close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY8588

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
BY (11) 8588
(13) C1
(19)
(46) 2006.10.30
(12)
7
(51) G 01N 33/49
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОНЦЕНТРАЦИИ ТИРОЗИН- И
ТРИПТОФАН-СОДЕРЖАЩИХ ПЕПТИДОВ В ПЛАЗМЕ КРОВИ
(21) Номер заявки: a 20020839
(22) 2002.10.23
(43) 2004.06.30
(71) Заявитель: Государственное научное
учреждение "Институт биофизики и
клеточной инженерии Национальной академии наук Беларуси" (BY)
(72) Авторы: Гаврилов Виктор Борисович; Лобко Наталья Федоровна;
Гаврилова Алевтина Рудольфовна;
Конев Сергей Васильевич (BY)
(73) Патентообладатель: Государственное
научное учреждение "Институт биофизики и клеточной инженерии Национальной академии наук Беларуси"
(BY)
(56) Осипович В.К. и др. Лабораторное
дело. - 1987. - № 3. - С. 221-224.
RU 2160449 C2, 2000.
RU 2168178 C2, 2001.
Гаврилов В.Б. и др. Клиническая лабораторная диагностика. - 1999. - № 2. С. 13-17.
BY 8588 C1 2006.10.30
(57)
Способ определения концентрации тирозин- и триптофан-содержащих пептидов в
плазме крови, заключающийся в том, что после осаждения белков плазмы хлорной кислотой доводят pH пробы до 13,0-13,1, определяют поглощение пробы при длинах волн 290,
300 и 305 нм и рассчитывают концентрацию тирозин- и триптофан-содержащих пептидов
- ТЗП и ТРП - в плазме крови в ммоль/л по формулам:
ТЗП = 1,62 ∆Д2 - 0,28 ∆Д1 или
ТЗП = 0,33 Д290 - 0,26,
ТРП = 0,25 ∆Д1 - 0,40 ∆Д2,
Спектры УФ-поглощения супернатанта плазмы крови,
полученного после осаждения белков 0,6 М хлорной кислотой,
при разных pH (1 - pH 7,4; 2 - pH 11,0; 3 - pH 13,0)
(Конечное разведение плазмы 15 раз)
Фиг. 1
BY 8588 C1 2006.10.30
где ∆Д1 = Д290 - Д305;
∆Д2 = Д300 - Д305;
Д290, Д300 и Д305 - значения поглощения пробы, измеренные соответственно при 290,
300 и 305 нм и рассчитанные с учетом разведения плазмы.
Изобретение относится к клинической биохимии, а именно к биохимическому анализу
крови и может быть использовано для диагностики синдрома эндогенной интоксикации
при инфекционно-септических, онкологических, эндокринных и травматических заболеваниях.
В настоящее время степень эндогенной интоксикации (ЭИ) организма считают одним
из важных критериев тяжести состояния больных при самых разных заболеваниях. Развитие ЭИ обусловлено образованием и последующим выходом из поврежденной ткани в
кровь различных продуктов катаболизма, обладающих токсическим действием и вызывающих генерализацию локального патологического процесса. Все эндотоксины относятся к соединениям с низким и средним молекулярным весом, не превышающим 5000 Д, для
измерения которых используют депротеинизированную плазму, получаемую путем осаждения белков с помощью трихлоруксусной (ТХУ) или хлорной (XК) кислот. Их принято
разделять на две большие группы - олигопептиды (ОП), образующиеся при протеолизе
белков, и непептидные вещества с низкой и средней молекулярной массой (BHCMM), к
которым относят около 200 соединений нормального и аномального метаболизма (аминокислоты, мочевина, креатинин, билирубин, лактат, фенолы и др.), накапливающихся в
токсичных для организма концентрациях. Оба показателя эндотоксемии при сильной степени интоксикации возрастают в несколько раз.
С целью быстрого и простого определения ОП предложен скрининг-метод, по которому их концентрацию оценивают непосредственно по величине ультрафиолетового (УФ)
поглощения супернатанта (при λ = 254 нм), полученного после осаждения белков 10 %
ТХУ и разведенного в 10 раз дистиллированной водой [1]. Основным недостатком указанного метода является его низкая специфичность, так как в УФ-области помимо пептидов поглощают многие другие органические соединения, содержащиеся в плазме.
Поэтому величину УФ-поглощения Д254 многие авторы оценивают не как концентрацию
ОП, а как интегральный показатель содержания молекул средней массы (MCM) или всех
веществ низкой и средней молекулярной массы (BHCMM).
Прототипом предлагаемого изобретения является способ определения ОП, основанный на осаждении белков хлорной кислотой (HClO4), разведении супернатанта дистиллированной водой и измерении его УФ-поглощения при 210 нм или 280 нм [2]. Длина волны
210 нм соответствует максимуму поглощения пептидной связи, а 280 нм - максимуму поглощения ароматических аминокислот (тирозина, триптофана и фенилаланина). В отличие
от ТХУ хлорная кислота (ХК) не поглощает в ультрафиолетовой области и не влияет на
УФ-поглощение измеряемых проб в области 210-260 нм. Установлено, что значение показателей Д210 и Д280 по сравнению с Д254 значительно лучше коррелирует с содержанием
ОП, измеряемым методом гель-фильтрации. Вместе с тем специфичность указанных показателей остается низкой. Эти показатели не позволяют оценить молярную или массовую
концентрацию ОП и не учитывают вклад побочного поглощения непептидных веществ. В
частности, показатель Д280 характеризует лишь относительное изменение суммарного содержания ароматических остатков аминокислот в олигопептидах по отношению к норме.
Для повышения чувствительности и точности анализа предложен метод, по которому
регистрацию УФ-поглощения депротеинизированной плазмы проводят при рН = 13,0-13,1
и вместо общего показателя оптического поглощения пропорционального суммарной
концентрации ароматических аминокислот, определяют молярные концентрации отдельных пептидных фракций: тирозин- и триптофан-содержащих пептидов (ТЗП и ТРП).
2
BY 8588 C1 2006.10.30
Отличительной сущностью предлагаемого способа определения ТЗП и ТРП в плазме
крови путем осаждения белков плазмы хлорной кислотой и доведения рН пробы до 13,013,1 является определение поглощения пробы при длинах волн 290, 300 и 305 нм и расчет
концентрации тирозин- и триптофан-содержащих пептидов - ТЗП и ТРП - в плазме крови
в ммоль/л по формулам:
ТЗП = 1,62∆Д2 - 0,28∆Д1 или
ТЗП = 0,33Д290 - 0,26,
ТРП = 0,25∆Д1 - 0,40∆Д2,
где ∆Д1 = Д290 - Д305; ∆Д2 = Д300 - Д305; Д290, Д300 и Д305 - значения поглощения пробы, измеренные соответственно при 290, 300 и 305 нм и рассчитанные с учетом разведения
плазмы.
Существенность предлагаемых операций и формул для определения содержания ТЗП
и ТРП подтверждается следующими исследованиями и примерами.
Было обнаружено, что при щелочном сдвиге рН супернатанта плазмы крови происходит увеличение оптической плотности и длинноволновое смещение максимума спектра
поглощения в области 280 нм. Изменение этих показателей достигало максимальных значений при рН = 13,0-13,1, при котором интенсивность поглощения возрастала на 20 % по
сравнению с нейтральным рН, а максимум спектра поглощения сдвигался с 280 до 290 нм
(фиг. 1).
Для объяснения обнаруженного эффекта был проведен анализ поглощения ароматических аминокислот и основных небелковых компонентов плазмы крови в концентрациях,
соответствующих верхней границе их содержания в норме [3, 4] (табл. 1). Известно, что
интенсивность УФ-поглощения при 280 нм падает в ряду триптофан - тирозин - фенилаланин соответственно в 4 и 28 раз [4]. Следовательно, оптический сигнал плазмы крови в
области 280-310 нм может быть представлен суммой поглощения только триптофана и
тирозина, находящихся в виде свободных аминокислот и в составе пептидов. Установлено, что при щелочном рН (предлагаемый метод) по сравнению с нейтральным рН (известный метод) поглощение тирозина (Дтир) возрастает в 1,7 раза, поглощение триптофана
(Дтрп) снижается на 30 %, а суммарное поглощение (Днб) небелковых компонентов
(1,1 г/л глюкозы + 0,5 г/л мочевины + 0,76 мг/л АТФ) падает почти в 2 раза.
Таблица 1
УФ-поглощение супернатанта плазмы крови и ее компонентов
в условиях определения олигопептидов
по известному методу (Д280 нм, рН 6,5)
и предлагаемому методу (Д290 нм, рН 13)
Показатели оптического поглощения компонентов плазмы
Супернатант плазмы, Дпл/мл
Тирозин (18,1 мг/л), Дтир
Триптофан (15,3 мг/л), Дтрп
Ароматические аминокислоты
Дак = Дтир + Дтрп
Небелковые вещества, Днб
Олигопептиды, Доп = Дпл - (Дак + Днб)
Известный
метод (Д1)
1,815
0,079
0,352
Предлагаемый
метод (Д2)
2,175
0,133
0,246
Отношение
Д2/Д1 (%)
119,8
168,4
69,9
0,431
0,379
87,9
0,033
1,351
0,019
1,777
57,6
131,9
При этом собственное поглощение ОП (Доп), вычисленное по разности между поглощением супернатанта плазмы Дпл и суммарным поглощением свободных ароматических
аминокислот и небелковых веществ (Дак + Днб), возрастает в 1,32 раза.
Таким образом, измерение УФ-поглощения при щелочном рН позволяет во-первых,
повысить чувствительность определения за счет резкого рН-зависимого усиления погло3
BY 8588 C1 2006.10.30
щения тирозина и во-вторых, увеличить специфичность анализа в результате существенного снижения поглощения небелковых примесей.
Считая, что концентрация пептидов в плазме крови преобладает по сравнению со свободными аминокислотами, общий тирозин и триптофан мы далее обозначили как тирозин- и триптофан-содержащие пептиды (соответственно ТЗП и ТРП). Количественный
анализ смеси двух соединений по спектру оптического поглощения основан на измерении
поглощения пробы и коэффициентов молярной экстинкции обоих соединений при двух
длинах волн (λ1 и λ2). При этом поглощение проб описывается уравнениями:
(1)
Д1 = εa1Ca + εb1Cb;
(2)
Д2 = εа2Са + εb2Сb,
где Д1 и Д2 - оптическое поглощение пробы при λ1 и λ2, Са и Cb - молярные концентрации
компонентов (А и В), εa1 и εa2 - коэффициенты молярной экстинкции компонента А при λ1
и λ2, εb1 и εb2 - коэффициенты молярной экстинкции компонента В при λ1 и λ2.
Концентрация веществ, входящих в состав смеси, определяют по уравнениям Фирордта [5]:
(3)
Ca = (εb2Д1-εb1Д2)/(εa1εb2-εa2εb1);
(4)
Cb = (εa1Д2-εa2Д1)/(εa1εb2-εa2εb1).
Для вычисления концентраций ТЗП и ТРП, входящих в состав пептидной фракции крови, нами были измерены коэффициенты молярной экстинкции тирозина и триптофана по
растворам этих аминокислот при щелочном рН = 13,0 при 3-х длинах волн: 290 нм, 300 нм
и 305 нм (табл. 2).
Таблица 2
Коэффициенты молярной экстинкции (εε, л/моль-1 см-1)
ароматических аминокислот тирозина и триптофана при рН = 13,0
Аминокислота ε290 (290 нм) ε300 (300 нм) ε305 (305 нм) ∆ε1 = ε290-ε305 ∆ε2 = ε300-ε305
Тирозин (А)
2,58⋅10-3
2,10⋅10-3
1,26⋅10-3
1,32⋅10-3
0,84⋅10-3
Триптофан (В)
6,05⋅10-3
1,55⋅10-3
0,63⋅10-3
5,42⋅10-3
0,92⋅10-3
Подставив численные значения соответствующих коэффициентов, нами были выведены уравнения для определения концентрации ТЗП и ТРП для двух пар длин волн:
1) λ1 = 290 нм и λ2 = 300 нм
ТЗП1 (ммоль/л) = 0,70 Д300 - 0,18 Д290;
(5)
ТРП1 (ммоль/л) = 0,24 Д290 - 0,30 Д300,
где Д290 и Д300 - удельное поглощение на 1 мл плазмы.
2) λ1 = 290 нм и λ2 = 305 нм
ТЗП2 (ммоль/л) = Д305 - 0,11 Д290;
(6)
(7)
ТРП2 (ммоль/л) = 0,21 Д290 - 0,43 Д305.
(8)
Указанные уравнения были использованы для расчета концентрации ТЗП и ТРП по
значениям оптической плотности плазмы крови здоровых доноров (табл. 3).
Очевидно, что при достоверности формул (5-8) концентрации ТЗП и ТРП, измеренные
двумя способами, должны совпадать. Однако значения ТЗП и ТРП, измеренные по первому
способу (по Д290 и Д300), были существенно выше значений, измеренных по второму способу (по Д290 и Д305). Таким образом, уравнения (5-8) дают неверные значения концентраций ТЗП и ТРП, возможно за счет влияния дополнительного фонового поглощения
непептидных компонентов. Чтобы смоделировать влияние фонового поглощения на измеряемые концентрации пептидов, из всех показателей оптического поглощения была вычтена величина фона, принятая за 10 % и 20 % от уровня Д305.
4
BY 8588 C1 2006.10.30
Таблица 3
Концентрации тирозин- и триптофан-содержащих пептидов (ТЗП и ТРП),
вычисленные по формулам (5-8) без и с коррекцией на поглощение фона
Коррекция
Д290
Д300
Д305
ТЗП1,
ТЗП2,
ТРП1,
ТРП2, ТЗП2/ТЗП1,
оптического по(ед/мл) (ед/мл) (ед/мл) ммоль/л ммоль/л ммоль/л ммоль/л
%
глощения
Без коррекции (X1)
4,15
3,27
2,33
1,54
1,87
0,015
-0,13
122 %
Фон (0,1Д305)(Х2)
3,92
3,04
2,1
1,42
1,67
0,029
-0,08
117 %
Фон (0,2Д305)(Х3)
3,68
2,57
1,63
1,14
1,22
0,112
0,07
108 %
Отношение показателей Х3/Х1, %
89 % 79 % 70 %
74 %
65 % 747 %
После коррекции значения ТЗП1 и ТЗП2 снижались соответственно до 74 % и 65 % от
исходных величин. При этом разница между ними существенно снижалась. Одновременно
многократно в 7,5 раза повышалась концентрация ТРП1. Аналогично возрастал показатель
ТРП2, значение которого было отрицательным при расчете без коррекции и становилось
положительным после коррекции фонового поглощения. Таким образом, фоновое поглощение непептидных компонентов значительно завышает расчетный уровень ТЗП и многократно снижает расчетный показатель ТРП.
Для коррекции фонового поглощения непептидных компонентов, нами предложены
новые формулы расчета концентраций ТЗП и ТРП по спектру поглощения плазмы, основанные на измерении оптической плотности пробы при трех длинах волн 290 нм, 300 нм и
305 нм и вычислении разностных величин ∆Д1 = Д290-Д305 и ∆Д2 = Д300-Д305:
(9)
ТЗП = (∆εb2 ⋅ ∆Д1 - ∆εb1 ⋅ ∆Д2) / (∆εa1 ⋅ ∆εb2 - ∆εa2 ⋅ ∆εb1);
ТРП = (∆εa1 ⋅ ∆Д2 - ∆εa2 ⋅ ∆Д1) / (∆εa1 ⋅ ∆εb2 - ∆εa2 ⋅ ∆εb1), (10)
где ∆εa1 = ε290-ε305 и ∆εa2 = ε300-ε290 разность коэффициентов молярной экстинкции для тирозина, ∆εb1 = ε290-ε305 и ∆εb2 = ε300-ε290 аналогичные показатели для триптофана.
Подстановка разностных значений коэффициентов молярной экстинкции тирозина и
триптофана, взятых из таблицы 2, приводит к следующим уравнениям для расчета концентрации пептидных фракций:
(11)
ТЗП (ммоль/л) = 1,62 ∆Д2 - 0,28∆Д1;
(12)
ТРП (ммоль/л) = 0,25 ∆Д1 - 0,40∆Д2.
С использованием указанных формул были вычислены концентрации ТЗП и ТРП в
норме, а также у больных с инсультом и при раке щитовидной железы (табл. 4).
Таблица 4
Показатели оптического поглощения плазмы крови
и концентрация ТЗП и ТРП в норме и патологии
Здоровые доноры
Рак щитовидной
Показатель
Инсульт (n = 16)
(n = 7)
железы (n = 5)
Д290/мл
4,15 ± 1,12
10,24 ± 2,85
8,41 ± 3,09
Д300/мл
3,27 ± 0,93
8,08 ± 1,92
7,37 ± 2,94
Д305/мл
2,33 ± 0,65
5,52 ± 2,32
5,05 ± 2,02
1,82 ± 0,47
4,72 ± 1,96
3,40 ± 1,42
∆Д1
0,94 ± 0,28
2,56 ± 0,83
2,30 ± 0,93
∆Д2
ТЗП (ммоль/л)
1,03 ± 0,33
2,88 ± 0,53
2,85 ± 1,30
ТРП (ммоль/л)
0,08 ± 0,02
0,16 ± 0,08
0,09 ± 0,05
ТЗП/ТРП
12,9
18
31,7
ТЗП/ТЗП (норма), %
100 %
280 %
277 %
ТРП/ТРП (норма), %
100 %
200 %
113 %
5
BY 8588 C1 2006.10.30
Как видно из табл. 4, в норме содержание ТЗП почти в 13 раз выше, чем ТРП. Сопоставление ТЗП и ТРП со средними концентрациями показывает, что вклад пептидной
фракции в общее содержание тирозина составляет 94 %, а в содержание триптофана 38 %. При патологии концентрация ТЗП возрастала в 2,8 раза при раке щитовидной железы и в 2,77 раза при инсульте. Концентрация ТРП возрастала в меньшей степени - в 2,0
раза при раке щитовидной железы и всего лишь на 13 % при инсульте. Таким образом,
значение ТРП многократно уступает значению ТЗП по чувствительности (абсолютной величине) и диагностической значимости. Поэтому практический смысл в медицинской диагностике имеет определение концентрации только первой пептидной фракции - ТЗП.
Для упрощения способа определения ТЗП была измерена корреляционная зависимость
между содержанием ТЗП и упрощенными оптическими показателями - (Д290-Д305) (фиг. 2)
и Д290 (фиг. 3). Был выявлен высокий уровень корреляции между ТЗП и указанными показателями - 087 между ТЗП и (Д290-Д305) и 0,95 между ТЗП и Д290. Выявленная корреляция
позволяет проводить вычисления ТЗП по упрощенным формулам, только по измерению
Д290 и Д305, либо только по измерению Д290. С учетом более высокого значения корреляции
и простоты анализа, предпочтительным является использование показателя Д290. Уравнение
для расчета концентрации ТЗП было выведено с помощью метода наименьших квадратов:
ТЗП (ммоль/л) = 0,33 Д290 - 0,26.
(13)
Предлагаемый способ осуществляется следующим способом: в пластиковую пробирку
на 1,5 мл последовательно добавляют 0,2 мл плазмы крови и 0,4 мл 0,6 M хлорной кислоты, перемешивают, инкубируют 2-3 мин и центрифугируют 10-15 мин при 3000 об/мин на
центрифуге ОПН-8. Затем отбирают 0,4 мл супернатанта, добавляют 1,6 мл 0,7 M раствора
NaOH (рН смеси составляет 13,0-13,1) и измеряют оптическую плотность пробы (ДХ) при
290 нм, 300 нм и 305 нм в 1-см кварцевой или пластиковой кювете на стандартном спектрофотометре. В контрольной пробе смешивают 0,4 мл 0,6 M хлорной кислоты и 1,6 мл
0,7 M NaOH и измеряют оптическую плотность ДО, в тех же условиях. Затем вычисляют
разность оптических плотностей Дизм = ДX-ДO и рассчитывается показатель удельного
поглощения пробы на мл плазмы (опт.ед./мл) по формуле Дλ = Дизм⋅V1/Vпл⋅V2/Vc =
= Дизм ⋅ 0,6/0,2⋅2,0/0,4 = 15Дизм, где Vпл - объем плазмы, Vc - объем супернатанта, V1 и V2 общие объемы пробы после смешивания плазмы с раствором XК (V1) и смешивания
супернатанта с раствором NaOH (V2). Расчет концентрации ТЗП проводят по уравнению
(11), либо по упрощенной формуле (13). Концентрацию ТРП вычисляют по формуле (12).
Пример 1.
Определение ТЗП в плазме крови здорового донора.
В пластиковую пробирку на 1,5 мл добавляют 0,2 мл плазмы крови здорового донора
и 0,4 мл 0,6 M хлорной кислоты, перемешивают, инкубируют 2-3 мин и центрифугируют
10-15 мин при 3000 об/мин на центрифуге ОПН-8. Затем отбирают 0,4 мл супернатанта в
пластиковую пробирку на 4 мл, добавляют к нему 1,6 мл 0,7 M раствора NaOH, перемешивают и измеряют оптическую плотность пробы (Дизм) в 1 см кварцевой кювете на
стандартном спектрофотометре при 290 нм, 300 нм и 305 нм (соответственно, Д1 = 0,354,
Д2 = 0,279, Д3 = 0,188). В контрольной пробе 0,3 мл 0,9 M хлорной кислоты добавляют к
1,7 мл 0,7 M NaOH и измеряют оптическую плотность (ДО = 0,014) в тех же условиях.
Расчет удельного поглощения пробы на 1 мл плазмы при длине волны λ (Дλ) проводят по
уравнению Дλ = 15(Дизм-ДО). При этом Д290 = 5,52, Д300 = 4,40, Д305 = 3,04. Затем определяют ∆Д1 = Д290-Д305 = 2,48 и ∆Д2 = Д290-Д305 = 1,36. Полученные значения подставляют в
уравнения для расчета ТЗП и ТРП и вычисляют:
ТЗП (ммоль/л) = 1,62 ∆Д2 - 0,28∆Д1 = 1,51;
ТРП (ммоль/л) = 0,25 ∆Д1 - 0,40∆Д2 = 0,08.
По упрощенному варианту определение ТЗП проводят путем измерения Д290 и вычисления концентрации пептидов по формуле ТЗП (ммоль/л)=0,33 Д290-0,26 = 1,56.
6
BY 8588 C1 2006.10.30
Пример 2.
Определение концентрации ТЗП в плазме крови больного с синдромом эндогенной
интоксикации.
В пластиковую пробирку на 1,5 мл добавляют 0,2 мл плазмы крови больного с инсультом, имеющего выраженный синдром эндогенной интоксикации, осаждают белки с
помощью хлорной кислоты описанным выше способом. Затем супернатант разводят 0,7 M
NaOH, измеряют оптическую плотность пробы при 290, 300 и 305 нм и вычисляют удельное поглощение пробы на 1 мл плазмы при указанных длинах волн Д290 = 8,72, Д300 = 6,89,
Д305 = 4,72. Далее вычисляют значения ∆Д1 = Д290-Д305 = 7,0 и ∆Д2 = Д290-Д305 = 2,17 и с
помощью уравнений (11-13) определяют концентрацию ТЗП и ТРП:
ТЗП (ммоль/л) = 1,62∆Д2-0,28∆Д1 = 2,39;
ТРП (ммоль/л) = 0,25∆Д1-0,40∆Д2 = 0,13;
ТЗП (ммоль/л) = 0,33Д290-0,26 = 2,61.
Сопоставление предлагаемого способа со способом прототипом показывает, что в новом способе вместо относительного показателя, выражаемого в единицах оптической
плотности и характеризующего общее содержание олигопептидов, определяют молярную
концентрацию двух фракций пептидов - тирозин - и триптофан-содержанщх веществ
(табл. 5). Ранее эти показатели плазмы крови вообще не определялись.
Кроме того, при синдроме эндогенной интоксикации новый показатель ТЗП возрастает в 2,8 раза, тогда как показатель Д280, измеренный известным способом, увеличивается
только в 1,79 раза. Таким образом, измерение концентрации ТЗП вместо показателя УФпоглощения при 280 нм существенно повышает чувствительность и точность анализа и
позволяет более адекватно интерпретировать нарушения белкового метаболизма при патологии.
Разработанный способ может быть использован в медицинской диагностике для оценки выраженности токсемии у больных с синдромом эндогенной интоксикации и контроля
за эффективностью детоксикационной терапии.
Таблица 5
Содержание олигопептидов, измеренное по известному методу (D280, рН 6),
и концентрация ТЗП, измеренная предлагаемым методом, в плазме крови
у здоровых доноров и при раке щитовидной железы
Содержание олигопептиОбследованная группа
ТЗП (ммоль/л)
дов (Д280, рН 6,5)
Здоровые доноры (n = 7)
0,162±0,033
1,03±0,33
Рак щитовидной железы (n = 5)
0,289±0,035
2,88±0,53
Повышение показателя у больных
179 %
280 %
(в % к норме)
Перечень фигур чертежей.
Фиг. 1. Спектры УФ-поглощения супернатанта плазмы крови, полученного после осаждения белков 0,6 M хлорной кислотой, при разных рН (1 - рН 7,4; 2 - рН 11,0; 3 - рН 13,0)
(Конечное разведение плазмы - 15 раз).
Фиг. 2. Корреляционная зависимость между содержанием ТЗП (ммоль/л) и показателем УФ-поглощения плазмы (Д290-Д305), измеряемые предлагаемым способом, у здоровых
доноров и больных с синдромом эндогенной интоксикации (N = 25).
Фиг. 3. Корреляционная зависимость между содержанием ТЗП (ммоль/л) и показателем УФ-поглощения плазмы Д290, измеряемые предлагаемым способом, у здоровых доноров и больных с синдромом эндогенной интоксикации (N = 25).
7
BY 8588 C1 2006.10.30
Источники информации:
1. Габриэлян Н.И., Дмитриев А.А., Кулаков Г.П. // Клин. медицина. - 1981. - № 10. С. 38-42.
2. Осипович В.К., Тупикова З.А., Маркелов И.М. // Лаб. дело. - 1987. - № 3. С. 221-224.
3. Лабораторные методы исследования в клинике. / Под ред. В.В. Меньшикова. - M.:
Медицина, 1987.
4. Шарабчиев Ю.Т., Дубина Т.В. Показатели здоровья в цифрах и фактах. - Мн: УП
"Юпоком", 2001.
5. Берштейн И.Я., Каминский Ю.Л. Спектрофотометрический анализ в органической
химии. - Л.: Химия, 1986. - С. 200.
6. Фрайфелдер Д. Физическая биохимия. - M.: Мир, 1980. - С. 582.
Корреляционная зависимость между содержанием ТЗП (ммоль/л)
и показателем УФ-поглощения плазмы (Д290-Д305), измеряемыми
предлагаемым способом, у здоровых доноров и больных
с синдромом эндогенной интоксикации (N=25)
Фиг. 2
Корреляционная зависимость между содержанием ТЗП (ммоль/л)
и показателем УФ-поглощения плазмы Д290, измеряемыми
предлагаемым способом, у здоровых доноров и больных
с синдромом эндогенной интоксикации (N=25)
Фиг. 3
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
8
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
1
Размер файла
191 Кб
Теги
by8588, патент
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа