close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY8338

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
BY (11) 8338
(13) C1
(19)
(46) 2006.08.30
(12)
7
(51) G 01N 21/64
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
СПОСОБ ФЛУОРИМЕТРИЧЕСКОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ
РИБОФЛАВИНА В КОРМАХ, ПРОДОВОЛЬСТВЕННОМ СЫРЬЕ
ИЛИ ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТАХ
BY 8338 C1 2006.08.30
(21) Номер заявки: a 20030847
(22) 2003.09.03
(43) 2005.03.30
(71) Заявитель: Государственное учреждение "Республиканский научно-практический центр гигиены" (BY)
(72) Авторы: Шуляковская Ольга Васильевна; Белышева Людмила Леонидовна; Застенская Ирина Алексеевна;
Воронцова Ольга Сергеевна (BY)
(73) Патентообладатель: Государственное
учреждение "Республиканский научно-практический центр гигиены" (BY)
(56) Руководство по методам анализа качества и безопасности пищевых продуктов. - М. Брандес, Медицина, 1998. С. 156-161.
Витамины. - Киев: Издательство Академии наук УССР, 1953. - С. 51-57.
Экспериментальная витаминология. Мн.: Наука и техника, 1979. - С. 224-251.
ГОСТ 30627.6-98. Продукты молочные
для детского питания. Метод измерений
массовой доли витамина В2 (рибофлавина).
(57)
Способ флуориметрического определения рибофлавина в кормах, продовольственном
сырье или пищевых продуктах, включающий кислотный и ферментативный гидролиз исследуемого образца, экстракционную очистку гидролизата от примесей, облучение рибофлавина в люмифлавин в щелочной среде, экстракцию люмифлавина, измерение
интенсивности флюоресценции люмифлавина в сравнении со стандартным раствором и
вычисление содержания рибофлавина, отличающийся тем, что в качестве фермента для
ферментативного гидролиза используют такадиастазу.
Изобретение относится к медицине, к разделу лабораторной диагностики, а также
сельскому хозяйству и пищевой промышленности.
Известен способ определения рибофлавина в молочных продуктах для детского питания путем кислотного гидролиза исследуемых образцов с их последующей ферментацией
ферментами амилоризином или пектофоэтидином, очисткой фильтрата от примесей и щелочного облучения фильтрата для перевода рибофлавина в люмифлавин, экстракции люмифлавина и измерении интенсивности флюоресценции последнего [1]. Способ является
аналогом по отношению к заявляемому.
Однако указанный способ имеет недостатки. Во-первых, ограничено определением
тиамина только в молочных продуктах. Во-вторых, ферментный гидролиз проводится в
течение 14-16 ч, что удлиняет время определения.
BY 8338 C1 2006.08.30
Известен способ флуориметрического определения рибофлавина в пищевых продуктах путем проведения кислотного и ферментативного гидролиза, экстракционной очистки
полученного гидролизата от соединений, мешающих флуориметрическому определению,
щелочного облучения рибофлавина в люмифлавин, экстракции люмифлавина и измерения
интенсивности флюоресценции люмифлавина в сравнении со стандартным раствором с
помощью флуориметра [2].
Указанный способ является прототипом по отношению к заявляемому. Однако к недостаткам известного способа относится длительное время проведения ферментативного
гидролиза (14-16 ч), что усложняет определение рибофлавина (удлиняет время анализа,
увеличивает расход электроэнергии и трудозатраты).
Задачей заявляемого изобретения является сокращение времени ферментативного гидролиза.
Поставленная задача достигается следующим образом.
Представлен способ флуориметрического определения рибофлавина в кормах, продовольственном сырье или пищевых продуктах, включающий кислотный и ферментативный
гидролиз исследуемого образца, экстракционную очистку гидролизата от примесей, облучение рибофлавина в люмифлавин в щелочной среде, экстракцию люмифлавина, измерение интенсивности флюоресценции люмифлавина в сравнении со стандартным раствором
и вычисление содержания рибофлавина, при этом в качестве фермента для ферментативного гидролиза используют такадиастазу.
Пример 1.
Определение рибофлавина (витамина В2) в пищевых продуктах.
1. Кислотный гидролиз.
Навеску продукта 6,0-8,0 г помещают в колбу вместимостью 250 см3 и приливают 150 см3
соляной кислоты концентрацией 0,1 моль/дм3.
Гидролиз осуществляют на кипящей водяной бане в течение 40 мин. По окончании
гидролиза колбу с содержимым охлаждают до температуры 18-25 °С, добавляют 5-7 см3
насыщенного раствора натрия уксуснокислого и 1 см3 толуола.
2. Ферментативный гидролиз.
К полученной по п. 1 смеси добавляют 5 см3 2 %-ного раствора такадиастазы и помещают в термостат, где выдерживают 3 ч при температуре (50 ± 1) °С. После этого гидролизат охлаждают до 18-25 °С.
3. Очистка гидролизата.
Полученный по п. 2 гидролизат переносят в мерную колбу вместимостью 250 см3, доводят до метки дистиллированной водой и фильтруют.
К 100 см3 полученного фильтрата добавляют 2 см3 раствора серной кислоты концентрацией 0,3 г/см3 и с помощью пипетки или бюретки по каплям раствор марганцевокислого
калия концентрацией 0,03 г/см3 до получения малинового окрашивания. Избыток марганцевокислого калия удаляют добавлением по каплям раствора перекиси водорода, количество растворов серной кислоты, марганцевокислого калия и перекиси водорода (в см3)
приплюсовывают к первоначальному объему фильтрата, взятого на окисление. Полученный
раствор переносят в делительную воронку, добавляют 30-50 см3 хлороформа и встряхивают в течение 1 мин. После разделения слоев хлороформенный слой (нижний) отбрасывают, а водную фазу используют для дальнейшего определения.
Аналогично готовят контрольную пробу на содержание рибофлавина в такадиастазе,
используя то же количество ферментного препарата и реактивов, но без исследуемой пробы.
4. Облучение рибофлавина в щелочной среде.
Облучение рибофлавина в щелочной среде проводят в 5 конических колбах с притертыми пробками.
В 4 колбы наливают по 20 см3 очищенного гидролизата, в две из которых добавляют
по 2 см3 рабочего стандартного раствора рибофлавина концентрацией 1 мкг/см3.
2
BY 8338 C1 2006.08.30
В 5-ю колбу наливают 20 см3 контрольной пробы.
Во все 5 колб добавляют по 4 см3 раствора гидроокиси натрия концентрацией 7 моль/дм3,
закрывают колбы пробками, перемешивают содержимое и облучают их светом двух светильников с лампами накаливания по 100 Вт каждая с расстояния 30 см в течение 40 мин.
Температура окружающего воздуха должна быть не более 25 °С. Для поддерживания
указанной температуры воздуха используют настольный вентилятор.
5. Экстракция.
Сразу же после окончания облучения растворы во всех колбах подкисляют 4 см3 ледяной уксусной кислоты, добавляют к ним по 20 см3 хлороформа, закрывают притертыми
пробками и встряхивают в течение 2 мин, избегая образования эмульсий. Затем все колбы
оставляют на 10-15 мин для расслоения водной и хлороформенной фаз. После этого пипеткой отбирают по 10-12 см3 хлороформенного раствора (нижний слой), который фильтруют через бумажный фильтр с безводным сульфатом натрия в флуориметрические
пробирки.
6. Измерение интенсивности флюоресценции люмифлавина.
Интенсивность флюоресценции люмифлавина измеряют при светофильтрах, дающих
диапазон длины волн возбуждения в области 350-480 нм и флюоресценции - 475-650 нм.
Контролем служит хлороформ.
7. Обработка результатов.
Содержание рибофлавина (X) в мг на 100 г продукта вычисляют по формуле:
(A − C) × M × V × V1
X=
,
(B − A) × V2 × M1 × V3 × 10
где А - среднее из показаний флуориметра для испытуемой пробы без добавления стандартного раствора рибофлавина, ед. прибора;
В - среднее из показаний флуориметра для испытуемой пробы с добавлением стандартного раствора рибофлавина, ед. прибора;
С - показание флуориметра для контрольного опыта на реактивы, ед. прибора;
V - общий объем гидролизата, см3;
V1 - объем гидролизата после окисления, см3;
V2 - объем гидролизата, взятый для окисления, см3;
V3 - объем гидролизата, взятый для облучения, см3;
М - масса добавленного рибофлавина, мкг;
M1 - масса пробы продукта, взятой для анализа, г;
10 - пересчет из мкг/г в мг на 100 г продукта.
Вычисления проводят с точностью до третьего десятичного знака с последующим округлением до второго десятичного знака.
За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое значение
(X) результатов двух параллельных определений.
Результаты определения рибофлавина в пищевых продуктах предлагаемым способом
представлены в таблице.
Определение рибофлавина в пищевых продуктах
Способ определения
Известный (по прототипу)
Предлагаемый
Время ферментативного
гидролиза, ч
14-16
3
Выход рибофлавина, %
75
80
Пример 2.
Определение рибофлавина (витамина В2) в кормах.
Определение рибофлавина в кормах проводится аналогично примеру 1.
3
BY 8338 C1 2006.08.30
Пример 3.
Определение рибофлавина (витамина В2) в продовольственном сырье.
Определение рибофлавина в продовольственном сырье проводится аналогично примеру 1.
Таким образом, по сравнению с прототипом заявляемый способ обладает следующими
преимуществами:
сокращает время ферментативного гидролиза в 4-5 раз;
повышает на 5 % точность определения;
заменяет дефицитные ферменты (амилоризин и пектофоэтидин П 10 X), используемые
в прототипе, на такадиастазу.
Источники информации:
1. ГОСТ 30627.6-98 Продукты молочные для детского питания. Метод измерения массовой доли витамина В2 (рибофлавина). Введ. 01.05.2000. - Мн.: Изд-во стандартов, 1999. С. 8 (аналог).
2. Руководство по методам анализа качества и безопасности пищевых продуктов / Под
ред. И.М. Скурихина, В.А. Тутельяна. -М.: Брандес, Медицина, 1998. - С. 156-161 (прототип).
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
4
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
84 Кб
Теги
by8338, патент
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа