close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY7809

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
BY (11) 7809
(13) C1
(19)
(46) 2006.02.28
(12)
7
(51) A 61K 31/56,
A 61P 31/16
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
ИНГИБИТОР РАЗМНОЖЕНИЯ ВИРУСА ГРИППА
(21) Номер заявки: a 20020529
(22) 2002.06.19
(43) 2003.12.30
(71) Заявители: Государственное учреждение
"Научно-исследовательский институт
эпидемиологии и микробиологии"
Министерства здравоохранения Республики Беларусь (BY); Институт органической химии Уфимского научного
центра Российской академии наук (RU)
(72) Авторы: Бореко Евгений Иванович
(BY); Павлова Наталья Ильинична
(BY); Савинова Ольга Владимировна
(BY); Флехтер Оксана Борисовна (RU);
Нигматуллина Лена Рамилевна (RU);
Балтина Лидия Ашрафовна (RU); Галин Фанур Зуфарович (RU); Толстиков Генрих Александрович (RU)
(73) Патентообладатели: Государственное
учреждение "Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии" Министерства здравоохранения Республики Беларусь (BY);
Институт органической химии Уфимского научного центра Российской
академии наук (RU)
(56) Платонов В.Г. и др. Хим.-фарм. журнал. - 1995. - Т. 29. - № 2. - С. 42-46.
RU 2174126 C1, 2001.
US 6369101 B1, 2002.
WO 02/26762 A1.
BY 7809 C1 2006.02.28
(57)
Применение 3-кето-28-оксо-аллобетулина формулы
H
O
H
O
H
O
H
в качестве ингибитора размножения вируса гриппа.
Изобретение относится к области медицины, в частности вирусологии, и может быть
использовано для подавления размножения вирусов гриппа.
Известны противовирусные свойства тритерпеноида лупанового ряда, бетулиновой
кислоты, в отношении вируса герпеса простого [1].
BY 7809 C1 2006.02.28
Более высокими противовирусными свойствами в отношении вируса герпеса простого
обладают другие тритерпеноиды лупанового ряда, бетулоновая кислота, бетулин, аллобетулин и его производные [2, 3, 6]. Бетулин не обладает противовирусными свойствами в
отношении вирусов гриппа [4]. В патентной и научно-технической литературе информация о противовирусных свойствах лупановых и родственных тритерпеноидов. включая
производные аллобетулина в отношении вирусов гриппа, отсутствует.
Задачей изобретения является расширение ассортимента средств, обладающих противовирусным действием в отношении вируса гриппа.
Поставленная задача достигается применением 3-кето-28-оксо-аллобетулина следующего строения:
H
O
H
O
H
O
H
3-Кето-28-оксо-аллобетулин относится к производным аллобетулина, обладающим
противогерпетическими свойствами [6].
Авторами обнаружено неочевидное свойство, позволяющее применить 3-кето-28оксо-аллобетулин в качестве ингибитора размножения вируса гриппа.
Сущность изобретения иллюстрируется примерами.
Пример 1.
Получение 3-кето-28-оксо-аллобетулина.
К раствору 1 ммоль бетулоновой кислоты (0,46 г) в 10 мл хлороформа добавляют при
перемешивании 2 мл трифторуксусной кислоты. Через 8 мин (ТСХ-контроль) реакционную массу нейтрализуют 15 % раствором соды, промывают водой, сушат над MgSO4, растворитель упаривают в вакууме водоструйного насоса. Выход: 0,43 г (95 %) в виде белых
кристаллов. Тпл. = > 270. Найдено. %: С - 79,17, Н - 10,20. С30Н47О3 (Mr 455,7). Вычислено, %:
С - 79,07, Н - 10,39. ИК-спектр (ν, см-1, вазелиновое масло): 720, 780, 930, 980, 1020, 1060,
1115, 1170, 1200, 1260, 1390, 1460, 1710, 1780. Спектр 1Н ЯМР (δ, м.д., CDCl3): 0,86, 0,93,
0,94, 1,01, 1,05 (7с. 7СН3), 1,15-2,00 (м, СН2, СН), 3,90 (с, 1H, Н19). Спектр 13С ЯМР (δ,
м.д., CDCl3): 13,6. 15,3, 16,4, 19,5, 21,0, 21,4, 24,0, 25,5, 26,5, 26,7, 27,9, 28,7, 31,9, 32,3,
33,0, 33,5, 34,0, 36,1, 37,0, 39,8, 40,0, 40,5, 46,1, 46,7, 47,3, 50,6, 55,0, 85,9, 179,8, 217,9.
Пример 2.
При проведении испытаний с вирусом гриппа A/Rostock/34 (H7N1) используют культуру клеток первичных фибробластов эмбрионов кур (ФЭК). Испытания проводят методом редукции количества бляшек под агаровым покрытием.
Монослойную культуру ФЭК, выращенную во флаконах, отмывают от ростовой среды, инфицируют различными разведениями вируса в пределах 0,01-0,00001 БОЕ/клетка
путем нанесения на клетки вируссодержащей суспензии в объеме 0,1 мл на 1 ч при 37 °С.
Затем жидкость удаляют и клетки покрывают расплавом питательного покрытия на основе концентрата среды 199 с добавлением 1 % бактагара и 0,005 % нейтрального красного
(все реактивы Sigma) и различных концентраций 3-кето-28-оксо-аллобетулин (соединение I)
или бетулина (соединение II). 3-кето-28-оксо-аллобетулин предварительно растворяют в
2
BY 7809 C1 2006.02.28
10 % этаноле. После застывания покрытия флаконы помещают в термостат на 36 ч и затем
подсчитывают количество бляшек, видимых благодаря присутствию в покрытии витального красителя. На основе количества бляшек вычисляют титр вируса. Критерием противовирусного действия считают наличие различий в сравнении с контролем вируса.
Вычисляют также концентрацию 50 % подавления размножения вируса (среднеэффективная концентрация, EC50) и отношение максимальной переносимой концентрации (МПК) к
ЕС50. МПК соединений для неинфицированных культур клеток определяют после 72 ч инкубации.
Полученные результаты приведены в таблице.
Как видно из данных таблицы, 3-кето-28-оксо-аллобетулин подавляет размножение
вируса гриппа в культуре клеток. В то же время у препарата сравнения, бетулина, противовирусные свойства отсутствуют.
Таким образом, заявляемое решение позволяет решить поставленную задачу. При использовании 3-кето-28-оксо-аллобетулина удается получить подавление размножения вируса гриппа в культуре клеток.
Противовирусные свойства 3-кето-28-оксо-аллобетулина (I)
и бетулина (II) в отношении вируса гриппа
Соединение
Концентрация*, мкг/мл
I
200
100
50
25
12
6
3
0
200
100
50
25
12,5
6
3
0
II
Титр вируса Разность с контро±Sx, lg БОЕ/мл
лем, lg БОЕ/мл
<2,00
<2,00
<2,00
<2,00
3,55±0,02
3,45±0,06
3,66±0,05
3,78±0,08
5,50±0,05
5,68±0,01
5,62±0,06
5,53±0,05
5,57±0,06
5,69±0,1
5,90±0,03
5,87±0,01
>1,78
>1,78
>1,78
>1,78
0,23
0,33
0,12
0,37
0,19
0,25
0,34
0,30
0,18
-0,03
-
ЕС50 (I95).
мкг/мл
Отношение
МПК/ЕС50
12,79
(13,15÷12,44)
15,64
-_
216,17
(6504,3÷7,18)
<1
Заявляемое химическое соединение может быть использовано в исследовательской
лабораторной практике непосредственно в настоящий момент для подавления размножения вирусов гриппа и редукции вызываемого ими заболевания.
В связи с установленными свойствами заявляемое вещество имеет большое практическое значение. На его основе могут быть разработаны лекарственные формы препарата
для лечения и профилактики гриппа. Ожидается, что такой препарат будет эффективен
также и при инфекции, вызванной вариантом вируса гриппа, устойчивым к действию известного лекарственного средства ремантадина, а также при развитии лекарственной устойчивости в ходе лечения. Следовательно, в таких случаях может быть оправдано
применение средств на основе 3-кето-28-оксо-аллобетулина в качестве препарата для самостоятельной или комбинированной терапии. Препарат на основе 3-кето-28-оксоаллобетулина может иметь применение и при профилактике гриппа, особенно в коллективах
полузакрытого типа, в частности семейных очагах. При появлении заболевших в таких
3
BY 7809 C1 2006.02.28
коллективах для лечения, как правило, используют ремантадин как наиболее эффективный этиотропный препарат. Однако после нескольких дней приема ремантадина больной
становится распространителем ремантадинустойчивого вируса гриппа, который может
вызвать заболевание у остальных членов коллектива [5]. При этом применение ремантадина лицами окружения с профилактической или лечебной целью может быть уже не
столь эффективным. В данном случае целесообразно профилактическое применение препаратов на основе 3-кето-28-оксо-аллобетулина самостоятельно или в комбинации с ремантадином.
Для выработки окончательных рекомендаций по применению 3-кето-28-оксо-аллобетулина с целью лечения и профилактики вирусных инфекций, в том числе тех из них,
которые вызываются вариантами возбудителей, устойчивыми к известным и применяющимся препаратам, необходимы изучение безвредности, разработка лекарственной формы, клинические испытания и отработка оптимальных схем применения.
Источники информации:
1. Патент США 6,214,350, МПК А 61К 035/78, 2001.
2. Kurokawa M., Basnet P., Ohsugi M,. Hozumi T., Kadota S., Namba T., Kawana T.,
Shiraki K. Anti-herpes simplex virus activity of moronic acid purified from Rhus javanica in vitro and in vivo. Journal of Pharmacology and Experimental Therapy 1999; 289(1): 72-8.
3. Патент США 5,750,578, МПК A 01N 027/00; A 01N 031/00; A 61K 039/245, 1998.
4. Платонов В.Г., Зорина А.Д., Гордон М.А., Чижов Н.П., Балыкина Л.В., Михайлов Ю.Д.,
Иванен Д.Р., Тран Ким Кви, Шавва А.Г. Исследование противогриппозной активности
тритерпеноидов // Хим. фарм. журнал. - 1995. - № 29(2). - С. 42-46.
5. Бореко Е.И., Павлова Н.И. Амантадин и ремантадин в профилактике и лечении
гриппа // Мед. Новости. - 1999. - № 3. - С. 20-25.
6. Патент США 6,369,101, МПК А 61К 031/34; C 07D 307/77; C 07D 307/00, 2002.
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
1
Размер файла
87 Кб
Теги
by7809, патент
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа