close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY5586

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
BY (11) 5586
(13) C1
(19)
7
(51) A 61K 35/175, 39/36
(12)
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
СПОСОБ СТИМУЛЯЦИИ ПОСТВАКЦИНАЛЬНОГО
ИММУНИТЕТА ПРИ ЧУМЕ ПЛОТОЯДНЫХ
(21) Номер заявки: a 19990652
(72) Авторы: Красочко Петр Альбинович;
(22) 1999.06.30
Прудников Виктор Сергеевич; Михай(46) 2003.12.30
лова Анжелика Владимировна (BY)
(71) Заявители: Белорусский научно-иссле- (73) Патентообладатели: Белорусский научнодовательский институт эксперименисследовательский институт эксперитальной ветеринарии им. С.Н.Вышементальной ветеринарии им.С.Н.Вылесского; Витебская государственная
шелесского; Витебская государственная
академия ветеринарной медицины (BY)
академия ветеринарной медицины (BY)
(57)
Способ стимуляции поствакцинального иммунитета при чуме плотоядных, включающий иммунизацию животных вирусвакциной одновременно с иммуностимуляторами, отличающийся тем, что в качестве иммуностимулятора используют препарат из пчелиной
перги "Апистимулин-А", который вводят однократно внутримышечно одновременно с
вакциной в дозе 20-25 мг на голову.
BY 5586 C1
(56)
Игнатов П. Очерки об инфекционных болезнях у собак. - М., 1995. - С. 94-95.
DE 3533864 A1, 1985.
RU 2048120 C1, 1995.
Чудаков В.Г. Технология продуктов пчеловодства. - М.: Колос, 1979. - С. 118-127.
Изобретение относится к ветеринарной иммунологии, в частности к способам стимуляции поствакцинального иммунитета при инфекционных заболеваниях плотоядных животных.
Наиболее близким к заявляемому изобретению является способ стимуляции поствакцинального иммунитета при чуме плотоядных, включающий иммунизацию животных
вирусвакциной одновременно с иммуностимуляторами с помощью препарата риботан,
представляющего собой соль рибонуклеиновой кислоты бактерий [1].
Недостатком его является то, что препарат активизирует неспецифический иммунитет
и не способствует выработке противочумного иммунитета у плотоядных.
Задачей настоящего изобретения является разработка способа активизации поствакцинального иммунитета против чумы плотоядных с использованием неспецифического
стимулятора иммунной системы "Апистимулина-А".
Поставленная задача достигается тем, что в способе стимуляции поствакцинального
иммунитета при чуме плотоядных, включающем иммунизацию животных вирусвакциной
одновременно с иммуностимулятором, в качестве иммуностимулятора используют препарат из пчелиной перги "Апистимулин-А", который вводят однократно внутримышечно
одновременно с вакциной в дозе 20-25 мг на голову.
BY 5586 C1
Используемое средство "Апистимулин-А" для стимуляции поствакцинального иммунитета получают из экологически чистого продукта - пчелиной перги, представляющей
собой пыльцу, собранную и переработанную пчелами и упакованную ими в соты. Препарат не обладает аллергенными, токсическими свойствами, но в то же время активизирует
биосинтез иммуноглобулинов, Т- и В-системы лимфоцитов, фагоцитарную активность
нейтрофилов, увеличивает титр интерферона, повышает активность лизоцима и бактерицидную активность сыворотки крови.
Пример 1.
Иммунизацию щенков серебристо-черных лисиц против чумы плотоядных проводили
в возрасте 7-8 месяцев путем введения им сухой живой культуральной вирусвакциной
против чумы плотоядных из штамма "ЭПМ" при инфекционном титре вируса 5,0 lg ТЦД 50/мл
в дозе 1 мл одновременно с иммуностимулятором "Апистимулином-А" в количестве 20-25 мг
на голову. Вирусвакцину с иммуностимулятором вводили однократно внутримышечно с
внутренней стороны бедра.
Пример 2.
Для отработки оптимальной дозы "Апистимулина-А" на 20 щенках серебристо-черных
лисиц животных разделили на 4 группы по 5 голов в группе. Щенкам опытной группы № 1
вводили чистую вирусвакцину против чумы плотоядных из штамма "ЭПМ" при инфекционном титре вируса 5,0 lg ТЦД 50/мл, животным опытной группы № 2 - ту же дозу вирусвакцины с "Апистимулином-А" в количестве 20 мг на голову, лисицам третьей опытной
группы - вирусвакцину с "Апистимулином-А" в количестве 25 мг на голову, четвертой
опытной группы - то же, но "Апистимулина-А" 30 мг на голову. Для исследования была
взята кровь от животных до иммунизации, через 3 и 14 дней. В крови опытных животных
определялся титр антител к вирусу чумы плотоядных.
В табл. 1 представлены данные по отработке оптимального количества "Апистимулина-А" при иммунизации серебристо-черных лисиц против чумы плотоядных.
Из табл. 1 видно, что оптимальной дозой "Апистимулина-А" при иммунизации против
чумы плотоядных является доза 20-25 мг/ голову.
Пример 3.
Для изучения влияния препарата "Апистимулин-А" на формирование поствакцинального иммунитета при чуме плотоядных был проведен опыт на серебристо-черных лисицах.
Было использовано 20 голов серебристо-черных лисиц возрастом 7-8 месяцев, которых
разделили на 4 группы по 5 голов в группе. Лисиц 1-ой опытной группы прививали сухой
живой культуральной вирусвакциной против чумы плотоядных из штамма "ЭПМ" при
инфекционном титре вируса 5,0 lg ТЦД 50/мл. Животных 2-й опытной группы иммунизировали той же вирусвакциной, но для активизации иммунитета использован иммуностимулятор риботан. Животных 3-й опытной группы иммунизировали той же вирусвакциной и
для активизации иммунитета использован иммуностимулятор "Апистимулин-А". Животные 4-й группы - контроль (вместо вирусвакцины и иммуностимуляторов вводился изотонический раствор натрия хлорида).
Для исследования была взята кровь до обработок через 3, 14 и 90 дней. В крови изучались
основные показатели клеточного (количество лейкоцитов, фагоцитарное число и фагоцитарный индекс) и гуморального иммунитета (бактерицидная и лизоцимная активность сыворотки крови, титр противовирусных антител в РНГА).
Для изучения иммуноморфогенеза через 15 дней после иммунизации часть опытных и
контрольных щенков убивали. У убитых животных для гистологического исследования и
подсчета количества плазматических клеток отбирали кусочки селезенки, регионарных и
контррегионарных месту введения вирусвакцины лимфоузлов.
В табл. 2 представлены результаты изучения напряженности противочумного иммунитета у щенков серебристо-черных лисиц после иммунизации их чистой вирусвакциной
и вирусвакциной с иммуностимуляторами.
2
BY 5586 C1
Из представленных результатов видно, что титр антител на 14-й день после вакцинации составил 9,4 log2, тогда как у вакцинированных чистой вирусвакциной - 7,4 log2, а
вакцинированных с риботаном - 8,1 log2, что свидетельствует о более сильной активизации биосинтеза противовирусных антител при одновременном ведении вирусвакцины с
"Апистимулином-А".
В табл. 3 представлены результаты изучения динамики лейкоцитов у щенков серебристочерных лисиц после иммунизации их чистой вирусвакциной и вирусвакциной с иммуностимуляторами.
Из табл. 3 видно, что на 14-й день у животных, иммунизированных чистой вирусвакциной, количество лейкоцитов возросло с 5,3×109 до 10,2×109, получавших вирусвакцину
с риботаном - с 5,4×109 до 11,6×109, а вирусвакцину с "Апистимулином-А" - с 5,3×109 до
13,3×109. Это говорит об активизации клеточного иммунитета у привитых лисиц, особенно с использованием "Апистимулина-А".
В табл. 4 представлены результаты изучения бактерицидной активности сыворотки
крови у щенков серебристо-черных лисиц при иммунизации при чуме плотоядных с использованием иммуностимуляторов.
Полученные данные свидетельствуют о значительной активизации гуморального неспецифического иммунитета у животных, особенно привитых с использованием "Апистимулина-А". Так, на 14-й день после иммунизации бактерицидная активность у животных,
привитых чистой вирусвакциной, возросла с 27,8 % до 41,25 %, тогда как использование
иммуностимулятора риботана - с 26,5 % до 49,49 %, а с "Апистимулином-А" - с 27,12 %
до 95,6 %. Такое положение продолжалось и до 90-го дня наблюдения.
На основании проведенных данных по изучению лизоцимной активности сыворотки
крови, как одного из основных показателей неспецифического гуморального иммунитета,
видно, что иммунизация животных с иммуностимуляторами значительно его активизирует уже начиная с 3-го дня наблюдения и, особенно, на 14-й день. Так, у щенков лисицы,
иммунизированных чистой вирусвакциной, к 4-му дню лизацимная активность сыворотки
крови возросла с 7,3 % до 7,6 %, а к 14-му дню - до 12,2 %. У животных, привитых вирусвакциной с риботаном, соответственно 7,3 %, 9,2 % и 12,8 %, а с "Апистимулином-А" 7,3 %, 16,6 % и 25,6 %. К 90-му дню лизоцимная активность у щенков несколько снизилась,
но все равно в группе животных, иммунизированных вирусвакциной с "Апистимулином-А",
этот показатель был в 2 раза выше, чем у вакцинированных чистой вирусвакциной
(табл. 5).
Иммунизация животных против чумы плотоядных активизирует не только гуморальный
иммунитет, но и клеточный. Особенно характерные изменения отмечаются при изучении
фагоцитарной активности нейтрофилов и плазмоцитарной реакции в органах иммунитета.
Изучение фагоцитарного числа и фагоцитарного индекса у животных, иммунизированных вирусвакциной против чумы плотоядных, показывает, что фагоцитарное число,
т.е. количество захваченных бактерий на число активных нейтрофилов у иммунизированных
животных как чистой вирусвакциной, так и вирусвакциной с риботаном, незначительно
повышается с 3,2 до 3,6 и с 3,2 до 3,8 к 14-му дню, однако при использовании "Апистимулина-А" этот показатель на 4-й день повысился с 3,2 до 4,8, а к 14-му дню - до 6,1.
Фагоцитарный индекс, т.е. отношение числа захваченных бактерий к общему числу исследованных нейтрофилов, также имел значительные различия. Так, у щенков лисиц, привитых чистой вирусвакциной и вирусвакциной с риботаном, отмечается снижение этого
показателя к 14-му дню соответственно с 2,8 до 1,9 и с 2,8 до 2,2. Но применение "Апистимулина-А" с вирусвакциной стимулирует фагоцитоз - фагоцитарный индекс возрос к
14-му дню с 2,8 до 5,4. Это свидетельствует, что "Апистимулин-А" является сильным активатором клеточного иммунитета у животных (табл. 6).
Характеристику плазмоцитарной реакции определяли по таким показателям, как число
плазмоцитов и число плазмобластов, подсчитанных в 50 полях зрения микроскопа (объек3
BY 5586 C1
тив 90х, окуляр 7х, бинокуляр 1,5х). Плазмоцитарная реакция, как показатель иммунологической перестройки организма, направленный на биосинтез противовирусных антител,
показывает, что у животных, иммунизированных чистой вирусвакциной, через 2 недели
после иммунизации в селезенке число плазмобластов составило 6,2, плазмоцитов - 22,6, в
регионарном месту введения вирусвакцины лимфоузле - соответственно 36,4 и 29,7, в
контррегионарном лимфоузле - 12,6 и 19,4. Животные, получившие вирусвакцину с риботаном, в селезенке имели 10,1 плазмоцитов и 44,7 плазмобластов, в регионарном лимфоузле - соответственно 37,8 и 52,1, в контррегионарном - 15,5 и 38,3. Щенки, иммунизированные
вирусвакциной с "Апистимулином-А", в селезенке имели 9,4 плазмобластов и 62,6 плазмоцитов, в регионарном лимфоузле - 25,3 и 74,8, контррегионарном - 12,8 и 49,2 (табл. 7).
Эти показатели свидетельствуют о значительной иммунологической перестройке организма щенков лисиц, особенно при иммунизации вирусвакциной с "Апистимулином-А".
Иммуноморфогенез направлен на повышение количества ранних иммунокомпетентных
клеток - плазмобластов, что повышает уровень гуморального иммунного ответа при иммунизации.
Таким образом, иммунизация щенков лисиц вирусвакциной против чумы плотоядных
одновременно с "Апистимулином-А" позволяет на 50-100 % активизировать основные показатели поствакцинального иммунитета, что приводит к более напряженному противочумному иммунитету.
Таблица 1
Результаты отработки дозы "Апистимулина-А"
при вакцинации против чумы плотоядных
№№
п/п
1
2
3
Дни
взятия
крови
Титры антител у животных различных групп (log2):
Группа № 2
Группа № 3
Группа № 4
Группа № 1
(ЭПМ + Аписти- (ЭПМ + Аписти- (ЭПМ + Аписти(ЭПМ)
мулин-А)
мулин-А)
мулин-А)
(20 мг/гол.)
(25 мг/гол.)
(30 мг/гол.)
До иммунизации
Через
3 дня
Через
14 дней
0
0
0
0
4,5 ± 0,54
7,1 ± 0,41
7,2 ± 0,12
6,2 ± 0,12
7,4 ± 0,12
9,2 ± 0,16
9,4 ± 0,07
9,0 ± 0,07
Таблица 2
Напряженность иммунитета у щенков серебристо-черных лисиц,
вакцинированных против чумы плотоядных
№№
п/п
1
2
3
4
Дни взятия
крови
До
иммунизации
Через 3 дня
Через 14 дней
Через 90 дней
Титры антител у животных различных групп (log2):
Группа № 2
Группа № 3
Группа № 1
Группа № 4
(ЭПМ +
(ЭПМ +
(ЭПМ)
(контроль)
риботан)
Апистимулин-А)
0
0
0
0
4,5 ± 0,54
7,4 ± 0,12
5,7 ± 0,33
6,9 ± 0,41
8,1 ± 0,16
6,2 ± 0,92
7,2 ± 0,12
9,4 ± 0,07
7,8 ± 0,46
0
0
0
4
BY 5586 C1
Таблица 3
Количество лейкоцитов у щенков серебристо-черных лисиц,
вакцинированных против чумы плотоядных
№№
п/п
1
2
3
4
Дни взятия
крови
До
иммунизации
Через 3 дня
Через 14 дней
Через 90 дней
Группа № 1
(ЭПМ)
Количество лейкоцитов (109)
Группа № 2
Группа № 3
(ЭПМ + риботан)
(ЭПМ + Апистимулин-А)
5,3 ± 0,46
5,4 ± 1,18
5,3 ± 0,14
6,7 ± 1,72
10,20 ± 1,18
5,2 ± 0,91
6,9 ± 1,19
11,6 + 1,34
5,2 ± 1,08
8,6 ± 1,72
13,3 ± 0,18
6,4 ± 1,35
Таблица 4
Бактерицидная активность сыворотки крови у щенков серебристо-черных лисиц,
вакцинированных против чумы плотоядных
№№
Дни взятия крови
п/п
1
2
3
4
До иммунизации
Через 3 дня
Через 14 дней
Через 90 дней
Группа № 1
(ЭПМ)
27,78 ± 0,19
38,47 ± 3,07
41,25 ± 1,52
31,63 ± 0,77
Бактерицидная активность, %
Группа № 2
Группа № 3
(ЭПМ + риботан) (ЭПМ + Апистимулин-А)
26,54 ± 0,22
27,12 ± 0,08
42,781 ± 2,18
46,42 ± 2,06
48,49 ± 1,43
95,63 ± 2,56
37,65 ± 2,45
50,47 ± 2,32
Таблица 5
Лизоцимная активность сыворотки крови у щенков серебристо-черных лисиц,
вакцинированных против чумы плотоядных
№№
п/п
1
2
3
4
Дни взятия
крови
До иммунизации
Через 3 дня
Через 14 дней
Через 90 дней
Группа № 1
(ЭПМ)
7,3 ± 1,32
7,6 ± 0,90
12,2 ± 1,47
7,8 ± 0,14
Лизоцимная активность (%)
Группа № 2
Группа № 3
(ЭПМ + риботан) (ЭПМ + Апистимулин-А)
5,4 ± 0,96
5,3 ± 1,07
9,2 ± 1,53
16,6 ± 2,18
12,8 ± 1,39
25,6 ± 0,78
10,2 ± 0,25
15,9 ± 0,07
5
BY 5586 C1
Таблица 6
Фагоцитарная активность крови у щенков серебристо-черных лисиц,
вакцинированных против чумы плотоядных
Фагоцитарная активность в группах
Группа № 3
Группа № 1
Группа № 2
Группа № 4
Дни
(ЭПМ + Аписти№№
(ЭПМ)
(ЭПМ + риботан)
(контроль)
взятия
мулин-А)
п/п
крови Фагоци- Фагоци- Фагоци- Фагоци- Фагоци- Фагоци- Фагоци- Фагоцитарное тарный тарное тарный тарное тарный тарное тарный
число* индекс** число индекс число индекс число индекс
До им2,8 ±
3,2 ±
3,2 ±
2,8 ±
3,2 ±
2,8 ±
3,2 ±
2,8 ±
1 муниза0,05
0,05
0,08
0,08
0,05
0,05
0,05
0,05
ции
Через
3,3 ±
1,7 ±
3,4 ±
2,0 ±
4,8 ±
4,2 ±
3,1 ±
2,7 ±
2
3 дня
0,12
0,12
0,09
0,09
0,12
0,12
0,05
0,05
Через
3,6 ±
1,9 ±
3,8 ±
2,2 ±
6,1 ±
5,4 ±
3,3 ±
2,9 ±
3
14 дней
0,04
0,04
0,04
0,04
0,08
0,08
0,04
0,06
Через
3,1 ±
1,6 ±
3,3 ±
2,8 ±
3,6 ±
3,2 ±
3,0 ±
2,5 ±
4
90 дней
0,08
0,08
0,05
0,10
0,06
0,06
0,04
0,03
* - фагоцитарное число - количество захваченных бактерий на число активных нейтрофилов;
** фагоцитарный индекс - отношение числа захваченных бактерий к общему числу исследованных нейтрофилов.
Таблица 7
Плазмоцитарная реакция в органах иммунной системы у щенков
серебристо-черных лисиц, вакцинированных против чумы плотоядных
Плазмоцитарная реакция у животных в группах*
Группа № 3
Органы
Группа № 1
Группа № 2
№№
(ЭПМ +
иммунной
(ЭПМ)
(ЭПМ + риботан)
Апистимулин-А)
п/п
системы
Плазмо- Плаз- Плазмо- Плазмо- Плазмоб- Плазбласты моциты бласты
циты
ласты моциты
6,2 ±
9,4 ±
22,6 ± 10,1 ±
44,7 ±
62,6 ±
1 Селезенка
0,11
0,16
0,40
0,73
1,60
2,12
Регионарный месту веде36,4 ±
29,7 ± 37,8 ±
52,1 ±
25,3 ±
74,8 ±
2 ния вакцины лимфоузел
1,06
0,06
1,06
1,53
0,92
1,76
(правый паховый)
Контррегионарный месту
38,3 ±
12,6 ±
19,4 ± 15,5 ±
12,8 ±
49,3 ±
3 ведения вакцины лимфо1,19
0,38
0,97
1,67
0,04
2,62
узел (левый паховый)
* - число плазмоцитов и число плазмобластов, подсчитанных в 50 полях зрения микроскопа (объектив 90х, окуляр 7х, бинокуляр 1,5х).
Источники информации:
1. Игнатов П. Очерки об инфекционных болезнях у собак. - М., 1995. - С. 94-95.
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
178 Кб
Теги
by5586, патент
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа