close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY8112

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
BY (11) 8112
(13) C1
(19)
(46) 2006.06.30
(12)
7
(51) G 01N 33/00,
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
СПОСОБ ОЦЕНКИ УСТОЙЧИВОСТИ ЗЕРНОВЫХ КУЛЬТУР К
ПОВЫШЕННОМУ СОДЕРЖАНИЮ ИОНОВ АЛЮМИНИЯ В ПОЧВЕ
(21) Номер заявки: a 20010971
(22) 2001.11.20
(43) 2003.06.30
(71) Заявитель: Государственное научное
учреждение "Институт экспериментальной ботаники имени В.Ф. Купревича Национальной академии
наук Беларуси" (BY)
(72) Авторы: Домаш Валентина Иосифовна; Пелагейчик Тамара Яковлевна;
Ермолицкая Людмила Васильевна;
Ходорцова Лилия Федоровна; Янчевская Тамара Георгиевна; Вербицкая Надежда Александровна (BY)
BY 8112 C1 2006.06.30
A 01H 1/04
(73) Патентообладатель: Государственное научное учреждение "Институт экспериментальной ботаники имени В. Ф. Купревича Национальной академии наук
Беларуси" (BY)
(56) RU 2078499 C1, 1997.
RU 2005349 C1, 1994.
RU 2068635 C1, 1996.
RU 2073422 C1, 1997.
RU 2138154 C1, 1999.
(57)
Способ оценки устойчивости зерновых культур к повышенному содержанию ионов
алюминия в почве, отличающийся тем, что в качестве показателя используют активность
протеолитического фермента Nα-бензоил-DL-аргинин-п-нитроанилидазы, которую определяют в надосадочной жидкости, полученной центрифугированием экстракта размолотого зерна зрелых культур 1/15 М фосфатным буфером при рН 8,5, и рассчитывают по
формуле:
∆Д × V × 1000
ЕА =
,
0,5 × н
где ЕА - активность фермента;
∆Д - разность экстинкций опытной и контрольной пробы;
V - объем пробы;
н - навеска размолотого зерна, г абсолютно сухой массы,
при этом если активность протеолитического фермента в зрелом зерне составляет 50 и
более единиц, то зерновую культуру относят к устойчивым к повышенному содержанию
ионов алюминия в почве.
Изобретение относится к сельскому хозяйству, а именно к селекции зерновых культур
и может быть использовано для отбора устойчивых к действию алюминия образцов ячменя и озимого тритикале.
Известен способ определения устойчивости зерновых культур к повышенному содержанию ионов алюминия, включающий вычисление коэффициента редукции поглотительной функции корневой системы растений. Оценивают устойчивость ячменя к
BY 8112 C1 2006.06.30
повышенному содержанию ионов алюминия с учетом полученного коэффициента. Известный способ осуществляется путем проращивания семян и помещения их в водный
питательный раствор, содержащий ионы алюминия в качестве абиотического фактора, и
в процессе выращивания определяют изменение водопоглощающей активности корневой системы путем ежедневного взвешивания сосудов с растениями в питательном растворе [1].
Недостатком способа является его длительность и трудоемкость, которые имеют место при физиологических методах исследований.
Задачей настоящего изобретения является разработка способа, снижающего трудоемкость и длительность оценки устойчивости зерновых культур к повышенному содержанию ионов алюминия в почве.
Поставленная задача достигается тем, что в способе оценки устойчивости зерновых
культур к повышенному содержанию ионов алюминия в почве в качестве показателя
используют активность протеолитического фермента Nα-бензоил-DL-аргинин-пнитроанилидазы, которую определяют в надосадочной жидкости, полученной центрифугированием экстракта размолотого зерна зрелых культур 1/15 М фосфатным буфером при
рН 8,5, и рассчитывают по формуле:
∆Д × V × 1000
,
EA =
0,5 × н
где ЕА - единица активности;
∆Д - разность экстинкций опытной и контрольной пробы;
V - объем пробы;
н - навеска размолотого зерна, г абсолютно сухой массы,
при этом если активность протеолитического фермента в зрелом зерне составляет 50 и
более единиц, то зерновую культуру относят к устойчивым к повышенному содержанию
ионов алюминия в почве.
Способ осуществляется следующим образом.
Зерно исследуемых культур измельчают, отвешивают определенную навеску, экстрагируют ее 1/15 М фосфатным буфером, рН 8,5. Смесь встряхивают в течение часа, центрифугируют и получают надосадочную жидкость, в которой определяют активность
фермента Nα-бензоил-DL-аргинин-п-нитроанилидазы следующим образом. В три пробирки (трехкратная повторность) вносят по 1 мл фосфатного буфера 1/15 М, рН 8,5, 0,5 мл
надосадочной жидкости 1 мл 2,3 мМ раствора Nα-бензоил-DL-аргинин-п-нитроанилида.
Затем проводят инкубирование смеси при 37 °С в течение 30 мин. Реакцию останавливают
0,5 мл 30 %-ной уксусной кислоты. В контрольные пробирки после добавления надосадочной жидкости вносят 0,5 мл уксусной кислоты, затем добавляют 1 мл фосфатного буфера и 1 мл Nα-бензоил-DL-аргинин-п-нитроанилида. После этого измеряют поглощение
при 405 нм опытных пробирок против контрольных. Активность фермента (в единицах
активности, ЕА) вычисляют по формуле:
∆Д × V × 1000
,
EA =
0,5 × н
где ЕА - единица активности фермента,
∆Д - разность экстинкций опытной и контрольной пробы;
V - объем пробы;
н - навеска размолотого зерна, г абсолютно сухой массы.
Исследования проводили с зерном различных сортов ячменя.
Пример 1.
Зерно ячменя измельчают и берут навеску 200 мг, на холоду извлекают фермент
1/15 М фосфатным буфером, рН,85, центрифугируют и получают надосадочную жидкость, в которой определяют активность фермента вышеописанным способом.
2
BY 8112 C1 2006.06.30
В табл. 1 и 2 приведены сравнительные данные с прототипом, где индекс устойчивости определяли по известному способу - путем выращивания растений на фильтровальной
бумаге.
Получают следующие данные.
Таблица 1
Индекс
№ пп.
Сорта ячменя
ЕА/г абс.сух.массы
устойчивости (К)
1
Карина
43,57 ± 0,25
0,40
2
Эльгина
45,62 ± 0,12
0,42
3
Зазерский
44,50 ± 0,38
0,47
4
Надя
50,80 ± 0,76
0,51
Неустойчивые
ср. 46,12 ± 0,38
ср. 0,45
5
Московский
82,00 ± 0,43
0,76
6
Джюгай
76,70 ± 0,96
0,69
7
Рамона
77,74 ± 1,20
0,75
8
Эффенди
78,56 ± 0,97
0,80
Устойчивые
ср. 78,75 ± 0,89
ср. 0,75
Если активность протеолитического фермента в зрелом зерне ячменя в составляет 50 и
более единиц, то зерновую культуру относят к устойчивым к повышенному содержанию
ионов алюминия в почве.
Пример 2.
Проводят экстракцию и определение активности фермента из зерна озимого тритикале
как было указано выше.
Получают следующие данные.
Таблица 2
№ пп
Сортообразцы тритикале
ЕА/г абс.сух.массы
Индекс устойчивости
1
Уго х Авродата
27,54 ± 0,13
0,48
2
Т 441х Армадилло
24,16 ± 0,02
0,49
3
Авролата
38,17 ± 0,89
0,51
4
Уго
25,49 ± 0,02
0,54
5
Модуль
31,50 ± 1,26
0,56
6
Альмо
26,52 ± 0,21
0,60
Неустойчивые
ср. 29,30 ± 0,46
ср. 0,53
7
Альмо х Авролата
51,12 ± 0,97
0,70
8
Аврозис
53,98 ± 1,63
0,74
9
Мально
53,69 ± 0,13
0,78
10
Авродата
60,85 ± 0,62
0,81
11
Мально х Авролата
63,25 ± 1,06
0,81
12
Модуль х Аврозис
55,18 ± 0,84
0,83
Устойчивые
ср. 56,35 ± 0,87
ср. 0,78
Если активность протеолитического фермента в зрелом зерне тритикале составляет 50
и более единиц, то зерновую культуру относят к устойчивым к повышенному содержанию
ионов алюминия в почве.
Анализируя данные табл. 1 и 2 можно видеть, что активность (ЕА) протеолитического
фермента Nα-бензоил-DL-аргинин-п-нитроанилидазы в различных по устойчивости сортах ячменя и тритикале тесно коррелирует с индексом устойчивости. Коэффициент корреляции (r) равен 0,98 и 0,92 соответственно.
3
BY 8112 C1 2006.06.30
Таким образом, предлагаемый способ оценки устойчивости зерновых культур к повышенному содержанию ионов алюминия в почве позволяет оценить большое количество
образцов за короткий промежуток времени (20 образцов в трехкратной повторности за 8часовой рабочий день). Для определения требуется незначительное количество материала
(200 мг). Способ прост в исполнении, не требует дефицитных, а также вредных для здоровья реактивов.
Источники информации:
1. RU 2078499 С1, 1997.
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
4
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
88 Кб
Теги
by8112, патент
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа