close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY7811

код для вставкиСкачать
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
BY (11) 7811
(13) C1
(19)
(46) 2006.02.28
(12)
7
(51) C 07J 53/00, 63/00,
A 61P 31/16
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
ЛУПАНОВЫЕ ТРИТЕРПЕНОИДЫ, ИНГИБИРУЮЩИЕ
РАЗМНОЖЕНИЕ ВИРУСА ГРИППА
(54)
(21) Номер заявки: a 20020530
(22) 2002.06.19
(43) 2003.12.30
(71) Заявители: Государственное учреждение "Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии"
Министерства здравоохранения Республики Беларусь (BY); Институт органической химии Уфимского научного
центра Российской академии наук (RU)
(72) Авторы: Бореко Евгений Иванович
(BY); Павлова Наталья Ильинична
(BY); Савинова Ольга Владимировна
(BY); Флехтер Оксана Борисовна (RU);
Нигматуллина Лена Рамилевна (RU);
Балтина Лидия Ашрафовна (RU); Галин Фанур Зуфарович (RU); Толстиков Генрих Александрович (RU)
(73) Патентообладатели: Государственное
учреждение "Научно-исследовательский
институт эпидемиологии и микробиологии" Министерства здравоохранения
Республики Беларусь (BY); Институт
органической химии Уфимского научного центра Российской академии наук
(RU)
(56) Платонов В.Г. и др. Хим.-фарм. журнал,
1995. - Т. 29. - № 2. - С. 42-46.
US 5643884 A, 1997.
WO 02/26762 A1.
RU 2174982 C2, 2001.
US 5750578 A, 1998.
WO 98/55497 A1.
BY 7811 C1 2006.02.28
(57)
Лупановые тритерпеноиды, представляющие собой 3-оксим-бетулоновую кислоту (I),
3,28-диоксим-бетулин (II), 3-гидрокси-28-оксим-бетулин (III) и 3-О-ацетил-28-фталат бетулина (IV) общей формулы:
CH3
H2C
CH3 CH3
3
CH3
1
R
1
2
H3C
CH3
где R - = NOH, R - COOH (I);
R1 - = NOH, R2 - CH = NOH (II);
R1 - OH, R2 - CH = NOH (III);
R1 - OOCCH3, R2 - CH2OOCC6H4COOH (IV),
ингибирующие размножение вируса гриппа.
2
28R ,
BY 7811 C1 2006.02.28
Изобретение относится к области медицины, в частности вирусологии, и может быть
использовано для подавления размножения вирусов гриппа.
Известны противовирусные свойства тритерпеноида лупанового ряда, бетулиновой
кислоты, в отношении вируса герпеса простого [1].
Более высокими противовирусными свойствами в отношении вируса герпеса простого
обладают другие тритерпеноиды лупанового ряда, бетулоновая кислота и бетулин [2, 3].
Бетулин не обладает противовирусными свойствами в отношении вирусов гриппа [4]. В
патентной и научно-технической литературе информация о противовирусных свойствах
лупановых тритерпеноидов в отношении вирусов гриппа отсутствует.
Задачей изобретения является расширение ассортимента средств, обладающих противовирусным действием.
Поставленная задача достигается применением ряда новых лупановых тритерпеноидов: 3-оксим-бетулоновой кислоты (I), 3,28-диоксим-бетулина (II). 3-гидрокси-28-оксимбетулина (III) и 3-О-ацетил-28-фталата бетулина (IV) следующего строения:
CH3
R1 = (= NOH); R2 = -COOH (I),
R1 = (= NOH); -CH = NOH (II),
H2C
R1 = -OH; R2 = -CH = NOH (III),
R1 = -OOCCH3; R2 = -CH2OOCC6H4COOH (IV)
H3C H3C
28R2
3
CH3
R1
CH3
CH3
Авторами обнаружено неочевидное свойство, позволяющее применить новые тритерпеноиды ряда лупана: 3-оксим-бетулоновую кислоту, 3,28-диоксим-бетулина, 3-гидрокси28-оксим-бетулина и 3-О-ацетил-28-фталат бетулина в качестве ингибиторов размножения вируса гриппа.
Сущность изобретения иллюстрируется примерами.
Пример 1.
Получение 3-оксим-бетулоновой кислоты (соединение I [5]).
К 0,98 г (2 ммоль) бетулоновой кислоты в 30 мл сухого пиридина добавляют 1,0 г гидрохлорида гидроксиламина и кипятят 2 ч. Реакционную массу выливают в 5 % водный
раствор соляной кислоты, выпавший осадок отфильтровывают, промывают водой и сушат.
Остаток перекристаллизовывают из этанола. Выход: 0,89 г (89 %). Тпл. = 223-225 °С. Найдено, %: С-76,55; Н-10,28; N-2,97. С30Н48О3N. Вычислено, %: С-76,15; Н-9,18; N-2,87. Спектр
1
Н ЯМР (δ, м.д., CDCl3): 0,96; 0,99; 1,01; 1,07; 1,12 (5с, 15Н, 5СН3); 1,00-2,00 (м, СН, СН2);
1,67 (с, 3Н, Н-30); 2,22-2,32 (м, 1Н, Н-19); 4,60 и 4,75 (оба уш.с, 2Н, Н-29); 8,20 (уш.с, 1Н,
NOH-3). Спектр 13С ЯМР (δ, м.д., CDCl3): 14,6; 15,8; 15,9; 16,1; 17,1; 19,0; 19,3; 21,1; 22,8;
25,2; 27,2; 29,6; 30,6; 32,1; 33,9; 36,9; 37,2; 38,3; 38,7; 40,3; 40,7; 42,4; 46,9; 49,4; 50,1; 51,2;
55,6; 110,1 (С-29); 149,8 (C-20); 167,3 (C-3); 181,3 (С-28).
Пример 2.
Получение 3,28-диоксим-бетулина (соединение II [6]).
Смесь 0,44 г (1 ммоль) 3-кето-бетулинового альдегида и 1,0 г гидрохлорида гидроксиламина в 10 мл пиридина кипятят с обратным холодильником в течение 2 ч. Реакционную
массу выливают в 5 % водный раствор соляной кислоты, выпавший осадок отфильтровывают, промывают водой и сушат. Остаток перекристаллизовывают из СНСl3-МеОН, выход
0,38 г (85 %). Тпл. = 244-246 °С. Найдено, %: С-76,68; Н-10,60; N-5,74. C30H48N2O2. Вычислено, %: С-76,92; Н-10,26; N-5,98. ИК-спектр (v, см-1, вазелиновое масло): 3240, 1905, 1645,
2
BY 7811 C1 2006.02.28
1616, 1430, 1380, 1120, 1020, 940, 890, 750, 735, 710. Спектр 1Н ЯМР (δ, м.д., CDCl3): 0,95;
0,98; 1,02; 1,05; 1,12 (5с, 15Н, 5СН3 ); 1,00-2,00 (м, СН, СН2 ); 1,76 (с, 3Н, Н-30); 2,222,32 (м, 1Н, Н-19;4,62 и 4,76 (оба уш.с, 2Н, Н-29); 7,24 (с, 1Н, Н-28); 7,58 (уш.с, 1Н, NOH-28);
8,21 (уш.с, 1Н, NOH-3). Спектр 13С ЯМР (δ, м.д., CDCl3): 14,6; 15,8; 16,0; 17,2; 19,0; 19,2;
21,1; 22,9; 25,2; 27,3; 27,8; 27,9; 29,7; 32,4; 33,9; 36,9; 37,2; 38,6; 38,7; 40,3; 42,2; 45,6; 49,3;
49,8; 49,9; 54,4; 110,1 (С-29); 149,8 (С-20); 155,5 (С-28); 167,3 (С-3).
Пример 3.
Получение 3-гидрокси-28-оксим-бетулина (соединение III [7]).
Смесь 0,48 г (1 ммоль) 3-О-ацетил-бетулинового альдегида и 0,5 г гидрохлорида гидроксиламина в 10 мл пиридина кипятят с обратным холодильником в течение 2 ч. Реакционную массу выливают в 5 % водный раствор соляной кислоты, выпавший осадок
отфильтровывают, промывают водой и сушат. Остаток растворяют в 25 мл 5 % раствора
КОН в метаноле и кипятят с обратным холодильником 3 ч. Выливают смесь в холодную
воду, осадок отфильтровывают , промывают водой до нейтральной реакции . Остаток
хроматографируют на окиси алюминия , элюируя хлороформом, выход 0,32 г (70 %).
Тпл. = 223-225 °С. Найдено, %: С-78,99; Н-10,88; N-3,24, C30H49NO2. Вычислено, %: С78,69; Н-10,75; N-3,07. ИК-спектр (v, см-1, вазелиновое масло): 3480; 2210; 1655; 1640;
1568; 1385; 1136; 930; 888; 795; 730. Спектр 1Н ЯМР (δ. м.д., CDCl3): 0,78; 0,84; 0,99; 1,06;
1,12 (5с, 15Н, 5СН3); 1,05-2,00 (м, СН, СН2); 1,68 (с, 3Н, Н-30); 2,44-2,58 (м, 1Н, H-19);
4,42-4,47 (м, 1Н, Н-3); 4,60 и 4,72 (оба уш.с, 2Н, Н-29); 7,38 (с, 1Н, Н-28); 7,67 (уш.с, 1Н,
NOH-28); 8,84 (с, 1Н, ОН-3). Спектр 13С ЯМР (δ, м.д., CDCl3) : 14,7; 15,3; 15,9; 16,0; 18,2;
19,1; 20,7; 25,0; 25,1; 27,2; 27,7; 27,9; 29,6; 32,2; 34,2; 37,1; 38,5; 38,6; 38,8; 40,8; 42,7; 47,8;
49,3; 49,7; 50,3; 55,2; 78,9 (С-3); 110,0 (С-29); 149,7 (С-20); 155,2 (С28).
Пример 4.
Получение 3-О-ацетил-28-фталата бетулина (соединение IV [8]).
Смесь 0,48 г (1 ммоль) 3-О-ацетил-бетулина и 0,3 г (2 ммоль) фталевого ангидрида
кипятят в 10-15 мл безводного пиридина 15 ч. Реакционную массу разбавляют 200 мл холодной воды, подкисляют 10 % раствором соляной кислоты и экстрагируют бензолом.
Экстракт промывают водой, 5 % раствором соляной кислоты, снова водой, сушат над
MgSO4 и упаривают в вакууме. Выход: 0,59 г (93 %). Тпл. = 174-176 °С. Найдено, %: С - 75,64;
Н-8,58. С40Н56О6 Вычислено, %: С-75,89; Н-8,94. Спектр 1H ЯМР (δ, м.д., CDC13): 0,75; 0,81;
0,96; 0,97; 1,03 (5с, 15Н, 5СН3); 1,05-2,00 (м, СH2, СН); 1,68 (с, 3Н, CH3); 2,00 (с, 3Н, ОАс);
2,45-2,50 (м, 1Н, Н19), 4,38-4,43 (м, 1Н, Н3), 3,98 и 4,41 (оба д, по 1Н, Н28, J11 Гц), 4,60 и
4,71 (оба уш. сигнала, по 1H, Н29); 7,35-7,40 (м, 2Н, Н2′, Н3′); 7,45-7,55 (м, 1Н, Н1′); 7,657,75 (м, 1H, Н4′). Спектр 13С ЯМР (δ. м.д., CDCl3): 14,7; 16,0; 16,1; 16,5; 18,1; 19,1; 20,8;
21,2; 23,6; 25,1; 27,0; 27,9; 29,5; 29,7; 34,0; 37,0; 37,6; 37,7; 38,3; 40,8; 42,7; 46,4; 47,7; 48,9;
50,2; 55,3; 64,4 (С -28); 81,0 (С-3); 109,9 (С -29); 128,7; 129,8; 130,1; 130,6; 132,0; 133,7
(С аромат.); 150,0 (С-20); 168,5; 171,2 (-О-С = О); 172,4 (СООН).
Пример 5.
При проведении испытаний с вирусом гриппа A/Rostock/34 (H7N1) используют культуру клеток первичных фибробластов эмбрионов кур (ФЭК). Испытания проводят методом редукции количества бляшек под агаровым покрытием.
Монослойную культуру ФЭК, выращенную во флаконах, отмывают от ростовой среды, инфицируют различными разведениями вируса в пределах 0,01-0,00001 БОЕ/клетка
путем нанесения на клетки вируссодержащей суспензии в объеме 0,1 мл на 1 ч при 37 °С.
Затем жидкость удаляют и клетки покрывают расплавом питательного покрытия на основе концентрата среды 199 с добавлением 1 % бактагара и 0,005 % нейтрального красного
(все реактивы Sigma) и различных концентраций исследуемых соединений. Соединения I-IV,
3
BY 7811 C1 2006.02.28
а также бетулин предварительно растворяют в 10 % этаноле. После застывания покрытия
флаконы помещают в термостат на 36 ч и затем подсчитывают количество бляшек, видимых благодаря присутствию в покрытии витального красителя. На основе количества
бляшек вычисляют титр вируса. Критерием противовирусного действия считают наличие
различий в сравнении с контролем вируса. Вычисляют также концентрацию 50 % подавления
размножения вируса (среднеэффективная концентрация. EC50) и отношение максимальной
переносимой концентрации (МПК) к ЕС50. МПК соединений для неинфицированных
культур клеток определяют после 72 ч инкубации.
Полученные результаты приведены в таблице.
Противовирусные свойства 3-оксим-бетулоновой кислоты (I),
3,28-диоксим-бетулина (II), 3-гидрокси-28-оксим-бетулина (III) и 3-О-ацетил-28фталата бетулина (IV) в отношении вируса гриппа
Соедине- Концентрание
ция*, мкг/мл
I
II
III
IV
400
50
25
12,5
6
3
1,5
0,7
0,1
0
200
100
50
25
12
6
3
0
6,25
3,0
1,5
0,7
0,3
0
200
100
50
25
12
6
3
0
Титр виру- Разность с
ЕС50(I95),
Отношение Отношение
са±Sx, lg контролем,
мкг/мл
МПК/ЕС50 МПК/ЕС90
БОЕ/мл lg БОЕ/мл
н.и.
н.и.
1,02
392,16
133,3
<3
>3,52
(1,16÷0,89)
<3
>3,52
4,42±0,07
2,1
4,54±0,06
1,98
5,56±0,07
0,96
6,49±0,09
0,03
6,53±0,07
-0,01
6,42±0,11
0,1
6,52±0,08
<2,00
>2,51
2,73
73,26
16,7
<2,00
>2,51
(3,11÷2,40)
<2,00
>2,51
<2,00
>2,51
2,30±0,17
2,21
4,00±0,14
0,51
4,11±0,14
0,40
4,51±0,07
<6,0
>2,48
0,20
31,25
8,9
7,45±0,1
1,03
(0,47÷0,09)
7,41±0,008
1,07
7,40±0,04
1,08
8,18±0,03
0,30
8,48±0,03
<2,00
>2,16
13,60
14,70
8
<2,00
>2,16
(14,35÷12,90)
<2,00
>2,16
<2,00
>2,16
4,00±0,10
0,16
4,30±0,10
-0,14
4,20±0,09
-0,04
4,16±0,33
-
4
BY 7811 C1 2006.02.28
Продолжение таблицы
Бетулин
200
100
50
25
12,5
6
3
0
5,50±0,05
5,68±0,01
5,62±0,06
5,53±0,05
5,57±0,06
5,69±0,1
5,90±0,03
5,87±0,01
0,37
0,19
0,25
0,34
0,30
0,18
-0,03
-
216,17
(6504,3÷7,18)
<1
<1
Как видно из данных таблицы, все исследованные соединения подавляют размножение вируса гриппа в культуре клеток. Наиболее выраженными противовирусными свойствами обладает 3-оксим-бетулоновая кислота (I). В то же время у препарата сравнения,
бетулина, противовирусные свойства отсутствуют.
Таким образом, заявляемое решение позволяет решить поставленную задачу. При
использовании 3-оксим-бетулоновой кислоты, 3,28-диоксим-бетулина, 3-гидрокси-28оксим-бетулина и 3-О-ацетил-28-фталата бетулина удается получить подавление размножения вируса гриппа в культуре клеток.
Заявляемое химическое соединение может быть использовано в исследовательской
лабораторной практике непосредственно в настоящий момент для подавления размножения вирусов гриппа и редукции вызываемого ими заболевания.
В связи с установленными свойствами данные вещества имеют большое практическое
значение. На их основе могут быть разработаны лекарственные формы препаратов для лечения и профилактики гриппа. Ожидается, что такие препараты будут эффективны также
и при инфекции, вызванной вариантом вируса гриппа, устойчивым к действию известного
лекарственного средства ремантадина, а также при развитии лекарственной устойчивости
в ходе лечения. Следовательно, в таких случаях может быть оправдано применение
средств на основе 3-оксим-бетулоновой кислоты, 3,28-диоксим-бетулина, 3-гидрокси-28оксим-бетулина и 3-О-ацетил-28-фталата бетулина в качестве препаратов для самостоятельной или комбинированной терапии. Препараты на основе 3-оксим-бетулоновой кислоты, 3,28-диоксим-бетулина, 3-гидрокси-28-оксим-бетулина и 3-О-ацетил-28-фталата
бетулина могут иметь применение и при профилактике гриппа, особенно в коллективах
полузакрытого типа, в частности семейных очагах. При появлении заболевших в таких
коллективах для лечения, как правило, используют ремантадин как наиболее эффективный этиотропный препарат. Однако после нескольких дней приема ремантадина больной
становится распространителем ремантадинустойчивого вируса гриппа, который может
вызвать заболевание у остальных членов коллектива [9]. При этом применение ремантадина лицами окружения с профилактической или лечебной целью может быть уже не
столь эффективным. В данном случае целесообразно профилактическое применение препаратов на основе 3-оксим-бетулоновой кислоты, 3,28-диоксим-бетулина, 3-гидрокси-28оксим-бетулина и 3-О-ацетил-28-фталата бетулина самостоятельно или в комбинации с
ремантадином.
Для выработки окончательных рекомендаций но применению 3-оксим-бетулоновой
кислоты, 3,28-диоксим-бетулина, 3-гидрокси-28-оксим-бетулина и 3-О-ацетил-28-фталата
бетулина с целью лечения и профилактики вирусных инфекций, в том числе тех из них,
которые вызываются вариантами возбудителей, устойчивыми к известным и применяющимся препаратам, необходимы изучение безвредности, разработка лекарственной формы, клинические испытания и отработка оптимальных схем применения.
5
BY 7811 C1 2006.02.28
Источники информации:
1. Патент США 6,214,350, МПК A 61K 035/78, 2001.
2. Kurokawa M, Basnet P, Ohsugi Metal J. Pharm. Exp. Ther. 1999: V. 289. N 1. P. 72-78.
3. Патент США 5.750.578, МПК A 01N 027/00; A 01N 031/00: A 61K 039/245, 1998.
4. Платонов В.Г., Зорина А.Д., Гордон М.А.. и др. Хим. фарм. журнал. - 1995. - Т. 29. № 2. - С. 42-46.
5. Valterova I., Klinot J., Vystrcil A. Collect. Czech. Chem. Commun. - 1983. - V. 48. № 2. - P. 649-661.
6. Sun C., Wang H.-K., Kashiwada Y. et al., J. Med. Chem. - 1998. - V. 41. - P. 4648-4657.
7. U. Wrzeciono, H. Dembczynska. Rocz. Chem. - 1969. - V. 43. - P. 1407-1412.
8. Флехтер О.Б., Карачурина Л.Т., Поройков В.В. и др. Биоорган. Химия. - 2000. - Т. 26. С. 215-223.
9. Бореко Е.И.. Павлова Н.И. Медицинские новости. - 1999. - № 3. - С. 20-25.
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
108 Кб
Теги
by7811, патент
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа