close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY7601

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
BY (11) 7601
(13) C1
(19)
(46) 2005.12.30
(12)
7
(51) C 07J 53/00, 63/00,
A 61K 31/56,
A 61P 31/16, 31/22
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
ЛУПАНОВЫЕ ТРИТЕРПЕНОИДЫ, ИНГИБИРУЮЩИЕ
РАЗМНОЖЕНИЕ ВИРУСОВ ГРИППА И ГЕРПЕСА
(21) Номер заявки: a 20020531
(22) 2002.06.19
(43) 2003.12.30
(71) Заявители: Государственное учреждение "Научно-исследовательский
институт эпидемиологии и микробиологии" Министерства здравоохранения Республики Беларусь (BY);
Институт органической химии Уфимского научного центра Российской
академии наук (RU)
(72) Авторы: Бореко Евгений Иванович
(BY); Павлова Наталья Ильинична
(BY); Савинова Ольга Владимировна (BY); Флехтер Оксана Борисовна
(RU); Нигматуллина Лена Рамилевна (RU); Балтина Лидия Ашрафовна (RU); Галин Фанур Зуфарович
(RU); Толстиков Генрих Александрович (RU); Николаева Светлана Николаевна (BY)
(73) Патентообладатели: Государственное
учреждение "Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии" Министерства здравоохранения Республики Беларусь (BY);
Институт органической химии Уфимского научного центра Российской академии наук (RU)
(56) WO 00/33846 A1.
EP 0943620 A2, 1999.
WO 94/26695 A1.
US 5468888 A, 1995.
US 6214350 B1, 2001.
KUROKAWA M. et al. J. Pharmacol.
Exp. Ther. - 1999. - Vol. 289, № 1. - P. 7278.
Платонов В.Г. и др. // Химико-фармацевтический журнал. - 1995. - Т. 29,
№ 2. - С. 42-46.
(57)
Лупановые тритерпеноиды общей формулы I:
BY 7601 C1 2005.12.30
CH3
H2C
CH3
1
2
H3C
28
R2
,
(I)
CH3
3
R1
CH3
CH3
где при R - = NOH, R представляет собой -CONHN = CHC6H5 или
-CONHCH(COOCH3)CH2CH2SCH3;
а при R1- = O, R2 представляет собой -CONH2, -NHCONHCH(COOCH3)CH2CH(CH3)2,
-CONH(CH2)17CH3 или
-NHCONHCH(COOCH3)CH2CH2SCH3,
для подавления размножения вирусов гриппа и герпеса.
BY 7601 C1 2005.12.30
Изобретение относится к новым химическим соединениям, конкретно к тритерпеноидам ряда лупана, обладающим противовирусной активностью в отношении вирусов гриппа и герпеса. Эти соединения в силу указанных свойств могут найти применение в экспериментальной биологии и медицине.
Известны противовирусные свойства тритерпеноида лупанового ряда, бетулиновой
кислоты, в отношении вируса герпеса простого [1].
Более высокими противовирусными свойствами в отношении вируса герпеса простого
обладают другие тритерпеноиды лупанового ряда, бетулоновая кислота и бетулин [2, 3].
Бетулин не обладает противовирусными свойствами в отношении вирусов гриппа [4]. В
патентной и научно-технической литературе информация о противовирусных свойствах
других тритерпеноидов лупанового ряда в отношении вирусов гриппа отсутствует.
Задачей изобретения является увеличение противовирусной активности и расширение
ассортимента средств, обладающих противовирусным действием.
Поставленная задача достигается применением ряда новых лупановых тритерпеноидов следующего строения:
CH 3
H 2C
H 3C
H 3C
,
1
CH 3
1
2
CH 3
3
R
R
28
CH 3
2
где при R - = NOH, R представляет собой -CONHN = CHC6H5 или
-CONHCH(COOCH3)CH2CH2SCH3;
а при R1- = O, R2 представляет собой -CONH2, -NHCONHCH(COOCH3)CH2CH(CH3)2,
-CONH(CH2)17СН3 или
-NHCONHCH(COOCH3)CH2CH2SCH3,
авторами обнаружены неочевидные свойства, позволяющие применить новые тритерпеноиды ряда лупана в качестве ингибиторов размножения вирусов гриппа и герпеса.
Сущность изобретения иллюстрируется примерами.
Пример 1.
Получение 3-оксо-28-норлуп-17βкарбамоил-20(29)ена (соединение III).
К раствору 1 ммоль (0,47 г) хлорангидрида бетулоновой кислоты в 5 мл сухого хлороформа добавляют 3 мл жидкого аммиака и смесь перемешивают 20 мин при 20-22 °C. Растворитель упаривают в вакууме досуха. Выход: 0,46 г (97 %) продукта. Тпл. = 197-199 °C.
Найдено, %: С-79.27, Н-10.61, N-3.08. C30H47O2N. Вычислено, %: C-79.40, Н-10.46, N-3.09.
ИК-спектр (ν, см-1, вазелиновое масло): 3250, 3020-2840, 1756, 1712, 1696, 1632, 1545,
1472, 1466, 1374, 1312, 1241, 1212, 1168, 1140, 1036, 1006, 988, 912, 888, 812, 744. Спектр
1
H ЯМР (δ, м.д., CDCl3): 0.80, 0.84, 0.90, 0.93, 0.98 (5с, 15Н, 5CH3), 1.00-2.00 (м, CH2, CH),
1.59 (с, 3Н, CH3), 2.25-2.37 (м, 3Н, H13, H16), 3.12 (дт, 1H, H19, J11.3, 4.3 Гц), 4.50 и 4.64
(оба уш. сигнала, по 1H, Н29), 7.24 (уш. сигнал, 2Н, -CONH2). Спектр 13C ЯМР (δ, м.д.,
CDCl3): 14.5, 15.9, 15.9, 19.4, 19.5, 20.8, 21.3, 25.5, 26.5, 29.7, 30.7, 33.3, 33.6, 34.0, 36.7,
37.6, 38.3, 39.5, 40.5, 42.2, 46.5, 47.1, 49.9, 50.0, 55.3, 109.2 (С29), 150.8 (С20), 177.0
(-CONH2), 217.9 (С3).
2
BY 7601 C1 2005.12.30
Пример 2.
Получение 3-оксо-28-норлуп-28-(N-карбонил-О'-метил-L-лейцин)-20(29)-ена (соединение IV).
К суспензии 1,3 ммоля гидрохлорида метилового эфира L-лейцина в 5 мл сухого хлороформа при перемешивании приливают по каплям 0,23 мл триэтиламина, добавляют раствор 1 ммоль (0,47 г) хлорангидрида бетулоновой кислоты в 5 мл хлороформа и кипятят 1
час. Реакционную массу оставляют на ночь, фильтрат промывают 10 мл 10 % раствора соляной кислоты, 2×10 мл воды, сушат над MgSO4 и отгоняют растворитель в вакууме. Продукт реакции хроматографируют на колонке с Al2O3, элюируя хлороформом, выход 0,51 г
(88 %). Тпл. = 203-205 °С. Найдено, %: C-76.49, H-10.02, N-2.54. C37H59O4N. Вычислено, %:
С-76.21, H-10.40, N-2.40. ИК-спектр (ν, см-1, вазелиновое масло): 2960-2840, 1744, 1716,
1696, 1672, 1648, 1632, 1512, 1480, 1452, 1364, 1325, 1256, 1236, 1184, 1136, 1044, 1008,
976, 920, 888, 824, 760. Спектр 1H ЯМР (δ, м.д., CDCl3): 0.88, 0.89, 0.91, 0.92, 0.94, 1.00,
1.03 (7с, 21Н, 7CH3), 1.10-2.00 (м, CH2, CH), 1.64 (с, 3Н, CH3), 2.35-2.52 (м, 3Н, Н13. Н16),
3.04-3.15 (м, 1H, Н19), 3.69 (с, 3Н, H1'), 4.52-4.65 (м, 2Н, Н29, Н3'), 4.69 (уш. сигнал, 1H,
Н29), 5.95 (д, 1H, -CONH-, J 8.4 Гц). Спектр 13C ЯМР (δ, м.д., CDCl3): 14.5, 15.8, 15.9, 19.4,
19.5, 20.9, 21.5, 22.9 (С6'), 24.9 (С7'), 25.5, 26.4 (С5'), 26.5, 29.3, 30.7, 33.5, 33.6, 34.0, 36.8,
37.6, 39.5, 40.6, 41.3 (С4'), 42.4, 46.4, 47.2, 49.8, 49.9, 52.1 (С1'), 54.8, 55.6 (С3'), 57.8, 109.2
(С29), 150.7 (С20), 173.8 (С2'), 175.9 (-CONH-), 218.0 (С3).
Пример 3.
Получение 3-оксим-28-норлуп-28-(N-карбонил-О'-метил-L-метионин)-20(29)-ена (соединение II).
К суспензии 1,3 ммоля гидрохлорида метилового эфира L-метионина в 5 мл сухого
хлороформа при перемешивании приливают по каплям 0,23 мл триэтиламина, добавляют
раствор 1 ммоль (0,49 г) хлорангидрида 3-оксим-бетулоновой кислоты в 5 мл хлороформа
и кипятят 1 час. Реакционную массу оставляют на ночь, фильтрат промывают 10 мл 10 %
раствора соляной кислоты, 2×10 мл воды, сушат над MgSO4 и отгоняют растворитель в
вакууме. Продукт реакции хроматографируют на колонке с Al2O3, элюируя хлороформом.
Выход 0,55 г (87 %) аморфного вещества. Найдено, %: С-68.56, Н-9.21, N-6.62, S-4.97.
C36H58O4N3S. Вычислено, %: С-68.34, Н-9.31, N-6.68, S-5.10. ИК-спектр (ν, см-1, вазелиновое масло): 3020-2784, 1764, 1714, 1698, 1668, 1636, 1532, 1478, 1452, 1314, 1267, 1240,
1144, 1112, 1036, 1014, 988, 936, 888, 828, 744. Спектр 1H ЯМР (δ, м.д., CDCl3): 0.80, 0.85,
0.91, 0.94, 0.99 (5с, 15Н, 5СН3), 1.10-2.00 (м, CH2, CH), 1.60 (с, 3Н, CH3), 2.04 (уш. сигнал,
3Н, Н6'), 2.27-2.40 (м, 3Н, H13, H16), 2.95-3.08 (м, 1H, Н19), 3.68 (с, 3Н, H1'), 4.51 (уш.
сигнал, 1H, Н29), 4.57-4.66 (м, 2Н, Н29, Н3'), 6.36 (д, 1H, -CONH-, J 7.7 Гц), 9.50 (уш. сигнал, 1H, NOH-3). Спектр 13C ЯМР (δ, м.д., CDCl3): 14.3, 15.2 (С6'), 15.7, 15.7, 19.3, 19.4,
20.8, 21.3, 25.4, 26.4, 29.3, 30.1 (С4'), 30.5, 31.3 (С5'), 33.3, 33.5, 33.9, 36.7, 37.5, 37.8, 39.4,
40.5, 42.3, 46.2, 47.0, 49.7, 49.8, 51.0 (С3'), 52.1 (C1'), 54.7, 55.5, 109.1 (С29), 150.5 (С20),
164.5 (С3), 172.5 (C2'), 176.0 (-CONH-).
Пример 4.
Получение 3-оксо-28-норлуп-28-(N-карбонил-18-амино-октадекан)-20(29)-ена (соединение V).
К 1 ммоль (0,47 г) хлорангидрида бетулоновой кислоты в 10 мл сухого диоксана прибавляют 1,6 ммоль (0,35 г) октадециламина и кипятят 2 часа. После охлаждения выливают
в 30 мл 5 % водного раствора соляной кислоты, осадок фильтруют, промывают водой до
нейтральной среды. Продукт реакции хроматографируют на колонке с Al2O3, элюируя
хлороформом. Выход 0,47 г (67 %) в виде желтого аморфного вещества. Rf 0.57. Найдено, %: С 80.92, H 11.76, N 1.86. C48H83O2N. Вычислено, %: С 81.50, H 12.00, N 1.98. ИКспектр (ν, см-1, вазелиновое масло): 3035-2840, 1741, 1716, 1696, 1680, 1662, 1632, 1502,
1474, 1450, 1386, 1316, 1255, 1240, 1221, 1160, 1136, 1040, 1008, 986, 930, 888, 824, 760.
3
BY 7601 C1 2005.12.30
Спектр 1H ЯМР (δ, м.д.): 0.83, 0.84, 0.88, 0.94, 0.98 (5с, 15Н, 5CH3), 1.20-2.00 (м, CH2, CH),
1.22 (с, 3Н, Н48), 1.64 (с, 3Н, CH3), 2.27-2.55 (м, 3Н, Н13, Н16), 3.11 (тд, 1H, Н19, J 11.0,
4.0 Гц), 3.21-3.36 (м, 2Н, Н31), 4.55 и 4.70 (оба уш. сигнала, по 1H, Н29), 5.87 (уш. сигнал,
1H, CONH). Спектр 13C ЯМР (δ, м.д.): 14.0 (С48), 14.4, 15.7, 15.8, 19.4, 19.5, 20.9, 21.3, 22.5
(С47), 25.5, 26.5, 26.9 (С32), 29.2 (С45), 29.5 (С33-С44), 29.7, 30.7, 31.7 (С46), 33.6, 33.6,
34.0, 36.7, 37.6, 38.3, 39.0 (С31), 39.5, 40.5, 42.3, 46.5, 47.1, 49.9, 50.0, 54.9, 55.4, 109.2
(C29), 150.7 (C20), 175.8 (-CONH-), 217.7 (С3).
Пример 5.
Получение 3-оксо-28-норлуп-28-(N-карбонил-О'-метил-L-метионин)-20(29)-ена (соединение VI).
К суспензии 1,3 ммоля гидрохлорида метилового эфира L-метионина в 5 мл сухого
хлороформа при перемешивании приливают по каплям 0,23 мл триэтиламина, добавляют
раствор 1 ммоль (0,47 г) хлорангидрида бетулоновой кислоты в 5 мл хлороформа и кипятят 1 час. Реакционную массу оставляют на ночь, фильтрат промывают 10 мл 10 % раствора соляной кислоты, 2×10 мл воды, сушат над MgSO4 и отгоняют растворитель в вакууме. Продукт реакции хроматографируют на колонке с Al2O3, элюируя хлороформом,
выход 0,55 г (91 %) аморфного вещества. Найдено, %: C-71.51, Н-9.80, N-2.12, S-5.08.
C36H57O4NS. Вычислено, %: С-71.92, Н-9.75, N-2.33, S-5.34. УФ-спектр (EtOH), λmах/нм:
263 (lg ε 4.18). ИК-спектр (ν, см-1, вазелиновое масло): 3040-2840, 1724, 1704, 1688, 1672,
1652, 1633, 1504, 1472, 1448, 1364, 1312, 1256, 1236, 1184, 1135, 1112, 1040, 1004, 976, 940,
888, 828, 760. Спектр 1H ЯМР (δ, м.д., CDCl3): 0.80, 0.85, 0.91, 0.94, 0.99 (5с, 15Н, 5CH3),
1.10-2.00 (м, 25Н, CH2, CH), 1.60 (с, 3Н, CH3), 2.04 (уш. сигнал, 3Н, Н6'), 2.27-2.40 (м, 3Н,
Н13, Н16), 2.95-3.08 (м, 1H, Н19), 3.68 (с, 3Н, H1'), 4.51 (уш. сигнал, 1H, Н29), 4.57-4.66 (м,
2Н, Н29, Н3'), 6.36 (д, 1H, -CONH-, J 7.7 Гц). Спектр 13C ЯМР (δ, м.д., CDCl3): 14.3, 15.2
(С6'), 15.7, 15.7 19.3, 19.4, 20.8, 21.3, 25.4, 26.4, 29.3, 30.1 (С4'), 30.5, 31.3 (С5'), 33.3, 33.5,
33.9, 36.7, 37.5, 37.8, 39.4, 40.5, 42.3, 46.2, 47.0, 49.7, 49.8, 51.0 (С3'), 52.1 (C1'), 54.7, 55.5,
109.1 (С29), 150.5 (С20), 172.5 (С2'), 176.0 (-CONH-), 217.7 (С3).
Пример 6.
Получение фенил-гидразидо-гидразон-3-оксим-луп-20(29)-ен-28-оевой кислоты (соединение I).
Смесь эквимолярного количества (1 ммоль) гидразида 3-оксим-бетулоновой кислоты
(0,48 г) и бензальдегида (0,15 мл) в 20 мл этанола кипятят 6 ч. После охлаждения выливают смесь в 50 мл 5 % раствора соляной кислоты, осадок отфильтровывают, промывают
водой до нейтральной реакции. Остаток хроматографируют на колонке с окисью алюминия, элюируя смесью хлороформа-ацетона (5:1, v/v), выход 0,52 г (91 %). Тпл. = 264-267 °C.
Найдено, %: С-77.97, Н-9.53, N-7.22. C37H53O2N3. Вычислено, %: С-77.70, Н-9.36, N-7.35.
УФ-спектр (EtOH), λmax/нм: 292 (lg ε 4.44). ИК-спектр (ν, см-1, вазелиновое масло): 1726,
1700, 1660, 1625, 1550, 1520, 1488, 1460, 1415, 1392, 1318, 1296, 1260, 1215, 1162, 1140,
1098, 1028, 990, 916, 888, 840, 766. Спектр 1H ЯМР (δ. м.д., CDCl3): 0.87, 0.90, 0.94, 0.99,
1.01 (5c, 15Н, 5CH3), 1.20-2.00 (м, CH2, CH), 1.70 (с, 3Н, CH3), 2.31-2.67 (м, 3Н, Н13, Н16),
2.85-3.05 (м, 1H, Н19), 4.59 и 4.73 (оба уш. сигнала, по 1H, Н29), 7.25-7.37 и 7.58-7.70 (оба
м, 5Н, H аромат.), 8.38 (уш. сигнал, 1H, -N = CH-Ph), 8.52 (уш. сигнал, 1H, -CONH-), 9.50
(уш. сигнал, 1H, NOH-3). Спектр 13C ЯМР (δ, м.д., CDCl3): 14.0, 15.1, 15.8, 16.2, 18.5, 18.7,
21.1, 22.4, 25.5, 27.0, 29.6, 30.5, 32.2, 33.7, 36.9, 37.1, 37.4, 38.4, 39.5, 40.6, 42.1, 46.3, 50.1,
54.4, 55.0, 55.4, 108.9 (С29), 126.8, 128.4, 128.4, 129.4, 129.4, 134.9, 145.8 (C1'), 150.8 (С20),
163.9 (С3), 172.7 (-CONH-).
Пример 7.
При проведении испытаний с вирусом гриппа A/Rostock/34 (H7N1) используют культуру клеток первичных фибробластов эмбрионов кур (ФЭК). Испытания проводят методом редукции количества бляшек под агаровым покрытием.
4
BY 7601 C1 2005.12.30
Монослойную культуру ФЭК, выращенную во флаконах, отмывают от ростовой среды, инфицируют различными разведениями вируса в пределах 0,01-0,00001 БОЕ/клетка
путем нанесения на клетки вируссодержащей суспензии в объеме 0,1 мл на 1 час при
37 °C. Затем жидкость удаляют и клетки покрывают расплавом питательного покрытия на
основе концентрата среды 199 с добавлением 1 % бактагара и 0,005 % нейтрального красного (все реактивы Sigma) и различных концентраций 3-оксо-28-норлуп-17β-карбамоил20(29)-ена (соединение III). 3-Оксо-28-норлуп-17β-карбамоил-20(29)-ен предварительно
растворяют в 10 % этаноле. После застывания покрытия флаконы помещают в термостат
на 36 час и затем подсчитывают количество бляшек, видимых благодаря присутствию в
покрытии витального красителя. На основе количества бляшек вычисляют титр вируса.
Критерием противовирусного действия считают наличие различий в сравнении с контролем вируса. Вычисляют также концентрацию 50 % подавления размножения вируса
(среднеэффективная концентрация, ЕС50) и отношение максимальной переносимой концентрации (МПК) к ЕС50. Кроме того, вычисляют индекс селективности (МПК/ЕС90).
МПК соединений для неинфицированных культур клеток определяют после 72 час инкубации. Полученные результаты приведены в таблице 1.
Пример 8.
Исследование, описанное в примере 7, выполняют с 3-оксо-28-норлуп-28-(N-карбонил-О'-метил-L-лейцин)-20(29)-еном (соединение IV).
Полученные результаты приведены в таблице 1.
Пример 9.
Исследование, описанное в примере 7, выполняют с 3-оксим-28-норлуп-28-(карбонилО'-метил-L-метионин)-20(29)-еном (соединение II).
Полученные результаты приведены в таблице 1.
Пример 10.
Исследование, описанное в примере 7, выполняют с бетулином. Полученные результаты приведены в таблице 1.
Таблица 1
Противовирусные свойства лупановых тритерпеноидов в отношении вируса гриппа
Концен- Титр виру- Разность с
СоедиЕС50(I95),
Отношение Отношение
трация*,
са±Sх, lg контролем, lg
нение
Мкг/мл
МПК/ЕС50 МПК/ЕС90
мкг/мл
БОЕ/мл
БОЕ/мл
III
400
<2,00
>1,78
0,30
1333,33
1
200
2,92±0,02
0,86
(2,86÷0,03)
100
3,06±0,11
0,72
50
3,20±0,03
0,58
25
3,26±0,03
0,52
12
3,30±0,19
0,48
6
3,13±0,07
0,65
3
3,23±0,12
0,55
0
3,78±0,08
IV
200
7,68±0,03
0,88
<<3
>>67
33,3
100
7,81±0,02
0,75
50
7,72±0,01
0,84
25
7,69±0,02
0,87
12,5
7,72±0,02
0,84
6
7,54±0,06
1,02
3
7,69±0,06
0,87
0
8,56±0,13
5
BY 7601 C1 2005.12.30
Продолжение табл. 1
II
50
<6,0
>2,48
1,42
35,21
8
25
6,95±0,6
1,53
(1,56÷1,29)
12,5
7,20±0,1
1,28
6,25
7,26±0,07
1,22
3,0
7,59±0,03
0,89
1,5
8,19±0,1
0,29
0,7
8,38±0,07
0,10
0
8,48±0,03
Бетулин
200
5,50±0,05
0,37
216,17
<1
<1
100
5,68±0,01
0,9
(6504,3÷7,18)
50
5,62±0,06
0,25
25
5,53±0,05
0,34
12,5
5,57±0,06
0,30
6
5,69±0,1
0,18
3
5,90±0,03
-0,03
0
5,87±0,01
* максимальная переносимая концентрация (МПК)
Пример 11.
При проведении испытаний с вирусом герпеса I типа (ВПГ, штамм 1 С) используют
перевиваемую культуру клеток рабдомиосаркомы (RD). Монослойную культуру клеток
RD, выращенную во флаконах, отмывают от ростовой среды, инфицируют 0,01-0,001
ТЦИД50/клетка вирусов путем нанесения на клетки разведения вируссодержащей суспензии в объеме 0,1 мл на 1 час при 37 °C. Затем жидкость удаляют и клетки покрывают средой поддержки (среда 199), содержащей различные концентрации 3-оксо-28-норлуп-28(N-карбонил-18-амино-октадекан)-20(29)-ена (соединение V). 3-Оксо-28-норлуп-28-(Nкарбонил-18-амино-октадекан)-20(29)-ен предварительно растворяют в 10 % этаноле. После 48 час инкубации при 37 °C регистрируют морфологические изменения монослоя клеток (цитопатическое действие (ЦПД) вируса, увеличение ×80). Находят минимальную
концентрацию соединений, подавляющую развитие ЦПД вируса на 50 % (ТЦД50). Критерием противовирусного действия считают наличие различий в сравнении с контролем вируса. Вычисляют также концентрацию 50 % подавления размножения вируса (среднеэффективная концентрация, ЕС50) и отношение максимальной переносимой концентрации
(МПК) к ЕС50. Кроме того, вычисляют индекс селективности (МПК/ЕС90). МПК соединений для неинфицированных культур клеток определяют после 72 час инкубации. Полученные результаты приведены в таблице 2.
Пример 12.
Исследование, описанное в примере 11, выполняют с 3-оксо-28-норлуп-28-(N-карбонил-18-амино-октадекан)-20(29)-еном (соединение V).
Полученные результаты приведены в таблице 2.
Пример 13.
Исследование, описанное в примере 11, выполняют с 3-оксо-28-норлуп-28-(N-карбонил-О'-метил-метионин)-20(29)-еном (соединение VI).
Полученные результаты приведены в таблице 2.
Пример 14.
Исследование, описанное в примере 11, выполняют с фенил-гидразидо-гидразон-3оксим-луп-20(29)-ен-28-оевой кислотой (соединение 1).
Полученные результаты приведены в таблице 2.
6
BY 7601 C1 2005.12.30
Пример 15.
Исследование, описанное в примере 11, выполняют соединениями сравнения: бетулиновой кислотой, бетулоновой кислотой и бетулином. Полученные результаты приведены
в таблице 2.
Таблица 2
Противовирусные свойства лупановых тритерпеноидов
в отношении вируса герепеса простого
Соединение
V
VI
I
Бетулиновая
кислота
Концентрация*,
мкг/мл
200
100
50
25
12,5
6,2
3,1
0
400
200
100
50
25
12,5
6,2
3,1
0
800
400
200
100
50
25
12,5
6,2
3,1
0
200
100
50
25
12,5
6,2
3,1
0
Титр виру- Разность с
EC50(I95),
са±Sх, lg контролем, lg
мкг/мл
БОЕ/мл
БОЕ/мл
<4,0
>2,0
1,11
4,18±0,17
1,94
(3,04÷0,4)
4,18±0,17
1.94
4,19±0,26
1,93
4,34±0,26
1,78
5,3±0,16
0,82
6,12±0,24
0
6,12±0,24
<4,0
>3
1,34
<4,0
>3
(3,99÷0,45)
4,48±0,17
2,52
5,18±0,13
1,82
5,18±0,13
1,82
5,28±0,26
1,72
6,15±0,23
0,85
7,0±0,26
0
7,0±0,26
<4,0
>2
7,70
<4,0
>2
(9,85÷6,03)
<4,0
>2
<4,0
>2
<4,0
>2
4,11±0,26
1,89
4,11±0,26
1,89
5,47±0,19
1,36
6,05±0,26
-0,05
6,0±0,26
<4,0
>2,0
5,12
<4,0
>2,0
(6,37÷4,14)
<4,0
>2,0
<4,0
>2,0
4,15±0,26
1,87
4,64±0,23
1,38
5,55±0,22
0,47
6,02±0,27
-
7
Отношение Отношение
МПК/ЕС50 МПК/ЕС90
180,2
16
298,5
32
181,41
129
85,47
32
BY 7601 C1 2005.12.30
Бетулоновая
кислота
Бетулин
50
25
12,5
6,2
1,0
0,5
0
100
50
25
12,5
6,2
3,1
0
<4,0
<4,0
<4,0
<4,0
4,38±0,18
5,10±0,25
6,02±0,27
4,15±0,26
4,38±0,19
4,38±0,19
4,71±0,24
5,19±0,26
5,33±0,16
6,02±0,27
>2,0
>2,0
>2,0
>2,0
1,64
0,92
1,87
1,64
1,64
1,31
0,83
0,69
-
0,90
(0,85÷0,009)
1,31
(3,39÷0,52)
Продолжение табл. 2
121,95
50
172,41
8
Как видно из данных таблицы 1, все заявляемые лупановые тритерпеноиды подавляют
размножение вируса гриппа в культуре клеток. Наиболее выраженное снижение инфекционности вируса и широкий диапазон эффективных концентраций имеет соединение IV.
Соединение III характеризуется наиболее широким отношением максимальной переносимой концентрации к среднеэффективной, однако снижение инфекционности в его присутствии, как правило, не достигает 90 % уровня (1 lg БОЕ/мл).
Из таблицы 2 следует, что известные тритерпеноиды: бетулин, бетулиновая и бетулоновая кислоты обладают выраженными ингибирующими свойствами в отношении вируса
герпеса простого. Наиболее широкий диапазон эффективных концентраций МПК/ЕС50 и
МПК/ЕС90 имеют бетулин (отношение МПК/EC50 = 172,41) и бетулоновая кислота (отношение МПК/ЕС90 = 50). В то же время отношение МПК/ЕС90 заявляемого соединения IV
равно 129, что в 2,6 раза выше, чем у бетулоновой кислоты. Отношение МПК/ЕС50 соединений V, VI и I выше, чем у бетулина в 1,04; 1,73 и 1,05 раза соответственно.
Таким образом, заявляемое решение позволяет решить поставленную задачу. При использовании новых тритерпеновых соединений лупанового ряда удается получить подавление размножения вирусов гриппа и герпеса в культуре клеток.
Заявляемые химические соединения могут быть использованы в исследовательской
лабораторной практике непосредственно в настоящий момент для подавления размножения вирусов гриппа и герпеса и редукции вызываемых ими заболеваний.
В связи с установленными свойствами заявляемые вещества имеют большое практическое значение. На их основе могут быть разработаны лекарственные формы препаратов
для лечения и профилактики гриппа и герпетических поражений. Ожидается, что такие
препараты будут эффективны также и при инфекциях, вызванных вариантами вируса
гриппа, устойчивого к действию известного лекарственного средства ремантадина, и вируса герпеса, устойчивого к действию известного препарата, ацикловира, а также при развитии лекарственной устойчивости к известным препаратам в ходе лечения. Экспериментальные данные, свидетельствующие об эффективности тритерпеноидов в отношении
варианта вируса герпеса, устойчивого к действию ацикловира, показаны на примере мороновой кислоты [4]. Известно, что при лечении герпетических поражений ацикловиром
достаточно быстро развивается лекарственная устойчивость возбудителя [5, 6]. Следовательно, в таких случаях может быть оправдано применение средств на основе тритерпеноидов лупанового ряда в качестве препаратов для самостоятельной или комбинированной терапии. Препараты на основе лупановых тритерпеноидов могут иметь применение и
при профилактике гриппа, особенно в коллективах полузакрытого типа, в частности се8
BY 7601 C1 2005.12.30
мейных очагах. При появлении заболевших в таких коллективах для лечения, как правило,
используют ремантадин как наиболее эффективный этиотропный препарат. Однако после
нескольких дней приема ремантадина больной становится распространителем ремантадинустойчивого вируса гриппа, который может вызвать заболевание у остальных членов
коллектива [7]. При этом применение ремантадина лицами окружения с профилактической или лечебной целью может быть уже не столь эффективным. Как и в случае с герпетической инфекцией, здесь целесообразно профилактическое применение препаратов на
основе тритерпеноидов ряда лупана самостоятельно или в комбинации с ремантадином.
Для выработки окончательных рекомендаций по применению лупановых тритерпеноидов с целью лечения и профилактики вирусных инфекций, в том числе тех из них, которые вызываются вариантами возбудителей, устойчивыми к известным и применяющимся препаратам, необходимы изучение безвредности, разработка лекарственной формы,
клинические испытания и отработка оптимальных схем применения.
Информационные источники:
1. Ryu S.Y., Lee C.-K., Lee С.О., Kim H.S., & Zee O.P. Arch. Pharmacal Res. (Seoul)
1992; 15(3): 242-5 / Cited by Hwang S-M. Process for preparing an anti-viral medicinal product
from plant extracts. US patent 6,214,350. April 10, 2001. A61K 035/78.
2. Kurokawa M., Basnet P., Ohsugi M., Hozumi T., Kadota S., Namba Т., Kawana T.,
Shiraki K. Anti-herpes simplex virus activity of moronic acid purified from Rhus javanica in vitro and in vivo. Journal of Pharmacology and Experimental Therapy 1999; 289(l): 72-8.
3. US patent 5,750,578. A 01N 027/00; A 01N 031/00; A 61K 039/245, 12,05.1998.
4. Платонов В.Г., Зорина А.Д., Гордон М.А., Чижов Н.П., Балыкина Л.В., Михайлов
Ю.Д., Иванен Д.Р., Трон Ким Кви, Шавва A.Г. Исследование противогриппозной активности тритерпеноидов. Хим. фарм. журнал, 1995, 29(2), с. 42-46.
5. Kimberlin D.W., Соеn D.M., Biron K.K. et al. Molecular mechanises of antiviral resistance // Antiviral Res., 1995, v. 26, p. 369-401.
6. Kimherlin D.W, Crumpacker C.S., Straus S.E. et al Antiviral resistance in clinical practice //
Antiviral Res., 1995, v. 26, p. 423-438.
7. Бореко Е.И., Павлова H.И. Амантадин и ремантадин в профилактике и лечении
гриппа // Мед. Новости, 1999 г., № 3, с. 20-25.
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
190 Кб
Теги
by7601, патент
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа