close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY8186

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
BY (11) 8186
(13) C1
(19)
(46) 2006.06.30
(12)
7
(51) C 07C 237/22
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ Nα-БЕНЗОИЛ-DL-АРГИНИЛп-НИТРОАНИЛИДА ГИДРОХЛОРИДА
(21) Номер заявки: a 20031004
(22) 2003.11.05
(43) 2005.06.30
(71) Заявитель: Государственное научное учреждение "Институт биоорганической химии Национальной
академии наук Беларуси" (BY)
(72) Авторы: Голубович Владимир Петрович; Мартинович Вера Павловна;
Поликарпова Валентина Ивановна;
Евстигнеева Елена Борисовна; Чемитова Лилия Михайловна (BY)
(73) Патентообладатель: Государственное
научное учреждение "Институт биоорганической химии Национальной академии наук Беларуси" (BY)
(56) Методы получения химических реактивов и препаратов. - М., 1965. - Вып. 13. С. 76-79.
TUPPY H. u.a. Hoppe-Seyler‫׳‬s Z.
Physiol. Chem., 1962, b.329/15, s. 281.
ERLANGER B.F. et al. Arch. Biochem.
Biophys., 1961, vol. 95, № 2, p. 271-278.
US 3412150, 1968.
NISHI N. et al. Bull. Chem. Soc. Japan,
1970, vol. 43, № 9, p. 2900-2907.
SU 928763 A, 1983.
US 4564695, 1986.
BY 8186 C1 2006.06.30
(57)
Способ получения Nα-бензоил-DL-аргинил-п-нитроанилида гидрохлорида, включающий бензоилирование DL-аргинина хлористым бензоилом в водно-диоксановой среде с
получением Nα-бензоил-DL-аргинина гидрохлорида, который затем подвергают взаимодействию с п-нитроанилином в диметилформамиде с добавлением пиридина до pH 7-8
при использовании дициклогексилкарбодиимида в качестве конденсирующего агента.
Изобретение относится к области биоорганической химии и медицины, а именно, к
способу получения Nα-бензоил-DL-аргинил-п-нитроанилида гидрохлорида (DL-BAPNA).
Это соединение представляет собой субстрат сериновых протеиназ и находит широкое
применение для количественного определения их содержания и протеолитической активности, в том числе для количественного определения в плазме крови таких сериновых
протеиназ и их ингибиторов, как α1-антитрипсин и α2-макроглобулин, которые определяют уровень протеолитической активности и ингибиторный потенциал крови.
Известен способ получения DL-BAPNA с использованием Nα-бензоил-Nω-нитро-Lаргинина и п-нитрофенилизоцианата [1]. Этот способ многостадиен, так как включает
стадии введения Nω-защиты и ее отщепления, для получения п-нитрофенилизоцианата используется весьма токсичное соединение - фосген, а при отщеплении нитрогруппы применяют агрессивный и токсичный фтористый водород [1].
Известны способы синтеза DL-BAPNA, в которых используется Nα-бензоилпроизводные аргинина без защиты гуанидиновой функции ковалентно связанными с ней
BY 8186 C1 2006.06.30
защитными группами. DL-BAPNA был впервые получен конденсацией Nα-бензоил-DLаргинина гидрохлорида с п-нитроанилином в диэтилфосфине в присутствии 85 %-ной
фосфорной кислоты и пятиокиси фосфора и три-п-бутиламина [2]. Главным недостатком
метода является использование высокотоксичного соединения фосфора - диэтилфосфина.
Кроме того, при синтезе образуются еще более высокотоксичные фосфины. Разновидностью этого способа является получение DL-BAPNA с использованием полиэфиров фосфорной кислоты, состоящее из 2 стадий - получения Nα-бензоил-DL-аргинина гидрохлорида и получения DL-BAPNA [3]. Получение Nα-бензоил-DL-аргинина гидрохлорида
ведут в присутствии Na2CO3, полученную натриевую соль Nα-бензоил-DL-аргинина переводят в гидрохлорид добавлением раствора соляной кислоты. DL-BAPNA получают конденсацией Nα-бензоил-DL-аргинина гидрохлорида с п-нитроанилином в присутствии
этилового эфира полифосфорной кислоты. Это соединение не является распространенным
реагентом, его необходимо получать в ходе синтеза из пятиокиси фосфора и этилового
эфира в присутствии хлороформа, что удлиняет синтез на дополнительную стадию. Этиловый эфир полифосфорной кислоты и образующиеся в качестве побочных продуктов
синтеза фосфорорганические соединения также являются токсичными веществами. Выходы соединений относительно невысоки и составляют 50-55 % на стадии получения
Nα-бензоил-DL-аргинина гидрохлорида и 55 % при получении DL-BAPNA.
Несколько п-нитроанилидов Nα-производных аргинина получены при помощи универсального конденсирующего реагента, используемого в современной химии аминокислот и
пептидов - дициклогексилкарбодиимида [4]. При их синтезе гуанидиновая группа аргинина
блокировалась тозильной или нитрозащитой, что приводило к увеличению числа стадий
синтеза. Для получения DL-BAPNA авторы [4] этот способ не использовали.
Задачей изобретения является разработка способа синтеза DL-BAPNA, который позволяет получить это соединение из доступных и недорогих исходных соединений при минимальном числе синтетических стадий, протекающих с высокими выходами синтезируемых
продуктов. Задача решается проведением синтеза DL-BAPNA в две стадии, первая из которых представляет собой получение Nα-бензоил-DL-аргинина гидрохлорида путем бензоилирования DL-аргинина хлористым бензоилом в водно-диоксановой среде, а вторая конденсацию полученного Nα-бензоил-DL-аргинина гидрохлорида с п-нитроанилином при
использовании дициклогексилкарбодиимида в качестве конденсирующего агента. Блокирование реакционной способности гуанидиновой группы происходит здесь протонированием
за счет хлористого водорода Nα-бензоил-DL-аргинина гидрохлорида. В первой стадии
синтеза используют полуторакратный избыток хлористого бензоила, который добавляют в
виде диоксанового раствора к суспензии DL-аргинина в воде. Nα-бензоил-DL-аргинина гидрохлорид получают с высоким выходом (91-95 %), и он не требует специальных очисток,
кроме промывок и переосаждения. Стадию конденсации Nα-бензоил-DL-аргинина гидрохлорида и п-нитроанилина проводят в диметилформамидном растворе при рН 7-8, который
устанавливают добавлением к раствору Nα-бензоил-DL-аргинина гидрохлорида нескольких
капель пиридина. Реакцию проводят при комнатной температуре, дициклогексилкарбодиимид добавляют небольшими порциями в течение пяти минут. Интенсивное перемешивание
реакционной смеси проводят в течение 14-16 часов при комнатной температуре. Для выделения и очистки DL-BAPNA после отделения дициклогексилмочевины фильтрованием к
диметилформамидному раствору добавляют эфир. Выпавший в осадок целевой продукт,
загрязненный примесями исходных соединений, промывают водой и сушат в вакууме до
постоянного веса. Водные промывки помогают отделить и Nα-бензоил-DL-аргинин и пнитроанилин, целевое соединение - DL-BAPNA получают хроматографически чистым, с
константами, соответствующими литературным [2, 3].
Пример 1. Получение Nα-бензоил-DL-аргинина гидрохлорида.
2
BY 8186 C1 2006.06.30
К 3,48 г (20 ммоль) DL-аргинина прибавляют 6 мл воды и к перемешиваемой суспензии
небольшими порциями приливают раствор 3,48 мл (30 ммоль) хлористого бензоила в 10 мл
диоксана. Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1,5 часа, затем упаривают в вакууме при температуре не выше 45 °С до полной отгонки растворителей. Остаток - прозрачное густое масло - промывают декантацией смесью ацетон-эфир
1:1, эфиром и растворяют в 8 мл метанола. К метанольному раствору прибавляют 10 мл
ацетона, 0,5 мл концентрированной соляной кислоты и 10 мл ацетона, спустя 5 минут 30 мл эфира и оставляют на 3 часа при 0-3 °С. Выпавший осадок отделяют фильтрованием,
промывают на фильтре эфиром и сушат в вакууме над Р2О5 до постоянного веса.
Получают 5,79 г (92 %) Nα-бензоил-DL-аргинина гидрохлорида в виде белого кристаллического порошка. Т.пл. 263-265 °С. Rf 0,37 (н-бутанол-уксусная кислота-водаэтилацетат 4:1:1:1), 0,41 (ацетон-метанол-уксусная кислота 4:2:1). (Б).
Лит.[3]: Т.пл. 265 °С.
Пример 2. Получение Nα-бензоил-DL-аргинил-п-нитроанилида гидрохлорида.
4, 72 г (15 ммоль) Nα-бензоил-DL-аргинина гидрохлорида растворяют при перемешивании в 15 мл диметилформамида и добавлением каплями 0,31 мл пиридина устанавливают рН 7-8, контролируя кислотность раствора лакмусовой бумажкой. К полученному
раствору прибавляют 2,11 г (15,3 ммоль) п-нитроанилина и после его растворения при интенсивном перемешивании небольшими порциями присыпают 3,24 г (15,7 ммоль) дициклогексилкарбодиимида, при этом наблюдают разогрев реакционной смеси и образование
осадка дициклогексилмочевины. Реакционную смесь перемешивают в течение 15 часов,
затем отделяют фильтрованием осадок дициклогексилмочевины, к фильтрату прибавляют
40 мл эфира. Выпавшее желтое масло кристаллизуется при стоянии в течение двух часов.
Кристаллический осадок отделяют фильтрованием, промывают эфиром и сушат в вакууме
в течение 1 часа. Подсушенный осадок суспендируют в 10 мл воды, переносят на фильтр,
промывают водой (3 × 4 мл) и высушивают в вакууме над Р2О5 до постоянного веса. Получают 4,96 г (76 %) Nα-бензоил-DL-аргинина-п-нитроанилида гидрохлорида в виде
белого кристаллического порошка с желтоватым оттенком. Т.пл. 263-267 °С. Rf 0,61
(н-бутанол-уксусная кислота-вода-этилацетат 4:1:1:1), 0,72 (ацетон-метанол-уксусная кислота 4:2:1). На ИК-спектре присутствует карбонильная полоса (амид I) - 1630 см-1 и полоса гуанидиновой группы - 1660 см-1. Элементный состав соответствует формуле
C19H23N6O4Cl. Найдено: С 52,50 %, Н 5,37 %, N 19,27 %, Сl 8,30 %. Вычислено: С 52,47 %,
Н 5,33 %, N 19,31 %, Сl 8,16 %.
Лит.: Т.пл. 262-263 °С [2]; Т.пл. 262 °С [1].
Источники информации:
1. Nishi N., Tokura S., Noguchi G. The synthesis of benzoyl-L-arginine-P-nitroanilide. Bull.
Chem. Soc. of Japan. Vol. 43, No 9, p. 2900-2907 (1973).
2. Erlander B.F., Kokowski K., Cowen W. Arch. Biochem. Biophys. Vol. 95, No 92, p. 271278 (1961).
3. Башкир Э.А., Лапук Я.И., Степанов В.М. Методы получения хим. реактивов и препаратов. Вып. 13. - С. 76-79 (1965).
4. Pat. USA N4564695. 14.09.1984.
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
3
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
74 Кб
Теги
by8186, патент
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа