close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY6091

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
BY (11) 6091
(13) C1
(19)
7
(51) C 12N 7/04,
(12)
A 61K 39/265
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
ШТАММ BACILLUS ALVEI КМИЭВ-11, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ
ПОЛУЧЕНИЯ ВИРУССПЕЦИФИЧЕСКИХ БЕЛКОВ ВИРУСА
ИНФЕКЦИОННОГО РИНОТРАХЕИТА КРУПНОГО РОГАТОГО
СКОТА
(21) Номер заявки: a 19990651
(22) 1999.06.30
(46) 2004.06.30
(71) Заявитель: Красочко Петр Альбинович (BY)
(72) Авторы: Красочко Петр Альбинович
(BY); Фукс Полина Павловна (UA);
Волосянко Елена Викторовна (UA);
Красочко Ирина Александровна (BY)
(73) Патентообладатель: Красочко Петр Альбинович (BY)
(57)
Штамм Bacillus alvei КМИЭВ-11, используемый для получения вирусспецифических
белков вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота.
BY 6091 C1
(56)
RU 2059415 C1, 1996.
RU 96009259 A, 1998.
WO 98/47374 A1.
JP 05252964 A, 1993.
Изобретение относится к ветеринарной микробиологии и вирусологии, в частности к
биотехнологии, и может быть использовано для получения вирусспецифических белков
для конструирования диагностических и профилактических препаратов при вирусных инфекциях крупного рогатого скота.
Известен микроорганизм Bac.alvei BKM-724, являющийся возбудителем европейского
гнильца пчел [1].
Однако в антигенной структуре его не содержится вирусспецифических белков и участков ДНК, комплементарных вирусам животных.
Известны штаммы вируса инфекционного ринотрахеита, являющиеся источником вирусспецифических белков, которые получают путем культивирования вирусов на культуре клеток [2].
Недостатком этого является сложная технология накопления вирусной массы, необходимость в культуре клеток, небольшой выход вирусспецифического белка - до 1-3 %, что
значительно удорожает стоимость вакцинных и диагностических препаратов.
Задачей изобретения является выявления штамма бактерий, имеющего участки дезоксирибонуклеиновой кислоты, комплементарной вирусу инфекционного ринотрахеита
крупного рогатого скота и белки, антигенно-родственные вирусу инфекционного ринотрахеита.
BY 6091 C1
Поставленная задача достигается тем, что источником специфических белков вируса
инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота является штамм бактерий Bac.alvei
КМИЭВ-11, имеющий участки дезоксирибонуклеиновой кислоты, комплементарной вирусу инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота и белки, антигенно-родственные этому вирусу.
Пример 1. Штамм Bac.alvei КМИЭВ-11 выделен из пораженных европейским гнильцом личинок пчел, задепонирован и хранится в Коллекции Микроорганизмов института
экспериментальной ветеринарии и ему присвоен номер КМИЭВ-11. Хранение микроорганизма осуществляется при + 2 + 4° после лиофильного высушивания в полужидком мясопептонном агаре в течение 1-1,5 лет. Жизнеспособность его поддерживается путем пересева на мясо-пептонный агар 1 раз в течение 2-3 месяцев при условии хранения при
+ 2 + 4°.
Согласно классификации микроорганизмов по Берги Bac.alvei КМИЭВ-11 относится
ко второй морфологической группе спорообразующих аэробов, т.к. бактериальные клетки
увеличивают объем при спорообразовании, споры эллипсовидные, расположены центрально или терминально. В указанной группе Bac.alvei КМИЭВ-11 принадлежит к подгруппе Б, в которую включены виды, не образующие газ при ферментации углеводов.
Изучаемая бацилла представляет собой крупную палочку размером 2-5 х 0,5-0,8 мкм, она
грамположительна, подвижна. На плотных питательных средах (МПА) при температуре
37 °С в аэробных условиях образует колонии серо-белого цвета, мелкие, диаметром 1-3
мм, плоские, круглые, иногда неопределенной формы, с ровными краями, не врастающими в агар. При культивировании на мясо-пептонном бульоне (МПБ) заметно помутнение,
иногда образуется пристеночное кольцо.
В биохимическом отношении Bac.alvei КМИЭВ-11 слабо активен. Бактерии обладают
каталазной активностью, дают положительную реакции. Фогес-Проскауэра, способствуют
образованию кислоты при ферментации глюкозы, индола. Сероводород не выделяется. Не
ферментирует арабинозу, манит, ксилозу, лактозу, сахарозу.
Пример 2. Наличие антигенов, перекрестно-реагирующих с антигенами вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота, определяли путем постановки реакции бласттрансформации лимфоцитов, сенсибилизированных взвесью бактерий Bac.alvei
КМИЭВ-11 в системе in vivo и антивированных антигеном вируса инфекционного ринотрахеита в системе in vitro. Постановку реакции осуществляли пробирочным микрометодом с последующим морфологическим учетом. В качестве антигена использован преципитирующий антиген вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота,
представляющий собой ранние белки вируса (производство Украинского НИИ экспериментальной и клинической ветеринарной медицины Украинской академии аграрных наук). Для оценки сенсибилизации организма антигенами вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота учет проводили путем подсчета 300 лимфоцитов и
выведения процента бластов в каждой исследуемой пробе. Для оценки сенсибилизации
лимфоцитов крупного рогатого скота было отобрано 15 телят возрастом 2-2,5 месяца и
живой массой 60-65 кг, которых разделили на 3 группы по 5 голов в каждой. Телятам подопытной группы № 1 вводили внутримышечно 4 мл инактивированных формальдегидом
бактериальной взвеси Bac.alvei КМИЭВ-11 при концентрации 10 млрд. микробных тел в
мл; телятам подопытной группы № 2 внутримышечно по 2 мл живой культуральной вирус-вакцины против инфекционного ринотрахеита "Монорин" производства Покровского
завода биопрепаратов (инфекционный титр вируса 5,5 lg ТЦД 50/мл); телятам третьей
(контрольной) группы водили внутримышечно по 5 мл стерильного изотонического раствора натрия хлорида. Через 10 дней после обработок у всех животных была взята кровь
для исследования. Результаты исследований представлены в таблице.
Из представленных в таблице данных видно, что у обработанных телят взвесью бактерий Bac.alvei КМИЭВ-11 отмечена сенсибилизация лимфоцитов антигенами вирусов ин2
BY 6091 C1
фекционного ринотрахеита, подтвержденная увеличением количества бластов, возникших
под воздействием митогена - антигена вируса инфекционного ринотрахеита.
Пример 3. Для выявления комплементарных участков ДНК вируса инфекционного
ринотрахеита и Bac.alvei КМИЭВ-11 изучали наличие их в плазмидах с помощью электрофоретического анализа. Комплементарность ДНК плазмиды Bac.alvei КМИЭВ-11 и
ДНК вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота изучали методом точечной гибридизации с радиоактивной меткой (ДНК-зонд разработан и изготовлен в Московской ветеринарной академии). В ходе исследований, проведенных в 8-ми повторностях, получены положительные результаты гибридизации ДНК вируса инфекционного
ринотрахеита и ДНК плазмиды, выделенной из Bac.alvei KMИЭB-11.
Источники информации:
1. Каталог культур микроорганизмов института биохимии и физиологии микроорганизмов РАН и Всероссийской коллекции микроорганизмов. - Пущино; Москва, 1992. С. 33.
2. Крюков Н.Н., Белкина Н.М., Семенихин А.Л. Получение модифицированного вируса ИРТ крупного рогатого скота и испытание его иммуногенных свойств // Бюлл. ВИЭВ. 1972. - Вып.14. - С.5-8.
Таблица
Результаты изучения перекрестно-реагирующих антигенов у вирусов и бактерий
в реакции бласттрансформации (% бластов)
№ № п/п
Количество телят в группе
1
2
3
Опытная группа № 1
Опытная группа № 2
Контрольная группа
Дни взятия крови
До введения
Через 10 дней
8,8 ± 1,2 %
35,2 ± 3,4 %
8,5 ± 1,7 %
45,1 ± 3,4 %
8,9 ± 2,2 %
8,7 ± 1,2 %
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
144 Кб
Теги
патент, by6091
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа