
Для всех экспериментов ин виво для испытания торможения роста опухоли использовали атимических голых мышей штамма NMRI nu/nu. Выбранный крупноклеточный рак
легкого типа LXFL 529 выращивали в голых мышах серийными переносами. Человеческое происхождение опухоли было доказано изоферментативными и иммуногистохимическими методами.
Проведение эксперимента:
Голым мышам штамма nu/nu в возрасте 6-8 недель опухоль подкожно имплантировали в оба бока. В зависимости от времени роста с удвоением объема лечение начали как
только радиус опухолей достиг 5-7 мм. Мышей распределяли путем рандомизации по
группе лечения и контрольной группе (5 мышей в каждой группе с 8-10 подвергающимися анализу опухолями). Все отдельные опухоли контрольной группы росли прогрессивно.
Размеры опухолей измеряли с помощью раздвижного калибра в двух измерениях.
Объем опухоли, который находится в хорошем соотношении с числом клеток, употребляли затем для всех анализов. Объем определяли по формуле "длина × ширина × ширина /2"
([a × b2]/2, а или b означают два прямоугольно расположенных диаметра).
Значения относительного объема опухоли каждой отдельной опухоли определяли путем деления размера опухоли в день Н на размер опухоли в день 0 (в момент рандомизации). Средние значения относительного объема опухоли употребляли для дальнейшего
анализа.
Торможение увеличения объема опухоли (объем опухолей в испытуемой группе /контрольной группе, Т/С, в %) представляло собой окончательную измеренную величину.
Лечение:
Все соединения давали по интермиттирующему плану соответственно в день 1, 5 и 9.
Все соединения вводили внутрибрюшинно при использовании воды в качестве растворителя.
Таблица 10
Терапия
Контроль
Доза а)
Время выживания
Число
[мг/кг/день]
[число суток]
опухолей
-
12.6
100
12.8
50
12.14
25
19
> 21
14
23
26
> 26
> 21
> 21
> 21
23
19
> 26
Относительный
объем опухоли
[ % дня 0]б)
Оптимальный
Т/С б)
> 21
> 21
10
1552
100 %
> 26
> 26
8
300,7
19,4 %
> 21
> 21
9
502,2
32,3 %
> 26
26
8
519,5
33,5 %
а)
максимально переносимая доза
в день 19
Соединения камптотецина в данном опыте проявляли, как правило, сравнимую или
лучшую активность.
б)
17
BY 5307 C1
Примеры серии Б Примеры получения соединений
Пример 1.1
п-аминофенил-2-O-метил-β
β-L-фукозид
1.1.а) п-нитрофенил-3,4-O-изопропилиден-β
β-L-фукозид
Раствор 750 мг (2,63 ммоль) п-нитрофенил-β-L-фукозида в 40 мл смеси диметилформамида и диоксана в соотношении 1:2 при 0 °С смешивают с 65 мг п-толуолсульфокислоты и 5 раз через каждые 30 минут 100 мкл 2-метоксипропена. После перемешивания
при 20 °С в течение 16 часов сгущают и очищают путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана и метанола в соотношении 99:1. После сгущения получают 710 мг (83 %) белого твердого вещества.
1.1.б) п-нитрофенил-2-O-метил-3,4-O-изопропилиден-β
β-L-фукозид
100 мг (0,307 ммоль) соединения примера 1.1.а) смешивают с 96 мкл метилйодида
в 10 мл тетрагидрофурана, после чего порциями смешивают с 11 мг 80 %-ного гидрида
натрия. После перемешивания при 20 °С в течение 3 часов к смеси добавляют еще 96 мкл
метилйодида и 11 мг гидрида натрия. После дальнейшего перемешивания при 20 °С в течение 16 часов к смеси добавляют небольшое количество воды и 100 мл дихлорметана.
Реакционную смесь дважды встряхивают вместе с водой, органическую фазу сгущают и
продукт очищают путем колоночной хроматографии с применением в качестве элюента
смеси петролейного эфира и этилацетата в соотношении 8:1. Выход: 78 мг (75 %).
1.1) п-аминофенил-2-O-метил-β
β-L-фукозид
78 мг (0,23 ммоль) п-нитрофенил-2-O-метил-3,4-O-изопропилиден-β-L-фукозида перемешивают при 20 °С в течение 16 часов в 3 мл 80 %-ной уксусной кислоты. Потом уксусную кислоту удаляют в вакууме, реакционную смесь смешивают с 10 мл метанола и
после добавки двуокиси платины гидрируют в атмосфере водорода при незначительном
избыточном давлении. Суспензию фильтруют на силикате марки Celite, после чего фильтруемый материал промывают метанолом. После очистки путем хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана и метанола в соотношении 97,5:2,5
получают 77 мг (80 %) целевого продукта. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 9:1, Rf = 0,42.
Пример 1.2
п-аминофенил-3-O-метил-β
β-L-фукозид
1.2.а) п-нитрофенил-3-O-метил-β
β-L-фукозид
6 г (21 ммоль) п-нитрофенил-β-L-фукозида в 300 мл абсол. метанола смешивают с
7,84 г (31,5 ммоль) окиси дибутилолова и нагревают с обратным холодильником в течение
двух часов. Затем сгущают, остаток сушат и подают в 300 мл диметилформамида. После
добавки 15,7 мл метилйодида реакционную смесь перемешивают в течение 40 часов при
70 °С. Растворитель удаляют в вакууме и остаток подают в 300 мл дихлорметана. Суспензию фильтруют, остающийся раствор снова сгущают и подвергают флеш-хроматографии
18
BY 5307 C1
с применением в качестве элюента смеси дихлорметана и метанола в соотношении 99:1.
После сгущения получают 3815 мг (61 %) целевого продукта.
1.2) п-аминофенил-3-O-метил-β
β-L-фукозид
3,81 г (12,73 ммоль) п-нитрофенил-3-O-метил-β-L-фукозида гидрируют аналогично
примеру 1.1. Выход: 3 г (88 %). Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 9:1; Rf = 0,53.
Пример 1.3
п-аминофенил-3-О-метил-β
β-L-фукозид
Соединение получают аналогично примеру 1.2 из п-нитрофенил-α-L-фукозида. Выход: 63 % через две стадии. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 9:1; Rf = 0,39.
Пример 1.4
п-аминофенил-4-О-метил-β
β-L-фукозид
1.4.а) п-нитрофенил-2-O-бензил-4-O-ацетил-β
β-L-фукозид
1 г (3,5 ммоль) п-нитрофенил-β-L-фукозида в 100 мл абсол. тетрагидрофурана смешивают с 31 мг п-толуолсульфокислоты и 1134 мг (7 ммоль) триэтилортоацетата. После перемешивания в течение 15 минут при 20 °С растворитель отгоняют в вакууме. Остаток
подают в 50 мл тетрагидрофурана и 3 мл диметилформамида, после чего смешивают с
4165 мкл бензилбромида и 210 мг 60 %-ного гидрида натрия. После перемешивания при
20 °С в течение часа к смеси добавляют 10 мл 80 %-ной уксусной кислоты, сгущают и остаток очищают путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана и метанола в соотношении 99:1. После сгущения и сушки получают 1236 мг
(85 %) целевого продукта.
1.4.б) п-нитрофенил-2-O-бензил-3-O-ацетил-4-O-метил-β
β-L-фукозид
1000 мг (2,39 ммоль) п-нитрофенил-2-O-бензил-4-O-ацетил-β-L-фукозида растворяют
в 60 мл бензола. После добавки 2988 мкл метилйодида и 1109 мг окиси серебра реакционную смесь нагревают с обратным холодильником в течение 8 часов. Полученную смесь
разделяют на компоненты путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента
смеси дихлорметана и метанола в соотношении 99:1. Выделяют 239 мг (23 %) пнитрофенил-2-О-бензил-3-О-ацетил-4-O-метил-β-L-фукозида и 653 мг (63 %) изомерного
п-нитрофенил-2-О-бензил-3-О-метил-4-O-ацетил-β-L-фукозида в виде белого твердого
вещества.
1.4) п-аминофенил-4-O-метил-β
β-L-фукозид
224 мг (0,52 ммоль) п-нитрофенил-2-O-бензил-3-O-ацетил-4-О-метил-β-L-фукозида
растворяют в 20 мл метанола и смешивают с 390 мкл 1-н. раствора метилата натрия. После перемешивания в течение 16 часов при 20 °С нейтрализуют 80 %-ной уксусной кислотой, сгущают и подают в дихлорметан. Органическую фазу промывают 1-н. раствора
бикарбоната натрия и водой, сушат и сгущают. Остаток подают в 20 мл метанола и гидри19
BY 5307 C1
руют над палладием на активном угле аналогично примеру 1.1. После сгущения продукт
подают в воду и подвергают лиофилизации. Выделяют 119 мг (88 %) белого аморфного
твердого вещества. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 9:1; Rf = 0,38.
Пример 1.5
п-аминофенил-3-О-н-пропил-β
β-L-фукозид
1.5.а) п-нитрофенил-2-О-бензил-3-O-н-пропил-4-O-ацетил-β
β-L-фукозид
Аналогично примеру 1.4.б) соединение примера 1.4.а) подвергают взаимодействию с
пропилйодидом с получением изомерных продуктов 3- и 4-пропилирования. В результате
разделения путем хроматографии получают п-нитрофенил-2-О-бензил-3-O-н-пропил-4-Oацетил-β-L-фукозид (выход: 49 %) и п-нитрофенил-2-O-бензил-3-O-ацетил-4-O-н-пропилβ-L-фукозид (выход: 29 %).
1.5.б) п-аминофенил-3-O-н-пропил-β
β-L-фукозид
Фракцию 1 примера 1.5.а) подвергают реакции аналогично примеру 1.4 с получением
78 % целевого соединения. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола
в соотношении 9:1; Rf = 0,42.
Пример 1.6.
п-аминофенил-3-десокси-β
β-L-фукозид
1.6.а) п-нитрофенил-3,6-дидесокси-3-хлор-4-O-ацетил-β
β-L-гулозид
1 г (3,5 ммоль) п-нитрофенил-β-L-фукозида в 100 мл тетрагидрофурана смешивают с
31 мг п-толуолсульфокислоты и 1134 мг (7 ммоль) триэтилортоацетата. После перемешивания в течение 15 минут при 20 °С растворитель отгоняют в вакууме. Добавляют 100 мл
насыщенного раствора хлористого водорода в дихлорметане. После 10-минутной реакции
сгущают и продукт очищают путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана и метанола в соотношении 99:1. Получают 793 мг (65 %) целевого продукта. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в
соотношении 97,5:2,5; Rf = 0,36.
1.6.б) п-нитрофенил-3,6-дидесокси-3-хлор-β
β-L-гулозид
375 мг (1,08 ммоль) п-нитрофенил-3,6-дидесокси-3-хлор-4-O-ацетил-β-L-гулозида растворяют в 25 мл метанола и смешивают с 10 каплями 1-н. раствора метилата натрия. По истечении 20 минут подкисляют уксусной кислотой, сгущают и распределяют между 400 мл
дихлорметана и 60 мл воды. Органическую фазу сушат, сгущают и осаждают из смеси дихлорметана и диэтилового эфира. Получают 315 мг (96 %) целевого продукта.
1.6.) п-аминофенил-3-десокси-β
β-L-фукозид
315 мг (1,04 ммоль) п-нитрофенил-3,6-дидесокси-3-хлор-β-L-гулозида растворяют в
40 мл метанола, смешивают с 200 мг палладия на активном угле и 290 мкл триэтиламина,
20
BY 5307 C1
после чего смесь гидрируют в течение 4 дней в атмосфере водорода при незначительном
избыточном давлении. Суспензию фильтруют, промывают, сгущают и продукт очищают
путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана и метанола в соотношении 97,5:2,5. Получают 160 мг (65 %) десокси-соединения. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 95:5; Rf = 0,18.
Пример 1.7
п-аминофенил-3,4-дидесокси-β
β-L-фукозид
400 мг (1,16 ммоль) п-нитрофенил-3,6-дидесокси-3-хлор-4-O-ацетил-β-L-гулозида примера 1.6.а) растворяют в 55 мл метанола, смешивают с 323 мкл триэтиламина и гидрируют
в атмосфере водорода при незначительном избыточном давлении над 10 %-ным палладием на активном угле. После перемешивания в течение 16 часов при 20 °С фильтруют на
силикате марки Celite, промывают, сгущают и подают в 100 мл метанола. К смеси добавляют 1,5 мл 1-н. раствора метилата натрия и перемешивают при комнатной температуре в
течение 16 часов. Нейтрализуют уксусной кислотой, сгущают и полученные продукты
разделяют путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана и метанола в соотношении 97,5:2,5. После сгущения соответствующих фракций и
переосаждения из смеси метанола и диэтилового эфира получают 120 мг (46 %) целевого
соединения. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 95:5; Rf = 0,31 и 77 мг (28 %) п-аминофенил-3-десокси-β-L-фукозида. Тонкослойная
хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 95:5; Rf = 0,18.
Пример 1.8
п-аминофенил-3,4-эпокси-β
β-L-фукозид
80 мг (0,23 ммоль) п-нитрофенил-3,6-дидесокси-3-хлор-4-О-ацетил-β-L-гулозида примера 1.6.а) подают в 10 мл метанола и смешивают с 345 мкл 1-н. раствора метилата натрия. После ультразвуковой обработки в течение часа подкисляют 80 %-ной уксусной
кислотой, сгущают и подвергают хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана и метанола в соотношении 99:1. После сгущения соответствующих
фракций продукт подают в метанол и гидрируют над палладием на активном угле аналогично примеру 1.1. Получают 46 мг (75 %) целевого соединения. Масс-спектр (бомбардировка быстрыми атомами, далее: "бба"): m/е = 238 = М + 1.
Пример 1.9
п-аминофенил-4-десокси-β
β-L-фукозид
Данное соединение получают аналогично методу авторов Т. Lindhorst и J. Thiem в источнике Carbohydr. Res. 209 (1991 г.), стр. 119, исходя из п-нитрофенил-β-L-фукозида
через п-нитрофенил-2,3-ди-O-бензоил-4,6-дидесокси-4-йод-β-L-фукозид. Тонкослойная
хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 90:10; Rf = 0,3.
21
BY 5307 C1
Пример 1.10
п-аминофенил-3-O-карбоксиметил-β
β-L-фукозид
1.10.а) п-нитрофенил-3-O-метоксикарбонилметил-β
β-L-фукозид
1 г (3,5 ммоль) п-нитрофенил-β-L-фукозида и 1,3 г (5,2 ммоль) окиси дибутилолова
нагревают с обратным холодильником в 50 мл метанола в течение 2 часов. Раствор сгущают, остаток подают в 50 мл диоксана, смешивают с 2 мл сложного метилового эфира
бромуксусной кислоты и 100 мг йодида тетрабутиламмония и нагревают с обратным холодильником в течение 16 часов. Растворитель упаривают и продукт очищают путем
флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана и метанола
в соотношении 99:1. После сгущения соответствующих фракций и переосаждения из смеси метанола и диэтилового эфира получают 455 мг (37 %) целевого соединения.
1.10) п-аминофенил-3-O-карбоксиметил-β
β-L-фукозид
282 мг (0,79 ммоль) п-нитрофенил-3-метоксикарбонилметил-β-L-фукозида растворяют в 20 мл метанола и смешивают с 440 мкл 2-н. раствора гидроокиси лития. После перемешивания при 20 °С в течение 2 часов доводят до значения рН = 3 с помощью кислого
ионообменника марки SC108 устанавливают и фильтруют. К фильтрату добавляют 250 мг
палладия на активном угле. Затем гидрируют в атмосфере водорода при незначительном
избыточном давлении в течение 1,5 часов, катализатор отделяют и промывают метанолом.
Продукт сгущают, подают в воду и подвергают сублимационной сушке. Получают 212 мг
(86 %) целевого продукта. Тонкослойная хроматография: смесь ацетонитрила, воды и ледяной уксусной кислоты в соотношении 5:1:0,2; Rf = 0,24.
Пример 1.11
п-аминофенил-3-O-метоксикарбонилметил-β
β-L-фукозид
250 мг (0,7 ммоль) п-нитрофенил-3-метоксикарбонилметил-β-L-фукозида примера
1.10.а) растворяют в 20 мл метанола и гидрируют в атмосфере водорода при незначительном избыточном давлении в течение 1,5 часов. Катализатор отделяют и промывают метанолом. Продукт сгущают, подают в воду и подвергают сублимационной сушке. Получают
195 мг (85 %) целевого продукта. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и
метанола в соотношении 9:1; Rf = 0,43; масс-спектр (бба): m/е = 328 = М + 1.
Пример 1.12
п-аминофенил-3-O-гидроксиэтил-β
β-L-фукозид
22
BY 5307 C1
1.12.а) п-нитрофенил-3-O-гидроксиэтил-β
β-L-фукозид
1000 мг (2,8 ммоль) п-нитрофенил-3-метоксикарбонилметил-β-L-фукозида растворяют в смеси 160 мл тетрагидрофурана и 40 мл воды и смешивают с 53 мг борана натрия. По
истечении 10 минут растворитель упаривают и остаток очищают путем флешхроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана и метанола в соотношении 95:5. После сгущения соответствующих фракций, подачи в воду и сублимационной сушки получают 362 мг (40 %) целевого продукта.
1.12) п-аминофенил-3-O-гидроксиэтил-β
β-L-фукозид
После гидрирования 362 мг соединения примера 1.12.а) аналогично примеру 1.1. получают 270 мг (82 %) целевого продукта. Тонкослойная хроматография: смесь ацетонитрила и воды в соотношении 10:1; Rf = 0,43.
Пример 1.13
п-аминофенил-2-O-карбоксиметил-β
β-L-фукозид
1.13.а) п-нитрофенил-2-O-метоксикарбонилметил-β
β-L-фукозид
250 мг (0,88 ммоль) п-нитрофенил-β-L-фукозида растворяют в 25 мл абс. тетрагидрофурана и 3 мл диметилформамида. К смеси добавляют 80 мг (2,64 ммоль) 80 %-ного гидрида натрия и, после 10-минутного перемешивания при 20 °С, 35 мкл сложного
бензилового эфира бромуксусной кислоты. Через каждые 10 минут 3 раза добавляют еще
по 35 мкл сложного бензилового эфира бромуксусной кислоты. Перемешивают в течение
30 минут и обрабатывают метанолом. По истечении 10 минут подкисляют 5 мл 80 %-ной
уксусной кислоты. Сгущают и дополнительно перегоняют в присутствии дихлорметана.
Очистку путем флеш-хроматографии начинают с применением в качестве элюента смеси
дихлорметана, метанола и ледяной уксусной кислоты в соотношении 90:10:1. Позже применяют ту же самую смесь, но в соотношении 80:20:2. После сгущения соответствующих
фракций остатки дигерируют диэтиловым эфиром и из первого элюента получают 157 мг
(42 %) целевого соединения. Тонкослойная хроматография: смесь ацетонитрила, воды и
ледяной уксусной кислоты в соотношении 5:1:0,2; Rf = 0,65. Из второго элюента получают
33 % изомерного 3-O-алкилированного соединения. Тонкослойная хроматография: смесь
ацетонитрила, воды и ледяной уксусной кислоты в соотношении 5:1:0,2; Rf = 0,54.
1.13) п-аминофенил-2-O-карбоксиметил-β
β-L-фукозид
Омыление и гидрирование 150 мг п-нитрофенил-2-О-метоксикарбоилметил-β-L-фукозида осуществляют аналогично примеру 1.10. Получают 109 мг (83 %) целевого продукта.
Тонкослойная хроматография: смесь ацетонитрила, воды и ледяной уксусной кислоты в
соотношении 5:1:0,2; Rf = 0,35.
Пример 1.14.а)
Синтез региоизомерных продуктов моносукцинилирования п-нитрофенил-β-L-фукозида:
1100 мг (3,86 ммоль) п-нитрофенил-β-L-фукозида растворяют в 50 мл пиридина и
смешивают с 580 мг (5,79 ммоль) ангидрида янтарной кислоты. После перемешивания в
течение 16 часов при 20 °С сгущают и дважды дополнительно перегоняют в присутствии
дихлорметана. Осаждают из смеси дихлорметана и диэтилового эфира и получают 1 г
неразделимой смеси, которую подают в смесь метанола и воды и смешивают с 846 мг
(2,6 ммоль) карбоната цезия. Растворитель упаривают и дополнительно перегоняют в при23
BY 5307 C1
сутствии диметилформамида. Остаток подают в диметилформамид и смешивают с 618 мкл
бензилбромида. После одночасовой ультразвуковой обработки бромид цезия отфильтровывают и фильтрат сгущают. Распределяют между 500 мл этилацетата и 50 мл воды. Органическую фазу сушат и сгущают. Компоненты разделяют путем флеш-хроматографии с
применением в качестве элюента смеси дихлорметана и метанола в соотношении 99:1.
Получают:
Фр. 1: 87 мг (4,8 %) п-нитрофенил-3-O-(3-бензилоксикарбонилпропионил)-β-L-фукозида.
Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 95:5; Rf = 0,45.
Фр. 2: 27 мг (1,5 %) п-нитрофенил-2-O-(3-бензилоксикарбонилпропионил)-β-L-фукозида.
Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 95:5; Rf = 0,34.
Фр. 3: 190 мг (10,3 %) п-нитрофенил-4-O-(3-бензилоксикарбонилпропионил)-β-L-фукозида,
Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 95:5; Rf = 0,28.
1.14) п-аминофенил-3-O-сукцинил-β
β-L-фукозид
85 мг (0,17 ммоль) фракции 1 примера 1.14.а) растворяют в 5 мл тетрагидрофурана и
1 мл воды. Добавляют 20 мг двуокиси платины и гидрируют в течение 8 часов. Катализатор
отфильтровывают, промывают смесью тетрагидрофурана и воды и фильтрат сгущают.
Остаток подают в воду и лиофилизуют. Получают 57 мг (94 %) целевого продукта. Тонкослойная хроматография: смесь ацетонитрила, воды и ледяной уксусной кислоты в соотношении 5:1:0,2; Rf = 0,65.
Пример 1.15
п-аминофенил-2-O-сукцинил-β
β-L-фукозид
Фракцию 2 примера 1.14.а) гидрируют аналогично примеру 1.14. Выход: 16 мг (87 %).
Тонкослойная хроматография: смесь ацетонитрила, воды и ледяной уксусной кислоты в
соотношении 5:1:0,2; Rf = 0,62.
Пример 1.16
п-аминофенил-4-O-сукцинил-β
β-L-фукозид
24
BY 5307 C1
Фракцию 3 примера 1.14.а) гидрируют аналогично примеру 1.14. Выход: 125 мг
(88 %). Тонкослойная хроматография: смесь ацетонитрила, воды и ледяной уксусной кислоты в соотношении 5:1:0,2; Rf = 0,63.
Пример 1.17
п-аминофенил-3,4-ди-O-метил-β
β-L-фукозид
1.17.а) п-нитрофенил-2-O-бензил-3,4-O-изопропилиден-β
β-L-фукозид
377 мг (1,16 ммоль) соединения примера 1.1.а) растворяют в 30 мл абс. тетрагидрофурана и смешивают последовательно с 690 мкл бензилбромида и 52 мг гидрида натрия, после чего перемешивают при 20 °С. Через 4 часа и 6 часов еще раз добавляют 690 мкл
бензилбромида и гидрида натрия. Реакционную смесь перерабатывают аналогично примеру 1.1.б). Получают 245 мг (51 %) целевого соединения.
1.17.б) п-нитрофенил-2-O-бензил-3,4-ди-O-метил-β
β-L-фукозид
245 мг (0,59 ммоль) п-нитрофенил-2-О-бензил-3,4-O-изопропилиден-β-L-фукозида
перемешивают в 80 %-ной уксусной кислоте в течение 16 часов при 20 °С. Сгущают и остаток перемешивают со смесью диэтилового эфира и пентана. Отсасывают, сушат и полученный продукт подают в 20 мл абс. тетрагидрофурана. К смеси добавляют 45 мг 80 %ного гидрида натрия и через 15 минут - 160 мкл метилйодида. Перемешивают в течение
20 часов при 20 °С, после чего обрабатывают метанолом и ледяной уксусной кислотой,
сгущают и остаток распределяют между дихлорметаном и водой. Органическую фазу сушат, сгущают и очищают путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента
смеси дихлорметана и метанола в соотношении 100:1. Соответствующие фракции сгущают и сушат, после чего получают 188 мг (79 %) целевого продукта.
1.17) п-аминофенил-3,4-ди-O-метил-β
β-L-фукозид
180 мг (0,45 ммоль) соединения примера 1.17.б) в смеси 15 мл метанола и 3 мл дихлорметана после добавления 50 мг палладия на активном угле гидрируют при комнатной
температуре в течение 2 суток. Катализатор отфильтровывают, фильтрат сгущают и очищают путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана
и метанола в соотношении 97,5:2,5. Получают 86 мг (68 %) целевого соединения. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 95:5; Rf = 0,21.
Пример 1.18
п-аминофенил-3-O-карбамоилметил-β
β-L-фукозид
100 мг (0,305 ммоль) соединения примера 1.11 растворяют в 10 мл метанола и смешивают с 0,5 мл 17 %-ного раствора гидроксида аммония. Через 4 часа сгущают, подают в
25
BY 5307 C1
воду и лиофилизуют. Получают 95 мг (колич.) целевого соединения. Тонкослойная хроматография: смесь ацетонитрила и воды в соотношении 10:1; Rf = 0,43.
Пример 1.19
п-аминофенил-2-O-гидроксиэтил-β
β-L-фукозид
200 мг (0,56 ммоль) п-нитрофенил-2-O-метоксикарбонилметил-β-L-фукозида примера
1.13.а) подвергают реакции аналогично примерам 1.12.а) и 1.12. Выход: 76 мг (45 % через
2 стадии). Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении
9:1; Rf = 0,2.
Пример 1.20
п-аминофенил-3,6-дидесокси-3-хлор-β
β-L-гулозид
50 мг (0,165 ммоль) соединения примера 1.6.б) гидрируют в 5 мл метанола над палладием на активном угле в течение часа. Отфильтровывают от катализатора, промывают,
сгущают, подают в воду и лиофилизуют. Получают 45 мг (89 %) целевого соединения.
Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 9:1;
Rf = 0,35.
Пример 1.21
п-аминофенил-α
α-L-рамнозид
300 мг п-нитрофенил-α-L-рамнозида (сигма) подвергают реакции аналогично примеру
1.1 и получают 96 % целевого соединения.
Пример 1.22
п-аминофенил-3-O-карбоксиметил-α
α-L-рамнозид
1.22.а) п-нитрофенил-3-O-метоксикарбонилметил-α
α-L-рамнозид
481 мг (1,63 ммоль) п-нитрофенил-α-L-рамнозида подают в 30 мл метанола и смешивают с 629 мг (2,45 ммоль) окиси дибутилолова. Нагревают с обратным холодильником в
26
BY 5307 C1
течение 2 часов, сгущают и подают в 30 мл диоксана. К смеси добавляют 85 мг йодида
тетрабутиламмония и 950 мкл сложного метилового эфира бромуксусной кислоты, после
чего нагревают с обратным холодильником в течение 16 часов. В случае необходимости
добавляют еще 1 мл сложного метилового эфира бромуксусной кислоты и продлевают
время реакции. Сгущают и остаток очищают путем флеш-хроматографии. п-нитрофенил3-О-метокси-карбонилметил-α-L-рамнозид элюируют с применением смеси дихлорметана
и метанола в соотношении 99:1. После сушки получают 408 мг (70 %) продукта. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 95:5; Rf = 0,36.
Пример 1.22
п-аминофенил-3-O-карбоксиметил-α
α-L-рамнозид
п-нитрофенил-3-O-метоксикарбонилметил-α-L-рамнозид подвергают реакции аналогично примеру 1.10 с получением 80 % целевого продукта. Тонкослойная хроматография:
смесь ацетонитрила, воды и ледяной уксусной кислоты в соотношении 5:1:0,2; Rf = 0,26.
Пример 1.23
п-аминофенил-β
β-D-галактопиранозид
3,0 г (10 ммоль) п-нитрофенил-β-D-галактопиранозида растворяют в 50 мл смеси метанола и воды в соотношении 1:1. После добавления 200 мг 10 %-ного палладия на активном угле гидрируют в атмосфере водорода при незначительном избыточном давлении.
Суспензию фильтруют на силикате марки Celite, после чего фильтруемый материал промывают 100 мл горячей смеси метанола и воды в соотношении 1:1. Фильтрат сгущают в
вакууме. В результате перекристаллизации из метанола получают 2,11 г (78 %) бесцветных
кристаллов. Тонкослойная хроматография: метанол; Rf = 0,62; [α]20 = -39,5° (с = 1,0/Н2O);
т.п. = 166 °С.
Пример 1.24.
п-аминофенил-2-О-метил-β
β-D-галактопиранозид
1.24.а) п-нитрофенил-6-O-трифенилметил-β
β-D-галактопиранозид
Раствор 9,0 г (30 ммоль) п-нитрофенил-β-D-галактопиранозида, 16,7 г (60 ммоль)
хлортрифенилметана и 609 мг (5 ммоль) N,N-диметиламинопиридина в 100 мл абсолютного пиридина нагревают до 60 °С в течение 4 часов. После сгущения в вакууме остаток
очищают путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси петролейного эфира и этилацетата в соотношении 2:1→3:2, каждый раз в присутствии 0,5 % триэтиламина. Получают 9,23 г (57 %) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография:
смесь дихлорметана, метанола и аммиака (25 %) в соотношении 15:3:0,2; Rf = 0,55;
т.п. = 82 °С.
27
BY 5307 C1
1.24.б) п-нитрофенил-3,4-O-изопропилиден-6-O-трифенилметил-β
β-D-галактопиранозид
8,7 г (16 ммоль) вышеуказанного соединения смешивают с 400 мл диметоксипропана
и каталитическим количеством (400 мг, 1,7 ммоль) (±)-камфора-10-сульфокислоты. После
реакции при комнатной температуре в течение часа реакцию прекращают добавлением
240 мл (1,7 ммоль) триэтиламина и сгущают в вакууме. В результате флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси петролейного эфира и этилацетата в соотношении 2:1 получают 6,2 г (66 %) бесцветной пены. Тонкослойная хроматография:
смесь петролейного эфира и этилацетата в соотношении 1:1; Rf = 0,46; [α]20 = -42,1°
(с = 0,94/СН2Сl2).
1.24.в) п-нитрофенил-2-O-метил-3,4-O-изопропилиден-6-O-трифенилметил-β
β -Dгалактопиранозид
5,83 г (10 ммоль) соединения примера 1.24.б) растворяют в 100 мл диметилформамида и смешивают с 2,5 мл (40 ммоль) метилйодида, после чего к смеси порциями
добавляют 450 мг (15 ммоль) 80 %-ной суспензии гидрида натрия в минеральном масле.
После реакции при комнатной температуре в течение 2 часов реакцию прекращают прикапыванием 10 мл метанола и сгущают в вакууме. Остаток подают в 1000 мл дихлорметана
и раствор интенсивно перемешивают с 500 мл воды. Органическую фазу сушат над 50 г
сульфата магния, сгущают в вакууме и очищают путем флеш-хроматографии с применением
в качестве элюента смеси петролейного эфира и этилацетата в соотношении 12:1→8:1.
Получают 4,72 г (79 %) бесцветной пены. Тонкослойная хроматография: смесь петролейного эфира и этилацетата в соотношении 1:1; Rf = 0,72; [α]20 = -35,7° (с = 1,0/СН3ОН).
1.24.г) п-нитрофенил-2-O-метил-β
β-D-галактопиранозид
Раствор 4,48 г (7,5 ммоль) вышеприведенного соединения в 200 мл дихлорметана
смешивают с 20 мл 99 %-ной трифторуксусной кислоты и перемешивают при комнатной
температуре в течение 3 часов. После сгущения в вакууме остаток очищают путем флешхроматографии с применением в качестве элюента смеси петролейного эфира и этилацетата в соотношении 5:1 ÷ 2:1. Получают 1,09 г (46 %) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (25 %) в соотношении
15:3:0,2; Rf = 0,42; т.п. = 177 °С.
1.24) п-аминофенил-2-O-метил-β
β-D-галактопиранозид.
946 мг (3 ммоль) соединения примера 1.24.г) растворяют в 50 мл метанола и после добавления 0,5 мл воды и около 200 мг основного никеля Ренея гидрируют в атмосфере водорода при незначительном избыточном давлении в течение 2 часов. Суспензию
фильтруют на силикате марки Celite, после чего фильтруемый материал интенсивно промывают 100 мл метанола. После сгущения фильтрата в вакууме получают 579 мг (68 %)
коричневатой пены. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (25 %) в соотношении 15:3:0,2; Rf = 0,28; [α]20 = -39,3° (с = 0,15/СН3ОН).
Пример 1.25
п-аминофенил-3-О-метил-β
β-D-галактопиранозид
1.25.а) п-нитрофенил-3-О-метил-β
β-D-галактопиранозид
Раствор 1,5 г (5,0 ммоль) п-нитрофенил-β-D-галактопиранозида в 40 мл абсолютного
метанола смешивают с 1,87 г (7,5 ммоль) окиси дибутилолова и нагревают с обратным хо28
BY 5307 C1
лодильником. Через 3 часа сгущают в вакууме и остаток сушат в течение часа в вакууме
масляного насоса. Продукт подают в 40 мл абсолютного диоксана, полученный раствор
смешивают с 1,9 мл (30 ммоль) метилйодида и реакционную смесь перемешивают в течение 16 часов при температуре ванны 100 °С. Затем растворитель отгоняют в вакууме и остаток очищают путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента сначала
смеси этилацетата и петролейного эфира в соотношении 2:1; а потом этилацетата. Получают 1,32 г (84 %) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (25 %) в соотношении 15:3:0,2; Rf = 0,34; т.п. = 196 °С;
[α]20 = -53,3° (с = 1,0/СН3ОН).
1.25) п-аминофенил-3-O-метил-β
β-D-галактопиранозид
946 мг (3 ммоль) вышеприведенного соединения восстанавливают описанным в примере 1.24 образом и перерабатывают. Получают 656 мг (77 %) коричневатых кристаллов.
Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (25 %) в соотношении 15:3:0,2; Rf = 0,21; т.п. = 196 °С; [α]20 = -25,2° (с = 1,0/СН3ОН).
Пример 1.26
Ацетат п-аминофенил-4-O-метил-β
β-D-галактопиранозида
1.26.а) п-нитрофенил-3-О-бензил-β
β-D-галактопиранозид
Раствор 1,5 г (5,0 ммоль) п-нитрофенил-β-D-галактопиранозида в 40 мл абсолютного
диоксана смешивают с 1,87 г (7,5 ммоль) окиси дибутилолова и нагревают с обратным холодильником. Через 3 часа полученный раствор смешивают с 3,6 мл (30 ммоль) бензилбромида и реакционную смесь перемешивают в течение 48 часов с обратным
холодильником. Растворитель отгоняют в вакууме и остаток очищают путем флешхроматографии с применением в качестве элюента смеси этилацетата и петролейного
эфира в соотношении 2:1 ÷1:1. Получают 1,58 г (81 %) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (25 %) в соотношении
15:3:0,2; Rf = 0,69; т.п. = 127 °С.
1.26.б) п-нитрофенил-3-O-бензил-4,6-O-изопропилиден-β
β-D-галактопиранозид
6,26 г (16 ммоль) соединения примера 1.26.а) подвергают описанной в примере 1.24.б)
реакции. После очистки путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента
смеси петролейного эфира и этилацетата в соотношении 5:1÷3:1 получают 6,54 г (95 %)
бесцветной пены. Тонкослойная хроматография: смесь петролейного эфира и этилацетата
в соотношении 1:1; Rf = 0,34; [α]20 = -38,9° (с = 1,0/СН2Сl2).
1.26.в) п-нитрофенил-2,3-ди-O-бензил-4,6-O-изопропилиден-β
β-D-галактопиранозид
4,31 г (10 ммоль) соединения примера 1.26.б) растворяют в 100 мл диметилформамида, после чего смешивают с 12 мл (100 ммоль) бензилбромида и порциями - 450 мг (15
ммоль) 80 %-ной суспензии гидрида натрия в минеральном масле. После реакции при
комнатной температуре в течение 2 часов реакцию прекращают прикапыванием 10 мл метанола и сгущают в вакууме. Остаток подают в 1000 мл дихлорметана и раствор интенсивно перемешивают с 500 мл воды. Органическую фазу сушат над 50 г сульфата магния,
сгущают в вакууме и очищают путем флеш-хроматографии с применением в качестве
элюента смеси петролейного эфира и этилацетата в соотношении 20:1 ÷ 15:1 ÷ 10:1. Получают 2,72 г (52 %) бесцветного масла, которое содержит еще примеси. Тонкослойная хроматография: смесь петролейного эфира и этилацетата в соотношении 1:1; Rf = 0,62.
29
BY 5307 C1
1.26.г) п-нитрофенил-2,3-ди-O-бензил-β
β-D-галактопиранозид
2,6 г (5 ммоль) вышеуказанного соединения подвергают описанной в примере 1.24.г)
реакции. После сгущения в вакууме и кипячения остатка в присутствии диэтилового эфира получают 805 мг (33 %) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь
петролейного эфира и этилацетата в соотношении 1:1; Rf = 0,23; т.п. = 160 °С.
1.26.д) п-нитрофенил-2,3-ди-O-бензил-6-O-трифенилметил-β
β-D-галактопиранозид
722 мг (1,5 ммоль) соединения примера 1.26.г) подвергают описанной в примере
1.24.а) реакции. После очистки путем флеш-хроматографии с применением в качестве
элюента смеси петролейного эфира и этилацетата в соотношении 15:1 ÷ 10:1 ÷ 5:1 получают 880 мг (81 %) бесцветной пены. Тонкослойная хроматография: смесь петролейного
эфира и этилацетата в соотношении 2:1; Rf = 0,79; [α]20 = -25,3° (с = 0,3/СН2Сl2).
1.26.е) п-нитрофенил-2,3-ди-O-бензил-4-O-метил-6-O-трифенилметил-β
β-D-галактопиранозид
724 мг (1 ммоль) вышеуказанного соединения подвергают описанному в примере
1.24.в) метилированию. После очистки путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси петролейного эфира и этилацетата в соотношении 10:1 ÷ 5:1 получают 662 мг (90 %) бесцветной пены. Тонкослойная хроматография: смесь петролейного
эфира и этилацетата в соотношении 5:1; Rf = 0,66; [α]20 = -38,7° (с = 0,2/CH2Cl2).
1.26) Ацетат п-аминофенил-4-O-метил-6-O-трифенилметил-β
β-D-галактопиранозида
590 мг (0,8 ммоль) вышеуказанного соединения растворяют в 50 мл 90 %-ной уксусной кислоты. После добавки 200 мг 10 %-ного палладия на активном угле гидрируют в
течение 16 часов в атмосфере водорода при незначительном избыточном давлении. Суспензию фильтруют на силикате марки Celite и фильтруемый материал интенсивно промывают 100 мл метанола. После сгущения фильтрата в вакууме и переосаждения остатка из
смеси диэтилового эфира и петролейного эфира получают 253 мг (92 %) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и петролейного эфира в соотношении 5:1; Rf = 0,12.
Пример 1.27
п-аминофенил-6-O-метил-β
β-D-галактопиранозид
1.27.а) Бензилирование соединения примера 1.24.б)
5,84 г (10 ммоль) соединения примера 1.24.б) бензилируют описанным в примере 1.26.в)
образом. После очистки путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента
сначала смеси петролейного эфира и этилацетата в соотношении 15:1 ÷ 12:1 ÷ 5:1, а потом
этилацетата, каждый раз в присутствии 0,5 % триэтиламина, получают две фракции продукта:
Фракция 1: 1,71 г (25 %) п-нитрофенил-2-O-бензил-3,4-О-изопропилиден-6-О-трифенилметил-β-D-галактопиранозида в виде желтоватой пены. Тонкослойная хроматография:
смесь петролейного эфира и этилацетата в соотношении 2:1; Rf = 0,72; [α]20 = -8,1°
(с = 1,0/СН2Сl2).
Фракция 2: 806 мг (19 %) п-нитрофенил-2-О-бензил-3,4-О-изопропилиден-β-D-галактопиранозида в виде желтоватого масла. Тонкослойная хроматография: смесь петролейного
эфира и этилацетата в соотношении 2:1; Rf = 0,45; [α]20 = +2,8°(с = 1,2/СН3ОН).
30
BY 5307 C1
1.27.б) п-нитрофенил-2-O-бензил-3,4-O-изопропилиден-6-O-метил-β
β -D-галактопиранозид
777 мг (1,8 ммоль) фракции 2 примера 1.27.а) подвергают описанному в примере
1.24.в) метилированию. После очистки путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси петролейного эфира и этилацетата в соотношении 10:1 ÷ 8:1 получают
730 мг (91 %) коричневатого масла. Тонкослойная хроматография: смесь петролейного
эфира и этилацетата в соотношении 2:1; Rf = 0,54; [α]20 = -11,6° (с = 1,1/СН2Сl2).
1.27.в) п-нитрофенил-2-O-бензил-6-O-метил-β
β-D-галактопиранозид
668 мг (1,5 ммоль) вышеуказанного соединения подвергают описанной в примере
1.24.г) реакции. Фильтрат сгущают в вакууме и остаток кипятят в присутствии небольшого количества диэтилового эфира. После охлаждения до комнатной температуры получают 388 мг (64 %) светлобежевых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь
петролейного эфира и этилацетата в соотношении 1:1; Rf = 0,15; т.п.: 143 °С.
1.27) п-аминофенил-6-О-метил-β
β-D-галактопиранозид
324 мг (0,8 ммоль) соединения примера 1.27.в) подвергают описанному в примере 1.24
восстановлению. Фильтрат сгущают в вакууме и остаток кипятят в присутствии небольшого количества диэтилового эфира. Получают 184 мг (81 %) бежевых кристаллов. Тонкослойная хроматография: этилацетат; Rf = 0,05; т.п.: 115 °С (разл.).
Пример 1.28
п-аминофенил-2,3-ди-O-метил-β
β-D-галактопиранозид
1.28.а) Изопропилиденирование п-нитрофенил-β
β-D-галактопиранозида
Раствор 7,5 г (25 ммоль) п-нитрофенил-β-D-галактопиранозида в 1000 мл абсолютного
ацетона смешивают с 500 мг безводного толуолсульфокислоты. 250 мл ацетона отгоняют
при атмосферном давлении в течение 30 минут и потом непосредственно нейтрализуют
добавкой 500 мг карбоната калия. После сгущения в вакууме остаток перемешивают с
1000 мл диэтилового эфира. Фильтруют, фильтрат сгущают и очищают путем флешхроматографии с применением в качестве элюента смеси петролейного эфира и этилацетата в соотношении 2:1 ÷ 1:1 ÷ 3:2. При этом получают две фракции продукта:
Фракция 1:
3,74 г (44 %) п-нитрофенил-3,4-O-изопропилиден-β-D-галактопиранозида в виде бесцветной пены. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и 25 %-ного
аммиака в соотношении 15:3:0,2; Rf = 0,59; [α]20 = -54,2° (с = 0,38/СН3ОН).
Фракция 2:
4,3 г (50 %) п-нитрофенил-4,6-O-изопропилиден-β-D-галактопиранозида в виде бесцветной пены. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и 25 %-ного
аммиака в соотношении 15:3:0,2; Rf = 0,54; [α]20 = -81,0° (с = 0,31/СН3ОН).
1.28.б) п-нитрофенил-2,3-ди-O-метил-4,6-O-изопропилиден-β
β-D-галактопиранозид
4,1 г (12 ммоль) фракции 2 примера 1.28.а) подвергают описанному в примере 1.24.в)
метилированию. После очистки путем флеш-хроматографии с применением в качестве
элюента смеси петролейного эфира и этилацетата в соотношении 5:1 ÷ 2:1 получают 2,93 г
(66 %) бесцветной пены. Тонкослойная хроматография: смесь петролейного эфира и этилацетата в соотношении 1:1; Rf = 0,42; [α]20 = -52,6° (с = 0,34/СН3ОН).
31
BY 5307 C1
1.28.в) п-нитрофенил-2,3-ди-O-метил-β
β-D-галактопиранозид
2,77 г (7,5 ммоль) вышеуказанного соединения подвергают описанной в примере
1.24.г) реакции. Смесь держат при комнатной температуре в течение часа, после чего
сгущают в вакууме и остаток сушат в течение часа в вакууме масляного насоса. В результате дигерирования с 100 мл смеси диэтилового эфира и петролейного эфира в соотношении 1:1 получают 1,11 г (45 %) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография:
этилацетат; Rf = 0,24; т.п.: 156 °С.
1.28) п-аминофенил-2,3-ди-O-метил-β
β-D-галактопиранозид
989 мг (3 ммоль) соединения примера 1.38.в) восстанавливают описанным в примере
1.24 образом. Получают 396 мг (44 %) бесцветного масла. Тонкослойная хроматография:
смесь дихлорметана, метанола и 25 %-ного аммиака в соотношении 15:3:0,2; Rf = 0,50;
[α]20 = -19,4° (с = 0,16/СН3ОН).
Пример 1.29
п-аминофенил-2,4-ди-O-метил-β
β-D-галактопиранозид
1.29.а) Тритилирование соединения примера 1.26.а)
11,7 г (30 ммоль) соединения примера 1.26.а) тритилируют описанным в примере
1.24.а) образом. После очистки путем флеш-хроматографии с применением в качестве
элюента смеси петролейного эфира и этилацетата в соотношении 10:1 ÷ 7:1 ÷ 5:1, каждый
раз в присутствии 0,5 % триэтиламина, получают два продукта:
Фракция 1:
8,5 г (32 %) трифенилметил-2-O-(п-нитрофенил)-3-O-бензил-6-O-трифенилметил-β-Dгалактопиранозида в виде бесцветной пены. Тонкослойная хроматография: смесь петролейного эфира и этилацетата в соотношении 2:1; Rf = 0,68; [α]20 = +42,8° (с = 1,0/CH2Cl2).
Фракция 2:
9,0 г (47 %) п-нитрофенил-3-O-бензил-6-O-трифенилметил-β-D-галактопиранозида в
виде бесцветной пены. Тонкослойная хроматография: смесь петролейного эфира и этилацетата в соотношении 2:1; Rf = 0,22; [α]20 = -22,6° (с = 1,03/СН2С12).
1.29.б) п-нитрофенил-2,4-ди-O-метил-3-O-бензил-6-О-трифенилметил-β
β-D-галактопиранозид
7.6 г (12 ммоль) фракции 2 примера 1.29.а) подвергают описанному в примере 1.24.в)
метилированию. После очистки путем флеш-хроматографии с применением в качестве
элюента смеси петролейного эфира и этилацетата в соотношении 2: 1 ÷ 10:1 получают
7,07 г (89 %) бесцветной пены. Тонкослойная хроматография: смесь петролейного эфира и
этилацетата в соотношении 2:1; Rf = 0,79; [α]20 = -35,8° (с = 1,09/СН3ОН).
1.29.в) п-аминофенил-2,4-ди-O-метил-3-O-бензил-β-D-галактопиранозид
6,0 г (9 ммоль) вышеуказанного соединения гидрируют в течение 48 часов описанным
в примере 1.26 образом. Получают 1,39 г (40 %) бесцветных кристаллов. Тонкослойная
хроматография: смесь этилацетата и петролейного эфира в соотношении 2:1; Rf = 0,20;
т.п.: 148 °С.
1.29) п-аминофенил-2,4-ди-O-метил-β
β-D-галактопиранозид
779 мг (2 ммоль) соединения примера 1.29.в) гидрируют в течение 5 суток описанным
в примере 1.24 образом. После упаривания объединенных фильтратов в вакууме и двукратного кипячения остатка в присутствии диэтилового эфира, взятого в количестве по 50
мл, получают 391 мг (65 %) слегка зеленоватых кристаллов. Тонкослойная хроматография: этилацетат; Rf = 0,16; т.п.: 260 °С (разл.).
32
BY 5307 C1
Пример 1.30
п-аминофенил-2,6-ди-O-метил-β
β-D-галактопиранозид
1.30.а) п-нитрофенил-2,6-ди-O-метил-3,4-O-изопропилиден-β
β-D-галактопиранозид
4,1 г (12 ммоль) фракции 1 примера 1.28.а) метилируют описанным в примере 1.24.в)
образом. После очистки путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента
смеси петролейного эфира и этилацетата в соотношении 10:1 ÷ 8:1 ÷ 5:1 получают 3,25 г
(73 %) бесцветного масла. Тонкослойная хроматография: смесь петролейного эфира и
этилацетата в соотношении 1:1; Rf = 0,65.
1.30.б) п-нитрофенил-2,6-ди-O-метил-β
β-D-галактопиранозид
2,77 г (7,5 ммоль) вышеуказанного соединения подвергают описанной в примере 1.24.г)
реакции. После очистки путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента
смеси этилацетата и петролейного эфира в соотношении 2:1 получают 1,63 г (66 %) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: этилацетат; Rf = 0,31; т.п.: 222 °С.
1.30) п-аминофенил-2,6-ди-O-метил-β
β-D-галактопиранозид
989 мг (3 ммоль) соединения примера 1.30.б) восстанавливают описанным в примере
1.24 образом. Получают 597 мг (66 %) бесцветного масла. Тонкослойная хроматография:
смесь дихлорметана, метанола и 25 %-ного аммиака в соотношении 15:3:0,2; Rf = 0,56;
[α]20 = -53,1° (с = 0,49/СН3ОН).
Пример 1.31
Ацетат п-аминофенил-3,4-ди-O-метил-β
β-D-галактопиранозида
1.31.а) п-нитрофенил-2,6-ди-O-бензил-3,4-O-изопропилиден-β
β-D-галактопиранозид
4,1 г (12 ммоль) фракции 1 примера 1.28.а) бензилируют описанным в примере 1.26.в)
образом. После очистки путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента
смеси петролейного эфира и этилацетата в соотношении 6:1 получают 5,3 г (85 %) желтоватого масла. Тонкослойная хроматография: смесь этилацетата и петролейного эфира в
соотношении 2:1; Rf = 0,76; [α]20 = +8,8°(с = 1,2/СН3ОН).
1.31.б) п-нитрофенил-2,6-ди-O-бензил-β
β-D-галактопиранозид
4,69 г (9 ммоль) вышеуказанного соединения подвергают описанной в примере 1.24.г)
реакции. Смесь держат при комнатной температуре в течение 30 минут, сгущают в вакууме и остаток сушат в течение часа в вакууме масляного насоса. В результате перекристаллизации из этанола получают 2,89 г (67 %) бесцветных кристаллов. Тонкослойная
хроматография: смесь этилацетата и петролейного эфира в соотношении 2:1; Rf = 0,42;
т.п.: 133 °С; [α]20 = -64,2° (с = 1,0/СН3ОН).
1.31.в) п-нитрофенил-2,6-ди-O-бензил-3,4-ди-O-метил-β
β-D-галактопиранозид
33
BY 5307 C1
2,4 г (5 ммоль) вышеуказанного соединения метилируют описанным в примере 1.26.в)
образом. После перекристаллизации из смеси этанола и н-гексана получают 1,74 г (69 %)
бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь этилацетата и петролейного
эфира в соотношении 1:1; Rf = 0,74; т.п.: 149 °С.
1.31) Ацетат п-аминофенил-3,4-ди-O-метил-β
β-D-галактопиранозида
1,52 г (3 ммоль) соединения примера 1.31.в) гидрируют описанным в примере 1.26 образом. Получают 664 мг (62 %) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография:
смесь дихлорметана, метанола и аммиака (25 %) в соотношении 15:3:0,2; Rf = 0,47; т.п.:
140 °С (разл.).
Пример 1.32
п-аминофенил-3,6-ди-O-метил-β
β-D-галактопиранозид
1.32.а) п-нитрофенил-3-O-метил-6-O-(трет-бутилдиметилсилил)-β
β-D-галактопиранозид
Раствор 1,58 г (5 ммоль) соединения примера 1.25,а) в 150 мл диметилформамида
смешивают с 1 г (15 ммоль) имидазола и 1,25 г (8 ммоль) трет-бутилдиметилсилилхлорида и перемешивают в течение 24 часов при комнатной температуре. Затем реакцию
прекращают добавкой 100 мл воды. Разбавляют 1000 мл дихлорметана, органическую фазу два раза промывают водой, взятой в количестве по 1000 мл, сушат над 20 г сульфата
магния и сгущают в вакууме. После очистки путем флеш-хроматографии с применением в
качестве элюента смеси петролейного эфира и этилацетата в соотношении 15:1 ÷ 10:1 ÷ 5:1
получают 826 мг (38 %) желтоватой пены, которая содержит еще примеси. Тонкослойная
хроматография: этилацетат; Rf = 0,59; [α]20 = -56,3° (с = 1,0/СН2Сl2).
1.32.б) п-нитрофенил-2,4-ди-O-бензил-3-O-метил-6-O-(трет-бутилдиметилсилил)β-D-галактопиранозид
773 мг (1,8 ммоль) вышеуказанного соединения бензилируют описанным в примере
1.26.в) образом. После очистки путем флеш-хроматографии с применением в качестве
элюента смеси петролейного эфира и этилацетата в соотношении 30:1 ÷ 5:1 получают
810 мг (74 %) бесцветной пены. Тонкослойная хроматография: смесь петролейного эфира
и этилацетата в соотношении 5:1; Rf = 0,58.
1.32.в) п-нитрофенил-2,4-ди-O-бензил-3-O-метил-β
β-D-галактопиранозид
732 мг (1,2 ммоль) соединения примера 1.32.б) растворяют в 6 мл тетрагидрофурана и
смешивают при температуре 0 °С с 2,4 мл 1 М раствора фторида тетрабутиламмония в
тетрагидрофуране. Перемешивают в течение 40 минут при комнатной температуре и сгущают в вакууме. После очистки путем флеш-хроматографии с применением в качестве
элюента смеси петролейного эфира и этилацетата в соотношении 5:1 ÷ 3:1 ÷ 2:1 получают
512 мг (86 %) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь петролейного
эфира и этилацетата в соотношении 1:1; Rf = 0,36; т.п.: 177 °С.
1.32.г) п-нитрофенил-2,4-ди-O-бензил-3,6-ди-O-метил-β
β-D-галактопиранозид
34
BY 5307 C1
446 мг (0,9 ммоль) вышеуказанного соединения метилируют описанным в примере
1.24.в) образом. После очистки путем флеш-хроматографии с применением в качестве
элюента смеси петролейного эфира и этилацетата в соотношении 20:1 ÷ 10:1 ÷ 8:1 получают 401 мг (87 %) бесцветного масла. Тонкослойная хроматография: смесь петролейного
эфира и этилацетата в соотношении 1:1; Rf = 0,70; [α]20 = -56,5° (с = 0,96/СН2Сl2).
1.32) п-аминофенил-3,6-ди-O-метил-β
β-D-галактопиранозид
357 мг (0,7 ммоль) соединения примера 1.32.г) гидрируют описанным в примере 1.24
образом. После сгущения объединенных фильтратов в вакууме и кипячения остатка в
присутствии 20 мл диэтилового эфира получают 207 мг (99 %) бесцветных кристаллов.
Тонкослойная хроматография: смесь петролейного эфира и этилацетата в соотношении
1:1; Rf = 0,02; т.п.: > 280 °С (разл.).
Пример 1.33
п-аминофенил-4,6-ди-O-метил-β
β-D-галактопиранозид
1.33.а) п-нитрофенил-2,3-ди-O-бензил-4,6-ди-O-метил-β
β-D-галактопиранозид
2,4 г (5 ммоль) соединения примера 1.26.г) метилируют описанным в примере 1.24.в)
образом. После очистки путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента
смеси петролейного эфира и этилацетата в соотношении 5:1 ÷ 3:1 получают 1,89 г (74 %)
бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь петролейного эфира и этилацетата в соотношении 1:1; Rf = 0,76; т.п.: 100 °С.
1.33) п-аминофенил-4,6-ди-O-метил-β
β-D-галактопиранозид
1,53 г (3 ммоль) соединения примера 1.33.а) гидрируют описанным в примере 1.24 образом. Получают 890 мг (99 %) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография:
смесь метанола и этилацетата в соотношении 1:1; Rf = 0,71; т.п.: 180 °С (разл.).
Пример 1.34
п-аминофенил-2,3,4-три-O-метил-β
β-D-галактопиранозид
1.34.а) п-нитрофенил-2,3,4-три-O-метил-6-O-трифенилметил-β
β-D-галактопиранозид
1,63 г (3 ммоль) соединения примера 1.24.а) метилируют описанным в примере 1.24.в)
образом. После очистки путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента
смеси петролейного эфира и этилацетата в соотношении 5:1 ÷ 3:1 получают 1,24 г (71 %)
бесцветной пены. Тонкослойная хроматография: смесь петролейного эфира и этилацетата
в соотношении 1:1; Rf = 0,54; [α]20 = -53,6° (с = 0,3/СН3ОН).
1.34.б) п-нитрофенил-2,3,4-три-O-метил-β
β-D-галактопиранозид
1,17 г (2 ммоль) вышеуказанного соединения подвергают описанной в примере 1.24.г)
реакции. После очистки путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента
смеси петролейного эфира и этилацетата в соотношении 3:1 ÷ 2:1 получают 468 мг (68 %)
35
BY 5307 C1
бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь петролейного эфира и этилацетата в соотношении 1:1; Rf = 0,12; т.п.: 104 °С; [α]20 = -68,2° (с = 0,47/СН3ОН).
1.34) п-аминофенил-2,3,4-три-O-метил-β
β-D-галактопиранозид
343 мг (1 ммоль) соединения примера 1.34.б) восстанавливают описанным в примере
1.24 образом. Получают 224 мг (71 %) бежевых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (25 %) в соотношении 15:3:0,2; Rf = 0,67;
т.п.: 138 °С.
Пример 1.35
п-аминофенил-2,3,6-три-O-метил-β
β-D-галактопиранозид
1.35.а) п-нитрофенил-2,3,6-три-O-метил-β
β-D-галактопиранозид
2,63 г (3 ммоль) соединения примера 1.30.б) подвергают селективному метилированию описанным в примере 1.25.а) образом. После очистки путем флеш-хроматографии с
применением в качестве элюента смеси петролейного эфира и этилацетата в соотношении
5:1 ÷ 2:1 получают 890 мг (32 %) коричневатого масла. Тонкослойная хроматография:
этилацетат; Rf = 0,37; [α]20 = -63,3° (с = 0,9/CH2Cl2).
1.35) п-аминофенил-2,3,6-три-O-метил-β
β-D-галактопиранозид
858 мг (2,5 ммоль) вышеуказанного соединения восстанавливают описанным в примере 1.24 образом. Получают 519 мг (66 %) бежевой пены. Тонкослойная хроматография:
этилацетат; Rf = 0,23; [α]20 = 34,5° (с = 0,86/СН3ОН).
Пример 1.36
п-аминофенил-2,4,6-три-O-метил-β
β-D-галактопиранозид
1.36.а) п-нитрофенил-2,4,6-три-O-метил-3-O-бензил-β
β-D-галактопиранозид
1,96 г (5 ммоль) соединения примера 1.26.а) метилируют описанным в примере 1.24.в)
образом. После очистки путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента
смеси петролейного эфира и этилацетата в соотношении 10:1 ÷ 8:1 получают 1,47 г (68 %)
бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь петролейного эфира и этилацетата в соотношении 2:1; Rf = 0,46; т.п.: 164 °С.
1.36) п-аминофенил-2,4,6-три-O-метил-β
β-D-галактопиранозид
1,3 г (3 ммоль) вышеуказанного соединения восстанавливают описанным в примере
1.26 образом. Получают 642 мг (68 %) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь этилацетата и петролейного эфира в соотношении 2:1; Rf = 0,12; т.п.: 147 °С
(разл.).
36
BY 5307 C1
Пример 1.37
п-аминофенил-3,4,6-три-O-метил-β
β-D-галактопиранозид
1.37.а) п-нитрофенил-2-O-бензил-β
β-D-галактопиранозид
1,17 г (2 ммоль) фракции 1 примера 1.27.а) подвергают описанной в примере 1.24.г)
реакции. После очистки путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента
смеси петролейного эфира и этилацетата в соотношении 3:1 ÷ 2:1 получают 468 мг (68 %)
бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь петролейного эфира и этилацетата в соотношении 1:1; Rf = 0,12; т.п.: 104 °С; [α]20 = -68,2° (с = 0,47/СН3ОН).
1.37.б) п-нитрофенил-2-O-бензил-3,4,6-три-O-метил-β
β-D-галактопиранозид
391 мг (1 ммоль) вышеуказанного соединения метилируют описанным в примере
1.24.в) образом. После очистки путем флеш-хроматографии с применением в качестве
элюента смеси петролейного эфира и этилацетата в соотношении 10:1 ÷ 5:1 получают
303 мг (70 %) светло-желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: этилацетат;
Rf = 0,81; [α]20 = -76,5° (с = 1,1/СН2Сl2).
1.37) п-аминофенил-3,4,6-три-O-метил-β
β-D-галактопиранозид
260 мг (0,6 ммоль) соединения примера 1.37.б) гидрируют описанным в примере 1.24
образом. Получают 161 мг (86 %) бежевых кристаллов. Тонкослойная хроматография:
этилацетат; Rf = 0,20; т.п.: 132 °С.
Пример 1.38
п-аминофенил-2,3,4,6-тетра-O-метил-β
β-D-галактопиранозид
1.38.а) п-нитрофенил-2,3,4,6-тетра-O-метил-β
β-D-галактопиранозид
904 мг (3 ммоль) п-нитрофенил-β-D-галактопиранозида метилируют описанным в
примере 1.24.в) образом. После очистки путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси петролейного эфира и этилацетата в соотношении
8:1 ÷ 6:1 ÷ 4:1 ÷ 2:1 получают 633 мг (59 %) бесцветного, воскообразного твердого вещества. Тонкослойная хроматография: этилацетат; Rf = 0,67; [α]20 = -55,7° (с = 0,9/CH2Cl2).
1.38) п-аминофенил-2,3,4,6-тетра-O-метил-β
β-D-галактопиранозид
536 мг (1,5 ммоль) соединения примера 1.33.а) гидрируют описанным в примере 1.24
образом. После упаривания объединенных фильтратов в вакууме и кипячения остатка в
присутствии 20 мл диэтилового эфира получают 412 мг (84 %) бесцветных кристаллов.
Тонкослойная хроматография: этилацетат; Rf = 0,42; т.п.: 204 °С (разл.).
37
BY 5307 C1
Пример 1.39
п-аминофенил-α
α-D-маннопиранозид
3,0 г (10 ммоль) п-нитрофенил-α-D-маннопиранозида гидрируют описанным в примере 1.23 образом. В результате осаждения из смеси метанола и диэтилового эфира получают 2,03 г (75 %) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: метанолт;
Rf = 0,69; т.п.: 161 °С; [α]20 = +102,7° (с = 1,0/Н2О).
Пример 1.40
п-аминофенил-3-O-метил-α
α-D-маннопиранозид
1.40.а) п-нитрофенил-6-O-трифенилметил-α
α-D-маннопиранозид
3,0 г (10 ммоль) п-нитрофенил-α-D-маннопиранозида тритилируют описанным в примере 1.24.а) образом. Получают 4,35 г (80 %) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (25 %) в соотношении 15:3:0,2;
Rf = 0,52; [α]20 = +104,0° (с = 1,0/СН3ОН); т.п.: 102-104 °С.
1.40.б) п-нитрофенил-3-O-метил-6-O-трифенилметил-α
α-D-маннопиранозид
2,72 г (5 ммоль) вышеуказанного соединения подвергают описанному в примере 1.26.а)
взаимодействию с 2 мл (30 ммоль) метилйодида. После очистки путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси петролейного эфира и этилацетата в соотношении 2:1 и осаждения из смеси этанола и н-гексана получают 1,83 г (66 %) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака
(25 %) в соотношении 15:3:0,2; Rf = 0,68; [α]20 = +106,4° (с = 1,0/СН3ОН); т.п.: 104 °С.
1.40) п-аминофенил-3-O-метил-α
α-D-маннопиранозид
1,4 г (2,5 ммоль) соединения примера 1.40.б) растворяют в 50 мл метанола. После добавки 300 мг 10 %-ного палладия на активном угле гидрируют атмосфере водорода при
незначительном избыточном давлении в течение 24 часов. Суспензию фильтруют на силикате марки Celite, после чего фильтруемый материал интенсивно промывают 100 мл
метанола. После сгущения фильтрата в вакууме остаток смешивают с 50 мл воды, фильтруют и фильтрат лиофилизуют. Получают 709 г (99 %) коричневатого аморфного твердого вещества. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака
(25 %) в соотношении 15:3:0,2; Rf = 0,33; [α]20 = +92,9° (с = 1,1/СН3ОН).
38
BY 5307 C1
Пример 1.41
п-аминофенил-2,3-ди-O-метил-α
α-D-маннопиранозид
1.41.a) п-нитрофенил-4,6-O-бензилиден-α
α-D-маннопиранозид
Раствор 6,0 г (20 ммоль) п-нитрофенил-α-D-маннопиранозида в 120мл диметилформамида смешивают с 3,2 мл (21,4 ммоль) бензальдегид-диметилацетала и 2,7 мл (20 ммоль)
54 %-ного раствора тетрафторборной кислоты и диэтилового эфира. Перемешивают в течение 5 часов при комнатной температуре, после чего реакцию прекращают добавкой 2,8
мл (20 ммоль) триэтиламина и сгущают в вакууме. После очистки путем флешхроматографии с применением в качестве элюента сначала толуола, а потом смеси толуола и этанола в соотношении 20:1 получают 6,48 г (83 %) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (25 %) в соотношении
15:3:0,2; Rf = 0,82; [α]20 = +170,7° (с = 1,0/СН2С12); т.п.: 116 °С.
1.41.б) п-нитрофенил-2,3-ди-O-метил-4,6-O-бензилиден-α
α-D-маннопиранозид
3,9 г (10 ммоль) вышеуказанного соединения метилируют описанным в примере
1.24.в) образом. После очистки путем флеш-хроматографии с применением в качестве
элюента смеси петролейного эфира и этилацетата в соотношении 20:1 ÷ 7:1 и осаждения
из смеси этилацетата и н-гексана получают 3,2 г (77 %) бесцветной пены. Тонкослойная
хроматография: смесь этилацетата и петролейного эфира в соотношении 2:1; Rf = 0,67;
[α]20 = +167,3° (с = 1,05/СН3ОН).
1.41) п-аминофенил-2,3-ди-О-метил-α
α-D-маннопиранозид
1,25 г (3 ммоль) соединения примера 1.41.б) гидрируют описанным в примере 1.26 образом. После очистки путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента сначала смеси этилацетата и петролейного эфира в соотношении 2:1, а потом этилацетата,
каждый раз в присутствии 0,5 % триэтиламина, получают 480 мг (53 %) красноватокоричневой пены. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (25 %) в соотношении 15:3:0,2; Rf = 0,31; [α]20 = + 83,6° (с = 0,76/СН3ОН).
Пример 1.42
1.42.а) п-нитрофенил-3-О-метоксикарбонилметил-β
β-D-галактопиранозид
Раствор 7,53 г (25 ммоль) п-нитрофенил-β-D-галактопиранозида в 180 мл абсолютного
диоксана смешивают с 9,3 г (37,5 ммоль) окиси дибутилолова и нагревают с обратным холодильником. Через 4 часа полученный раствор смешивают с 8,3 мл (90 ммоль) сложного
метилового эфира бромуксусной кислоты и 9,25 г (25 ммоль) йодида тетрабутиламмония
и перемешивают реакционную смесь с обратным холодильником в течение 3 часов. Потом растворитель отгоняют в вакууме и остаток очищают путем флеш-хроматографии с
39
BY 5307 C1
применением в качестве элюента смеси дихлорметана и метанола в соотношении
50:1 ÷ 20:1. Наряду с некоторыми побочными продуктами получают 4,05 г (43 %) соединения примера 1.42.а) в виде бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь
дихлорметана, метанола и аммиака (25 %) в соотношении 15:3:0,2; Rf = 0,54; [α]20 = -62,0°
(с = 1,0/СН3ОН); т.п.: 176 °С.
1.42) п-аминофенил-3-О-метоксикарбонилметил-β
β-D-галактопиранозид
3,73 г (10 ммоль) соединения примера 1.42.а) гидрируют описанным в примере 1.24
образом. После осаждения из смеси этанола и н-гексана получают 2,98 г (87 %) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака
(25 %) в соотношении 15:3:0,2; Rf = 0,39; [α]20 = -36,3°(с = 1,07/СН3ОН);т.п.: 155 °С.
Пример 1.43
1.43.а) Натриевая соль п-нитрофенил-3-O-карбоксиметил-β
β-D-галактопиранозида
Раствор 3,73 г (10 ммоль) соединения примера 1.42.а) в 100 мл метанола смешивают с
раствором 400 мг (10 ммоль) гидроокиси натрия в 5 мл воды и перемешивают при комнатной температуре в течение 2 часов. После сгущения в вакууме остаток сушат в вакууме
масляного насоса в течение 2 часов, после чего смешивают с 100 мл этанола. Кипятят с
обратным холодильником в течение 5 минут, фильтруют после охлаждения на ледяной
бане и получают 3,66 г (96 %) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: метанол; Rf = 0,62; [α]20 = -50,0° (с = 1,0/СН3ОН); т.п.: 180-185 °С.
1.43) Натриевая соль п-аминофенил-3-О-карбоксиметил-β
β-D-галактопиранозида
3,05 г (8 ммоль) вышеуказанного соединения гидрируют описанным в примере 1.24
образом. После кипячения в присутствии 50 мл этанола получают 2,03 г (72 %) бесцветных
кристаллов. Тонкослойная хроматография: метанол; Rf = 0,70; [α]20 = -22,4° (с = 1,0/СН3ОН);
т.п.: 180-182 °С.
Пример 1.44
п-аминофенил-3-O-карбамоилметил-β
β-D-галактопиранозид
1.44.а) п-нитрофенил-3-O-карбамоилметил-β
β-D-галактопиранозид
Раствор 373 мг (1 ммоль) соединения примера 1.42.а) в 30 мл метанола смешивают с
10 мл 25 %-ного водного раствора аммиака и перемешивают в течение 15 минут при комнатной температуре. После сгущения в вакууме остаток сушат в течение 2 часов в вакууме
масляного насоса, после чего смешивают с 30 мл этанола. Кипятят с обратным холодиль40
BY 5307 C1
ником в течение 5 минут, после охлаждения на ледяной бане отфильтровывают и получают
306 мг (85 %) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана,
метанола и аммиака (25 %) в соотношении 15:3:0,2; Rf = 0,14; [α]20 = -41,7° (с = 1,0/СН3ОН);
т.п.: 229 °С (разл.).
1.44) п-аминофенил-3-О-карбамоилметил-β
β-D-галактопиранозид
287 мг (0,8 ммоль) вышеуказанного соединения гидрируют описанным в примере 1.24
образом. После осаждения из смеси метанола и диэтилового эфира получают 207 мг
(79 %) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (25 %) в соотношении 15:3:0,2; Rf = 0,10; т.п.: 205 °С (разл.).
Пример 1.45
п-аминофенил-3-O-(N-метил-карбамоилметил)-β
β-D-галактопиранозид
1.45.а) п-нитрофенил-3-O-(N-метил-карбамоилметил)-β
β-D-галактопиранозид
Раствор 373 мг (1 ммоль) соединения примера 1.42.а) в 30 мл метанола смешивают с
10 мл 30 %-ного водного раствора метиламина и перемешивают в течение 2 часов при
комнатной температуре. После сгущения в вакууме остаток сушат в течение 2 часов в вакууме масляного насоса, после чего перекристаллизуют из этанола. Получают 372 мг
(100 %) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (25 %) в соотношении 15:3:0,2; Rf = 0,33; [α]20 = -36,7° (с = 1,0/СН3ОН);
т.п.: 205 °С.
1.45) п-аминофенил-3-O-(N-метил-карбамоилметил)-β
β-D-галактопиранозид
298 мг (0,8 ммоль) соединения примера 1.45.а) гидрируют описанным в примере 1.24
образом. После осаждения из смеси метанола и диэтилового эфира получают 180 мг
(66 %) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (25 %) в соотношении 15:3:0,2; Rf = 0,16; т.п.: 239 °С.
Пример 1.46
п-аминофенил-3-O-(N-пропил-карбамоилметил)-β
β-D-галактопиранозид
1.46.а) п-нитрофенил-3-O-(N-пропил-карбамоилметил)-β
β-D-галактопиранозид
373 мг (1 ммоль) соединения примера 1.42.а) подвергают описанному в примере 1.45.а)
взаимодействию с 823 мкл (10 ммоль) н-пропиламина. После сгущения в вакууме остаток
41
BY 5307 C1
осаждают из смеси этанола и н-гексана. Получают 340 мг (85 %) бесцветных кристаллов.
Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (25 %) в соотношении 15:3:0,2; Rf = 0,49; [α]20 = -32,4° (с = 1,0/СН3ОН); т.п.: 155 °С.
1.46) п-аминофенил-3-O-(N-пропил-карбамоилметил)-β
β-D-галактопиранозид
320 мг (0,8 ммоль) соединения примера 1.46.а) гидрируют описанным в примере 1.24
образом. После осаждения из смеси метанола и диэтилового эфира получают 188 мг
(63 %) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (25 %) в соотношении 15:3:0,2; Rf = 0,31; т.п.: 154 °С.
Пример 1.47
п-аминофенил-3-O-(N-бутил-карбамоилметил)-β
β-D-галактопиранозид
1.47.а) п-нитрофенил-3-O-(N-бутил-карбамоилметил)-β
β-D-галактопиранозид
373 мг (1 ммоль) соединения примера 1.42.а) подвергают описанному в примере 1.45.а)
взаимодействию с 900 мкл (10 ммоль) н-бутиламина. После сгущения в вакууме остаток
осаждают из смеси этанола и н-гексана. Получают 413 мг (100 %) бесцветных кристаллов.
Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (25 %) в соотношении 15:3:0,2; Rf = 0,51; [α]20 = -26,8° (с = 1,0/СН3ОН); т.п.: 92 °С.
1.47) п-аминофенил-3-O-(N-бутил-карбамоилметил)-β
β-D-галактопиранозид
332 мг (0,8 ммоль) соединения примера 1.47.а) гидрируют описанным в примере 1.24
образом. После осаждения из смеси этанола и н-гексана получают 105 мг (34 %) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака
(25 %) в соотношении 15:3:0,2; Rf = 0,32; т.п.: 135 °С.
Пример 1.48
п-аминофенил-3-O-метоксикарбонилметил-α
α-D-маннопиранозид
1.48.а) п-нитрофенил-3-O-метоксикарбонилметил-6-O-трифенилметил-α
α-D-маннопиранозид
13,6 г (25 ммоль) соединения примера 1.40.а) подвергают описанной в примере 1.42.а)
реакции. После флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси петролейного эфира и этилацетата в соотношении 10:1 получают наряду с несколькими побочными
продуктами 2,79 г (18 %) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь
этилацетата и петролейного эфира в соотношении 2:1; Rf = 0,50; т.п.: 95-97 °С.
42
BY 5307 C1
1.48) п-аминофенил-3-O-метоксикарбонилметил-6-O-трифенилметил-α-D-маннопиранозид
1,23 г (2 ммоль) соединения примера 1.48.а) гидрируют описанным в примере 1.40 образом и обрабатывают. Получают 250 мг (36 %) коричневатого аморфного твердого вещества. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (25 %) в
соотношении 15:3:0,2; Rf = 0,45.
Пример 1.49
п-аминофенил-3-O-карбоксиметил-α
α-D-маннопиранозид
1.49.а) п-нитрофенил-3-O-бензоксикарбонилметил-6-O-трифенилметил-α
α-D-маннопиранозид
13,6 г (25 ммоль) соединения примера 1.40.а) подвергают описанному в примере 1.42.а)
взаимодействию с 14,4 мл (90 ммоль) сложного бензилового эфира бромуксусной кислоты. После флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси петролейного
эфира и этилацетата в соотношении 20:1 ÷ 10:1 получают наряду с некоторыми побочными продуктами 5,0 г (29 %) желтоватой пены. Тонкослойная хроматография: смесь этилацетата и петролейного эфира в соотношении 2:1; Rf = 0,66; [α]20 = +74,8° (с = 1,0/СН2Сl2).
1.49) п-аминофенил-3-О-карбоксиметил-α
α-D-маннопиранозид
2,08 г (3 ммоль) вышеуказанного соединения гидрируют описанным в примере 1.40
образом в течение 36 часов. После сгущения фильтрата остаток осаждают из смеси этанола и н-гексана. В результате промывания этилацетатом и повторного осаждения из смеси
этанола и диэтилового эфира получают 495 мг (50 %) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: метанол; Rf = 0,53; т.п.: 205-207 °С.
Пример 1.50
п-аминофенил-3-O-карбамоилметил-α
α-D-маннопиранозид
1.50.а) п-нитрофенил-3-O-карбамоилметил-6-O-трифенилметил-α
α-D-маннопиранозид
1,04 г (1,5 ммоль) соединения примера 1.49.а) подвергают описанной в примере 1.44.а)
реакции. Остаток сушат в вакууме масляного насоса, после чего его очищают путем
флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси петролейного эфира и
этилацетата в соотношении 2:3. Получают 561 мг (62 %) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (25 %) в соотношении
15:3:0,2; Rf = 0,67; [α]20 = +91,3° (с = 1,0/СН2С12); т.п.: 125-127 °С.
43
BY 5307 C1
1.50) п-аминофенил-3-О-карбамоилметил-α
α-D-маннопиранозид
541 г (0,9 ммоль) вышеуказанного соединения гидрируют описанным в примере 1.40
образом в течение 48 часов. После сгущения фильтрата остаток интенсивно промывают
метанолом и получают 134мг (45 %) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (25 %) в соотношении 15:3:0,2; Rf = 0,21;
т.п.: 126-128 °С.
Пример 1.51
п-аминофенил-3-десокси-β
β-D-галактопиранозид
1.51.а) п-нитрофенил-2,6-ди-O-бензил-4-O-ацетил-β
β-D-галактопиранозид
Раствор 2,7 г (5,6 ммоль) соединения примера 1.31.б) в 20 мл дихлорметана смешивают с 3 мл (16,3 ммоль) триэтилортоацетата и 20 мг толуолсульфокислоты. Реакционную
смесь держат при комнатной температуре в течение 30 минут, после чего разбавляют 200 мл
дихлорметана, промывают 50 мл насыщенного раствора бикарбоната натрия, органическую фазу сушат над сульфатом магния, фильтруют и сгущают в вакууме. Полученную
бесцветную пену растворяют в 15 мл 80 %-ной уксусной кислоты. Реакционную смесь
держат при комнатной температуре в течение дополнительных 30 минут, после чего подают в 200 мл насыщенного раствора бикарбоната натрия, три раза экстрагируют хлороформом, взятым в количестве по 75 мл, объединенные органические фазы промывают 100 мл
воды, сушат над сульфатом магния, фильтруют и сгущают в вакууме. В результате осаждения из смеси этанола и петролейного эфира получают 2,43 г (83 %) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь этилацетата и петролейного эфира в
соотношении 2:1; Rf = 0,64; [α]20 = -62,1° (с = 1,0/СН2Сl2); т.п.: 83 °С.
1.51.б) п-нитрофенил-2,6-ди-O-бензил-3-O-трифторметансульфонил-4-О-ацетилβ-D-галактопиранозид
К раствору 2,3 г (4,4 ммоль) соединения примера 1.51.а) в смеси 30 мл дихлорметана и
3 мл пиридина в атмосфере аргона при температуре -20 °С прикапывают раствор 2мл (11,8
ммоль) ангидрида трифторметансульфокислоты в 30 мл дихлорметана. Реакционную
смесь оставляют стоять при температуре -20 °С в течение часа, после чего подают в 200 мл
насыщенного раствора бикарбоната натрия, органическую фазу отделяют, сушат над
сульфатом магния, фильтруют и сгущают в вакууме. После очистки путем флешхроматографии с применением в качестве элюента сначала толуола, а потом смеси толуола и этилацетата в соотношении 20:1 получают 2,39 г (83 %) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь толуола и этилацетата в соотношении 5:1; Rf = 0,55;
[α]20 = -61,4° (с = 1,0/СН2Сl2); т.п.: 105 °С.
1.51.в) п-нитрофенил-2,6-ди-O-бензил-3-десокси-β
β-D-галактопиранозид
1,31 г (2 ммоль) вышеуказанного соединения растворяют в 25 мл толуола и смешивают с 1,54 г (6 ммоль) тетраборгидрата тетрабутиламмония. Реакционную смесь держат
при температуре 80 °С в течение 2 часов, после чего разбавляют 200 мл дихлорметана,
промывают 50 мл воды, органическую фазу сушат над сульфатом магния, фильтруют и
сгущают в вакууме. После очистки путем флеш-хроматографии с применением в качестве
элюента смеси толуола и этилацетата в соотношении 7:1 получают 596 мг (64 %) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь толуола и этилацетата в соотношении 5:1; Rf = 0,10; [α]20 = -81,3° (с = 1,0/CH2Cl2); т.п.: 114 °С.
44
BY 5307 C1
1.51)п-аминофенил-3-десокси-β
β-D-галактопиранозид
465 мг (1 ммоль) соединения примера 1.51.в) гидрируют описанным в примере 1.40
образом в течение 6 часов. После сгущения фильтрата остаток осаждают из смеси этанола
и петролейного эфира и получают 206 мг (81 %) бесцветных кристаллов. Тонкослойная
хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (25 %) в соотношении 15:3:0,2,
Rf = 0,22.
Пример 1.52
п-аминофенил-3,4-дидесокси-β
β-D-галактопиранозид
1.52.а) п-нитрофенил-2,6-ди-O-бензил-3,4-ди-O-трифторметансульфонил-β
β-D-галактопиранозид
2,12 г (4,4 ммоль) соединения примера 1.31.б) подвергают описанному в примере
1.51.б) взаимодействию с 4 мл (23,6 ммоль) ангидрида трифторметансульфокислоты. После очистки путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента сначала толуола, а потом смеси толуола и этилацетата в соотношении 50:1 получают 2,75 г (84 %)
желтоватого масла. Тонкослойная хроматография: смесь толуола и этилацетата в соотношении 5:1; Rf = 0,67; [α]20 = -22,5° (с = 1,0/СН2С12).
1.52.б) п-нитрофенил-2,6-ди-O-бензил-3,4-дидесокси-β
β-D-галактопиранозид
1,49 г (2 ммоль) соединения примера 1.52.а) подвергают описанному в примере 1.51.в)
взаимодействию с 2,31 г (9 ммоль) тетраборгидрата тетрабутиламмония. После очистки
путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента сначала толуола, а потом
смеси толуола и этилацетата в соотношении 50:1 получают 629 мг (70 %) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь толуола и этилацетата в соотношении 5:1;
Rf = 0,53; [α]20 = -79,1° (с = 1,0/СН2С12); т.п.: 89 °С.
1.52) п-аминофенил-3,4-дидесокси-β
β-D-галактопиранозид
450 мг (1 ммоль) соединения примера 1.52.б) гидрируют описанным в примере 1.40
образом в течение 5 часов. После сгущения фильтрата остаток осаждают из смеси этанола
и петролейного эфира, в результате чего получают 183 мг (76 %) бесцветных кристаллов.
Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (25 %) в соотношении 15:3:0,2; Rf = 0,47; [α]20 = -115,1° (с = 1,0/СН3ОН); т.п.: 187 °С.
Пример 1.53
п-аминофенил-6-O-ацетил-β
β-D-галактопиранозид
1.53.a) п-нитрофенил-6-O-ацетил-β
β-D-галактопиранозид
К раствору 7,53 г (25 ммоль) п-нитрофенил-β-D-галактопиранозида в 80 мл абсолютного ацетонитрила при температуре 0 °С прикапывают свежий раствор 2 мл (25 ммоль)
пиридина и 1,85 мл (26 ммоль) ацетилхлорида в 20 мл ацетонитрила. Перемешивают при
45
BY 5307 C1
0 °С в течение 30 минут и сгущают в вакууме. После очистки путем флеш-хроматографии
с применением в качестве элюента смеси дихлорметана и метанола в соотношении
50:1 ÷ 20:1 получают 4,02 г (47 %) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография:
смесь дихлорметана, метанола и аммиака (25 %) в соотношении 15:3:0,2; Rf = 0,50.
1.53) п-аминофенил-6-О-ацетил-β
β-D-галактопиранозид
1,72 г (5 ммоль) соединения примера 1.53.а) гидрируют описанным в примере 1.40 образом в течение 2 часов. После сгущения фильтрата остаток переосаждают из смеси метанола и диэтилового эфира и получают 1,34 г (86 %) бесцветных кристаллов. Тонкослойная
хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (25 %) в соотношении 15:3:0,2;
Rf = 0,34; [α]20 = -41,0° (с = 0,56/СН3ОН); т.п.: 180 °С (разл.).
Пример 1.54
п-аминофенил-3,4-ди-O-метоксикарбонилметил-β
β-D-галактопиранозид
1.54.а) Ацилирование соединения примера 1.24.а)
1,36 г (3 ммоль) соединения примера 1.24.а) растворяют в 25 мл диметилформамида и
смешивают с 1 мл (10,6 ммоль) сложного метилового эфира бромуксусной кислоты и
порциями с 300 мг (10 ммоль) 80 %-ной суспензии гидрида натрия в минеральном масле.
Через 3,5 часа при комнатной температуре к смеси добавляют еще 250 мкл (2,65 ммоль)
сложного метилового эфира бромуксусной кислоты и 75 мг (2,5 ммоль) гидрида натрия в
минеральном масле. По истечении 2 часов реакцию прекращают прикапыванием 5 мл метанола и сгущают в вакууме. Остаток подают в 250 мл дихлорметана и раствор интенсивно перемешивают с 100 мл воды. Органическую фазу сушат над 10 г сульфата магния,
сгущают в вакууме и очищают путем флеш-хроматографии с применением в качестве
элюента смеси петролейного эфира и этилацетата в соотношении 10:1 ÷ 7:1 ÷ 5:1 ÷ 3:1.
Получают 3 фракции продукта:
Фракция 1:
401 мг (21 %) п-нитрофенил-2,3,4-три-O-метоксикарбонилметил-β-D-галактопиранозида в виде бесцветной пены. Тонкослойная хроматография: смесь петролейного эфира и
этилацетата в соотношении 1:1; Rf = 0,47; [α]20 = -51,9° (с = 0,26/СН3ОН).
Фракция 2:
не идентифицирована; 88 мг бесцветной пены. Тонкослойная хроматография: смесь
петролейного эфира и этилацетата в соотношении 1:1; Rf = 0,39; [α]20 = -61,5° (с = 0,26/СН3ОН).
Фракция 3:
275 мг (16 %) п-нитрофенил-3,4-ди-O-метоксикарбонилметил-β-D-галактопиранозида
в виде бесцветной пены. Тонкослойная хроматография: смесь петролейного эфира и этилацетата в соотношении 1:1; Rf = 0,30; [α]20 = -38,6° (с = 0,28/CH3ОН).
1.54) п-аминофенил-3,4-ди-O-метоксикарбонилметил-β
β-D-галактопиранозид
206 мг (0,3 ммоль) фракции 3 примера 1.54.а) гидрируют описанным в примере 1.40
образом в течение 16 часов. Фильтрат сгущают, остаток кипятят в присутствии 20 мл диэтилового эфира, после чего получают 45,6 мг (37 %) серых кристаллов. Тонкослойная
46
BY 5307 C1
хроматография: смесь петролейного эфира и этилацетата в соотношении 1:1; Rf = 0,22;
т.п.: 155 °С (разл.).
Пример 1.55
п-аминофенил-2,3,4-три-O-метоксикарбонилметил-β
β-D-галактопиранозид
380 мг (0,5 ммоль) фракции 1 примера 1.54.а) гидрируют описанным в примере 1.40
образом в течение 16 часов. Фильтрат сгущают, остаток кипятят в присутствии 20 мл диэтилового эфира, после чего получают 46,8 мг (19 %) желто-коричневого масла. Тонкослойная хроматография: смесь петролейного эфира и этилацетата в соотношении 1:1;
Rf = 0,29; т.п.: 106 °С (разл.).
Пример 1.56
п-аминофенил-4-O-(β
β-D-галактопиранозил)-β
β-D-глюкопиранозид
4,63 г (10 ммоль) п-нитрофенил-4-О-(β-D-галактопиранозил)-β-D-галактопиранозида
гидрируют описанным в примере 1.23 образом. Получают 3,04 г (70 %) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: метанол; Rf = 0,55; т.п.: 235-237 °С (разл.).
Пример 1.57
Натриевая соль п-аминофенил-4-О-(3'-сульфатβ-D-галактопиранозил)-β
β-D-глюкопиранозида
47
BY 5307 C1
1.57.а) п-нитрофенил-4-O-(3',4'-O-изопропидилен-β
β-D-галактопиранозил)-β
β-D-глюкопиранозид
23,2 г (50 ммоль) п-нитрофенил-4-O-(β-D-галактопиранозил)-β-D-глюкопиранозида
смешивают с 400 мл диметоксипропана и каталитическим количеством (±)-камфора-10сульфокислоты (400 мг, 1,7 ммоль). После реакции при комнатной температуре в течение
3 суток реакцию прекращают добавкой 240 мкл (1,7 ммоль) триэтиламина, сгущают в вакууме и сушат 2 часа в вакууме масляного насоса. Полученные кристаллы подают в 500 мл
смеси метанола и воды в соотношении 10: 1 и кипятят с обратным холодильником в течение 6 часов. После сгущения в вакууме и очистки путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана и метанола в соотношении 25:1 ÷ 10:1,
каждый раз в присутствии 0,5 % триэтиламина, получают 15,2 г (60 %) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении
5:1; Rf = 0,49; т.п.: 253-255 °С (разл.).
1.57.б) п-нитрофенил-2,3,6-три-O-бензоил-4-O-(2',6'-ди-O-бензоил-3',4'-O-изопропидилен-β
β-D-галактопиранозил)-β
β-D-глюкопиранозид
К раствору 15,1 г (30 ммоль) соединения примера 1.57.а) в 300 мл пиридина при температуре 0 °С в течение 30 минут медленно прикапывают 50 мл (430 ммоль) бензоилхлорида. Перемешивают еще 2 часа при комнатной температуре, после чего реакционную
смесь при перемешивании подают в 2000 мл ледяной воды. Через 15 минут выпавшие
кристаллы отфильтровывают и подают в 1500 мл дихлорметана. Раствор два раза промывают водой, взятой в количестве по 500 мл, и два раза - 1-н. раствором бикарбоната натрия, взятым в количестве по 500 мл. Органическую фазу сушат над 50 г сульфата магния,
сгущают в вакууме и очищают путем перекристаллизации из метанола. Получают 26,7 г
(87 %) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 50:1; Rf = 0,49; [α]20 = +23,6° (с = 1,08/СН2Сl2); т.п.: 272-274 °С.
1.57.в) п-нитрофенил-2,3,6-три-O-бензоил-4-O-(2',6'-ди-O-бензоил-β
β-D-галактопиранозил)-β
β-D-глюкопиранозид
К раствору 20,5 г (20 ммоль) соединения примера 1.57.б) в 400 мл дихлорметана добавляют 20 мл 99 %-ной трифторуксусной кислоты и перемешивают при комнатной температуре в течение 20 минут. Раствор два раза промывают 1-н. раствором бикарбоната
натрия, взятым в количестве по 200 мл, органическую фазу сушат над 10 г сульфата магния, сгущают в вакууме и остаток очищают путем осаждения из смеси дихлорметана и
диэтилового эфира. Получают 18,0 г (91 %) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 20:1; Rf = 0,18; т.п.: 234 °С.
1.57.г) п-нитрофенил-2,3,6-три-O-бензоил-4-О-(2',6'-ди-O-бензоил-4'-O-ацетил-β
βD-галактопиранозил)-β
β-D-глюкопиранозид
5,5 г (5,6 ммоль) соединения примера 1.57.в) подвергают описанной в примере 1.51.а) реакции. После очистки путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента
смеси петролейного эфира и этилацетата в соотношении 3:1 ÷ 1:1 получают 4,03 г (70 %)
бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в
соотношении 20:1; Rf = 0,67; т.п.: 118 °С.
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
2
Размер файла
518 Кб
Теги
патент, by5307
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа