close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY6506

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
BY (11) 6506
(13) C1
(19)
7
(51) C 07C 215/76,
(12)
A 61P 31/16, 31/22
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
4,6-ДИ-ТРЕТ-БУТИЛ-2-[(N-АЦЕТИЛ)АМИНО]ФЕНОЛ,
ПРОЯВЛЯЮЩИЙ ПРОТИВОВИРУСНУЮ АКТИВНОСТЬ
(21) Номер заявки: a 20010730
(22) 2001.08.24
(46) 2004.09.30
(71) Заявитель: Учреждение Белорусского государственного университета
"Научно-исследовательский институт
физико-химических проблем" (BY)
(72) Авторы: Бореко Евгений Иванович;
Ксендзова Галина Анатольевна; Николаева Светлана Николаевна; Павлова
Наталья Ильинична; Полозов Генрих
Иванович; Савинова Ольга Владимировна; Сорокин Виктор Леонидович;
Цодова Надежда Николаевна; Шадыро
Олег Иосифович (BY)
(73) Патентообладатель: Учреждение Белорусского государственного университета "Научно-исследовательский институт физико-химических проблем" (BY)
(57)
4,6-Ди-трет-бутил-2-[(N-ацетил)амино]фенол формулы:
C(CH3)3
OH
O
(CH3)3C
NH
C CH ,
BY 6506 C1
проявляющий активность при подавлении размножения вирусов герпеса и гриппа.
(56)
US 4199574, 1980.
US 4551552, 1985.
RU 2145963 C1, 1995.
RU 2125565 C1, 1999.
JP 03047174 A, 1991.
EP 0508334 A2, 1992.
Изобретение относится к области медицины, в частности вирусологии, и может быть
использовано при подавлении размножения вирусов герпеса и гриппа.
Известны противовирусные свойства противогерпетического препарата ацикловира
(ациклогуанозин, цикловир, виролекс)
BY 6506 C1
OH
N
N
N
N
NH2
CH2OH
CH2
CH2
[1. Pat. US 4 199 574 - А61К 31/52; С07D 413/18 22.04.1980].
Известны также свойства средства против вируса гриппа препарата ремантадина
O
CH
CH3 . HCl
NH2
[2. Pat. US 4 551 552 - С07С 85/11 05.11.1985].
Задачей изобретения является расширение ассортимента средств, обладающих противовирусным действием.
Поставленная задача достигается синтезом 4,6-ди-трет-бутил-2-[(N-ацетил)амино]фенола
формулы
C(CH3)3
OH
O
(CH3)3C
NH-C-CH3
для подавления размножения вирусов герпеса и гриппа.
Указанное соединение, его свойства и способ получения в литературе не описаны.
Заявляемое соединение получают в результате известной реакции ацилирования по
азоту производных аминофенола. В качестве исходного соединения используют 4,6-дитрет-бутил-2-аминофенол, который ацилируют уксусным ангидридом с последующим выделением заявляемого соединения известными приемами.
Сущность изобретения иллюстрируется примерами.
Пример 1.
Получение заявляемого соединения.
К 10 мл (0,1060 моль) уксусного ангидрида при перемешивании на магнитной мешалке добавляли 1 г (0,0045 моль) 4,6-ди-трет-бутил-2-аминофенола. Реакционную смесь перемешивали при нагревании 1 час и охлаждали до -15 °С. Кристаллический продукт отфильтровывали и перекристаллизовывали из петролейного эфира. Получали 0,73 г (61 %)
4,6-ди-трет-бутил-2-[(N-ацетил)амино]фенола, т.пл. 147-148 °С.
УФ: λmax = 290 nm (εmax = 5788±286).
Спектр ПМР (δ м.д., CDCl3) : 8.36 с (1Н,ОН), 7.75 уш.с. (1H,NH), 7.20 д (1Н,СН), 6.76
д (1Н,СН), 2.17 с (3Н,СН3), 1.42 с (9Н,3СН3), 1.24 с (9Н,3СН3).
Масс-спектр (m/z, I %) : 263 (М+, 16).
Пример 2.
При проведении испытаний с вирусом герпеса I типа (ВПГ, штамм 1 С) и его вариантом со сниженной чувствительностью к действию известного противогерпетического препарата ацикловира используют перевиваемую культуру клеток рабдомиосаркомы (RD).
Монослойную культуру клеток RD, выращенную во флаконах, отмывают от ростовой
среды, инфицируют 0.01-0,001 ТЦИД50/клетка вирусов путем нанесения на клетки разведения вируссодержащей суспензии в объеме 0,1 мл на 1 час при 37 °С. Затем жидкость
удаляют и клетки покрывают средой поддержки (среда 199), содержащей различные концентрации исследуемых веществ. После 48 час инкубации при 37 °С регистрируют мор-
2
BY 6506 C1
фологические изменения монослоя клеток (цитопатическое действие (ЦПД) вируса, увеличение ×80). Находят минимальную концентрацию соединений, подавляющую развитие
ЦПД вируса на 50 % (ТЦД50). Критерием противовирусного действия считают наличие
различий в сравнении с контролем вируса.
Таблица 1
Противовирусные свойства 4,6-ди-трет-бутил-2-[(N-ацетил)амино]фенола и
ацикловира в отношении вируса герпеса
Противовирусное действие
ВПГ
ВПГр
Концентрация,
Вещество
Титр вируса Разность с Титр вируса Разность с
мкг/мл
±Sx,
контролем,
±Sx,
контролем,
ТЦД50/мл
ТЦД50/мл
ТЦД50/мл
ТЦД50/мл
400
<4,00
>2,00
<4,00
>2,0
200
<4,00
>2,00
<4,00
>2,0
100
1,6
4,11±0,17
1,19
4,60±0,26
4,6-Ди-трет50
1,16
4,20±0,24
1,10
бутил-2-[(N5,04±0,35
ацетил)ами25
5,15±0,39
1,05
4,30±0,16
1,0
но]фенол
12
6,05±0,40
0,15
5,04±0,35
0,26
6
-0,05
5,30±0,11
0
6,25±0,20
Контроль
6,20±0,23
5,30±0,11
4,0
<2,0
>5,23
-0,17
5,47±0,26
1,0
2,53
0
4,70±0,10
5,30±0,11
Ацикловир
0,5
2,39
5,30±0,11
0
4,84±0,07
0,25
2,07
0
5,16±0,05
5,30±0,11
Контроль
5,30±0,11
7,23±0,23
Обозначение: ВПГр - вариант ВПГ вариант со сниженной чувствительностью к действию известного противогерпетического препарата ацикловира.
Как видно, 4,6-ди-трет-бутил-2-[(N-ацетил)амино]фенол обладает способностью тормозить размножение вируса герпеса и его варианта со сниженной чувствительностью к
действию ацикловира в культуре клеток.
Пример 3.
При проведении испытаний с вирусом гриппа A/Rostock/34 (H7N1) и его вариантом,
устойчивым к действию известного противогриппозного препарата ремантадина, используют культуру клеток первичных фибробластов эмбрионов кур (ФЭК). Испытания проводят методом редукции количества бляшек под агаровым покрытием.
Монослойную культуру ФЭК, выращенную во флаконах, отмывают от ростовой среды, инфицируют различными разведениями вируса в пределах 0,01-0,00001 БОЕ/клетка
вируса путем нанесения на клетки вируссодержащей суспензии в объеме 0,1 мл на 1 час
при 37 °С. Затем жидкость удаляют и клетки покрывают расплавом питательной среды на
основе концентрата среды 199 с добавлением 1 % бактагара и 0,005 % нейтрального красного (все реактивы - Sigma) и различных концентраций исследуемых соединений. После
застывания покрытия флаконы помещают в термостат на 36 час и затем подсчитывают
количество бляшек, видимых благодаря присутствию в покрытии витального красителя.
На основе количества бляшек вычисляют титр вируса. Критерием противовирусного действия считают наличие различий в сравнении с контролем вируса.
Полученные результаты приведены в таблице 2.
3
BY 6506 C1
Таблица 2
Противовирусные свойства 4,6-ди-трет-бутил-2-[(N-ацетил)амино]фенола и ремантадина в отношении вируса гриппа
Противовирусное действие
FPV
FPVp
Концентрация,
Вещество
Титр вируРазность с Титр виру- Разность с
мкг/мл
са±Sx,
контролем,
са±Sx,
контролем,
lg БОЕ/мл
lg БОЕ/мл
lg БОЕ/мл
lg БОЕ/мл
800
<5,00
>2,59
<4,60
>2,03
400
<5,00
>2,59
<4,60
>2,03
4,6-Ди-трет200
<5,00
>2,59
<4,60
>2,03
бутил-2-[(N100
6,25±0,02
1,34
5,43±0,10
1,20
ацетил)ами50
6,40±0,10
1,19
5,48±0,12
1,15
но]фенол
25
6,59±0,10
1,00
5,65±0,008
0,98
0
7,59±0,03
6,63±0,05
25
н.и.
н.и.
7,24
0,26
12
н.и.
н.и.
7,27
0,23
6
н.и.
н.и.
7,46
0,04
Ремантадин
0,7
н.и.
н.и.
7,45
0,05
0,1
5,16±0,12
3,48
7,39
0,11
0,01
4,65±0,65
3,99
7,41
0,09
0
8,64±0,03
7,50
Обозначения: FPVp - вариант FPV, устойчивый к действию ремантадина;
н.и. - не исследовали.
Как видно, 4,6-ди-трет-бутил-2-[(N-ацетил)амино]фенол обладает способностью тормозить размножение вируса гриппа и его варианта, устойчивого к действию ремантадина.
Таким образом, заявляемое решение позволяет решить поставленную задачу. При использовании 4,6-ди-трет-бутил-2-[(N-ацетил)амино]фенола удается получить подавление
размножения вирусов герпеса и гриппа в культуре клеток. 4,6-Ди-трет-бутил-2-[(Nацетил)амино]фенол проявляет противовирусное действие также и в отношении вариантов вирусов герпеса и гриппа, устойчивых к действию известных противовирусных препаратов, ацикловира и ремантадина, соответственно.
Заявляемое химическое соединение может быть использовано в исследовательской
лабораторной практике непосредственно в настоящий момент для подавления размножения вирусов герпеса и гриппа.
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
4
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
201 Кб
Теги
патент, by6506
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа