close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY7678

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
BY (11) 7678
(13) C1
(19)
(46) 2006.02.28
(12)
7
(51) A 61K 31/455, 31/52,
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
C 12N 7/04,
A 61P 31/18
(54) ПРИМЕНЕНИЕ КСАНТИНОЛА НИКОТИНАТА ДЛЯ ПОДАВЛЕНИЯ
ВИЧ В КУЛЬТУРЕ КЛЕТОК
BY 7678 C1 2006.02.28
(21) Номер заявки: a 20020799
(22) 2002.10.02
(43) 2004.06.30
(71) Заявитель: Государственное учреждение "Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии" Министерства здравоохранения
Республики Беларусь (BY)
(72) Авторы: Кучеров Игорь Иванович;
Подольская Ирина Александровна;
Мистрюкова Любовь Олеговна;
Коржев Михаил Олегович; Абаев
Аркадий Юрьевич; Рытик Петр
Григорьевич (BY)
(73) Патентообладатель: Государственное
учреждение "Научно-исследовательский институт эпидемиологии и
микробиологии" Министерства здравоохранения Республики Беларусь
(BY)
(56) RU 2174982 С2, 2001.
Рытик П.Г. и др. Современные проблемы инфекционной патологии человека. Материалы II научно-практической
конференции. - Мн., 2001. - С. 201-207.
Кучеров И.И. и др. Вторая международная конференция "Вирусные гепатиты и ВИЧ-инфекция: эпидемиология,
диагностика, профилактика, лечение". Мн., 1999. - С. 79.
Кучеров И.И. и др. Инфекция и иммунитет. Материалы, приуроченные
к V Международному форуму по глобальной вакцинологии "Вакцины и
иммунизация". - Мн., 2001. - С. 141-146.
(57)
Применение ксантинола никотината в качестве препарата, подавляющего размножение вируса иммунодефицита человека в Т-лимфобластоидных клетках.
Изобретение относится к медицине, в частности, к вирусологии и может быть использовано для решения задачи профилактики и лечения ВИЧ-инфекции/СПИДа.
В настоящее время основной стратегией лечения ВИЧ-инфекции/СПИДа является
комбинированное применение этиотропных лекарственных средств [1], подавляющих репликацию вируса иммунодефицита человека (ВИЧ) за счет прямого воздействия на его
ферменты, участвующие в этом процессе (обратную транскриптазу и протеазу), в частности азидотимидин (АЗТ) [2]. Однако, все, без исключения, используемые для этой цели
лекарственные средства имеют ряд ограничений для своего применения. Во-первых, высокая стоимость комбинированной этиотропной терапии (до 10 тысяч USD в год на 1 пациента) делают ее труднодоступной для населения большинства развивающихся стран [3],
к которым относится и Беларусь. Так, стоимость 30-дневного курса лечения лишь одним
препаратом АЗТ (цена 1 таблетки 2,32 доллара США) составляет около 418 долларов
США. Во-вторых, все эти препараты обладают выраженным побочным действием и трудно переносятся пациентами [1]. Так, применение нуклеозидных ингибиторов ВИЧ, пред-
BY 7678 C1 2006.02.28
ставителем которых является АЗТ, способно вызывать такие побочные эффекты, как нейтропения, анемия, панкреатиты, периферическая нейропатия, афтозные язвы, диаррея и
др. И, наконец, третье - эффективность применения АЗТ (и других нуклеозидных ингибиторов ВИЧ) уже спустя несколько месяцев существенно снижается вследствие селекции
АЗТ-резистентных вариантов ВИЧ [4]. Известно также, что формирующаяся у ВИЧ резистентность к одному из нуклеозидных препаратов может носить перекрестный характер [5].
Задача изобретения: поиск новых ингибиторов ВИЧ среди уже используемых в медицинской практике лечебных препаратов другого назначения, доступных по цене, без ярко
выраженных побочных действий и активных в отношении резистентных к нуклеозидным
ингибиторам штаммов ВИЧ.
Результат достигается применением ксантинола никотината для подавления ВИЧ в
культуре клеток.
Ксантинола никотинат (7-[2-Окси-3-(N-метил-бета-оксиэтиламино)-пропил]-теофиллина никотинат) известен как сердечно-сосудистое спазмолитическое средство [6]. Побочные действия слабо выражены и иногда могут проявляться в виде общей слабости и
головокружения.
Производитель: Борисовский завод медпрепаратов. Форма выпуска: таблетки по 0,15 г
или 15 % раствор для инъекций 2 мл, по 10 ампул в пачке. Стоимость упаковки (60 таблеток) на 01.09.02 - 2055 бел. руб. (34,25 бел. руб. за 1 таблетку). Назначается по 1 таблетке
3 раза в день. Стоимость 30-дневного применения препарата составляет менее 2 долларов
США.
Новизна изобретения заключается в обнаружении у ксантинола никотината новых
биологических свойств в виде проявления анти-ВИЧ активности в культуре клеток.
Оригинальность изобретения в установлении наличия у широко применяемого в практической медицине сердечно-сосудистого препарата новой функции - способности подавлять размножение ВИЧ в клеточных культурах.
Сущность изобретения иллюстрируется примерами.
Пример 1.
Определение анти-ВИЧ активности ксантинола никотината методом формазанового
теста (ФТ).
Эксперименты проводились на трех Т-лимфобластоидных клеточных линиях Jurkattat3, Molt 4/8 и МТ-4. Инфекционным агентом служил выделенный в Беларуси от вирусоносителя высокорепликативный штамм ВИЧ-1zmb с инфекционным титром не менее 6,0
lg ТЦД50. Испытания проводили на двух клонах вируса: АЗТ-чувствительном (R-) и АЗТрезистентном (R+). Постановку ФТ проводили в терапевтическом варианте с одновременным внесением в клеточные культуры препарата и вируса. Суть метода заключается в том,
что после добавления в культуру реагента MTT живыми клетками адсорбируется образующийся формазановый продукт, степень накопления которого после растворения в
органическом инградиенте (ДМСО) измеряется на спектрофотометре при длине волны
540 нм. О наличии анти-ВИЧ активности препарата судили на 5-е сутки после заражения
клеток по индексу защиты (ИЗ) клеток. Показатель ИЗ выше 50 % указывал на наличие у
препарата ВИЧ-ингибирующих свойств.
В результате испытаний ксантинола никотината в ФТ установлено, что препарат обладает анти-ВИЧ активностью в диапазоне концентраций 50,0-0,5 мкг/мл в случае (R-) клона
ВИЧ-1zmb и 50,0-10,0 мкг/мл в опытах на (R+) клоне ВИЧ-1zmb - 50,0-2,0 мкг/мл. Химиотерапевтический индекс препарата равнялся 200.
Пример 2.
Оценка анти-ВИЧ активности ксантинола никотината по прижизненной окраске клеток трипановым синим (OTC).
2
BY 7678 C1 2006.02.28
Испытания проводились на Т-лимфобластоидной клеточной линии МТ-4 в аналогичных с ФТ условиях. Результаты теста учитывались на 5-е сутки путем прижизненной окраски клеток 0,2 % раствором трипанового синего (trypan blue). Методика позволяет
непосредственно судить о количестве живых (неокрашенных) и мертвых (окрашенных в
синий цвет) клеток, подсчитываемых в камере Горяева под световым микроскопом "Ломо
АУ-12" (ув. 1,5×7×20). Об эффективности препарата судили по величине ED50 (effective
dose), при которой число живых клеток, обработанных препаратом и инфицированных
ВИЧ, на 50 % превышало их число в контроле вируса.
В результате установлено, что ксантинола никотинат защищал клетки от вирулицидного действия ВИЧ-1zmb. ED50 препарата для (R-) клона ВИЧ-1zmb находилась в интервале 50,0-0,4 мкг/мл, а для (R+) клона ВИЧ-1zmb - 50,0-2,0 мкг/мл.
Пример 3.
Ингибирование синцитиеобразующей активности (ИСА) ВИЧ.
Испытания проводили на Т-лимфобластоидной клеточной линии Jurkat-tat3 с использованием синцитиеобразующего штамма ВИЧ-1zmb. Учет результатов проводили на 5-е
сутки после заражения клеток путем подсчета синцитиев на 30 полях зрения в инвертированном микроскопе "Reichert-Jung MicroStar" (ув. 10×10/.25). Позитивными считались те
концентрации препарата, при которых количество синцитиев было снижено не менее, чем
на 25 % по сравнению с контролем вируса.
В результате испытаний установлено, что ксантинола никотинат в концентрации
50,0 мкг/мл подавлял синцитиеобразование, индуцированное ВИЧ-1zmb, на 27-29 %.
Суммарные данные оценки различными методами ингибирующего действия ксантинола никотината на ВИЧ приведены в таблице.
Табл.
Результаты испытаний ксантинола никотината
различными методами на анти-ВИЧ активность
(R-)BИЧ-1zmb
(R+)BИЧ-1zmb
Эффективные концентрации (мкг/мл)
ФТ
OTC
ИСА
50,0-0,5
50,0-0,4
50,0
50,0-10,0
50,0-2,0
Н/Т
Таким образом, выявлен лекарственный препарат, снижающий инфекционную активность ВИЧ в культурах Т-лимфобластов. Как видно из примеров 1-3 (см. таблицу), ксантинола никотинат предотвращает гибель более 50 % клеток от цитопатического действия
ВИЧ-1zmb, что, по современным представлениям, позволяет считать его препаратом, обладающим анти-ВИЧ активностью, в том числе и в отношении АЗТ-резистентного (R+)
клона ВИЧ-1zmb.
Источники информации:
1. Schutz M., Wendrow A. Quick reference guide to antiretrovirals // Medscape Web site. Junuary 3, 2002. - P.3.
2. Cheng Y.-C, Gao W.-Y., Chen C-H. et al. DNA polymerases versus HIV reverse transcriptase in AIDS therapy // Annals of the New York Academy of Science "AIDS: anti-HIV
Agents, Therapies, and Vaccines". - 1990. - V. 616. - P. 218.
3. XIII Международная конференция по СПИДу, Дурбан (ЮАР) // ВИЧ/СПИД и родственные проблемы. - 2000. - Т. 4. - № 2. - С. 9.
3
BY 7678 C1 2006.02.28
4. Папуашвили M.H. Подходы к терапии ВИЧ-инфекции // ВИЧ/СПИД и родственные
проблемы. - 2001. - Т. 5. - № 2. - С. 92.
5. Wainberg M.A., Tremblay M., Rooke R. et al. Characterization of reverse transcriptase
activity and susceptibility to other nucleosides of AZT-resistant variants of HIV-I //Annals of the
New York Academy of Science "AIDS: anti-HIV Agents, Therapies, and Vaccines". - 1990. V. 616. - P. 349.
6. Машковский М.Д. Лекарственные средства. - Мн.: Беларусь. - 1987. - ч. 1. - С. 402.
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
80 Кб
Теги
by7678, патент
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа