close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY7321

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
BY (11) 7321
(13) C1
(19)
(46) 2005.09.30
(12)
7
(51) C 12N 1/20
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
СРЕДА ДЛЯ ВЫРАЩИВАНИЯ ЛЕПТОСПИРОЗНЫХ БАКТЕРИЙ
(21) Номер заявки: a 20020268
(22) 2002.04.02
(43) 2003.12.30
(71) Заявители: Зайцева Алеся Владимировна; Дремач Геннадий Эдуардович (BY)
(72) Авторы: Зайцева Алеся Владимировна;
Дремач Геннадий Эдуардович (BY)
(73) Патентообладатели: Зайцева Алеся Владимировна; Дремач Геннадий Эдуардович (BY)
(56) Справочник ветеринарного лаборанта. М.: Колос, 1981. - С.37.
BY 3092 С1, 1999.
SU 1237707 А1, 1986.
SU 828459, 1983.
Волина Е.Г. и др. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. - 2001. - № 1. - С. 3-5.
BY 7321 C1 2005.09.30
(57)
Среда для культивирования бактерий рода Leptospira, содержащая сыворотку крови
овец или кроликов, отличающаяся тем, что дополнительно содержит фосфатный буфер c
рН 7,0-7,4 и 0,15 % раствор липополисахаридполипептидной фракции О-антигена бактерий рода Escherichia или Salmonella при следующем соотношении компонентов, мас. %:
сыворотка крови овец или кроликов
5-10
0,15 % раствор липополисахаридполипептидной фракции О-антигена бактерий рода
Escherichia или Salmonella
1–5
фосфатный буфер, рН 7,0-7,4
остальное.
Изобретение относится к микробиологии, в частности - к производственному культивированию лептоспирозных бактерий, используемых в диагностике и изготовлении вакцин.
Для культивирования лептоспирозных бактерий используют следующие питательные
среды: вводно-сывороточная среда Ферваорт-Вольфа (1928), Кортгофа (1932), Тарасова
(1937), синтетические безбелковые среды: Шенберга (1967) и Торнея (1974), Элленгаузена
(1967), Элленгаузена для ветеринарных целей (1976), Рассела (1986), твин-альбуминсывороточная среда Эллиса, альбуминовая среда ГНКИ (Бабич М.А., Дигальцев Ю.М.,
1965) и др.
Наиболее близким техническим решением к предлагаемому изобретению является
среда Любашенко [1].
Среду Любашенко готовят путем фильтрации через бумагу и стерилизации при 1 атм.
в течение 30 мин нехлорированной водопроводной, колодезной или речной воды. После
охлаждения рН воды устанавливают 7,3-7,4 и добавляют 5 % сыворотки крови кролика
или барана, прогретой при 56 °С в течение 1 ч. Среду фильтруют через пластинки "СФ" в
приборе Зейтца при небольшом вакууме (660 мм ртутного столба) и асептически разливают в пробирки. Для проверки на стерильность пробирки выдерживают при 37 °С 48 ч.
BY 7321 C1 2005.09.30
При соблюдении всех необходимых условий штаммы лептоспирозных бактерий вырастают в этой среде через 5-7 суток, накопление их не превышает 8-100 млн/см3 микробных клеток.
Цель изобретения - повышение биологической активности целевого продукта.
Поставленная цель достигается тем, что к смеси белковой основы и буферного раствора
добавляют стимулятор. В качестве стимулятора роста лептоспир используют 0,15 %-ный
раствор липополисахаридполипептидной фракции О-антигена эшерихиозных или сальмонеллезных бактерий.
Сущность предлагаемого изобретения заключается в том, что среда для культивирования бактерий рода Leptospira содержит сыворотку крови овец или кроликов и дополнительно фосфатный буфер с рН 7,0-7,4 и 0,15 % раствор липополисахаридполипептидной
фракции О-антигена бактерий рода Escherichia или Salmonella при следующем соотношении компонентов, мас. %:
сыворотка крови овец или кроликов
5-10
0,15 % раствор липополисахаридполипептидной фракции
О-антигена бактерий рода Escherichia или Salmonella
1-5
фосфатный буфер, рН 7,0-7,4
остальное.
Пример 1.
Для приготовления фосфатного буфера 1/15 M раствора двузамещенного фосфата натрия и однозамещенного фосфата калия данные вещества смешивали в соотношении 7:3,
смесь разводили дистиллированной водой в соотношении 1:10. рН устанавливали 7,0-7,4
добавлением первого или второго растворов и стерилизовали при температуре 120 °С в
течение 60 мин.
Кровь барана дефибринировали, отделяли сыворотку, прогревали при температуре 5658 °С в течение 30-60 мин. Прогретую сыворотку фильтровали через стерилизующие
фильтры.
Сыворотку крови овец, 0,15 %-ный раствор липополисахаридполипептидной фракции
О-антигена из сальмонеллезных бактерий и фосфатный буфер смешивали при соотношении компонентов (мас. %) 5:1:94.
Среда обеспечивала накопление лептоспирозных бактерий 508 млн/см3 микробных
клеток. Вакцина, приготовленная из данной культуры, вызывала PMA у кроликов в титре
1:800.
Пример 2.
Способ осуществляли аналогично примеру 1, но сыворотку крови овец, 0,15 %-ный
раствор липополисахаридполипептидной фракции O-антигена эшерихиозных бактерий и
фосфатный буфер смешивали при соотношении компонентов (мас. %) 2:1:17.
Среда такого состава обеспечивала накопление лептоспирозных бактерий 524 млн/см3
микробных клеток. Вакцина, приготовленная из данной культуры, обеспечивала проявление иммунной реакции у кроликов в PMA 1:680.
Пример 3.
Способ осуществляли аналогично примеру 1, но при изготовлении среды использовали сыворотки крови кроликов.
Накопление лептоспирозных бактерий составило 508 млн/см3 микробных клеток. Вакцина, приготовленная из данной культуры, обеспечивала у кроликов PMA 1:640.
Пример 4.
Способ осуществляли аналогично примеру 1, но сыворотку крови овец, 0,15 %-ный
раствор липополисахаридполипептидной фракции O-антигена эшерихиозных бактерий и
фосфатный буфер смешивали при соотношении компонентов (мас. %) 1:1:18.
2
BY 7321 C1 2005.09.30
Накопление лептоспирозных бактерий составило 500 млн/см3 микробных клеток. Вакцинированные кролики давали PMA 1:580.
Пример 5.
Способ осуществляли аналогично примеру 1, но сыворотку крови овец, 0,15 %-ный
раствор липополисахаридполипептидной фракции O-антигена эшерихиозных бактерий и
фосфатный буфер смешивали при соотношении компонентов (мас. %) 10:1:89.
Накопление лептоспирозных бактерий составило 520 млн/см3 микробных клеток. Вакцинированные кролики давали PMA 1:540.
Пример 6.
Способ осуществляли аналогично примеру 1, но сыворотку крови овец, 0,15 %-ный
раствор липополисахаридполипептидной фракции O-антигена эшерихиозных бактерий и
фосфатный буфер смешивали при соотношении компонентов (мас. %) 6:3:41.
Накопление лептоспирозных бактерий составило 95 млн/см3 микробных клеток.
Пример 7.
Способ осуществляли аналогично примеру 1, но сыворотку крови овец, 0,15 %-ный
раствор липополисахаридполипептидной фракции O-антигена эшерихиозных бактерий и
фосфатный буфер смешивали при соотношении компонентов (мас. %) 5:1:119.
Накопление лептоспирозных бактерий составило 100 млн/см3 микробных клеток.
В ходе экспериментальной работы нами установлено, что при содержании сыворотки
животных в питательной среде менее 5 % и более 10 % существенно снижается интенсивность роста и деления лептоспирозных бактерий.
При содержании в питательной среде менее 1 % 0,15 %-ный раствор липополисахаридполипептидной фракции О-антигена эшерихиозных бактерий его стимулирующее действие на размножение лептоспир практически не проявлялось.
Присутствие О-антигена из сальмонелл и эшерихий в питательной среде более 5 %
приводило к диссоциации и частичному лизису лептоспир, концентрация которых составляла 95-100 млн/см3.
Из представленных данных видно, что для производственного культивирования лептоспирозных бактерий, используемых для изготовления диагностических и профилактических препаратов, целесообразно применять питательную среду, содержащую 5-10 %
сыворотки крови овец или кроликов, 1-5 % липополисахаридполипептидной фракции Оантигена из эшерихиозных или сальмонеллезных бактерий и 85-94 % фосфатного буфера.
Питательная среда вышеуказанного состава обеспечивает накопление лептоспир 500640 млн/см3 микробных клеток.
Источники информации:
1. Андросов Ф.З., Беляев И.Я., Клочко Р.Т. и др. Справочник ветеринарного лаборанта /
Под ред. В.Я. Антонова. - M.: Колос, 1981. - С. 37.
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
71 Кб
Теги
by7321, патент
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа