close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY7967

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
BY (11) 7967
(13) C1
(19)
(46) 2006.04.30
(12)
7
(51) G 01N 33/50
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ УРОГЕНИТАЛЬНЫХ
ИНФЕКЦИЙ CHLAMYDIA TRACHOMATIS, MICOPLASMA
HOMINIS И UREAPLASMA UREALYTICUM В ИССЛЕДУЕМОМ
МАТЕРИАЛЕ
BY 7967 C1 2006.04.30
(21) Номер заявки: a 20030985
(22) 2003.10.29
(43) 2005.06.30
(71) Заявитель: Государственное учреждение образования "Белорусская медицинская академия последипломного образования" (BY)
(72) Авторы: Хулуп Геннадий Яковлевич; Костюк Светлана Андреевна
(BY)
(73) Патентообладатель: Государственное
учреждение образования "Белорусская
медицинская академия последипломного образования" (BY)
(56) Lars Stergaard et al. J. of Clinical Microbiology. - 1990. - V. 28. - № 6. - P. 12541260.
Лопухов Л.В. и др. Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. - 2000. - Т. 2. - № 3. - С. 96-105.
Щербо С.Н. и др. Клиническая лабораторная диагностика. - 1998. - № 2. С. 21-24.
(57)
Способ определения у больного возбудителей урогенитальных инфекций, выбранных
из группы Chlamydia trachomatis, Mycoplasma hominis и Ureaplasma urealyticum, включающий выделение ДНК возбудителя из биологической пробы, проведение полимеразной
цепной реакции и электрофоретическое разделение продуктов амплификации, отличающийся тем, что при выделении фрагментов ДНК с молекулярной массой от 35000 до
40000 относительных единиц размером 465-475 пар нуклеотидов с интенсивностью свечения 70-90 относительных единиц судят о наличии в биологической пробе Chlamydia trachomatis, при выделении фрагментов ДНК с молекулярной массой от 75000 до 80000 относительных единиц размером 950-960 пар нуклеотидов с интенсивностью свечения 110130 относительных единиц - о наличии Mycoplasma hominis, а при выделении фрагментов
ДНК с молекулярной массой от 52000 до 57000 относительных единиц размером 650-660
пар нуклеотидов с интенсивностью свечения 60-80 относительных единиц - о наличии
Ureaplasma urealyticum.
Изобретение относится к медицине, к разделу клинической лабораторной диагностики.
Известен способ определения Chlamydia trachomatis, Mycoplasma hominis и Ureaplasma
urealyticum в соскобе эпителиальных клеток из уретры и цервикального канала путем
осуществления полимеразной цепной реакции, при котором после проведения электрофоретического разделения продуктов амплификации определяют наличие в исследуемом образце синтезированного фрагмента молекулы ДНК по расстоянию пробега в исследуемой
BY 7967 C1 2006.04.30
пробе, и если это расстояние соответствует расстоянию пробега в пробе положительного
контроля, то это свидетельствует о синтезе фрагмента ДНК возбудителя и при наличии
фрагментов молекул ДНК Chlamydia trachomatis, Mycoplasma hominis и Ureaplasma urealyticum судят о наличии этих микроорганизмов. Указанный способ является прототипом
по отношению к заявляемому способу [1].
Общим признаком для заявляемого способа и прототипа является определение Chlamydia trachomatis, Mycoplasma hominis и Ureaplasma urealyticum в исследуемом матерале
из уретры и цервикального канала путем осуществления полимеразной цепной реакции с
электрофоретическим разделением продуктов амплификации.
Однако указанный способ обладает следующим недостатком:
из-за того, что этап электрофореза не дает возможности получить конечный продукт
анализа и не позволяет четко интерпретировать полученные данные, возникает двойственность в оценке результатов, что искажается точность определения.
Задачей заявляемого способа является повышение точности определения.
Поставленная задача достигается следующим способом.
Предложен способ определения возбудителей урогенитальных инфекций, выбранных
из группы Chlamydia trachomatis, Mycoplasma hominis и Ureaplasma urealyticum, включающий выделение ДНК возбудителя из биологической пробы, проведение полимеразной
цепной реакции и электрофоретическое разделение продуктов амплификации, при этом
при выделении фрагментов ДНК с молекулярной массой от 35000 до 40000 относительных единиц размером 465-475 пар нуклеотидов с интенсивностью свечения 70-90 относительных единиц судят о наличии в биологической пробе Chlamydia trachomatis, при выделении фрагментов ДНК с молекулярной массой от 75000 до 80000 относительных единиц
размером 950-960 пар нуклеотидов с интенсивностью свечения 110-130 относительных
единиц - о наличии Mycoplasma hominis, а выделение фрагментов ДНК с молекулярной
массой от 52000 до 57000 относительных единиц размером 650-660 пар нуклеотидов с интенсивностью свечения 60-80 относительных единиц - о наличии Ureaplasma urealyticum.
Поскольку структура ДНК каждого микроорганизма индивидуальна, то получение
молекулярных характеристик фрагментов ДНК возбудителей в процессе синтеза и сравнение с данными контрольных образцов, дает возможность исключить двойственность в
интерпретации полученных характеристик возбудителя в исследуемом материале.
Пример 1.
Необходимо установить этиологию инфекционного процесса урогенитального тракта
у пациента А. с клиническим диагнозом - "эндоцервицит, эрозия шейки матки".
Выделение ДНК из всех биологических проб проводят сорбентным методом (адсорбция ДНК на частицах двуокиси кремния в присутствии гуанидинатиоционата натрия). Условия синтеза ДНК соответствуют рекомендациям производителя тест-системы. Полученные ампликоны разгоняют электрическим током при электрофорезе с фиксированным
напряжением 150 В "Эльф-2" (ДНК-технология) в 1,5 % агарозном геле, содержащем 1 %
бромистый этидий в течение 30 мин при напряжении 10 В/см. Анализ результатов проводят с использованием трансиллюминатора Н-2 ("Петротерм", Россия) с применением видеосистемы для регистрации гелей "Gel-Imager" ("Петротерм", Россия) с помощью программы "Gel Exploer" версия 1,0 на базе компьютера Intel Pentium-4.
Идентификацию ПЦР-результатов проводят по следующим критериям:
выявление в биологических пробах специфического ПЦР-продукта;
соответствие размера ДНК-продукта в клиническом образце размеру ДНК-продукту
контрольной пробы;
соответствие молекулярной массы ДНК-продукта в клиническом образце размеру
ДНК-продукту контрольной пробы;
соответствие интенсивности свечения ДНК-продукта в клиническом образце размеру
ДНК-продукту контрольной пробы.
2
BY 7967 C1 2006.04.30
При анализе биологические пробы считаются положительными, если:
молекулярные характеристики ДНК-продукта в клиническом образце соответствует
молекулярным характеристикам ДНК-продукта контрольной пробы.
Результаты анализа биологического материала от пациентов считаются отрицательными, если:
в пробе, содержащей клинический образец, специфических ДНК-продуктов не обнаружено или он выявлен, но его молекулярные характеристики ДНК не соответствуют молекулярным характеристикам фрагмента молекулы контрольной ДНК возбудителя.
Фрагмент контрольной ДНК Chlamydia trachomatis имеет размер 470 пар нуклеотидов
с интенсивностью свечения 79 относительных единиц и молекулярной массой 38786,0 относительных единиц; фрагмент контрольной ДНК Mycoplasma hominis - 956 пар нуклеотидов с интенсивностью свечения 120 относительных единиц и молекулярной массой
77715,0 относительных единиц; фрагмент контрольной ДНК для Ureaplasma urealyticum 654 пар нуклеотидов с интенсивностью свечения 80 относительных единиц и молекулярной массой 55384,0 относительных единиц.
В табл. 1 представлены молекулярные характеристики контрольных ДНК Chlamydia
trachomatis, Mycoplasma hominis и Ureaplasma urealyticum, где указаны их молекулярная
масса, размер - число пар нуклеотидов и интенсивность свечения.
В табл. 2 представлены молекулярные характеристики фрагмента молекулы ДНК по
заявляемому способу в пробе № 1 от пациента А. с клиническим диагнозом - "эндоцервицит, эрозия шейки матки" - молекулярная масса составила 39012 относительных единиц,
размер 470 пар нуклеотидов и интенсивность свечения 82 относительных единиц, из которых видно, что у пациента А. в исследуемом материале выявлена ДНК Chlamydia trachomatis.
Пример 2.
Необходимо установить этиологию инфекционного процесса урогенитального тракта
у пациента В. с клиническим диагнозом "хронический неспецифический уретрит".
Аналогичным образом, как в примере 1, определяют молекулярные характеристики
фрагмента ДНК в исследуемом материале у пациента В. с клиническим диагнозом "хронический неспецифический уретрит" - проба № 2.
В табл. 2 представлены молекулярные характеристики фрагмента молекулы ДНК по
заявляемому способу в пробе № 2 от пациента В. с клиническим диагнозом - "хронический неспецифический уретрит" - молекулярная масса составила 78430 относительных
единиц о.е., размер 956 пар нуклеотидов и интенсивность свечения 126 относительных
единиц, из которых видно, что у пациента В. в исследуемом материале выявлена ДНК
Mycoplasma hominis.
Пример 3.
Необходимо установить этиологию инфекционного процесса урогенитального тракта
у пациента С. с клиническим диагнозом - "эндоцервицит".
Аналогичным образом, как в примере 1, определяют молекулярные характеристики
фрагмента ДНК в исследуемом материале у пациента С. с клиническим диагнозом "эндоцервицит" - проба № 3.
В табл. 2 представлены молекулярные характеристики фрагмента молекулы ДНК по
заявляемому способу в пробе № 3 от пациента С. с клиническим диагнозом - "эндоцервицит" - молекулярная масса составила 56216 относительных единиц, размер 654 пар нуклеотидов и интенсивность свечения 68 относительных единиц, из которых видно, что у
пациента С. в исследуемом материале выявлена ДНК Ureaplasma urealyticum.
Таким образом, по сравнению с прототипом заявляемый способ позволяет получить
следующие преимущества:
3
BY 7967 C1 2006.04.30
Таблица 1
Молекулярные характеристики контрольных ДНК Chlamydia trachomatis,
Mycoplasma hominis и Ureaplasma urealyticum - молекулярная масса, размер - число
пар нуклеотидов и интенсивность свечения
Полосы фрагментов
ДНК микроор.
К+
К-
молекулярная масса
+
--
число пар нуклеоти+
-дов
интенсивность све+
-чения
Интерпретация
методика
анализа соблюдена
ДНК Chlamydia ДНК Mycoplasma ДНК Ureaplasma
trachomatis
hominis
urealyticum
от 35000 до
от 75000 до
от 52000 до
40000 о.е.
80000 о.е.
57000 о.е.
465-475
950-960
650-660
70-90 о.е.
110-130 о.е.
60-80 о.е.
присутствие
Chlamydia trachomatis
присутствие My- присутствие
coplasma hominis Ureaplasma urealyticum
Таблица 2
Молекулярные характеристики фрагментов ДНК в исследуемых пробах № 1, № 2,
№ 3 - молекулярная масса, размер - число пар нуклеотидов и интенсивность свечения
Характеристики
Проба 1
Проба 2
Проба 3
фрагмента ДНК
Количество н.п.
470
956
654
Молекулярная масса
39012,0 о.е.
78430,0 о. е.
56216,0 о.е.
Интенсивность
82 о.е.
126 о.е.
68 о.е.
свечения
Интерпретация
присутствие Chlamy- присутствие Myприсутствие Ureadia trachomatis
coplasma hominis
plasma urealyticum
обеспечивает повышение чувствительности и двойной контроль качества за счет того, что
он дает возможность оценивать специфический фрагмент ДНК по размеру, интенсивности
свечения и молекулярной массе, что снижает возможность ошибки в интерпретации результатов полимеразной цепной реакции при установлении этиологии заболевания.
Источники информации:
1. Lars Stergaard et al. J. of Clinical Microbiology. - 1990. - V. 28. - № 6. - P. 1254-1260.
2. Лопухов Л.В. и др. Клиническая микробиология и антибактериальная химиотерапия. - 2000. - Т. 2. - № 3. - С. 96-105.
3. Щербо С.Н. и др. Клиническая лабораторная диагностика. - 1998. - № 2. - С. 21-24.
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
4
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
1
Размер файла
97 Кб
Теги
by7967, патент
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа