close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY6209

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
BY (11) 6209
(13) C1
(19)
7
(51) G 01N 33/68, 33/74
(12)
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ
АЛЛЕРГИЧЕСКИХ СОСТОЯНИЙ ОРГАНИЗМА
(21) Номер заявки: 970678
(22) 1997.12.05
(46) 2004.06.30
(71) Заявитель: Государственное учреждение "Республиканский научно-практический центр гигиены" (BY)
(72) Авторы: Ушков Александр Александрович; Балакирева Светлана Ивановна;
Каплунова Татьяна Антоновна (BY)
(73) Патентообладатель: Государственное
учреждение "Республиканский научно-практический центр гигиены" (BY)
(57)
Способ прогнозирования аллергических состояний организма, включающий взятие
пробы крови, получение сыворотки, разведение полученной сыворотки физиологическим
раствором в 80 раз, добавление к 0,2 мл полученного раствора 0,2 мл 0,006 % водного раствора серотонина, последующую инкубацию в течение 3 мин, полярографию при температуре 18-25 °C и расчет серотонинпектического индекса, отличающийся тем, что
полярографию осуществляют до и после инкубации сыворотки крови с серотонином, определяют высоту фоновой полярографической волны белка сыворотки и рассчитывают
значение серотонинпектического индекса (СПИ) по формуле:
СПИ = 100 % −
Н1
Н0
× 100 % ,
BY 6209 C1
где Н0 - высота полярографической волны белка сыворотки крови до инкубации с серотонином,
Н1 - высота полярографической волны белка сыворотки крови после инкубации с серотонином,
и при получении СПИ > 30 % делают вывод о склонности к аллергическим состояниям.
(56)
Чуйко М.П. и др. // Лабораторное дело. - 1982. - № 7. - С. 36-38.
RU 2024870 C1, 1994.
RU 2063044 C1, 1996.
RU 95113129 A, 1997.
Предлагаемый способ относится к области медицины, в частности к клинической биохимии, и может быть использован в лабораторной клинической практике и экспериментальных исследованиях для диагностики аллергических состояний организма.
Общеизвестно участие серотонина в механизме некоторых аллергических реакций, в
результате которых происходит связывание серотонина белками крови и при этом теряет-
BY 6209 C1
ся его биологическая активность, в связи с этим представляет интерес изучение серотонинпектической способности сыворотки крови при различных патологических и, особенно, инфекционно-аллергических состояниях организма.
Известен флуоресцентный метод определения серотонинпектического индекса (СПИ)
для диагностики аллергических состояний организма (Чуйко М.П., Каплунова Т.А. Метод
определения серотонинпектического индекса сыворотки крови. Лабораторное дело, 1982,
№ 7, с. 36-38). Данный способ включает диализ сыворотки крови, добавление стандартного раствора серотонина с помощью реакции с ортофталевым альдегидом, в результате которого образуется флуоресцентный комплекс (прототип).
Недостатками данного способа являются его длительность (24 ч проходит диализ сыворотки крови), необходимость точного контроля рН среды и времени для образования
стабильного флуоресцирующего комплекса, потребность большого количества исследуемой крови, применение дорогостоящего и труднодоступного реактива (орто-фталевого
альдегида) при относительно невысокой точности достигаемого результата.
Задачей настоящего изобретения является создание простого, дешевого и точного способа прогнозирования аллергических состояний организма.
Поставленная задача достигается следующим образом. Предложен способ прогнозирования аллергических состояний организма, включающий взятие пробы крови, получение сыворотки, разведение полученной сыворотки физиологическим раствором в 80 раз,
добавление к 0,2 мл полученного раствора 0,2 мл 0,006 % водного раствора серотонина,
последующую инкубацию в течение 3 мин, полярографию при температуре 18-25 °С и
расчет серотонинпектического индекса, когда полярографию осуществляют до и после
инкубации сыворотки крови с серотонином, определяют высоту фоновой полярографической волны белка сыворотки и рассчитывают значение серотонинпектического индекса
(СПИ) по формуле:
СПИ (%) = 100 %-H1/Н0 ⋅ 100 %,
где H0 - высота полярографической волны сыворотки крови без серотонина;
H1 - высота полярографической волны сыворотки крови после контакта с серотонином,
и при получении СПИ > 30 % делают вывод о склонности к аллергическим состояниям.
Способ осуществляется следующим образом: берут пробу крови, выделяют общепринятым методом сыворотку и в ней определяют фоновую полярографическую волну белка,
затем добавляют серотонин и после этого записывают полярографическую волну оставшегося (не связавшегося с серотонином) белка, по разнице высот полярографических волн
определяют величину серотонинпектического индекса. Измерения проводят на полярографе ППТ-1.
Предлагаемый способ прогнозирования аллергических состояний организма является
экспресс-методом в диагностике аллергических состояний организма (5-7 мин), так как не
требует проведения длительного диализа, исключает ряд промежуточных манипуляций,
обладает высокой чувствительностью, позволяет определить малые концентрации белка
(10-4-10-7 моль/л), требует минимального количества исследуемого материала, снижает
материальные затраты, исключает необходимость применения дорогостоящих реактивов и
оборудования, что дает возможность широко использовать его в практической медицине.
Пример выполнения
В лабораторную пробирку помещают 0,2 мл разведенной физиологическим раствором
в 80 раз сыворотки крови, полученной общепринятым методом, к ней добавляют 2 мл
0,015 N СоСl2, 2 мл 1 М NH4Cl и 1 мл 1 М NH4OH, содержимое перемешивают, а затем
вводят в полярографическую кювету. Производят запись полярографической волны при
следующих условиях:
начальное напряжение 1,1 В, диапазон тока 100 мА, скорость развертки 5 мв/с.
2
BY 6209 C1
Время образования капли ртути - 3 с. После этого в кювету вносят 0,2 мл серотонина
(6 мг на 100 мл Н2О), инкубируют 3 минуты и полярографируют при температуре 1825 °С. Измеряют высоту полярографических волн обеих сывороток в миллиметрах.
Серотонинпектический индекс вычисляется по формуле:
СПИ (%) = 100 % - H1/Н0 ⋅ 100 %,
где H1 - высота полярографической волны сыворотки крови после контакта с серотонином;
Н0 - высота полярографической волны сыворотки крови без серотонина.
Время проведения одного анализа по предложенному способу составляет 5-7 минут. С
целью проверки воспроизводимости полученных результатов предложенным способом
проведены повторные эксперименты, которые показали, что отклонения опытных данных
находятся в пределах 1 процента (табл. 1).
Таблица 1
Воспроизводимость результатов исследования
серотонинпектического индекса сыворотки крови
№ /№
эксперимента
Высота волны
1
100
73
100
73
95
67
95
66
96
64
95
65
110
73
Н0
H1
Н0
H1
Н0
H1
Н0
H1
H0
H1
H0
H1
H0
H1
1
2
3
4
5
6
7
Повторные записи
2
3
100
100
73,5
73
99,5
100
73
73,5
95,5
96
66,5
67
94
95,5
66,5
66,5
96
95,5
63,5
64
95,5
96
65
65,5
110
109,5
73
72,5
4
99
73,5
99
73
96
66,5
94
66
96
63,5
95
65,5
109
73,5
Из таблицы видно, что суммарная погрешность проведения эксперимента складывается из погрешности прибора и измерения высоты полярографической волны. Исследования
проведены на приборе с классом точности 0,25. Высоту измеряли линейкой с погрешностью 0,5 мм. Максимальная ошибка эксперимента составляла 2 %.
Из табл. 2 видно, что предлагаемый нами способ прогнозирования аллергических состояний организма более чем в 3 раза точнее, чем способ-прототип.
Таблица 2
Подтверждение точности способа
Статистические показатели
M±m
Пределы колебаний
σ
Ошибка метода
Предлагаемый способ
28,6±0,18
27,0-30,0
0,9
3,1
3
Прототип
28,4±0,46
23,7-36,1
2,9
10,5
BY 6209 C1
Кроме того, предлагаемый способ позволяет не только упростить (за счет включения
диализа), но и сократить время проведения анализа более чем в 60 раз (табл. 3).
Таблица 3
Время, затраченное на определение серотонинпектического индекса
Основные этапы определения
1. Получение сыворотки
2. Диализ
3. Определение ПИ
Предлагаемый способ
15 мин
10 мин
Прототип
15 мин
1440 мин
60 мин
Предлагаемый способ исключает применение дорогостоящих реактивов (ортофталевого альдегида и др.), требует использования минимальных количеств исследуемой сыворотки крови.
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
122 Кб
Теги
by6209, патент
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа