close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY5852

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
7
(51) C 12N 1/14,
(12)
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
BY (11) 5852
(13) C1
(19)
C 12P 7/64 //
(C 12N 1/14,
C 12R 1:645)
ШТАММ ГРИБА MORTIERELLA ALPINA PEYRONEL БС-2
ДЛЯ ПРОИЗВОДСТВА ПОЛИНЕНАСЫЩЕННЫХ ВЫСШИХ
ЖИРНЫХ КИСЛОТ И ИХ ПРОИЗВОДНЫХ
(21) Номер заявки: a 19991075
(22) 1999.12.06
(31) 98122249 (32) 1998.12.07 (33) RU
(46) 2004.03.30
(71) Заявитель: ООО "Инженерно-маркетинговая фирма "Биотех-Сэприс"
(RU)
(72) Авторы: Суханов Виктор Александрович; Ариповский Александр Викторович; Желифонова Валентина Павловна;
Кульнев Анатолий Иванович (RU);
Петров Петр Тимофеевич; Скрипко
Анна Дмитриевна; Гриневич Людмила
Николаевна; Царенков Валерий Минович (BY)
(73) Патентообладатель: ООО "Инженерномаркетинговая фирма "Биотех-Сэприс"
(RU)
(57)
Штамм гриба Mortierella alpina Peyronel БС-2 (VKM F-3625D) для производства полиненасыщенных высших жирных кислот и их производных.
BY 5852 C1
(56)
RU 2075934 C1,1997.
WO 9621037, 1996.
RU 2038377 C1, 1991.
Изобретение относится к сельскохозяйственной, медицинской и пищевой микробиологии, в частности к штамму-продуценту полиненасыщенных высших жирных кислот,
которые используются для производства различных препаратов, применяемых в сельском
хозяйстве, в ветеринарии, в медицине, в косметологии и в пищевой промышленности.
Известны штаммы грибов рода Mortierella: Mortierella alpina, Mortierella bainiari, Mortierella elongata, Mortierella exigua, Mortierella minutissima, Mortierella verticilata, Mortierella
hygrophila и Mortierella polycephala для получения арахидоновой кислоты [1, 2, 3].
Известен также штамм Mortierella hygrophila VKM F-1854, продуцирующий 10-45
(отн. %) арахидоновой кислоты от суммы жирных кислот [4].
Недостатком данных способов с использованием определенных штаммов является то,
что несмотря на относительно большое количество получаемой арахидоновой кислоты
неясно, могут ли эти штаммы производить другие полиненасыщенные высшие жирные
кислоты (ПНВЖК) в зависимости от условий культивирования, поскольку в некоторых
случаях требуется изменять соотношение между ПНВЖК с сохранением максимального
количества арахидоновой кислоты, то есть неясно, могут ли эти штаммы быть универсальными в условиях производства.
BY 5852 C1
Известен штамм гриба Mortierella alpina Peyronel БС-1 (VKM F-3605 D), являющийся
продуцентом полиненасыщенных высших жирных кислот. Штамм вырабатывает до 3050 % арахидоновой кислоты от суммы всех высших жирных кислот [5]. Описание и получение штамма приведено в указанном патенте (родительский штамм, прототип).
Известный штамм не позволяет получать арахидоновую и другие ПНВЖК в еще
больших количествах.
Целью изобретения является получение штамма, вырабатывающего еще более значительные количества арахидоновой кислоты, а также позволяющего изменять состав
ПНВЖК в сторону более ненасыщенных и длинных кислот, в зависимости от условий
культивирования.
Предложен новый штамм гриба Mortierella alpina Peyronel БС-2 (VKM F-3625 D) для
производства полиненасыщенных высших жирных кислот и их производных.
Новый штамм получен путем отбора моноспорового изолята после воздействия ультрафиолетом на суспензию спор Mortierella alpina Peyronel БС-1 (VKM F-3605 D) с последующим анализом содержания арахидоновой кислоты (маркерная характеристика) в
изолятах методом ГЖХ. Авторский номер нового штамма БС-2. Хранится во Всероссийской коллекции микроорганизмов под международным депозитарным номером VKM F3625 D. В данное время штамм является производственным.
Штамм Mortierella alpina Peyronel БС-2 (VKM F-3625 D) имеет следующие культурально-морфологические особенности при его культивировании на жидких средах:
При культивировании штамма в колбах на жидких средах наблюдается, как правило,
мицелиальный рост. Иногда гриб растет в виде рыхлых шариков диаметром от 2 до 6 мм.
Мицелий имеет желтовато-кремовый цвет и обладает специфическим запахом, похожим
на запах рыбьего жира. В начале культивирования гифы слабо ветвящиеся, шириной
5-9 мкм, длиной 50-100 мкм. В процессе культивирования наблюдается образование жировых клеток, заполненных каплями жира. Жировые клетки имеют неправильную форму
обычно с несколькими (2-4) перегородками.
Штамм культивируют при температуре 24-28 °С в колбах (750 мл) со 100 мл среды на
качалке при 220 об/мин в течение 5-7 суток.
Стандартные условия выращивания приведены ниже в качестве примеров.
Пример 1.
Среда 1, следующего состава (г/л):
глюкоза
80
пептон
10
дрожжевой экстракт Difco
5
2
КН2РО4
0,5.
MgSO4×7Н2O
Пример 2.
Среда 2 (г/л):
пшено
40
(NH4)2SO4
1,0
КН2РО4
1,0
0,5
MgSO4×7H2O
KCl
0,5
CaCl2
0,15
Вода
1000 мл.
Пшено варить в большом объеме воды 1 час, внести соли, стерилизовать при 115 °С
30 мин.
2
BY 5852 C1
Пример 3.
Среда 3 (г/л):
глюкоза
80,0
дрожжевой экстракт Difco
1,0
(NH4)2SO4
3,0
0,5
MgSO4×7H2O
KCl
0,5
КН2РО4
2,0
CaCl2
0,15
40
мг/л
FeSO4×7H2O
30 мг/л
ZnSO4×7Н2О
10 мг/л
CuSO4×5H2O
5мг/л
MnSO4×5Н2О
CoCl2
0,5 мг/л.
Штамм имеет следующие культурально-морфологические признаки на плотных средах:
Пример 4.
Культурально-морфологические признаки на сусло-агаре.
Состав среды - сусло неохмеленное 6-7 °Б, агар 2 %, рН 7.
Стерилизация при 115 °С 30 минут.
Гриб культивируют на чашках Петри (диаметр 9 см) в темноте при 28 °С 7 суток.
Колонии на сусло-агаре 70-75 мм в диаметре, белые, пушистые, нарастают мелкими
лопастями в виде неправильной розетки, с линейной скоростью роста 6-7 мм в сутки; с
развитым воздушным вегетативным мицелием, хлопьевидно-пушистые, 0,5-0,8 см высотой; слабо спороносящие. Спорангиеносцы прямые, шиловидные 60-150 мкм длиной, у
верхушки 2-4 мкм в диаметре, у основания 6-10 мкм с клеткой-ножкой; простые, отходят
единично и чаще от субстрата. Спорангии округлые, с бугристыми выступами, у основания слегка приплюснутые, 10-20 мкм в диаметре, многоспоровые образуются на более
длинных спорангиеносцах; и односпоровые эллиптически-шаровидные, иногда слегка угловатые, 10-14 мкм в диаметре, возникают на более коротких спорангиеносцах. Спорангиеспоры эллиптически-цилиндрические 4-5,5 × 1,5-2,5 мкм, обычно с 1-2 каплями жира.
Пример 5.
Культурально-морфологические признаки на глюкозо-картофельном агаре.
Состав среды - отвар картофеля - 100 мл, глюкоза - 10 г, агар -20 г, вода водопроводная до 1000 мл.
Стерилизуют при 115 °С 30 минут.
Гриб культивируют на чашках Петри (диаметр 9 см) в темноте при 28 °С 7 суток.
Семисуточные колонии на глюкозо-картофельном агаре 35-40 мм в диаметре, белые,
пушистые, нарастают мелкими лопастями в виде неправильной розетки с линейной скоростью роста 6-7 мм в сутки; с развитым воздушным вегетативным мицелием, хлопьевиднопушистые, 0,5-0,8 см высотой; слабо спороносящие. Строение и размеры спорангиеносцев, спорангий и спорангиеспор аналогичны приведенным в примере 4.
Пример 6.
Культурально-морфологические признаки на голодном агаре.
Состав среды - агар - 20 г, вода водопроводная - 100 мл. Стерилизация при 115 °С 30
минут.
Гриб культивируют на чашках Петри (диаметр 9 см) в темноте при 28 °С 7 суток.
Семисуточные колонии на голодном агаре 12-15 мм в диаметре, белые, пушистые с
немногочисленными гифальными клубочками, нарастают мелкими лопастями в виде не3
BY 5852 C1
правильной розетки с линейной скоростью роста 1,5-2 мм в сутки; с развитым воздушным
вегетативным мицелием, хлопьевидно-пушистые, 0,4-0,6 см высотой; хорошо спороносящие.
Строение и размеры спорангиеносцев, спорангий и спорангиеспор аналогичны примеру 4.
Пример 7.
Культурально-морфологические признаки на среде Чапека.
Состав среды (г/л) - сахароза - 30,0, NaNO 3 - 2,0, КН 2 РО 4 - 1,0, KCl - 0,5,
MgSO4 × 7Н2О - 0,5, FeSO4 × 7Н2О - 0,01, агар - 20, вода дистиллированная - 1000 мл.
Гриб культивируют на чашках Петри (диаметр 9 см) в темноте при 28 °С 7 суток.
Семисуточные колонии на среде Чапека 15-20 мм в диаметре, белые, пушистые с немногочисленными гифальными клубочками, нарастают мелкими лопастями в виде неправильной розетки с линейной скоростью роста 2-2,8 мм в сутки; с развитым воздушным
вегетативным мицелием, хлопьевидно-пушистые, 0,5-0,6 см высотой; слабо спороносящие. Строение и размеры спорангиеносцев, спорангий и спорангиеспор аналогичны приведенным в примере 4.
Физиолого-биохимические признаки штамма Mortierella alpina Peyronel БС-2 (VKM F3625 D):
Штамм сапрофит, аэроб, растет в диапазоне рО2 от 10 до 100 % от насыщения воздухом, не растет в анаэробных условиях.
Способен расти в интервале от 5 до 32 °С. Оптимальная температура для роста 2428 °С. Растет в интервале рН от 5,4 до 8,0, оптимальное значение рН 6,0-7,2.
Утилизирует крахмал, глюкозу, фруктозу, лактозу, мальтозу, маннозу, декстрин, галактозу, гликоген, аммонийные формы азота, нитраты, аминные формы азота (пептоны,
дрожжевой экстракт, гидролизаты мясной, рыбной муки, казеина).
Техническим результатом изобретения является получение штамма, вырабатывающего относительно большое количество арахидоновой кислоты в составе жирных кислот (до
62 %), а также продуцирующего кислоты С20:5-С22:6, в зависимости от условий культивирования.
Сравнительная продуцирующая способность родительского и нового штаммов по выходу жирных кислот приведена в примере 8.
Пример 8.
Содержание высших жирных кислот (отн. %) в образцах экстрактов, полученных из
мицелиальной биомассы штаммов Mortierella alpina Peyronel БС-1 и БС-2 при выращивании на различных средах:
Штамм БС-2, отн., %
Штамм БС-1,
Кислота
отн. %
среда 1 среда 2 среда 3
С 14:n
0,5
С 16:0
16,0
4,2
5,3
10,0
С 16:1
С 18:0
14,0
0,4
6,6
5,0
С 18:1
13,0
12,7
12,0
16,0
С 18:2
6,3
8,1
12,5
10,6
6,2
4,6
4,2
6,3
γ-С 18:3
С 20:1
1,3
следы
С 20:2
1,0
1,3
следы
С 20:3
4,8
4,8
следы
5,1
С 20:4
34
62,0
58,0
47
С 22:n
1,5
следы
Биомасса, г/л
14
25
18
15
4
BY 5852 C1
Штамм отличается от родительского более высоким содержанием арахидоновой кислоты (С 20:4, ω-6) от суммы жирных кислот: до 62 % против 34 %. Кроме того, штамм
БС-2 позволяет выращивать биомассу до 25 г/л против 14 г/л - в случае использования
штамма БС-1.
Повышение уровня более ненасыщенных и длинных высших жирных кислот, типа эйкозапентаеновой (С 20:5, ω-3) и докозагексаеновой (С 22:6, ω-3) может достигаться путем
изменения температуры культивирования штамма, а именно путем ее снижения до 12 °С в
последние сутки (Пример 9).
Пример 9.
Содержание высших жирных кислот (отн. %) в образце экстракта, полученного из мицелиальной биомассы гриба Mortierella alpina БС-2, после его культивирования при 12 °С
(выращивание на среде 1):
Кислота
отн. %
С 14:n
С 16:0
3,1
С 16:1
С 18:0
1,2
С 18:1
16,0
С 18:2
10,1
6,5
γ-С 18:3
С 20:2
С 20:3
3,1
С 20:4
36,4
С 20:5
14,2
С 22:6
2,1
Выделенный из биомассы штамма экстракт используется непосредственно в виде моно-,
ди-, триглицеридов и других липидов или, после омыления и химической модификации,
например, в виде солей, эфиров, амидов и других производных полиненасыщенных высших жирных кислот, для производства различных препаратов, применяемых в сельском
хозяйстве, в ветеринарии, в медицине, в косметологии и в пищевой промышленности.
Источники информации:
1. ЕР, 0223960 А2, МПК С 12 Р 7/64, 1986.
2. WO 92/13086, МПК С 12 Р 7/64, А 23 С 9/00, А61К 6/00, 7/00, 1992.
3. RU, патент 2120998, МПК С 12 Р 7/40, 1991.
4. RU, патент 2058078, МПК А 01 N 63/04, 1996.
5. RU, патент 2075934, МПК А 01 N 63/04, А 01 С 1/8, 1996.
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
1
Размер файла
157 Кб
Теги
by5852, патент
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа